Макроциклические ингибиторы киназы lrrk2 - RU2622104C2

Код документа: RU2622104C2

Чертежи

Описание

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым макроциклическим соединениям и композициям, содержащим указанные соединения, действующие в качестве ингибиторов киназы, в частности, в качестве ингибиторов LRRK2 (богатой лейцином повторной киназы 2). Кроме того, настоящее изобретение предлагает способы получения описанных соединений, а также способы их применения, например, в качестве лекарственного или диагностического агента, в частности, для лечения и/или диагностики заболеваний, характеризующихся активностью киназы LRRK2, таких как неврологические расстройства, включая болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера.

Уровень техники

Болезнь Паркинсона представляет собой дегенеративное расстройство центральной нервной системы. Она возникает в результате гибели дофаминергических нейронов в среднем мозге. На ранних стадиях заболевания наиболее очевидные симптомы являются связанными с движением, например, дрожь, замедленность движений и трудности при ходьбе. Позже появляются также когнитивные и поведенческие проблемы, при этом на запущенных стадиях заболевания обычно возникает деменция. Хотя болезнь Паркинсона обычно считается спорадичной, в последние десятилетия обнаружено несколько мутаций в гене LRRK2 (богатая лейцином повторная киназа 2), связанных с болезнью Паркинсона (WO 2006068492 и WO 2006045392). LRRK2, также известная как дардарин, является членом семейства богатых лейцином повторных киназ, имеющим активность киназы смешанного типа, в частности, в мозге, но также и в других тканях в организме. Исследователи идентифицировали более 20 мутаций LRRK2 в семействах с поздней стадией болезни Паркинсона. Например, мутация G2019S различается совместно с аутосомальным доминантным паркинсонизмом и соответствует примерно 6% случаев наследственной болезни Паркинсона и 3% случаев спорадичной болезни Паркинсона в Европе. Мутация G2019S происходит в сильно консервативном домене киназы, и по этой причине постулируют, что мутация G2019S может оказывать влияние на активность киназы (WO 2006068492). Кроме того, замещения аминокислот на втором остатке R1441 также связаны с болезнью Паркинсона, как показано, также повышают активность киназы LRRK2. Сверхэкпрессирование мутантного белка LRRK2 R1441G на моделях трансгенных мышей (Li, Y et al. 2009, Nature Neuroscience 12:826-828) связано с симптомами болезни Паркинсона, а также с пониженным высвобождением дофамина, это говорит о том, что ингибиторы LRRK2 могут также позитивно регулировать высвобождение дофамина и имеют потенциальную полезность при лечении состояний, характеризующихся пониженными уровнями дофамина, таких как симптомы синдрома отмены/рецидива, связанные с лекарственной зависимостью; заболевания таупатии, такие как болезнь Альцгеймера, заболевание с образованием аргирофильных зерен, болезнь Пика, кортикобазальная дегенерация; наследственная лобно-височная деменция; и болезнь Паркинсона. Две дополнительные мутации в LRRK2 клинически связывают с переходом от легкого ослабления когнитивной функции до болезни Альцгеймера (WO 200714979). Эти данные дополнительно дают доказательство того, что ингибиторы активности киназы LRRK2 могли бы быть полезными при лечении различных видов деменции и родственных нейродегенеративных расстройств.

Таким образом, фармакологическое ингибирование киназы LRRK2 является привлекательной стратегией для терапии при нейродегенеративных расстройствах, основанной на воздействии на их механизмы, таких как болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера. Следовательно, целью настоящего изобретения является получение соединений и композиций, содержащих указанные соединения, действующие в качестве ингибиторов киназ LRRK2.

До сегодняшнего дня предложено несколько (немакроциклических) пиразолопиримидинов для лечения нейронных расстройств, в частности, болезни Альцгеймера и/или болезни Паркинсона (смотри, например, EP 1908764, US 6194410, EP 1354884, EP 0729758 и US 6194410). Однако ни одно из соединений, описанных в указанных ссылках, как показано, не имеет ингибиторной активности по отношению к LRRK2.

Кроме того, разработанные в настоящее время ингибиторы киназы LRRK2, в частности, те, которые предназначены для лечения нейронных расстройств, не содержат макроциклических пиразолопиримидиновых остатков (смотри, например, WO 2009127652, WO 2011038572).

Тем не менее, все еще имеется потребность в конструировании и разработке ингибиторов киназы LRRK2 для лечения нейронных расстройств. Авторы обнаружили, что макроциклические пиразолопиримидины и фармацевтически приемлемые композиции в соответствии с настоящим изобретением являются пригодными для использования при лечении нескольких нейронных расстройств, связанных с активностью киназы LRRK2.

Сущность изобретения

Авторы неожиданно обнаружили, что макроциклические соединения, описанные в настоящем документе, действуют в качестве ингибиторов киназы, в частности, ингибиторов киназы LRRK2.

В качестве своего первого предмета настоящее изобретение предлагает соединение Формулы I или его стереоизомер, таутомер, рацемат, метаболит, пролекарство или предлекарство, соль, гидрат, N-оксидную форму или его сольват:

где

A₁ и A₂ выбирают из C и N; где когда A₁ представляет собой C, тогда A₂ представляет собой N; и где когда A₂ представляет собой C, тогда A₁ представляет собой N;

R₁ выбирают из -H, -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -C_3-6циклоалкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₉R₁₀, -(C=O)-R₄, -SO₂-R₄, -CN, -NR₉-SO₂-R₄, -Het₁; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -NR₁₁R₁₂, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила;

R₂ выбирают из -H, -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -C_3-6циклоалкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-O-C_1-6алкила, -(C=O)-NR₂₇R₂₈, -Het₃, -(C=O)-Het₃, -SO₂-C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -Het₃, -Ar₂, -NR₁₃R₁₄;

R₃ выбирают из -H, -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -C_3-6циклоалкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-O-C_1-6алкила, -Het₂, -(C=O)-Het₂, -(C=O)-NR₂₉R₃₀, -SO₂-C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -NR₁₅R₁₆, -Het₂, -Ar₄;

R₄ выбирают из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₁₇R₁₈, -Het₄;

R₅и R₇, каждый, независимо выбирают из -H, -галогена, -C_1-6алкила, -OC_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -Het₅, -Ar₁, -C_3-6циклоалкила, -SO₂-Ar₃, -SO₂, -SO₂-C_1-6алкила, -(C=O), -(C=O)-C_1-6алкила, -O-(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-O-C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₃R₂₄;

R₆ выбирают из -SO₂, -SO₂-C_1-6алкила, -(C=O), -(C=S), -(C=O)-O-C_1-6алкила, -(C=S)-O-C_1-6алкила, -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-C_2-6алкенила, -(C=S)-C_1-6алкила, -(C=S)-C_2-6алкенила, -C_1-6алкил-(C=O)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-(C=S)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-NR₃₃(C=O)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-NR₃₃(C=S)-NR₃₁R₃₂, -SO₂-C_3-5циклоалкила, -(C=O)-C_3-5циклоалкила, -(C=S)-C_3-5циклоалкила, -(C=O)-NR₃₁R₃₂, -(C=S)-NR₃₁R₃₂, -(C=O)-Het₅, -(C=S)-Het₅, -(C=O)-Ar₆, -(C=S)-Ar₆, -(C=O)-NR₃₁-(C=O)-R₃₂; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₅R₂₆;

R₈ выбирают из -NR₃₄-(C=O)-R₃₅, -NR₃₆-(C=O)-NR₃₄R₃₅, -NR₃₄-(SO₂)-R₃₅, -NR₃₄-(C=O)-O-R₃₅, -O-(C=O)-NR₃₄R₃₅;

R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃, R₁₄, R₁₅, R₁₆, R₁₇, R₁₈, R₁₉, R₂₀, R₂₁, R₂₂, R₂₃, R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₂₇, R₂₈, R₂₉, R₃₀, R₃₁, R₃₂, R₃₃, R₃₄, R₃₅, R₃₆, R₃₇, R₃₈, R₃₉ и R₄₀,каждый, независимо выбирают из -H, -галогена, -O, -OH, -O-C_1-6алкила, -C_1-6алкила, -C_3-6циклоалкила или -Het₁; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -Het₆, -Ar₅;

X₁ выбирают из -C_1-6алкила-, -O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -(C=O)-, -NR₃-(C=O)-, -NR₃-(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-NR₃-C_1-6алкила-, -NR₃-C_1-6алкила-, -C_1-6алкил-NR₃-C_1-6алкила-, -SO₂-NR₃-; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₃₇R₃₈;

X₂ выбирают из -C_1-6алкила-, -O-C_1-6алкила-, -O-C_1-6алкил-O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -(C=O)-, -(C=O)-NR₂-, -NR₂-C_1-6алкила-, -NR₂-, -SO₂-NR₂-; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₃₉R₄₀;

B выбирают из -(C=O)-, -(C=N)-R₃₉-, -(SO₂)-, -(C=O)-NR₅-, -(C=S)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -NR₅-(C=S)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=O)-O-, -NR₅-(C=S)-O-, -CHR₈-;

Ar₁,Ar₂,Ar₃, Ar₄, Ar₅ и Ar₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный ароматический гетероцикл, необязательно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из O, N и S; каждый из указанных Ar₁, Ar₂,Ar₃, Ar₄ и Ar₅ является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -NR₁₉R₂₀, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила;

Het₁, Het₂, Het₃,Het₄, Het₅ и Het₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный моноциклический гетероцикл, имеющий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из O, N и S, где каждый гетероцикл является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -C_1-6алкила, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -NR₂₁R₂₂; каждый из указанных -C_1-6алкилов является необязательно замещенным 1-3 -галогенами;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, независимо выбирают из C и N.

В частности, настоящее изобретение предлагает соединение Формулы I или его стереоизомер, таутомер, рацемат, метаболит, пролекарство или предлекарство, соль, гидрат, N-оксидную форму или его сольват, где

R₄ выбирают из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₁₇R₁₈, -Het₄;

R₈ выбирают из -NR₃₄-(C=O)-R₃₅, -NR₃₆-(C=O)-NR₃₄R₃₅, -NR₃₄-(SO₂)-R₃₅, -NR₃₄-(C=O)-O-R₃₅, -O-(C=O)-NR₃₄R₃₅;

X₂ выбирают из -C_1-6алкила-, -O-C_1-6алкила-, -O-C_1-6алкил-O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -(C=O)-, -(C=O)-NR₂-, -NR₂-C_1-6алкила-, -NR₂-, -SO₂-NR₂-; где каждый из указанного C_1-6алкила является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₃₉R₄₀;

B выбирают из -(C=O)-, -(C=N)R₃₉-, -(SO₂)-, -(C=O)-NR₅-, -(C=S)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -NR₅-(C=S)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=O)-O-, -NR₅-(C=S)-O-, -CHR₈-;

Ar₁, Ar₂, Ar₃, Ar₄, Ar₅ и Ar₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный ароматический гетероцикл, необязательно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из O, N и S; каждый из указанных Ar₁, Ar₂,Ar₃, Ar₄ и Ar₅ является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -NR₁₉R₂₀, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила;

Het₁, Het₂, Het₃, Het₄, Het₅ и Het₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный моноциклический гетероцикл, имеющий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из O, N и S, где каждый гетероцикл является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -C_1-6алкила, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -NR₂₁R₂₂; каждый из указанных -C_1-6алкилов является необязательно замещенным 1-3 -галогенами;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, независимо выбирают из C и N.

Более конкретно, настоящее изобретение предлагает соединение Формулы I или его стереоизомер, таутомер, рацемат, метаболит, пролекарство или предлекарство, соль, гидрат, N-оксидную форму или его сольват, где

A₁ представляет собой N и A₂ представляет собой C;

R₁ выбирают из -H, -OH, -C_1-6алкила, -C_3-6циклоалкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₉R₁₀, -SO₂-R₄, -CN, -NR₉-SO₂-R₄, -Het₁; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -NR₁₁R₁₂, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила;

R₄ выбирают из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₁₇R₁₈, -Het₄;

R₅и R₇, каждый, независимо выбирают из -H, -галогена, -C_1-6алкила, -OC_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -Het₅, -Ar₁, -C_3-6циклоалкила, -SO₂-Ar₃, -SO₂, -SO₂-C_1-6алкила, -(C=O), -(C=O)-C_1-6алкила, -O-(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-O-C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -OH, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₃R₂₄;

R₆ выбирают из -SO₂, -(C=O), -(C=S), -(C=O)-O-C_1-6алкила, -(C=O)-C_2-6алкенила, -(C=S)-O-C_1-6алкила, -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=S)-C_1-6алкила, -(C=S)-C_2-6алкенила, -C_1-6алкил-(C=S)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-NR₃₃(C=O)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-NR₃₃(C=S)-NR₃₁R₃₂, -(C=S)-C_3-5циклоалкила, -(C=S)-NR₃₁R₃₂, -(C=O)-Het₅, -(C=S)-Het₅, -(C=O)-NR₃₁-(C=O)-R₃₂; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -OH, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₅R₂₆;

R₈ выбирают из -NR₃₆-(C=O)-NR₃₄R₃₅, -NR₃₄-(SO₂)-R₃₅, -NR₃₄-(C=O)-O-R₃₅, -O-(C=O)-NR₃₄R₃₅;

R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃, R₁₄, R₁₅, R₁₆, R₁₇, R₁₈, R₁₉, R₂₀, R₂₁, R₂₂, R₂₃, R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₂₇, R₂₈, R₂₉, R₃₀, R₃₁, R₃₂, R₃₃, R₃₄, R₃₅, R₃₆, R₃₇, R₃₈, R₃₉ и R_40,каждый, независимо выбирают из -H, -галогена, -O, -OH, -O-C_1-6алкила, -C_1-6алкила, -C_3-6циклоалкила или -Het₁; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -Het₆, -Ar₅;

X₁ выбирают из -C_1-6алкила-, -O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -(C=O)-, -NR₃-(C=O)-, -NR₃-(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-NR₃-C_1-6алкила-, -C_1-6алкил-NR₃-C_1-6алкила-, -SO₂-NR₃-; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₃₇R₃₈;

X₂ выбирают из -C_1-6алкила-, -O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -(C=O)-, -(C=O)-NR₂-, -NR₂-C_1-6алкила-, -NR₂-, -SO₂-NR₂-; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₃₉R₄₀;

B выбирают из -(C=O)-, -(C=N)R₃₉-, -(SO₂)-, -(C=O)-NR₅-, -(C=S)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -NR₅-(C=S)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=S)-O-, -CHR₈-;

Ar₁,Ar₂,Ar₃, Ar₄, Ar₅ и Ar₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный ароматический гетероцикл, необязательно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из O, N и S; каждый из указанных Ar₁, Ar₂, Ar₃, Ar₄ и Ar₅ является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -NR₁₉R₂₀, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, представляют собой C.

R₁ выбирают из -H, -галогена, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -(C=O)-R₄ и -CN; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 -OH;

R₂ выбирают из -H и -C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -OH, -O-C_1-6алкила, -NR₁₃R₁₄;

R₃ выбирают из -H и -C_1-6алкила;

R₄ представляет собой -NR₁₇R₁₈;

R₅и R₇, каждый, независимо выбирают из -H, -C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена и -NR₂₃R₂₄;

R₆ выбирают из -SO₂, -(C=O)-O-C_1-6алкила, -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-C_2-6алкенила, -C_1-6алкил-(C=O)-NR₃₁R₃₂, -SO₂-C_3-5циклоалкила, -(C=O)-C_3-5циклоалкила, -(C=O)-NR₃₁R₃₂, -(C=O)-Het₅, -(C=O)-Ar₆; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -OC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₅R₂₆;

R₈ представляет собой -NR₃₄-(C=O)-R₃₅;

R₁₃, R₁₄, R₁₇, R₁₈, R₂₃, R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₃₁, R₃₂, R₃₄ и R₃₅, каждый, независимо выбирают из -H, -C_1-6алкила и -C_3-6циклоалкила;

X₁ выбирают из -O-C_1-6алкила-, -NR₃-(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-NR₃-C_1-6алкила-, -NR₃-C_1-6алкила-, -C_1-6алкил-NR₃-C_1-6алкила-, -SO₂-NR₃-; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 -C_1-6алкилами;

X₂ выбирают из -O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -NR₂-C_1-6алкила-;

B выбирают из -(C=O)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=O)-O-, -CHR₈-;

Ar₆ представляет собой 5- или 6-членный ароматический гетероцикл, необязательно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из O, N и S;

Het₅ представляет собой 5- или 6-членный моноциклический гетероцикл, имеющий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из O, N и S, где каждый гетероцикл является необязательно и независимо замещенным 1-3 -C_1-6алкилами; каждый из указанных -C_1-6алкилов является необязательно замещенным 1-3 -галогенами;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, независимо выбирают из C и N.

A₁ представляет собой N и A₂ представляет собой C;

R₁, R₂, R₃ и R₅, каждый, представляют собой -H;

R₆ выбирают из -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-C_3-5циклоалкила и -(C=O)-NR₃₁R₃₂; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 -NR₂₅R₂₆;

R₂₅ и R₂₆, каждый, независимо выбирают из -H и -C_1-6алкила;

R₃₁ и R₃₂ представляют собой, каждый, -H;

X₁ выбирают из -O-C_1-6алкила и -NR₃-C_1-6алкила-;

X₂ представляет собой -NR₂-C_1-6алкил-;

B выбирают из -(C=O)-NR₅- и -NR₆-;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, представляют собой C.

Более конкретно, настоящее изобретение предлагает соединение, выбранное из списка, включающего

В частности, для соединений в соответствии с настоящим изобретением, пиразолопиримидиновый остаток связан с арильным или гетероарильным остатком в положении Z₁ или Z₂, в соответствии с нумерацией, как представлено в Формуле I, и/или R₁ связан с арильным или гетероарильным остатком в положении Z₃, Z₄ или Z₅, в соответствии с нумерацией, как представлено в Формуле I.

Другим предметом настоящего изобретения является получение (фармацевтических) композиций, содержащих соединение в соответствии с настоящим изобретением. В частности, соединения и композиции в соответствии с настоящим изобретением являются пригодными для использования в качестве лекарственного средства для медицины или ветеринарии.

Соединения и композиции в соответствии с настоящим изобретением являются пригодными для использования при ингибировании активности киназы, в частности, киназы LRRK2, и могут использоваться для лечения и/или предотвращения неврологических расстройств, таких как болезнь Альцгеймера или болезнь Паркинсона.

В качестве последнего своего предмета, настоящее изобретение предлагает способ предотвращения и/или лечения неврологического расстройства, такого как болезнь Альцгеймера или болезнь Паркинсона; указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения или композиции в соответствии с настоящим изобретением.

Краткое описание чертежей

Фигура 1: аутофосфорилирование LRRK1 в присутствии 1 мкМ соединения (среднее значение ±SD (стандартное отклонение), N=3).

Фигура 2: клеточный статус фосфорилирования LRRK1 в присутствии 1 мкМ соединения (среднее значение ±SD, N=3).

Фигура 3: клеточный статус фосфорилирования LRRK2 в присутствии 1 мкМ соединения (среднее значение ±SD, N=4).

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение теперь будет описываться дополнительно. В следующих далее рассуждениях, различные аспекты настоящего изобретения определяются более подробно. Каждый аспект, определяемый таким образом, может объединяться с любым другим аспектом или аспектами, если только четко не указано иного. В частности, любой признак, упоминаемый как являющийся предпочтительным или преимущественным, может объединяться с любым другим признаком или признаками, указанными как являющиеся предпочтительными или преимущественными.

Если только контекст не диктует иного, звездочки используют в настоящем документе для указания точки, в которой обозначенный одно- или двухвалентный радикал связывается со структурой, к которой он относится и от которой радикал составляет часть.

Как уже упоминалось выше, в первом аспекте настоящее изобретение предлагает соединения Формулы I или его стереоизомер, таутомер, рацемат, метаболит, пролекарство или предлекарство, соль, гидрат, N-оксидную форму или его сольват:

где

R₄ выбирают из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₁₇R₁₈, -Het₄;

R₈ выбирают из -NR₃₄-(C=O)-R₃₅, -NR₃₆-(C=O)-NR₃₄R₃₅, -NR₃₄-(SO₂)-R₃₅, -NR₃₄-(C=O)-O-R₃₅, -O-(C=O)-NR₃₄R₃₅;

R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃, R₁₄, R₁₅, R₁₆, R₁₇, R₁₈, R₁₉, R₂₀, R₂₁, R₂₂, R₂₃, R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₂₇, R₂₈, R₂₉, R₃₀, R₃₁, R₃₂, R₃₃, R₃₄, R₃₅, R₃₆, R₃₇, R₃₈, R₃₉ и R₄₀, каждый, независимо выбирают из -H, -галогена, -O, -OH, -O-C_1-6алкила, -C_1-6алкила, -C_3-6циклоалкила или -Het₁; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -Het₆, -Ar₅;

Ar₁,Ar₂,Ar₃, Ar₄, Ar₅ и Ar₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный ароматический гетероцикл, необязательно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из O, N и S; каждый из указанных Ar₁, Ar₂, Ar₃, Ar₄ и Ar₅ является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -NR₁₉R₂₀, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, независимо выбирают из C и N.

Если не указано иного, все указанные выше радикалы могут определяться обоими способами. Например, когда B представляет собой -(C=O)-NR₅-, -(C=O)- связывается с X₂ и -NR₅- связывается с X₁. Альтернативно, -(C=O)- связывается с X₁ и -NR₅- связывается с X₁.

Это называют “левая часть” радикала, например, когда B представляет собой -(C=O)-NR₅-, -(C=O)-, а "правая часть" представляет собой -NR₅-.

Предпочтительно, B является таким, что левая часть возможных смысловых значений B (то есть, в частности, -(C=N) от -(C=N)R₃₉, -(C=O) от -(C=O)-NR₅, -(C=S) от -(C=S)-NR₅, -CH от -CHR₈-, -NR₅ от -NR₅-(C=O)-NR₇, -NR₅-(C=S)-NR₇, NR₅-(C=O)-O- и NR₅-(C=S)-O-, -SO₂ от -SO₂-NR₅) связывается с X₁. Альтернативно, B является таким, что правая часть возможных смысловых значений B (то есть, в частности (R₃₉)- от -(C=N)R₃₉, (NR₅)- от -(C=O)-NR₅, -SO₂-NR₅ и -(C=S)-NR₅, (NR₇)- от -NR₅-(C=O)-NR₇ и -NR₅-(C=S)-NR₇, O- от NR₅-(C=O)-O- и NR₅-(C=S)-O-, R₈- от -CHR₈-) связывается с X₁.

Предпочтительно, X₁ является таким, что левая часть возможных смысловых значений X₁ (то есть, в частности, -O от -O-C_1-6алкила, -S от -S-C_1-6алкила, -NR₃ от -NR₃-(C=O) и -NR₃-C_1-6алкила, -SO₂ от -SO₂-NR₃) связывается с Z₁-Z₅ арильным или гетероарильным остатком. Альтернативно, X₁ является таким, что правая часть возможных смысловых значений X₁ (то есть, в частности, (C_1-6алкил)- от -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила и -NR₃-C_1-6алкила, -(C=O) от -NR₃-(C=O), (NR₃)- от -SO₂-NR₃) связывается с Z₁-Z₅ арильным или гетероарильным остатком.

Предпочтительно, X₂ является таким, что левая часть возможных смысловых значений X₂ (то есть, в частности, -O от -O-C_1-6алкила, -S от -S-C_1-6алкила, -(C=O) от -(C=O)-NR₂, -NR₂ от -NR₂-C_1-6алкила, -SO₂ от -SO₂-NR₂) связывается с пиразолопиримидиновым остатком. Альтернативно, X₂ является таким, что правая часть возможных смысловых значений X₂ (то есть, в частности, (C_1-6алкил)- от -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила и -NR₂-C_1-6алкила, (NR₂)- от -(C=O)-NR₂ и -SO₂-NR₂) связывается с пиразолопиримидиновым остатком.

Такой же принцип применим ко всем радикалам по настоящему изобретению, если не указано иного.

Когда описываются соединения по настоящему изобретению, используемые термины должны восприниматься в соответствии со следующими далее определениями, если только контекст не диктует иного.

Термин "алкил" сам по себе или как часть другого заместителя относится к полностью насыщенным углеводородным радикалам. Как правило, алкильные группы по настоящему изобретению содержат от 1 до 6 атомов углерода. Алкильные группы могут быть линейными или разветвленными и могут быть замещенными, как указано в настоящем документе. Когда в настоящем документе используют нижний индекс после атома углерода, этот нижний индекс относится к количеству атомов углерода, которое может содержать упомянутая группа. Таким образом, например, C_1-6алкил означает алкил из одного-шести атомов углерода. Примеры алкильных групп представляют собой метил, этил, н-пропил, изопропил, бутил и их изомеры (например, н-бутил, изобутил и трет-бутил); пентил и его изомеры, гексил и его изомеры. C₁-C₆алкил включает все линейные, разветвленные или циклические алкильные группы, имеющие в пределах от 1 до 6 атомов углерода, и таким образом включает метил, этил, н-пропил, изопропил, бутил и их изомеры (например, н-бутил, изобутил и трет-бутил); пентил и его изомеры, гексил и его изомеры, циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.

Термин "необязательно замещенный алкил" относится к алкильной группе, необязательно замещенной одним или несколькими заместителями (например, 1-3 заместителями, например, 1, 2 или 3 заместителями или 1-2 заместителями) в любой доступной точке присоединения. Неограничивающие примеры таких заместителей включают -галоген, -OH, первичные и вторичные амиды, -O-C_1-6алкил, -S-C_1-6алкил, гетероарил, арил и тому подобное.

Термин “циклоалкил” сам по себе или как часть другого заместителя представляет собой циклическую алкильную группу, которая представляет собой одновалентную, насыщенную или ненасыщенную углеводородную группу, имеющую циклическую структуру. Циклоалкил включает все насыщенные или частично насыщенные (содержащие 1 или 2 двойных связи) углеводородные группы, имеющие циклическую структуру. Циклоалкильные группы могут содержать 3 или более атомов углерода в кольце и, как правило, в соответствии с настоящим изобретением содержат от 3 до 6 атомов. Примеры циклоалкильных групп включают, не ограничиваясь этим, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил.

Когда алкильные группы, как определено, являются двухвалентными, то есть имеют две одинарные связи для присоединения двух других групп, они называются "алкиленовыми" группами. Неограничивающие примеры алкиленовых групп включают метилен, этилен, метилметилен, триметилен, пропилен, тетраметилен, этилэтилен, 1,2-диметилэтилен, пентаметилен и гексаметилен.

Как правило, алкиленовые группы по настоящему изобретению предпочтительно содержат такое же количество атомов углерода как их алкильные аналоги. Когда присутствует алкиленовый или циклоалкиленовый бирадикал, присоединение к молекулярной структуре, от которой он образует часть, может осуществляться через общий атом углерода или иной атом углерода. Для иллюстрации этого с применением номенклатуры звездочки по настоящему изобретению, C₃алкиленовая группа может представлять собой, например, *-CH₂CH₂CH₂-*, *-CH(-CH₂CH₃)-* или *-CH₂CH(-CH₃)-*. Подобным же образом, C₃циклоалкиленовая группа может представлять собой

Термины "гетероцикл", как используется в настоящем документе, сам по себе или как часть другой группы, относятся к неароматическим, полностью насыщенным или частично ненасыщенным циклическим группам (например, к 3-6-членным моноциклическим кольцевым системам), которые имеют, по меньшей мере, один гетероатом, по меньшей мере, в одном кольце, содержащем атом углерода. Каждое кольцо гетероциклической группы, содержащей гетероатом, может иметь 1, 2, 3 или 4 гетероатома, выбранных из атомов азота, атомов кислорода и/или атомов серы. Необязательно замещенное гетероциклическое соединение относится к гетероциклическому соединению, необязательно имеющему один или несколько заместителей (например, 1-4 заместителя или, например, 1, 2, 3 или 4), выбранных из заместителей, определенных выше для замещенного алкила.

Иллюстративные гетероциклические группы включают пиперидинил, азетидинил, имидазолинил, имидазолидинил, изоксазолинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, тиазолидинил, изотиазолидинил, пиперидил, сукцинимидил, 3H-индолил, изоиндолинил, хроменил, изохроманил, ксантенил, 2H-пирролил, 1-пирролинил, 2-пирролинил, 3-пирролинил, пирролидинил, 4H-хинолизинил, 4aH-карбазолил, 2-оксопиперазинил, пиперазинил, гомопиперазинил, 2-пиразолинил, 3-пиразолинил, пиранил, дигидро-2H-пиранил, 4H-пиранил, 3,4-дигидро-2H-пиранил, фталазинил, оксетанил, тиетанил, 3-диоксоланил, 1,3-диоксанил, 2,5-диоксимидазолидинил, 2,2,4-пиперидонил, 2-оксопиперидинил, 2-оксопирролодинил, 2-оксоазепинил, индолинил, тетрагидропиранил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиенил, тетрагидрохинолинил, тетрагидроизохинолинил, тиоморфолинил, тиоморфолинил сульфоксид, тиоморфолинилсульфон, 1,3-диоксоланил, 1,4-оксатианил, 1,4-дитианил, 1,3,5-триоксанил, 6H-1,2,5-тиадиазинил, 2H-1,5,2-дитиазинил, 2H-оксоцинил, 1H-пирролизинил, тетрагидро-1,1-диоксотиенил, N-формилпиперазинил и морфолинил; в частности, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, пиперидинил, диоксоланил, диоксанил, морфолинил, тиоморфолинил, пиперазинил, тиазолидинил, тетрагидропиранил и тетрагидрофуранил.

Термин "арил", как используется в настоящем документе, относится к полиненасыщенной, ароматической углеводородной группе, имеющей одно кольцо (то есть фенил). Арил, как предполагается, также включает частично гидрированные производные карбоциклических систем, перечисленных в настоящем документе. Неограничивающие примеры арила включают фенил, бифенилил, бифениленил, 5- или 6-тетралинил, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-азуленил, 1- или 2-нафтил, 1-, 2- или 3-инденил, 1-, 2- или 9-антрил, 1- 2-, 3-, 4- или 5-аценафтиленил, 3-, 4- или 5-аценафтенил, 1-, 2-, 3-, 4- или 10-фенантрил, 1- или 2-пенталенил, 1-, 2-, 3- или 4-флуоренил, 4- или 5-инданил, 5-, 6-, 7- или 8-тетрагидронафтил, 1,2,3,4-тетрагидронафтил, 1,4-дигидронафтил, дибензо[a,d]циклогептенил и 1-, 2-, 3-, 4- или 5-пиренил; в частности, фенил.

Арильное кольцо необязательно может быть замещенным одним или несколькими заместителями. “Необязательно замещенный арил” относится к арилу, необязательно имеющему один или несколько заместителей (например, 1-5 заместителей, например, 1, 2, 3 или 4) в любой доступной точке присоединения, выбранных из заместителей, определенных выше для замещенного алкила.

