Термостабильная композиция, обладающая антивирусной и антибактериальной активностью и ее использование - RU2718554C1
Код документа: RU2718554C1
Описание
Область техники
Группа изобретений относится к биотехнологии, медицине, косметологии, ветеринарии и может быть использована для профилактики, предупреждения и лечения у людей и животных бактериальных и вирусных заболеваний, а также относится к производству широкого спектра санитарно-гигиенических средств и лекарственных препаратов.
Предшествующий уровень техники
Контакт с различными микроорганизмами и вирусами окружающей среды нередко приводит к заболеванию. Известно, что санитарно-гигиенические мероприятия могут значительно уменьшить популяцию микроорганизмов, включая патогены.
Широко распространенными антропозоонозными бактериальными инфекционными болезнями с многообразными механизмами передачи возбудителя являются стафилококковые инфекции. Эти инфекции характеризуются развитием гнойного воспаления в очагах поражения, интоксикацией и нередкой генерализацией патологического процесса с развитием сепсиса. На коже человека обитает 14 видов стафилококка. Из них в патологии человека играют роль три вида: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis и Staphylococcus saprophyticus. Важнейшим патогенным для человека стафилококком является Staphylococcus aureus - стойкий, высоковирулентный, легко приобретающий устойчивость к антимикробным препаратам возбудитель инфекции. Менее вирулентные, коагулазонегативные стафилококки, в частности Staphylococcus epidermidis, проявляют тропность к инородным материалам (эндопротезам) и все чаще становятся возбудителями больничных инфекций, особенно у больных с ослабленным иммунитетом. Другой коагулазонегативный стафилококк, Staphylococcus saprophyticus - распространенный возбудитель инфекций мочевых путей. Золотистые стафилококки являются также облигатными паразитами крупного рогатого скота, лошадей, свиней, собак, обезьян, изредка птиц. Известны случаи инфицирования молока при стафилококковом мастите у коров с последующей вспышкой пищевого отравления у людей.
В процессе жизнедеятельности стафилококк продуцирует различные ферменты и токсины, оказывающие губительное воздействие на организм человека. Так, например, стафилококковый токсин эксфолиатин способен повреждать клетки кожи, энтеротоксин - вызывать симптомы пищевого отравления, а лейкоцидин - разрушать лейкоциты. По этой причине симптоматика заболеваний, спровоцированных золотистым стафилококком, существенно разнится и зависит от локализации очага инфекции, наличия или отсутствия у больного человека сопутствующих болезней, от состояния его иммунитета и от степени воздействия факторов внешней среды.
Стафилококковые инфекции распространены повсеместно. Заболевания возникают в течение всего года. Регистрируют как спорадические случаи, так и эпидемические вспышки. Восприимчивость к стафилококковым инфекциям низкая, однако, постоянно действующий риск заражения способствует тому, что у большинства взрослых (до 40%) вырабатываются антитела против стафилококка и его токсинов. Группы риска инфицирования - новорожденные и дети до года, больные с иммунодефицитными состояниями (ВИЧ-инфицированные, внутривенные наркоманы, больные сахарным диабетом и др.).
Предупредить возникновение стафилококковой инфекции в быту, на производстве, стафилококковые пищевые отравления, внутрибольничную стафилококковую инфекцию призваны профилактические мероприятия и использование санитарно-гигиенических средств. Средства, применяемые для этих целей не должны включать в свой состав антибиотики.
Первый из микроорганизмов, у которого была обнаружена устойчивость к антибиотикам, Staphylococcus aureus. Устойчивость к метициллину, сопряженная с устойчивостью к другим бета-лактамным антибиотикам, дала название мультирезистентным стафилококкам MRSA (methicillinresistant Staphylococcus aureus).
Обычно MRSA кроме резистентности к бета-лактамным антибиотикам одновременно обладают резистентностью ко многим другим классам антибиотиков: аминогликозидам, макролидам, фторхинолонам, клиндамицину, ко-тримоксазолу, хлорамфениколу (Инфекции и антимикробная терапия, т. 7, №4, 2005).
Одной из задач науки и промышленности является создание новых альтернативных препаратов, обладающих антимикробной активностью с минимальным риском появления резистентных штаммов, обеспечивающих восстановление и нормализацию биоценотических взаимодействий в организме человека, и возможность внедрения их в производство.
Поэтому в настоящее время является актуальным использование веществ, не обладающих антибиотическим действием. Потенциальное применение для лечения и профилактики инфекций имеет лизостафин. Он обладает высокой степенью антистафилококковой бактериолитической активности. Лизостафин является средством, принадлежащим к антимикробным пептидам и белкам, известным как бактериоцины. Бактериоцины обладают бактерицидной активностью против других бактерий и представляет собой механизм самозащиты, который помогает микроорганизмы выжить в их естественной среде обитания. Лизостафин обладает способностью к протеолитическому действию на глицин-содержащие мостики пептидогликана клеточной стенки стафилококков. Множество научных исследований, показывают, что данный белок может быть использован для профилактики или лечения бактериальных стафилококковых инфекционных заболеваний, в том числе и в сочетании с другими антибактериальными средствами. Лизостафин хранится в виде замороженного раствора. Лизостафин активен против всех антибиотикоустойчивых штаммов патогенных стафилококков, включая MRSA-штаммы, и по эффективности превосходит другие противостафилококковые биологические препараты - бактериофаги, бактериоцины и фаговые эндолизины. Рекомбинантный лизостафин практически не отличается, по свойствам, от активной природной формы.
Кроме того, в настоящее время актуальной проблемой является так же борьба с вирусными инфекциями. Вирусы представляют собой основную категорию патогенов. Вирусные инфекции числятся среди основных причин заболеваемости у человека. Вирусы демонстрируют широкое разнообразие структуры и жизненного цикла.
Вирусы являются облигатными внутриклеточными паразитами. На поверхности вирусов имеются белки, способные связываться со специфическими рецепторными белками на поверхности клеток хозяина, преодолевая видовые барьеры, вирусы могут переносить отдельные гены или группы генов из клетки в клетку. Главная особенность вирусных инфекций заключается в том, что они распространяются на весь организм, заражая клетки большинства органов, а не концентрируясь точечно, как бактерии.
Наиболее распространенная группа вирусных заболеваний - острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ). Ведущая роль в структуре ОРВИ принадлежит гриппу. Их вызывают около 200 различных РНК-содержащих вирусов, что создает серьезные трудности для профилактики и лечения этих заболеваний. Также значительные трудности возникают при лечении герпеса, папилломы и других вирусной инфекций. Одной из главных проблем инфектологии являются парентеральные вирусные гепатиты. Препараты интерферона важны для экстренной профилактики различных вирусных инфекций.
Рекомбинантный интерферон гамма человека состоит из 144 аминокислотных остатков, в отличие от природного лишен первых трех аминокислот Cys-Tyr-Cys, замененных на Met (инициирующий синтез белка в бактериях), имеет молекулярную массу мономера - 16,9 кДа. Биологически активная форма ИФН-гамма - димер. Удельная противовирусная активность на фибробластах человека, клетках обезьяны VERO или клетках быка MDBK, инфицированных вирусом везикулярного стоматита или вирусом энцефаломиокардита, составляет около 2⋅107 ME на мг белка. Субстанция интерферона гамма хранится при минус 20°С и термостабильна только в течение 6 месяцев. Так же из уровня техники известен человеческий рекомбинантный гамма-интерферон, получаемый из штамма Escherichia coli, содержащего рекомбинантную плазмидную ДНК pGIF315, также технология его выделения и очистки (патент на изобретение RU 2214832, опубликован 27.10.2003). Данный человеческий рекомбинантный гамма-интерферон производит ООО «НПП «Фармаклон» (Россия) под торговым наименованием «Ингарон».
Известно, что для увеличения пролонгированного действия белков стали использовать пегилирование (конъюгация с ПЭГ). Пегилирование представляет собой процесс, в котором к полипептидам ковалентно присоединяются цепи полиэтиленгликоля, что позволяет улучшить клинические показатели (фармакокинетику, фармакодинамику и иммуногенность). Свойства полипептида могут быть изменены, но активность остается, т.к. молекула полиэтиленгликоля защищает его от внешних воздействий.
Вместе с тем, при применении ПЭГ выявлены определенные недостатки. Химический синтез при проведении пегилирования приводит к тому, что состав полученного продукта полидисперсен. Получаются молекулы с различным молекулярным весом и поэтому они могут обладать разными свойствами. Например, более крупные, с большим числом мономеров, могут быть иммуногенны, а также накапливаться в печени. Так же одним из самых существенных недостатков является потеря специфической активности продукта из-за блокировки активных групп, изменения конформации.
Из всех известных интерферонов, интерферон гамма имеет самую низкую термическую стабильность. Такая низкая термическая стабильность интерферона гамма делает его трудно используемым в качестве активного компонента для производства различных средств.
Из уровня техники известны термостойкие варианты человеческого интерферона гамма (патент на изобретение US 6,046,034, опубликован 04.04.2000; патент на изобретение FR 2899589, опубликован 12.10.2007). В этих патентах представлены термостабильные интерфероны гамма, полученные генно-инженерным способом - путем замен аминокислот, входящих в его нативную структуру. Однако в результате были получены мутанты (аналоги) интерферона гаммы, влияние которых на организм человека до сих пор не изучено и их коммерческая применимость пока не ясна.
Из уровня техники известна термостабильная лиофилизованная композиция, содержащая лекарственное средство и липидный компонент, состоящий из одного или более неионогенных ПАВ (поверхностно-активное вещество), при этом лекарственное средство может содержать лекарственный белок, представляющий собой антитело (заявка на изобретение RU 2014133089, опубликована 20.03.2016).
Так же известны стабильные фармацевтические составы, которые содержат интерфероны гамма и альфа в синергетических соотношениях (патент на изобретение RU 2403057, опубликован 10.11.2010).
Кроме того, известно лечебное противовирусное средство, содержащее альфа-, бета- или гамма- рекомбинантный интерферон, которое дополнительно содержит стабилизатор биологических, физико-химических свойств и/или устойчивости к микробной контаминации и консистентно-образующую основу (патент на изобретение RU 2150291, опубликован 06.10.2000).
Так же известен способ лечения стафилококковых заболеваний, где относительно высокие дозы лизостафина по меньшей мере, 50 и предпочтительно 100 мг лизостафина на килограмм веса тела используются для лечения (патент на изобретение US 6,028,051, опубликован 22.02.2000).
Наиболее близким по совокупности существенных признаков техническим решением к заявленной термостабильной композиции является противовирусное средство, состоящее из коллагена и интерферона, лиофильно высушенных (патент на изобретение RU 2204410, опубликован 20.05.2003). Средство эффективно при лечении гнойных ран, однако может вызывать затруднения при применении в случае сухих ран и на слизистую глаза.
Вышеперечисленные композиции эффективны при лечении только одного вида инфекции - либо вирусной, либо бактериальной.
Из уровня техники известен целый ряд композиций и способов их применения в санитарно-гигиенических целях.
Потребители используют множество средств личной и домашней гигиены, потому что очистка кожи и других живых и неживых поверхностей для уменьшения популяций микробов представляет собой первое защитное решение по устранению патогенов с этих поверхностей и, таким образом, снижению риска инфекции.
Такие средства часто включают в себя агенты, которые уничтожают или подавляют рост нежелательных организмов, таких как бактерии и вирусы. Эти средства находят применение, например, для ухода за кожей, в качестве персональных очищающих средств, для ухода за полостью рта, а также могут использоваться как противомикробные средства для твердых поверхностей.
Негативным фактором при применении химических средств является загрязнение обрабатываемых объектов остатками токсичных веществ, удаление которых требует дополнительных мер. Вместе с тем эти методы не являются экологически чистыми, поскольку сопряжены с применением медленно деградирующих во внешней среде химических агентов. Кроме того, после использования по назначению многие препараты попадают различными путями в окружающую среду, загрязняя ее.
В связи с этим актуальной является разработка средств, содержащих в роли активных компонентов токсически безопасных и экологичных веществ.
Из уровня техники известен гель, для профилактики и лечения заболеваний пародонта, содержащий метронидазолбензоат, хлоргексидинглюконат в качестве активно-действующего вещества, карбомер и гидроксипропилметилцеллюлозу в качестве гелеобразующего агента, ментол в качестве вкусовой добавки, подсластитель, динатриевую соль ЭДТА в качестве вспомогательного компонента и консистентно-образующую основу, при этом он может дополнительно содержать в качестве активно-действующего вещества компоненты, выбранные из группы: альфа-, бета-, гамма-рекомбинантный интерферон, лиизин, пролин, холина салицилат (международная заявка WO 2014/014389, опубликована 23.01.2014)
Так же из уровня техники известен композитный спрей, описанный в патенте на изобретение CN 103705912, опубликованном 09.04.2014. Этот спрей характеризуется тем, что содержит лизостафин, лизоцим, полифенолы чая, оливковое масло, витамин С, лецитин, ксантановую камедь и очищенную воду.
Наиболее близким техническим решением для полоскания полости рта является средство для полоскания полости рта на основе лизостатина (патент на изобретение CN 1360886, опубликован 28.12.2000). Оно может лечить заболевания ротовой полости, вызванные стафилококками, гемолитическим стрептококком, анаэробными бактериями.
Известные комплексы для полоскания полости рта проявляют противовоспалительное, антимикробное действие, однако эффективность многих из них при длительном применении снижается за счет адаптации микрофлоры.
Широко известны фармацевтические композиции для профилактики и лечения заболеваний пародонта в виде паст, эликсиров, ополаскивателей, мазей, эмульсий и гелей (патент на изобретение RU 2228168, опубликован 10.05.2004; патент на изобретение RU 2201206, опубликован 27.03.2003; патент на изобретение RU 2190995, опубликован 20.10.2002; патент на изобретение RU 2286764, опубликован 10.11.2006). При лечении заболеваний пародонта придерживаются трех основных этиологических направлений воздействия: антибактериальное, противовоспалительное, регенерирующее, в результате которых устраняется очаг инфекции, прекращается воспалительный процесс в пораженном участке, улучшаются процессы трофики и регенерации.
Из уровня техники известны различные зубные пасты, используемые для профилактики воспалительных заболеваний пародонта, содержащие противовоспалительные и противомикробные компоненты, например: экстракты лекарственных растений, витамины, смесь лизатов (Лечебно-профилактическая зубная паста «Silca Herb plus»® (Германия); заявка на изобретение RU 2012101121, опубликована 20.07.2013). Описанные зубные пасты в процессе использования не обладают противовирусным эффектом. Недостатком данных составов является слабое антибактериальное действие, обусловленное слабым бактерицидным действием компонентов.
Наиболее близким техническим решением к зубной пасте является набор для ухода за полостью рта в виде зубной пасты, которая содержит композицию для ухода за полостью рта, содержащую: первый компонент, содержащий, по меньшей мере, одно соединение, повышающее Eh, и фармацевтически приемлемый носитель, и второй компонент, содержащий, по меньшей мере, одно соединение цинка, цетилпиридинийхлорид (СРС) и фармацевтически приемлемый носитель (патент на изобретение RU 2581915, опубликован 05.08.2011). В одном варианте осуществления композиция для ухода за полостью рта дополнительно содержит противовирусное средство. Подходящие противовирусные средства для применения в композиции для ухода за полостью рта включают, интерферон типа III, интерферон типа II, интерферон типа I.
