Гетероциклические антагонисты р2х7 - RU2768865C2

Чертежи

Описание

Настоящее изобретение относится к новым гетероциклическим соединениям формулы (I), обладающим антагонистическими свойствами в отношении рецептора Р2Х7 (Р2Х7), к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения, к химическим способам получения этих соединений и к их применению в лечении или профилактике заболеваний, ассоциированных с активностью рецептора Р2Х7, у животных, в частности у людей.

Р2Х7 принадлежит семейству ионотропных рецепторов Р2Х. Р2Х7 активируется внеклеточными нуклеотидами, в частности аденозинтрифосфатом (АТФ). Р2Х7 отличается от других членов семейства Р2Х специфической локализацией (в частности в центральной нервной системе (ЦНС) и иммунокомпетентных клетках), высокой концентрацией АТФ (в миллимолярном (мМ) диапазоне), необходимой для его активации, и его способностью формировать большую пору при длительной или повторной стимуляции. Р2Х7 представляет собой лиганд-управляемый ионный канал и присутствует на клетках различных типов, главным образом на тех клетках, которые, как известно, вовлечены в воспалительный и/или иммунный процесс, конкретно на макрофагах, тучных клетках и лимфоцитах (Т и В). Активация рецептора Р2Х7 внеклеточными нуклеотидами, например АТФ, приводит к высвобождению интерлейкина-1β (IL-1β) и образованию гигантских клеток (макрофагов/микроглиальных клеток), дегрануляции (тучных клеток) и шеддингу молекул L-селектина (у лимфоцитов). Рецепторы Р2Х7 также локализованы на антигенпрезентирующих клетках (АРС), кератиноцитах, ацинарных клетках слюнных желез (клетках околоушной железы), гепатоцитах, эритроцитах, эритролейкозных клетках, моноцитах, фибробластах, клетках костного мозга, нейронах и ренальных мезангиальных клетках. Известно также, что рецептор Р2Х7 является болевым сенсором в нервной системе. В экспериментах с использованием Р2Х7-дефицитных мышей была продемонстрирована роль Р2Х7 в развитии боли, так как эти мыши были защищены от развития как индуцированной адъювантами воспалительной боли, так и невропатической боли, индуцированной частичным лигированием нерва. Имеется также растущее число доказательств того, что Р2Х7 или его нижележащие эффекторы, такие как интерлейкин-1β (IL-1β), вовлечены в патофизиологию некоторых неврологических расстройств, таких как болезнь Альцгеймера (J.I. Diaz-Hernandez et al., Neurobiol. Aging, 2012, 1816-1828: In vivo P2X7 inhibition reduces Aβ plaques in AD through GSK3β). Считается, что P2X7 осуществляет важную функцию в нейротрансмиссии в ЦНС, оказывая активирующее воздействие на постсинаптические и/или пресинаптические нейроны и нейроглию. С использованием данных гибридизации in situ было выяснено, что мРНК рецептора Р2Х7 широко распределена по всему головному мозгу крысы. Конкретно, области с высокой экспрессией мРНК Р2Х7 были обнаружены в переднем обонятельном ядре, коре головного мозга, грушевидной коре (Pir), латеральном ядре перегородки мозга (LS), пирамидальных клетках слоев СА1, СА3, СА4 гиппокампа, мостовых ядрах, наружном клиновидном ядре и медиальном вестибулярном ядре. Сигналы гибридизации Р2Х7 также наблюдались в двигательных нейронах двигательного ядра тройничного нерва, ядра лицевого нерва, ядра подъязычного нерва и переднего рога спинного мозга.

Таким образом, существует терапевтическая основа для применения антагонистов Р2Х7 в лечении целого ряда болезненных состояний. Эти состояния включают, но не ограничиваются ими, заболевания, ассоциированные с ЦНС, такие как болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Гентингтона, боковой амиотрофический склероз, травма спинного мозга, церебральная ишемия, травма головы, менингит, расстройства сна, расстройства настроения и тревожные расстройства, эпилепсия, ВИЧ-индуцированное нейровоспаление и хроническая невропатическая и воспалительная боль. Кроме того, периферические воспалительные расстройства и аутоиммунные заболевания, включая, но без ограничения, ревматоидный артрит, остеоартрит, псориаз, аллергический дерматит, астму, хроническую обструктивную болезнь легких, гиперчувствительность дыхательных путей, септический шок, бронхит, гломерулонефрит, синдром раздраженного кишечника, жировую болезнь печени, фиброз печени, повреждение кожных покровов, эмфизему легких, мышечную дистрофию, фиброз, атеросклероз, ожоговое повреждение, болезнь Крона, неспецифический язвенный колит, возрастную дегенерацию желтого пятна, рост и метастазирование злокачественных клеток, синдром Шегрена, миелобластный лейкоз, диабет, остеопороз, ишемическое заболевание сердца, все являются примерами заболеваний, при которых подразумевается вовлечение рецепторов Р2Х7. Ввиду клинической значимости Р2Х7, идентификация соединений, которые модулируют функцию рецепторов Р2Х7, представляет собой привлекательное направление в области разработки новых терапевтических агентов.

