Ингибиторы нейтральной эндопептидазы (нэп) и растворимой эндопептидазы человека (рэпч) для профилактики и лечения глазных болезней - RU2758771C1

Описание

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0001] Описаны двойные ингибиторы эндотелинпревращающего фермента-1 (ЭПФ-1), а также нейтральной эндопептидазы (НЭП) и/или растворимой эндопептидазы человека (РЭПч), применяемые по отдельности или в композиции, при условии, что указанные фармацевтические композиции могут необязательно содержать один или несколько ингибиторов карбоангидразы, таких как, например, бринзоламид адренергические агонисты, такие как, например, бримонидин, β-блокаторы, такие как, например, тимолол, аналоги простагландинов, такие как, например, биматопрост, ингибиторы R-киназы, такие как, например, нетасурдил, агонисты рецепторов аденозина, такие как, например, трабоденозон, антагонисты рецепторов эндотелии, такие как, например, ситаксентан, двойные антагонисты рецепторов эндотелина, такие как, например, бозентан, доноры оксида азота, такие как, например, бутандиолпарасимпатомиметики, такие как, например, пилокарпин, ацетилхолин, катехоламины, такие как, например, адреналин, антагонисты мускариновых рецепторов, такие как, например, атропин, ингибиторы сосудистого эндотелиального фактора роста, такие как, например, ранибизумаб, кортикостероиды, такие как, например, дексаметазон, антибиотики, такие как, например, ванкомицинсредства для регенерации тканей, такие как, например, поликарбоксиметилглюкоза, витамины и провитамины, такие как, например, пантенол и ретинил пальмитатхимиотерапевтические средства, такие как, например, митомицин, нестероидные противовоспалительные препараты, такие как, например, кеторолакантагонисты рецепторов, такие как, например, цетиризин, моноклональные антитела, такие как, например, адалимумаб, протеазы, такие как, например, окриплазмин, иммунодепрессанты, такие как, например, циклоспорин, или не содержать ничего из упомянутого, для профилактики и/или лечения глазных болезней.

НАУЧНЫЕ ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0002] Повышенное внутриглазное давление и снижение глазного кровотока являются основными факторами риска развития глаукомы у человека. Глаукома является наиболее распространенной нейропатией головки зрительного нерва и морфологически связана с потерей ганглиозных клеток сетчатки, а клинически - с ухудшением поля зрения. Лечение глаукомы основано на снижении внутриглазного давления и предотвращении возникновения или прогрессирования нейропатии зрительного нерва. В настоящее время не существует терапии, способной уменьшить изменения глазного кровотока или ограничить гибель ганглиозных клеток сетчатки путем апоптоза у пациентов, страдающих глаукомой (B.C. Chauhan (2008) Can. J. Ophthalmol. 43, 356-360).

[0003] Эндотелии - это самый мощный вазоактивный пептид человеческого организма, известный на сегодняшний день. Уже сам термин «вазоактивный пептид» указывает на то, что этот пептид, обладая высокой вазоконстрикторной активностью, участвует в регуляции внутриглазного кровяного давления. При высвобождении он вызывает снижение глазного кровотока с последующей патологией сетчатки и головки зрительного нерва.

[0004] Участие эндотелина в регуляции внутриглазного давления обусловлено, помимо вазоконстрикторной активности, воздействием на трабекулярный отток, который является основным путем оттока жидкости из глаза. Эндотелии повышает сократительную способность трабекулярной сети и, следовательно, уменьшает отток жидкости из глаза, повышая внутриглазное давление и вызывая патологию сетчатки и головки зрительного нерва.

[0005] Эндотелии, помимо влияния на внутриглазное кровяное давление и регулирования давления внутриглазной жидкости, влияет на апоптоз ганглиозных клеток сетчатки, воздействуя через рецепторы ЕТв, и индуцирует пролиферацию астроцитов головки зрительного нерва человека, воздействуя через рецепторы ЕТ_A и ЕТ_B (G. Prasanna, R. Krishnamoorthy, A.F. Clark, R.J. Wordinger & T. Yorio (2002) Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 43, 2704-2713).