Когда атом углерода в арильной группе заменяется гетероатомом, получаемое в результате кольцо упоминается в настоящем документе как гетероарильное кольцо.

Термин “гетероарил”, как используется в настоящем документе, сам по себе или как часть другой группы, относится, не ограничиваясь этим, к ароматическим кольцам, содержащим 5-6 атомов углерода, в которых один или несколько атомов углерода могут быть заменены атомами кислорода, азота или серы. Неограничивающие примеры такого гетероарила включают: пирролил, фуранил, тиофенил, пиразолил, имидазолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, триазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, тетразолил, оксатриазолил, тиатриазолил, пиридинил, пиримидил, пиразинил, пиридазинил, оксазинил, диоксинил, тиазинил, триазинил, имидазо[2,1-b][1,3]тиазолил, тиено[3,2-b]фуранил, тиено[3,2-b]тиофенил, тиено[2,3-d][1,3]тиазолил, тиено[2,3-d]имидазолил, тетразоло[1,5-a]пиридинил, индолил, индолизинил, изоиндолил, бензофуранил, изобензофуранил, бензотиофенил, изобензотиофенил, индазолил, бензимидазолил, 1,3-бензоксазолил, 1,2-бензоизоксазолил, 2,1-бензоизоксазолил, 1,3-бензотиазолил, 1,2-бензизотиазолил, 2,1-бензизотиазолил, бензотриазолил, 1,2,3-бензоксадиазолил, 2,1,3-бензоксадиазолил, 1,2,3-бензотиадиазолил, 2,1,3-бензотиадиазолил, тиенопиридинил, пуринил, имидазо[1,2-a]пиридинил, 6-оксо-пиридазин-1(6H)-ил, 2-оксопиридин-1(2H)-ил, 6-оксо-пиридазин-1(6H)-ил, 2-оксопиридин-1(2H)-ил, 1,3-бензодиоксолил, хинолинил, изохинолинил, циннолинил, хиназолинил, хиноксалинил, 7-азаиндолил, 6-азаиндолил, 5-азаиндолил, 4-азаиндолил.

“Необязательно замещенный гетероарил” относится к гетероарилу, необязательно имеющему один или несколько заместителей (например, 1-4 заместителя, например, 1, 2, 3 или 4), выбранных из заместителей, определенных выше для замещенного алкила.

Термин “галоген” или “галогенид”, как группа или часть группы, является общим для фтора, хлора, брома или йода, а также для любых пригодных для использования их изотопов.

Когда в настоящем изобретении используют термин “замещенный”, он, как подразумевается, указывает, что один или несколько атомов водорода на атоме, указанном в выражении с использованием термина “замещенный”, заменяют, выбирая из указанной группы, при условии, что указанная нормальная валентность атома не превышается, и что замещение дает в результате химически стабильное соединение, то есть соединение, которое является достаточно стойким, чтобы пережить выделение до желаемой степени чистоты из реакционной смеси и приготовление в виде терапевтического и/или диагностического средства.

Когда группы могут быть необязательно замещенными, такие группы могут быть замещенными один или несколько раз, и предпочтительно один, два или три раза. Заместители могут быть выбраны из заместителей, определенных выше для замещенного алкила.

Как используется в настоящем документе такие термины, как “алкил, арил или циклоалкил, каждый из которых является необязательно замещенным” или “алкил, арил или циклоалкил, необязательно замещенный”, относятся к необязательно замещенному алкилу, необязательно замещенному арилу и необязательно замещенному циклоалкилу.

В более общем смысле, из того, что приведено выше, специалисту в данной области будет ясно, что соединения по настоящему изобретению могут существовать в форме различных изомеров и/или таутомеров, включая, не ограничиваясь этим, геометрические изомеры, конформационные изомеры, E/Z-изомеры, стереохимические изомеры (то есть, энантиомеры и диaстереоизомеры) и изомеры, которые соответствуют присутствию одних и тех же заместителей на различных положениях колец, представленных в соединениях по настоящему изобретению. Все такие возможные изомеры, таутомеры и их смеси включаются в рамки настоящего изобретения.

В дополнение к этому, настоящее изобретение включает изотопно-меченные соединения и соли, которые идентичны соединениям Формулы (I), но на самом деле, один или несколько атомов заменены атомом, имеющим атомную массу или массовое число, отличное от атомной массы или массового числа, наиболее распространенного в природе. Примеры изотопов, которые могут вводиться в соединения Формулы (I), представляют собой изотопы водорода, углерода, азота, фтора, такие как³H,¹¹C,¹³N,¹⁴C,¹⁵O и¹⁸F. Такие изотопно-меченные соединения Формулы (I) являются пригодными для использования при анализах распределения в лекарственных средствах и/или тканях субстрата. Например, изотопы¹¹C и¹⁸F являются особенно пригодными для использования при PET (позитронной эмиссионной томографии). PET является пригодной для использования при получении изображений головного мозга. Изотопно-меченные соединения Формулы (I) могут, как правило, быть получены посредством осуществления процедур, описанных ниже, посредством замещения легкодоступного не меченного изотопно реагента изотопно-меченным реагентом.

Когда в настоящем изобретении используют термин “соединения по настоящему изобретению” или сходный термин, как подразумевается, он включает соединения общей Формулы I и любой их подгруппы. Этот термин также относится к соединениям, как описано в таблице 1, к их производным, N-оксидам, солям, сольватам, гидратам, стереоизомерным формам, рацематным смесям, таутомерным формам, оптическим изомерам, аналогам, пролекарствам, сложным эфирам и метаболитам, а также к их кватернизованным азотным аналогам. N-оксидные формы указанных соединений, как подразумевается, включают соединения, где один или несколько атомов азота окисляются до так называемого N-оксида.

Как используется в описании и прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если только контекст не диктует четко иного. В качестве примера, "соединение" обозначает одно соединение или несколько соединений.

Термины, описанные выше, и другие термины, используемые в описании, хорошо понятны специалистам в данной области.

Предпочтительно, соединения Формулы I определены выше, как таковые, где

A₁ и A₂ выбирают из C и N; где когда A₁ представляет собой C, тогда A₂ представляет собой N; и где когда A₂ представляет собой C, тогда A₁ представляет собой N.

Более предпочтительно, A₁ представляет собой N, и A₂ представляет собой C. Альтернативно, A₂ представляет собой N, и A₁ представляет собой C.

Предпочтительно, R₁ выбирают из -H, -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -C_3-6циклоалкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₉R₁₀, -(C=O)-R₄, -SO₂-R₄, -CN, -NR₉-SO₂-R₄, -Het₁; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -NR₁₁R₁₂, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила.

R₁ выбирают из -H, -галогена, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -(C=O)-R₄ и -CN; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 –OH.

Еще более предпочтительно, R₁ представляет собой -H.

Предпочтительно, R₂ выбирают из -H, -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -C_3-6циклоалкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-O-C_1-6алкила, -(C=O)-NR₂₇R₂₈, -Het₃, -(C=O)-Het₃, -SO₂-C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -Het₃, -Ar₂, -NR₁₃R₁₄.

Более предпочтительно, R₂ выбирают из -H и -C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -OH, -O-C_1-6алкила, -NR₁₃R₁₄.

Еще более предпочтительно, R₂ представляет собой H.

Предпочтительно, R₃ выбирают из -H, -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -C_3-6циклоалкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-O-C_1-6алкила, -Het₂, -(C=O)-Het₂, -(C=O)-NR₂₉R₃₀, -SO₂-C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -NR₁₅R₁₆, -Het₂, -Ar₄.

Более предпочтительно, R₃ выбирают из -H и -C_1-6алкила.

Еще более предпочтительно, R₃ представляет собой H.

Предпочтительно, R₄ выбирают из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₁₇R₁₈, -Het₄.

Более предпочтительно, R₄ представляет собой -NR₁₇R₁₈.

Предпочтительно, R₅и R₇, каждый, независимо выбирают из -H, -галогена, -C_1-6алкила, -OC_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -Het₅, -Ar₁, -C_3-6циклоалкила, -SO₂-Ar₃, -SO₂, -SO₂-C_1-6алкила, -(C=O), -(C=O)-C_1-6алкила, -O-(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-O-C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₃R₂₄.

Более предпочтительно, R₅и R₇, каждый, независимо выбирают из -H, -C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена и -NR₂₃R₂₄.

Еще более предпочтительно, R₅ и R₇, каждый, представляют собой -H.

Предпочтительно, R₆ выбирают из -SO₂, -SO₂-C_1-6алкила, -(C=O), -(C=S), -(C=O)-O-C_1-6алкила, -(C=S)-O-C_1-6алкила, -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-C_2-6алкенила, -(C=S)-C_1-6алкила, -(C=S)-C_2-6алкенила, -C_1-6алкил-(C=O)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-(C=S)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-NR₃₃(C=O)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-NR₃₃(C=S)-NR₃₁R₃₂, -SO₂-C_3-5циклоалкила, -(C=O)-C_3-5циклоалкила, -(C=S)-C_3-5циклоалкила, -(C=O)-NR₃₁R₃₂, -(C=S)-NR₃₁R₃₂, -(C=O)-Het₅, -(C=S)-Het₅, -(C=O)-Ar₆, -(C=S)-Ar₆, -(C=O)-NR₃₁-(C=O)-R₃₂; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₅R₂₆.

Более предпочтительно, R₆ выбирают из -SO₂, -(C=O)-O-C_1-6алкила, -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-C_2-6алкенила, -C_1-6алкил-(C=O)-NR₃₁R₃₂, -SO₂-C_3-5циклоалкила, -(C=O)-C_3-5циклоалкила, -(C=O)-NR₃₁R₃₂, -(C=O)-Het₅, -(C=O)-Ar₆; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -OC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₅R₂₆.

Еще более предпочтительно,R₆ выбирают из -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-C_3-5циклоалкила и -(C=O)-NR₃₁R₃₂; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 -NR₂₅R₂₆.

Предпочтительно, R₈ выбирают из -NR₃₄-(C=O)-R₃₅, -NR₃₆-(C=O)-NR₃₄R₃₅, -NR₃₄-(SO₂)-R₃₅, -NR₃₄-(C=O)-O-R₃₅, -O-(C=O)-NR₃₄R₃₅.

Более предпочтительно, R₈ представляет собой -NR₃₄-(C=O)-R₃₅.

Предпочтительно, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃, R₁₄, R₁₅, R₁₆, R₁₇, R₁₈, R₁₉, R₂₀, R₂₁, R₂₂, R₂₃, R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₂₇, R₂₈, R₂₉, R₃₀, R₃₁, R₃₂, R₃₃, R₃₄, R₃₅, R₃₆, R₃₇, R₃₈, R₃₉ и R₄₀,каждый, независимо выбирают из -H, -галогена, -O, -OH, -O-C_1-6алкила, -C_1-6алкила, -C_3-6циклоалкила или -Het₁; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -Het₆, -Ar₅.

Более предпочтительно, R₁₃, R₁₄, R₁₇, R₁₈, R₂₃, R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₃₁, R₃₂, R₃₄ и R₃₅, каждый, независимо выбирают из -H, -C_1-6алкила и -C_3-6циклоалкила.

Еще более предпочтительно, R₂₅ и R₂₆, каждый, независимо выбирают из -H и -C_1-6алкила; и R₃₁ и R₃₂, каждый, представляют собой -H.

Предпочтительно, X₁ выбирают из -C_1-6алкила-, -O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -(C=O)-, -NR₃-(C=O)-, -NR₃-(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-NR₃-C_1-6алкила-, -NR₃-C_1-6алкила-, -C_1-6алкил-NR₃-C_1-6алкила-, -SO₂-NR₃; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₃₇R₃₈.

Более предпочтительно, X₁ выбирают из -O-C_1-6алкила-, -NR₃-(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-NR₃-C_1-6алкила-, -NR₃-C_1-6алкила-, -C_1-6алкил-NR₃-C_1-6алкила-, -SO₂-NR₃-; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 -C_1-6алкилами.

Еще более предпочтительно, X₁ выбирают из -O-C_1-6алкила и -NR₃-C_1-6алкила.

Предпочтительно, X₂ выбирают из -C_1-6алкила-, -O-C_1-6алкила-, -O-C_1-6алкил-O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -(C=O)-, -(C=O)-NR₂-, -NR₂-C_1-6алкила-, -NR₂-, -SO₂-NR₂-; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₃₉R₄₀.

Более предпочтительно, X₂ выбирают из -O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -NR₂-C_1-6алкила-.

Еще более предпочтительно, X₂ представляет собой -NR₂-C_1-6алкил-.

Предпочтительно, B выбирают из -(C=O)-, -(C=N)-R₃₉-, -(SO₂)-, -(C=O)-NR₅-, -(C=S)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -NR₅-(C=S)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=O)-O-, -NR₅-(C=S)-O-, -CHR₈-.

Более предпочтительно, B выбирают из -(C=O)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=O)-O-, -CHR₈-.

Еще более предпочтительно, B выбирают из -(C=O)-NR₅- и -NR₆-.

Предпочтительно, Ar₁,Ar₂,Ar₃, Ar₄, Ar₅ и Ar₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный ароматический гетероцикл, необязательно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из O, N и S; каждый из указанных Ar₁, Ar₂,Ar₃, Ar₄ и Ar₅ является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -NR₁₉R₂₀, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила.

Более предпочтительно, Ar₆ представляет собой 5- или 6-членный ароматический гетероцикл, необязательно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из O, N и S.

Предпочтительно, Het₁, Het₂, Het₃, Het₄, Het₅ и Het₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный моноциклический гетероцикл, имеющий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из O, N и S, где каждый гетероцикл является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -C_1-6алкила, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -NR₂₁R₂₂; каждый из указанных -C_1-6алкилов является необязательно замещенным 1-3 -галогенами.

Более предпочтительно, Het₅ представляет собой 5- или 6-членный моноциклический гетероцикл, имеющий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из O, N и S, где каждый гетероцикл является необязательно и независимо замещенным 1-3 -C_1-6алкилами; каждый из указанных -C_1-6алкилов является необязательно замещенным 1-3 -галогенами.

Предпочтительно, Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, независимо выбирают из C и N.

Более предпочтительно, Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, представляют собой C.

В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение предлагает соединение Формулы I или его стереоизомер, таутомер, рацемат, метаболит, пролекарство или предлекарство, соль, гидрат, N-оксидную форму или его сольват:

где применимо одно или несколько из следующих далее обозначений:

R₄ выбирают из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₁₇R₁₈, -Het₄;

R₈ выбирают из -NR₃₄-(C=O)-R₃₅, -NR₃₆-(C=O)-NR₃₄R₃₅, -NR₃₄-(SO₂)-R₃₅, -NR₃₄-(C=O)-O-R₃₅, -O-(C=O)-NR₃₄R₃₅;

Ar₁, Ar₂, Ar₃, Ar₄, Ar₅ и Ar₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный ароматический гетероцикл, необязательно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из O, N и S; каждый из указанных Ar₁, Ar₂, Ar₃, Ar₄ и Ar₅ является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -NR₁₉R₂₀, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила;

Het₁, Het₂, Het₃, Het₄, Het₅ и Het₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный моноциклический гетероцикл, имеющий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из O, N и S, где каждый гетероцикл является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -C_1-6алкила, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -NR₂₁R₂₂; каждый из указанных -C_1-6алкилов является необязательно замещенным 1-3 -галогенами;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, независимо выбирают из C и N.

В другом конкретном варианте осуществления, настоящее изобретение предлагает соединения Формулы I, где применимо одно или несколько из следующих далее обозначений:

R₃ выбирают из -H и -C_1-6алкила;

R₄ представляет собой -NR₁₇R₁₈;

R₅ и R₇, каждый, независимо выбирают из -H, -C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена и -NR₂₃R₂₄;

R₈ представляет собой -NR₃₄-(C=O)-R₃₅;

X₂ выбирают из -O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -NR₂-C_1-6алкила-;

B выбирают из -(C=O)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=O)-O-, -CHR₈-;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, независимо выбирают из C и N.

Еще в одном конкретном варианте осуществления, настоящее изобретение предлагает соединения Формулы I, где применимы одно или несколько из следующих далее обозначений:

A₁ представляет собой N, и A₂ представляет собой C;

R₁, R₂, R₃ и R₅, каждый, представляют собой -H;

R₂₅ и R₂₆, каждый, независимо выбирают из -H и -C_1-6алкила;

R₃₁ и R₃₂, каждый, представляют собой –H;

X₁ выбирают из -O-C_1-6алкила и -NR₃-C_1-6алкила-;

X₂ представляет собой -NR₂-C_1-6алкил-;

B выбирают из -(C=O)-NR₅- и -NR₆-;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, представляют собой C.

В частности, X₁ и X₂, как используется в настоящем документе, представляют собой бирадикалы, которые, взятые вместе с радикалами, к которым они присоединены, образуют макроциклическое пиразолопиримидиновое соединение. Указанные бирадикалы могут присутствовать в любом из обоих направлений в макроциклическом пиразолопиримидине, но предпочтительно присутствуют в направлении, как описано ниже:

Обращаясь к формуле I:

X₁ выбирают из списка, включающего *-C_1-6алкил-, *-O-C_1-6алкил-, *-S-C_1-6алкил-, *-(C=O)-, *-NR₃-(C=O)-, *-NR₃-(C=O)-C_1-6алкил, *-(C=O)-NR₃-C_1-6алкил-, *-NR₃-C_1-6алкил-, *-C_1-6алкил-NR₃-C_1-6алкил-, -SO₂-NR₃-*, где указанный бирадикал предпочтительно присоединен к арильному или гетероарильному остатку через *;

X₂ выбирают из *-C_1-6алкила-, *-O-C_1-6алкила-, *-S-C_1-6алкила-, *-(C=O)-, -(C=O)-NR₂-*, *-NR₂-C_1-6алкила-, *-NR₂-, -SO₂-NR₂-*; где указанный бирадикал предпочтительно присоединен к пиразолопиримидиновому остатку через *.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение предлагает соединения Формулы I или его стереоизомер, таутомер, рацемат, метаболит, пролекарство или предлекарство, соль, гидрат, N-оксидную форму или его сольват, где

R₄ выбирают из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₁₇R₁₈, -Het₄;

R₈ выбирают из -NR₃₄-(C=O)-R₃₅, -NR₃₆-(C=O)-NR₃₄R₃₅, -NR₃₄-(SO₂)-R₃₅, -NR₃₄-(C=O)-O-R₃₅, -O-(C=O)-NR₃₄R₃₅;

B выбирают из -(C=O)-, -(C=N)R₃₉-, -(SO₂)-, -(C=O)-NR₅-, -(C=S)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -NR₅-(C=S)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=O)-O-, -NR₅-(C=S)-O-, -CHR₈-;

Ar₁, Ar₂, Ar₃, Ar₄, Ar₅ и Ar₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный ароматический гетероцикл, необязательно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из O, N и S; каждый из указанных Ar₁, Ar₂,Ar₃, Ar₄ и Ar₅ является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -NR₁₉R₂₀, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила;

Het₁, Het₂, Het₃, Het₄, Het₅ и Het₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный моноциклический гетероцикл, имеющий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из O, N и S, где каждый гетероцикл является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -C_1-6алкила, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -NR₂₁R₂₂; каждый из указанных -C_1-6алкилов является необязательно замещенным 1-3 -галогенами;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, независимо выбирают из C и N.

В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение предлагает соединения Формулы I или его стереоизомер, таутомер, рацемат, метаболит, пролекарство или предлекарство, соль, гидрат, N-оксидную форму или его сольват, где

A₁ представляет собой N и A₂ представляет собой C;

R₄ выбирают из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₁₇R₁₈, -Het₄;

R₅и R₇, каждый, независимо выбирают из -H, -галогена, -C_1-6алкила, -OC_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -Het₅, -Ar₁, -C_3-6циклоалкила, -SO₂-Ar₃, -SO₂, -SO₂-C_1-6алкила, -(C=O), -(C=O)-C_1-6алкила, -O-(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-O-C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -OH, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₃R₂₄;

R₆ выбирают из -SO₂, -(C=O), -(C=S), -(C=O)-O-C_1-6алкила, -(C=S)-O-C_1-6алкила, -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-C_2-6алкенила, -(C=S)-C_1-6алкила, -(C=S)-C_2-6алкенила, -C_1-6алкил-(C=S)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-NR₃₃(C=O)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-NR₃₃(C=S)-NR₃₁R₃₂, -SO₂-C_3-5циклоалкила, -(C=S)-C_3-5циклоалкила, -(C=S)-NR₃₁R₃₂, -(C=O)-Het₅, -(C=S)-Het₅, -(C=O)-NR₃₁-(C=O)-R₃₂; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -OH, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₅R₂₆;

R₈ выбирают из -NR₃₆-(C=O)-NR₃₄R₃₅, -NR₃₄-(SO₂)-R₃₅, -NR₃₄-(C=O)-O-R₃₅, -O-(C=O)-NR₃₄R₃₅;

B выбирают из -(C=O)-, -(C=N)R₃₉-, -(SO₂)-, -(C=O)-NR₅-, -(C=S)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -NR₅-(C=S)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=S)-O-, -CHR₈-;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, представляют собой C.

A₁ представляет собой N и A₂ представляет собой C;

R₄ выбирают из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₁₇R₁₈, -Het₄;

R₅и R₇, каждый, независимо выбирают из -H, -галогена, -C_1-6алкила, -OC_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -Het₅, -Ar₁, -C_3-6циклоалкила, -SO₂-Ar₃, -SO₂, -SO₂-C_1-6алкила, -(C=O), -(C=O)-C_1-6алкила, -O-(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-O-C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -OH, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₃R₂₄;

R₈ выбирают из -NR₃₆-(C=O)-NR₃₄R₃₅, -NR₃₄-(SO₂)-R₃₅, -NR₃₄-(C=O)-O-R₃₅, -O-(C=O)-NR₃₄R₃₅;

B выбирают из -(C=O)-, -(C=N)R₃₉-, -(SO₂)-, -(C=O)-NR₅-, -(C=S)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -NR₅-(C=S)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=S)-O-, -CHR₈-;

Ar₁, Ar₂, Ar₃, Ar₄, Ar₅ и Ar₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный ароматический гетероцикл, необязательно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из O, N и S; каждый из указанных Ar₁, Ar₂,Ar₃, Ar₄ и Ar₅ является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -NR₁₉R₂₀, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкил;

Het₁, Het₂, Het₃, Het₄, Het₅ и Het₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный моноциклический гетероцикл, имеющий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из O, N и S, где каждый гетероцикл является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -C_1-6алкила, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -NR₂₁R₂₂; каждый из указанных -C_1-6алкилов является необязательно замещенным 1-3 -галогенами;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, представляют собой C.

В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение предлагает соединения Формулы I или его стереоизомер, таутомер, рацемат, метаболит, пролекарство или предлекарство, соль, гидрат, N-оксидную форму или его сольват, где

R₃ выбирают из -H и -C_1-6алкила;

R₄ представляет собой -NR₁₇R₁₈;

R₅ и R₇, каждый, независимо выбирают из -H, -C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена и -NR₂₃R₂₄;

R₈ представляет собой -NR₃₄-(C=O)-R₃₅;

X₂ выбирают из-O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -NR₂-C_1-6алкила-;

B выбирают из -(C=O)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=O)-O-, -CHR₈-;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, независимо выбирают из C и N.

A₁ представляет собой N и A₂ представляет собой C;

R₁, R₂, R₃ и R₅,каждый, представляют собой -H;

R₂₅ и R₂₆, каждый, независимо выбирают из -H и -C_1-6алкила;

R₃₁ и R₃₂ каждый представляет собой -H;

X₁ выбирают из -O-C_1-6алкила и -NR₃-C_1-6алкила-;

X₂ представляет собой -NR₂-C_1-6алкил-;

B выбирают из -(C=O)-NR₅- и -NR₆-;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, представляют собой C.

В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение предлагает соединение Формулы II или его стереоизомер, таутомер, рацемат, метаболит, пролекарство или предлекарство, соль, гидрат, N-оксидную форму или его сольват:

где

B выбирают из -(C=O)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=O)-O-, -CHR₈-;

R₅ и R₇, каждый, независимо выбирают из -H и -C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена и -NR₂₃R₂₄;

R₆ выбирают из -SO₂-C_1-6алкила, -(C=O)-O-C_1-6алкила, -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-C_2-6алкенила, -C_1-6алкил-(C=O)-NR₃₁R₃₂, -SO₂-C_3-5циклоалкила, -(C=O)-C_3-5циклоалкила, -(C=O)-NR₃₁R₃₂, -(C=O)-Het₅; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -OC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₅R₂₆;

R₈ представляет собой -NR₃₄-(C=O)-R₃₅;

R₂₃, R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₃₁ и R₃₂, каждый, независимо выбирают из -H и -C_1-6алкила;

R₃₅ представляет собой -C_3-6циклоалкил;

В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение предлагает соединение Формулы III или его стереоизомер, таутомер, рацемат, метаболит, пролекарство или предлекарство, соль, гидрат, N-оксидную форму или его сольват:

где

R₃ выбирают из -H и -C_1-6алкила;

R₅ представляет собой -H;

R₆ выбирают из -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-C_3-5циклоалкила и -OC_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 -OC_1-6алкилами;

B выбирают из -(C=O)-NR₅- и -NR₆-.

В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение предлагает соединение Формулы IV или его стереоизомер, таутомер, рацемат, метаболит, пролекарство или предлекарство, соль, гидрат, N-оксидную форму или его сольват:

где

R₃ выбирают из -H и -C_1-6алкила;

R₅ представляет собой -H;

R₆ выбирают из -(C=O)-C_1-6алкила и -(C=O)-C_3-5циклоалкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -OC_1-6алкила и -NR₂₅R₂₆;

R₂₅ и R₂₆, каждый, представляют собой -C_1-6алкил;

B выбирают из -(C=O)-NR₅- и -NR₆-.

Еще в одном конкретном варианте осуществления настоящее изобретение предлагает соединение или его стереоизомер, таутомер, рацемат, метаболит, пролекарство или предлекарство, соль, гидрат, N-оксидную форму или его сольват, выбранное из списка, включающего:

В частности, настоящее изобретение предлагает соединение, выбранное из списка, включающего

В частности, в соединениях в соответствии с настоящим изобретением, пиразолопиримидиновый остаток связан с арильным или гетероарильным остатком в положении Z₁ или Z₂, в соответствии с нумерацией, как представлено в Формуле I. Кроме того, R₁ из соединений в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно связан с арильным или гетероарильным остатком в положении Z₃, Z₄ или Z₅, в соответствии с нумерацией, как представлено в Формуле I.

Соединения по настоящему изобретению могут быть получены в соответствии со схемами реакций, приведенными в примерах, ниже, но специалисты в данной области заметят, что эти примеры являются только иллюстративными для настоящего изобретения, и что соединения по настоящему изобретению могут быть получены с помощью любого из нескольких стандартных способов синтеза, обычно используемых специалистами в области органической химии.

В предпочтительном варианте осуществления соединения по настоящему изобретению являются пригодными для использования в лекарственных препаратах для медицины или ветеринарии, в частности, для использования в качестве ингибиторов киназы, более конкретно, для ингибирования киназы LRRK2.

Кроме того, настоящее изобретение предлагает использование соединения, как определено выше, или использование композиции, содержащей указанное соединение, в качестве лекарственного препарата для медицины или ветеринарии, в частности, для предотвращения и/или лечения неврологических расстройств, таких как, не ограничиваясь этим, болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение предлагает использование соединения, как определено выше, или использование композиции, содержащей указанное соединение, для предотвращения и/или лечения неврологических расстройств, таких как, не ограничиваясь этим, болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера.

Кроме того, настоящее изобретение предлагает соединение, как определено выше, или композицию, содержащую указанное соединение, для использования для предотвращения и/или лечения неврологических расстройств, таких как, не ограничиваясь этим, болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера.

Другие варианты осуществления настоящего изобретения подробно описываются ниже в настоящем документе в форме пронумерованных описаний:

1. Соединение Формулы I или его стереоизомер, таутомер, рацемат, метаболит, пролекарство или предлекарство, соль, гидрат, N-оксидная форма или его сольват:

где

R₄ выбирают из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₁₇R₁₈, -Het₄;

R₆ выбирают из -SO₂, -SO₂-C_1-6алкила, -(C=O), -(C=S), -(C=O)-O-C_1-6алкила, -(C=S)-O-C_1-6алкила -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=S)-C_1-6алкила, -C_1-6алкил-(C=O)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-(C=S)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-NR₃₃(C=O)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-NR₃₃(C=S)-NR₃₁R₃₂, -(C=O)-C_3-5циклоалкила, -(C=S)-C_3-5циклоалкила, -(C=O)-NR₃₁R₃₂, -(C=S)-NR₃₁R₃₂, -(C=O)-Het₅, -(C=S)-Het₅, -(C=O)-Ar₆, -(C=S)-Ar₆, -(C=O)-NR₃₁-(C=O)-R₃₂; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₅R₂₆;

R₈ выбирают из -NR₃₄-(C=O)-R₃₅, -NR₃₆-(C=O)-NR₃₄R₃₅, -NR₃₄-(SO₂)-R₃₅, -NR₃₄-(C=O)-O-R₃₅, -O-(C=O)-NR₃₄R₃₅;

X₁ выбирают из -C_1-6алкила-, -O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -(C=O)-, -NR₃-(C=O)-, -NR₃-C_1-6алкила-, -SO₂-NR₃-; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₃₇R₃₈;

B выбирают из -(C=O)-, -(C=N)R₃₉-, -(SO₂)-, -(C=O)-NR₅-, -(C=S)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -NR₅-(C=S)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=O)-O-, -NR₅-(C=S)-O-, -CHR₈-;

Het₁, Het₂, Het₃, Het₄, Het₅ и Het₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный моноциклический гетероцикл, имеющий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из O, N и S, где каждый гетероцикл является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -C_1-6алкила, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -NR₂₁R₂₂; каждый из указанных -C_1-6алкилов является необязательно замещенным 1-3 -галогенами;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, независимо выбирают из C и N.

2. Соединение, как определено в описании 1, где

R₄ выбирают из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₁₇R₁₈, -Het₄;

R₈ выбирают из -NR₃₄-(C=O)-R₃₅, -NR₃₆-(C=O)-NR₃₄R₃₅, -NR₃₄-(SO₂)-R₃₅, -NR₃₄-(C=O)-O-R₃₅, -O-(C=O)-NR₃₄R₃₅;

B выбирают из -(C=O)-, -(C=N)R₃₉-, -(SO₂)-, -(C=O)-NR₅-, -(C=S)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -NR₅-(C=S)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=O)-O-, -NR₅-(C=S)-O-, -CHR₈-;

Het₁, Het₂, Het₃, Het₄, Het₅ и Het₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный моноциклический гетероцикл, имеющий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из O, N и S, где каждый гетероцикл является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -C_1-6алкила, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -NR₂₁R₂₂; каждый из указанных -C_1-6алкилов является необязательно замещенным 1-3 -галогенами;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, независимо выбирают из C и N.