Однако известные средства обладают либо антибактериальным, либо противовирусным эффектом.
Различные композиции также могут быть использованы для производства различных изделий, в т.ч. санитарно-гигиенические изделия и средства, косметические средства, и т.п.
Спрей для протирания может использоваться для очистки и обеззараживания одушевленных или неодушевленных поверхностей. Примеры таких средств представлены ниже.
Из уровня техники в настоящее время известен нетканый материал, применяемый в форме изделия, предназначенного для сбора выделений организма человека, в частности пеленок разового пользования, обработанный линейным полимерным бигуанидом для устранения бактериальной активности (ЕР 0174128, опубликован 12.03.1986).
Описана композиция для ухода за кожей, бумажное полотенце и метод подготовки бумажного полотенца, которое содержит лизостафин и китайские травяные экстракты (патент на изобретение CN 103861092, опубликован 18.06.2014).
Известны антимикробные повязки Neotulle фирмы Fisons (Германия) и Sofratulle фирмы A.Roussel (Германия), представляющие собой стерильные салфетки на тканой сетчатой подложке, импрегнированные мазью неомицина или фрамицетина (синоним неомицина) на основе вазелина или белого твердого парафина в сочетании с ланолином (Martindal the Extra Pharmacopoeia, London, 1978, v. 27, p. 1159).
Однако указанные салфетки содержат антибиотик неомицин, который обладает высокой токсичностью и нефротоксичностью и не активен в отношении инфекций, вызываемых резистентными грамотрицательными микроорганизмами.
Наиболее близким техническим решением к санитарно-гигиеническому изделию для обработки поверхности кожи, является влажная бумажная или тканевая салфетка, которая пропитана составом, содержащим бактериоцин, хелатирующий агент, стабилизатор, поверхностно-активное вещество, соль и высушивающий агент-спирт, (международная заявка WO 96/39842, опубликована 19.12.1996). Способ дезинфицирования, высушивания и/или очистки поверхности включает протирание поверхности санитарно-гигиенической салфеткой, обладающей дезинфицирующим эффектом.
Недостатком известного решения является использование спирта, что приводит к проблеме сухой и шелушащейся кожи.
Наиболее близким по совокупности существенных признаков техническим решением к заявленному санитарно-гигиеническому влажному изделию является салфетка, которая используется при дезинфицирующей обработке рук, поверхностей, инъекционного поля или кожи локтевого сгиба доноров (патент на изобретение RU 2253481, опубликован 10.06.2005). Салфетка, выполненная из впитывающего материала и пропитанная жидким дезинфицирующим составом. Данная салфетка не обладает антивирусной активностью
Наиболее близким по совокупности существенных признаков техническим решением к заявленному одноразовому впитывающему изделию является одноразовое впитывающее изделие, представляющее собой одно из изделий: тампон, гигиеническую прокладку, ежедневную прокладку (заявка на изобретение RU 2010141844, опубликована 20.04.2012). Однако известное решение не обладает антибактериальной и антивирусной активностью.
Известно средство по уходу за кожей рук, приготовленное при определенном соотношении неионных поверхностно-активных веществ, цвиттерионных поверхностно-активных веществ, анионного поверхностно-активного вещества, ланолина, 1,3-пропандиола, глицерина, лимонной кислоты, аллантоина, бактериостатическое средство, основы, лизостафина и деионизированной воды (патент на изобретение CN 102846496, опубликован 18.09.2012). Средство ингибирует рост только вредных бактерий и не обладает антивирусной активностью.
Известен лекарственный гель с рекомбинантным интерфероном и витамином Е, содержащий дополнительно метионин, лимонную кислоту, бензойную кислоту, альбумин сывороточный человеческий, спирт этиловый, глицерин (патент на изобретение RU 2184564, опубликован 10.07.2002).
Наиболее близким по совокупности существенных признаков техническим решением к заявленным средствам для ухода за кожей является средство, обладающие иммуномодулирующим, противомикробным, антиоксидантным и регенерирующим действием, содержащие рекомбинантный интерферон, лизоцим, эмоксипин и, по крайней мере, одно вспомогательное вещество, выбранное из ряда: гидрофильная основа, ацетатный буфер, консервант (патент на изобретение RU 2255760, опубликован 10.07.2005).
Однако данные композиции, как и перечисленные выше, обладают либо антибактериальным, либо противовирусным эффектом.
Для обеззараживания широкого круга объектов наиболее часто применяются химические методы, основанные на применении дезинфицирующих химических веществ (формальдегида, глутарового альдегида, надуксусной кислоты, фенольных, крезольных, иодоморфных растворов и др.) (патент на изобретение RU 2148415, опубликован 10.05.2000; патент на изобретение RU 2163146, опубликован 20.02.2001).
Описаны противомикробные композиции, содержащие дезинфицирующий спирт, органическую кислоту и воду, причем композиция имеет рН приблизительно 5 или ниже, обладающая дезинфицирующим эффектом против бактерий и/или может синергически инактивировать или разрушать вирусы (патент на изобретение RU 2366460, опубликован 20.01. 2009).
Известно средство, содержащее пероксид водорода, четвертичное аммониевое соединение, органическую кислоту или смесь двух и более органических кислот и карбамид в определенных соотношениях. Предложен также способ получения средства с вышеуказанными компонентами. Полученный препарат обладает высокой антимикробной активностью и термостабильностью (патент на изобретение RU 2180572, опубликован 20.03.2002). Данное средство является экологически не безопасным для окружающей среды.
Описан способ дезинфекции помещений, оборудования, консервации и обеззараживания воды с использованием средства на основе хлоргексидина (международная заявка WO 2008/108680, опубликована 12.09.2008). Хлоргексидин (1,1-гексаметилен-бис-парахлорфенил-бис-гуанидин) выпускается как антисептическое средство многими фирмами. Данное средство является экологически не безопасным для окружающей среды.
Наиболее близким техническим решением к санитарно-гигиеническому средству является гель для дезинфекции с лизостафином, бактерицидным пептидом, хлоргексидином, сорбитолом, дигидрофосфатом натрия, вторичным кислым фосфатом натрия и загустителем (патент на изобретение CN 104524557, опубликован 22.04.2015).
Данное средство является экологически не безопасным для окружающей среды.
Известно, использование лизостафина в композициях для обработки белья (международная заявка WO 2002/066591, опубликована 29.08.2002, патент на изобретение CN 1364866, опубликован 11.01.2001).
Наиболее близким техническим решением к кондиционеру для белья является композиция, содержащая поверхностно-активное вещество и фермент, обладающий лизостафиновой активностью (заявка на изобретение US 2002/178,509, опубликована 17.02.2001).
Однако известные средства не обладают антивирусной активностью.
Для предупреждения заражения вирусом иммунодифицита человека половым путем известно покрытие презерватива снаружи и изнутри дезинфицирующим средством (ЕР 0427997, опубликован 22.05.1991).
Описано средство для смазки презерватива, содержащее дезинфицирующий и противовоспалительный препарат - менфегол, основу, и представлено в виде геля или мази (ЕР 0343631, опубликован 29.11.1989).
Наиболее близким техническим решением по совокупности существенных признаков к заявленному средству для смазки презервативов является средство для смазки презерватива содержащее противовирусный препарат и фармацевтически приемлемые целевые добавки (патент на изобретение RU 2187329, опубликован 18.12.2000). В качестве противовирусного средства оно содержит альфа, или бета, или гамма рекомбинантный интерферон в количестве 1000-10000000 ME на 1 г средства.
Наряду с санитарно-гигиеническми средствами широко известны лекарственные средства, обладающие противомикробным, противовирусным эффектом.
Известно лекарственное средство, обладающее иммуномодулирующим, противомикробным, антиоксидантным и регенерирующим действием, в виде различных лекарственных форм для перорального, парентерального и наружного применения (таблетки, спреи, растворы, гели), для введения на слизистые оболочки (суппозитории) на основе природного и рекомбинантного интерферонов типа α, β, γ, лизоцима и эмоксипина (патент на изобретение RU 2255760, опубликован 10.07.2005). Недостатками данного изобретения являются применение в гидрофильной основе для суппозиториев такого нестабильного компонента, как желатин, и консерванта хлоргексидин, что может снизить стабильность интерферона. В таблетированной форме этого средства для перорального применения содержится большое количество лактозы (0,3 г). Как известно, лактоза у многих пациентов вызывает нарушение пищеварения из-за сниженной активности или отсутствия соответствующего фермента - лактазы. При изготовлении препарата в форме таблетки возможна дестабилизация интерферона, поскольку при таблетировании под давлением происходит существенное повышение температуры.
Известно стабилизированное лекарственное средство виферон-форте для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний с высокой степенью биодоступности, созданное на основе интерферона человеческого рекомбинантного альфа, и/или бета, и/или гамма типов с антиоксидантным комплексом, включающим токоферола ацетат, аскорбиновую кислоту и их производные, а также содержащее вспомогательные вещества: стабилизаторы, буферные растворы, кислоты, пластификаторы, эмульгаторы, консерванты и основу (патент на изобретение RU 2381812, опубликован 20.02.2010). Данное средство обладает антибактериальным, противовирусным свойствами и применяется в лечении инфекционно-воспалительных заболеваний урогенитального тракта, вирусного гепатита, другой инфекционной патологии. Кроме того, в данном средстве в качестве основы предложены различные жиры и масла, требующие специальной стабилизации с большим набором разнообразных веществ.
Известен препарат генно-инженерного гамма-интерферона, включающий интерферон, стабилизирующие добавки, биологически инертный наполнитель, аминокислоту или ее соль и солевую буферную систему в определенном соотношении компонентов (патент на изобретение RU 2077336, опубликован 10.06 1997).
Известен препарат для лечения вирусных, хламидийных и бактериальных инфекций на основе интерферона. Он представляет собой единую лекарственную форму из смеси интерферона и вещества, обладающего антиоксидантными свойствами. В качестве этого вещества используют альфа-токоферола ацетат. Препарат может быть выполнен в виде ректальной капсулы или свечи и вводится ректально (патент на изобретение RU 2057544, опубликован 10.04.1996).
Известен лекарственный препарат для лечения вирусных инфекций, представляющий собой единую лекарственную форму из смеси интерферона и вещества, содержащего не менее 2,2% полиненасыщенных жирных кислот. Препарат может быть выполнен в виде ректальной капсулы или свечи и вводится ректально (патент на изобретение RU 2097061, опубликован 27.11.1997).
Наиболее близким по совокупности технических признаков техническим решением к заявляемому лекарственному средству является препарат противовирусного действия, включающий человеческий интерферон и синергист (патент на изобретение RU 2073522, опубликован 20.02.1997). В качестве синергиста он содержит иммуноглобулины человека. В качестве человеческого интерферона он содержит рекомбинантный альфа-, или бета-, или гамма-интерферон человека. В качестве иммуноглобулинов человека он содержит смесь IgA, IgM и IgG, а также дополнительно содержит фармацевтически приемлемые целевые добавки. Техническим результатом изобретения является создание препарата пролонгированного действия на основе рекомбинантного интерферона, обеспечивающего хорошую проникающую способность и обладающего противовирусным, противобактериальным, противовоспалительным, детоксицирующим, местноанестезирующим и регенерирующим действием. Полученное противовирусное средство имеет вид либо мази различной консистенции, либо свечи.
Недостатком составов, описанных выше, является то, что практически все они содержат антибиотики, лизоцим, хлорсодержащие соединения. По всей видимости, это обусловлено тем, что известные растворы и суспензии, содержащие интерфероны не обладают длительным сроком хранения из-за их быстрой инактивации.
Наиболее близким техническим решением по совокупности существенных признаков к заявленному медицинскому изделию является медицинское изделие в виде повязки для лечения ран и ожогов (международная заявка WO 2014/062080, опубликована 24.04.2014). Повязка включает абсорбирующий материал, представляющий собой нетканый перфорированный материал, пропитанный лекарственным препаратом, который представляет собой гелеобразную смесь из борной кислоты, гидроксипропилметилцеллюлозы, лидокаина гидрохлорида и очищенной воды при следующем соотношении компонентов в масс. %: борная кислота - 0,001-20,0, гидроксипропилметилцеллюлоза - 0,001-10,0, лидокаина гидрохлорид - 0,001-10,0, очищенная вода - остальное. Средство дополнительно содержит бетаметазон в количестве 0,0001-1,0 или рекомбинантный интерферон, выбранный из группы: альфа, бета, гамма рекомбинантный интерферон в количестве 100-1000000 ME, или гепарин в количестве 10-100000 ME. Однако, известное техническое решение не обладает антивирусной активностью.
Как показал проведенный анализ уровня техники, в настоящее время оказалось трудно получить эффективную противомикробную композицию, эффективную как против бактерий, так и против вирусов, из-за фундаментальных различий между бактериями и вирусами. Известны только композиции, состав которых включает либо лизостафин, либо интерферон гамма. Кроме того, существуют лишь несколько имеющихся в продаже продуктов, содержащих антибактериальные и антивирусные вещества и обладающие биоцидным и защитным действием, но не известны случаи совместного использования лизостафина с интерфероном гамма.
Возможно это обусловлено так же тем, что оптимальные условия проявления биологической активности интерферона гамма и лизостафина не идентичны. Например, человеческий рекомбинантный интерферон гамма стабилен и хранится при рН 6,0-6,5, тогда как лизостафин лучше работает в слабощелочных условиях (рН 7,5-7,8). При таких значениях рН существует риск агрегации молекул интерферона гамма и, как следствие, снижение его активности. Именно поэтому препараты на основе интерферона гамма (например «Ингарон») с рН 7,5-8,0, имеют срок годности 2 года при температуре от плюс 2 до 8°С. То, что разные белки ведут себя по-разному, связано с их аминокислотным составом (первичной структурой) и физико-химическими свойствами.
Раскрытие группы изобретений
Очевидно, что имеется потребность в создании, экологичной, безопасной эффективной композиции обладающей широким спектром действия от вирусных и бактериальных инфекций, которая имеет стабильную биологическую активность в процессе хранения, и обладает пролонгированным действием, а так же имеющую широкое применение в промышленном производстве.
Вышеуказанные ограничения преодолеваются настоящим изобретением.
Задачей настоящего изобретения является создание высокоактивной, биодоступной и термостабильной в течение длительного времени, при стандартных условиях, композиции, на основе биологически активных веществ, обеспечивающей противовирусное и антимикробное действие, которая может быть использована, без потери своих свойств и своей активности, для производства различных средств, в том числе, лекарственных, и медицинских изделий. Другой задачей настоящего изобретения является расширение арсенала санитарно-гигиенических, лекарственных средств, не обладающих токсичностью и аллергенностью, а так же прочими побочными эффектами.