[0006] Эндотелии представляет собой пептид, состоящий из 21 аминокислоты, который синтезируется и высвобождается эндотелием. Эндотелии вырабатывается путем расщепления связи Trp-Val в пептиде-предшественнике, называемом Big ЕТ-1. Эндотелинпревращающий фермент-1 (ЕСЕ-1), мембраносвязанная металлопротеаза, катализирует протеолитическую активацию Big ЕТ-1 до ЕТ-1 и представляет собой регуляторный сайт, контролирующий выработку активного пептида.

[0007] Нейтральная эндопептидаза (НЭП), цинк-металлопептидаза, разлагает предсердный натрийуретический пептид (ПНП) и образует регуляторный сайт, контролирующий концентрацию активного пептида. В клетках феохромоцитомы, не содержащих сыворотку, ПНП ингибирует апоптоз, вызывая повышение уровня цГМФ. Распространение депрессии в коре головного мозга сопровождается длительным повышением экпрессии ПНП и внутриклеточной концентрации цГМФ. Натрийуретический пептидный рецептор НПрА (NPRA) регулирует внутриклеточную концентрацию цГМФ, стимулируя дисперсную гуанилилциклазу (pGC), которая активирует цГМФ-зависимый протеинкиназный путь G.

[0008] Публикации о том, что повышенная регуляция рецепторов ЕТ-1 и пониженная регуляция рецепторов ПНП происходят в клетках, подвергнутых метаболическим или окислительным повреждениям, побудили нас исследовать эффекты двойного ингибирования ЭПФ/НЭП на клетках грызунов, подвергающихся апоптозу, аналогичные тем, которые наблюдаются у людей при офтальмологических заболеваниях, таких как, например, глаукома.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0009] Изобретение относится к новому применению бензазепина, бензоксазепина, бензотиазепин-N-уксусной кислоты и фосфонозамещенных производных бензазепинона, обладающих ингибирующей активностью нейтральной эндопептидазы (НЭП) и/или растворимой эндопептидазы человека (РЭПч). Соединения изобретения могут быть использованы для приготовления фармацевтических композиций для профилактики и лечения офтальмологических заболеваний.

[0010] Изобретение относится к применению соединений, раскрытых в патенте ЕР 1706121 В1, для изготовления лекарственных средств, оказывающих положительное воздействие. Положительный эффект раскрывается в настоящем документе или очевиден для специалиста в данной области техники из спецификации и общих знаний в этой области. Изобретение также относится к применению соединений изобретения для изготовления лекарственных средств для лечения или профилактики заболевания или состояния. Более конкретно, изобретение относится к новому применению для лечения заболевания или состояния, раскрытого в настоящем документе или очевидного для специалиста в данной области техники из спецификации и общих знаний в данной области техники. В вариантах осуществления изобретения конкретные соединения, раскрытые в настоящем документе, используются для изготовления лекарственного средства.

[0011] ЕР 1706121 В1 относится к использованию определенных соединений с комбинированной ингибиторной активностью как нейтральной эндопептидазы (НЭП), так и/или растворимой эндопептидазы человека (РЭПч), а также эндотелинпревращающего фермента (ЭПФ) для лечения и/или профилактики нейродегенеративных заболеваний, таких как черепно-мозговая травма, острый рассеянный энцефаломиелит, повреждения головного мозга вследствие эпилепсии, повреждения спинного мозга, бактериальный или вирусный менингит и менингоэнцефалит, прионные болезни, отравления нейротоксическими соединениями, радиационно-индуцированные повреждения мозга, а также для профилактики ишемического инсульта при условии, что указанные фармацевтические композиции не содержат антагониста рецепторов альдостерона.

[0012] WO 2004/082637, поданный 18 марта 2004 года и опубликованный 30 сентября 2004 года, раскрывает способ профилактики или лечения многочисленных патологических состояний, включающий введение антагониста рецепторов альдостерона и ингибитора ЭПФ. Среди перечисленных патологических состояний - глаукома, гипертоническая или диабетическая ретинопатия, повышенное внутриглазное давление. Однако польза предпочтительных соединений при этих показаниях не была раскрыта.