3. Соединение, как определено в описании 1, где

A₁ представляет собой N и A₂ представляет собой C;

R₄ выбирают из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₁₇R₁₈, -Het₄;

R₅ и R₇, каждый, независимо выбирают из -H, -галогена, -C_1-6алкила, -OC_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -Het₅, -Ar₁, -C_3-6циклоалкила, -SO₂-Ar₃, -SO₂, -SO₂-C_1-6алкила, -(C=O), -(C=O)-C_1-6алкила, -O-(C=O)-C_1-6алкила, -(C=O)-O-C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -OH, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₃R₂₄;

R₆ выбирают из -SO₂, -(C=O), -(C=S), -(C=O)-O-C_1-6алкила, -(C=S)-O-C_1-6алкила, -(C=O)-C_1-6алкила, -(C=S)-C_1-6алкила, -C_1-6алкил-(C=S)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-NR₃₃(C=O)-NR₃₁R₃₂, -C_1-6алкил-NR₃₃(C=S)-NR₃₁R₃₂, -(C=S)-C_3-5циклоалкила, -(C=S)-NR₃₁R₃₂, -(C=O)-Het₅, -(C=S)-Het₅, -(C=O)-NR₃₁-(C=O)-R₃₂; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -OH, -OC_1-6алкила, -SC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₅R₂₆;

R₈ выбирают из -NR₃₆-(C=O)-NR₃₄R₃₅, -NR₃₄-(SO₂)-R₃₅, -NR₃₄-(C=O)-O-R₃₅, -O-(C=O)-NR₃₄R₃₅;

R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃, R₁₄, R₁₅, R₁₆, R₁₇, R₁₈, R₁₉, R₂₀, R₂₁, R₂₂, R₂₃, R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₂₇, R₂₈, R₂₉, R₃₀, R₃₁, R₃₂, R₃₃, R₃₄, R₃₅, R₃₆, R₃₇, R₃₈, R₃₉ и R₄₀, каждый, независимо выбирают из -H, -галогена, -O, -OH, -O-C_1-6алкила, -C_1-6алкила, -C_3-6циклоалкила или -Het₁; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -Het₆, -Ar₅;

X₁ выбирают из -C_1-6алкила-, -O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -(C=O)-, -NR₃-(C=O)-, -SO₂-NR₃-; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила, -NR₃₇R₃₈;

B выбирают из -(C=O)-, -(C=N)R₃₉-, -(SO₂)-, -(C=O)-NR₅-, -(C=S)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -NR₅-(C=S)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=S)-O-, -CHR₈-;

Ar₁, Ar₂, Ar₃, Ar₄, Ar₅ и Ar₆, каждый, независимо представляют собой 5- или 6-членный ароматический гетероцикл, необязательно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из O, N и S; каждый из указанных Ar₁, Ar₂,Ar₃, Ar₄ и Ar₅ является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -NR₁₉R₂₀, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -S-C_1-6алкила;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, представляют собой C.

4. Соединение в соответствии с описанием 1, где

R₁ выбирают из -H, -галогена, -(C=O)-R₄;

R₂ выбирают из -H, -C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 -O-C_1-6алкилами;

R₃ выбирают из -H, -C_1-6алкила;

R₄ представляет собой -NR₁₇R₁₈;

R₅ и R₇, каждый, независимо выбирают из -H, -C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 -галогенами;

R₆ выбирают из -SO₂-C_1-6алкила, -(C=O)-O-C_1-6алкила, -(C=O)-C_1-6алкила, -C_1-6алкил-(C=O)-NR₃₁R₃₂, -(C=O)-C_3-5циклоалкила, -(C=O)-NR₃₁R₃₂, -(C=O)-Het₅, -(C=O)-Ar₆; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -OH, -OC_1-6алкила;

R₈ представляет собой -NR₃₄-(C=O)-R₃₅;

R₁₇, R₁₈, R₃₁, R₃₂, R₃₄, R₃₅, каждый, независимо выбирают из -H, -C_1-6алкила, -C_3-6циклоалкила;

X₁ выбирают из -C_1-6алкила-, -NR₃-C_1-6алкила-;

X₂ выбирают из -S-C_1-6алкила-, -NR₂-C_1-6алкила-;

B выбирают из -(C=O)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=O)-O-, -CHR₈-;

Het₅ представляет собой 5- или 6-членный моноциклический гетероцикл, имеющий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из O, N и S, где каждый гетероцикл является необязательно замещенным 1-3 -C_1-6алкилами; каждый из указанных -C_1-6алкилов является необязательно замещенным 1-3 -галогенами;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, независимо выбирают из C и N.

5. Соединение, как определено в описании 1, где

R₁ и R₂ представляют собой -H;

R₅ и R₇, каждый, независимо выбирают из -H и -C_1-6алкила;

R₆ выбирают из -(C=O)-C_3-5циклоалкила, -(C=O)-(CH₂)₂-OH;

X₁ представляет собой -O-C_1-3алкил-; где когда X₁ представляет собой -O-CH₃-, тогда R₅ не представляет собой -H;

X₂ представляет собой -NR₂-C_1-6алкил-;

B выбирают из -(C=O)-NR₅-, -NR₅-(C=O)-NR₇, -SO₂-NR₅, -NR₆-;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, представляют собой C.

6. Соединение, как определено в любом из описаний 1-5, где пиразолопиримидиновый остаток связан с арильным или гетероарильным остатком в положении Z₁ или Z₂, в соответствии с нумерацией, как представлено в Формуле I.

7. Соединение, как определено в любом из описаний 1-6, где R₁ связан с арильным или гетероарильным остатком в положении Z₃, Z₄ или Z₅, в соответствии с нумерацией, как представлено в Формуле I.

8. Соединение, как определено в любом из описаний 1-7, для использования в качестве лекарственного средства для медицины или ветеринарии.

9. Применение соединения, как определено в любом из описаний 1-7, при приготовлении лекарственного средства для предотвращения, лечения и/или диагностики неврологических расстройств, таких как болезнь Паркинсона или болезнь Альцгеймера.

10. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение, как определено в любом из описаний 1-7, пригодная для использования в качестве лекарственного средства в медицине или ветеринарии.

11. Применение соединения, как определено в любом из описаний 1-7, или композиции, как определено в описании 10, пригодных для ингибирования активности киназы; в частности, киназы LRRK2.

12. Применение соединения, как определено в любом из описаний 1-7, или композиции, как определено в пункте 10, для предотвращения, лечения и/или диагностики неврологических расстройств, таких как болезнь Паркинсона или болезнь Альцгеймера.

13. Способ предотвращения и/или лечения неврологических расстройств, таких как болезнь Паркинсона или болезнь Альцгеймера; указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения в соответствии с любым из описаний 1-7 или композиции, как определено в пункте 10.

Способ лечения

Соединения Формулы (I), их стереоизомеры, таутомеры, рацематы, метаболиты, пролекарства или предлекарства, соли, гидраты, N-оксидные формы или их сольваты являются ингибиторами активности киназы LRRK2 и, таким образом, как предполагается, имеют потенциал применения при лечении неврологических расстройств, включая болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, деменцию (включая деменцию, связанную с тельцами Леви, и сосудистую деменцию), возрастную дисфункцию памяти, легкое нарушение когнитивной функции, заболевание с образованием аргирофильных зерен, болезнь Пика, кортикобазальную дегенерацию, прогрессивный супрануклеарный паралич, наследственную лобно-височную деменцию и паркинсонизм, связанный с хромосомой 17 (FTDP-17), симптомы синдрома отмены/рецидива, связанные с лекарственной зависимостью, дискинезию, вызываемую L-Dopa, и раковые заболевания почек, груди, легких, предстательной железы, а также острую миелогенную лейкемию (AML).

В контексте настоящего изобретения, лечение болезни Паркинсона относится к лечению идиопатической болезни Паркинсона и наследственной болезни Паркинсона. В одном из вариантов осуществления наследственная болезнь Паркинсона включает пациентов, экспрессирующих киназу LRRK2, несущую мутацию G2019S или мутацию R1441G. Лечение болезни Паркинсона может быть симптоматическим или может модифицировать заболевание. В одном из вариантов осуществления лечение болезни Паркинсона относится к симптоматическому лечению. Соединения по настоящему изобретению могут также быть полезными при лечении пациентов, идентифицируемых как склонные к развитию паркинсонизма посредством одной из нескольких малозаметных признаков, связанных с развитием заболевания, таких как история семьи, дефицит обоняния, констипация, нарушение познавательной способности, походка, или биологических показаний развития заболевания, полученных от молекулярных, биохимических, иммунологических или связанных с получением изображений технологий. В этом контексте лечение может быть симптоматическим или модифицировать заболевание.

В контексте настоящего изобретения лечение болезни Альцгеймера относится к лечению идиопатической болезни Альцгеймера и наследственной болезни Альцгеймера. Лечение болезни Альцгеймера может быть симптоматическим или может модифицировать заболевание. В одном из вариантов осуществления лечение болезни Альцгеймера относится к симптоматическому лечению.

Подобным же образом, лечение деменции (включая деменцию, связанную с тельцами Леви, и сосудистую деменцию), возрастной дисфункции памяти, легкого нарушения когнитивной функции, заболевания с образованием аргирофильных зерен, болезни Пика, кортикобазальной дегенерации, прогрессивного супрануклеарного паралича, наследственной лобно-височной деменции и паркинсонизма, связанного с хромосомой 17 (FTDP-7), и раковых заболеваний почек, груди, легких, предстательной железы, а также острой миелогенной лейкемии (AML) может быть симптоматическим или модифицировать заболевание. В одном из вариантов осуществления лечение деменции (включая деменцию, связанную с тельцами Леви, и сосудистую деменцию), возрастной дисфункции памяти, легкого нарушения когнитивной функции, заболевания с образованием аргирофильных зерен, болезни Пика, кортикобазальной дегенерации, прогрессивного супрануклеарного паралича, наследственной лобно-височной деменции и паркинсонизма, связанного с хромосомой 17 (FTDP-17), и раковых заболеваний почек, груди, легких, предстательной железы, а также острой миелогенной лейкемии (AML) относится к симптоматическому лечению.

В контексте настоящего изобретения лечение симптомов синдрома отмены/рецидива, связанных с лекарственной зависимостью, и дискинезии, вызываемой L-Dopa, относится к симптоматическому лечению.

Соответственно, настоящее изобретение дополнительно предлагает способ предотвращения и/или лечения неврологических расстройств, таких как, не ограничиваясь этим, болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера, указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения или композиции, как определено в настоящем документе. Способы по настоящему изобретению могут использоваться при разнообразных наборах параметров, в том числе, например, при выборе оптимального курса лечения для пациента, при предсказании успеха при лечении индивидуального пациента с конкретным режимом лечения, при оценке хода заболевания, при мониторинге эффективности лечения, при определении прогноза для индивидуальных пациентов и при оценке предрасположенности индивидуума к получению пользы от конкретной терапии.

В настоящем изобретении особенное предпочтение отдается соединениям Формулы I или любой их подгруппе, которые при анализе ингибирования по отношению к LRRK2, описанном ниже, ингибируют активность киназы при значении IC₅₀ меньше чем 10 мкМ, предпочтительно меньше чем 1 мкМ, наиболее предпочтительно меньше чем 100 нМ.

Указанное ингибирование может осуществляться in vitro и/или in vivo, и когда оно осуществляется in vivo, оно предпочтительно осуществляется селективным образом, как определено выше.

Термин "состояние, опосредованное киназой LRRK2" или "заболевание", как используется в настоящем документе, означает любое заболевание или другое болезненное состояние, при котором, как известно, играет роль киназа LRKK2. Термин "состояние, опосредованное киназой LRRK2" или "заболевание" также обозначает те заболевания или состояния, которые облегчаются посредством лечения с помощью ингибирования киназы LRRK2. Соответственно, другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к лечению или уменьшению тяжести одного или нескольких заболеваний, при которых, как известно, играет роль киназа LRRK2.

Для фармацевтического использования соединения по настоящему изобретению могут использоваться как свободная кислота или основание и/или в форме фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли и/или основно-аддитивной соли (например, получаемой с помощью нетоксичной органической или неорганической кислоты или основания), в форме гидрата, сольвата и/или комплекса и/или в форме или пролекарства или предлекарства, такого как сложный эфир. Как используется в настоящем документе, и если не утверждается иного, термин “сольват” включает любое сочетание, которое может образоваться соединением по настоящему изобретению с соответствующим неорганическим растворителем (например, гидраты) или органическим растворителем, таким как, не ограничиваясь этим, спирты, кетоны, сложные эфиры и тому подобное. Такие соли, гидраты, сольваты и тому подобное и их получение будут очевидны для специалиста в данной области; можно сослаться, например, на соли, гидраты, сольваты и тому подобное, описанные в патентах США №№ US-A-6372778, US-A-6369086, US-A-6369087 и US-A-6372733.

Фармацевтически приемлемые соли соединений в соответствии с настоящим изобретением, то есть в форме водо-, маслорастворимых или диспергируемых продуктов, включают обычные нетоксичные соли или соли четвертичного аммония, которые образуются, например, из неорганических или органических кислот или оснований. Примеры таких кислотно-аддитивных солей включают ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталин-сульфонат, никотинат, оксалат, пальмоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоцианат, тозилат и ундеканоат. Соли оснований включают соли аммония, соли щелочных металлов, такие как соли натрия и калия, соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция и магния, соли с органическими основаниями, такие как соли дициклогексиламина, N-метил-D-глюкамина, и соли с аминокислотами, такими как аргинин, лизин, и тому подобное. В дополнение к этому, основные азотсодержащие группы могут кватернизоваться с помощью таких агентов, как низшие алкилгалогениды, такие как метил-, этил-, пропил- и бутилхлорид, бромиды и йодиды; диалкилсульфаты, такие как диметил-, диэтил-, дибутил- и диамилсульфаты, длинноцепочечные галогениды, такие как децил-, лаурил-, миристил- и стеарилхлориды, бромиды и йодиды, аралкилгалогениды, подобные бензил- и фенэтилбромидам, и другие. Другие фармацевтически приемлемые соли включают этанолятсульфатные соли и сульфатные соли.

Как правило, для фармацевтического применения, соединения по настоящему изобретению могут приготавливаться в виде лекарственного средства или фармацевтической композиции, содержащей, по меньшей мере, одно соединение по настоящему изобретению и, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент и/или вспомогательное вещество и, необязательно, одно или несколько дополнительных фармацевтически активных соединений.

В качестве неограничивающих примеров, такой состав может находиться в форме, пригодной для перорального введения, для парентерального введения (такого как внутривенная, внутримышечная или подкожная инъекция или внутривенное вливание), для введения посредством ингаляции, посредством накожного пластыря, посредством импланта, посредством суппозитория и тому подобного. Такие пригодные для использования формы введения, которые могут быть твердыми, полутвердыми или жидкими, в зависимости от способа введения, а также способы и носители, разбавители и эксципиенты для использования их в препарате, будут очевидны специалистам в данной области; опять сошлемся, например, на патенты США №№ US-A-6372778, US-A-6369086, US-A-6369087 и US-A-6372733, а также на стандартные справочники, такие как самое последнее издание Remington's Pharmaceutical Sciences.

Некоторые предпочтительные, но неограничивающие примеры таких препаратов включают таблетки, пилюли, порошки, пастилки, саше, капсулы для приема лекарств, эликсиры, суспензии, эмульсии, растворы, сиропы, аэрозоли, мази, кремы, лосьоны, мягкие и твердые желатиновые капсулы, суппозитории, капли для глаз, стерильные растворы для инъекций и стерильно упакованные порошки (которые обычно разбавляют перед использованием) для введения в виде болюса и/или для непрерывного введения, которые могут приготавливаться вместе с носителями, эксципиентами и разбавителями, которые сами по себе являются пригодными для таких препаратов, такими как лактоза, декстроза, сахароза, сорбит, маннит, крахмалы, смола акации, фосфат кальция, альгинаты, смола трагаканта, желатин, силикат кальция, микрокристаллическая целлюлоза, поливинилпирролидон, полиэтиленгликоль, целлюлоза, (стерильная) вода, метилцеллюлоза, метил- и пропилгидроксибензоаты, тальк, стеарат магния, съедобные масла, растительные масла и минеральные масла или пригодные для использования их смеси. Составы могут необязательно содержать другие фармацевтически активные вещества (которые могут приводить или не приводить к синергическому воздействию с соединениями по настоящему изобретению) и другие вещества, которые обычно используют в фармацевтических средствах, такие как смазывающие агенты, смачивающие агенты, эмульгирующие и суспендирующие агенты, диспергирующие агенты, разрыхлители, агенты для придания объема, наполнители, консервирующие агенты, подслащивающие агенты, ароматизирующие агенты, регуляторы потока, агенты для высвобождения, и тому подобное. Композиции могут также быть приготовлены с тем, чтобы обеспечить быстрое, распределенное по времени или замедленное высвобождение активного соединения (соединений), содержащегося в них, например, с использованием липосом или гидрофильных полимерных матриц на основе природных гелей или синтетических полимеров. Для улучшения растворимости и/или стабильности соединений фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением, может быть преимущественным использование α-, β- или γ-циклодекстринов или их производных. Интересный способ приготовления соединения в сочетании с циклодекстрином или его производным описан в EP-A-721331. В частности, настоящее изобретение охватывает фармацевтическую композицию, содержащую эффективное количество соединения в соответствии с настоящим изобретением вместе с фармацевтически приемлемым циклодекстрином.

В дополнение к этому, сорастворители, такие как спирты, могут улучшить растворимость и/или стабильность соединений. При приготовлении водных композиций, добавление солей соединений по настоящему изобретению может быть более пригодным для использования благодаря их повышенной водорастворимости.

Для местного введения соединения могут преимущественно использоваться в форме спрея, мази или трансдермального пластыря или другой пригодной формы для местного, трансдермального и/или интрадермального введения.

Более конкретно, композиции могут быть приготовлены в виде лекарственного средства, содержащего терапевтически эффективное количество частиц, состоящих из твердой дисперсии соединений по настоящему изобретению и одного или нескольких фармацевтически приемлемых водорастворимых полимеров.

Термин "твердая дисперсия" определяет систему в твердом состоянии (в противоположность жидкому или газообразному состоянию), содержащую, по меньшей мере, два компонента, где один компонент диспергирован более или менее однородно в другом компоненте или компонентах. Когда указанная дисперсия компонентов является такой, что система является химически и физически однородной или гомогенной или состоит из одной фазы, как определено в термодинамике, такая твердая дисперсия упоминается как "твердый раствор". Твердые растворы являются предпочтительными физическими системами, благодаря тому, что компоненты обычно являются легко биологически доступными для организмов, которым они вводятся.

Кроме того, может быть удобным приготавливать соединения в форме наночастиц, которые имеют модификатор поверхности, адсорбированный на их поверхности в количестве, достаточном для поддержания эффективного среднего размера частиц менее чем 1000 нм. Пригодные для использования модификаторы поверхности могут предпочтительно выбираться из известных органических и неорганических фармацевтических эксципиентов. Такие эксципиенты включают различные полимеры, низкомолекулярные олигомеры, природные продукты и поверхностно-активные вещества. Предпочтительные модификаторы поверхности включают неионные и анионные поверхностно-активные вещества.

Еще один интересный способ приготовления соединения в соответствии с настоящим изобретением включает фармацевтическую композицию, где соединения вводят в гидрофильные полимеры, и применение этой смеси в виде пленки покрытия на очень маленьких шариках, с получением, таким образом, композиции с хорошей биологической доступностью, которую можно удобно получать и которая является пригодной для использования при приготовлении фармацевтических дозированных форм для перорального введения. Материалы, пригодные для использования в качестве сердцевин в шариках, являются разнообразными, при условии, что указанные материалы являются фармацевтически приемлемыми и имеют соответствующие размеры и твердость. Примеры таких материалов представляют собой полимеры, неорганические вещества, органические вещества и сахариды, и их производные.

Препараты могут быть получены способом, известным самим по себе, который обычно включает смешивание, по меньшей мере, одного соединения в соответствии с настоящим изобретением с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями и, по желанию, в сочетании с другими фармацевтически активными соединениями, по необходимости, при асептических условиях. Опять сошлемся на патенты США №№ US-A-6372778, US-A-6369086, US-A-6369087 и US-A-6372733 и на другие литературные источники, рассмотренные выше, а также на стандартные справочники, такие как самое последнее издание Remington's Pharmaceutical Sciences.

Фармацевтические препараты по настоящему изобретению предпочтительно находятся в виде единичной стандартной дозированной формы и могут соответствующим образом упаковываться, например, в коробке, блистере, флаконе, бутылке, саше, ампуле или в любом другом пригодном для использования однодозовом или многодозовом держателе или контейнере (который может метиться соответствующим образом); необязательно, вместе с одной или несколькими аннотациями, содержащими информацию о продукте и/или инструкцию для использования. Как правило, такие единичные стандартные дозировки будут содержать в пределах между 1 и 1000 мг, а обычно между 5 и 500 мг, по меньшей мере, одного соединения по настоящему изобретению, например, примерно 10, 25, 50, 100, 200, 300 или 400 мг на единичную дозировку.

Соединения могут вводиться с помощью различных способов применения, включая пероральный, ректальный, глазной, трансдермальный, подкожный, внутривенный, внутримышечный или интраназальный способы, в зависимости, в основном, от конкретного используемого препарата и от состояния, которое должно лечиться или предотвращаться, и при этом пероральное и внутривенное введение обычно является предпочтительным. По меньшей мере, одно соединение по настоящему изобретению будет, как правило, вводиться в “эффективном количестве”, под которым подразумевается любое количество соединения Формулы или любой их подгруппы, при соответствующем введении, которое является достаточным для достижения желаемого терапевтического или профилактического воздействия на индивидуума, которому оно вводится. Обычно, в зависимости от состояния, которое должно предотвращаться или лечиться, и от способа введения, такое эффективное количество будет находиться в пределах между 0,01 и 1000 мг на килограмм массы тела пациента в день, чаще, в пределах между 0,1 и 500 мг, например, между 1 и 250 мг, например, составлять примерно 5, 10, 20, 50, 100, 150, 200 или 250 мг на килограмм массы тела пациента в день, которое может вводиться в одной ежедневной дозе, разделяться на одну или несколько ежедневных доз или вводиться по существу непрерывно, например, с использованием капельного вливания. Количество (количества), которое должно вводиться, способ введения и режим дополнительного лечения могут определяться лечащим врачом в зависимости от таких факторов, как возраст, пол и общее состояние пациента, и от природы и тяжести заболевания/симптомов, которые должны лечиться. Опять сошлемся на патенты США №№ US-A-6372778, US-A-6369086, US-A-6369087 и US-A-6372733 и на другие литературные источники, рассмотренные выше, а также на стандартные справочники, такие как самое последнее издание Remington's Pharmaceutical Sciences.

В соответствии со способом по настоящему изобретению, указанная фармацевтическая композиция может вводиться раздельно в различные моменты времена в течение курса терапии или одновременно в раздельных дозах или в одной объединенной форме. Настоящее изобретение, следовательно, должно пониматься как охватывающее все такие режимы одновременного или поочередного лечения, и термин "введение" должен интерпретироваться соответствующим образом.

Для получения формы для перорального введения, композиции по настоящему изобретению могут смешиваться с пригодными для использования добавками, такими как эксципиенты, стабилизаторы или инертные разбавители, и приводиться посредством соответствующих способов в соответствующие формы для введения, такие как таблетки, таблетки с покрытием, твердые капсулы, водные, спиртовые или масляные растворы. Примеры пригодных для использования инертных носителей представляют собой аравийскую камедь, оксид магния, карбонат магния, фосфат калия, лактозу, глюкозу или крахмал, в частности, кукурузный крахмал. В этом случае приготовление может осуществляться в виде как сухих, так и влажных гранул. Пригодные для использования масляные эксципиенты или растворители представляют собой растительные или животные масла, такие как подсолнечное масло или рыбий жир. Пригодные для использования растворители для водных или спиртовых растворов представляют собой воду, этанол, сахарные растворы или их смеси. Полиэтиленгликоли и полипропиленгликоли также являются пригодными в качестве дополнительных вспомогательных веществ для других форм введения. В качестве таблеток с непосредственным высвобождением, эти композиции могут содержать микрокристаллическую целлюлозу, дикальций фосфат, крахмал, стеарат магния и лактозу и/или другие эксципиенты, связующие вещества, агенты для увеличения объема, разрыхлители, разбавители и смазывающие вещества, известные в данной области.

Когда они вводятся с помощью назального аэрозоля или ингаляции, эти композиции могут быть получены в соответствии с технологиями, хорошо известными в области лекарственных средств, и могут быть приготовлены в виде растворов в солевом растворе, с использованием бензилового спирта или других пригодных для использования консервантов, ускорителей поглощения для улучшения биологической доступности, фторуглеродов и/или других солюбилизирующих или диспергирующих агентов, известных в данной области. Соответствующие фармацевтические препараты для введения в форме аэрозолей или спреев представляют собой, например, растворы, суспензии или эмульсии соединений по настоящему изобретению или их физиологически переносимых солей в фармацевтически приемлемом растворителе, таком как этанол или вода, или в смеси таких растворителей. По потребности, препарат может также дополнительно содержать другие фармацевтические вспомогательные вещества, такие как поверхностно-активные вещества, эмульгаторы и стабилизаторы, а также пропеллент.

Для подкожного введения соединения в соответствии с настоящим изобретением, по желанию, вместе с веществами, обычно применяемыми для этого, такими как солюбилизаторы, эмульгаторы или другие вспомогательные вещества, приводятся в форму раствора, суспензии или эмульсии. Соединения по настоящему изобретению могут также лиофилизироваться, и полученные лиофилизаты могут использоваться, например, для приготовления препаратов для инъекций или вливаний. Пригодные для использования растворители представляют собой, например, воду, физиологический солевой раствор или спирты, например, этанол, пропанол, глицерол, в дополнение к этому, также сахарные растворы, такие как растворы глюкозы или маннит, или альтернативно, смеси различных рассмотренных растворителей. Растворы или суспензии для инъекций могут быть приготовлены в соответствии с литературными данными, используя пригодные для использования нетоксичные, парентерально приемлемые разбавители или растворители, такие как маннит, 1,3-бутандиол, вода, раствор Рингера или изотонический раствор хлорида натрия, или пригодные для использования диспергирующие или смачивающие и суспендирующие агенты, такие как стерильные, успокаивающие, фиксированные масла, включая синтетические моно- или диглицериды и жирные кислоты, включая олеиновую кислоту.

Когда их вводят ректально в форме суппозиториев, эти препараты могут быть приготовлены посредством смешивания соединений в соответствии с настоящим изобретением с соответствующим нераздражающим эксципиентом, таким как масло какао, сложные эфиры синтетических глицеридов или полиэтиленгликолей, которые являются твердыми при обычных температурах, но разжижаются и/или растворяются в ректальной полости с высвобождением лекарственного средства.

В предпочтительных вариантах осуществления соединения и композиции по настоящему изобретению используют перорально или парентерально.

Теперь настоящее изобретение будет иллюстрироваться с помощью следующих далее примеров синтеза и биологических примеров, которые не ограничивают рамки настоящего изобретения каким-либо образом.

Примеры

A. Синтез и физико-химические свойства соединений

Соединения по настоящему изобретению могут быть получены с помощью любого из нескольких стандартных способов синтеза, обычно используемых специалистами в области органической химии. Соединения, как правило, получают из исходных материалов, которые являются либо коммерчески доступными, либо приготавливаются с помощью стандартных средств, очевидных специалистам в данной области.

Общие схемы:

В целом соединения Формулы (I) могут быть получены, как показано на схеме 1, ниже, где пиразоло[1,5-a]пиримидин или имидазо[2,1-f]пиридазин Формулы (II) преобразуют с помощью реакции с соединением Формулы (III) в соединение Формулы (IV), которое затем взаимодействует с (гетеро-)арилом Формулы (V) с образованием соединения Формулы (VI). Затем с соединения Формулы (VI) может быть необязательно снята защита, если это желательно, перед циклизацией с образованием соединения Формулы (VII). Соединение Формулы (VII) может быть необязательно преобразовано в соединение общей формулы (I).

Схема 1

На приведенной выше схеме:

LG₁ и LG₂, каждый, независимо представляют собой соответствующую уходящую или функциональную группу;

X₃ и X₄, вместе с функциональным остатком, к которому они присоединены, представляют собой незащищенную или защищенную функциональную группу, которую при реакции (после снятия защиты) образуют вместе X₁, как определено в формуле I;

E представляет собой соответствующую функциональную группу, которая может использоваться для образования прямой связи между (гетеро-)арильной группой и скелетной структурой;

D представляет собой функциональную группу, такую как B, или защищенную функциональную группу, которая при дальнейшей реакции и/или снятии защиты образует функциональную группу, такую как B, как определено в формуле I;

В приведенной выше реакции соединения Формулы (II) с соединением Формулы (III) уходящие группы LG₁ и LG₂ преимущественно представляют собой группу галогена, такую как группа хлора или брома. Реакцию можно осуществлять посредством замещения, например, посредством обработки соединения Формулы (II) соединением Формулы (III) в органическом растворителе, таком как ацетонитрил, с помощью пригодного для использования основания, такого, например, как диизопропилэтиламин, при повышенной температуре, например, при нагревании с обратным холодильником.

Соединения Формулы (III) могут быть получены при помощи разнообразных стадий селективной защиты и снятия защиты. Реакции защиты могут осуществляться с использованием, например, изоиндол-1,3-диона, в растворителе, таком как толуол, при повышенной температуре, например, при нагревании с обратным холодильником, или они могут осуществляться с использованием, например, трет-бутоксикарбонильного ангидрида в присутствии основания, например, триэтиламина, в растворителе, таком как тетрагидрофуран, при комнатной температуре, или они могут осуществляться с использованием, например, трет-бутилдиметилсилилхлорида и триэтиламина в растворителе, таком как N,N-диметилформамид, при комнатной температуре. Реакция снятия защиты может осуществляться обычным способом с использованием, например, гидразина, в растворителе, таком как этанол, при повышенной температуре, например, при нагревании с обратным холодильником.

Соединение Формулы (IV) может необязательно быть защищено с помощью соответствующей защитной группы, такой как трет-бутилоксикарбониламино группа, обычным способом, например, посредством обработки с помощью трет-бутоксикарбонильного ангидрида при основных условиях, с использованием, например, триэтиламина и 4-(диметиламино)пиридина, в растворителе, таком как тетрагидрофуран, при повышенной температуре, например, при нагревании с обратным холодильником.