При решении поставленных задач достигаются технические результаты, заключающиеся в:
- расширении диапазона температуры хранения человеческого рекомбинантного интерферона гамма и лизостафина;
- достижении стабилизирующего эффекта, за счет сохранения и стабилизации биологических свойств двух различных белков: человеческого рекомбинантного интерферона гамма, и лизостафина, при стандартных условиях хранения, в течение длительного времени (не менее 5 лет), за счет оптимально подобранного состава и количества компонентов;
- получении на основе человеческого рекомбинантного интерферона гамма с лизостафином термостабильной композиции, обладающей высокой антивирусной и антибактериальной активностью, при стандартных условиях хранения, в течение длительного промежутка времени (не менее 5 лет), высоким биоцидным эффектом и являющейся гипоаллергенной, биодоступной, экологичной, не токсичной, а также имеющей хорошую проникающую способность и широкий спектр применения (слизистые, кожа, поверхности, белье и т.п.);
- использовании термостабильной композиции в различных средствах и изделиях, обеспечивающих комплексную защиту человека от проникновения бактериальных и вирусных инфекций, за счет ее стабилизации, что позволяет заявляемые средства и изделия хранить при стандартных условиях хранения, в течение длительного промежутка времени (не менее 3 лет), с сохранением высокой антивирусной и антибактериальной активности;
- обеспечении возможности применения термостабильной композиции без потери своих свойств и своей активности в крупномасштабном производстве заявляемых изделий и средств, при этом промышленный выпуск может быть осуществлен в короткие сроки;
- расширении ассортимента средств, содержащих высокоактивные стабилизированные компоненты;
- обеспечении возможности получения различных готовых средств, с различной консистенцией, органолептическими свойствами на оборудовании со стандартной комплектацией для получения мягких и жидких форм лекарственных или косметических средств;
- получении формирования равномерных тонких пленок на поверхности (при смачивании кожи, слизистых, предметов), заявляемая композиция долго сохраняет биологическую активность в отношении патогенных микроорганизмов и вирусов. Санитарно-гигиенические средства имеют высокую смачиваемость обрабатываемых поверхностей и адгезию к ним.
Указанные технические результаты достигаются за счет оригинального состава термостабильной композиции, обладающей противовирусной и антимикробной активностью и ее использования, в том числе, для производства санитарно-гигиенических средств, лекарственных средств, а так же средств для защиты от бактериальных и вирусных инфекций. Заявленная группа изобретений объединена единым изобретательским замыслом.
Указанные технические результаты достигаются за счет создания термостабильной композиции, обладающей антивирусной и антибактериальной активностью, представляющей собой лиофилизат с активностью человеческого рекомбинантного интерферона гамма от 500000 до 2000000 МЕ/г и активностью лизостафина от 50 до 200 ЕД/г, при этом лиофилизат получен из раствора с рН 5-7 и содержит в 1 г композиции:
При этом термостабильная композиция предпочтительно содержит лиофилизат, полученный из раствора с рН 5-7.
В качестве человеческого рекомбинантного интерферона гамма предпочтительно используют человеческий рекомбинантный интерферон гамма, полученный из штамма продуцента Е. coli трансформированного плазмидой pGIF315.
Декстран предпочтительно используют с молекулярной массой от 60000 до 70000 или их смесь.
Метоксиполиэтиленгликоль предпочтительно используют с молекулярной массой от 2000 до 5000 или их смесь.
В качестве лизостафина может быть использован рекомбинантный лизостафин.
Средство для ухода за полостью рта представляет собой водный раствор термостабильной композиции в любом ее вышеизложенном варианте, при этом водный раствор имеет активность человеческого рекомбинантного гамма-интерферона 200-1000 МЕ/мл водного раствора, лизостафина - 0,02-0,1 ЕД/мл водного раствора, а так же может дополнительно содержать в одном варианте: сорбитол, натрий хлористый и консервант, во-втором варианте: повидон, сорбат калия, и/или лактат калия, ароматизатор, консервант. При этом во втором варианте средство для ухода за полостью рта представляет собой спрей.
Так же заявляется зубная паста, которая содержит термостабильную композицию в любом ее вышеизложенном варианте и приемлемые наполнители, используемые для получения зубных паст, при этом зубная паста имеет активность человеческого рекомбинантного гамма-интерферона 200-1000 МЕ/г, лизостафина - 0,02-0,1 ЕД/г, при следующем соотношении компонентов (масс %):
Кроме того, зубная паста может дополнительно содержать витамины, и/или противогрибковые вещества, или их смесь.
Санитарно-гигиеническое изделие, содержит основное полотно и термостабильную композицию в любом ее вышеизложенном варианте, при этом активность изделия составляет по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 5000-20000 МЕ/см2, по лизостафину 0,5-2 ЕД/см2 при следующем соотношении компонентов (масс %):
При этом термостабильную композицию можно нанести на основное полотно.
Санитарно-гигиеническое изделие может дополнительно содержать карбоксиметилцеллюлозу, альгинат натрия, трегалозу, консервант, которые перед смешиванием с термостабильной композицией растворяют в воде, и полученным водным раствором пропитывают основное полотно, а затем высушивают до содержания влаги 1-7 масс %, при следующем соотношении компонентов в готовом изделии (масс %):
Основное полотно предпочтительно состоит из хлопка, и/или целлюлозы, и/или вискозы, и/или синтетических материалов или их смеси.
Санитарно-гигиеническое изделие может представлять собой одно из следующих изделий: салфетку, маску для лица, бумажное полотенце, одноразовые перчатки, носовые платки.
При этом изделие может быть размещено в индивидуальной герметичной упаковке или групповой герметичной упаковке.
Санитарно-гигиеническое влажное изделие, представляет собой основное полотно пропитанное термостабильной композицией в любом ее вышеизложенном варианте, растворенной в водном растворе, содержащем карбоксиметилцеллюлозу, альгинат натрия и консервант, и высушенный до содержания влаги 10-20 масс %, при этом активность готового изделия составляет по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 4000-16000 МЕ/см2, по лизостафину 0,4-1,6 ЕД/см2, а соотношении компонентов готового изделия составляет (масс. %):
При этом впитывающий материал может состоять из хлопка, и/или вискозы, и/или синтетических материалов или их смеси.
Санитарно-гигиеническое влажное изделие может дополнительно содержать глицерин, и/или тиогликоль, и/или антигрибковые вещества, и/или витамины, и/или краситель, и/или ароматизатор или их смесь.
Санитарно-гигиеническое влажное изделие может представлять собой одно из следующих изделий: салфетки, влажную туалетную бумагу, гигиенический тампон.
При этом изделие может быть размещено в индивидуальной герметичной упаковке или групповой герметичной упаковке.
Одноразовое впитывающее изделие содержит носитель и санитарно-гигиеническое изделие в любом его вышеизложенном варианте, при соотношении масс по весу носитель: изделие (5-10):(1-5).
Одноразовое впитывающее изделие может представлять собой предпочтительно одно из следующих изделий: тампон, гигиеническую прокладку, ежедневную прокладку.
При этом изделие может быть размещено в индивидуальной герметичной упаковке или групповой герметичной упаковке.
Средство для ухода за кожей, содержащее косметически приемлемую основу и термостабильную композицию в любом ее вышеизложенном варианте, при этом средство обладает активностью по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 500-2000 МЕ/г и по лизостафину 0,05-0,2 ЕД/г, при следующем соотношении компонентов в готовом средстве (масс %):
При этом косметически приемлемая основа может представлять собой предпочтительно одну из следующих основ: гелевую, жировую основу, водную основу, порошкообразную основу, тальк, аэросил.
Средство для ухода за кожей может дополнительно содержать спермацет, и/или витамины, и/или минеральные соли, и/или противогрибковые вещества или их смесь.
Средство для ухода за кожей может представлять собой предпочтительно одно из следующих средств: крем, гель, желе, присыпку, порошок, лосьон, спрей, маску.
Средство для ухода за кожей может представлять собой средство ветеринарного назначения.
Санитарно-гигиеническое средство содержит приемлемую жидкую основу и термостабильную композицию в любом ее вышеизложенном варианте, при этом средство обладает активностью по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 500-100000 МЕ/мл и по лизостафину 0,05-10 ЕД/мл, при следующем соотношении компонентов готового средства (масс %):
Санитарно-гигиеническое средство может дополнительно содержать трегалозу, консервант и ПЭГ 400 и представлять собой спрей.
Санитарно-гигиеническое средство может дополнительно содержать триэтаноламин для обеспечения рН средства 6,0-8,0.
Санитарно-гигиеническое средство может дополнительно содержать карбоксиметилцеллюлозу, альгинат натрия, консервант и представлять собой гель.
Санитарно-гигиеническое средство может представлять собой средство для обработки поверхностей или средство для обработки одежды.
Кондиционер для белья, содержит приемлемую жидкую основу и термостабильную композицию в любом ее вышеизложенном варианте, при этом кондиционер обладает активностью по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 2000-10000 МЕ/мл, по лизостафину 0,2-1 ЕД/мл, при следующем соотношении компонентов готового кондиционера (масс %):
Средство для смазки презервативов, содержит термостабильную композицию в любом ее вышеизложенном варианте и фармацевтически приемлемые целевые добавки, при этом средство обладает активностью по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 5-50 МЕ/г, по лизостафину 0,0005-0,005 ЕД/г при следующем соотношении компонентов (масс %):
При этом может дополнительно содержать витамины и/или противогрибковые вещества.
Лекарственное средство содержит термостабильную композицию и фармацевтически приемлемую основу при этом средство обладает активностью по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 5000-100000 МЕ/г и по лизостафину 0,5-10 ЕД/г, при следующем соотношении компонентов (масс %):
При этом лекарственное средство может представлять собой суппозитории, или спрей, или мазь, или гель, или лиофилизат.
Медицинское изделие, может содержать основное полотно и термостабильную композицию, при этом активность изделия составляет по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 5000-20000 МЕ/см2, по лизостафину 0,5-2 ЕД/см2 при следующем соотношении компонентов (масс %):
Медицинское изделие может дополнительно содержать карбоксиметилцеллюлозу, альгинат натрия, трегалозу, консервант, которые перед смешиванием с термостабильной композицией растворяют в воде, и полученным водным раствором пропитывают основное полотно, а затем высушивают до содержания влаги 1-7 масс %, при следующем соотношении компонентов в готовом изделии (масс %):
Медицинское изделие может быть получено путем нанесения термостабильной композиции на основное полотно.
В медицинском изделии основное полотно состоит из хлопка, и/или целлюлозы, и/или вискозы, и/или синтетических материалов или их смеси.
Медицинское изделие может представлять собой предпочтительно одно из следующих изделий: маску для лица, бинт, одноразовые перчатки, губку для местного применения.
Медицинское изделие может быть размещено в индивидуальной герметичной упаковке или групповой герметичной упаковке.
Под термином «лизостафин» следует понимать любой лизостафин, природный или рекомбинантный, обладающий способностью к протеолитическому действию на глицин-содержащие мостики пептидогликана клеточной стенки стафилококков. Это фермент (ЕС 3.4.99.17) - внеклеточная цинк-содержащая глицил-глициновая эндопептидаза. Проявлением ферментативной активности лизостафина является разрушение клеточных стенок микроорганизмов рода Staphylococcus (лизис стафилококков) посредством гидролиза полиглициновых межпептидных мостиков в пептидогликане, встречающихся только в клеточной стенке стафилококков. Лизостафин также обладает эластолитической активностью. Лизостафин коммерчески доступен от нескольких поставщиков, например, от Sigma-Aldrich, Inc.
Под термином «человеческий рекомбинантный интерферон гамма» следует понимать белковую молекулу, состоящую из 144 аминокислотных остатков, связывающуюся с рецептором IFNGR, который состоит из цепочек IFNGR1 и IFNGR2. Обладает противовирусными и иммуномодулирующими свойствами, активизирует работу отдельных видов лейкоцитов по защите от инфекции, блокирует образование вирусных белков и сборку зрелых вирусных частиц, вызывает гибель внутриклеточных микроорганизмов, уничтожает инфицированные вирусами клетки. Для осуществления изобретения предпочтительно используется человеческий рекомбинантный интерферон гамма, получаемый из штамма Escherichia coli содержащего рекомбинантную плазмидную ДНК pGIF315 (патент на изобретение RU 2214832, опубликован 27.10.2003). Человеческий рекомбинантный интерферон гамма коммерчески доступен от нескольких поставщиков, например, Sigma-Aldrich, Inc, человеческий рекомбинантный гамма-интерферон, получаемый из штамма Escherichia coli, содержащего рекомбинантную плазмидную ДНК pGIF315, производитель ООО «НПП «Фармаклон».
Под «стандартными условиями» следует понимать стандартную окружающую температуру и давление, которые могут называться также нормальными условиями (НУ): давление 100 кПа, температура +25°С.
Под «термостабильностью» надо понимать способность белков сохранять уникальную пространственную структуру полипептидной цепи, а следовательно, активность, под действием температуры от минус 70°С до плюс 30°С.
Под термином «приемлемый» (в приемлемом наполнителе, косметически приемлемой основе, приемлемой жидкой основе, фармацевтически приемлемых целевых добавках), следует понимать, что приемлемыми должны быть компоненты, входящие в состав: растворимые, нетоксичные, не содержащие анионные ПАВ и не обладающие инактивирующим действием в отношении используемых белков, не воздействовать неблагоприятно на противовирусную и антимикробную эффективность композиции, и в особенности не воздействовать неблагоприятно на кожу и слизистую, и их использование является общеупотребимым в данной, конкретной области применения.
Термостабильная композиция, согласно настоящему изобретению, обладает эффективной противовирусной и антимикробной активностью в течение длительного периода времени.
При создании заявленной композиции, состоящей из комплекса двух белков, пришлось столкнуться с целым рядом проблем, связанных с температурой хранения, стабильностью, сроком хранения, стабильностью при использовании в качестве сырья для производства санитарно-гигиенических средств.
Таким образом, основной проблемой, связанной с белковыми композициями, является преодоление физической неустойчивости белков. Физическая неустойчивость не вызывает изменений ковалентных связей в белках. Физическая неустойчивость скорее предполагает изменение структуры белков более высокого порядка, например, вторичной структуры. Такие изменения включают денатурацию, адсорбцию на поверхностях, агрегацию и осаждение.
Обычно денатурация белков наблюдается под воздействием аномальной температуры, рН и т.д. Денатурировать белки можно холодом. Кроме того белки денатурируют под действием слишком высоких или низких рН, вызывающих исчезновение заряда одного знака (А.В. Финкельштейн, «Физика белка», М2002).
Известно, что вышеуказанные типы неустойчивости, которые могут оказывать сильное влияние на промышленную жизнеспособность и эффективность белковых композиций, сложно устранить.
Известно, что устойчивость белка можно улучшить, вводя в композицию наполнители, которые взаимодействуют с белком в растворе, делая его устойчивым, растворимым и не агрегированным. Например, соли соединений и их ионные разновидности являются обычно используемыми добавками, вводимыми в белковые композиции. Такие соединения помогают устранить денатурацию белков, образуя неспецифические связи с белками и повышая термостабильность. Соли (например, NaCl, KCl), аминокислоты (например, гистидин, аргинин), уменьшают изменение вторичных структур белков (Tian et al.,
Средства на основе белка часто должны иметь высокую концентрацию для достижения эффекта. Проведенные эксперименты показали, что использование этих веществ в рекомендуемых дозах создает много проблем, включающих изготовление, сохранение устойчивости, доставки, что особенно характерно для белков. А также возникли проблемы, связанные с опалесценцией и агрегацией. Помимо этого возникла самоассоциация двух основных белков, которая привела к увеличению вязкости раствора, что осложнило получение высоких концентраций белков при фильтровании. Поэтому экспериментальным путем были определены границы количественного содержания белков, а так же количественный и компонентный состав необходимый для их стабилизации в этих границах. Таким образом верхняя граница, интерферона гамма составила 2000000 МЕ/г, лизостафина - 200 ЕД/г. Нижняя также была определена экспериментальным путем и составила для интерферона гаммы 500000 МЕ/г, а лизостафина 50 ЕД/г.