[0013] Целью настоящего изобретения было выявление специфических ингибиторов металлопротеазы, имеющих терапевтическую ценность при введении в составе фармацевтической композиции, не содержащей антагониста рецепторов альдостерона.

[0014] Неожиданно оказалось, что бензазепин, бензоксазепин, бензотиазепин-N-уксусная кислота и фосфонозамещенные производные бензазепинона, обладающие ингибирующей активностью нейтральной эндопептидазы (НЭП) и/или растворимой эндопептидазы человека (РЭПч), предотвращают апоптоз в моделях грызунов аналогично тому, что наблюдается при течении глазных болезней у человека. Это свойство делает их полезными для лечения и/или профилактики и/или приготовления фармацевтических композиций для лечения и/или профилактики оптических нарушений зрения и/или глазных болезней, выбранных из группы, состоящей из таких заболеваний, как, например: (i) все формы первичной и вторичной глаукомы, предпочтительно, например, первичная открытоугольная глаукома, нормотензивная глаукома, первичная закрытоугольная глаукома, эксфолиативный синдром и глаукома, пигментно-дисперсный синдром и глаукома, неоваскулярная глаукома, воспалительная глаукома, глаукома, связанная с патологией хрусталика, травматическая глаукома, первичная врожденная глаукома, ятрогенная глаукома и злокачественная глаукома; (ii) приобретенные макулярные нарушения, предпочтительно, такие как, например, возрастная макулярная дистрофия, идиопатическая хороидальная неоваскуляризация, центральная серозная хориоретинопатия, витреомакулярные интерфейсные патологии, идиопатическая макулярная телеангиэктазия, цистоидный макулярный отек и микрокистозный макулярный отек; (iii) оптическая нейропатия, предпочтительно, такая как, например, передняя или задняя ишемическая оптическая невропатия; (iv) неврит зрительного нерва; v) увеит, предпочтительно, такой, например, как передний увеит, промежуточный увеит, задний увеит и панувеит; (vi) наследственные патологии глазного дна, предпочтительно, такие, например, как конусная дистрофия, конусно-стержневая дистрофия, стержневая дистрофия, болезнь Старгардта, кристаллическая дистрофия роговицы Биетти, семейные доброкачественные хлопья на сетчатке, вителиформная макулодистрофия Беста, возрастная вителиформная макулодистрофия, макулярная дистрофия Северной Каролины, семейные доминантные друзы и концентрическая кольцевидная макулярная дистрофия; (vii) ретинальные сосудистые патологии, предпочтительно, такие как, например, диабетическая ретинопатия, недиабетическая ретинопатия, окклюзия вены сетчатки, окклюзия артерии сетчатки, глазной ишемический синдром, гипертоническая болезнь глаз, серповидно-клеточная ретинопатия, анемическая ретинопатия, эритробластическая ретинопатия, ретинопатия недоношенных, макроаневризма артерии сетчатки, первичная телеангиэктазия сетчатки, болезнь Илза и радиационная ретинопатия; (viii) склерит и эписклерит; (ix) отслойки сетчатки; (х) травма глазного яблока; (XI в) помутнение стекловидного тела, предпочтительно, такое как, например, кровоизлияние в стекловидное тело и звездчатый гиалоз; (xii) миопия и дегенеративная миопия; (xiii) послеоперационная травма, предпочтительно, такая как, например, механическая травма из-за обычного хирургического вмешательства, термотравма после лазерной хирургии и травма после криохирургии; (xiv) филаментозный кератит; (xv) патологии роговицы, предпочтительно, такие как, например, истирания, разрывы, изъязвления, дистрофии, помутнения, эндотелиальная и эпителиальная декомпенсация, послеоперационный отек, дегенерации роговицы, васкуляризация роговицы и эктазии роговицы, предпочтительно, такие как, например, кератоконус.