Реакция полученного в результате соединения (IV) с (гетеро-)арильным соединением Формулы (V) преимущественно осуществляется посредством связывания бороновой кислоты E или производного сложного эфира бороновой кислоты E и (гетеро-)арильного соединения при условиях Сузуки с использованием, например, тетракис(трифенилфосфин)палладия(0), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенила (Xphos) и трехосновного фосфата калия, в смеси растворителей, такой как 1,4-диоксан/вода, при повышенной температуре, например, при 80°C.

Полученное в результате соединение Формулы (VI) может необязательно обрабатываться для удаления любых желаемых защитных групп, например, групп простого силилового эфира, таких как трет-бутилдиметилсилильные группы, они могут преобразовываться в исходную свободную гидрокси группу. Такое снятие защиты может осуществляться обычным образом, например, с использованием тетрабутиламмония фторида в 1,4-диоксане при комнатной температуре.

Циклизация соединения Формулы (VI) может осуществляться, например, при условиях Мицунобу, с использованием, например, диизопропилазодикарбоксилата и трифенилфосфина, в смеси растворителей, таких как 2-метил-1,4-диоксан и толуол, при повышенной температуре, например, при 90°C.

Полученное в результате соединение Формулы (VII) может необязательно обрабатываться для удаления любых желаемых защитных групп, например, трет-бутилоксикарбониламино группы могут преобразовываться в исходную свободную амино группу. Такое снятие защиты может осуществляться обычным образом, например, посредством обработки при кислотных условиях, например, с использованием 4 н раствора хлористоводородной кислоты в метаноле при комнатной температуре.

Соединение со снятой защитой может необязательно обрабатываться с образованием амидного соединения Формулы (I). Реакцию можно преимущественно осуществлять посредством обработки с помощью ацилхлорида и основания, такого как триэтиламин, в растворителе, таком как тетрагидрофуран, при комнатной температуре. На реакцию также можно влиять с использованием, например, O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) и диизопропилэтиламина, в растворителе, таком как N,N-диметилформамид, например, при комнатной температуре.

Соединения 1, 4, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 20, 25 и 29 могут быть получены в соответствии с синтезом, описанным на схеме 1.

Соединения Формулы (I) могут также быть получены, как показано на общей схеме 2, ниже, где пиразоло[1,5-a]пиримидин или имидазо[2,1-f]пиридазин Формулы (II) преобразуется посредством реакции с соединением Формулы (VIII) в соединение Формулы (IX), которое затем взаимодействует с (гетеро-)арилом Формулы (V) с образованием соединения Формулы (X). Соединение Формулы (X) может взаимодействовать с соединением Формулы (XI) с получением соединения Формулы (XII). Затем с соединения Формулы (XII) может быть снята защита, если это желательно, перед циклизацией с образованием соединения Формулы (VII). Соединение Формулы (VII) может быть необязательно преобразовано в соединение общей формулы (I).

На приведенной ниже схеме 2:

LG₁ и LG₂, каждый, независимо представляют собой соответствующую уходящую или функциональную группу;

X₄ и X₅ вместе с функциональным остатком, к которому они присоединены, представляют собой незащищенную или защищенную функциональную группу, которую при реакции (после снятия защиты) образуют вместе X₁, как определено в формуле I;

G и J представляют собой функциональные группы или защищенные функциональные группы, которые при дальнейшей реакции и/или после снятия защиты образуют функциональную группу, такую как D;

D представляет собой функциональную группу, такую как B, или защищенную функциональную группу, которая при дальнейшей реакции и/или после снятия защиты образует функциональную группу, такую как B, как определено в формуле I.

Схема 2

В приведенной выше реакции соединения Формулы (II) с соединением Формулы (VIII) уходящие группы LG₁и LG₂ преимущественно представляют собой группу галогена, такую как группа хлора или брома. Реакцию можно осуществлять посредством замещения, например, посредством обработки соединения Формулы (II) соединением Формулы (VIII) в органическом растворителе, таком как ацетонитрил, с помощью пригодного для использования основания, такого, например, как диизопропилэтиламин, при повышенной температуре, например, при нагревании с обратным холодильником.

Соединения Формулы (VIII) и (XI) могут быть либо приобретены коммерчески, либо получены с помощью разнообразных стадий селективной защиты и снятия защиты.

Полученное соединение Формулы (IX) может необязательно быть защищено соответствующей защитной группой, такой как трет-бутилоксикарбониламино группа, обычным способом, например, посредством обработки с помощью трет-бутоксикарбонильного ангидрида при основных условиях с использованием, например, триэтиламина и 4-(диметиламино)пиридина, в растворителе, таком как тетрагидрофуран, при повышенной температуре, например, при нагревании с обратным холодильником.

Реакция полученного в результате соединения (IX) с (гетеро-)арильным соединением Формулы (V) преимущественно осуществляется посредством связывания бороновой кислоты E или производного сложного эфира бороновой кислоты E и (гетеро-)арильного соединения при условиях Сузуки с использованием, например, тетракис(трифенилфосфин)палладия(0), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенила (Xphos) и трехосновного фосфата калия в смеси растворителей, такой как 1,4-диоксан/вода, при повышенной температуре, например, при 80°C.

Реакция полученного в результате соединения Формулы (X) с соединением Формулы (XI) может преимущественно осуществляться при условиях Уильямсона с использованием основания, такого как карбонат калия, в растворителе, таком как ацетонитрил, при повышенной температуре, например, при нагревании с обратным холодильником. Эта реакция может также осуществляться при условиях Мицунобу с использованием, например, диизопропилазодикарбоксилата и трифенилфосфина, в растворителе, таком как тетрагидрофуран, при повышенной температуре, например, при 90°C.

Полученное в результате соединение Формулы (XII) может необязательно обрабатываться для удаления любых желаемых защитных групп, например, трет-бутилоксикарбониламино группы могут преобразовываться в исходную свободную амино группу и, например, сложноэфирные группы могут преобразовываться в исходные группы свободной карбоновой кислоты. Такое снятие защиты может осуществляться обычным способом, например, посредством обработки при кислотных условиях, например, с использованием водного 6 н раствора хлористоводородной кислоты в растворителе, таком как ацетонитрил, при повышенной температуре, например, при 60°C, или с использованием кислоты, такой как трифторуксусная кислота, в растворителе, таком как дихлорметан, например, при комнатной температуре.

Циклизация соединения Формулы (XII) может осуществляться, например, посредством обработки O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфатом (HBTU) и N,N-диизопропилэтиламином в растворителе, таком как N,N-диметилформамид, например, при комнатной температуре.

Полученное соединение Формулы (VII) может необязательно обрабатываться с образованием соединения Формулы (I).

Соединения 2, 3, 9, 18 и 27 могут быть получены в соответствии с синтезом, описанным на схеме 2.

Соединения Формулы (I) могут также быть получены, как показано на общей схеме 3, ниже, где пиразоло[1,5-a]пиримидин или имидазо[2,1-f]пиридазин Формулы (II) преобразуется посредством реакции с соединением Формулы (VIII) в соединение Формулы (IX). Соединение Формулы (IX) может быть необязательно преобразовано в соединение Формулы (XIII), которое затем взаимодействует с (гетеро-)арилом Формулы (XIV) с образованием соединения Формулы (XV). Затем с соединения Формулы (XV) может быть необязательно снята защита, если это желательно, перед циклизацией с образованием соединения Формулы (VII). Соединение Формулы (VII) может быть необязательно преобразовано в соединение общей формулы (I).

Схема 3

На приведенной выше схеме:

LG₁ и LG₂, каждый, независимо представляют собой соответствующую уходящую или функциональную группу;

G представляет собой соответствующую функциональную группу или защищенную функциональную группу, которая при дальнейшей реакции и/или после снятия защиты образует функциональную группу, такую как K;

K и L представляют собой функциональные группы или защищенные функциональные группы, которые при дальнейшей реакции и/или после снятия защиты образуют функциональную группу, такую как D;

Соединения Формулы (VIII) могут быть либо коммерчески приобретены, либо получены с помощью разнообразных стадий селективной защиты и снятия защиты.

С соединения Формулы (IX) может быть снята защита с использованием, например, кислотных условий, таких как 4 н раствор хлористоводородной кислоты в метаноле, при комнатной температуре.

Полученное в результате соединение со снятой защитой может взаимодействовать, например, с 2-нитробензолсульфонилхлоридом и триэтиламином, в растворителе, таком как дихлорметан, при температуре от 0°C до комнатной температуры.

Полученное в результате соединение может необязательно быть защищено соответствующей защитной группой, такой как трет-бутилоксикарбониламино группа, обычным способом, например, посредством обработки с помощью трет-бутоксикарбонильного ангидрида при основных условиях с использованием, например, триэтиламина и 4-(диметиламино)пиридина, в растворителе, таком как тетрагидрофуран, при повышенной температуре, например, при нагревании с обратным холодильником.

Соединение Формулы (IX) может необязательно алкилироваться с использованием, например, йодметана и карбоната цезия, в растворителе, таком как N,N-диметилформамид, при некоторой температуре, например, при комнатной температуре.

Нитробензолсульфонил может необязательно удаляться с помощью обработки, например, тиофенолом и карбонатом цезия, в растворителе, таком как N,N-диметилформамид, например, при комнатной температуре.

Сложный эфир бороновой кислоты Формулы (XIV) может быть получен, например, с помощью реакции Уильямсона с использованием, например, карбоната калия в растворителе, таком как ацетонитрил, например, при комнатной температуре, с последующим борированием, например, посредством обработки бис(пинаколято)дибором, [1,1-бис(дифенилфосфино)ферроцен]-дихлорпалладием(II) и ацетатом калия, в растворителе, таком как 1,4-диоксан, например, при повышенной температуре, например, при 80°C. Несколько промежуточных стадий может потребоваться для получения желаемых сложных эфиров бороновых кислот.

Реакция соединения формулы (XIII) с (гетеро-)арильным соединением Формулы (XIV) преимущественно осуществляется при условиях Сузуки с использованием, например, тетракис(трифенилфосфин)палладия(0), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенила (Xphos) и трехосновного фосфата калия, в смеси растворителей, такой как 1,4-диоксан/вода, при повышенной температуре, например, при 80°C.

Полученное в результате соединение Формулы (XV) может необязательно обрабатываться для удаления любых желаемых защитных групп, например, трет-бутилоксикарбониламино группы могут преобразовываться в исходную свободную амино группу, и, например, сложноэфирные группы могут преобразовываться в исходные группы свободной карбоновой кислоты. Такое снятие защиты может осуществляться обычным способом, например, посредством обработки при кислотных условиях, например, с использованием водного 6 н раствора хлористоводородной кислоты в растворителе, таком как ацетонитрил, при повышенной температуре, например, 60°C.

Циклизация соединения Формулы (XV) может осуществляться, например, посредством обработки O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфатом (HBTU) и N,N-диизопропилэтиламином, в растворителе, таком как N,N-диметилформамид, например, при комнатной температуре.

Полученное соединение Формулы (VII) может необязательно обрабатываться с образованием соединения Формулы (I).

Соединения 5 и 7 могут быть получены в соответствии с синтезом, описанным на схеме 3.

Соединения Формулы (I) могут также быть получены, как показано на общей схеме 4, ниже, где пиразоло[1,5-a]пиримидин или имидазо[2,1-f]пиридазин Формулы (II) преобразуется посредством реакции с соединением Формулы (VIII) в соединение Формулы (IX), которое затем взаимодействует с (гетеро-)арилом Формулы (V) с образованием соединения Формулы (X). Соединение Формулы (X) может взаимодействовать с соединением Формулы (XI) с получением соединения Формулы (XVI). С соединения Формулы (XVI) может затем быть снята защита, если это желательно, перед циклизацией с образованием соединения Формулы (VII). Соединение Формулы (VII) может быть необязательно преобразовано в соединение общей формулы (I).

Схема 4

На приведенной выше схеме:

LG₁ и LG₂, каждый, независимо представляют собой соответствующую уходящую или функциональную группу;

Соединения Формулы (VIII) и (XI) могут быть либо коммерчески приобретены, либо получены с помощью разнообразных стадий селективной защиты и снятия защиты.

Реакция полученного в результате соединения (IX) с (гетеро-)арильным соединением Формулы (V) преимущественно осуществляется посредством связывания бороновой кислоты E или производного сложного эфира бороновой кислоты E и (гетеро-)арильного соединения при условиях Сузуки с использованием, например, тетракис(трифенилфосфин)палладия(0), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенила (Xphos) и трехосновного фосфата калия, в смеси растворителей, такой как 1,4-диоксан/вода, при повышенной температуре, например, при 80°C.

Полученное соединение Формулы (X) может необязательно быть защищено соответствующей защитной группой, такой как бензильная группа, обычным способом, например, посредством обработки бензилбромидом в растворителе, таком как ацетонитрил, при повышенной температуре, например, при 80°C.

С соединений Формулы (IX) может быть снята защита с использованием, например, кислотных условий, таких как 4 н раствор хлористоводородной кислоты в метаноле при комнатной температуре.

Реакция полученного в результате соединения Формулы (X) с соединением Формулы (XI), которая может преимущественно осуществляться с использованием реагента, такого как 1,1'-карбонилдиимидазол, в растворителе, таком как тетрагидрофуран, при некоторой температуре, например, при комнатной температуре.

Реакция полученного в результате соединения Формулы (X) с соединением Формулы (XI), которая может также преимущественно осуществляться с использованием реагента, такого как сульфонилхлорид, и основания, такого как триэтиламин, в растворителе, таком как дихлорметан, при некоторой температуре, например, при комнатной температуре.

Полученное соединение Формулы (XVI) может необязательно быть защищено соответствующей защитной группой, такой как трет-бутилоксикарбониламино группа, обычным способом, например, посредством обработки с помощью трет-бутоксикарбонильного ангидрида при основных условиях с использованием, например, триэтиламина и 4-(диметиламино)пиридина, в растворителе, таком как тетрагидрофуран, при повышенной температуре, например, при нагревании с обратным холодильником.

Полученное соединение Формулы (XVI) может необязательно обрабатываться для удаления любой желаемой защитной группы, такой как бензильные группы, которые могут удаляться с использованием 1 н раствора трибромида бора в растворителе, таком как дихлорметан, например, при комнатной температуре, или с использованием палладия на активированном угле в атмосфере водорода, в смеси растворителей, такой как тетрагидрофуран/метанол, например, при комнатной температуре.

Циклизация соединения Формулы (ХVI) может осуществляться, например, посредством обработки карбонатом цезия, йодидом калия и тетрабутиламмония йодидом, например, при повышенной температуре, например, при 50°C или 90°C, в растворителе, таком как N,N-диметилацетамид или тетрагидрофуран.

Полученное соединение Формулы (VII) может необязательно обрабатываться с образованием соединения Формулы (I).

Соединения 6, 8, 17, 19, 21, 22, 23, 24, 26 и 28 могут быть получены в соответствии с синтезом, описанным на схеме 4.

Указанные выше общие способы иллюстрируются с помощью следующих далее конкретных способов, которые описывают получение соединений Формулы (I).

Экспериментальная часть

При получении соединений, описанных в примерах, следуют следующим далее экспериментальным протоколам, если не указано иного.

Если не указано иного, реакционные смеси перемешивают с помощью магнитной мешалки при комнатной температуре. Когда растворы “сушат”, их, как правило, сушат над сушильным агентом, таким как сульфат натрия или сульфат магния. Когда смеси, растворы и экстракты “концентрируют”, их, как правило, концентрируют на роторном испарителе при пониженном давлении.

Для нескольких соединений, которые очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с обращенной фазой, используемый способ описан ниже (указан в процедуре для соединения как метод ВЭЖХ A). При необходимости, эти методы могут слегка регулироваться специалистом в данной области для получения более оптимального результата для разделения.

Метод ВЭЖХ A

Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой, с использованием полупрепаративной системы ВЭЖХ Gilson, работающей с помощью программного обеспечения Gilson UNIPOINT.

Очистку осуществляют на колонке Phenomenex Luna (длиной 100 мм ×21,2 мм внутренний диаметр; 5-мкм частиц) при комнатной температуре, при постоянной скорости потока 20,0 мл/мин. Градиентное элюирование осуществляют в пределах от 32% (25 мМ водный раствор NH₄HCO₃)/68% (ацетонитрил-метанол 1:1) до 4% (25 мМ водный раствор NH₄HCO₃)/96% (ацетонитрил-метанол 1:1) за 20 минут. УФ детектор устанавливают на 226 нм, что соответствует длине волны максимального поглощения, наблюдаемого для соединения.

Получение соединений:

Пример 1

Пример 1 получают, следуя общей схеме 1.

Получение промежуточного соединения 1

Смесь 2-(2-аминоэтиламино)этанола (14,56 г, 139,80 ммоль) и изоиндолин-1,3-диона (20,16 г, 137,00 ммоль) в толуоле (420 мл) нагревают с обратным холодильником в течение 3 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=235, RT=0,181 мин

Получение промежуточного соединения 2

Трет-бутилдиметилсилилхлорид (31,0 г, 205,5 ммоль) добавляют к суспензии промежуточного соединения 1 (32,0 г, 137,0 ммоль) и триэтиламина (38,0 мл, 274,0 ммоль) в N,N-диметилформамиде (411 мл). Смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом и промывают водой и насыщенным солевым раствором (3x). Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 16,6 г промежуточного соединения 2 (35%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=349, RT=0,728 мин

Получение промежуточного соединения 3

трет-Бутоксикарбонильный ангидрид (4,3 г, 19,6 ммоль) добавляют к смеси промежуточного соединения 2 (6,5 г, 18,6 ммоль) и триэтиламина (3,1 мл, 22,4 ммоль) в тетрагидрофуране (56 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 часа, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате и промывают водой и насыщенным солевым раствором (3x). Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Промежуточное соединение 3 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Выход: 6,0 г промежуточного соединения 3 (72%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=349 (MW-Boc), RT=2,185 мин

Получение промежуточного соединения 4

Смесь промежуточного соединения 3 (6,0 г, 13,4 ммоль) и гидразина (1,2 мл, 40,1 ммоль) перемешивают в течение ночи при 60°C. Реакционную смесь охлаждают, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате и промывают 1 н раствором гидроксида натрия и водой. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Промежуточное соединение 4 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Выход: 3,8 г промежуточного соединения 4 (89%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=319, RT=0,948 мин

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаен получают в соответствии со сходными процедурами синтеза, как описано для получения промежуточного соединения 7, с использованием промежуточного соединения 4 для связывания со скелетной структурой и (3-гидроксифенил)бороновой кислоты для связывания Сузуки. Замыкание кольца осуществляют после снятия защиты с помощью TBDMS с использованием условий Мицунобу. Получают незащищенный 7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаен после снятия защиты с помощью Boc при кислотных условиях.

Получение примера 1

Смесь 7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена (0,2 г, 0,6 ммоль) и триэтиламина (208 мкл, 1,5 ммоль) в сухом тетрагидрофуране (5 мл) перемешивают в течение 5 минут, а затем добавляют циклопропанкарбонилхлорид (60 мкл, 0,66 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток перетирают в метаноле с получением желаемого продукта.

Выход: 156 мг примера 1 (72%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=364, RT=1,059 мин

Пример 2

Пример 2 получают, следуя общей схеме 2.

Получение промежуточного соединения 5

Смесь 3-бром-5-хлор-пиразоло[1,5-a]пиримидина (5,0 г, 21,5 ммоль), трет-бутил N-(2-аминоэтил)карбамата (4,22 мл, 26,89 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (4,5 мл, 25,81 ммоль) в ацетонитриле (65 мл) нагревают с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате и промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 4,91 г промежуточного соединения 5 (64%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=356, RT=1,035 мин

Получение промежуточного соединения 6

Смесь промежуточного соединения 5 (4,91 г, 13,79 ммоль), трет-бутоксикарбонильного ангидрида (3,31 г, 15,17 ммоль), триэтиламина (2,9 мл, 20,68 ммоль) и 4-(диметиламино)пиридина (0,084 г, 0,69 ммоль) в тетрагидрофуране (41 мл) нагревают с обратным холодильником в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате и промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 4,37 г промежуточного соединения 6 (69%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=456, RT=1,602 мин

Получение промежуточного соединения 7

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 26 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют промежуточное соединение 6 (4,0 г, 8,77 ммоль), (3-гидроксифенил)бороновую кислоту (1,57 г, 11,40 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (104 мг, 0,09 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (167 мг, 0,35 ммоль) и трехосновный фосфат калия (9,31 г, 5 экв.) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 80°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждают, разбавляют этилацетатом, и органический слой промывают насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 3,98 г промежуточного соединения 7 (97%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=470, RT=1,060 мин

Получение промежуточного соединения 8

Этил 4-бромбутаноат (0,8 мл, 5,6 ммоль) добавляют к суспензии промежуточного соединения 7 (1,75 г, 3,7 ммоль) и карбоната калия (1,0 г, 7,5 ммоль) в ацетонитриле (11 мл). Смесь нагревают с обратным холодильником в течение ночи, охлаждают и добавляют этилацетат. Органический слой промывают насыщенным солевым раствором, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 2,1 г промежуточного соединения 8 (97%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=584, RT=1,986 мин

Получение промежуточного соединения 9

Промежуточное соединение 8 (2,0 г, 3,4 ммоль) растворяют в ацетонитриле (42 мл), и добавляют 6 н хлористоводородную кислоту (12 мл/ммоль). Смесь перемешивают при 60°C в течение 2 часов. После охлаждения полученный твердый продукт фильтруют, промывают дихлорметаном и сушат в высоком вакууме. Промежуточное соединение 5 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Выход: 1,3 г промежуточного соединения 9 (86%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=356, RT=0,515 мин

Получение примера 2

Раствор промежуточного соединения 8 (0,6 г, 1,4 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (0,7 мл, 4,2 ммоль) в N,N-диметилформамиде (66 мл) добавляют медленно в течение периода 1 час с использованием перистальтического насоса Marlow к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (1,2 г, 3,1 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (1,6 мл, 9,8 ммоль) в N,N-диметилформамиде (33 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение еще 1 часа после завершения добавления. Смесь гасят с помощью 7 н аммиака в метаноле. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в дихлорметане и промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия. Водный слой экстрагируют дихлорметаном. Объединенные органические слои промывают насыщенным солевым раствором, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 212 мг примера 2 (45%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=338, RT=2,266 мин

Пример 3

Пример 3 получают, следуя общей схеме 2.

Получение промежуточного соединения 10

Смесь 3-бром-5-хлор-пиразоло[1,5-a]пиримидина (3,0 г, 12,9 ммоль), трет-бутил 3-аминопропаноата (2,6 г, 14,2 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (6,7 мл, 38,7 ммоль) в ацетонитриле (39 мл) перемешивают в течение ночи при 85°C. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате и промывают водой. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 50% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 4,0 г промежуточного соединения 10 (91%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=341, RT=0,918 мин

Получение промежуточного соединения 11

Смесь промежуточного соединения 10 (4,0 г, 11,8 ммоль), трет-бутоксикарбонильного ангидрида (3,2 г, 14,1 ммоль), триэтиламина (2,1 мл, 15,3 ммоль) и 4-(диметиламино)пиридина (0,07 г, 0,59 ммоль) в тетрагидрофуране (35 мл) нагревают с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате и промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 50% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 4,9 г промежуточного соединения 11 (95%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=441, RT=1,863 мин

Получение промежуточного соединения 12

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 7 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют промежуточное соединение 11 (1,0 г, 2,3 ммоль), (3-гидроксифенил)бороновую кислоту (0,4 г, 2,9 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (23 мг, 0,02 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (43 мг, 0,09 ммоль) и трехосновный фосфат калия (2,6 г, 5 экв.) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 80°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждают, разбавляют этилацетатом, и органический слой промывают насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,0 г промежуточного соединения 12 (100%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=455, RT=1,149 мин

Получение промежуточного соединения 13

Диизопропилазодикарбоксилат (857 мг, 4,24 ммоль) добавляют к смеси промежуточного соединения 12 (0,9 г, 2,0 ммоль), трет-бутил N-(2-гидроксиэтил)карбамата (0,6 г, 3,8 ммоль) и трифенилфосфина (1,0 г, 3,8 ммоль) в сухом тетрагидрофуране (10 мл). Смесь перемешивают при 90°C в течение 1 часа. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гексана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 50% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,2 г промежуточного соединения 13 (100%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=498 (MW-Boc), RT=2,144 мин

Получение промежуточного соединения 14

Промежуточное соединение 13 (1,2 г, 2,0 ммоль) растворяют в дихлорметане (3 мл) и добавляют трифторуксусную кислоту (3 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток обрабатывают толуолом, и растворитель удаляют при пониженном давлении (3x). Промежуточное соединение 20 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=342, RT=0,416 мин

Получение примера 3

Раствор промежуточного соединения 14 (0,6 г, 2,0 ммоль) в N,N-диметилформамиде (140 мл) добавляют медленно в течение периода 3 часа к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (2,3 г, 6,1 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (10,6 мл, 60,6 ммоль) в N,N-диметилформамиде (60 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение еще 1 часа после завершения добавления. Смесь гасят водным раствором аммиака (25%) и перемешивают в течение 30 минут. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют дихлорметан. Полученный твердый продукт фильтруют и промывают простым диэтиловым эфиром и метанолом.

Выход: 150 мг примера 3 (23%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=324, RT=2,285 мин

Пример 4

Пример 4 получают, следуя общей схеме 1.

Получение промежуточного соединения 15

O-(Бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (576 мг, 1,52 ммоль) добавляют к смеси 7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена (420 мг, 1,27 ммоль), 3-этокси-3-оксо-пропионовой кислоты (170 мкл, 1,4 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (887 мкл, 1,52 ммоль) в N,N-диметилформамиде (4 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Сырую реакционную смесь выливают в этилацетат и промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 270 мг промежуточного соединения 15 (52%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=410, RT=1,051 мин

Получение промежуточного соединения 16

Борогидрид натрия (150 мг, 3,96 ммоль) добавляют к суспензии промежуточного соединения 15 (270 мг, 0,66 ммоль) в тетрагидрофуране (1 мл). Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 30 минут и осторожно добавляют метанол (1 мл). Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 1 часа. После завершения реакции смесь гасят с помощью насыщенного водного раствора хлорида аммония и перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 часов. Смесь экстрагируют этилацетатом, и органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 163 мг промежуточного соединения 16 (67%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=368, RT=0,681 мин

Получение промежуточного соединения 17

Для повышения чистоты промежуточное соединение 16 защищают как трет-бутилдиметилсилилхлорид, который очищают с помощью ВЭЖХ. Смесь промежуточного соединения 16 (163 мг, 0,44 ммоль), трет-бутилдиметилсилилхлорида (100 мг, 0,66 ммоль) и триэтиламина (122 мкл, 0,88 ммоль) в N,N-диметилформамиде (1,3 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом и промывают насыщенным солевым раствором (3x). Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 75 мг промежуточного соединения 17 (35%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=482, RT=1,785 мин

Получение примера 4

Промежуточное соединение 17 (75 мг, 0,15 ммоль) суспендируют в уксусной кислоте/тетрагидрофуране/воде (3:1:1, 0,5 мл), и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 6 часов. Добавляют толуол, и растворители удаляют при пониженном давлении.

Выход: 63 мг примера 4 (95%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=368, RT=2,433 мин

Пример 5

Пример 5 получают, следуя общей схеме 3.

Получение промежуточного соединения 18

Промежуточное соединение 6 (2,45 г, 6,88 ммоль) растворяют в 4 н растворе хлористоводородной кислоте в метаноле (21 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Полученный твердый продукт фильтруют, промывают метанолом и сушат в высоком вакууме. Промежуточное соединение 18 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Выход: 2,12 г промежуточного соединения 18 (94%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=256, RT=0,255 мин

Получение промежуточного соединения 19

2-Нитробензолсульфонилхлорид (1,57 г, 7,08 ммоль) добавляют порциями при 0°C и в атмосфере азота к раствору промежуточного соединения 18 (2,12 г, 6,44 ммоль) и триэтиламина (3,12 мл, 22,54 ммоль) в дихлорметане (19 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 часа, давая ей возможность для достижения комнатной температуры. Сырую реакционную смесь выливают в насыщенный солевой раствор, и водный слой экстрагируют этилацетатом. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Промежуточное соединение 19 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Выход: 2,67 г промежуточного соединения 19 (94%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=443, RT=0,979 мин

Получение промежуточного соединения 20

Смесь промежуточного соединения 19 (2,6 г, 5,89 ммоль), трет-бутоксикарбонильного ангидрида (1,35 г, 6,18 ммоль), триэтиламина (980 мкл, 7,07 ммоль) и 4-(диметиламино)пиридина (7 мг, 0,06 ммоль) в тетрагидрофуране (18 мл) нагревают с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 3,06 г промежуточного соединения 20 (96%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=543, RT=1,407 мин

Получение промежуточного соединения 21

Смесь промежуточного соединения 20 (3,0 г, 5,54 ммоль) и карбонат цезия (3,61 г, 11,08 ммоль) в N,N-диметилформамиде (17 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 15 минут. Добавляют йодметан (520 мкл, 8,31 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом, промывают водой и насыщенным солевым раствором, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Промежуточное соединение 21 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Выход: 3,0 г промежуточного соединения 21 (97%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=555, RT=1,650 мин

Получение промежуточного соединения 22

Промежуточное соединение 21 (3,0 г, 5,4 ммоль) и карбонат цезия (3,52 г, 10,80 ммоль) суспендируют в N,N-диметилформамиде (16 мл). Добавляют тиофенол (660 мкл, 6,48 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=372, RT=0,667 мин

Получение промежуточного соединения 23

Смесь промежуточного соединения 22 (2,0 г, 5,4 ммоль), трет-бутоксикарбонильного ангидрида (1,77 г, 8,1 ммоль) и триэтиламина (1,5 мл, 10,8 ммоль) в тетрагидрофуране (16 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,82 г промежуточного соединения 23 (71%, в 2 стадии)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=472, RT=1,812 мин

Получение промежуточного соединения 24

Трет-бутил 2-бромацетат (1,28 мл, 8,67 ммоль) добавляют к суспензии 3-бромфенола (1,0 г, 5,78 ммоль) и карбоната калия (1,6 г, 11,56 ммоль) в ацетонитриле (17 мл). Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 1 часа, охлаждают и добавляют этилацетат. Органический слой промывают насыщенным солевым раствором, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Промежуточное соединение 24 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=309 (MW+Na), RT=1,577 мин

Получение промежуточного соединения 25

1,4-Диоксан (17 мл) дегазируют посредством барботирования через него газообразного азота. Добавляют промежуточное соединение 24 (1,66 г, 5,78 ммоль), бис(пинаколято)дибор (1,47 г, 5,78 ммоль), [1,1′-бис(дифенилфосфино)ферроцен]-дихлорпалладий(II) (139 мг, 0,17 ммоль) и ацетат калия (1,135 г, 11,56 ммоль). Суспензию перемешивают в атмосфере азота при 80°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждают, разбавляют этилацетатом и промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,32 г промежуточного соединения 25 (68% в 2 стадии)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=357 (MW+Na), RT=1,806 мин

Получение промежуточного соединения 26

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 7 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют промежуточное соединение 22 (1,72 г, 3,66 ммоль), промежуточное соединение 25 (1,2 г, 4,39 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (46 мг, 0,04 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (72 мг, 0,15 ммоль) и трехосновный фосфат калия (3,88 г, 5 экв.) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 80°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждают, разбавляют этилацетатом, и органический слой промывают насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,78 г промежуточного соединения 26 (81%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=598, RT=2,131 мин

Получение промежуточного соединения 27

Промежуточное соединение 26 (1,78 г, 2,98 ммоль) растворяют в ацетонитриле (12 мл/ммоль) и добавляют 6 н водный раствор хлористоводородной кислоты (12 мл/ммоль). Смесь перемешивают при 60°C в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Промежуточное соединение 27 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=342, RT=0,442 мин

Получение примера 5

Раствор промежуточного соединения 27 (1,125 г, 2,98 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (1,56 мл, 8,94 ммоль) в N,N-диметилформамиде (150 мл) добавляют медленно с использованием перистальтического насоса Marlow в течение периода 1 час к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (2,49 г, 6,56 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (3,64 мл, 20,86 ммоль) в N,N-диметилформамиде (75 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение еще 1 часа после завершения добавления. Смесь гасят водным раствором аммиака (25%). Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют дихлорметан. Органический слой промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, и водный слой экстрагируют дихлорметаном. Объединенные органические слои промывают насыщенным солевым раствором, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 512 мг примера 5 (53%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=324, RT=2,097 мин

Пример 6

Пример 6 получают, следуя общей схеме 4.