Необходимо отметить, что предпочтительным вариантом при производстве заявляемой термостабильной композиции является использование человеческого рекомбинантного интерферона гамма, полученного из штамма Escherichia coli содержащего рекомбинантную плазмидную ДНК pGIF315. Это обусловлено следующим.
Рекомбинантная плазмида pGIF315 содержит промоторы, обеспечивающие высокую конститутивную экспрессию в клетках Е. coli гена, кодирующего гамма-интерферон размером 144 а.о. с молекулярной массой 16,9 кДа (патент на изобретение RU 2214832, опубликован 27.10.2003). Это, при прочих равных условиях, позволяет использовать обычные питательные среды, не требующих дефицита каких-либо компонентов или добавления каких-либо индукторов, что упрощает технологию и снижает себестоимость. Плазмида может быть трансформирована в любые штаммы Е. coli, соответствующие требованиям, предъявляемым к штаммам-продуцентам, например: SG 200-50 или BL 21.
Неожиданно было обнаружено, что именно метоксиполиэтиленгликоль, альгинат натрия и декстран в заявленном количестве по изобретению, могут уменьшить или предотвратить как воздействие внешних факторов, так и отрицательное взаимодействие/реакцию между биологически активными белками, содержащимися в термостабильной композиции, путем формирования стабильного комплекса.
Как показали проведенные исследования, для применения и использования термостабильной композиции наиболее оптимальным является использование ее в лиофилизированном виде, т.к. это обусловлено высокой технологичностью в производстве изделий и средств из нее, а так же удобством при транспортировке и хранении, т.к. не нужно соблюдения температурного режима. Полученный сухой препарат представляет собой лиофилизат белого цвета, который хорошо растворяется в воде и физиологическом растворе для инъекций с образованием прозрачного бесцветного или слегка желтоватого раствора. Полученный препарат обладает контролируемой антивирусной и антибактериальной активностью.
Антимикробное и антивирусное действие обеспечиваются тем, что в предлагаемой композиции человеческий рекомбинантный интерферон гамма и лизостафин стабилизированы путем оптимально подобранного как состава, так и соотношения компонентов, что позволило увеличить срок ее годности и хранения до 5 лет без потери биологической активности. По всей видимости, в полученной композиции активные вещества защищены от внешних воздействий и находятся в образованном высокоактивном биологическом комплексе, предположительно заключенном в мицеллу, подобную нанокапсуле.
Лизостафин в составе композиции действует сразу на стафилококки, а вот противовирусная активность человеческого рекомбинантного интерферона гаммы проявляется после того, как вирус попадает через кожные покровы и слизистые в организм.
При вирусной инфекции происходит активация экспрессии генов интерферонов. В результате проявляется антивирусная активность, блокада синтеза вирусных белков, модуляция иммунного ответа.
Определяющим является тот факт, что вирусы размножаются только в живых клетках. Поскольку клетка защищена клеточной мембраной, вирусу трудно проникнуть в клетку, т.к. его размеры и толщина мембраны практически одинаковы. Вирусы обладают специфичностью по отношению к поверхности тех или иных клеток. Для инфицирования клетки-хозяина вирус специфически взаимодействует с поверхностью клетки и после определенного времени взаимодействия происходит слияние мембран вируса и клетки-хозяина. Результатом этого долговременного контакта является проникновение в клетку вирусной частицы или его нуклеиновой кислоты. Поэтому, чтобы уничтожить вирус, который контактирует с тканями человека, необходимо обеспечить им постоянную противовирусную активность. При этом важнейшую роль играет именно временной фактор: чем раньше человеческий рекомбинантный интерферон гамма попадает в клетку, тем эффективнее иммунитет подавляет вирус.
Роль человеческого рекомбинантного интерферона гамма в процессах ингибирования внедрения вируса в клетки, синтеза его белков была исследована на различных моделях вирусных инфекций. Также показано, что противовирусная активность интерферона выше при профилактическом применении. (Киселев О.В. «Интерферон гамма: новый цитокин в клинической практике» М., 2007).
При создании термостабильной композиции главным являлось сохранение активности человеческого рекомбинантного интерферона гамма и лизостафина в их активных формах в течение продолжительного периода времени для обеспечения срока хранения санитарно-гигиенического средства в течение 3 лет.
Поскольку заявляемая термостабильная композиция находится в стабильном состоянии, это позволяет использовать ее в различных изделиях, обеспечивающих комплексную защиту человека от проникновения бактериальных и вирусных инфекций.
На основе термостабильной композиции в настоящем изобретении разработана комплексная защита, включающая: составы для производства санитарно-гигиенических средств и изделий, средства для ухода за кожей и полостью рта, смазку для презервативов, кондиционер для белья. Некоторые изделия и средства (их формы), содержащие термостабильную композицию, дополнительно можно стабилизировать путем введения дополнительных компонентов.
Так средство для ухода за полостью рта в одном варианте может дополнительно содержать сорбитол в количестве 0,15-0,75 (масс %), натрий хлористый в количестве 0,003-0,015 (масс %), и консервант в количестве 0,03-0,15 (масс %). В другом варианте может дополнительно содержать повидон в количестве 0,006-0,018(масс %), сорбат калия и/или лактат калия в количестве 0,0003-0,006 (масс %), ароматизатор в количестве 0,0001-0,0003 (масс %), консервант в количестве 0,03-0,05 (масс %), при этом средство представляет собой спрей.
Заявляемые санитарно-гигиенические средства и изделия, при использовании на кожных или слизистых покровах, обладают прямым выраженным биоцидным действием, в том числе за счет усиления первичного иммунного барьера.
При разработке санитарно-гигиенического средства, в виде спрея было учтено, что микробы и вирусы находятся во взвешенном состоянии в составе микрокапель влаги и частичек пыли и их необходимо инактивировать. Для этого воздушную среду помещения обрабатывают аэрозольным облаком, состоящим из микрокапель спрея, которые в воздухе соединяются с частицами, обсемененными микробами и вирусами, в результате чего происходит их обеззараживание.
А санитарно-гигиенические средства в виде геля, за счет образования тонкой защитной биоразлагаемой пленки, создают пролонгированный биоцидной эффект. При этом гель может быть использован в качестве средства интимной гигиены, перед половым актом.
Санитарно-гигиеническое средство в одном варианте может представлять собой спрей и дополнительно содержать трегалозу в количестве 2-5 (масс %), консервант в количестве 0,04-1,5 (масс %) и ПЭГ 400 в количестве 0,3-1,5 (масс %).
В другом варианте может дополнительно содержать карбоксиметилцеллюлозу количестве 10 (масс %), альгинат натрия количестве 2 (масс %), консервант количестве 0,05(масс %) и представляет собой гель.
При изучении влияния различных компонентов и физико-химических факторов на термостабильность при хранении и на активность, использовались приборы, реактивы и стандартные методики для физико-химических, биологических и микробиологических исследований, известные из уровня техники. Компоненты, входящие в состав термостабильной композиции, известны из уровня техники и коммерчески доступны.
Вода, используемая по настоящему изобретению должна быть необходимой степени очистки: очищенная или дистиллированная, или для инъекций, или деионизованная.
Для улучшения смачиваемости и равномерности распределения по обрабатываемой поверхности, создания высокой степень дисперсности и термостабильности, а также для препятствия конгломерации компонентов, что способствует проявлению их биологического эффекта, применяли эфиры полиэтиленгликоля ПЭГ40, ПЭГ 4000, ПЭГ 400, а также неионный детергент Твин 80.
В качестве консервантов для обеспечения необходимого показателя микробиологической чистоты приемлемым является применение солей органических кислот, таких как бензойная, сорбиновая, молочная, взятые в любом сочетании.
Для создания средства для ухода за кожей используют различные основы. Для изготовления косметически приемлемой гелевой основы используют загустители, например: карбоксиметилцеллюлозу, повидон, альгинат натрия, пектин. Загустители, как правило, присутствуют в количестве от 4 до 8%, от общего веса композиции.
Кремовая основа может быть как гидрофильной, так и гидрофобной. Необходимо отметить, что термостабильная композиция не вызывает раздражения на коже, а так же не вызывает коррозию неодушевленных поверхностей.
Необязательным компонентом являются вкусовые агенты, которые обычно используются в композициях на уровне от примерно 0,001 до примерно 5% от веса композиции. В качестве подсластителей могут выступать маннит, сорбит, сахароза, декстроза, глюкоза.
рН композиций по настоящему изобретению может быть отрегулирован путем использования буферных компонентов: натрия фосфорнокислого и лимонной кислоты. Для регулирования рН использовали триэтаноламин. рН был установлен опытным путем, при рН меньше 5,0 и более 7,0 человеческий рекомбинантный интерферон гамма и лизостафин теряют активность и менее стабильны в процессе хранения.
Проведенные исследования по изучению термостабильности различных заявляемых средств и изделий (с использованием разных комбинаций вспомогательных веществ) и при различных температурных режимах показали, что они сохраняют свои свойства при хранении при температуре окружающей среды до +25°С в течение 3 лет, а при +30°С в течение не менее 2 лет. Термостабильная композиция может храниться в широком диапазоне температур от 0 до +30°С и обладает широким спектром антимикробной и антивирусной активности, что способствовало расширению возможностей для получения изделий и средств, с различными вариантами назначения и способами практического использования: наружное применение, аппликационный или аэрозольный способ нанесения, для людей или животных, для обработки поверхностей.
Термостабильная композиция имеет широкий спектр применения, обусловленный входящими в ее состав компонентами, при этом человеческий рекомбинантный интерферон гамма и лизостафин являются естественными защитными факторами в борьбе организма человека с инфекцией, что обеспечивает биодоступность, гипоаллергенность, экологичность и отсутствие побочных эффектов.
Средства согласно настоящему изобретению имеют несколько видов применения, включая жидкости для полоскания рта, спреи для тела, антисептики, салфетки, обладающие дезинфицирующим эффектом обеззараживающие гели, зубные пасты, кремы и подобные продукты для личной гигиены. Термостабильная композиция также может использоваться в составе санитарно-гигиенических средств для обработки поверхностей.
Термостабильная композиция согласно настоящему изобретению эффективна при производстве санитарно-гигиенические средства, обладающие дезинфицирующими свойствами, могут применяться в домашнем хозяйстве (например, для дезинфекции твердых поверхностей, таких как полы, столешницы, утварь, посуда, и мягких материалов, таких как одежда), в личной и интимной гигиене (например, крема, лосьоны, гели и гигиенические салфетки), и применяться в промышленности и в больницах, т.к. эффективно и быстро дезинфицируют поверхности, которые инфицированы или загрязнены бактериями, и вирусами.
Термостабильная композиция также может быть включена в материал ткани с образованием санитарно-гигиенического изделия, с биоцидным действием для протирания, например: кожных покровов.
Данный состав может быть использован для производства медицинских изделий (бинты, перчатки, маски). Особенно полезным оказывается применение термостабильной композиции для производства лекарственных средств в форме спрея, геля, мази, суппозиториев, лиофилизатов для приготовления растворов для интраназального применения. Данное средство может быть использовано для лечения людей и животных
Термостабильная композиция и средства, ее содержащие, по настоящему изобретению обеспечивают преимущества, т.к. не токсичны, гипоаллергенны, и не имеют побочных эффектов (раздражения, осушения).
Таким образом, заявленная группа изобретений объединена единым изобретательским замыслом, направленным на создание термостабильной композиции, обладающей антивирусной и антибактериальной активностью, а так же на использование ее при производстве целого ряда средств и изделий: санитарно-гигиенических и медицинских изделий, санитарно-гигиенических, косметических и лекарственных средств, зубной пасты и средства для уходя за полостью рта, кондиционера для белья и средства для смазки презерватива, содержащих заявляемую термостабильную композицию, обладающую высокой антивирусной и антибактериальной активностью.
Для проверки противовирусной и антибактериальной активности при различных температурах хранения использовали 2 серии термостабильной композиции, полученные по примерам 1 и 2. Каждую из термостабильных композиций после лиофилизации разделяли на три равные группы и помещали на хранение в различные температурные условия: при стандартных условиях (+25°С), при +30°С, при +35°С.
В течение первого месяца исследований термостабильной композиции на антивирусную и антибактериальную активность из разных групп пробы для контроля отбирали еженедельно. В течение полугода - ежемесячно. В дальнейшем отбирали аналитические образцы один раз в три месяца.
Для исследования противовирусной активности была использована тест-система in vitro на культуре клеток линии Vero. В качестве тестового вируса в нашем исследовании использовали вирус везикулярного стоматита (ВВС). Доза ВВС бралась в концентрации 10 ТЦД50. Пробоподготовку проводили, растворяя 200 мг термостабильной композиции первой и второй серии соответственно в 1 мл воды для инъекций. Результаты представлены в таблице 1.
Для исследования антибактериальной активности термостабильной композиции использовали тестовый штамм стафилококка. Взвесь клеток тестового штамма доводили до концентрации 1×105 клеток/мл. После чего готовили десятикратные разведения до концентрации 1×102 клеток/мл. 1 г термостабильной композиции каждой серии растворяли в 10 мл воды инъекционной, после чего один мл полученного раствора прибавляли к одному мл полученной ранее взвеси в различных разведениях. Инкубировали в течение 10 минут. Учет результатов проводили спектрофотометрически при длине волны 600 нм. Результаты представлены в таблице 2.
В качестве образцов сравнения использовались следующие специально приготовленные лиофилизированные смеси: инферферон гамма человеческий рекомбинантный в среде фосфатно-солевого буфера с активностью 500000 ME (образец сравнения №1); лизостафин в среде фосфатно-солевого буфера с активностью 50 ЕД (образец сравнения №2); смесь интерферона гамма человеческого рекомбинантного 500000 ME и лизостафина 50 ЕД с среде фосфатно-солевого буфера (без добавок) (образец сравнения №3).
В результате проведенного исследования было установлено, что:
1. Исходная активность приготовленных растворов сравнения соответствует ожидаемой и равна по своей величине образцам сравнения, содержащим какое-либо одно активное вещество, находящееся в стандартных условиях.
2. Образец, представляющий собой смесь человеческого рекомбинантного интерферона гамма и лизостафина без вспомогательных ингредиентов показал значения активностей ниже теоретически возможного. Можно предположить, что это обусловлено взаимным влиянием компонентов. Причем, контрольные образцы, содержащие простую смесь гамма интерферона человеческого рекомбинантного и лизостафина, полностью теряли свою активность при всех условиях хранения менее чем за месяц.
3. При хранении в заданных условиях в течение первого месяца контрольные образцы, содержащие только человеческий рекомбинантный интерферон гамма независимо от состава буферной смеси теряли до 70% активности при хранении в комнатных условиях и полностью дезактивировались при температурах 30°С и 35°С.
4. При хранении в заданных условиях в течение первого месяца контрольные образцы, содержащие только лизостафин, теряли до 30% свой активности при хранении при комнатной температуре, до 90% при хранении при 30°С и полностью дезактивировались при длительном воздействии высокой температуры.
5. Термостабильные композиции по примерам 1 и 2 сохраняли начальную активность своих белковых компонентов в течение первого месяца на уровне первоначальной при всех температурных условиях хранения.
6. В течение пяти лет термостабильные композиции сохраняли свою термостабильность при хранении при +25°С и при +30°С. В конце этого периода при хранении при 35°С обе композиции потеряли около 15% своей активности.