[0015] Соединения по настоящему изобретению известны из европейских патентов ЕР 0 733 642, ЕР 0 916 679 и ЕР 1 468 010, содержащих подробные описания синтеза, и могут быть описаны общей формулой (1):

где:

R1 означает группу формулы (2) или (3):

А представляет собой СН2, О или S,

R2 и R3 независимо представляют собой водород или галоген,

R4 и R6 независимо представляют собой водород или группу, образующую биолабильный сложный эфир карбоновой кислоты;

R5 выбирается из группы, состоящей из (С1-С6)алкокси(С1-С6)алкила, который может быть замещен (С1-С6)алкокси, фенил-(С1-С6)-алкилом и фенилокси-(С1-С6)-алкилом, где фенильная группа может быть замещена (C1-С6)алкилом, (С1-С6)-алкокси или галогеном, и нафтил-(С1-С6)-алкила,

R7 и R8 независимо представляют собой водород или группу, образующую биолабильный сложный эфир фосфоновой кислоты.

[0016] К изобретению относятся все соединения, имеющие формулу (1), рацематы, смеси диастереомеров и отдельных стереоизомеров, а также их фармацевтически приемлемые соли. Таким образом, к изобретению относятся соединения, в которых заместители на потенциально асимметричных атомах углерода находятся либо в R-конфигурации, либо в S-конфигурации.

[0017] Фармацевтически приемлемые соли могут быть получены с помощью стандартных методик, хорошо известных в данной области техники, например, путем смешивания соединения настоящего изобретения с соответствующим катионом металла или органическим основанием, например амином.

[0018] Эта цель может быть достигнута получением соли металла общей формулы (1), как указано выше, где ионом металла является ион лития или ион двухвалентного металла. Предпочтительными солями двухвалентных металлов являются соли кальция, магния и цинка. Наиболее предпочтительной является кальциевая соль.

[0019] Изобретение относится к применению соединения общей формулы (1), как указано выше, для лечения и/или профилактики и/или приготовления фармацевтических композиций для лечения и/или профилактики оптических нарушений зрения и/или глазных болезней, выбранных из группы, включающей, например, такие болезни как (i) все формы первичной и вторичной глаукомы, предпочтительно, например, первичная открытоугольная глаукома, нормотензивная глаукома, первичная закрытоугольная глаукома, эксфолиативный синдром и глаукома, пигментно-дисперсный синдром и глаукома, неоваскулярная глаукома, воспалительная глаукома, глаукома, связанная с патологией хрусталика, травматическая глаукома, первичная врожденная глаукома, ятрогенная глаукома и злокачественная глаукома; (ii) приобретенные макулярные нарушения, предпочтительно, такие как, например, возрастная макулярная дистрофия, идиопатическая хороидальная неоваскуляризация, центральная серозная хориоретинопатия, витреомакулярные интерфейсные патологии, идиопатическая макулярная телеангиэктазия, цистоидный макулярный отек и микрокистозный макулярный отек; (iii) оптическая нейропатия, предпочтительно, такая как, например, передняя или задняя ишемическая оптическая невропатия; (iv) неврит зрительного нерва; v) увеит, предпочтительно, такой, например, как передний увеит, промежуточный увеит, задний увеит и панувеит; (vi) наследственные патологии глазного дна, предпочтительно, такие, например, как конусная дистрофия, конусно-стержневая дистрофия, стержневая дистрофия, болезнь Старгардта, кристаллическая дистрофия роговицы Биетти, семейные доброкачественные хлопья на сетчатке, вителиформная макулодистрофия Беста, возрастная вителиформная макулодистрофия, макулярная дистрофия Северной Каролины, семейные доминантные друзы и концентрическая кольцевидная макулярная дистрофия; (vii) ретинальные сосудистые патологии, предпочтительно, такие как, например, диабетическая ретинопатия, недиабетическая ретинопатия, окклюзия вены сетчатки, окклюзия артерии сетчатки, глазной ишемический синдром, гипертоническая болезнь глаз, серповидно-клеточная ретинопатия, анемическая ретинопатия, эритробластическая ретинопатия, ретинопатия недоношенных, макроаневризма артерии сетчатки, первичная телеангиэктазия сетчатки, болезнь Илза и радиационная ретинопатия; (viii) склерит и эписклерит; (ix) отслойки сетчатки; (х) травма глазного яблока; (XI в) помутнение стекловидного тела, предпочтительно, такое как, например, кровоизлияние в стекловидное тело и звездчатый гиалоз; (xii) миопия и дегенеративная миопия; (xiii) послеоперационная травма, предпочтительно, такая как, например, механическая травма из-за обычного хирургического вмешательства, термотравма после лазерной хирургии и травма после криохирургии; (xiv) филаментозный кератит; (xv) патологии роговицы, предпочтительно, такие как, например, истирания, разрывы, изъязвления, дистрофии, помутнения, эндотелиальная и эпителиальная декомпенсация, послеоперационный отек, дегенерации роговицы, васкуляризация роговицы и эктазии роговицы, предпочтительно, такие как, например, кератоконус, при условии, что указанные фармацевтические композиции не содержат антагониста рецепторов альдостерона.