Ингибиторы Р2Х7 описаны в различных патентных заявках:

в WO 2004099146 раскрыты бензамидные ингибиторы рецептора Р2Х7 и их применение в лечении воспалительных заболеваний;

в WO 2009108551 раскрыты гетероариламидные аналоги и их применение при состояниях, опосредованных рецептором Р2Х7;

в WO 2009132000 раскрыты замещенные хинолины и изохинолины в качестве антагонистов рецептора Р2Х7 и их применение при состояниях, опосредованных рецептором Р2Х7;

в WO 2015119018 раскрыты производные тиазола и оксазола в качестве антагонистов рецептора Р2Х7 и их применение при состояниях, опосредованных рецептором Р2Х7;

в WO 2015/099107 А1 раскрыт антагонист рецептора Р2Х7, представляющий собой замещенный пиримидинон, и его применение при состояниях, опосредованных рецептором Р2Х7.

Тем не менее, все еще существует неудовлетворенная потребность в соединениях, которые способны оказывать эффективное антагонизирующее действие на Р2Х7 и которые могут быть доставлены в разные целевые органы, являющиеся очагами развития патологии, опосредованной Р2Х7, в том числе в головной мозг. Такие соединения предложены в данной заявке.

Далее представлены различные воплощения данного изобретения.

Настоящее изобретение относится к соединениям, представляющим собой оксадиазолоны следующей формулы (I), или их фармацевтически приемлемым солям:

включая любую их стереохимически изомерную форму, где:

R¹ независимо выбран из атома водорода, амина, моноциклического или бициклического алифатического, ароматического, гетероалифатического или гетероароматического кольца, возможно замещенных одним или более заместителями, выбранными из С₁-С₄алкила, возможно замещенного одним или более атомом(ами) галогена(ов), галогена, С₁-С₄алкокси или фенильной группы, возможно замещенной С₁-С₄алкилом;

R² независимо выбран из моноциклического или бициклического алифатического, гетероалифатического, ароматического или гетероароматического кольца, C₁-С₆алкильной, алкенильной или алкинильной цепи, возможно замещенных одним или более заместителями, выбранными из С₁-С₄алкила, возможно замещенного одним или более атомом(ами) галогена(ов), галогена, С₁-С₄алкокси, циано, С₁-С₄алкилтио, группы SO-С₁-С₄алкил, группы SO₂-С₁-С₄алкил, группы N(С₁-С₄алкил)₂;

n равно 1 или 2;

m равно 0, 1 или 2;

R³ и R⁴ независимо могут представлять собой -Н, -F, С₁-С₄алкил, -ОН, -ОС₁-С₄алкил, предпочтительно они оба представляют собой -Н;

X представляет собой О или S;

R⁵ представляет собой -Н или -СН₃, возможно замещенный одним или более атомами фтора; предпочтительно R⁵ представляет собой водород.

При использовании в вышеуказанных определениях:

Термины "галогено", "галоген" и "галогенид", которые могут быть использованы взаимозаменяем образом, относятся к замещающему атому фтора, хлора, брома или йода.

Термин "стереохимически изомерные формы", использованный выше, определяет все возможные изомерные формы, которые могут иметь соединения формулы (I). Если не упомянуто или не указано иное, химическое обозначение соединений означает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, причем указанные смеси содержат все диастереомеры и энантиомеры основной молекулярной структуры. Более конкретно, стереогенные центры могут иметь R- или S-конфигурацию; заместители в бивалентных циклических (частично) насыщенных радикалах могут иметь либо цис-, либо транс-конфигурацию.

Очевидно, что стереохимически изомерные формы соединений формулы (I) входят в объем данного изобретения.

Абсолютная стереохимическая конфигурация соединений формулы (I) и промежуточных соединений, используемых для их получения, легко может быть определена специалистами в данной области техники с использованием общеизвестных методов, таких как, например, дифракция рентгеновских лучей.

Кроме того, некоторые соединения формулы (I) и некоторые промежуточные соединения, используемые для их получения, могут проявлять полиморфизм. Следует понимать, что настоящее изобретение охватывает любые полиморфные формы, обладающие свойствами, полезными в лечении указанных выше состояний.

Подразумевается, что упомянутые выше фармацевтически приемлемые соли представляют собой терапевтически активные нетоксичные формы солей присоединения кислоты, которые способны образовывать соединения формулы (I). Эти фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты легко могут быть получены путем обработки

В свою очередь, указанные солевые формы могут быть превращены в форму свободного основания путем обработки подходящим основанием.

Соединения формулы (I) могут существовать как в несольватированной форме, так и в сольватированных формах. Термин "сольват" используется в данной заявке для описания молекулярной ассоциации, содержащей соединение по изобретению и одну или более молекул фармацевтически приемлемого растворителя, например воды или этанола. Термин "гидрат" используют, когда указанным растворителем является вода.