Получение промежуточного соединения 28

Бензилбромид (0,53 мл, 4,47 ммоль) добавляют к суспензии промежуточного соединения 7 (2,0 г, 4,26 ммоль) в ацетонитриле (13 мл). Смесь перемешивают при 80°C в течение 3 часов. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Промежуточное соединение 28 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Выход: 2,4 г промежуточного соединения 28 (100%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=560, RT=2,125 мин

Получение промежуточного соединения 29

Промежуточное соединение 28 (2,4 г, 4,29 ммоль) растворяют в 4 н растворе хлористоводородной кислоты в метаноле (13 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают водой. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Промежуточное соединение 29 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=360, RT=0,729 мин

Получение промежуточного соединения 30

Раствор N,N-диизопропилэтиламина (2,31 мл, 13,2 ммоль) и промежуточного соединения 29 (0,79 мг, 2,2 ммоль) в сухом тетрагидрофуране (6,6 мл) (+ несколько капель N,N-диметилформамида) добавляют по каплям к раствору 1,1'-карбонил диимидазола (0,61 г, 3,74 ммоль) в сухом тетрагидрофуране (6 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа и добавляют 2-бензилоксиэтанамин (0,998 г, 6,6 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре. Когда реакция завершается, добавляют этилацетат, и органический слой промывают водой. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,065 г промежуточного соединения 30 (90%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=537, RT=1,035 мин

Получение промежуточного соединения 31

Промежуточное соединение 30 (1 г, 1,86 ммоль) суспендируют в дихлорметане (5,6 мл) и охлаждают на ледяной бане. Добавляют трибромид бора (1M раствор в дихлорметане, 3,72 мл, 3,72 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. Получают смесь гидроксильного и бромированного производных. Реакционную смесь охлаждают на ледяной бане и добавляют метанол. Добавляют дихлорметан до тех пор, пока продукт полностью не солюбилизируется, и смесь используют без дополнительной очистки на следующей стадии.

Получение примера 6

Карбонат цезия (3,03 г, 9,30 ммоль) суспендируют в N,N-диметилацетамиде (120 мл) и нагревают до 50°C. Раствор промежуточного соединения 31 (780 мг, 1,86 ммоль) в дихлорметане добавляют по каплям в течение периода в 3 часа. Реакционную смесь фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток суспендируют в этилацетате и промывают водой. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении, в то же время охлаждая.

Выход: 7 мг примера 5 (1%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=339, RT=1,528 мин

Пример 7

Пример 7 получают, следуя общей схеме 3.

Получение промежуточного соединения 32

трет-Бутоксикарбонильный ангидрид (2,82 г, 12,90 ммоль) добавляют к смеси промежуточного соединения 6 (2,3 г, 6,45 ммоль), триэтиламина (1,63 мл, 16,13 ммоль) и 4-(диметиламино)пиридина (16 мг, 0,13 ммоль) в тетрагидрофуране (19 мл). Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждают и добавляют этилацетат. Органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,65 г промежуточного соединения 32 (46%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=556-558, RT=2,094 мин

Получение промежуточного соединения 33

Смесь 3-бромфенола (5,26 г, 30,4 ммоль), 3-бромпропан-1-ола (6,60 мл, 67 ммоль) и карбоната калия (14,71 г, 106,4 ммоль) в ацетонитриле (91 мл) нагревают с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают, и добавляют этилацетат. Органический слой промывают насыщенным солевым раствором, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Промежуточное соединение 33 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=231-233, RT=0,967 мин

Получение промежуточного соединения 34

К раствору промежуточного соединения 33 (7,02 г, 30,4 ммоль) в ацетоне (91 мл) добавляют смесь воды и серной кислоты (14,9 мл; 2:1) при 0°C, и смесь перемешивают в течение нескольких минут. Затем по каплям добавляют оксид хрома(VI) (12,16 мл, 121,60 ммоль) и смесь перемешивают при 0°C в течение 5 часов. Реакционную смесь гасят с помощью 2-пропанола (5 мл), и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺ = без ионизации, RT=0,208 мин

Получение промежуточного соединения 35

К перемешиваемому раствору промежуточного соединения 34 (7,45 г, 30,4 ммоль) в этаноле добавляют по каплям при 0°C раствор серной кислоты (1,62 мл, 30,4 ммоль) в этаноле. Смесь нагревают с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают, концентрируют и добавляют этилацетат. Органический слой промывают бикарбонатом натрия, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Промежуточное соединение 35 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Выход: 8,28 г промежуточного соединения 35 (100%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=273-275, RT=1,362 мин

Получение промежуточного соединения 36

1,4-Диоксан (44 мл) дегазируют посредством барботирования через него газообразного азота. Добавляют промежуточное соединение 35 (4,0 г, 14,65 ммоль), бис(пинаколято)дибор (4,46 г, 17,58 ммоль), [1,1-бис(дифенилфосфино)ферроцен]-дихлорпалладий(II) (122 мг, 0,15 ммоль) и ацетат калия (4,31 г, 43,95 ммоль). Суспензию перемешивают в атмосфере азота при 80°C в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждают, разбавляют этилацетатом и промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 3,03 г промежуточного соединения 36 (65%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=321, RT=1,591 мин

Получение промежуточного соединения 37

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 7 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют промежуточное соединение 32 (1,55 г, 2,79 ммоль), промежуточное соединение 36 (1,16 г, 3,63 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (35 мг, 0,03 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (52 мг, 0,11 ммоль) и трехосновный фосфат калия (2,95 г, 5 экв.) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают, разбавляют этилацетатом, и органический слой промывают насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,78 г промежуточного соединения 37 (95%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=670, RT=2,247 мин

Получение промежуточного соединения 38

Промежуточное соединение 37 (1,78 г, 2,66 ммоль) растворяют в ацетонитриле (8 мл) и добавляют 6 н водный раствор хлористоводородной кислоты (12 мл/ммоль). Смесь перемешивают при 60°C в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Промежуточное соединение 38 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=342, RT=0,470 мин

Получение примера 7

Раствор промежуточного соединения 38 (1,005 г, 2,66 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (2,0 мл, 7,98 ммоль) в N,N-диметилформамиде (167 мл) добавляют медленно с использованием перистальтического насоса Marlow в течение периода 1 час к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (2,22 г, 5,85 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (3,25 мл, 18,62 ммоль) в N,N-диметилформамиде (83 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение еще 1 часа после завершения добавления. Смесь гасят водным раствором аммиака (25%). Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют этилацетат. Органический слой промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 120 мг примера 7 (14% в 2 стадии)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=339, RT=2,275 мин

Пример 8

Пример 8 получают, следуя общей схеме 4.

Получение промежуточного соединения 39

Триэтиламин (1,78 мл, 12,87 ммоль) и 3-хлорпропан-1-сульфонилхлорид (0,79 мл, 6,44 ммоль) добавляют к раствору промежуточного соединения 38 (1,7 г, 4,29 ммоль) в дихлорметане (13 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Дополнительно добавляют 3-хлорпропан-1-сульфонилхлорид (0,26 мл, 2,14 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре до завершения реакции. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют этилацетат. Органический слой промывают водой, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гексана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=500, RT=1,003 мин

Получение промежуточного соединения 40

Промежуточное соединение 39 (2,145 г, 4,29 ммоль), трет-бутоксикарбонильный ангидрид (2,06 г, 9,44 ммоль), триэтиламин (1,78 мл, 12,87 ммоль) и 4-(диметиламино)пиридин (53 мг, 0,43 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (13 мл). Смесь нагревают с обратным холодильником в герметичной пробирке в течение 6 часов. Реакционную смесь охлаждают, растворитель удаляют при пониженном давлении, и добавляют этилацетат. Органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,27 г промежуточного соединения 40 (42% в 2 стадии)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=700, RT=2,252 мин

Получение промежуточного соединения 41

Промежуточное соединение 40 (0,720 г, 1,03 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (10 мл) и добавляют Pd/C (0,1 г). Смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 20 часов. Дополнительно добавляют Pd/C (0,1 г) и метанол (5 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 66 часов. Реакционную смесь фильтруют через целит, и остаток промывают дихлорметаном и метанолом. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 100 мг промежуточного соединения 41 (16%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=610, RT=1,034 мин

Получение примера 8

Промежуточное соединение 41 (0,21 г, 0,34 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (15 мл) добавляют по каплям к раствору карбоната цезия (0,55 г, 1,70 ммоль), йодида калия (113 мг, 0,68 ммоль) и тетрабутиламмония йодида (11 мг, 0,03 ммоль) в тетрагидрофуране (30 мл). Смесь перемешивают при 90°C в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют этилацетат. Органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой отделяют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают. Другую очистку осуществляют с использованием ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 35 мг примера 8 (28%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=374, RT=2,590 мин

Пример 9

Получение примера 9

Пример 9 получают, следуя общей схеме 1.

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорид (0,15 г, 0,452 ммоль), 3-фторпропановую кислоту (50 мг, 0,50 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (0,269 мл, 1,58 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (1,36 мл). Добавляют O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (0,205 г, 0,54 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 20 мг примера 9 (12%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=370, RT=2,917 мин

Получение примера 10

Пример 10

Пример 10 получают, следуя общей схеме 1.

К раствору 7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорида (0,15 г, 0,452 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (0,230 мл, 1,35 ммоль) в N,N-диметилформамиде (1,35 мл) добавляют N,N-диметилкарбамоилхлорид (57 мг, 0,557 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют метанол. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, преципитат фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 123 мг примера 10 (74%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=367, RT=2,939 мин

Пример 11

Получение примера 11

Пример 11 получают, следуя общей схеме 1.

7-Окса-10,14,18,19,22-пентаазатетрацикло-[13,5,2,1^{2,6}.0^{18,21}]трикоза-1(21),2(23),3,5,15(22),16,19-гептаен гидрохлорид получают в соответствии со сходными процедурами синтеза, как описано для получения промежуточного соединения 7, с использованием трет-бутил N-(3-аминопропил)-N-[2-(трет-бутил(диметил)силил)оксиэтил]карбамата для связывания со скелетной структурой и (3-гидроксифенил)бороновой кислоты для связывания Сузуки. Замыкание кольца осуществляют после снятия защиты с помощью TBDMS с использованием условий Мицунобу. Незащищенный 7-окса-10,14,18,19,22-пентаазатетрацикло-[13.5.2.1^{2,6}.0^{18,21}]трикоза-1(21),2(23),3,5,15(22),16,19-гептаена гидрохлорид получают после снятия защиты с помощью Boc при кислотных условиях.

Этил карбонохлоридат (100 мкл, 1,01 ммоль) добавляют при 0°C к раствору 7-окса-10,14,18,19,22-пентаазатетрацикло-[13.5.2.1^{2,6}.0^{18,21}]трикоза-1(21),2(23),3,5,15(22),16,19-гептаена гидрохлорида (350 мг, 1,01 ммоль) и триэтиламина (349 мкл, 2,52 ммоль) в дихлорметане (10 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляют воду и продукт экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным солевым раствором, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 212 мг примера 11 (55%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=382, RT=3,414 мин

Пример 12

Получение примера 12

Пример 12 получают, следуя общей схеме 1.

2-Бромацетамид (80 мг, 0,58 ммоль) добавляют к суспензии 7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорида (175 мг, 0,527 ммоль) и бикарбоната калия (158 мг, 1,58 ммоль) в ацетонитриле (1,58 мл). Суспензию перемешивают при нагревании с обратным холодильником в течение 2 часов. Добавляют 2-бромацетамид (65 мг, 0,474 ммоль) и бикарбонат калия (32 мг, 0,316 ммоль) и смесь перемешивают при нагревании с обратным холодильником в течение 6 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и сырой продукт перемешивают в метаноле/H₂O (1:1). Преципитат фильтруют, промывают метанолом и простым эфиром и перекристаллизуют из горячего метанола/дихлорметана (4:1). Продукт извлекают в дихлорметане/метаноле (4:1, 225 мл) и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (15 мкл, 0,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и соединение перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат в вакууме.

Выход: 146 мг примера 12 (71%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=353, RT=1,889 мин

Пример 13

Получение примера 13

Пример 13 получают, следуя общей схеме 1.

Метансульфонилхлорид (45 мкл, 0,58 ммоль) добавляют к раствору 7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорида (175 мг, 0,527 ммоль) и диизопропилэтиламина (269 мкл, 1,58 ммоль) в N,N-диметилформамиде (1,58 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляют метансульфонилхлорид (12 мкл, 0,16 ммоль) и перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют метанол. Преципитат фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 155 мг примера 13 (79%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=374, RT=3,011 мин

Пример 14

Получение примера 14

Пример 14 получают, следуя общей схеме 1.

7-[(2-Нитробензол)сульфонил]-7,10,13,17,18,21- гексаазатетрацикло[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза- 1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен получают в соответствии со сходными процедурами синтеза, как описано для получения промежуточного соединения 7, с использованием промежуточного соединения 4 для связывания со скелетной структурой и (3-аминофенил)бороновой кислоты для связывания Сузуки. После связывания Сузуки NH анилина защищают с помощью нозилхлорида при классических условиях. Замыкание кольца осуществляют после снятия защиты с помощью TBDMS с использованием условий Мицунобу. Boc-незащищенный 7-[(2-нитробензол)сульфонил]-7,10,13,17,18,21-гексаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен получают после снятия защиты с помощью Boc при кислотных условиях.

Получение промежуточного соединения 42

7-[(2-Нитробензол)сульфонил]-7,10,13,17,18,21-гексаазатетрацикло[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза- 1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаена гидрохлорид (495 мг, 0,96 ммоль) и триэтиламин (334 мкл, 2,40 ммоль) перемешивают в сухом тетрагидрофуране (2,88 мл). Добавляют пропаноилхлорид (90 мкл, 1,06 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляют дополнительное количество пропаноилхлорида (9 мкл, 0,106 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение еще 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и преципитат перетирают в метаноле. Твердый продукт фильтруют, промывают простым диэтиловым эфиром и сушат в вакууме.

Выход: 417 мг промежуточного соединения 42 (81%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=536, RT=0,877 мин

Получение примера 14

К раствору промежуточного соединения 42 (417 мг, 0,78 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2,34 мл) добавляют карбонат цезия (508 мг, 1,56 ммоль) и тиофенол (100 мкл, 0,94 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают водой, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 197 мг примера 14 (72%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=351, RT=2,700 мин

Пример 15

Получение примера 15

Пример 15 получают, следуя общей схеме 1.

Получение промежуточного соединения 43

7-[(2-Нитробензол)сульфонил]-7,10,13,17,18,21-гексаазатетрацикло[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаена гидрохлорид (600 мг, 1,13 ммоль), 3-метоксипропановую кислоту (120 мкл, 1,24 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (494 мкл, 2,83 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (5 мл). Добавляют O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (516 мг, 1,36 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляют простой диэтиловый эфир, и органический слой промывают насыщенным водным растворов бикарбоната натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 558 мг промежуточного соединения 43 (85%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=580, RT=0,858 мин

Получение примера 15

Пример 15 получают, следуя общей схеме 1.

Карбонат цезия (626 мг, 1,92 ммоль) и тиофенол (120 мкл, 1,15 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (5 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 минут. Добавляют раствор промежуточного соединения 43 (558 мг, 0,96 ммоль) в N,N-диметилформамиде (5 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают 1M водным раствором гидроксида натрия и водой. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 258 мг примера 15 (68%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=395, RT=1,910 мин

Пример 16

Получение примера 16

Пример 16 получают, следуя общей схеме 1.

Смесь примера 15 (220 мг, 0,56 ммоль), формальдегида (70 мг, 0,84 ммоль) и ледяной уксусной кислоты (32 мкл, 0,56 ммоль) перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут. Добавляют триацетоксиборогидрид натрия (237 мг, 1,12 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 176 мг примера 16 (77%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=409, RT=2,224 мин

Пример 17

Получение примера 17

Пример 17 получают, следуя общей схеме 1.

Смесь 7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорида (300 мг, 0,904 ммоль) и диизопропилэтиламина (616 мкл, 3,62 ммоль) в тетрагидрофуране (2,5 мл) и N,N-диметилформамиде (2,5 мл) добавляют по каплям к раствору ди(имидазол-1-ил)метанона (220 мг, 1,356 ммоль) в тетрагидрофуране (1,5 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляют 1-(2-фторэтил)пиперазина гидрохлорид (229 мг, 1,36 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при 80ºC в течение 63 часов и при 110ºC в течение 24 часов. Добавляют ди(имидазол-1-ил)метанон (150 мг, 0,904 ммоль) и смесь перемешивают при 110ºC в течение 18 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт извлекают в дихлорметане/метаноле (4:1, 520 мкл), и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (48 мкл, 0,191 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и соединение перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат в вакууме.

Выход: 84 мг примера 17 (19%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=454, RT=2,032 мин

Пример 18

Получение примера 18

Пример 18 получают, следуя общей схеме 1.

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорид (175 мг, 0,527 ммоль), 3-метоксипропановую кислоту (54 мг, 0,58 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (313 мкл, 1,84 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (2,10 мл). Добавляют O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (239 мг, 0,63 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют метанол. Преципитат фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 167 мг примера 18 (83%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=382, RT=2,813 мин

Пример 19

Получение примера 19

Пример 19 получают, следуя общей схеме 1.

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорид (175 мг, 0,527 ммоль), 1H-пиррол-2-карбоновую кислоту (64 мг, 0,58 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (313 мкл, 1,84 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (2,10 мл). Добавляют O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (239 мг, 0,63 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь выливают в этилацетат, и органический слой промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют метанол, и преципитат фильтруют. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 64 мг примера 19 (31%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=389, RT=3,208 мин

Пример 20

Получение примера 20

Пример 20 получают, следуя общей схеме 1.

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорид (128 мг, 0,386 ммоль), оксазол-4-карбоновую кислоту (48 мг, 0,425 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (230 мкл, 1,35 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (1,16 мл). Добавляют O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (174 мг, 0,46 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют метанол. Преципитат фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 125 мг примера 20 (83%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=391, RT=2,988 мин

Пример 21

Получение примера 21

Пример 21 получают, следуя общей схеме 1.

Циклопропансульфонилхлорид (81 мг, 0,58 ммоль) добавляют к раствору 7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорида (175 мг, 0,527 ммоль) и диизопропилэтиламина (269 мкл, 1,58 ммоль) в N,N-диметилформамиде (1,58 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Добавляют циклопропансульфонилхлорид (22 мг, 0,16 ммоль) и перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют метанол. Преципитат фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 125 мг примера 21 (59%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=400, RT=3,288 мин

Пример 22

Получение примера 22

Пример 22 получают, следуя общей схеме 1.

Получение промежуточного соединения 44

7-[(2-Нитробензол)сульфонил]-7,10,13,17,18,21-гексаазатетрацикло[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаена гидрохлорид (315 мг, 0,61 ммоль) и триэтиламин (211 мкл, 1,52 ммоль) перемешивают в сухом тетрагидрофуране (5,00 мл) в течение 5 минут. Добавляют циклопропанкарбонилхлорид (60 мкл, 0,67 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 190 мг промежуточного соединения 44 (57%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=548, RT=0,921 мин

Получение примера 22

Тиофенол (40 мкл, 0,42 ммоль) и карбонат цезия (228 мг, 0,70 ммоль) суспендируют в N,N-диметилформамиде (0,5 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 15 минут. Добавляют раствор промежуточного соединения 43 (190 мг, 0,35 ммоль) в N,N-диметилформамиде (0,5 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают насыщенным солевым раствором, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 82 мг примера 22 (65%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=363, RT=2,740 мин

Пример 23

Получение примера 23

Пример 23 получают, следуя общей схеме 1.

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорид (150 мг, 0,452 ммоль), гидрохлорид 2-морфолиноуксусной кислоты (90 мг, 0,497 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (384 мкл, 2,26 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (1,80 мл). Добавляют O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (205 мг, 0,54 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют метанол. Преципитат фильтруют и сушат при пониженном давлении. Продукт извлекают в дихлорметане/метаноле (4:1, 100 мл) и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (90 мкл, 0,36 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 90 минут. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и соединение перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 155 мг примера 23 (75%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=423, RT=1,942 мин

Пример 24

Получение примера 24

Пример 24 получают, следуя общей схеме 1.

Получение промежуточного соединения 45

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорид (125 мг, 0,377 ммоль), 2-(трет-бутоксикарбонил(метил)амино)уксусную кислоту (79 мг, 0,415 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (224 мкл, 1,32 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (1,13 мл). Добавляют O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (171 мг, 0,45 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, добавляют метанол и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Преципитат фильтруют и перекристаллизуют из горячего метанола/дихлорметана (4:1).

Выход: 122 мг промежуточного соединения 45 (69%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=427, RT=3,412 мин

Получение примера 24

Промежуточное соединение 44 (119 мг, 0,255 ммоль) перемешивают в 4 н растворе HCl в 1,4-диоксане (1,02 мл, 0,255 ммоль) в течение 3 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и соединение перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат в вакууме.

Выход: 101 мг примера 24 (98%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=367, RT=1,875 мин

Пример 25

Получение примера 25

Пример 25 получают, следуя общей схеме 1.

Мочевину (29 мг, 0,490 ммоль) добавляют к раствору 7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]-докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорида (125 мг, 0,377 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (74 мкл, 0,57 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (1,13 мл). Смесь перемешивают при 110°C в течение 18 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, добавляют метанол и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Преципитат фильтруют и перекристаллизуют из горячего метанола/дихлорметана (4:1).

Выход: 98 мг примера 25 (77%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=339, RT=2,412 мин

Пример 26

Получение примера 26

Пример 26 получают, следуя общей схеме 1.

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорид (150 мг, 0,452 ммоль), гидрохлорид 2-морфолиноуксусной кислоты (90 мг, 0,497 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (384 мкл, 2,26 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (1,80 мл). Добавляют O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (205 мг, 0,54 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют метанол. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Преципитат фильтруют и сушат при пониженном давлении. Продукт извлекают в дихлорметане/метаноле (4:1, 200 мл) и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (84 мкл, 0,368 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и соединение перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 142 мг примера 26 (67%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=436, RT=1,930 мин

Пример 27

Получение примера 27

Пример 27 получают, следуя общей схеме 1.

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорид (125 мг, 0,377 ммоль), гидрохлорид 3-пирролидин-1-илпропановой кислоты (75 мг, 0,415 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (321 мкл, 1,89 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (1,50 мл). Добавляют O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (171 мг, 0,45 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют метанол. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Преципитат фильтруют и сушат при пониженном давлении. Продукт извлекают в дихлорметане/метаноле (4:1, 200 мл) и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (65 мкл, 0,259 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и соединение перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 91 мг примера 27 (53%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=421, RT=2,050 мин

Пример 28

Получение примера 28

Пример 28 получают, следуя общей схеме 1.

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорид (100 мг, 0,301 ммоль), гидрохлорид 3-диметиламинопропановой кислоты (51 мг, 0,331 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (255 мкл, 1,50 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (1,20 мл). Добавляют O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (137 мг, 0,36 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют метанол. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Преципитат фильтруют и перекристаллизуют из горячего метанола/дихлорметана (4:1). Соединение очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт извлекают в дихлорметане/метаноле (4:1, 40 мл) и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (69 мкл, 0,276 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и соединение перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 102 мг примера 28 (79%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=395, RT=1,977 мин

Пример 29

Получение примера 29

Пример 29 получают, следуя общей схеме 1.

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен-5-карбонитрил получают в соответствии со сходными процедурами синтеза, как описано для получения промежуточного соединения 7, с использованием промежуточного соединения 4 для связывания со скелетной структурой и 2-гидрокси-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензонитрила для связывания Сузуки. Замыкание кольца осуществляют после снятия защиты с помощью TBDMS с использованием условий Мицунобу.

Boc-незащищенный 7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен-5-карбонитрил получают после снятия защиты с помощью Boc при кислотных условиях.

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен-5-карбонитрила гидрохлорид (580 мг, 1,63 ммоль) и триэтиламин (498 мкл, 3,59 ммоль) перемешивают в сухом тетрагидрофуране (4,89 мл) в течение 5 минут. Добавляют циклопропанкарбонилхлорид (160 мкл, 1,79 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 220 мг примера 29 (35%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=389, RT=3,056 мин

Пример 30

Получение примера 30

Пример 30 получают, следуя общей схеме 1.

Получение промежуточного соединения 46

4-(трет-Бутоксикарбониламино)бутановую кислоту (12,0 г, 59,04 ммоль) и 3-бензилоксипропан-1-амин (11,91 г, 59,04 ммоль) растворяют в дихлорметане (360 мл). Добавляют N,N-диизопропилэтиламин (27,47 мл, 212,54 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 минут. Добавляют O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (26,87 г, 70,85 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют насыщенный водный раствор бикарбоната натрия, и два слоя разделяют. Органический слой промывают водой, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=351, RT=2,930 мин

Получение промежуточного соединения 47

Промежуточное соединение 46 (4,0 г, 11,41 ммоль) растворяют в 4 н растворе HCl в MeOH (34 мл), и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь концентрируют и промывают толуолом. Преципитат промывают простым диэтиловым эфиром и сушат при пониженном давлении.

Выход: 3,2 г промежуточного соединения 47 (98%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=251, RT=0,241 мин

Получение промежуточного соединения 48

Смесь 3-бром-5-хлор-пиразоло[1,5-a]пиримидина (2,00 г, 8,60 ммоль), промежуточного соединения 47 (2,37 г, 9,46 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (5,85 мл, 34,4 ммоль) в ацетонитриле (25,8 мл) перемешивают при нагревании с обратным холодильником в течение ночи. Добавляют еще одну порцию промежуточного соединения 46 (646 мг, 2,58 ммоль) и смесь перемешивают при нагревании с обратным холодильником в течение еще 3 часов. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате и промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 20% до 100% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 2,3 г промежуточного соединения 48 (60%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=446, RT=0,825 мин

Получение промежуточного соединения 49

трет-Бутоксикарбонильный ангидрид (1,18 г, 5,41 ммоль) добавляют к смеси промежуточного соединения 48 (2,3 г, 5,15 ммоль), триэтиламина (786 мкл, 5,67 ммоль) и 4-(диметиламино)пиридина (32 мг, 0,26 ммоль) в тетрагидрофуране (15 мл). Смесь нагревают с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 33% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 2,43 г промежуточного соединения 49 (86%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=447 (-Boc), RT=1,117 мин

Получение промежуточного соединения 50

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 13,35 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют промежуточное соединение 49 (2,43 г, 4,45 ммоль), (3-гидроксифенил)бороновую кислоту (0,64 г, 4,67 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (104 мг, 0,09 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (172 мг, 0,36 ммоль) и трехосновный фосфат калия (4,717 г, 5 экв.) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 80°C в течение 18 часов. Реакционную смесь охлаждают, разбавляют этилацетатом, и органический слой промывают водой. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 50% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,91 г промежуточного соединения 50 (77%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=560, RT=1,141 мин

Получение промежуточного соединения 51

Промежуточное соединение 50 (1,91 г, 3,41 ммоль) растворяют в метаноле (65 мл) и добавляют палладий (36 мг, 0,34 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 24 часов. Реакционную смесь фильтруют через целит, и остаток промывают метанолом. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 100% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 641 мг промежуточного соединения 51 (40%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=470, RT=0,803 мин

Получение промежуточного соединения 52

Раствор промежуточного соединения 51 (441 мг, 0,94 ммоль) в 2-метилтетрагидрофуране (20 мл/ммоль) и раствор диизопропилазодикарбоксилата (560 мкл, 2,82 ммоль) в толуоле (20 мл/ммоль) добавляют одновременно в течение периода в 3 часа к раствору трифенилфосфина (740 мг, 2,82 ммоль) в толуоле (75 мл/ммоль промежуточного соединения 50) при 90°C. Смесь перемешивают при 90°C в течение 30 минут. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 20% до 80% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 240 мг промежуточного соединения 52 (57%)

Получение примера 30

Промежуточное соединение 52 (240 мг, 0,53 ммоль) растворяют в 4 н растворе HCl в MeOH (1,59 мл), и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрируют и добавляют простой диэтиловый эфир. Преципитат фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 182 мг примера 30 (98%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=352, RT=2,612 мин

Пример 31

Получение примера 31

Пример 31 получают, следуя общей схеме 2.