[0020] Дальнейшие варианты осуществления изобретения определены в зависимых пунктах формулы изобретения.

[0021] Изобретение, в частности, относится к применению соединений, имеющих общую формулу (4):

где символы имеют значения, приведенные выше.

[0022] Более конкретно, изобретение относится к применению соединений общей формулы (5):

где символы имеют значения, приведенные выше.

[0023] Наиболее предпочтительными активными веществами, используемыми по настоящему изобретению, являются следующие:

• (2R)-2-{[l-({[(3S)-l-(карбоксиметил)-2-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-1H-1-бензазепин-3-ил]амино}карбонил)циклопентил]метил}-4-фенилбутановая кислота (6):

• (2R)-2-{[l-({[(3S)-l-(карбоксиметил)-2-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-1H-1-бензазепин-3-ил]амино}карбонил)циклопентил]метил}-4-(1-нафтил)бутановая кислота (7):

• трет-бутил-((3S)-3-{[(1-{[(бензилокси)(этокси)фосфорил]метил}циклопентил)-карбонил]амино)-2-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-1H-1-бензазепин-1-ил)ацетат (8):

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ

[0024] Соединения изобретения могут быть приведены в пригодные для введения формы посредством обычных процессов с использованием вспомогательных веществ, таких как жидкости или материалы-носители. Фармацевтические композиции изобретения могут вводиться местно и/или системно, и в частности, например, местно в глаз, периокулярно, в том числе, субконъюнктивально, субтенонально, ретробульбарно или перибульбарно, интраокулярно в глаз, а также энтерально, перорально, парентерально (внутримышечно или внутривенно), подкожно или ректально. Их можно вводить в виде растворов, суспензий, мазей (кремов, гелей, гелеобразующих растворов, спреев, глазных вставок/отложений, контактных линз), глазных имплантатов, а также таблеток, капсул, мягких капсул, порошков, суппозиториев, нанокомпозиций или с помощью ионофореза, или с помощью фармацевтических композиций на основе систем носителей наночастиц. Подходящими вспомогательными веществами для таких составов являются фармацевтически обычные жидкие или твердые наполнители и разбавители, растворители, эмульгаторы, смазочные материалы, ароматизаторы, красители и/или буферные вещества. Среди часто используемых вспомогательных веществ можно отметить карбонат магния, диоксид титана, лактозу, маннит и другие сахара, тальк, лактопротеин, желатин, крахмал, целлюлозу и ее производные, животные и растительные масла, такие как, например, рыбий жир, подсолнечное, арахисовое или кунжутное масло, полиэтиленгликоль и растворители, такие как, например, стерильная вода и моно- или многоатомные спирты, такие как, например, глицерин.