Предпочтительно, R¹ независимо выбран из атома водорода, моно или замещенных аминов, или алифатического, ароматического, гетероалифатического или гетероароматического кольца, выбранного из циклопентила, циклогексила, пиперидина, морфолина, пирролидина, пиперазина, фенила, пиридина, оксазола, пиразола или тиазола, где каждая из указанных группировок возможно может быть замещена одним или более заместителями, выбранными из С₁-С₄алкила, возможно замещенного одним или более атомом(ами) галогена(ов), галогена, С₁-С₄алкокси или фенильной группы, возможно замещенной С₁-С₄алкилом, или вышеуказанные алифатические, ароматические, гетероалифатические или гетероароматические кольца могут быть конденсированными с другим ароматическим, гетероароматическим или гетероалифатическим кольцом.

Предпочтительно, R² независимо выбран из фенила, пиридина, пиримидина, пиразола, имидазола, нафталина, хинолина, тиазола, фурана, оксазола, оксадиазола, С₃-С₇циклоалкила, пирана, тетрагидропирана, диоксана, С₁-С₄алкилокси, алифатических, ароматических или гетероароматических бициклических колец, С₁-С₄алкильной цепи или С₃-С₅алкинильной цепи, где каждая из указанных группировок возможно может быть замещена одним или более чем одним С₁-С₄алкилом, возможно замещенным одним или более атомом(ами) галогена(ов), галогеном или С₁-С₄алкокси.

Предпочтительно, R³ и R⁴ независимо представляют собой Н, F, -СН₃, -ОН, -ОСН₂СН₃, более предпочтительно они оба представляют собой Н.

X предпочтительно представляет собой О.

Предпочтительное воплощение изобретения относится к соединениям формулы (I), как определено выше, где:

R¹ независимо выбран из атома водорода или из группы, состоящей из циклопентила, циклогексила, пиперидина, морфолина, пирролидина, пиперазина, аминов, фенила, пиридина, оксазола, пиразола или тиазола, где каждая указанная группа возможно замещена метилом, метокси, галогеном, трифторметилом или фенильной группой, возможно замещенной метилом; и каждое вышеуказанное алифатическое, ароматическое или гетероалифатическое или гетероароматическое кольцо может быть конденсированным с другим ароматическим или гетероароматическим кольцом;

R² независимо выбран из фенила, пиридина, пиримидина, пиразола, имидазола, нафталина, хинолина, тиазола, фурана, оксазола, оксадиазола, С₃-С₇циклоалкила, пирана, тетрагидропирана, диоксана, алифатических бициклических колец, C₁-С₃алкилокси, С₁-С₄алкильной цепи или С₃-С₅алкинильной цепи; где каждое вышеуказанное алифатическое, ароматическое и гетероалифатическое кольцо возможно замещено метилом, метокси, галогеном и/или трифторметильной группой;

n равно 1 или 2; предпочтительно n равно 1;

m равно 0, 1 или 2; предпочтительно m равно 0;

R³ и R⁴ независимо представляют собой -Н, F, СН₃, -ОН или -ОСН₂СН₃; предпочтительно, они оба представляют собой водород;

X представляет собой О или S; предпочтительно О;

R⁵ представляет собой Н или -СН₃; предпочтительно, R⁵ представляет собой Н;

Другое предпочтительное воплощение изобретения относится к соединениям формулы (I), как определено выше, где:

R¹ независимо выбран из атома водорода, 3,3-дифторциклопентила, циклогексила, 4,4-дифторциклогексила, пиперидинила, 3,3-дифторпиперидинила, 4,4-дифторпиперидинила, 4,4-дифтор-2-метилпиперидинила, 3-(4-метилфенил)пиперидинила, 4Н,5Н,6Н,7Н-тиено[3,2-с]пиридин-5-ила, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ила, 3,4-дигидро-2Н-1,4-бензоксазин-4-ила, пирролидинила, 4-фенилпиперазинила, фенила, 2-фторфенила, 3-фторфенила, 4-фторфенила, 2-хлорфенила, 2-трифторметилфенила, 3-метоксифенила, 4-метоксифенила, 2,3-дихлорфенила, 2,4-дихлорфенила, 2-хлор-3-трифторметилфенила, 2,4-дифторфенила, 2-хлор-4-фторфенила, 2-хлор-6-фторфенила, 2-, 3- или 4-пиридина, 2-метилпиридин-3-ила, диметил-1,2-оксазол-4-ила, триметил-1H-пиразол-4-ила и 4-метил-1,3-тиазол-5-ила;