Получение промежуточного соединения 53

Промежуточное соединение 7 (1,62 г, 3,45 ммоль), метил 2-бромацетат (490 мг, 5,17 ммоль) и карбонат калия (954 мг, 6,90 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (10,35 мл). Реакционную смесь перемешивают при 80°C в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждают, добавляют воду, и продукт экстрагируют этилацетатом. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 33% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,317 г промежуточного соединения 53 (70%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=442 (-Boc), RT=1,166 мин

Получение промежуточного соединения 54

Промежуточное соединение 53 (1,317 г, 2,43 ммоль) растворяют в 4 н растворе HCl в 1,4-диоксане (7,29 мл), и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют и добавляют простой диэтиловый эфир. Преципитат фильтруют и сушат при пониженном давлении. Получают карбоновую кислоту.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=328 (карбоновая кислота)

Получение промежуточного соединения 55

Ацетон (260 мкл, 3,52 ммоль) добавляют к раствору промежуточного соединения 54 (1,00, 2,93 ммоль) и триэтиламина (812 мкл, 5,86 ммоль) в 1,2-дихлорэтане:метаноле (1:1, 8,79 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляют порциями борогидрид натрия (812 мг, 5,86 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут. Добавляют воду и соединение экстрагируют дихлорметаном. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 20% до 100% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 127 мг промежуточного соединения 55 (11%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=370, RT=0,402 мин

Получение примера 31

Суспензию промежуточного соединения 55 (127 мг, 0,34 ммоль) в N,N-диметилформамиде (12 мл) добавляют по каплям к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (390 мг, 1,02 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (347 мкл, 2,04 ммоль) в N,N-диметилформамиде (24 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 50% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 31 мг примера 31 (26%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=353, RT=2,507 мин

Пример 32

Получение примера 32

Пример 32 получают, следуя общей схеме 1.

8,11,14,18,19,22-Гексаазатетрацикло-[13.5.2.1^{2,6}.0^{18,21}]трикоза-1(21),2,4,6(23),15(22),16,19-гептаен-7-он получают в соответствии со сходными процедурами синтеза, как описано для получения промежуточного соединения 7, с использованием трет-бутил N-[2-(2-аминоэтил(трет-бутоксикарбонил)амино)этил]карбамата для связывания со скелетной структурой и 3-борбензойной кислоты для связывания Сузуки. Замыкание кольца осуществляют после снятия защиты с помощью Boc с использованием условий с использованием HBTU.

8,11,14,18,19,22-Гексаазатетрацикло-[13.5.2.1^{2,6}.0^{18,21}]трикоза-1(21),2,4,6(23),15(22),16,19-гептаен-7-он (120 мг, 0,372 ммоль) и триэтиламин (63 мкл, 0,45 ммоль) перемешивают в сухом тетрагидрофуране (1,12 мл) в течение 5 минут. Добавляют циклопропанкарбонилхлорид (40 мкл, 0,41 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют метанол. Преципитат фильтруют, промывают простым диэтиловым эфиром и сушат при пониженном давлении.

Выход: 102 мг примера 32 (70%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=391, RT=2,410 мин

Пример 33

Получение примера 33

Пример 33 получают, следуя общей схеме 2.

Получение промежуточного соединения 56

2-Нитробензолсульфонилхлорид (1,124 г, 5,073 ммоль) добавляют порциями при 0°C и в атмосфере азота к раствору промежуточного соединения 54 (1,277 г, 3,382 ммоль) и триэтиламина (1,646 мл, 11,84 ммоль) в дихлорметане (10,15 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 часа, давая ей возможность для достижения комнатной температуры. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 20% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,568 г промежуточного соединения 56 (88%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=527, RT=0,837 мин

Получение промежуточного соединения 57

К раствору промежуточного соединения 56 (1,468 г, 2,788 ммоль), 2-диметиламиноэтанола (838 мкл, 8,364 ммоль) и трифенилфосфина (1,828 г, 6,97 ммоль) в тетрагидрофуране (8,36 мл) и N,N-диметилформамиде (3 мл) добавляют диизопропилазодикарбоксилат (1,382 мл, 6,97 ммоль). Смесь перемешивают при 70°C в течение 90 минут. Дополнительно добавляют 2-диметиламиноэтанол (83,8 мкл, 0,836 ммоль), диизопропилазодикарбоксилат (138,2 мкл, 0,697 ммоль) и трифенилфосфин (182,8 мг, 0,697 ммоль) и смесь перемешивают при 70°C в течение 30 минут. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают водой, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 10% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают. Продукт промывают простым диэтиловым эфиром.

Выход: 1,078 г промежуточного соединения 57 (65%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=598, RT=0,283 мин

Получение промежуточного соединения 58

К раствору промежуточного соединения 57 (1,028 г, 1,72 ммоль) в N,N-диметилформамиде (5,16 мл) добавляют карбонат цезия (1,121 г, 3,44 ммоль) и тиофенол (211 мкл, 2,064 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляют гидроксид натрия (206 мг, 5,16 ммоль) и воду (0,86 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 17 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 632 мг промежуточного соединения 58 (92%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=399, RT=1,410 мин

Получение примера 33

Раствор промежуточного соединения 58 (583 мг, 1,461 ммоль) в N,N-диметилформамиде (44 мл) добавляют по каплям к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (1,66 г, 4,38 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (1,491 мл, 8,77 ммоль) в N,N-диметилформамиде (102 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют метанол. Преципитат фильтруют и сушат при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт (120 мг, 0,315 ммоль) извлекают в дихлорметане/метаноле (4:1, 50 мл) и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (90 мкл, 0,35 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и соединение перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 122 мг примера 33 (77%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=381, RT=1,603 мин

Пример 34

Получение примера 34

Пример 34 получают, следуя общей схеме 4.

Получение промежуточного соединения 59

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 20 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют промежуточное соединение 21 (1,38 г, 2,48 ммоль), (3-гидроксифенил)бороновую кислоту (440 мг, 3,22 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (58 мг, 0,05 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (95 мг, 0,20 ммоль) и трехосновный фосфат калия (2,63 г, 5 экв.) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают, разбавляют этилацетатом, и органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,21 г промежуточного соединения 59 (86%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=569, RT=1,046 мин

Получение промежуточного соединения 60

Трет-бутилдиметилсилилхлорид (390 мг, 2,56 ммоль) добавляют к суспензии промежуточного соединения 59 (1,21 г, 2,13 ммоль) и триэтиламина (442 мкл, 3,19 ммоль) в N,N-диметилформамиде (20 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 часов. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом и промывают водой и насыщенным солевым раствором (3x). Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,10 г промежуточного соединения 60 (76%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=583 (-Boc), RT=1,527 мин

Получение промежуточного соединения 61

Карбонат цезия (1,049 г, 3,22 ммоль) и тиофенол (200 мкл, 1,93 ммоль) суспендируют в N,N-диметилформамиде (2,42 мл), и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 минут. Добавляют раствор промежуточного соединения 60 (1,10 г, 1,61 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2,42 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают 1M водным раствором гидроксида натрия, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 310 мг промежуточного соединения 61 (39%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=498, RT=1,038 мин

Получение промежуточного соединения 62

3-Хлорпропан-1-сульфонилхлорид (80 мкл, 0,68 ммоль) добавляют к раствору промежуточного соединения 61 (310 мг, 0,62 ммоль) и триэтиламина (112 мкл, 0,81 ммоль) в дихлорметане (2 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляют воду, и продукт экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным солевым раствором, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=639, RT=1,523 мин

Получение промежуточного соединения 63

Тетрабутиламмония фторид (1M раствор в тетрагидрофуране, 1 мл, 0,93 ммоль) добавляют к раствору промежуточного соединения 62 (396 мг, 0,62 ммоль) в тетрагидрофуране (1,86 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток разбавляют этилацетатом и промывают водой (3x) и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=525, RT=1,022 мин

Получение промежуточного соединения 64

Раствор промежуточного соединения 63 (325 мг, 0,62 ммоль) в N,N-диметилформамиде (40 мл) добавляют по каплям к суспензии карбоната цезия (1,01 г, 3,10 ммоль) в N,N-диметилформамиде (20 мл) при 90°C в течение периода 1 час. Твердые продукты фильтруют, и фильтрат выпаривают при пониженном давлении. Остаток разбавляют этилацетатом и промывают водой и насыщенным солевым раствором (2x). Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью флэш-хроматографии с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 122 мг промежуточного соединения 64 (40% в 3 стадии)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=488, RT=1,061 мин

Получение примера 34

Промежуточное соединение 64 (120 мг, 0,25 ммоль) растворяют в 2 н HCl в метаноле (10 мл), и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток суспендируют в дихлорметане и добавляют 7 н раствор аммиака в метаноле (0,5 мл). Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток очищают с помощью флэш-хроматографии с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток перетирают с простым диэтиловым эфиром, и продукт сушат при пониженном давлении.

Выход: 74 мг примера 34 (76%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=388, RT=2,887 мин

Пример 35

Получение примера 35

Пример 35 получают, следуя общей схеме 1.

Диметил(2-{7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен-13-ил}этил)амин получают в соответствии со сходными процедурами синтеза, как описано для получения промежуточного соединения 7, с использованием трет-бутил N-[2-(трет-бутил(диметил)силил)оксиэтил]-N-[2-(2-диметиламиноэтиламино)-этил]карбамата для связывания со скелетной структурой и (3-гидроксифенил)бороновую кислоту для связывания Сузуки. Замыкание кольца осуществляют после снятия защиты с помощью TBDMS с использованием условий Мицунобу. Незащищенный диметил(2-{7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]-докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен-13-ил}этил)амин получают после снятия защиты с помощью Boc при кислотных условиях.

Диметил(2-{7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен-13-ил}этил)амин (197 мг, 0,49 ммоль) и триэтиламин (340 мкл, 2,45 ммоль) растворяют в дихлорметане (2 мл) и охлаждают до 0°C. Добавляют циклопропанкарбонилхлорид (50 мкл, 0,59 ммоль) при 0°C и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью флэш-хроматографии с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток перетирают с простым диэтиловым эфиром, и продукт сушат при пониженном давлении.

Выход: 70 мг примера 35 (33%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=435, RT=2,265 мин

Пример 36

Получение примера 36

Пример 36 получают, следуя общей схеме 2.

Получение промежуточного соединения 65

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 30 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют промежуточное соединение 6 (2,277 г, 4,99 ммоль), (3-гидроксифенил)бороновую кислоту (1,05 г, 6,487 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (116 мг, 0,10 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (191 мг, 0,40 ммоль) и трехосновный фосфат калия (5,296 г, 5 экв.) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 80°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждают, разбавляют этилацетатом, и органический слой промывают водой. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 20% до 100% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=469, RT=0,945 мин

Получение промежуточного соединения 66

Промежуточное соединение 65 (1,209 г, 2,58 ммоль), метил 2-бромацетат (240 мг, 2,58 ммоль) и карбонат калия (535 мг, 3,87 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (7,74 мл). Реакционную смесь перемешивают при 60°C в течение 2,5 часов. Реакционную смесь охлаждают и разбавляют этилацетатом. Органический слой промывают водой, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 50% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,281 г промежуточного соединения 66 (92%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=541, RT=1,122 мин

Получение промежуточного соединения 67

Промежуточное соединение 66 (1,278 г, 2,364 ммоль) и моногидрат гидроксида лития (110 мг, 2,60 ммоль) в смеси тетрагидрофуран/метанол/вода (2:2:1, 14,2 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют толуол, и дважды выпаривают. Остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=527, RT=0,983 мин

Получение промежуточного соединения 68

Промежуточное соединение 67 (771 мг, 2,364 ммоль) растворяют в 4 н растворе HCl в 1,4-диоксане (7,09 мл), и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют толуол, и дважды выпаривают. Остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=327, RT=0,275 мин

Получение примера 36

Раствор промежуточного соединения 68 (773 мг, 2,37 ммоль) в N,N-диметилформамиде (71 мл) добавляют по каплям к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (2,70 г, 7,11 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (12,092 мл, 71,10 ммоль) в N,N-диметилформамиде (166 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляют 25% водный раствор аммиака (2,5 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 31 мг примера 36 (26%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=309, RT=1,757 мин

Пример 37

Пример 37 получают, следуя общей схеме 1.

Получение примера 37

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),-15,18-гептаена гидрохлорид (150 мг, 0,452 ммоль) и триэтиламин (189 мкл, 1,36 ммоль) растворяют в сухом тетрагидрофуране (1,36 мл), и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 минут. Добавляют 2-фторацетилхлорид (40 мкл, 0,50 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 часов. Дополнительно добавляют 2-фторацетилхлорид (7 мкл, 0,09 ммоль) и триэтиламин (32 мкл, 0,23 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют метанол. Преципитат фильтруют, промывают простым диэтиловым эфиром и сушат при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 83 мг примера 37 (52%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=356, RT=2,790 мин

Пример 38

Получение примера 38

Пример 38 получают, следуя общей схеме 1.

Получение промежуточного соединения 69

Смесь 3-бром-5-хлор-пиразоло[1,5-a]пиримидина (1,5 г, 6,45 ммоль), промежуточного соединения 4 (2,26 г, 7,10 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (3,29 мл, 19,35 ммоль) в ацетонитриле (19,3 мл) нагревают с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате и промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 10% до 55% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 2,7 г промежуточного соединения 69 (81%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=415 (-Boc), RT=1,395 мин

Получение промежуточного соединения 70

Промежуточное соединение 69 (2,7 г, 5,25 ммоль), трет-бутоксикарбонильный ангидрид (1,26 г, 5,78 ммоль) и триэтиламин (885 мкл, 6,3 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (15,75 мл). Реакционную смесь перемешивают при 70°C в течение 3 часов. Добавляют дополнительное количество трет-бутоксикарбонильного ангидрида (115 мг, 0,53 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при 70°C в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате и промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Промежуточное соединение 3 используют на следующей стадии без дополнительной очистки. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 25% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 3,2 г промежуточного соединения 70 (99%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=515 (-Boc), RT=1,625 мин

Получение промежуточного соединения 71

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 30 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют промежуточное соединение 70 (3,10 г, 5,04 ммоль), гидрохлорид [3-(аминометил)фенил]бороновой кислоты (1,42 г, 7,56 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (232 мг, 0,20 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (191 мг, 0,40 ммоль) и трехосновный фосфат калия (5,34 г, 5 экв.) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 85°С в течение 7 часов. Реакционную смесь охлаждают, разбавляют этилацетатом, и органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 2,53 г промежуточного соединения 71 (78%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=641, RT=0,928 мин

Получение промежуточного соединения 72

3-Нитробензолсульфонилхлорид (140 мг, 0,64 ммоль) добавляют порциями при 0°C и в атмосфере азота к раствору промежуточного соединения 71 (370 г, 0,58 ммоль) и триэтиламина (242 мкл, 1,74 ммоль) в безводном дихлорметане (1,74 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 часов, давая ей возможность для достижения комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляют дихлорметаном и промывают 1 н водным раствором бикарбоната натрия. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 380 мг промежуточного соединения 72 (79%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=726 (MW-Boc), RT=1,549 мин

Получение промежуточного соединения 73

Промежуточное соединение 72 (380 мг, 0,46 ммоль) перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов в тетрабутиламмония фториде (1M раствор в тетрагидрофуране, 1,38 мл). Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток разбавляют этилацетатом и промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=612 (MW-Boc), RT=1,121 мин

Получение промежуточного соединения 74

Раствор промежуточного соединения 73 (200 мг, 0,28 ммоль) в 2-метилтетрагидрофуране (5,7 мл) и раствор диизопропилазодикарбоксилата (0,17 г, 0,84 ммоль) в толуоле (16 мл) добавляют одновременно к раствору трифенилфосфина (220 мг, 0,84 ммоль) в толуоле (21 мл) при 90°C. Смесь перемешивают при 90°C в течение 30 минут. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 2% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=694, RT=1,374 мин

Получение промежуточного соединения 75

К раствору промежуточного соединения 74 (340 мг, 0,49 ммоль) в 1,4-диоксане (1,47 мл) добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (3 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Выход: 206 мг промежуточного соединения 75 (80%)

Получение промежуточного соединения 76

Циклопропанкарбонилхлорид (40 мкл, 0,47 ммоль) добавляют по каплям в атмосфере азота при 0°C к раствору промежуточного соединения 75 (206 мг, 0,39 ммоль) и триэтиламина (271 мкл, 1,95 ммоль) в безводном дихлорметане (1,17 мл). Смесь перемешивают в течение 1 часа, давая ей возможность для достижения комнатной температуры. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют дихлорметан. Органический слой промывают водой, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Выход: 220 мг примера 76 (100%)

Получение примера 38

Тиофенол (50 мкл, 0,47 ммоль) и карбонат цезия (508 мг, 1,56 ммоль) суспендируют в N,N-диметилформамиде (1 мл), и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 минут. Добавляют раствор промежуточного соединения 76 (220 мг, 0,39 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают водой и 1 н водным раствором гидроксида натрия, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 3% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт извлекают в дихлорметане/метаноле (4:1, 10 мл) и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (20 мкл, 0,08 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и соединение перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 18 мг примера 38 в виде HCl соли (11%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=377, RT=1,685 мин

Пример 39

Получение примера 39

Пример 39 получают, следуя общей схеме 1.

Получение промежуточного соединения 77

Ацетилхлорид (30 мкл, 0,46 ммоль) добавляют по каплям в атмосфере азота при 0°C к раствору промежуточного соединения 75 (200 мг, 0,38 ммоль) и триэтиламина (264 мкл, 1,90 ммоль) в безводном дихлорметане (2 мл). Смесь перемешивают в течение 1 часа, давая ей возможность для достижения комнатной температуры. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Выход: 205 мг промежуточного соединения 77 (100%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=536, RT=0,976 мин

Получение примера 39

Тиофенол (50 мкл, 0,47 ммоль) и карбонат цезия (495 мг, 1,52 ммоль) суспендируют в N,N-диметилформамиде (2 мл), и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 минут. Добавляют промежуточное соединение 77 (205 мг, 0,38 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляют дихлорметан, и органический слой промывают водой и 1 н водным раствором гидроксида натрия, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт перетирают с дихлорметаном, фильтруют и сушат при пониженном давлении. Продукт извлекают в дихлорметане/метаноле (4:1, 25 мл) и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (1 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрируют, и преципитат фильтруют и промывают простым диэтиловым эфиром. Продукт сушат при пониженном давлении.

Выход: 42 мг примера 39 в виде HCl соли (29%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=351, RT=1,073 мин

Пример 40

Получение примера 40

Пример 40 получают, следуя общей схеме 1.

Получение промежуточного соединения 78

2-Метилпропаноилхлорид (50 мкл, 0,46 ммоль) добавляют по каплям в атмосфере азота при 0°C к раствору промежуточного соединения 75 (200 мг, 0,38 ммоль) и триэтиламина (264 мкл, 1,90 ммоль) в безводном дихлорметане (2 мл). Смесь перемешивают в течение 1 часа, давая ей возможность для достижения комнатной температуры. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Выход: 215 мг промежуточного соединения 78 (100%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=564, RT=0,977 мин

Получение примера 40

Тиофенол (50 мкл, 0,47 ммоль) и карбонат цезия (495 мг, 1,52 ммоль) суспендируют в N,N-диметилформамиде (2 мл), и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 минут. Добавляют промежуточное соединение 78 (215 мг, 0,38 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляют дихлорметан, и органический слой промывают водой и 1 н водным раствором гидроксида натрия, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт перетирают дихлорметаном, фильтруют и сушат при пониженном давлении. Продукт извлекают в дихлорметане/метаноле (4:1, 25 мл) и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (1 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрируют, и преципитат фильтруют и промывают простым диэтиловым эфиром. Продукт сушат при пониженном давлении.

Выход: 37 мг примера 40 в виде HCl соли (23%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=379, RT=1,911 мин

Пример 41

Получение примера 41

Пример 41 получают, следуя общей схеме 1.

Получение промежуточного соединения 79

Смесь промежуточного соединения 75 (204 мг, 0,38 ммоль), 3-метоксипропановой кислоты (40 мкл, 0,42 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (323 мкл, 1,90 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 10 минут. Добавляют O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (174 мг, 0,46 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют дихлорметан. Органический слой промывают водой, 1 н водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 6% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 210 мг промежуточного соединения 79 (95%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=580, RT=0,897 мин

Получение примера 41

Тиофенол (40 мкл, 0,43 ммоль) и карбонат цезия (235 мг, 0,72 ммоль) суспендируют в N,N-диметилформамиде (2 мл). Добавляют промежуточное соединение 79 (210 мг, 0,36 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. Добавляют дихлорметан, и органический слой промывают водой и 1 н водным раствором гидроксида натрия, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 10% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт извлекают в метаноле (0,57 мл) и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (1 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. Преципитат фильтруют и промывают метанолом. Продукт сушат при пониженном давлении.

Выход: 28 мг примера 41 в виде HCl соли (18%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=395, RT=1,138 мин

Пример 42

Получение примера 42

Пример 42 получают, следуя общей схеме 1.

Получение промежуточного соединения 80

Бутаноилхлорид (50 мкл, 0,46 ммоль) добавляют по каплям в атмосфере азота при 0°C к раствору промежуточного соединения 75 (200 мг, 0,38 ммоль) и триэтиламина (264 мкл, 1,90 ммоль) в безводном дихлорметане (2 мл). Смесь перемешивают в течение 1 часа, давая ей возможность для достижения комнатной температуры. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт перетирают с метанолом, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 215 мг примера 80 (100%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=564, RT=0,980 мин

Получение примера 42

Тиофенол (390 мкл, 0,47 ммоль) и карбонат калия (630 мг, 4,56 ммоль) суспендируют в ацетонитриле (4 мл), и смесь перемешивают при 70°C в течение 30 минут. Добавляют промежуточное соединение 80 (215 мг, 0,38 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при 90°C в течение 48 часов. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и добавляют гидроксид натрия (456 мг, 11,4 ммоль). Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток растворяют в дихлорметане. Органический слой промывают с 1 н водным раствором гидроксида натрия и насыщенным солевым раствором, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 10% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт извлекают в дихлорметане (20 мл) и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (1 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрируют, и полученное масло выпаривают совместно с простым диэтиловым эфиром (3x). Продукт сушат при пониженном давлении.

Выход: 8 мг примера 42 в виде HCl соли (5%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=379, RT=1,307 мин

Пример 43

Получение примера 43

Пример 43 получают, следуя общей схеме 1.

Получение промежуточного соединения 81

Смесь промежуточного соединения 75 (203 мг, 0,38 ммоль), 3-диметиламинопропановой кислоты (50 мкл, 0,42 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (323 мкл, 1,90 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 10 минут. Добавляют O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (174 мг, 0,46 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют дихлорметан. Органический слой промывают водой, 1 н водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 6% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 196 мг промежуточного соединения 81 (87%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=593, RT=0,696 мин

Получение примера 43

Тиофенол (40 мкл, 0,40 ммоль) и карбонат цезия (215 мг, 0,66 ммоль) суспендируют в N,N-диметилформамиде (2 мл). Добавляют промежуточное соединение 81 (196 мг, 0,33 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают водой и 1 н водным раствором гидроксида натрия, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 10% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 30 мг примера 43 (22%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=408, RT=0,733 мин

Пример 44

Получение примера 44

Пример 44 получают, следуя общей схеме 2.

Получение промежуточного соединения 82

Смесь 3-бром-5-хлор-пиразоло[1,5-a]пиримидина (2,0 г, 8,60 ммоль), метил 2-аминоацетат гидрохлорида (2,16 г, 17,2 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (7,51 мл, 43,0 ммоль) в ацетонитриле (25,8 мл) нагревают с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате и промывают водой. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 67% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 1,72 г промежуточного соединения 82 (70%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=286, RT=2,402 мин

Получение промежуточного соединения 83

Смесь промежуточного соединения 82 (1,72 г, 6,03 ммоль), трет-бутоксикарбонильного ангидрида (1,38 г, 6,33 ммоль), триэтиламина (922 мкл, 6,63 ммоль) и 4-(диметиламино)пиридина (37 мг, 0,30 ммоль) в тетрагидрофуране (18 мл) нагревают с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате и промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 1,9 г промежуточного соединения 83 (82%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=386, RT=0,998 мин

Получение промежуточного соединения 84

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 30 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют промежуточное соединение 83 (1,90 г, 4,93 ммоль), (3-гидроксифенил)бороновую кислоту (1,02 г, 7,40 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (116 мг, 0,10 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (186 мг, 0,39 ммоль) и трехосновный фосфат калия (5,23 г, 5 экв.) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 80°C в течение 16 часов. Дополнительно добавляют (3-гидроксифенил)бороновую кислоту (0,51 г, 3,70 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (58 мг, 0,05 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (93 мг, 0,195 ммоль) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 80°C в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают водой. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 1,48 г промежуточного соединения 84 (75%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=399, RT=3,462 мин

Получение промежуточного соединения 85

Промежуточное соединение 84 (800 мг, 2,01 ммоль), трет-бутил N-(3-гидроксипропил)карбамат (490 мг, 2,81 ммоль) и трифенилфосфин (949 мг, 3,62 ммоль) суспендируют в сухом тетрагидрофуране (12 мл/ммоль). Добавляют диизопропилазодикарбоксилат (713 мкл, 3,62 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 900 мг промежуточного соединения 85 (81%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=578 (MW+Na), RT=4,384 мин

Получение промежуточного соединения 86

Промежуточное соединение 85 (0,900 г, 1,62 ммоль) и моногидрат гидроксида лития (70 мг, 1,78 ммоль) в смеси тетрагидрофуран/метанол/вода (2:2:1, 4,86 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Дополнительно добавляют моногидрат гидроксида лития (30 мг, 0,76 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=442 (MW-Boc), RT=1,100 мин

Получение промежуточного соединения 87

Промежуточное соединение 86 (877 мг, 1,62 ммоль) перемешивают в смеси трифторуксусной кислоты (5 мл) в дихлорметане (5 мл), и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток обрабатывают толуолом, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Промежуточное соединение 87 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=342, RT=1,573 мин

Получение примера 44

Суспензию промежуточного соединения 87 (553 мг, 1,62 ммоль) в N,N-диметилформамиде (55 мл) добавляют по каплям к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (1,84 г, 4,86 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (4,244 мл, 24,30 ммоль) в N,N-диметилформамиде (110 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляют раствор аммиака в воде, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают насыщенным водным раствором карбоната натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 115 мг примера 44 (22%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=324, RT=1,071 мин

Пример 45

Получение примера 45

Пример 45 получают, следуя общей схеме 2.

Гидрид натрия (60% в минеральном масле, 30 мг, 0,85 ммоль) добавляют к раствору примера 33 (293 мг, 0,77 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2,31 мл). Смесь перемешивают при 60ºC в течение 30 минут и добавляют йодметан (57 мкл, 0,92 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 60°C в течение 90 минут. Добавляют воду и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 минут. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт извлекают в дихлорметане/метаноле (4:1, 45 мл) и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (80 мкл, 0,31 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 101 мг примера 45 в виде HCl соли (30%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=395, RT=1,225 мин

Пример 46

Получение примера 46

Пример 46 получают, следуя общей схеме 2.

Получение промежуточного соединения 88

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 16,55 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют промежуточное соединение 6 (2,518 г, 5,518 ммоль), (3-формилфенил)бороновую кислоту (1,076 г, 7,173 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (128 мг, 0,11 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (210 мг, 0,44 ммоль) и трехосновный фосфат калия (5,856 г, 5 экв.) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 80°C в течение 15 часов. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 50% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 2,366 г промежуточного соединения 88 (89%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=482, RT=1,186 мин

Получение промежуточного соединения 89

Смесь промежуточного соединения 88 (2,170 г, 4,797 ммоль), метил 3-аминопропаноата гидрохлорида (1,67 г, 11,99 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (2,039 мл, 11,99 ммоль) перемешивают в смеси 1,2-дихлорэтан/метанол (1:1, 14,39 мл) при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляют порциями триацетоксиборогидрид натрия (2,541 г, 11,99 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 часов. Дополнительно добавляют метил 3-аминопропаноат гидрохлорид (670 мг, 4,797 ммоль), N,N-диизопропилэтиламин (1,63 мл, 9,594 ммоль) и триацетоксиборогидрид натрия (1,016 г, 4,797 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток растворяют в этилацетате. Органический слой промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 100% этилацетата), а затем дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 50:1 до 9:1 метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 2,170 г промежуточного соединения 89 (80%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=569, RT=0,743 мин

Получение промежуточного соединения 90

2-Нитробензолсульфонилхлорид (600 мг, 2,70 ммоль) добавляют порциями при 0°C и в атмосфере азота к раствору промежуточного соединения 89 (1,022 г, 1,797 ммоль) и триэтиламина (624 мкл, 4,49 ммоль) в безводном дихлорметане (5,39 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 часов, давая ей возможность для достижения комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляют дихлорметаном и промывают водой. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 80% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=775 (MW+Na), RT=1,240 мин

Получение промежуточного соединения 91

6 н раствор HCl (12 мл/ммоль, 22 мл) добавляют к раствору промежуточного соединения 89 (1,373 г, 1,821 ммоль) в тетрагидрофуране (12 мл/ммоль, 22 мл). Смесь перемешивают в герметичной пробирке при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют толуол, и дважды выпаривают. Остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Получение промежуточного соединения 92

Раствор промежуточного соединения 91 (1,048 г, 1,82 ммоль) в N,N-диметилформамиде (55 мл) добавляют по каплям к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (2,07 г, 5,46 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (9,286 мл, 54,60 ммоль) в N,N-диметилформамиде (127 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 50:1 до 9:1 метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=522, RT=0,793 мин

Получение примера 46

Тиофенол (220 мкл, 2,12 ммоль) и карбонат цезия (577 мг, 1,77 ммоль) добавляют к раствору промежуточного соединения 92 (923 мг, 1,77 ммоль) в N,N-диметилформамиде (3,5 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 часов. Добавляют этилацетат, и преципитат фильтруют и сушат при пониженном давлении. Продукт извлекают в дихлорметане/метаноле (4:1, 20 мл), и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (80 мкл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 96 мг примера 46 в виде HCl соли (15%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=337, RT=0,998 мин

Пример 47

Получение примера 47

Пример 47 получают, следуя общей схеме 2.

Пример 46 (100 мг, 0,297 ммоль) и формальдегид (37%, 10 мкл, 0,36 ммоль) перемешивают в 1,2-дихлорэтане при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляют триацетоксиборогидрид натрия (125 мг, 0,59 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт извлекают в дихлорметане/метаноле (4:1, 30 мл) и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (60 мкл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 80 мг примера 47 в виде соли HCl (70%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=351, RT=1,036 мин

Пример 48

Получение примера 48

Пример 48 получают, следуя общей схеме 2.

Смесь примера 36 (170 мг, 0,551 ммоль) и карбоната калия (115 мг, 0,83 ммоль) в N,N-диметилформамиде (1,65 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 15 минут. Добавляют йодметан (30 мкл, 0,55 ммоль) и смесь перемешивают при 60°C в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт извлекают в дихлорметане/метаноле (4:1, 40 мл) и добавляют 4 н раствор HCl в 1,4-диоксане (60 мкл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 69 мг примера 48 в виде HCl соли (35%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=323, RT=1,605 мин

Пример 49

Получение примера 49

Пример 49 получают, следуя общей схеме 2.