[0025] Соединения настоящего изобретения обычно вводят в виде фармацевтических композиций. Виды фармацевтических композиций, которые могут быть использованы, включают, но не ограничиваются ими, растворы, суспензии, мази (кремы, гели или спреи), а также таблетки, жевательные таблетки, капсулы, мягкие капсулы, парентеральные растворы, суппозитории и другие виды, раскрытые в настоящем документе или очевидные для специалиста в данной области из спецификации и общих знаний в данной области. Фармацевтические композиции по изобретению не содержат антагониста рецепторов альдостерона.

[0026] В вариантах осуществления изобретения предусмотрена фармацевтическая упаковка или набор, содержащий один или несколько контейнеров, заполненных одним или несколькими ингредиентами фармацевтической композиции изобретения. К такому контейнеру (контейнерам) могут прилагаться различные письменные материалы, такие как, например, инструкции по применению или уведомление в форме, предписанной государственным органом, регулирующим производство, использование или продажу лекарственных средств; такое уведомление информирует о санкционировании государственным органом производства, использования и продажи данных лекарственных средств для лечения человека и применения в ветеринарии.

[0027] Рецептуры, подходящие для соединений изобретения, детально описаны в патентных заявках WO 03/068266 и WO 04/062692.

[0028] Конкретные соединения, описанные выше, предназначены для дальнейшей более подробной иллюстрации изобретения и поэтому никоим образом не ограничивают сферу применения изобретения.

ГЛАЗНЫЕ БОЛЕЗНИ: ЗАМЕДЛЕННАЯ ГИБЕЛЬ КЛЕТОК СЕТЧАТКИ У ЧЕЛОВЕКА И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ МОДЕЛЕЙ

[0029] Апоптоз играет значительную роль в клеточной гибели при оптических нарушениях зрения и/или глазных болезнях, включая (i) все формы первичной и вторичной глаукомы, предпочтительно, например, первичная открытоугольная глаукома, нормотензивная глаукома, первичная закрытоугольная глаукома, эксфолиативный синдром и глаукома, пигментно-дисперсный синдром и глаукома, неоваскулярная глаукома, воспалительная глаукома, глаукома, связанная с патологией хрусталика, травматическая глаукома, первичная врожденная глаукома, ятрогенная глаукома и злокачественная глаукома (R. Agarwal, S.K. Gupta, P. Agarwal, R. Saxena & S.S. Agrawal (2009) Indian J. Ophthalmol. 57,257-266); (ii) приобретенные макулярные нарушения, предпочтительно, такие как, например, возрастная макулярная дистрофия, идиопатическая хороидальная неоваскуляризация, центральная серозная хориоретинопатия, витреомакулярные интерфейсные патологии, идиопатическая макулярная телеангиэктазия, цистоидный макулярный отек и микрокистозный макулярный отек (J.L. Dunaief, Т. Dentchev, G.-S. Ying & А.Н. Milam (2002) Arch. Ophthalmol. 120, 1435-1442); (iii) оптическая нейропатия, предпочтительно, такая как, например, передняя или задняя ишемическая оптическая невропатия (B.J. Slater, Z. Mehrabian, Y. Guo, A. Hunter & S.L. Bernstein (2008) Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 3671-3676); (iv) неврит зрительного нерва (K.S. Shindler, E. Ventura, M. Dutt & A. Rostami (2008) Exp.Eye Res. 87, 208-213); (v увеит, предпочтительно, такой, например, как передний увеит, промежуточный увеит, задний увеит и панувеит (С.-С. Chan, D.M. Matteson, Q. Li, S.M. Whitcup & R.B. Nussenblatt (1997) Arch. Ophthalmol. 115, 1559-1567); (vi) наследственные патологии глазного дна, предпочтительно, такие, например, как конусная дистрофия, конусно-стержневая дистрофия, стержневая дистрофия, болезнь Старгардта, кристаллическая дистрофия роговицы Биетти, семейные доброкачественные хлопья на сетчатке, вителиформная макулодистрофия Беста, возрастная вителиформная макулодистрофия, макулярная дистрофия Северной Каролины, семейные доминантные друзы и концентрическая кольцевидная макулярная дистрофия (Н. Zhang, X. Li, X. Dai, J. Han, Y. Zhang, Y. Qi, Y. He, Y. Liu, B. Chang & J.J. Pang (2017) J. Ophthalmol. 2017, 1-13 9721362); (vii)