R² независимо выбран из 2-фенилметила, 1-фенилэтила, 2-фенилэтила, фенила, 2-, 3-, 4-фторфенила, 2-, 4-хлорфенила, 2-метоксифенила, 3-метоксифенила, 4-метоксифенила, 2-, 4-трифторметилфенила, 2-, 4-метилфенила, 2,3-дихлорфенила, 2,4-дихлорфенила, 2,4-дифторфенила, 2-хлор-4-фторфенила, 2-хлор-6-фторфенила, 2-хлор-3-трифторметилфенила, 2,4-диметоксифенила, 3,5-диметоксифенила, 2-бром-5-фторфенила, 4-фтор-2-метилфенила, 2-пиридинила, 3-пиридинила, 4-пиридина, 2-метилпиридин-3-ила, 6-трифторметилпиридин-3-ила, 2-метил-6-(трифторметил)пиридин-3-ила, нафталин-1-ила, хинолин-5-ила, 1,3-тиазол-2-ила, 1,3-тиазол-5-ила, 4-метил-1,3-тиазол-5-ила, 5-метил-1,2-оксазол-3-ила, 1,2-оксазол-3-ила, 1,2-оксазол-5-ила, 1,3-оксазол-2-ила, 1,3-оксазол-5-ила, диметил-1,2-оксазол-4-ила, 3 -(трифторметил)-1Н-пиразол-1-ила, 1,3-диметил-1Н-пиразол-5-ила, 1-метил-1H-имидазол-2-ила, фуран-3-ила, 5-(трифторметил)фуран-2-ила, 5-метил-1,3,4-оксадиазол-2-ила, 5-метил-1,2,4-оксадиазол-3-ила, 3-метил-1,2,4-оксадиазол-5-ила, пиримидин-2-ила, пиримидин-5-ила, 5-фторпиримидин-2-ила, циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклопент-3-ен-1-ила, циклогексила, 1-фторциклогексила, 2-метилциклогексила, 2,2-диметилциклогексила, 4,4-диметилциклогексила, 2,2-дифторциклогексила, 4,4-дифторциклогексила, 4-(трифторметил)циклогексила, 4-фторциклогексила, 3,3-дифторциклопентила, 6,6-дифторбицикло[3.1.0]гексан-3-ила, бицикло[2.2.1]гептан-1-ила, бицикло[2.2.1]гептан-2-ила, 1,4-диоксаспиро[4.5]декан-8-ила, оксан-2-ила, оксан-3-ила, оксан-4-ила, 1,4-диоксан-2-ила, метокси, этокси, пропокси, водорода, метила, этила, пропила, 2-метилпропила, бут-1-инила, проп-1-инила, пиперидин-1-ила, 4,4-дифторпиперидин-1-ила;

n равно 1 или 2; предпочтительно, n равно 1;

m равно 0, 1 или 2; предпочтительно, m равно 0;

R³ и R⁴ независимо представляют собой -Н, -СН₃, -ОН и -ОСН₂СН₃; предпочтительно, R³ и R⁴ оба представляют собой водород;

X представляет собой О или S; предпочтительно, X представляет собой О;

R⁵ представляет собой -Н или -СН₃; предпочтительно R⁵ представляет собой -Н;

Наиболее предпочтительно, соединение формулы (I) по данному изобретению выбрано из группы, состоящей из следующих соединений:

Соединения формулы (I) обычно могут быть получены в результате взаимодействия соединения формулы (II):

где значения n, X и R¹, R³ и R⁴ такие, как определено выше, с соединением формулы (III):

где значения R², R⁵ и m такие, как определено выше; и W представляет собой подходящую уходящую группу; и возможно превращение полученного соединения формулы (I) в его соль присоединения и/или получение его стереохимически изомерных форм.

Взаимодействие соединения формулы (II) с соединением формулы (III) может быть осуществлено в по меньшей мере одном реакционно-инертном растворителе и возможно в присутствии по меньшей мере одного подходящего реагента сочетания и/или его подходящего основания.

W в соединении формулы (III) представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, атом галогена, например хлора, брома, или в некоторых случаях W может также представлять собой спиртовую и подобные реакционноспособные уходящие группы. Взаимодействие соединения формулы (II) с соединением формулы (III) может быть осуществлено в реакционно-инертном растворителе, таком как, например, ацетонитрил, диметилацетамид, THF или DMF, и возможно в присутствии подходящего основания, такого как, например, карбонат натрия, карбонат калия или метоксид натрия. Перемешивание может повышать скорость реакции. Удобно осуществлять взаимодействие при температуре в пределах от комнатной температуры до температуры дефлегмации реакционной смеси.

Соединения формулы (III) известны в данной области.

Соединения формулы (II) могут быть получены согласно следующей схеме:

Соединения формулы (II), где n, R¹, R³ и R⁴ такие, как определено в формуле (I), могут быть получены в результате циклизации соответствующих N'-производных гидроксиэтанимидамида (IV).

Взаимодействие осуществляют в подходящем растворителе, таком как 1,4-диоксан, в присутствии CDI в качестве агента циклизации и DBU в качестве основания, предпочтительно при температуре 105°С.

Соединения формулы (IV), где n, R¹, R³ и R⁴ такие, как определено в формуле (I), могут быть получены из подходящего нитрильного производного (V) в результате взаимодействия с гидроксиламина гидрохлоридом в присутствии K₂CO₃ в качестве основания, с использованием EtOH в качестве растворителя, предпочтительно при температуре от к.т. до температуры дефлегмации.

Нитрильное производное (V), исходные вещества и некоторые промежуточные соединения являются известными соединениями, и они коммерчески доступны или могут быть получены согласно стандартным реакционным методикам, общеизвестным в данной области.

Соединения формулы (IIa) могут быть также получены согласно следующей схеме:

Соединения формулы (IIa), где n, R¹, R³ и R⁴ такие, как определено в формуле (I), могут быть получены в результате циклизации соответствующего N'-гидроксиэтанимидамида (IV).