Получение промежуточного соединения 93

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 200 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют промежуточное соединение 5 (7,50 г, 21,05 ммоль), (3-формилфенил)бороновую кислоту (6,35 г, 27,37 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (128 мг, 0,11 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (487 мг, 0,42 ммоль) и трехосновный фосфат калия (22 г, 5 экв.) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 80°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждают и добавляют этилацетат. Органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 5,53 г промежуточного соединения 93 (69%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=382, RT=0,882 мин

Получение промежуточного соединения 94

Триацетоксиборогидрид натрия (3,00 г, 14,16 ммоль) добавляют к смеси промежуточного соединения 93 (2,70 г, 7,08 ммоль), метил (2R)-2-аминопропаноата гидрохлорида (0,99 г, 7,08 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (0,981 мл, 7,08 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (105 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют насыщенный водный раствор бикарбоната натрия, и органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 3,01 г промежуточного соединения 94 (71%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=469, RT=0,532 мин

Получение промежуточного соединения 95

6 н раствор HCl (12 мл/ммоль, 35 мл) добавляют к раствору промежуточного соединения 94 (2,70 г, 5,76 ммоль) в тетрагидрофуране (12 мл/ммоль, 35 мл). Смесь перемешивают при 70°C в течение ночи. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении. Продукт используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=355, RT=0,204 мин

Получение примера 49

Раствор промежуточного соединения 95 (2,25 г, 5,76 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (10,06 мл, 57,6 ммоль) в N,N-диметилформамиде (40 мл) добавляют по каплям к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (2,07 г, 5,46 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (10,06 мл, 57,6 ммоль) в N,N-диметилформамиде (20 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа после завершения добавления. Добавляют 7 н раствор аммиака в метаноле. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и водой. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт перетирают с ацетонитрилом, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 292 мг примера 49 (15%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=337, RT=1,090 мин

Пример 50

Получение примера 50

Получение промежуточного соединения 96

13-[2-(Бензилокси)этил]-7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен получают в соответствии со сходными процедурами синтеза, как описано для получения промежуточного соединения 7, с использованием трет-бутил N-[2-(2-бензилоксиэтиламино)этил]-N-[2-(трет-бутил(диметил)силил)-оксиэтил]карбамата для связывания со скелетной структурой и (3-гидроксифенил)бороновой кислоты для связывания Сузуки. Замыкание кольца осуществляют после снятия защиты с помощью TBDMS с использованием условий Мицунобу. Незащищенный 13-[2-(бензилокси)этил]-7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]-докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен получают после снятия защиты с помощью Boc при кислотных условиях.

Циклопропанкарбонилхлорид (10 мкл, 0,08 ммоль) добавляют к раствору 13-[2-(бензилокси)этил]-7-окса-10,13,17,18,21- пентаазатетрацикло[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза- 1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаена (30 мг, 0,07 ммоль) и триэтиламина (11 мкл, 0,08 ммоль) в дихлорметане (2 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 1 часа. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=498, RT=1,109 мин

Получение примера 50

Суспензию промежуточного соединения 96 (35 мг, 0,07 ммоль) и палладия (0,07 ммоль) в тетрагидрофуране/метаноле (1:1, 10 мл)) перемешивают в атмосфере водорода в течение 2 дней. Твердый продукт удаляют посредством фильтрования через целит. Растворитель из фильтрата удаляют при пониженном давлении, и остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 12 мг примера 50 (42%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=408, RT=2,247 мин

Пример 51

Получение примера 51

Пример 51 получают, следуя общей схеме 2.

Пример 51 получают в соответствии с процедурами, используемыми для получения примера 49, за исключением того, что используют метил (2S)-2-аминопропаноат гидрохлорид вместо метил (2R)-2-аминопропаноата гидрохлорида на стадии восстановительного аминирования.

Метод ЖХ-МС 2 пример 51: MH⁺=337, RT=1,074 мин

Пример 52

Получение примера 52

Пример 52 получают, следуя общей схеме 1.

Получение промежуточного соединения 97

Промежуточное соединение 52 (350 мг, 0,78 ммоль) и гидрид натрия (60% в минеральном масле, 90 мг, 1,17 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (2,34 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 минут и добавляют по каплям йодметан (60 мкл, 0,94 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана, этилацетата, дихлорметана и дихлорметана:метанола (9:1) (от 20% до 100% этилацетата и от 50% до 100% дихлорметана:метанола 9:1). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 147 мг промежуточного соединения 97 (40%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=366 (MW-Boc), RT=0,739 мин

Получение примера 52

Промежуточное соединение 92 (147 мг, 0,32 ммоль) растворяют в 4 н растворе HCl в метаноле (6 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт перетирают с простым диэтиловым эфиром, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 25 мг примера 52 (21%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=366, RT=2,210 мин

Пример 53

Получение примера 53

Пример 53 получают, следуя общей схеме 1.

5-Метокси-7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен получают в соответствии со сходными процедурами синтеза, как описано для получения промежуточного соединения 7, с использованием промежуточного соединения 4 для связывания со скелетной структурой и (3-гидрокси-4-метокси-фенил)бороновой кислоты для связывания Сузуки. Замыкание кольца осуществляют после снятия защиты с помощью TBDMS с использованием условий Мицунобу. Незащищенный 5-метокси-7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен получают после снятия защиты с помощью Boc при кислотных условиях.

5-Метокси-7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен гидрохлорид (105 мг, 0,32 ммоль) и триэтиламин (67 мкл, 0,48 ммоль) перемешивают в сухом тетрагидрофуране (0,96 мл). Добавляют циклопропанкарбонилхлорид (40 мкл, 0,35 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт перетирают с метанолом, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 44 мг примера 53 (35%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=394, RT=2,908 мин

Пример 54

Получение примера 54

Пример 54 получают, следуя общей схеме 4.

7,10,13,17,18,21-Гексаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен-8-он получают в соответствии со сходными процедурами синтеза, как описано для получения примера 54, с использованием промежуточного соединения 95 и [3-(трет-бутоксикарбониламино)фенил]бороновой кислоты для связывания Сузуки. Замыкание кольца осуществляют после снятия защиты с помощью Boc и реакции с метил 2-бромацетатом с использованием условий связывания с применением HBTU. Незащищенный 7,10,13,17,18,21-гексаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен-8-он получают после снятия защиты с нозила с использованием тиофенола.

7,10,13,17,18,21-Гексаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен-8-он (25 мг, 0,08 ммоль) и триэтиламин (14 мкл, 0,10 ммоль) перемешивают в сухом тетрагидрофуране (240 мкл). Добавляют циклопропанкарбонилхлорид (10 мкл, 0,09 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт перетирают с метанолом, фильтруют и сушат при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле. Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт перекристаллизуют в горячем метаноле/дихлорметане (4:1).

Выход: 12 мг примера 54 (40%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=377, RT=2,331 мин

Пример 55

Получение примера 55

Пример 55 получают, следуя общей схеме 2.

Получение промежуточного соединения 98

Гидрид натрия (60% в минеральном масле, 1,032 г, 25,81 ммоль) добавляют к раствору 3-бром-5-хлор-пиразоло[1,5-a]пиримидина (1,50 г, 6,452 ммоль) в сухом N,N-диметилформамиде (19,36 мл). Добавляют трет-бутил N-(2-гидроксиэтил)карбамат (4,52 г, 25,81 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут. Реакционную смесь охлаждают на ледяной бане и добавляют воду. Смесь перемешивают в течение 5 минут. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 20% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 1,376 мг промежуточного соединения 98 (57%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=372, RT=0,928 мин

Получение промежуточного соединения 99

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 21 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют промежуточное соединение 98 (1,32 г, 3,556 ммоль), (3-аминофенил)бороновую кислоту (610 мг, 3,91 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (81 мг, 0,07 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (133 мг, 0,28 ммоль) и трехосновный фосфат калия (3,778 г, 5 экв.) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 85°C в течение 15 часов. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают водой. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 25% до 66% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 1,115 г промежуточного соединения 99 (82%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=384, RT=0,729 мин

Получение промежуточного соединения 100

Пиридин (219 мкл, 2,71 ммоль) добавляют к суспензии промежуточного соединения 99 (1,04 г, 2,712 ммоль) и тетрагидрофуран-2,5-диона (540 мг, 5,42 ммоль) в тетрагидрофуране (8,14 мл). Смесь перемешивают при 80ºC в течение 3 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают 1 н водным раствором HCl. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 10% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Получение промежуточного соединения 101

Промежуточное соединение 100 (1,311 г, 2,712 ммоль) перемешивают при комнатной температуре в 4 н растворе HCl в 1,4-диоксане (8,14 мл) в течение 3 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют толуол и выпаривают (2x).

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=384, RT=0,352 мин

Получение примера 55

Раствор промежуточного соединения 101 (1,062 г, 2,53 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (1,291 мл, 7,59 ммоль) в N,N-диметилформамиде (8 мл) добавляют по каплям в течение периода 1 час к раствору 1-гидроксибензотриазола гидрата (1,03 г, 7,59 ммоль) и N,N′-диизопропилкарбодиимида (1,183 г, 7,59 ммоль) в N,N-диметилформамиде (18 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 76 мг примера 56 (8%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=366, RT=2,158 мин

Пример 56

Получение примера 56

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен-4-карбоксамид гидрохлорид получают в соответствии со сходными процедурами синтеза, как описано для получения промежуточного соединения 7, с использованием промежуточного соединения 4 для связывания со скелетной структурой и (3-гидрокси-5-метоксикарбонил-фенил)бороновой кислоты для связывания Сузуки. Замыкание кольца осуществляют после снятия защиты с помощью TBDMS с использованием условий Мицунобу. Сложный метиловый эфир на фенильном кольце преобразуют в карбоксамид с помощью омыления и последующего образования амида с использованием хлорида аммония при условиях связывания с использованием HBTU. Незащищенный 7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен-4-карбоксамид гидрохлорид получают после снятия защиты с помощью Boc при кислотных условиях.

7-Окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2,4,6(22),14(21),15,18-гептаен-4-карбоксамид гидрохлорид (120 мг, 0,32 ммоль) и триэтиламин (111 мкл, 0,80 ммоль) перемешивают в сухом тетрагидрофуране (0,96 мл). Добавляют циклопропанкарбонилхлорид (40 мкл, 0,35 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Дополнительно добавляют циклопропанкарбонилхлорид (15 мкл, 0,13 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 31 мг примера 56 (24%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=407, RT=2,276 мин

Пример 57

Получение примера 57

Пример 57 получают, следуя общей схеме 1.

Пример 57 получают как побочный продукт в течение образования амидной связи, осуществляемого для получения примера 9.

Выход: 125 мг примера 57

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=350, RT=2,915 мин

Пример 58

Получение примера 58

Пример 58 получают, следуя общей схеме 1.

Смесь примера 14 (117 мг, 0,33 ммоль) и карбоната калия (68 мг, 0,49 ммоль) в N,N-диметилформамиде (1 мл) перемешивают при комнатной температуре. Добавляют йодметан (20 мкл, 0,40 ммоль) и смесь перемешивают при 60°C в течение 19 часов. Дополнительно добавляют карбонат калия (68 мг, 0,49 ммоль) и йодметан (20 мкл, 0,40 ммоль) и смесь перемешивают при 60°C в течение еще 10 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 14 мг примера 58 (12%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=365, RT=3,060 мин

Пример 59

Получение примера 59

Пример 59 получают, следуя общей схеме 2.

Пример 59 получают в соответствии с процедурами, применяемыми для получения примера 44, за исключением того, что для реакции Мицунобу используют трет-бутил N-[2-(2-гидроксиэтокси)этил]карбамат. Замыкание кольца осуществляют в соответствии со следующей далее процедурой. Раствор 2-[[3-[3-[2-(2-аминоэтокси)этокси]фенил]пиразоло[1,5-a]пиримидин-5-ил]амино]уксусной кислоты (152 мг, 0,41 ммоль) в N,N-диметилформамиде (28 мл) добавляют к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (470 мг, 1,23 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (795 мкл, 6,015 ммоль) в N,N-диметилформамиде (13 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 10% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 44 мг примера 59 (30%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=354, RT=2,218 мин

Пример 60

Получение примера 60

Пример 60 получают, следуя общей схеме 2.

Пример 60 получают в соответствии с процедурами, сходными с теми, которые применяют для получения примера 44, за исключением того, что для реакции Мицунобу используют трет-бутил N-(4-гидроксибутил)карбамат. Замыкание кольца осуществляют в соответствии со следующей далее процедурой. Раствор 2-[[3-[3-(4-аминобутокси)фенил]пиразоло[1,5-a]пиримидин-5-ил]амино]уксусной кислоты (131 мг, 0,37 ммоль) в N,N-диметилформамиде (24 мл) добавляют к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (420 мг, 1,11 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (717 мкл, 5,55 ммоль) в N,N-диметилформамиде (13 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 10% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 24 мг примера 60 (19%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=338, RT=2,425 мин

Пример 61

Получение примера 61

Пример 61 получают, следуя общей схеме 3.

Получение промежуточного соединения 102

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 6,39 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют трет-бутил N-[3-[(3-бромпиразоло[1,5-a]пиримидин-5-ил)-трет-бутоксикарбонил-амино]пропил]карбамат (1,00 г, 2,13 ммоль), (3-гидрокси-4-метоксикарбонил-фенил)бороновую кислоту (710 мг, 2,56 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (46 мг, 0,04 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (81 мг, 0,17 ммоль) и трехосновный фосфат калия (2,26 г, 5 экв.) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 85°C в течение 15 часов. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют этилацетат и органический слой промывают водой. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Получают смесь сложного метилового эфира и карбоновой кислоты. Два соединения разделяют с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 100% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Карбоновую кислоту используют на следующей стадии.

Выход: 735 г промежуточного соединения 102 (65%)

Получение промежуточного соединения 103

1-Гидроксибензотриазол (243 мг, 1,80 ммоль) добавляют к раствору промежуточного соединения 102 (631 мг, 1,20 ммоль), хлорида аммония (100 мг, 1,80 ммоль) и N,N'-диизопропилметандиимина (280 мкл, 1,80 ммоль) в N,N-диметилформамиде (3,60 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом и промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 100% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 568 мг примера 103 (90%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=427 (MW-Boc), RT=1,095 мин

Получение промежуточного соединения 104

Смесь промежуточного соединения 103 (518 мг, 0,98 ммоль), метил 2-бромацетата (140 мг, 1,47 ммоль) и карбоната калия (271 мг, 1,96 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2,94 мл) перемешивают при 80°C в течение 3 часов. Добавляют этилацетат, и органический слой промывают водой. Преципитат в органической фазе фильтруют. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют метанол, и преципитат фильтруют и сушат. Два преципитата соединяют.

Выход: 0,337 мг промежуточного соединения 104 (57%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=599, RT=1,053 мин

Получение промежуточного соединения 105

Промежуточное соединение 104 (287 мг, 0,48 ммоль) и моногидрат гидроксида лития (40 мг, 0,96 ммоль) суспендируют в смеси тетрагидрофурана, метанола и воды (2:2:1, 1,44 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и продукт используют без дополнительной очистки на следующей стадии.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=585, RT=0,936 мин

Получение промежуточного соединения 106

Промежуточное соединение 105 (327 мг, 0,56 ммоль) перемешивают в течение 6 часов при комнатной температуре в 4 н растворе HCl в 1,4-диоксане (1,68 мл). Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют толуол, и удаляют при пониженном давлении. Продукт используют без дополнительной очистки на следующей стадии.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=385, RT=0,286 мин

Получение примера 61

Раствор промежуточного соединения 106 (168 мг, 0,40 ммоль) в N,N-диметилформамиде (12 мл) добавляют по каплям к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (460 мг, 1,20 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (1012 мкл, 6,00 ммоль) в N,N-диметилформамиде (28 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 40 мг примера 61 (27%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=367, RT=1,771 мин

Пример 62

Получение примера 62

Пример 62 получают, следуя общей схеме 4.

Получение промежуточного соединения 107

Смесь 3-бром-6-хлор-имидазо[2,1-f]пиридазина (3,00 г, 12,90 ммоль), бензил N-(2-аминоэтил)карбамата гидрохлорида (11,90 г, 51,60 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (13,52 мл, 77,40 ммоль) в н-бутаноле (38,7 мл) нагревают в течение 72 часов при 150°C в герметичной пробирке. Реакционную смесь охлаждают и добавляют этилацетат. Органический слой промывают 1 н водным раствором HCl, водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 3% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 2,70 г промежуточного соединения 107 (54%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=391, RT=0,650 мин

Получение промежуточного соединения 108

трет-Бутоксикарбонильный ангидрид (760 мг, 3,48 ммоль) добавляют к раствору промежуточного соединения 107 (1,13 г, 2,90 ммоль) в тетрагидрофуране (8,70 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 дней. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 50% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 840 мг промежуточного соединения 108 (59%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=490, RT=1,062 мин

Получение промежуточного соединения 109

Промежуточное соединение 108 (840 мг, 1,71 ммоль), (3-гидроксифенил)бороновую кислоту (350 мг, 1,50 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (67 мг, 0,14 ммоль) и трехосновный фосфат калия (1,80 г, 5 экв.) растворяют в смеси 1,4-диоксана и воды (3:1, 5,13 мл), и смесь дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (81 мг, 0,07 ммоль) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 70°C в течение 18 часов. Реакционную смесь охлаждают и добавляют этилацетат. Органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт перетирают с дихлорметаном, фильтруют и сушат при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 2% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 740 г промежуточного соединения 109 (86%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=504, RT=0,948 мин

Получение промежуточного соединения 110

Промежуточное соединение 109 растворяют в смеси метанола и тетрагидрофурана (3:1, 30 мл), дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь и добавляют палладий (160 мг, 1,47 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 7 часов. Реакционную смесь фильтруют над декалитом и промывают метанолом. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=370, RT=0,451 мин

Получение промежуточного соединения 111

Промежуточное соединение 110 (460 мг, 1,25 ммоль), 2-гидроксиуксусную кислоту (100 мг, 1,38 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (328 мкл, 1,88 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (3,75 мл). Добавляют O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) (569 мг, 1,38 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь выливают в воду, и водный слой экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором, сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 5% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 150 мг промежуточного соединения 111 (28%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=428, RT=0,586 мин

Получение промежуточного соединения 112

Все растворы дегазируют посредством барботирования газообразного азота через эти растворы. Раствор промежуточного соединения 111 (150 мг, 0,35 ммоль) в 2-метилтетрагидрофуране (20 мл/ммоль) и раствор диизопропилазодикарбоксилата (210 мкл, 1,05 ммоль) в толуоле (20 мл/ммоль) добавляют одновременно в течение периода в 2 часа к раствору трифенилфосфина (275 мг, 1,05 ммоль) в толуоле (75 мл/ммоль промежуточного соединения 111) при 90°C. Смесь перемешивают при 90°C в течение 1 часа. Дополнительно добавляют по каплям трифенилфосфин (275 мг, 1,05 ммоль) и диизопропилазодикарбоксилат (210 мкл, 1,05 ммоль). Смесь перемешивают при 90°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 15 мг промежуточного соединения 112 (10%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=410, RT=2,432 мин

Получение примера 62

Промежуточное соединение 112 (15 мг, 0,04 ммоль) перемешивают в течение 3 часов при комнатной температуре в 4 н растворе HCl в 1,4-диоксане (200 мкл). Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют простой диэтиловый эфир, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 10 мг примера 62 (81%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=310, RT=1,168 мин

Пример 63

Получение примера 63

Пример 63 получают, следуя общей схеме 2.

Пример 63 получают в соответствии со сходными процедурами, применяемыми для получения примера 3, за исключением того, что для связывания Сузуки используют (3-фтор-5-гидрокси-фенил)бороновую кислоту. Замыкание кольца осуществляют в соответствии со следующей далее процедурой. Раствор 3-[[3-[3-(2-аминоэтокси)-5-фтор-фенил]пиразоло[1,5-a]пиримидин-5-ил]амино]пропионовой кислоты (27 мг, 0,08 ммоль) в N,N-диметилформамиде (0,9 мл) добавляют по каплям к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (30 мг, 0,08 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (204 мкл, 1,20 ммоль) в N,N-диметилформамиде (1,9 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 5 мг примера 63 (18%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=342, RT=2,556 мин

Пример 64

Получение примера 64

Пример 64 получают, следуя общей схеме 1.

Получение промежуточного соединения 113

Промежуточное соединение 113 получают в соответствии с процедурами, сходными с теми, которые применяют для получения 10,13-ди-трет-бутил 7-окса-10,13,17,18,21-пентаазатетрацикло-[12.5.2.1^{2,6}.0^{17,20}]докоза-1(20),2(22),3,5,14(21),15,18-гептаен-10,13-дикарбоксилата, за исключением того, что используют (3-гидрокси-5-метоксикарбонил-фенил)бороновую кислоту для связывания Сузуки. Замыкание кольца осуществляют в соответствии со следующей далее процедурой. Раствор метил 3-[5-[трет-бутоксикарбонил-[2-(трет-бутоксикарбонил(2-гидроксиэтил)-амино)этил]амино]пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-ил]-5-гидрокси-бензоата (8,946 г, 15,65 ммоль) в 2-метилтетрагидрофуране (20 мл/ммоль) и раствор диизопропилазодикарбоксилата (9,31 мл, 46,95 ммоль) в толуоле (20 мл/ммоль) добавляют одновременно в течение периода в 3 часа к раствору трифенилфосфина (12,315 г, 46,95 ммоль) в толуоле (75 мл/ммоль) при 90°C. Смесь перемешивают при 90°C в течение 30 минут. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 10% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 7,698 мг промежуточного соединения 113 (89%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=554, RT=1,470 мин

Получение промежуточного соединения 114

Промежуточное соединение 113 (2,00 г, 3,61 ммоль) и моногидрат гидроксида лития (450 мг, 10,83 ммоль) в смеси тетрагидрофуран/метанол/вода (2:2:1, 40 мл) перемешивают при 50°C в течение 15 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют воду и добавляют 1 н раствор HCl для подкисления раствора до pH 5-6. Преципитат фильтруют, промывают метанолом и сушат при пониженном давлении. Остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=440, RT=0,860 мин

Получение промежуточного соединения 115

1-Гидроксибензотриазол (600 мг, 3,84 ммоль) добавляют к раствору промежуточного соединения 114 (1,123 г, 2,56 ммоль) в сухом тетрагидрофуране (7,68 мл). Добавляют N,N'-диизопропилметандиимин (598 мкл, 3,84 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляют воду, и водный слой экстрагируют этилацетатом. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и продукт используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=557, RT=1,190 мин

Получение промежуточного соединения 116

Борогидрид натрия (100 мг, 2,56 ммоль) добавляют при 0°C к суспензии промежуточного соединения 115 (1,42 г, 2,56 ммоль) в сухом тетрагидрофуране (7,68 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Дополнительно добавляют борогидрид натрия (20 мг, 0,512 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение еще 1 часа. Добавляют воду, и продукт экстрагируют этилацетатом. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 100% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 357 мг промежуточного соединения 116 (33%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=426, RT=0,792 мин

Получение промежуточного соединения 117

Промежуточное соединение 116 (482 мг, 1,13 ммоль) перемешивают в 4 н растворе HCl в 1,4-диоксане (4 мл/ммоль) при комнатной температуре в течение 3 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют толуол и удаляют его при пониженном давлении. Продукт используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=362, RT=1,391 мин

Получение промежуточного соединения 118

Трет-бутилдиметилсилилхлорид (180 мг, 1,19 ммоль) добавляют порциями к раствору промежуточного соединения 117 (358 мг, 0,99 ммоль) и триэтиламина (441 мкл, 3,17 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2,97 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов. Дополнительно добавляют трет-бутилдиметилсилилхлорид (180 мг, 1,19 ммоль) и триэтиламин (441 мкл, 3,17 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение следующих 17 часов. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 10% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 356 мг промежуточного соединения 118 (82%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=440, RT=0,823 мин

Получение промежуточного соединения 119

Смесь промежуточного соединения 118 (356 мг, 0,81 ммоль) и триэтиламина (170 мкл, 1,22 ммоль) в сухом тетрагидрофуране (2,43 мл) перемешивают и добавляют циклопропанкарбонилхлорид (80 мкл, 0,89 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток перетирают в метаноле, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 343 мг промежуточного соединения 119 (83%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=508, RT=4,608 мин

Получение примера 64

Раствор тетрабутиламмония фторида (1M раствор в тетрагидрофуране, 0,48 мл, 0,48 ммоль) и промежуточного соединения 119 (224 мг, 0,44 ммоль) в тетрагидрофуране (1,32 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток перетирают в метаноле, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Выход: 158 мг примера 64 (91%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=394, RT=2,426 мин

Пример 65

Получение примера 65

Пример 65 получают, следуя общей схеме 1.

Смесь примера 38 (52 мг, 0,14 ммоль) и формальдегида (37% раствор, 5,4 мкл, 1,17 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (0,42 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляют триацетоксиборогидрид натрия (59 мг, 0,28 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и продукт экстрагируют смесью дихлорметана и метанола (9:1). Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 10% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении.

Выход: 28 мг примера 65 (51%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=391, RT=0,314 мин

Пример 66

Получение примера 66

Пример 66 получают, следуя общей схеме 2.

Получение промежуточного соединения 120

2-Аминоэтанол (570 мкл, 9,46 ммоль) добавляют к раствору 3-бром-5-хлор-пиразоло[1,5-a]пиримидина (2,00 г, 8,60 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (1,803 мл, 10,32 ммоль) в ацетонитриле (25,80 мл). Реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение ночи. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 2,10 г промежуточного соединения 120 (95%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=258, RT=0,386 мин

Получение промежуточного соединения 121

К раствору промежуточного соединения 120 (2,10 г, 8,17 ммоль) в дихлорметане (24,51 мл) добавляют ди(имидазол-1-ил)метанон (1,99 г, 12,25 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Преципитат фильтруют, промывают дихлорметаном и сушат при пониженном давлении. Продукт используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Выход: 2,26 г промежуточного соединения 121 (79%)

Получение промежуточного соединения 122

3-(Трет-бутил(диметил)силил)оксипропан-1-амин (1,08 г, 5,70 ммоль) добавляют к суспензии промежуточного соединения 121 (1,00 г, 2,85 ммоль), триэтиламина (317 мкл, 3,13 ммоль) и N,N-диметилпиридин-4-амина (17 мг, 0,14 ммоль) в тетрагидрофуране (8,55 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разбавляют этилацетатом, и органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,16 г промежуточного соединения 122 (86%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=472, RT=1,156 мин

Получение промежуточного соединения 123

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 25 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют промежуточное соединение 122 (1,16 г, 2,46 ммоль), (3-гидроксифенил)бороновую кислоту (440 мг, 3,20 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (58 мг, 0,05 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (95 мг, 0,20 ммоль) и трехосновный фосфат калия (2,60 г, 5 экв.) и смесь перемешивают в атмосфере газообразного азота при 80°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждают, разбавляют этилацетатом, и органический слой промывают насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,10 г промежуточного соединения 123 (92%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=486, RT=1,118 мин

Получение промежуточного соединения 124

Тетрабутиламмония фторид (1M раствор в тетрагидрофуране, 3,40 мл, 3,39 ммоль) добавляют к раствору промежуточного соединения 123 (1,10 г, 2,26 ммоль) в тетрагидрофуране (6,78 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток разбавляют этилацетатом и промывают водой (3x) и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=372, RT=0,459 мин

Получение примера 66

Раствор промежуточного соединения 124 (408 мг, 1,10 ммоль) в 2-метилтетрагидрофуране (20 мл/ммоль) и раствор диизопропилазодикарбоксилата (650 мкл, 3,30 ммоль) в толуоле (20 мл/ммоль) добавляют одновременно в течение периода в 2 часа к раствору трифенилфосфина (866 мг, 3,30 ммоль) в толуоле (75 мл/ммоль промежуточного соединения 124) при 90°C. Смесь перемешивают при 90°C в течение 1 часа. Реакционную смесь охлаждают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов. Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают. Продукт перетирают с метанолом, фильтруют и сушат при пониженном давлении.

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=354, RT=2,785 мин

Пример 67

Получение примера 67

Пример 67 получают, следуя общей схеме 2.

Получение промежуточного соединения 125

Смесь 3-бром-5-хлор-пиразоло[1,5-a]пиримидина (1,55 г, 6,67 ммоль), метил 3-(2-метоксиэтиламино)пропаноата (1,08 г, 6,67 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (1,394 мл, 8,00 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) нагревают с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают, растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют этилацетат. Органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 5% до 70% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 1,05 г промежуточного соединения 125 (44%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=358, RT=1,072 мин

Получение промежуточного соединения 126

Смесь 1,4-диоксана и воды (3:1, 7,92 мл) дегазируют посредством барботирования газообразного азота через смесь. Добавляют промежуточное соединение 125 (943 мг, 2,64 ммоль), (3-гидроксифенил)бороновую кислоту (470 мг, 3,43 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (Xphos) (100 мг, 0,21 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (58 мг, 0,05 ммоль) и трехосновный фосфат калия (3,40 г, 5 экв.). Реакционную смесь перемешивают в атмосфере азота при 70°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают и добавляют этилацетат. Органический слой промывают водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат, фильтруют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 10% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Получают карбоновую кислоту.

Выход: 484 мг промежуточного соединения 126 (51%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=357, RT=0,600 мин

Получение промежуточного соединения 127

Серную кислоту (80 мкл, 1,51 ммоль) добавляют по каплям при 0°C к раствору промежуточного соединения 126 (538 мг, 1,51 ммоль) в метаноле (4,53 мл). Реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 4 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 5% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Получают карбоновую кислоту.