ретинальные сосудистые патологии, предпочтительно, такие как, например, диабетическая ретинопатия, недиабетическая ретинопатия, окклюзия вены сетчатки, окклюзия артерии сетчатки, глазной ишемический синдром, гипертоническая болезнь глаз, серповидно-клеточная ретинопатия, анемическая ретинопатия, эритробластическая ретинопатия, ретинопатия недоношенных, макроаневризма артерии сетчатки, первичная телеангиэктазия сетчатки, болезнь Илза и радиационная ретинопатия (G. Donati, А. Kapetanios, М. Dubois-Dauphin & C.J. Pournaras (2008) Acta Ophthalmol. 86, 302-306); (viii) склерит или эписклерит (С. Heinz, N. Bograd, J. Koch & A. Heiligenhaus (2013) Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 251, 139-142); (ix) отслойки сетчатки (J.G. Arroyo, L. Yang, D. Bula & D.F. Chen (2005) Am. J. Ophthalmol. 139, 605-610); (x) травма глазного яблока (H.-С.Н. Wang, J.-H. Choi, W.A. Greene, MX. Plamper, H.E. Cortez, M. Chavko, Y. Li, J.J. Dalle Lucca & A.J. Johnson (2014) Military Med. 179, S34-S40); (xi) помутнение стекловидного тела, предпочтительно, такое как, например, кровоизлияние в стекловидное тело и звездчатый гиалоз (A. Alamri, Н. Alkatan & I. Aljadaan (2016) Middle East African J. Ophthalmol. 23, 271-273); (xii) миопия и дегенеративная миопия (G.Z. Xu, W.W. Li & M.O. Tso (1996) Trans. Am. Ophthalmol. Soc. 94, 411-431); (xiii) послеоперационная травма, предпочтительно, такая как, например, механическая травма из-за обычного хирургического вмешательства, термотравма после лазерной хирургии и травма после криохирургии (A, Barak, Т. Goldkorn & L.S. Morse (2005) Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 46, 2587-2591; X. Liu, S. Ling, X. Gao, C. Xu & F.Wang (2013) JAMA Ophthalmol. 131, 1070-1072; D. Reichstein (2015) Curr. Opin. Ophthalmol. 26, 157-166); (xiv) филаментозный кератит (S. Yeh, X.J. Song, D.Q. Li, W. Farley, M.E. Stern & S.C. Pflugfelder (2003) Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 43, 124-129); (xv) патологии роговицы, предпочтительно, такие как, например, истирания, разрывы, изъязвления, дистрофии, помутнения, эндотелиальная и эпителиальная декомпенсация, послеоперационный отек, дегенерации роговицы, васкуляризация роговицы и эктазии роговицы, предпочтительно, такие как, например, кератоконус (R.M. Kaldawy, J. Wagner, S. Ching & G.M. Seigel (2002) Cornea 21, 206-209; N. Szentmary, B. Szende & I. Suveges (2005) Eur. J. Ophthalmol. 15, 17-22). Путем визуализации в реальном времени с использованием аннексина 5, меченного флуоресцентным красителем DY-7766 было продемонстрировано, что у людей, страдающих глаукомой, апоптоз происходит в ганглиозных клетках сетчатки (M.F. Cordeiro, Е.М. Normando, M.J. Cardoso, S. Miodragovic, S. Jeylani, B.M. Davis, L. Guo, S. Ourselin, R. A'Hern & P.A. Bloom (2017) Brain 140, 1757-1767). Для моделирования этого вида апоптоза в экспериментах без участия людей крысам системно вводят доксорубицин и оценивают апоптоз в крупных органах, таких как печень или сердце (R. Gillet, G. Grimber, М. Bennoun, С.Caron de Fromentel, P. Briand & V. Joulin (2000) Oncogene 19, 3498-3507; L.L. Fan, G.P. Sun, W. Wei, Z.G. Wang, L. Ge, W.Z. Fu & H. Wang (2010) World J. Gastroenterol. 16, 1473-1481), или же доксорубицином воздействуют на глаз крысы и оценивают апостоз в ганглиозных клетках сетчатки (I.M. Parhad, J.W. Griffin, A.W. Clark & J.F. Koves (1984) J. Neuropathol. Exp. Neurol. 43, 188-200). Мы применяли индуцированный доксорубицином апоптоз у крыс, чтобы оценить возможность его предотвращения при системном введении соединений, приведенных в примере.