Таким образом неожиданно было обнаружено, что термостабильная композиция сохраняет свои свойства при хранении при температуре окружающей среды до +25°С в течение 5 лет, а при +30°С может храниться в течение не менее 3 лет.
Настоящее изобретение далее иллюстрируется следующими примерами, которые могут быть воспроизведены обычным специалистом в этой области техники. Приведенные ниже примеры являются лишь иллюстрацией изобретения и раскрывают различные аспекты возможного осуществления настоящего изобретения. Следующие примеры не должны быть истолкованы как ограничивающие изобретение, как оно заявлено.
Варианты осуществления изобретения
Пример 1. Получение термостабильной композиции, обладающей антивирусной и антибактериальной активностью.
Для получения термостабильной композиции размораживают субстанцию человеческого рекомбинантного интерферона гамма, затем размораживают субстанцию лизостафина. В емкость с перемешивающим устройством наливают 500 мл воды. Вносят в емкость метоксиполиэтиленгликоль в количестве 3 г, альгинат натрия в количестве 1 г, натрий фосфорнокислый двузамещенный двуводный в количестве 12 г, лимонную кислоту в количестве 11 г, декстран в количестве 73,0 г. Перемешивают и измеряют рН, который составляет 5,0. В емкость с растворенными ингредиентами вносят 100 мл размороженной субстанции лизостафина с активностью 50 ЕД/мл, перемешивают. Затем добавляют размороженную субстанцию интерферона гамма с активностью 3000000 МЕ/мл в количестве 17 мл.
Доводят объем водой до 1 л и перемешивают в течение 15 минут, не допуская вспенивания. Полученный раствор фильтруют через фильтры 0,45 мкм и 0,2 мкм и проводят асептический розлив во флаконы нейтрального стекла с дозой наполнения 200 мкл, 10 мл. Замораживают при минус 40°С и лиофилизируют в течение 36 часов. Флаконы герметично укупоривают резиновыми пробками и алюминиевыми колпачками.
Термостабильная композиция представляет собой лиофилизированный порошок белого цвета. Порошок гигроскопичен. рН раствора одного грамма стабилизированной композиции в 5 мл воды равен 5,0
Антивирусная и антибактериальная активность приведены в таблицах 1 и 2. Для исследования противовирусной активности была использована тест-система in vitro на культуре клеток линии Vero. В качестве тестового вируса использовали вирус везикулярного стоматита (ВВС). Доза ВВС бралась в концентрации 10 ТЦД50. Пробоподготовку проводили, растворяя 200 мг термостабильной композиции соответственно в 1 мл воды для инъекций. Для исследования антибактериальной активности использовали тестовый штамм стафилококка. Взвесь клеток тестового штамма доводили до концентрации 1×105 клеток/мл. После чего готовили десятикратные разведения до концентрации 1×102 клеток/мл. 1 г термостабильной композиции растворяли в 10 мл воды инъекционной после чего один мл полученного раствора прибавляли к одному мл полученной ранее взвеси в различных разведениях. Инкубировали в течение 10 минут. Учет результатов проводили спектрофотометрически при длине волны 600 нм.
Полученный лиофилизат обладает активностью интерферона гамма 500000 МЕ/г, лизостафина 50 ЕД/г и содержит следующие компоненты на 1 г готовой термостабильной композиции:
Лиофилизат хранили при температуре +25°С в течение 5 лет. На протяжении 5 лет проверяли термостабильность композиции при хранении. Через 5 лет активность составила по интерферону гамма 90% от исходной, лизостафина 92% от исходной.
Пример 2. Получение термостабильной композиции, обладающей антивирусной и антибактериальной активностью.
Для получения термостабильной композиции размораживают субстанцию рекомбинантного интерферона гамма, затем размораживают субстанцию лизостафина. В емкость с перемешивающим устройством наливают 300 мл воды. Вносят в емкость метоксиполиэтиленгликоль в количестве 15 г, альгинат натрия в количестве 2.5 г, натрий фосфорнокислый двузамещенный двуводный в количестве 25 г, лимонную кислоту в количестве 3,5 г, декстран в количестве 54 г. При этом рН раствора составляет 7,0. В емкость с растворенными ингредиентами вносят 400 мл размороженной субстанции лизостафина с активностью 50 ЕД/мл, пермешивают. Затем добавляют размороженную субстанцию интерферона гамма с активностью 3000000 МЕ/мл в количестве 68 мл.
Субстанция «Интерферон гамма человеческий рекомбинантный» представляет собой водный раствор белка, синтезированного клетками Escherichia coli SG 200-50, трансформированными плазмидой pGIF315.
Доводят объем водой до 1 л и перемешивают в течение 15 минут, не допуская вспенивания. Полученный раствор фильтруют через фильтры 0,45 мкм и 0,2 мкм и проводят асептический розлив во флаконы нейтрального стекла с дозой наполнения 200 мкл, 1 мл, 10 мл. Замораживают при минус 40°С и лиофилизируют. Время высушивания 36 часов. Флаконы герметично укупоривают резиновыми пробками и алюминиевыми колпачками.
Термостабильная композиция представляет собой лиофилизированный порошок белого цвета. Порошок гигроскопичен. рН раствора одного грамма стабилизированной композиции в 5 мл воды равен 7,0.
Полученный лиофилизат обладает активностью интерферона гамма 2000000 МЕ/г, лизостафина 200 ЕД/г и содержит следующие компоненты на 1 г готовой термостабильной композиции:
Лиофилизат хранили при температуре +25°С в течение 5 лет. На протяжении 5 лет проверяли термостабильность композиции при хранении. Через 5 лет активность составила по интерферону гамма 90% от исходной, лизостафина 92% от исходной.
Пример 3. Получение термостабильной композиции, обладающей антивирусной и антибактериальной активностью.
Для получения термостабильной композиции размораживают субстанцию рекомбинантного интерферона гамма, затем размораживают субстанцию лизостафина. В емкость с перемешивающим устройством наливают 300 мл воды. Вносят в емкость метоксиполиэтиленгликоль в количестве 9 г, альгинат натрия в количестве 1,45 г, натрий фосфорнокислый двузамещенный двуводный в количестве 16 г, лимонную кислоту в количестве 8 г, декстран в количестве 65,5 г. При этом рН раствора составляет 6,0. В емкость с растворенными ингредиентами вносят 200 мл размороженной субстанции лизостафина с активностью 50 ЕД/мл, перемешивают. Затем добавляют размороженную субстанцию интерферона гамма с активностью 3000000 МЕ/мл в количестве 34 мл.
Субстанция «Интерферон гамма человеческий рекомбинантный» представляет собой водный раствор белка, синтезированного клетками Escherichia coli SG 200-50, трансформированными плазмидой pGIF315.
Доводят объем водой до 1 л и перемешивают в течение 15 минут, не допуская вспенивания. Полученный раствор фильтруют через фильтры 0,45 мкм и 0,2 мкм и проводят асептический розлив во флаконы нейтрального стекла при дозе наполнения 1 мл, 10 мл. Замораживают при минус 40°С и лиофилизируют. Время высушивания 36 часов. Флаконы герметично укупоривают резиновыми пробками и алюминиевыми колпачками.
Термостабильная композиция представляет собой лиофилизированный порошок белого цвета. Порошок гигроскопичен. рН раствора одного грамма стабилизированной композиции в 5 мл воды равен 6,0.
Полученный лиофилизат обладает активностью интерферона гамма 1000000 МЕ/г, лизостафина 100 ЕД/г и содержит следующие компоненты на 1 г готовой термостабильной композиции:
Лиофилизат хранили при температуре +25°С в течение 5 лет. На протяжении 5 лет проверяли термостабильность композиции при хранении. Через 5 лет активность составила по интерферону гамма 90% от исходной, лизостафина 92% от исходной.
Пример 4. Средство для ухода за полостью рта в виде водного раствора
Средство готовили из термостабильной композиции, приготовленной по примеру №2, где активность по интерферону гамма составляет 2000000 МЕ/г, по лизостафину 200 ЕД/г. Для приготовления средства в 200 мл воды растворяют флакон с 20 мг лиофилизата термостабильной композиции, перемешивают до полного растворения. Средство представляет собой бесцветную жидкость с рН 7,0 с активностью 200 МЕ/мл интерферона гамма, 0,02 ЕД/мл лизостафина.
Полученный раствор используют для полоскания полости рта, носоглотки. Средство не токсично, не вызывает побочных эффектов.
Пример 5. Средство для ухода за полостью рта в виде полоскания
Взвешивают 300 мг натрия хлористого, 15 г сорбитола, 3 г натрия бензоата. Предварительно растворяют каждую навеску в отдельных емкостях в 0,5 л воды, при перемешивании. В аппарат с мешалкой вносят 5 л воды, затем последовательно переносят в него все предварительно растворенные ингредиенты. Раствор перемешивают в течение 10 минут. Термостабильную композицию, приготовленную по примеру 2, в количестве 1 г разводят в небольшом объеме воды и приливают к содержимому аппарата с мешалкой, осторожно, избегая вспенивания. Через 5 минут доводят объем в аппарате с мешалкой до 10,0 л водой. Величина рН составляет 7,0 единиц. Перемешивают 5 минут.
После проведения стерилизующей фильтрации средство асептически разливают во флаконы при объеме дозирования 150 мл.
Средство представляет собой бесцветную жидкость, возможна легкая опалесценция.
Активность: 200 МЕ/мл интерферона гамма, 0,02 ЕД/мл лизостафина.
Средство используют в профилактических целях, а также для снижения риска развития различных воспалений и инфекционных осложнений после лечебных и других интенсивных процедур в полости рта. Средство не токсично, не вызывает побочных эффектов.
Способ применения: полоскать ротовую полость 50-60 мл средства. Не споласкивать водой и не запивать в течение 30 минут. Использовать 3-5 раз по мере необходимости, но не реже 3 раз в сутки. Срок годности: не менее 3 лет при хранении при комнатной температуре.
Средство для полоскания полости рта с активностью гамма интерферона 200 МЕ/мл, лизостафина 0,02 ЕД/мл имеет состав на 1 мл:
Пример 6. Средство для ухода за полостью рта в виде полоскания.
Взвешивают 1,5 г натрия хлористого, 7,5 г сорбитола, 5 г натрия бензоата. Предварительно растворяют каждую навеску в отдельных емкостях в 0,5 л воды, при перемешивании. В аппарат с мешалкой вносят 5 л воды, затем последовательно переносят в него все предварительно растворенные ингредиенты. Раствор перемешивают в течение 10 минут. Термостабильную композицию, приготовленную по примеру 1, в количестве 20 г разводят в небольшом объеме воды и приливают к содержимому аппарата с мешалкой, осторожно, избегая вспенивания. Через 5 минут доводят объем в аппарате с мешалкой до 10,0 л водой. рН раствора равен 5,0. Перемешивают 5 минут.
После проведения стерилизующей фильтрации средство асептически разливают во флаконы при объеме дозирования 150 мл.
Средство представляет собой бесцветную жидкость, возможна легкая опалесценция.
Активность: 1000 МЕ/мл интерферона гамма, 0,1 ЕД/мл лизостафина.
Средство используют в профилактических целях, а также для снижения риска развития различных воспалений и инфекционных осложнений после лечебных и других интенсивных процедур в полости рта. Средство не токсично, не вызывает побочных эффектов.
Способ применения: полоскать ротовую полость 50-60 мл средства. Не споласкивать водой и не запивать в течение 30 минут. Использовать 3-5 раз по мере необходимости, но не реже 3 раз в сутки. Срок годности: не менее 3 лет при хранении при комнатной температуре.
Средство для полоскания полости рта с активностью гамма интерферона 1000 МЕ/мл, лизостафина 0,1 ЕД/мл имеет состав на 1 мл:
Пример 7. Средство для ухода за полостью рта в виде спрея.
Готовят навески 600 мг повидона, 30 мг сорбата калия, 3 г натрия бензоата и растворяют навески каждую в отдельных емкостях в 0,5 л воды очищенной, перемешивают на магнитной мешалке. В аппарат с мешалкой вносят 5 л воды, затем последовательно переносят в него растворенные ингредиенты. После этого добавляют 60% раствор лактата калия в объеме 0,3 мл. Содержимое аппарата перемешивают 10 минут. Термостабильную композицию, приготовленную по примеру 3 в количестве 2 г, разводят в небольшом объеме воды и вносят в аппарат, осторожно, избегая вспенивания. Величина рН составляет 6,0 единиц. Добавляют 10 мг масла мяты перечной. Затем доводят объем до 10,0 л водой. Через 10 минут выключают мешалку.
После проведения стерилизующей фильтрации средство упаковывают во флакон с приспособлением для распыления средства в виде спрея.
Получается маловязкая жидкость с легкой опалесценцией и характерным приятным запахом и вкусом.
Активность 200 МЕ/мл интерферона гамма, 0,02 ЕД/мл лизостафина.
Средство предназначено для гигиенического, профилактического и оздоровительного ухода за полостью рта. Для снижения риска развития различных воспалений и инфекционных осложнений после лечебных и других интенсивных процедур в полости рта. Средство не токсично, не вызывает побочных эффектов.
Способ применения: орошать полость рта, направляя спрей на проблемные участки. Не споласкивать водой и не запивать в течение 30 минут. Использовать 3-5 раз по мере необходимости, но не реже 3 раз в сутки. Длительность курса от 2 до 5 недель.
Срок годности: 3 года при хранении при комнатной температуре.
Спрей для полости рта с активностью интерферона гамма 200 МЕ/мл, лизостафина 0,02 ЕД/мл имеет состав на 1 мл:
Пример 8. Средство для ухода за полостью рта в виде спрея
Готовят навески 600 мг повидона, 30 мг сорбата калия, 3 г натрия бензоата и растворяют навески каждую в отдельных емкостях в 0,5 л воды очищенной, перемешивают на магнитной мешалке. В аппарат с мешалкой вносят 5 л воды, затем последовательно переносят в него растворенные ингредиенты. После этого добавляют 60% раствор лактата калия в объеме 0,3 мл. Содержимое аппарата перемешивают 10 минут. Термостабильную композицию, приготовленную по примеру 2 в количестве 3 г, разводят в небольшом объеме воды и вносят в аппарат, осторожно, избегая вспенивания. Величина рН составляет 7,0 единиц. Добавляют 10 мг масла мяты перечной. Затем доводят объем до 10,0 л водой. Через 10 минут выключают мешалку.
После проведения стерилизующей фильтрации средство упаковывают во флакон с приспособлением для распыления средства в виде спрея.
Получается маловязкая жидкость с легкой опалесценцией и характерным приятным запахом и вкусом.
Активность 600 МЕ/мл интерферона гамма, 0,06 ЕД/мл лизостафина.
Средство предназначено для гигиенического, профилактического и оздоровительного ухода за полостью рта. Для снижения риска развития различных воспалений и инфекционных осложнений после лечебных и других интенсивных процедур в полости рта.
Способ применения: орошать полость рта, направляя спрей на проблемные участки. Не споласкивать водой и не запивать в течение 30 минут. Использовать 3-5 раз по мере необходимости, но не реже 3 раз в сутки. Длительность курса от 2 до 5 недель.
Срок годности: 3 года при хранении при комнатной температуре.
Спрей для полости рта с активностью интерферона гамма 600 МЕ/мл, лизостафина 0,06 ЕД/мл имеет состав на 1 мл:
Пример 9. Зубная паста.