Выход: 338 мг промежуточного соединения 127 (60%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=371, RT=2,839 мин

Получение промежуточного соединения 128

Промежуточное соединение 127 (271 мг, 0,73 ммоль), трет-бутил N-(2-гидроксиэтил)карбамат (160 мг, 1,02 ммоль) и трифенилфосфин (365 мг, 1,39 ммоль) суспендируют в сухом тетрагидрофуране (5,84 мл). Добавляют диизопропилазодикарбоксилат (274 мкл, 1,39 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Дополнительно добавляют трет-бутил N-(2-гидроксиэтил)карбамат (160 мг, 1,02 ммоль), трифенилфосфин (365 мг, 1,39 ммоль) и диизопропилазодикарбоксилат (274 мкл, 1,39 ммоль), реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 дней. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием гептана и этилацетата в качестве элюентов (градиент элюирования от 10% до 90% этилацетата). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 211 мг промежуточного соединения 128 (56%)

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=514, RT=1,873 мин

Получение промежуточного соединения 129

Моногидрат гидроксида лития (10 мг, 0,35 ммоль) добавляют к раствору промежуточного соединения 128 (178 мг, 0,35 ммоль) в смеси тетрагидрофуран/метанол/вода (2:2:1, 1,05 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют толуол, и дважды выпаривают. Остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=500, RT=0,890 мин

Получение промежуточного соединения 130

Промежуточное соединение 129 (175 мг, 0,35 ммоль) перемешивают в 4 н растворе HCl в 1,4-диоксане (4 мл/ммоль) при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют толуол, и удаляют при пониженном давлении. Продукт используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Метод ЖХ-МС 1: MH⁺=400, RT=0,471 мин

Получение примера 67

Раствор промежуточного соединения 130 (140 мг, 0,35 ммоль) в N,N-диметилформамиде (23 мл) добавляют по каплям в течение периода 30 минут к раствору O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (HBTU) (400 мг, 1,05 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (917 мкл, 5,25 ммоль) в N,N-диметилформамиде (12 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюентов (градиент элюирования от 0% до 5% метанола). Фракции продукта собирают, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Продукт дополнительно очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (метод ВЭЖХ A). Фракции продукта собирают, и растворитель выпаривают.

Выход: 15 мг примера 67 (11%)

Метод ЖХ-МС 2: MH⁺=382, RT (время удерживания)=2,548 мин

Соединения в Таблице 1 получают аналогично процедурам, описанным выше.

Таблица 1

Соединение 1, Пример 1

Соединение 2, Пример 2

Соединение 3, Пример 3

Соединение 4, Пример 4

Соединение 5, Пример 5

Соединение 6, Пример 6

Соединение 7, Пример 7

Соединение 8, Пример 8

Соединение 9

Соединение 10, Пример 9

Соединение 11, Пример 10

Соединение 12, Пример 11

Соединение 13, Пример 12

Соединение 14, Пример 13

Соединение 15

Соединение 16

Соединение 17, Пример 14

Соединение 18, Пример 67

Соединение 19, Пример 16

Соединение 20

Соединение 21, Пример 61

Соединение 22, Пример 62

Соединение 23

Соединение 24

Соединение 25

Соединение 26

Соединение 27

Соединение 28

Соединение 29, Пример 17

Соединение 30, Пример 15

Соединение 31, Пример 18

Соединение 32, Пример 19

Соединение 33, Пример 20

Соединение 34, Пример 21

Соединение 35, Пример 22

Соединение 36, Пример 23

Соединение 37, Пример 24

Соединение 38, Пример 25

Соединение 39, Пример 26

Соединение 40, Пример 27

Соединение 41, Пример 28

Соединение 42, Пример 29

Соединение 43, Пример 30

Соединение 44, Пример 31

Соединение 45, Пример 32

Соединение 46, Пример 33

Соединение 47, Пример 34

Соединение 48, Пример 35

Соединение 49, Пример 36

Соединение 50, Пример 37

Соединение 51, Пример 38

Соединение 52, Пример 39

Соединение 53, Пример 40

Соединение 54, Пример 41

Соединение 55, Пример 42

Соединение 56, Пример 43

Соединение 57, Пример 44

Соединение 58, Пример 45

Соединение 59, Пример 46

Соединение 60, Пример 47

Соединение 61, Пример 48

Соединение 62, Пример 49

Соединение 63, Пример 50

Соединение 64, Пример 51

Соединение 65, Пример 52

Соединение 66, Пример 53

Соединение 67, Пример 54

Соединение 68, Пример 55

Соединение 69, Пример 56

Соединение 70, Пример 57

Соединение 71, Пример 58

Соединение 72, Пример 59

Соединение 73, Пример 60

Соединение 74, Пример 63

Соединение 75, Пример 64

Соединение 76, Пример 65

Соединение 77, Пример 66

Идентификация соединений

Температура плавления

Для определения температуры плавления соединений по настоящему изобретению используют следующий способ.

Способ для определения температуры плавления

Для ряда соединений температуры плавления (m.p.) определяют в открытых капиллярных пробирках на устройстве Mettler FP62. Температуры плавления измеряют при температуре, находящейся в пределах от 50°C до 300°C, с использованием градиента 10°C/минут. Значения температуры плавления считывают с цифрового дисплея и не корректируют.

Таблица 2
Температуры плавления№ СоединенияТемпература плавления (°C)№ СоединенияТемпература плавления (°C)1>30046ND*2>30047258,13>30048279,14>30049>3005>30050>3006ND*51ND*7ND*52>30082695327510>30054ND*11>30055ND*12ND*56179,913>30057>30014ND*58>30017>30059>30018251,760239,119>30061>30021>30062>30022ND*63286,829ND*64>30030185,265ND*31ND*66ND*32>30067ND*33>30068295,134ND*69>30035>30070>30036270,471>30037ND*72272,538>30073>30039230,774ND*40>30075ND*

4129576ND*42>30077ND*43ND*44ND*45ND** Не определено

ЖХ-МС

Для характеризации с помощью ЖХ-МС соединений по настоящему изобретению используют следующий далее способ.

Общая процедура ЖХ-МС

Все анализы осуществляют с использованием LC/MSD квадруполя Agilent 6110 series, соединенного с системой жидкостной хроматографии (LC) Agilent 1290 series, состоящей из бинарного насоса с дегазатором, устройством для автоматического отбора образцов, термостатируемым отделением для колонки и с детектором на основе диодной матрицы. Масс-спектрометр (MS) работает с помощью источника электрораспылительной ионизации при атмосферном давлении (API-ES) в режиме положительных ионов. Напряжение капилляра устанавливают при 3000 В, напряжение на фрагментаторе при 70 В, и температуру квадруполя поддерживают при 100°C. Поток газа для сушки и значения температуры составляют 12,0 л/мин и 350°C, соответственно. Азот используют в качестве газа для распыления при давлении 35 фунт/кв. дюйм в датчике (2,2 кг/кв. см). Сбор данных осуществляют с помощью программного обеспечения Agilent Chemstation.

Метод ЖХ-МС 1

В дополнение к общей процедуре ЖХ-МС 1: анализы осуществляют на колонке Phenomenex Kinetex C18 (длина 50 мм ×2,1 мм, внутренний диаметр; частицы 1,7 мкм) при 60°C, при скорости потока 1,5 мл/мин. Градиентное элюирования осуществляют в пределах от 90% (вода + 0,1% муравьиной кислоты)/10% ацетонитрила до 10% (вода + 0,1% муравьиной кислоты)/90% ацетонитрила в течение 1,50 минуты, затем конечную композицию подвижной фазы выдерживают в течение дополнительных 0,40 мин. Стандартный объем инжекции составляет 2 мкл. Диапазоны регистрации данных устанавливают при 254 нм для детектора UV-PDA и m/z 80-800 для детектора MS.

Метод ЖХ-МС 2

В дополнение к общей процедуре ЖХ-МС1: анализы осуществляют на колонке YMC pack ODS-AQ C18 (длина 50 мм ×4,6 мм внутренний диаметр; частицы 3 мкм) при 35°C, при скорости потока 2,6 мл/мин. Градиентное элюирование осуществляют в пределах от 95% (вода + 0,1% муравьиной кислоты)/5% ацетонитрила до 5% (вода + 0,1% муравьиной кислоты)/95% ацетонитрила в течение 4,80 минуты, затем композицию конечной подвижной фазы выдерживают в течение дополнительной 1,00 мин. Стандартный объем инжекции составляет 2 мкл. Диапазоны регистрации данных устанавливают 190-400 нм для детектора UV-PDA и m/z 100-1400 для детектора MS.

Таблица 3
Данные ЖХ-МСНомер соединенияПик массы (MH)⁺Время удерживания (мин)способ ЖХ-МС13643,022223382,267233652,285243682,4332

53242,097263391,528273242,275283742,5902103702,9172113672,9392123823,4142133531,8892143743,0112173512,7002183822,5482194092,2242213671,7712223101,1682294542,0322303951,9102313822,8132323893,2082333912,9882344003,2882353632,7402364231,9422373671,8752383392,4122394361,9302404212,0502413951,9772423893,0562433522,6122443522,5072453912,4102463812473882,8872484352,2652

493091,7572503562,7902513771,6852523511,0732533791,9112543951,6232553791,2062564080,7332573241,0712583951,2252593370,9982603511,0362613231,6052623371,0902634082,2472643371,0742653662,1502663942,7882673772,3312683662,1582694072,2762703502,9152713653,0602723542,2182733382,4252743422,5562753942,4262763910,3141773542,7852

B. Анализ активности киназы

Ингибирование киназы LRRK2 и LRRK1 оценивают с использованием рекомбинантного белка LRRK2 и LRRK1 в анализе киназы in vitro на основе пептидов.

Протокол 1

Экспрессия и очистка рекомбинантного белка LRRK2

Белок LRRK2 приготавливают, как описано в Daniëls et al. ((2011) J Neurochem 116, 304-315). Клетки HEK293T трансфицируют плазмидой pCHMWS-3xflag-LRRK2 с использованием полиэтиленимина и лизируют после 48-72 часов в буфере для лизирования (Tris 20 мМ pH 7,5, NaCl 150 мМ, EDTA 1 мМ, Triton 1%, Glycerol 10%, коктейль ингибиторов протеаза). Лизаты осветляют посредством центрифугирования при 20000 g в течение 10 минут и инкубируют вместе с нормальными IgG мышей, связанными с агарозными шариками, для удаления белков, неспецифично связывающихся с агарозой или IgG мышей. После удаления суспензии шариков с IgG, лизаты инкубируют в течение 3-18 часов вместе с flagM2, связанным с агарозными шариками. Шарики промывают 4 раза промывочным буфером (Tris 25 мМ pH 7,5, NaCl 400 мМ, Triton 1%) и промывают в киназном буфере (Tris-HCl 25 мМ pH 7,5, 10 мМ MgCl₂, 2 мМ дитиотреитол (DTT), 0,02% Triton, 5 мМ бета-глицерофосфат, 0,1 мМ Na₃VO₄). Белки элюируют в 5 объемах киназного буфера, содержащего 100 мкг/мл пептида 3xflag. Для анализов, использующих очищенный белок, связанный с афинной смолой, афинные шарики повторно суспендируют в равном объеме киназного буфера, если не указано иного. Чистоту и концентрацию оценивают с помощью SDS-PAGE (3-8% трис-ацетатного SDS геля) и окрашивания Coomassie Brilliant Blue или окрашивания серебром. Альтернативно, используют усеченный фермент LRRK2 (LRRK2, меченный GST из аминокислот 970-2527) и усеченный LRRK2-G2019S (LRRK2-G2019S, меченный из аминокислот 970-2527).

Анализ киназы LRRK2

Для фосфорилирования LRRKтида рекомбинантный LRRK2 инкубируют вместе с 6 мкКюри₃₂P-ATP (3000 Кюри/ммоль), 200 мкМ LRRKтида, 10 мкМ ATP и с соединением или растворителем на 40 мкл реакционной смеси в течение 30 минут при 30°C. Соединения исследуют при концентрациях, находящихся в пределах от 10 мкМ до 10 пкМ; конечное количество ДМСО в реакции киназы составляет 1%. Реакции останавливают, и реакционные смеси наносят в виде пятен на фосфоцеллюлозную бумагу P81 и промывают в течение 4×10 минут в 75 мМ фосфорной кислоты. Уровни фосфорилирования LRRKтида измеряют посредством ауторадиографии. Анализы киназы осуществляют для каждого условия по три раза.

Уровни фосфорилирования LRRKтида изображают на графике зависимости от log концентрации соединения и подгоняют кривые ингибирования, из которых получают значения IC₅₀.

Протокол 2

Радиометрический анализ протеинкиназы (³³PanQinase^® Activity Assay) используют для измерения активности киназы. Все анализы осуществляют в 96-луночных FlashPlates^™ от Perkin Elmer при объеме реакций 50 мкл. Реакционный коктейль приготавливают с помощью пипетки за 4 стадии в следующем порядке:

10 мкл нерадиоактивного раствора ATP (в H₂O)

25 мкл буфера для анализа/смеси [γ-³³P]-ATP

5 мкл образца для исследования в 10% ДМСО

10 мкл смеси фермента/субстрата

Анализ содержит 70 мМ HEPES-NaOH pH 7,5, 3 мМ MgCl₂, 3 мМ MnCl₂, 3 мкМ Na-ортованадата, 1,2 мМ DTT, ATP (0,3 мкМ), [γ-³³P]-ATP (приблизительно 4×1005 отсчетов в минуту на лунку), протеинкиназу (7,3 нМ) и субстрат (GSK3(14-27), 1,0 мкг/50 мкл).

Киназу получают от Invitrogen Corporation.

Реакционные коктейли инкубируют при 30°C в течение 60 минут. Реакцию останавливают с помощью 50 мкл 2% (объем/объем) H₃PO₄, планшеты аспирируют и промывают два раза 200 мкл 0,9% (масс/объем) NaCl. Введение³³Pi (считают “отсчеты в минуту”) определяют с помощью сцинтилляционного счетчика для микропланшетов.

Соединения

Соединения растворяют в 10 мМ в ДМСО. По необходимости, растворы обрабатывают ультразвуком в ультразвуковой ванне. Соединения аликвотируют и хранят при -20°C.

Таблица 4 приводит значения IC₅₀ для соединений в соответствии с настоящим изобретением, полученных с использованием рассмотренного выше анализа киназы.

Таблица 4№ СоединенияIC₅₀ для полноразмерного LRRK2IC₅₀ для усеченного LRRK2IC₅₀ для усеченного LRRK2-G2019SПротокол1N/A++++++12+++++++13+++++++++14N/A++++++15++++++16N/AN/AN/A7N/AN/AN/A

8N/AN/AN/A10N/A+++N/A211N/A+++N/A212N/A++N/A213N/A+++N/A214N/A++N/A217N/A+++N/A218N/AN/AN/A19N/A++N/A221N/AN/AN/A222N/AN/AN/A229N/A++N/A230N/A+++N/A231N/A++N/A232N/A+++N/A233N/A+++N/A234N/A++N/A235N/A+++N/A236N/A++N/A237N/A+++N/A238N/A+++N/A239N/A++N/A240N/A+++N/A241N/A+++N/A242N/A+++N/A243N/A++N/A244N/A+N/A245N/A++N/A246N/A+N/A247N/A++N/A248N/A++N/A249N/A++N/A250N/A+++N/A251N/A++N/A2

52N/A++N/A253N/A+N/A254N/A++N/A255N/A+N/A256N/A+N/A257N/A+N/A258N/A+N/A259N/A+N/A260N/A+++N/A261N/A+N/A262N/A+N/A263N/A++N/A264N/A+N/A265N/A+N/A266N/A++N/A267N/A+N/A268N/A+N/A269N/A+N/A270N/A+++N/A271N/AN/AN/A72N/AN/AN/A73N/AN/AN/A74N/AN/AN/A75N/AN/AN/A76N/AN/AN/A77N/AN/AN/A+ обозначает IC₅₀>1 мкM, ++ обозначает IC₅₀ в пределах между 100 нМ и 1 мкМ, и +++ обозначает IC₅₀<100 нМ
N/A обозначает недоступно

Экспрессирование и очистка рекомбинантного белка LRRK1

Белок LRRK1 приготавливают, в основном, как описано в Daniëls et al. ((2011) J Neurochem 116, 304-315). Клетки HEK293T трансфицируют плазмидой pCHMWS-3xflag-LRRK1 с использованием полиэтиленимина и лизируют после 48-72 часов в буфере для лизирования (Tris 20 мМ pH 7,5, NaCl 150 мМ, EDTA 1 мМ, Triton 1%, Glycerol 10%, коктейль ингибиторов протеаз). Лизаты осветляют посредством центрифугирования при 20000 g в течение 10 минут и инкубируют вместе с нормальными IgG мышей, связанными с агарозными шариками, для удаления белков, неспецифично связывающихся с агарозой или IgG мышей. После удаления суспензии шариков с IgG, лизаты инкубируют в течение 3-18 часов вместе с flagM2, связанным с агарозными шариками. Шарики промывают 4 раза промывочным буфером (Tris 25 мМ pH 7,5, NaCl 400 мМ, Triton 1%) и промывают в киназном буфере (Tris-HCl 25 мМ pH 7,5, 10 мМ MgCl₂, 2 мМ дитиотреитола (DTT), 0,02% Triton, 5 мМ бета-глицерофосфата, 0,1 мМ Na₃VO₄). Белки элюируют в 5 объемах киназного буфера, содержащего 100 мкг/мл пептида 3xflag. Чистоту и концентрацию оценивают с помощью SDS-PAGE (3-8% трис-ацетатный SDS гель) и окрашивания Coomassie Brilliant Blue или окрашивания серебром.

Анализ киназы LRRK1

Для фосфорилирования LRRKтида рекомбинантный LRRK2 инкубируют вместе с 6 мкКюри³²P-ATP (3000 Кюри/ммоль), 10 мкМ ATP и 1 мкМ соединения или растворителя на 40 мкл реакционной смеси в течение 30 минут при 30°C. Реакции завершают посредством добавления нагрузочного SDS буфера. Образцы загружают на предварительно залитые Tris-ацетатные гели, 3-8%, или Tris-глициновые гели, 4-20%, и переносят на поливинилиденфторидные мембраны. Включенную³²P-ATP детектируют с помощью ауторадиографии с использованием фосфоресцентного планшетного сканера Storm 840. Эти же мембраны зондируют с помощью DR4A/3EDD в доменном антителе мыши анти-киназа LRRK2 для подтверждения присутствия LRRK1. Денсиметрический анализ полос на блот- ауторадиограммах и на иммунохимическую активность осуществляют с использованием анализатора Aida v1,0 (Raytest, Straubenhardt, Germany) или программного обеспечения ImageJ (NIH, USA). Уровни аутофосфорелирования вычисляют как отношение ауторадиографического сигнала к уровню иммунохимической активности.

Результаты анализов аутофосфорелирования LRRK1 показаны на фигуре 1.

Воздействие на уровни фосфорилирования LRRK1 и LRRK2 в клетках

Для мечения интактных клеток экспрессируют LRRK1 или LRRK2 в клетках HEK293T. Клетки промывают 2x в DMEM без фосфатов, а затем метаболически метят с помощью 5 мкКюри/см² ортофосфата-P³² в DMEM без фосфатов при 37°C. После 4-8 часов мечения клетки обрабатывают соединением при 1 мкМ или растворителем в течение 2 часов. Обработанные клетки затем лизируют, и LRRK1 или LRRK2 иммунопреципитируют с использованием агарозных шариков flag-M2. Иммунопреципитированный белок разрешают на 3-8% SDS-PAGE гелях, и осуществляют блот-анализ на PVDF мембранах. Мембраны обрабатывают, как описано выше для анализа аутофосфорелирования. Все условия исследуют по три раза, и результаты показаны на фигурах 2 и 3.

Реферат

Изобретение относится к соединениям Формулы I, которые обладают свойствами ингибиторов киназы LRRK2.В Формуле I Aи Авыбирают из С и N; где когда Aпредставляет собой С, тогда Апредставляет собой N; и где когда Апредставляет собой С, тогда Aпредставляет собой N; Rвыбирают из -Н, -галогена, -Cалкила, -O-Cалкила, -(С=O)-Rи -CN; где каждый из указанных Cалкилов является необязательно и независимо замещенным -ОН; Rвыбирают из -Н и -Салкила; где каждый из указанных Cалкилов является необязательно и независимо замещенным -ОН, -O-Cалкилом или -NRR; Rвыбирают из -Н и -Cалкила; Rпредставляет собой -NRR; Rи R, каждый, независимо выбирают из -Н и -Cалкила; где каждый из указанных Cалкилов является необязательно и независимо замещенным -NRR; Rвыбирают из -SO-Cалкила, -(С=O)-O-Cалкила, -(С=O)-Cалкила, -(С=O)-Салкенила, -Cалкил-(С=O)-NRR, -SO-Cциклоалкила, -(С=O)-Сциклоалкила, -(С=O)-NRR, -(С=O)-Het, -(С=O)-Ar, где каждый из указанных Cалкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -ОН, -OCалкила, -Het, -NRR; R, R, R, R, R, R, R, R, Rи R, каждый, независимо выбирают из -Н и -Cалкила; Xвыбирают из -O-Cалкила-, -S-Cалкила-, -NR-(C=O)-, -NR-(С=O)-Cалкила, -(С=O)-NR-Салкила-, -NR-Cалкила-, -Cалкил-NR-Cалкила-; где каждый из указанных Cалкилов является необязательно и независимо замещенным -Cалкилом; Хвыбирают из -O-Cалкила-, -NR-Салкила-; В выбирают из -(C=O)-NR-, -NR-(С=O)-NR-, -SO-NR-, -NR-, -NR-(С=O)-О-; Arпредставляет собой 5-членный ароматический гетероцикл, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О и N; Hetпредставляет собой 5- или 6-членный моноциклический гетероцикл, имеющий от 1 до 2 гетероатомов, выбранных из О и N, где каждый гетероцикл является необязательно и независимо замещенным -Cалкилом; каждый из указанных -Cалкилов является необязательно замещенным галогеном; каждый Z, Z, Z, Zи Zвыбирают из С. Изобретение также относится к индивидуальным соединениям, применению соединения, к фармацевтической композиции, к способам предотвращения и/или лечения неврологических расстройств. Технический результат: получены новые соединения Формулы I, обладающие свойствами ингибиторов киназы LRRK2. 6 н. и 10 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл., 67 пр.

Формула

1. Соединение Формулы I, или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль:

где

A₁ и А₂ выбирают из С и N; где когда A₁ представляет собой С, тогда А₂ представляет собой N; и где когда А₂ представляет собой С, тогда A₁ представляет собой N;

R₁ выбирают из -Н, -галогена, -C_1-6алкила, -O-C_1-6алкила, -(С=O)-R₄ и -CN; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным -ОН;

R₂ выбирают из -Н и -С_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным -ОН, -O-C_1-6алкилом или -NR₁₃R₁₄;

R₃ выбирают из -Н и -C_1-6алкила;

R₄ представляет собой -NR₁₇R₁₈;

R₅ и R₇, каждый, независимо выбирают из -Н и -C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным -NR₂₃R₂₄;

R₆ выбирают из -SO₂-C_1-6алкила, -(С=O)-O-C_1-6алкила, -(С=O)-C_1-6алкила, -(С=O)-С₂-₆алкенила, -C_1-6алкил-(С=O)-NR₃₁R₃₂, -SO₂-C_3-5циклоалкила, -(С=O)-С_3-5циклоалкила, -(С=O)-NR₃₁R₃₂, -(С=O)-Het₅, -(С=O)-Ar₆, где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -ОН, -OC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₅R₂₆;

R₁₃, R₁₄, R₁₇, R₁₈, R₂₃, R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₃₁ и R₃₂, каждый, независимо выбирают из -Н и -C_1-6алкила;

X₁ выбирают из -O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -NR₃-(C=O)-, -NR₃-(С=O)-C_1-6алкила, -(С=O)-NR₃-С_1-6алкила-, -NR₃-C_1-6алкила-, -C_1-6алкил-NR₃-C_1-6алкила-; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным -C_1-6алкилом;

Х₂ выбирают из -O-C_1-6алкила-, -NR₂-С_1-6алкила-;

В выбирают из -(C=O)-NR₅-, -NR₅-(С=O)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(С=O)-О-;

Ar₆ представляет собой 5-членный ароматический гетероцикл, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О и N;

Het₅ представляет собой 5- или 6-членный моноциклический гетероцикл, имеющий от 1 до 2 гетероатомов, выбранных из О и N, где каждый гетероцикл является необязательно и независимо замещенным -C_1-6алкилом; каждый из указанных -C_1-6алкилов является необязательно замещенным галогеном;

каждый Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅ выбирают из С.

2. Соединение по п. 1, где

A₁ представляет собой N и А₂ представляет собой С;

R₁ выбирают из -Н, -C_1-6алкила, -О-C_1-6алкила, -CN; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным -ОН;

R₂ выбирают из -Н и -C_1-6алкила, где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным -ОН, -O-C_1-6алкилом или -NR₁₃R₁₄;

R₃ выбирают из -Н и -C_1-6алкила;

R₄ представляет собой -NR₁₇R₁₈;

R₆ выбирают из -(С=O)-O-C_1-6алкила, -(С=O)-С_2-6алкенила, -(С=O)-C_1-6алкила, -(С=O)-Het₅; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -ОН, -OC_1-6алкила, -Het₅, -NR₂₅R₂₆;

R₁₃, R₁₄, R₁₇, R₁₈, R₂₃, R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₃₁ и R₃₂, каждый, независимо выбирают из -Н и -C_1-6алкила;

X₁ выбирают из -O-C_1-6алкила-, -S-C_1-6алкила-, -NR₃-(C=O)-, -NR₃-(С=O)-C_1-6алкила, -(С=O)-NR₃-C_1-6алкила-, -С_1-6алкил-NR₃-С_1-6алкила-; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным -C_1-6алкилом;

Х₂ выбирают из -O-C_1-6алкила- и -NR₂-С_1-6алкила-;

В выбирают из -(C=O)-NR₅-, -NR₅-(С=O)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-;

Ar₆ представляет собой 5-членный ароматический гетероцикл, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О и N;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, представляют собой С.

3. Соединение по п. 1, где

R₂ выбирают из -Н и -C_1-6алкила; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным -ОН, -O-C_1-6алкилом или -NR₁₃R₁₄;

R₃ выбирают из -Н и -C_1-6алкила;

R₄ представляет собой -NR₁₇R₁₈;

R₆ выбирают из -(С=O)-O-C_1-6алкила, -(С=O)-C_1-6алкила, -(С=O)-С_2-6алкенила, -C_1-6алкил-(С=O)-NR₃₁R₃₂, -SO₂-С_3-5циклоалкила, -(С=O)-С_3-5циклоалкила, -(С=O)-NR₃₁R₃₂, -(С=O)-Het₅, -(С=O)-Ar₆; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 заместителями, выбранными из -галогена, -ОН, -OC_1-6алкила, -Het₅ и -NR₂₅R₂₆;

R₁₃, R₁₄, R₁₇, R₁₈, R₂₃, R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₃₁ и R₃₂, каждый, независимо выбирают из -Н и -C_1-6алкила;

X₁ выбирают из -O-C_1-6алкила-, -NR₃-(С=O)-C_1-6алкила, -(С=O)-NR₃-С_1-6алкила-, -NR₃-С_1-6алкила-, -C_1-6алкил-NR₃-C_1-6алкила-, где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным -C_1-6алкилом;

Х₂ выбирают из -O-C_1-6алкила-, -NR₂-C_1-6алкила-;

В выбирают из -(C=O)-NR₅-, -NR₅-(С=O)-NR₇-, -SO₂-NR₅-, -NR₆-, -NR₅-(C=O)-O-;

Ar₆ представляет собой 5-членный ароматический гетероцикл, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О и N;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, независимо выбирают из С.

4. Соединение по п. 1, где

A₁ представляет собой N и А₂ представляет собой С;

R₁, R₂, R₃ и R₅, каждый, представляют собой -Н;

R₆ выбирают из -(С=O)-C_1-6алкила, -(С=O)-С_3-5циклоалкила и -(С=O)-NR₃₁R₃₂; где каждый из указанных C_1-6алкилов является необязательно и независимо замещенным 1-3 -NR₂₅R₂₆;

R₂₅ и R₂₆, каждый, независимо выбирают из -Н и -C_1-6алкила;

R₃₁ и R₃₂, каждый, представляют собой -Н;

X₁ выбирают из -O-C_1-6алкила и -NR₃-С_1-6алкила-;

Х₂ представляет собой -NR₂-С_1-6алкил-;

В выбирают из -(С=O)-NR₅- и -NR₆-;

Z₁, Z₂, Z₃, Z₄ и Z₅, каждый, представляют собой С.

5. Соединение, выбранное из списка, включающего

6. Соединение по любому из пп. 1-5, где пиразолопиримидиновый остаток связан с арильным или гетероарильным остатком в положении Z₁ или Z₂ в соответствии с нумерацией, как представлено в Формуле I.

7. Соединение по любому из пп. 1-5, где R₁ связан с арильным или гетероарильным остатком в положении Z₃, Z₄ или Z₅ в соответствии с нумерацией, как представлено в Формуле I.

8. Соединение по любому из пп. 1-5 для применения в качестве лекарственного средства, ингибирующего киназную активность, в частности LRRK2-киназную активность, для медицины или ветеринарии.

9. Применение соединения по любому из пп. 1-5 при приготовлении лекарственного средства для предотвращения, лечения и/или диагностики неврологических расстройств, таких как болезнь Паркинсона или болезнь Альцгеймера.

10. Фармацевтическая композиция, ингибирующая киназную активность, в частности LRRK2-киназную активность, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп. 1-7 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент и/или вспомогательное вещество.

11. Соединение по любому из пп. 1-5, пригодное для ингибирования активности киназы, в частности киназы LRRK2.

12. Соединение по любому из пп. 1-5, пригодное для предотвращения, лечения и/или диагностики неврологических расстройств, таких как болезнь Паркинсона или болезнь Альцгеймера.

13. Композиция по п. 10, пригодная для ингибирования активности киназы, в частности киназы LRRK2.

14. Композиция по п. 10, пригодная для предотвращения, лечения и/или диагностики неврологических расстройств, таких как болезнь Паркинсона или болезнь Альцгеймера.

15. Способ предотвращения и/или лечения неврологических расстройств, таких как болезнь Паркинсона или болезнь Альцгеймера, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения в соответствии с любым из пп. 1-5.

16. Способ предотвращения и/или лечения неврологических расстройств, таких как болезнь Паркинсона или болезнь Альцгеймера, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, композиции по п. 10.

Документы, цитированные в отчёте о поиске

Производные имидазо[1,2-b]пиридазина и пиразоло[1,5-a]пиримидина и их применение в качестве ингибитора протеинкиназ

Авторы

ХОФЛАК Ян (BE)

БЛОМ Петра (BE)

KHOFLAK YAN

BLOM PETRA

KHOFLAK Yan

BLOM Petra

Патентообладатели

ONKODIZAJN S A

ONKODIZAJN S.A.

Заявители

ONKODIZAJN S A

ONKODIZAJN S.A.

СПК: A61K31/504 A61K31/519 A61K31/529 A61P25/16 A61P25/28 A61P43/00 C07D487/16 C07D487/18 C07D498/16 C07D498/18 C07D498/22 C07D515/16 C07D515/18

МПК: A61K31/529 A61K31/504 A61P25/16 A61P25/28

Публикация: 2017-06-13

Дата подачи заявки: 2012-09-28

РОССТИП

Поиск по товарам

Добавить свой товар

Сообщества

Товары

Участники

Патенты

Запросов

Поставщикам

О сервисе

Блогерам

Помощь