ПРИМЕРЫ

[0030] Методика: Крыс Вистар массой 200-250 г анестезировали хлоралгидратом 400 мг/кг, а осмотические мининасосы, заливаемые перед имплантацией, заполняли либо носителем, либо соединением (6), репрезентативным для соединений изобретения, в дозе 60 мг/кг / сут и имплантировали подкожно. Впоследствии крысы (n=7) получали доксорубицин в дозе 5 мг/кг внутрибрюшинно 3 раза в сутки в 1-й, 2-й и 3-й день, или же крысы (n=8) получали доксорубицин в дозе 5 мкг или наполнитель в объеме 5 мкл в стекловидное тело глаза с помощью микрошприца Гамильтон в течение 5 мин в 1-й день. Крыс усыпляли через 5 дней после первой внутрибрюшинной инъекции доксорубицина или через 5 дней после введения доксорубицина в стекловидное тело и транскардиально перфузировали раствором, содержащим 4% параформальдегида в фосфатном буфере. Печень и глаза были впоследствии удалены и погружены в парафин. Для визуализации апоптоза на 10-мкм парафиновых срезах было проведено окрашивание на основе терминального дезоксиуридинового мечения концов (TUNEL). Для количественной оценки апоптоза использовался стереологический метод с использованием оптического диссектора (L.M. Cruz-Orive & E.R. Weibel (1990) Am. J. Physiol. 258, L148-L156). Для отбора проб использовали несмещенную счетную рамку (0,05 × 0,05 мм, высота диссектора 0,01 мм) для печени и (0,10 × 0,025 мм, высота диссектора 0,01 мм) для слоя ганглиозных клеток сетчатки. Значение N_v TUNEL-позитивных клеток определяли с помощью 8-10 диссекторов и выражали через число TUNEL-позитивных клеток × 10²/мм³для печени и число TUNEL-позитивных клеток × 10³/мм³ для ганглиозных клеток сетчатки. Статистическая оценка проводилась с помощью t-критерия Стьюдента (Таблица 1).

[0031] Результаты: Доксорубицин вызывал апоптоз либо в печени, либо в сетчатке, о чем свидетельствует наличие TUNEL-позитивных клеток (Таблица 1). Соединение (6) обеспечивало значительную защиту от индуцированного доксорубицином апоптоза в печени и сетчатке, о чем свидетельствует снижение N_v TUNEL-позитивных клеток по сравнению с субъектами, получавшими наполнитель (Таблица 1).

[0032] Выводы: Соединение (6) уменьшило плотность апоптотических клеток в печени крыс на 23,46% и в сетчатке на 8,21% (Таблица 1). Апоптоз, индуцированный доксорубицином в печени, характеризовался многими морфологическими признаками, сходными с апоптозом, наблюдаемым в ганглиозных клетках сетчатки.

Реферат

Изобретение относится к применению соединений общей формулы (1), в которой R1 означает группу формулы (2) или (3); А представляет собой СН2, R2 и R3 независимо представляют собой водород, R4 и R6 независимо представляют собой водород или трет-бутил; R5 означает нафтил-(С1-С6)-алкил или фенил-этил, R7 и R8 независимо представляют собой этил или бензил, или его стереоизомера или фармацевтически приемлемой соли для уменьшения апоптоза ганглиозных клеток сетчатки глаза. Соединения по изобретению могут найти применение в медицине для приготовления фармацевтических композиций для профилактики и лечения глазных болезней. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 табл.

Формула