Взаимодействие осуществляют в подходящем растворителе, таком как THF, с использованием 1,1'-тиокарбонилдиимидазола в присутствии диэтилэфирата трифторида бора в качестве кислоты Льюиса, предпочтительно при комнатной температуре.

Соединения формулы (IV), где n, R¹, R³ и R⁴ такие, как определено в формуле (I), могут быть получены из подходящего нитрильного производного (V) в результате взаимодействия с гидроксиламина гидрохлоридом в присутствии K₂CO₃ в качестве основания с использованием EtOH в качестве растворителя, предпочтительно при температуре от к.т. до температуры дефлегмации.

Нитрильное производное (V), исходные вещества и некоторые промежуточные соединения являются известными соединениями, и они коммерчески доступны или могут быть получены согласно стандартным реакционным методикам, общеизвестным в данной области.

Указанный способ возможно дополнительно включает в себя реакцию асимметрического синтеза с использованием хиральных вспомогательных веществ (с использованием углевода, хирального амина или циклического кетимина) и/или реакцию каталитического асимметрического синтеза Штреккера (с использованием гуанидина, хирального шиффова основания или катализатора на основе BINOL (1,1-би-2-нафтол)).

Соединения формулы (I), получаемые описанными выше способами, могут быть синтезированы в форме рацемической смеси энантиомеров, которые могут быть отделены друг от друга, следуя известным в данной области методикам разделения. Те соединения формулы (I), которые получены в рацемической форме, могут быть превращены в соответствующие диастереомерные солевые формы в результате взаимодействия с подходящей хиральной кислотой. Указанные диастереомерные солевые формы затем разделяют, например путем селективной или фракционной кристаллизации, и энантиомеры выделяют щелочью. Альтернативный способ разделения энантиомерных форм соединений формулы (1) включает в себя жидкостную хроматографию с использованием хиральной стационарной фазы. Указанные чистые стереохимически изомерные формы могут быть получены также из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм подходящих исходных веществ при условии, что реакция протекает стереоспецифически. Предпочтительно, если желательным является конкретный стереоизомер, указанное соединение будут синтезировать стереоспецифическими способами получения. В этих способах преимущественно используют энантиомерно чистые исходные вещества.

Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли и стереоизомерные формы обладают антагонистическими свойствами в отношении рецептора Р2Х7, что продемонстрировано в фармакологических примерах. Другими примерами известных в данной области техники реакций трансформации групп с целью превращения соединений формулы (I) в другие соединения формулы (I) являются гидролиз сложных эфиров карбоновых кислот до соответствующей карбоновой кислоты или соответствующего спирта; гидролиз амидов до соответствующих карбоновых кислот или аминов; спирты могут быть превращены в сложные эфиры и простые эфиры; первичные амины могут быть превращены во вторичные или третичные амины; может быть проведено гидрирование по двойным связям с образованием соответствующей одинарной связи. Исходные вещества и некоторые промежуточные соединения являются известными соединениями, и они коммерчески доступны или могут быть получены согласно стандартным реакционным методикам, общеизвестным в данной области техники. Соединения формулы (I), полученные описанными выше способами, могут быть синтезированы в форме рацемических смесей энантиомеров, которые можно отделить друг от друга, следуя известным в данной области техники методикам разделения. Те соединения формулы (I), которые получены в рацемической форме, могут быть превращены в соответствующие диастереомерные солевые формы путем взаимодействия с подходящей хиральной кислотой. Указанные диастереомерные солевые формы впоследствии разделяют, например, посредством селективной или фракционной кристаллизации, и энантиомеры высвобождают с использованием щелочи. Альтернативный способ разделения энантиомерных форм соединений формулы (I) включает в себя жидкостную хроматографию с использованием хиральной стационарной фазы. Указанные чистые стереохимически изомерные формы также могут быть получены из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм соответствующих исходных веществ при условии, что реакция протекает стереоспецифично. Предпочтительно, если желательным является конкретный стереоизомер, указанное соединение будут синтезировать с использованием стереоспецифических способов получения. В этих способах предпочтительно используют энантиомерно чистые исходные вещества. При получении соединений формулы (I) и исходных веществ и/или промежуточных соединений, описанных в данной заявке, полезной может быть защита некоторых групп, которые чувствительны к реакционным условиям. Оценка полезности возможной защиты, а также выбор подходящего для защиты агента в соответствии с реакцией, проводимой при получении соединений по изобретению, и функциональной группы, подлежащей защите, находятся в компетенции специалиста. Удаление возможных защитных групп проводят в соответствии со стандартными методами. Справочную информацию по использованию защитных групп в органической химии смотри в Theodora W. Greene and Peter G.M. Wuts, "Protective groups in organic synthesis", John Wiley & Sons, Inc., II Ed., 1991.

Получение солей соединений формулы (I) осуществляют известными способами. Таким образом, соединения формулы (I) по настоящему изобретению полезны в качестве лекарственных средств, особенно в лечении состояния или заболевания, опосредованного рецептором Р2Х7, в частности лекарственных средств с антагонистической активностью в отношении рецептора Р2Х7. Следовательно, соединения по настоящему изобретению могут быть использованы для изготовления лекарственного средства для лечения состояния или заболевания, опосредованного активностью рецептора Р2Х7, в частности лекарственного средства с антагонистической активностью в отношении рецептора Р2Х7.