Для приготовления 100 г зубной пасты отвешивают 50 мг фторида натрия, 0,5 г тензида, 1 г ксилита, 0,5 г натрия гидрокарбоната, 50 мг натрия бензоата. В качестве основного мягкого абразивного наполнителя использовали оксид кремния в количестве - до получения 100 г пасты. Отвешенные вещества смешивают, после чего к 1/10 полученной смеси прибавляют 50 мг стабилизированной композиции, приготовленной по примеру 1. Перемешивают, после чего полученную смесь добавляли к оставшимся 9/10 частям.
Полученную пасту помещают в алюминиевые тубусы с завинчивающейся крышкой емкостью 40 мл.
Пробоподготовку для подтверждения активности проводят следующим образом. Отвешивают 1 г пасты и взбалтывают его в 5 мл воды очищенной. Полученную смесь отфильтровывают через бумажный фильтр. После чего проводят стерилизующую фильтрацию через фильтр 0,22 мкм. Дальнейшее исследование проводят, как описано в примере 1.
Противовирусная активность интерферона гамма в 1 г зубной пасты составляет 200 МЕ/г, а противомикробная активность лизостафина - 0,02 ЕД/г.
Зубная паста применяется как профилактическое средство для десен и очистке зубов. Для снижения риска развития различных воспалений и инфекционных осложнений после лечебных и других интенсивных процедур в области десен и зубов. Используют по мере необходимости.
Срок годности составляет 3 года.
Пример 10. Зубная паста.
В качестве основного носителя использовали химически осажденный мел с 10% дигидрат дикальцийфосфата, а так же в качестве приемлемых носителей вводили хлорид стронция в количестве 20 мг, глицерин в количестве 0,5 г, фторида натрия в количестве 50 мг, тензида - 0,5 г, ксилита - 1 г, натрия гидрокарбоната - 0,5 г, натрия бензоата - 50 мг. К 1/10 полученной основы прибавляют 50 мг стабилизированной композиции, полученной по примеру 2, тщательно перемешивают. В полученную смесь порционно добавляют оставшуюся часть основы.
Противовирусная активность интерферона гамма в 1 г зубной пасты составляет 1000 МЕ/г, а активность лизостафина - 0,1 ЕД/г.
Зубная паста применяется, как профилактическое средство для десен и для очистки зубов. Для снижения риска развития различных воспалений и инфекционных осложнений после лечебных и других интенсивных процедур в области десен и зубов. Используют по мере необходимости.
Срок годности составляет 3 года.
Пример 11. Санитарно-гигиеническое изделие.
В качестве основного полотна использовали хлопчатобумажную ткань. На образец ткани наносили термостабильную композицию из расчета 15 мг стабильной композиции на каждый квадратный см ткани. Использовали термостабильную композицию, приготовленную по примеру 1. Полученную заготовку подсушивали в естественных условиях в горизонтальном положении, после чего, валиком из твердой резины обкатывали. Заготовку досушивали в течение 24 часов при комнатной температуре.
Получили санитарно-гигиеническое изделие с активностью интерферона гамма 5000 МЕ/см2, лизостафина 0,5 ЕД/см2.
Образцы изделий разрезали на куски площадью около 4 см2 и 10 см2. Образцы площадью 4 см2 в стерильных условиях помещали в культуральную взвесь стафилококка в количестве 1×107 клеток микроорганизмов на 1 мл культуральной взвеси, имеющую оптическую плотность при длине волны 600 нм, одну оптическую единицу.
Образец изделия при помощи стерильного пинцета ополаскивали без взбалтывания в пробирке со взвесью микроорганизмов в течение 10 минут, после чего вели исследование, как показано в примере 1.
Результаты исследования показали соответствие полученным выше уровням активности.
Оценку эффективности противовирусной активности проводили после вымывания активных компонентов из тканевой основы с последующий фильтрацией через фильтр 0.22 мкм по методике, описанной в примере 1.
Санитарно-гигиеническое изделие предназначено для удаления биологической или внешней жидкости с поверхности кожи. Изделие обладает достаточной способностью впитывать влагу при этом, не только механически очищая кожные поверхности от загрязнения, но и эффективно уничтожая микробное загрязнение. Удерживая собранную с кожных поверхностей влагу и загрязнения внутри толщи тканого материала, изделие также дезинфицирует проникшую внутрь среду, что упрощает утилизацию, сводя ее к обычным бытовым отходам. Использованное изделие не будет являться источником вторичного заражения.
Срок годности изделия 3 года.
Пример 12. Санитарно-гигиеническое изделие.
Для приготовления образца санитарно-гигиенического изделия использовали термостабильную композицию по примеру 2. В качестве основного полотна использовали смесевое тканое полотно, содержащее 60% хлопковых и 40% синтетических нитей.
Тканое полотно смачивали водой. Навеску термостабильной композиции отвешивали из расчета 15 мг на один см2. Навеску растворяли при слабом перемешивании в воде очищенной, взятой из расчета 1 мл на 100 мг стабилизированной композиции. Раствор термостабильной композиции оставляли на 30 минут для набухания, после чего наносили на тканое полотно. Равномерно распределяли по поверхности тканого полотна и высушивали при комнатной температуре в течение 24 часов.
Активность санитарно-гигиенического изделия составила 20000 МЕ/см2 интерферона гамма, 2 ЕД/см2 лизостафина.
Отбор контрольных образцов и контроль активности основных компонентов производили аналогично примера 11.
При данном способе нанесения степень удержания основных веществ на поверхности и в толще ткани значительно выше, чем в примере 11. Количество не закрепившегося на тканевой основе материала после высушивания составляет менее 5%.
В процессе проведения анализа активности основных компонентов было установлено, что активность смываемых с поверхности и высвобождаемых компонентов составляет около 85% от начальной. Результаты исследования показали соответствие указанным выше уровням активности.
Полученное санитарно-гигиеническое изделие используется в качестве салфетки.
Для изготовления медицинского изделия в виде перчаток полученное полотно размечали, раскраивали и сшивали, чтобы получить изделие.
Медицинское изделие «перчатки» применяются для кратковременной (не более 2 часов) защиты кожных покровов рук от микробного и/или вирусного поражения в ситуациях, в которых такое заражение возможно, например, во время эпидемии ОРВИ или гриппа. Защитные механизмы активируются после увлажнения ткани перчатки биологическими жидкостями организма или же влагой из окружающей среды. Противомикробный эффект достигается сразу же после попадания микроорганизмов на поверхность изделия. Противовирусный эффект наступает при попадании вирусов вместе с активными компонентами, водящими в состав изделия, на поверхность кожи рук. Изделие также представляет собой механическую преграду, препятствующую попаданию микроорганизмов непосредственно на поверхность кожи рук.
Пример 13. Санитарно-гигиеническое изделие.
В предложенном способе нанесения термостабильной композиции нами был использован следующий прием: тканое полотно предварительно пропитывалось заполняющим составом, после чего избыток заполняющего состава удалялся и после этого на поверхность изделия наносился раствор термостабильной композиции.
Предварительно готовили раствор, содержащий 5 г карбоксиметилцеллюлозы, 0,05 г трегалозы, 1 г альгината натрия и 0,1 г бензоата натрия. В качестве растворителя использовали воду в количестве 100 мл. Раствор готовили при комнатной температуре при периодическом перемешивании в течение 30 минут до полного набухания основы.
Полученный раствор наносили на тканевую основу. Выдерживали в течение 20 минут и удаляли избыток жидкости.
На заготовку изделия наносили раствор термостабильной композиции, такой же, как в примере 12. Отличие от примера 12 было в том, что раствор термостабильной композиции наносили последовательно с обеих сторон изделия с предварительным просушиванием между операциями.
После нанесения раствора термостабильной композиции изделие просушивали в течение 20 ч в токе воздуха до остаточной влажности не более 7 масс %.
Активность санитарно-гигиенического изделия составила 20000 МЕ/г интерферона гамма, 2 ЕД/г лизостафина.
Использование технологии нанесения с использованием заполняющего состава позволяет максимально эффективно использовать термостабильную смесь в изделиях на тканевой или нетканой основе, но имеет большие трудозатраты и себестоимость изготовления изделия.
Санитарно-гигиеническое изделие предназначено для удаления загрязнений и избыточной влаги с кожных покровов. За счет того, что активные компоненты термостабильной композиции распределены на поверхности изделия практически не проникая внутрь основного материала, изделие является более эффективным при обычном способе применения (относительно кратковременное протирание), чем изделия по примерам 11 и 12. За счет того, что компоненты термостабильной композиции полнее переходят на обрабатываемую поверхность. На такой поверхности образуется тончайшая защитная полимерная пленка, которая продолжает оказывать защитное действие в течение какого-то времени уже после применения изделия. При этом изделие сохраняет те же свойства, что и изделие по примерам 11 и 12, включая срок годности.
Пример 14. Санитарно-гигиеническое изделие.
Санитарно-гигиеническое изделие, полученное по примеру 12, использовали для изготовления маски медицинской.
Для ее изготовления изделие, полученное по примеру 12, раскроили и сшили обычным способом маску медицинскую.
В сухом виде биологически активные компоненты белковой природы не проявляют своей эффективности. Однако, изделие в виде маски медицинской для лица, во-первых, непосредственно соприкасается с кожными покровами человека, а, следовательно, при температуре окружающей среды, увлажняется биологическими жидкостями (потовыми выделениями), а во-вторых, дыхание человека содержит в своем составе больше количество водяного пара, который конденсируется на тканевой основе медицинской маски, из-за чего также возникает увлажнение.
Для оценки эффективности изделия «маска медицинская» был применен следующий метод. Для имитации воздушно-капельного обсеменения наружной поверхности изделия, изготовленного по примеру 12, был применен мелкодисперсный диспергатор. На 12 изделий независимо было распылено по 0,5 мл взвеси микроорганизмов с концентрацией 103 микр/мл. После этого изделие дополнительно увлажняли с внутренней стороны при помощи распылителя. Дальнейшие исследования вели аналогично примеру 12.
В результате проведенного тестирования было установлено, что принудительное заражение в высоких дозах тестовым штаммом полностью блокируется изделием, за счет биоцидного действия. Поверхность чашек Петри остается чистой, рост колоний отсутствует, в то время как в тестовых образцах наблюдается ожидаемый рост (положительный контроль). Отрицательный контроль (уровень фоновой обсемененности в месте проведения исследования) показал отсутствие роста, что подтверждает валидность проведения исследования. Результаты исследования показали соответствие указанным выше уровням активности.
Обычная, в том числе многослойная маска медицинская является только механическим препятствием, на котором задерживаются частички пыли и водяные микрокапли, с помощью которых распространяются опасные для человека вирусы и микроорганизмы. В связи с этим время эксплуатации обычной маски медицинской чаще всего ограничено 2 часами. В условиях сильного загрязнения это время уменьшается.
При использовании изготовленной в этом примере маски медицинской к свойству механического задержания внешних частиц прибавляется противовирусное и противомикробное действие, в результате чего время эксплуатации значительно увеличивается и определяется в основном необходимостью и уровнем запыленности внешней среды. При этом, чем больше маска эксплуатируется, тем полнее происходит перенос компонентов на поверхность кожи. Которые в свою очередь, в местах контакта с кожной поверхностью образуют тонкую полимерную защитную пленку, что усиливает суммарный положительный эффект от применения изделия.
Приготовленное изделие, помещали в индивидуальную герметичную упаковку и хранили при комнатной температуре в течение 3 лет. По истечении срока хранения изделие изымались с хранения и направлялись на контроль.
В результате проведенного контроля по показателям активности основных компонентов было установлено, что противовирусная активность по интерферону гамма снижается на 7% от первоначальной, а противомикробная- лизостафина на 4%.
Пример 15. Санитарно-гигиеническое изделие на бумажной основе.
Данный пример отличается от примера 11 тем, что в качестве основы использовали однослойную бумагу низкой плотности из целлюлозы.
Подтверждение активности проводили аналогично примеру 11. Изделие высушивали в токе воздуха до остаточной влажности 7 масс %.
Активностью интерферона гамма 5000 МЕ/см2, лизостафина 0,5 ЕД/см2.
Подтверждение противовирусной активности проводили следующим способом. От изделия отрезали опытный кусок площадью 100 см2, который сворачивали в неплотный рулон и помещали в емкость с 10 мл воды очищенной. При помощи пинцета образец перемешивали в течение 15 минут, после чего удаляли из раствора. Полученный раствор фильтровали через бумажный фильтр «синяя лента» для удаления крупных остатков отсоединившейся от основного образца бумаги. А затем стерилизовали через фильтр 0,22 мкм. Дальнейший анализ вели так же, как в примере 1.
Из полученного изделия изготавливали платки носовые одноразовые сухие, салфетки одноразовые сухие, бумажные полотенца. Результаты исследования показали соответствие указанным выше уровням активности.
Изделие применяется для протирания кожных покровов и может быть утилизировано посредством бытовой канализации.
Срок хранения составляет 3 года.
Пример 16. Санитарно-гигиеническое изделие.
Изделие, полученное по примеру 15, использовали в качестве бумажных салфеток, которые упаковывали как индивидуально, так и по 100 штук в общей упаковке.
Активность изделия составила 20000 МЕ/г интерферона гамма, 2 ЕД/г лизостафина.
Пример 17. Медицинское изделие (губка).
Изделие, губку, изготавливали путем нанесения на экструдированную целлюлозу. Используемый материал представлет собой пористые, полужесткие отрезные листы размером (500×1000)мм. После нанесения термостабильной композиции листы разрезались.
В результате стерильная губка для местного применения представляет собой жесткий волокнистый легко смачиваемый материал 5×5 см, толщиной от 2 до 7 мм, упакованный индивидуально или в групповой упаковке по 5, 10, 20 или более штук. Активность медицинского изделия составила 5000 МЕ/г интерферона гамма, 0,5 ЕД/г лизостафина.
Изделие применяется как биоцидное для обработки кожных покровов, например, со стафилококковым или герпетическим поражением. В легких случаях повреждения кожных покровов изделие может применяться самостоятельно, а также в сочетании с лекарственными средствами наружного применения. Крепление изделия происходит за счет бинта или лейкопластыря.
Изделие обладает хорошей впитываемостью. После увлажнения водой или биологическими жидкостями в месте соприкосновения с пораженным участком кожных покровов оно образует стойкую защитную пленку, из которой постепенно высвобождаются активные компоненты. Это способствует повышению длительности эффекта от местного применения. Результаты исследования показали соответствие указанным выше уровням активности.
При необходимости остатки защитной пленки могут быть легко удалены с кожных покровов. Изделие не вызывает местной реакции. Не аллергенно. Срок годности изделия при хранении в упаковке в сухом месте составляет 3 года.
Пример 18. Санитарно-гигиеническое изделие (салфетка).
Санитарно-гигиеническое изделие, полученное в примере 13, разрезали на куски 40×40 см.
Методика анализа эффективности была модифицирована следующим образом.
На стерильной поверхности для тестирования в боксовом помещении при помощи маркера наносили разметку 10 на 10 см2. Использовали 4 рабочих разведения тестового микроорганизма, для чего выделяли 12 квадратов разметки. Дополнительно размечали еще 6 квадратов той же площади. Разведения тестового микроорганизма наносили ватным тампоном на деревянной палочке, предварительно смачивая тампон в суспензии клеток. Оставляли для высыхания (отсутствие видимых следов влаги).