Согласно настоящему изобретению также предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для лечения состояний или заболеваний, выбранных из состояний или заболеваний, опосредованных рецептором Р2Х7. В одном из воплощений настоящего изобретения предложено соединение формулы (I) для применения в качестве лекарственного средства или для применения в лечении состояний или заболеваний, выбранных из состояний или заболеваний, опосредованных рецептором Р2Х7. Кроме того, согласно настоящему изобретению предложен также способ лечения состояния, опосредованного активностью рецептора Р2Х7, у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. С учетом вышеописанных механизмов действия соединения по изобретению полезны для лечения нейродегенеративных расстройств различного происхождения, таких как болезнь Альцгеймера и другие связанные с деменцией состояния, такие как деменция с тельцами Леви, лобно-височная деменция и таупатии; амиотрофический боковой склероз, рассеянный склероз, болезнь Паркинсона и другие синдромы паркинсонизма; ВИЧ-индуцированное нейровоспаление; эссенциальный тремор; другие спиномозжечковые дегенерации и невропатия Шарко-Мари-Тута. Соединения по изобретению также полезны для лечения неврологических состояний, таких как эпилепсия, в том числе простой парциальный припадок, сложный парциальный припадок, вторично-генерализованный припадок, дополнительно включающий малый эпилептический припадок, миоклонические судороги, клонические судороги, тонические судороги, тонико-клонические судороги и атонические судороги.

Соединения по изобретению также полезны для лечения когнитивных расстройств и психических расстройств. Психические расстройства включают, но не ограничиваются ими, глубокую депрессию, дистимию, манию, биполярное расстройство (такое как биполярное расстройство I типа, биполярное расстройство II типа), циклотимическое расстройство, "быструю" цикличность, чрезвычайно быструю смену маниакальной и депрессивной фаз, манию, гипоманию, шизофрению, шизофреноформные расстройства, шизоаффективные расстройства, расстройства личности, расстройства внимания с гиперактивным поведением или без гиперактивного поведения, бредовые расстройства, кратковременные психотические расстройства, психотическое расстройство, обусловленное общим состоянием здоровья, вызванные веществами психотические расстройства или неидентифицированное психотическое расстройство, тревожные расстройства, такие как генерализованное тревожное расстройство, панические расстройства, посттравматическое стрессовое расстройство, расстройства контроля над побуждениями, фобические расстройства, диссоциативные состояния и, кроме того, зависимость от курения, лекарственную зависимость и алкоголизм. В частности, биполярные расстройства, психоз, тревогу и зависимость.

Соединения по настоящему изобретению полезны в предупреждении или лечении невропатической боли. Синдромы невропатической боли включают, но не ограничиваются ими, диабетическую невропатию; ишиалгию; неспецифическую боль в поясничном отделе позвоночника; боль при рассеянном склерозе; фибромиалгию; ВИЧ-обусловленную невропатию; невралгию, такую как постгерпетическая невралгия и невралгия тройничного нерва, невралгия Мортона, каузалгия; и боль, обусловленную физической травмой, ампутацией, фантомом конечности, раковым заболеванием, токсинами или хроническими воспалительными состояниями; центральную боль, такую как боль, наблюдаемую при таламических синдромах; смешанные центральные и периферические формы боли, такие как комплексные региональные болевые синдромы (CRPS), также называемые симпатическими рефлекторными дистрофиями.

Соединения по изобретению также полезны для лечения хронической боли. Хроническая боль включает, но не ограничивается ими, хроническую боль, вызванную воспалением или связанным с воспалением состоянием, остеоартритом, ревматоидным артритом, острым повреждением или травмой, боль в верхнем отделе позвоночника и боль в поясничном отделе позвоночника (являющуюся результатом системного, регионарного или первичного заболевания позвоночника, такого как радикулопатия), костную боль (обусловленную остеоартритом, остеопорозом, костным метастазированием или неизвестными причинами), тазовую боль, боль, ассоциированную с травмой позвоночника, кардиальную боль в грудной клетке, некардиальную боль в грудной клетке, центральную постинсультную боль, миофасциальную боль, боль при серповидноклеточной анемии, боль при раковом заболевании, боль при болезни Фабри, боль при синдроме приобретенного иммунодефицита (СПИД), гериартрическую боль или боль, причиной которой являются головная боль, синдром височно-нижнечелюстного сустава, подагра, фиброз или компрессионные синдромы верхней апертуры грудной клетки, в частности ревматоидный артрит и остеоартрит.

Соединения по изобретению также полезны в лечении острой боли, вызванной острым повреждением, болезнью, спортивно-медицинскими повреждениями, запястным туннельным синдромом, ожогами, растяжениями и напряжениями в скелетно-мышечной системе, мышечно-сухожильным растяжением, шейно-плечевыми болевыми синдромами, диспепсией, язвой желудка, язвой двенадцатиперстной кишки, дисменореей, эндометриозом или хирургическим вмешательством (таком как, операции на открытом сердце или коронарное шунтирование), в лечении послеоперационной боли, боли при камнях в почках, боли в желчном пузыре, боли при камнях в желчном пузыре, родовой боли или зубной боли.

Соединения по изобретению также полезны в лечении головных болей, таких как мигрень, головная боль напряжения, трансформированная мигрень или развивающаяся головная боль, кластерная головная боль, а также расстройств, связанных с вторичной головной болью, таких как расстройства, вызванные инфекциями, метаболическими расстройствами или другими системными болезнями, и других острых головных болей, пароксизмальной гемикрании и т.п., являющихся результатом ухудшения вышеупомянутых первичной и вторичной головных болей.

Соединения по изобретению также полезны в лечении таких заболеваний, как головокружение, шум в ушах, мышечный спазм и другие расстройства, включая, но не ограничиваясь ими, сердечно-сосудистые заболевания (такие как сердечная аритмия, инфаркт миокарда или стенокардия, гипертензия, сердечная ишемия, церебральная ишемия), эндокринные расстройства (такие как акромегалия или несахарный диабет), заболевания, при которых патофизиология расстройства включает избыточную секрецию или гиперсекрецию или другую неподходящую клеточную секрецию эндогенного вещества (такого как катехоламин, гормон или фактор роста).

Соединения по изобретению также полезны в избирательном лечении заболеваний печени, таких как воспалительные заболевания печени, например хронический вирусный гепатит В, хронический вирусный гепатит С, алкогольное поражение печени, первичный билиарный цирроз, аутоиммунный гепатит, фиброз печени, неалкогольный стеатогепатит и отторжение трансплантата печени.

Соединения по изобретению ингибируют воспалительные процессы, поражающие все системы организма. Поэтому они полезны в лечении воспалительных процессов скелетно-мышечной системы, перечень примеров которых, не являющийся исчерпывающим перечнем всех целевых расстройств, следующий: артритические состояния, такие как, анкилозирующий спондилит, артрит шейного отдела позвоночника, фибромиалгия, подагра, ювенильный ревматоидный артрит, пояснично-крестцовый артрит, остеоартрит, остеопороз, псориатический артрит, ревматическое заболевание; расстройства, поражающие кожу и родственные ткани: экзема, псориаз, дерматит и воспалительные состояния, такие как солнечный ожог; расстройства дыхательной системы: астма, аллергический ринит и респираторный дистресс-синдром, легочные расстройства, в которые вовлечено такое воспаление, как астма и бронхит; хроническая обструктивная болезнь легких; расстройства иммунной и эндокринной систем: узелковый периартрит, тиреоидит, апластическая анемия, склеродермия, тяжелая миастения, рассеянный склероз и другие демиелинизирующие заболевания, энцефаломиелит, саркоидоз, почечный синдром, синдром Бехчета, полимиозит, гингивит.

Соединения по изобретению также полезны в лечении расстройств желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), таких как воспалительные заболевания кишечника (IBD), включая, но не ограничиваясь ими, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, илеит, проктит, глютеновая болезнь, энтеропатии, микроскопический или коллагенозный колит, эозинофильный гастроэнтерит или паучит в результате проктоколэктомии и постиленатального анастомоза и синдром раздраженного кишечника, включающий любые расстройства, ассоциированные с абдоминальной болью и/или абдоминальным дискомфортом, такие как пилороспазм, нервная диспепсия, синдром раздраженной толстой кишки, спастический колит, спастический кишечник, невроз кишечника, функциональный колит, слизистый колит, колит, вызванный приемом слабительных средств, и функциональная диспепсия; а также для лечения атрофического гастрита, гастрита различной этиологии (gastritis varialoforme), неспецифического язвенного колита, пептической язвы, изжоги и другого поражения ЖКТ, например в результате инфекции Helicobacter pylori, гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, гастропареза, такого как диабетический гастропарез; и других функциональных расстройств кишечника, таких как неязвенная диспепсия (NUD); рвота, диарея и висцеральное воспаление.

Соединения по изобретению также полезны в лечении расстройств мочеполового тракта, таких как гиперактивность мочевого пузыря, простатит (хронический бактериальный и хронический небактериальный простатит), простатодиния, интерстициальный цистит, недержание мочи и доброкачественная гиперплазия предстательной железы, аднексит, пельвиоперитонит, бартолинит и вагинит. В частности, гиперактивность мочевого пузыря и недержание мочи.

Соединения по изобретению также полезны в лечении офтальмологических заболеваний, таких как ретинит, ретинопатия, увеит и острое повреждение ткани глаза, возрастная дегенерация желтого пятна или глаукома, конъюнктивит.

Соединения по изобретению также полезны в лечении расстройств приема пищи, таких как нервная анорексия, включая подтипы ограничительного типа и типа с компульсивным перееданием/очищением кишечника (при помощи слабительных средств); нервная булимия, включая подтипы булимии с очищением кишечника и булимии без очищения кишечника; ожирение; компульсивные расстройства приема пищи; компульсивное переедание; и не классифицированное расстройство приема пищи.