Салфетку дважды сворачивали и без сильного нажима протирали
Экспонировали в течение 10 минут после протирания, после чего методом отпечатков снимали оставшиеся микроорганизмы с квадратов на чашки Петри.
Дополнительные размеченные квадраты на поверхности для тестирования также заражали тестовым штаммом микроорганизма, но эти квадраты не протирались салфеткой. На них тем же методом отпечатков оценивался коэффициент переноса микроорганизмов с поверхности для тестирования на питательную среду в чашках Петри. Для определения величины начального заражения квадратов на тестовой поверхности, разведения микроорганизмов наносились ватным тампоном на деревянной палочке, смоченным в культуральной жидкости тестового штамма, на чашки Петри напрямую.
Было установлено, что эффективность противомикробного действия салфеток, при обработке тестовой поверхности, достигается практически стопроцентное обеззараживание поверхности во всех тестах. Связано это с тем, что плохо закрепленные микроорганизмы механически снимаются с поверхности, попадают вглубь материала салфетки, где и гибнут, тогда как хорошо закрепившиеся на поверхности микроорганизмы под воздействием лизостафина теряют свою жизнеспособность. После применения салфетка не становиться возможным источником постороннего заражения и не требует специальных мер по утилизации. Результаты исследования показали соответствие указанным выше уровням активности.
Срок годности составляет 3 года.
Пример 19. Санитарно-гигиеническое влажное изделие.
В качестве основного полотна использовали хлопчатобумажную ткань. На образец ткани наносили термостабильную композицию из расчета 200 мг стабильной композиции на каждый квадратный см ткани. Использовали термостабильную композицию, приготовленную по примеру 1. Полученную заготовку подсушивали в естественных условиях в горизонтальном положении, после чего, валиком из твердой резины обкатывали. Заготовку досушивали в течение 24 часов при комнатной температуре.
Получили санитарно-гигиеническое влажное изделие с активностью интерферона гамма 4000 МЕ/см2, лизостафина 0,4 ЕД/см2
Сушку останавливали, когда остаточная влажность составляла 15 масс %. Результаты исследования показали соответствие указанным выше уровням активности.
Срок хранения изделия составляет 3 года.
Пример 20. Санитарно-гигиеническое влажное изделие.
В качестве основного полотна использовали смесевое полотно, содержащее 60% хлопковых и 40% синтетических нитей. Для изготовления изделия использовали 3,2 г термостабильной композиции, приготовленной по примеру 1. Для приготовления заполняющей основы использовали следующие навески вспомогательных компонентов: 20 г карбоксиметилцеллюлозы, 10 г альгината натрия и 0,5 г бензоата натрия. В качестве растворителя использовали воду в количестве 100 мл. Раствор готовили при комнатной температуре при периодическом перемешивании в течение 30 минут до полного набухания основы.
Полученная в результате масса имеет гелеобразное состояние. Для сохранения его подвижности полученную массу готовили на водяной бане при 50°С. Нанесение заполняющей основы на смесевое волокно, состоящее из целлюлозных и вискозных волокон, проводили аналогично примеру 13, за тем исключением, что процедура нанесения проводилась резиновым валиком и при температуре около 40°С. Полученный материал отжимали и подсушивали до содержания влаги 20 масс %.
Активность по гамма интерферону составляет 16000 МЕ/см2, а по лизостафину 1,6 Ед/см2.
Изделие предназначено для наружного применения как самостоятельно, так и с удерживающим материалом, в качестве которого может выступать бинт медицинский или другое средство закрепления на поверхности кожи. На поверхности кожи изделие образует прочные, биологически безопасные, защитные пленки за счет чего достигается более выраженный дезинфицирующий эффект, чем при применении в качестве средства для протирания. Результаты исследования показали соответствие указанным выше уровням активности. Срок годности изделия в герметичной упаковке 3 года.
Пример 21. Одноразовое впитывающее изделие.
Санитарно-гигиеническое изделие по примеру 11 разрезали на куски 20 на 20 см, после чего добавляли вату и сворачивали таким образом, чтобы края были внутри изделия. При использовании изделия, его не разворачивают.
При этом соотношение масс по весу составило вата: изделие 5:1.
Используется для местного наружного применения.
Срок годности составляет 3 года.
Применяется для удаления больших количество жидкостей природного или биологического происхождения, например, эксудативной.
Пример 22. Одноразовое впитывающее изделие (тампон).
В качестве влагопоглощающего наполнителя использовали вату медицинскую гигроскопическую, которую предварительно обработали для увеличения плотности волокон. Для изготовления изделия отвешивали 5 г ваты, из которой механическим способом формировали тампон. Ватный тампон помещали внутрь санитарно-гигиенического изделия, изготовленного по примеру 11, который плотно навивали в четыре слоя вокруг ватного тампона. Края ткани подгибали внутрь изделия и закрепляли нитью, так чтобы изделие самопроизвольно не раскрывалось. При этом соотношение масс по весу составило вата: изделие 10: 3.
Пример 23. Одноразовое гигиеническое изделие (гигиеническая прокладка).
Одноразовое гигиеническое изделие делали так же, как в примере 22. Но ватный тампон формировали в виде прямоугольника 4 на 6 см и толщиной 1 см. Санитарно-гигиеническое изделие по примеру 12 раскраивали таким образом, чтобы можно было сформировать удобное для применения гигиеническое изделие («крылышки»), после чего ватный тампон помещали внутрь выкройки, края подгибали и прошивали механическим способом. В качестве модификации использовали также склеивание краев при помощи клея. При этом соотношение масс по весу составило вата: изделие 9:2.
Пример 24. Одноразовое гигиеническое изделие (ежедневная прокладка).
Одноразовое гигиеническое изделие изготавливали по примеру 22, но ватный наполнитель предварительно обрабатывали ароматизатором. Толщину ватного влагопоглощающего наполнителя использовали 0.5 см. Перед помещением в выкройку из изделия по примеру 12 с двух сторон ватного влагопоглощающего тампона укладывали полусинтетический полупроницаемый не тканый материал предотвращающий выход удерживаемой внутри изделия влаги. При этом соотношение масс по весу составило вата: изделие 5:2.
Изделие помещали в упаковочную полиэтиленовую пленку по 10 шт.
Регулируя толщину влагопоглощающего слоя, можно изготавливать данный вид изделия под различные требования эксплуатации. Также на потребительские свойства благоприятно сказывается введение в конструкцию изделия элементов из силикагеля и различных не тканых материалов с клеящим слоем во вставках в части изделия, не соприкасающиеся с телом человека, но способствующие удержанию изделия на элементах одежды.
Пример 25. Средство для ухода за кожей.
Приготовление заявляемого средства осуществляют путем получения сначала косметически приемлемой основы содержащей (масс %):
Приготовление заявляемого средства осуществляют путем смешивания полученной косметически приемлемой основы в количестве 100 г с термостабильной композицией, с активностью 1000000 МЕ/г по интерферону гамма и 100 ЕД/г по лизостафину, приготовление которой описано в примере 3, в количестве 50 мг.
Готовое средство, представляющее собой маску для лица, фасуют в необходимую емкость (например, тубы), укупоривают и маркируют.
Полученное средство обладает активностью интерферона гамма 500 МЕ/г, лизостафина 0,05 ЕД/г.
Срок хранения составляет 3 года.
Пример 26. Средство для ухода за кожей.
Препарат готовили из термостабильной композиции с активностью 500000 МЕ/г по интерферону гамма и 50 ЕД/г по лизостафину, приготовление которой описано в примере 1.
Состав на 1 г средства:
Средство обладает активностью по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 2000 МЕ/г и по лизостафину 0,2 ЕД/г.
Средство в виде крема может быть использовано для гигиенического, профилактического и оздоровительного ухода за кожей с проявлениями воспаления, нагноениями, фурункулами. Средство не вызывает побочных эффектов, не токсично, обладает биоцидным эффектом, при этом улучшает структуру кожи.
Срок годности 3 года.
Пример 27. Средство для ухода за кожей.
Для изготовления средства, в виде геля, использовали термостабильную композицию по примеру 1, содержащую 500000 МЕ/г интерферона гамма и 50 ЕД/г лизостафина. Для приготовления заполняющей основы использовали следующие навески вспомогательных компонентов: 20 г карбоксиметилцеллюлозы, 10 г альгината натрия и 0,05 г бензоата натрия. В качестве растворителя использовали воду в количестве 100 мл. Раствор готовили при комнатной температуре при периодическом перемешивании в течение 30 минут до полного набухания основы. Затем в гель вводили термостабильную композицию из расчета: на 1 г геля берется 1 мг термостабильной композиции. Получаемый в результате материал представляет собой плотный гель.
Средство обладает активностью по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 500 МЕ/г и по лизостафину 0,05 ЕД/г.
Такая косметически приемлемая гелевая основа, формирует на обрабатываемой поверхности кожи, тонкую биоразлагаемую пленку, из которой активные противовирусные агенты высвобождаются в течение всего времени контакта. Дополнительным фактором выбора этих веществ, служит тот известный факт, что они, благодаря способности к биодеградации, обладают кровоостанавливающим, сорбирующим и рядом других лечебных свойств, что является положительным фактором при применении геля в качестве профилактических и гигиенических средств для обработки кожных поверхностей.
Также средство может быть использовано для гигиенического, профилактического и оздоровительного ухода за кожей людей и животных, с выраженными воспалениями, нагноениями, фурункулами и другими проявлениями бактериальной инфекции.
Средство безопасно для человека и животных.
Способ применения: с помощью дозатора выдавить средство на шпатель (или ватный тампон) и равномерно распределить на проблемных участках кожи. Использовать по мере необходимости, но не реже 2 раз в сутки. Длительность курса от 2 до 3 недель.
Анализ эффективности полученного средства проводили аналогично примера 1. Результаты исследования показали соответствие указанным выше уровням активности.
Полученный таким образом гель фасовали во флаконы по 10, 25 и 50 г. Срок годности геля составляет 3 года.
Пример 28. Средство для ухода за кожей.
Для приготовления приемлемой косметической основы, в виде желе, отвешивали: желатина 3 г, агар-агара 2 г, трагананта 1 г, крахмала 2 г. Сухие вещества добавляли к ранее приготовленной водно-глицериновой смеси, состоящему из 30 мл глицерина и 50 мл воды очищенной. Смешивание проводили при постоянном перемешивании. После этого к 1/10 части приготовленной приемлемой основы прибавляли термостабильную композицию, приготовленную по примеру 3 в количестве 0,1 г и перемешивали. Затем добавляли оставшуюся водно-глицериновую смесь и перемешивали еще раз. В результате получали 100 мл готового желе.
Полученное желе фасовали в банки по 25 г.
Средство обладает активностью по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 1000 МЕ/г и по лизостафину 0,1 ЕД/г.
Полученная композиция может быть использована в косметологических целях для обработки кожных покровов с незначительными воспалительными очагами, угревой сыпью и другими дефектами кожных покровов.
Срок годности изделия составляет 3 года.
Пример 29. Средство для ухода за кожей.
Для приготовления приемлемой косметической основы, в виде желе, сначала готовили водно-глицериновую смесь для чего 30 частей глицерина смешивали с 50 частями воды очищенной. Готовили навески ПЭГ40. 2 г, желатина 3 г, карбоксиметилцеллюлозы 5 г. Сухие вещества вносили в ранее приготовленный раствор при постоянном перемешивании. После чего прибавляли термостабильную композицию, приготовленную по примеру 1 в количестве, 0,3 г Тщательно перемешивали. Полученное косметологическое желе фасовали в банки по 25 г.
Средство обладает активностью по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 1500 МЕ/г и по лизостафину 0,15 ЕД/г.
Срок годности составляет 3 года.
Пример 30. Средство для ухода за кожей.
Для приготовления приемлемой косметической основы, в виде маски, делали навески веществ: карбопол ультраз-213 г, сорбит 5 г, мануол 5 г, лавитол косметический 5 г, масло облепиховое 2 г. В качестве основного растворителя использовали воду в количестве 100 мл. Вводили в полученный состав термостабильную композицию, приготовленную по примеру 2 в количестве 0,1 г. Готовый состав фасовали в индивидуальную упаковку по 20 г.
Средство обладает активностью по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 2000 МЕ/г и по лизостафину 0,2 ЕД/г.
Срок годности составляет 3 года.
Полученное изделие предназначено для нанесения на кожу лица с последующей экспозицией в течение от 15 до 60 минут. Изделие хорошо смягчает кожу лица. Усиливает клеточный противовирусный иммунитет, убивает микроорганизмы и очищает поры кожи. Так же обладает смягчающим действием.
Пример 31. Санитарно-гигиеническое изделие в форме спрея.
Готовят навески 200 г трегалозы, 4 г сорбата калия, 30 г ПЭГ400 и растворяют каждую навеску в отдельной емкости в 0,5 л воды, перемешивая на магнитной мешалке. В реактор вносят 5 л воды, затем последовательно переносят в него растворенные ингредиенты. Раствор перемешивают не менее 10 минут. Величина рН составляет 6,0 единиц. Для корректировки рН используют триэтаноламин. Термостабильную композицию, приготовленную по примеру 1, в количестве 10 г разводят в небольшом объеме воды и вносят к содержимому реактора, осторожно, избегая вспенивания. Добавляют 5 мг масла лимона. Затем доводят объем до 10,0 л водой. Через 10 минут выключают мешалку реактора.
После проведения стерилизующей фильтрации средство упаковывают во флаконы с приспособлением для распыления средства в виде спрея.
Применяется путем аэрозольного распыления средства на поверхности с высокой вероятностью обсеменения бактериальной патогенной микрофлорой и на поверхности кожи, требующей особенной чистоты и дополнительной защиты от контаминации. Срок годности: не менее 3 лет при хранении при комнатной температуре.
Полученный спрей использовали для интенсивного гигиенического, профилактического и оздоровительного ухода за кожей животных с выраженными воспалениями, нагноениями, фурункулами и другими проявлениями бактериальной инфекции. Применяется путем аэрозольного распыления средства на кожные покровы животного. Использовать по мере необходимости, но не реже 2 раз в сутки. Длительность курса от 2 до 3 недель.
Также данное средство может применяться для интенсивного гигиенического, профилактического ухода за одеждой. Для снижения риска заражения и развития различных воспалений и инфекционных заболеваний. Способ применения: путем аэрозольного распыления средства на ткань.
Средство с активностью интерферона гамма 500 ME /мл, лизостафина 0,05 ЕД/мл имеет состав на 1 мл:
Пример 32. Санитарно-гигиеническое средство в форме спрея.
Готовят навески 500 г трегалозы, 150 г сорбата калия, 150 г ПЭГ400 и растворяют каждую навеску в отдельной емкости в 0,5 л воды, перемешивая на магнитной мешалке. В реактор вносят 5 л воды, затем последовательно переносят в него растворенные ингредиенты. Раствор перемешивают не менее 10 минут. Величина рН составляет 7,0 единиц. Для корректировки рН используют триэтаноламин. Термостабильную композицию, приготовленную по примеру 2, в количестве 500 г вносят в реактор, осторожно, избегая вспенивания. Добавляют 5 мг масла мяты перечной. Затем доводят объем до 10,0 л водой. Через 10 минут выключают мешалку реактора.
После проведения стерилизующей фильтрации средство упаковывают во флаконы с приспособлением для распыления средства в виде спрея.
Применяется путем аэрозольного распыления средства на поверхности с высокой вероятностью обсеменения бактериальной патогенной микрофлорой и на поверхности кожи, требующие особенной чистоты и дополнительной защиты от контаминации. Срок годности составляет не менее 3 лет при хранении при комнатной температуре.
Средство с активностью интерферона гамма 100000 МЕ/мл, лизостафина 10 ЕД/мл имеет состав на 1 мл:
Пример 33. Санитарно-гигиеническое средство для обработки поверхностей.
Для изготовления изделия использовали термостабильную композицию по примеру 1, содержащую 500000 ME интерферона гамма и 50 ЕД лизостафина. Для приготовления заполняющей основы использовали следующие навески вспомогательных компонентов: 10 г карбоксиметилцеллюлозы, 2 г альгината натрия и 0,05 г бензоата натрия. В качестве растворителя использовали воду в количестве 100 мл. Раствор готовили при комнатной температуре при периодическом перемешивании в течение 30 минут до полного набухания основы.
Полученный таким образом гель фасовали во флаконы по 10, 25 и 50 грамм. Срок годности геля составляет 3 года.
Полученный гель анализировали на противомикробную активность. Как описано в примере 13. Было установлено, что начальная противомикробная активность составляет 0,05 ЕД/мл санитарно-гигиенического средства.
Для контроля антивирусной активности отбирали четыре пробы по 0,1 мл санитарно-гигиенического изделия, после чего использовали методологию, описанную в примере 1. Было установлено, что начальная противовирусная активность составляет 500 МЕ/мл изделия.
Конечная противовирусная активность через 3 года хранения в нормальных условиях соответствует результатам исследования для примеров 1-4.
Средство представляет собой достаточно текучую основу, после высыхания образующую тонкую, относительно прочную полимерную пленку, из которой действующие вещества могут высвобождаться продолжительное время. При необходимости образовавшаяся пленка может быть легко удалена с поверхности водой.
Пример 34. Кондиционер для белья.
Кондиционер готовили из термостабильной композиции с активностью 1000000 МЕ/г по интерферону гамма и 100 ЕД/г по лизостафину, приготовление которой описано в примере 3.
Компоненты берут в следующем соотношении на 1 мл средства
Для лучшей дисперсности предпочтительная форма композиции представляет собой жидкую форму, может подаваться с помощью дозирующих устройств, например, пульверизатора.
Активность средства составляет по интерферону гамма 10000 МЕ/мл, по лизостафину 1 ЕД/мл.
Кондиционер для белья согласно изобретению должен быть использован в процессе полоскания без применения средств, содержащих ионные детергенты. Кондиционер для белья при употреблении разбавляется в водном растворе. Белье, обработанное кондиционером, проявляет свои свойства при поражении кожи стафилококком.
Срок хранения 3 года.
Пример 35. Кондиционер для белья.
Кондиционер для белья согласно изобретению должен быть использован в процессе полоскания без применения средств, содержащих ионные детергенты. Кондиционер для белья при употреблении разбавляется в водном растворе.
Препарат готовили из термостабильной композиции с активностью 2000000 МЕ/г по интерферону гамма и 200 ЕД/г по лизостафину, приготовление которой описано в примере 2.
Компоненты берут в следующем соотношении на 1 мл средства
Средство обладает активностью интерферона гамма 2000 МЕ/г, лизостафина 0,2 ЕД/мл.
Пример 36. Средство для смазки презервативов.
Препарат готовили из термостабильной композиции с активностью 500000 МЕ/г по интерферону гамма и 50 ЕД/г по лизостафину, приготовление которой описано в примере 1.
Для получения средства готовят раствор компонентов. К гидрофильной основе, состоящей из сплава полиэтиленоксида 400 и полиэтиленоксида 4000, добавляют вспомогательные компоненты. Стерилизуют автоклавированием. Затем добавляют термостабильную композицию и перемешивают. Готовый препарат фасуют в необходимую емкость (например, тубы), герметизируют и маркируют.
Указанные компоненты берут в следующем соотношении на 1 г средства:
Средство обладает активностью интерферона гамма 5 МЕ/г, лизостафина 0,0005 ЕД/г.
Средство рекомендовано для проведения профилактики стафилококковых инфекций и заболеваний, передаваемых половым путем.
Пример 37. Средство для смазки презервативов.
Препарат готовили из стабилизированной композиции с активностью 1000000 МЕ/г по интерферону гамма и 100 ЕД/г по лизостафину, приготовление которой описано в примере 1.
Смешивают компоненты, стерилизуют автоклавированием. Затем добавляют стабилизированную композицию и перемешивают. Готовый препарат фасуют в необходимую емкость (например, тубы), герметизируют и маркируют.
Указанные компоненты берут в следующем соотношении на 1 г средства:
Средство обладает активностью интерферона гамма 50 МЕ/г, лизостафина 0,005 ЕД/г.
Срок хранения составляет 3 года.
Средство рекомендовано для проведения профилактики заболеваний, передаваемых половым путем.
Пример 38. Лекарственное средство в виде мази для лечения кожных инфекций.
Для приготовления средства использовали термостабильную композицию с активностью 2000000 МЕ/г по интерферону гамма и 200 ЕД/г по лизостафину, приготовление которой описано в примере 2.
Состав на 1 г средства:
Средство обладает активностью по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 20000 МЕ/г и по лизостафину 2 ЕД/г.
Средство может быть использовано для ухода за кожей с проявлениями воспаления, нагноениями, фурункулами. Средство не вызывает побочных эффектов, не токсично.
Срок годности составляет 3 года.
Пример 39. Лекарственное средство в виде геля для лечения кожных инфекций.
Лекарственное средство в виде геля применяется для лечения воспалений, нагноений, фурункулеза и других проявлений бактериальной инфекции на коже.
Для приготовления геля, использовали термостабильную композицию по примеру 1, содержащую 500000 МЕ/г интерферона гамма и 50 ЕД/г лизостафина. Для приготовления заполняющей основы использовали следующие навески вспомогательных компонентов: 20 г карбоксиметилцеллюлозы, 10 г альгината натрия и 0,05 г бензоата натрия. В качестве растворителя использовали воду в количестве 100 мл. Термостабильная композиция вносится из расчета 10 мг на 1 г геля. Раствор готовили при комнатной температуре при периодическом перемешивании в течение 30 минут до полного набухания основы. Полученный гель фасовали во флаконы по 10, 25 и 50 г.
Средство обладает активностью по человеческому рекомбинантному интерферону гамма 5000 МЕ/г и по лизостафину 0,5 ЕД/г.
Способ применения: с помощью дозатора выдавить средство на шпатель или ватный тампон и равномерно распределить на проблемных участках кожи. Использовать по мере необходимости, но не реже 2 раз в сутки. Длительность курса от 2 до 3 недель.
Срок годности геля составляет 3 года.
Пример 40. Лекарственное средство в форме спрея для лечения кожных инфекций
Растворяют навески 200 г трегалозы, 4 г сорбата калия, 30 г ПЭГ400 в реакторе в 5 л воды. Перемешивают не менее 10 минут. Величина рН составляет 6,0 единиц. Для корректировки рН используют триэтаноламин. Термостабильную композицию, приготовленную по примеру 2, в количестве 2,5 г разводят в небольшом объеме воды и вносят к содержимому реактора, осторожно, избегая вспенивания. Затем доводят объем до 10,0 л водой. Через 10 минут выключают мешалку реактора.
После проведения стерилизующей фильтрации средство упаковывают во флаконы с приспособлением для распыления средства в виде спрея.
Применяется путем аэрозольного распыления средства на поверхности кожи.
Срок годности составляет не менее 3 лет при хранении при комнатной температуре.
Полученный спрей, использовали для лечения кожи с выраженными воспалениями, нагноениями, фурункулами и другими проявлениями бактериальной инфекции. Использовать по мере необходимости, но не реже 2 раз в сутки. Длительность курса от 2 до 3 недель.
Средство с активностью интерферона гамма 5000 МЕ/мл, лизостафина 0,5 ЕД/мл имеет состав на 1 мл:
Пример 41. Приготовление лиофилизированного лекарственного средства для приготовления раствора для интраназального применения.
В емкость с перемешивающим устройством наливают 500 мл воды. Вносят в емкость натрий фосфорнокислый двузамещенный двенадцативодный в количестве 2,19 г, натрий фосфорнокислый однозамещенный двуводный в количестве 0,6 г, полиглюкин в количестве 12 г, трегалозу в количестве 1 г. Перемешивают и замеряют рН, который составляет 7,0. В емкость с растворенными ингредиентами вносят термостабильную композицию, приготовленную по примеру 2 в количестве 10 г, перемешивают.
Доводят объем водой до 1 л и перемешивают в течение 15 минут, не допуская вспенивания. Полученный раствор фильтруют через фильтры 0,45 мкм и 0,2 мкм и проводят асептический розлив во флаконы нейтрального стекла с дозой наполнения 1 мл. Замораживают при минус 40°С и лиофилизируют в течение 36 часов. Флаконы герметично укупоривают резиновыми пробками и алюминиевыми колпачками.
Препарат представляет собой лиофилизированный порошок белого цвета. Порошок гигроскопичен. рН раствора одного грамма в 5 мл воды равен 7,0.
Полученный лиофилизат обладает активностью лизостафина 2 ЕД/флакон и 20000 МЕ/флакон гамма интерферона. Содержит следующие компоненты:
Лиофилизат хранили при температуре +25°С в течение 5 лет. На протяжении 5 лет проверяли стабильность композиции при хранении. Через 5 лет активность составила по лизостафину 92% от исходной.
Пример 42. Приготовление лекарственного средства для интраназального применения в форме спрея.
В емкость с перемешивающим устройством наливают 500 мл воды. Вносят в емкость следующие навески: 1,35 г натрия фосфорнокислого двузамещенного двенадцативодного, 0,98 г натрия фосфорнокислого однозамещенного двуводного, 30 г ПЭГ 400, 30 мг натрия хлористого, 1,5 г сорбитола, 0,3 г натрия бензоата, 20 г глицерина. Перемешивают и замеряют рН, который составляет 6,6. Термостабильную композицию, приготовленную по примеру 2, в количестве 50 г разводят в небольшом объеме воды и приливают к содержимому емкости с мешалкой, осторожно, избегая вспенивания. Через 5 минут доводят объем до 1,0 л водой. Перемешивают 5 минут.
После проведения стерилизующей фильтрации средство упаковывают во флакон с приспособлением для распыления средства в виде спрея при объеме дозирования 5 мл, 50 мл.
Средство представляет собой бесцветную жидкость, возможна легкая опалесценция.
Активность: 100000 МЕ/мл интерферона гамма, 1 10 ЕД/мл лизостафина.
Средство не токсично, не вызывает побочных эффектов.
Использовать 3-5 раз по мере необходимости, но не реже 3 раз в сутки.
Средство для интраназального применения с активностью гамма интерферона 100000 МЕ/мл, лизостафина 10 ЕД/мл имеет состав на 1 мл:
Срок годности составляет не менее 3 лет при хранении при комнатной температуре.
Пример 43. Приготовление лекарственного средства в форме суппозитория.
В гомогенизатор загружают 3 г твина 80, прибавляют 15,5 г полиэтиленоксида 400 и перемешивают до однородного состояния, затем добавляют 0,01 г динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты и перемешивают до полного растворения, добавляют 0,5 г цинка сульфата моногидрата, тщательно гомогенизируют. Термостабильную композицию, приготовленную по примеру 2 в количестве 1 г небольшими порциями вводят в гомогенат и нагревают до 48-50°С. К полученной гомогенной суспензии при перемешивании приливают 0,2 мл воды очищенной, массу тщательно перемешивают и приливают постепенно при тщательном перемешивании в 130 г расплава полиэтиленоксида 1500, массу тщательно перемешивают и быстро разливают в контурную ячейковую упаковку №5. Получают 100 суппозиториев массой 1,5 г, содержащих в каждом суппозитории 20000 ME интерферона гамма и 2 ЕД лизостафина.
Пример 44. Приготовление лекарственного средства в форме суппозитория.
Готовят 150 г смеси, для чего первоначально смешивают стабилизатор бутилокситолуол с диметилсульфоксидом и Твином-80. Соединяют гомогенат с расплавленной смесью кондитерского жира и парафина в соотношении 8:1 (липофильная основа) и добавляют термостабильную композицию, приготовленную по примеру 3 в количестве 0,5 г. Смесь выливают в формы для свечей, остужают и упаковывают. Указанные компоненты берут в следующем соотношении в 1 г смеси:
Получают 100 суппозиториев массой 1,5 г, содержащих в каждом суппозитории 5000 ME интерферона гамма и 0,5 ЕД лизостафина.
Реферат
Группа изобретений относится к биотехнологии, фармации, медицине, косметологии, ветеринарии и может быть использована для профилактики и лечения бактериальных и вирусных заболеваний у людей и животных, а также относится к производству широкого спектра санитарно-гигиенических и лекарственных средств. Предлагается термостабильная композиция, обладающая антивирусной и антибактериальной активностью, представляющая собой лиофилизат с активностью человеческого рекомбинантного интерферона гамма от 500000 до 2000000 МЕ/г и активностью лизостафина от 50 до 200 ЕД/г, который получен из раствора с рН 5-7 и содержит в 1 г композиции: человеческий рекомбинантный интерферон гамма 0,03-0,12 мг; лизостафин 0,17-0,68 мг; метоксиполиэтиленгликоль 30-150 мг; альгинат натрия 10-25 мг; натрий фосфорнокислый двузамещенный двуводный 120-250 мг; лимонная кислота 35-110 мг; декстран – остальное. Предлагается также следующие средства и изделия, содержащие вышеуказанную композицию: средство для ухода за полостью рта, представляющее собой водный раствор композиции; зубная паста; санитарно-гигиеническое изделие, содержащее основное полотно, состоящее из хлопка, и/или целлюлозы, и/или вискозы, и/или синтетических материалов или их смеси, и вышеуказанную композицию; одноразовое впитывающее изделие, представляющее собой одно из следующих изделий: тампон, гигиеническую прокладку, ежедневную прокладку, содержащее носитель и вышеуказанное санитарно-гигиеническое изделие; санитарно-гигиеническое влажное изделие, представляющее собой впитывающий материал, пропитанный указанной композицией; средство для ухода за кожей; санитарно-гигиеническое средство, содержащее указанную композицию и приемлемую жидкую основу; санитарно-гигиеническое средство, представляющее собой гель, содержащее приемлемую основу (карбоксиметилцеллюлозу, альгинат натрия, консервант) и указанную композицию; кондиционер для белья; средство для смазки презервативов, лекарственное средство, обладающее антивирусной и антибактериальной активностью; медицинское изделие, обладающее антивирусной и антибактериальной активностью, представляющее собой маску для лица, или бинт, или одноразовые перчатки; медицинское изделие, представляющее собой губку для местного применения, на которую нанесена указанная композиция. При использовании группы изобретений достигаются следующие технические результаты: сохранение и стабилизация биологических свойств двух различных белков: человеческого рекомбинантного интерферона гамма и лизостафина при стандартных условиях хранения, в течение длительного времени; получение композиции, обладающей высокой антивирусной и антибактериальной активностью, и различных средств и изделий с ее использованием, обеспечивающих комплексную защиту человека от проникновения бактериальных и вирусных инфекций; обеспечение возможности применения указанной композиции без потери своих свойств и своей активности в крупномасштабном производстве заявляемых изделий и средств. 14 н. и 30 з.п. ф-лы, 2 табл., 44 пр.