Соединения по изобретению также полезны в лечении аллергического дерматита, гипервосприимчивости дыхательных путей, хронической обструктивной болезни легких (COPD), бронхита, септического шока, синдрома Шегрена, гломерулонефрита, атеросклероза, роста и метастазирования клеток злокачественного образования, миелобластного лейкоза, диабета, менингита, остеопороза, ожогового повреждения, ишемической болезни сердца, инсульта, заболевания периферических кровеносных сосудов, варикозного расширения вен, глаукомы.

Термины "проведение лечения" и "лечение", использованные в данном описании, относятся к терапевтическому, паллиативному и профилактическому лечению, включая реверсирование, облегчение, торможение развития или предупреждение заболевания, расстройства или состояния, к которому применяется такой термин, или одного или более симптомов такого заболевания, расстройства или состояния.

Кроме того, согласно настоящему изобретению предложены фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество соединения формулы (I).

Для приготовления фармацевтических композиций по настоящему изобретению эффективное количество конкретного соединения, в форме соли присоединения основания или кислоты, в качестве активного ингредиента объединяют в однородной смеси с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым носителем, который может иметь самые разнообразные формы в зависимости от формы препарата, требующегося для введения. Эти фармацевтические композиции желательно находятся в стандартной лекарственной форме, предпочтительно для перорального введения, ректального введения, чрескожного введения или парентерального инъецирования.

Например, при приготовлении композиций в пероральной лекарственной форме можно использовать любой обычный жидкий фармацевтический носитель, такой как, например, вода, гликоли, масла, спирты и тому подобное, в случае пероральных препаратов в жидкой форме, таких как суспензии, сиропы, эликсиры и растворы; или можно использовать любой твердый фармацевтический носитель, такой как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие вещества, разрыхлители и тому подобное в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Ввиду легкости их введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее удобную пероральную стандартную лекарственную форму, и в этом случае несомненно используют твердые фармацевтические носители. В случае композиций для парентерального инъецирования фармацевтический носитель будет преимущественно содержать стерильную воду, хотя для улучшения растворимости активного ингредиента могут быть включены другие ингредиенты.

Растворы для инъекций могут быть приготовлены, например, с использованием фармацевтически приемлемого носителя, содержащего физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь их обоих. Суспензии для инъекций также могут быть приготовлены с использованием подходящих жидких носителей, суспендирующих агентов и тому подобного. Фармацевтический носитель в композициях, подходящих для чрескожного введения, возможно может содержать агент, усиливающий проникновение через кожу, и/или подходящий увлажняющий агент, возможно в комбинации с небольшими количествами подходящих добавок, которые не оказывают существенного вредного воздействия на кожу. Указанные добавки могут быть выбраны в целях облегчения введения активного ингредиента в кожу и/или быть полезными для приготовления требуемых композиций. Эти композиции для местного применения можно вводить различными способами, например, в виде трансдермального пластыря, препарата для капельного нанесения ("spot-on") или мази. Соли присоединения соединений формулы (1), благодаря их повышенной растворимости в воде по сравнению с соответствующей основной формой, несомненно являются более подходящими для приготовления водных композиций.

Особенно предпочтительным является приготовление фармацевтических композиций по изобретению в стандартной лекарственной форме для удобства введения и единообразия дозировки.

Термин "стандартная лекарственная форма", используемый в данном описании, относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве однократных дозировок, причем каждая единица содержит предопределенное количество активного ингредиента, рассчитанное таким образом, чтобы производить желаемый терапевтический эффект, совместно с необходимым фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (в том числе делимые таблетки или таблетки, покрытые оболочкой), капсулы, пилюли, пакетики с порошком, облатки, растворы или суспензии для инъекций, отмеренные дозы, соответствующие чайной ложке, отмеренные дозы, соответствующие столовой ложке, и тому подобное и их разделенные кратные количества.

Для перорального введения фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут иметь форму твердых лекарственных форм, например таблеток (как в проглатываемых, так и в жевательных формах), капсул или желатиновых капсул, приготовленных традиционными способами с фармацевтически приемлемыми эксципиентами и носителями, такими как связующие вещества (например, прежелатинизированный маисовый крахмал, поливинилпирролидон, гидроксипропилметилцеллюлоза и тому подобное), наполнители (например, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза, фосфат кальция и тому подобное), смазывающие вещества (например, стеарат магния, тальк, диоксид кремния и тому подобное), разрыхлители (например, картофельный крахмал, натриевая соль гликолята крахмала и тому подобное), увлажняющие агенты (например, лаурилсульфат натрия) и тому подобное. Такие таблетки также могут быть покрыты оболочкой способами, хорошо известными в данной области техники.

Жидкие препараты для перорального введения могут иметь форму, например, растворов, сиропов или суспензий, или они могут быть приготовлены в виде сухого продукта для смешивания с водой и/или другим подходящим жидким носителем перед использованием. Такие жидкие препараты могут быть приготовлены традиционными методами, возможно вместе с другими фармацевтически приемлемыми добавками, такими как суспендирующие агенты (например, сироп сорбита, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза или гидрированные пищевые жиры), эмульгирующие агенты (например, лецитин или аравийская камедь), неводные носители (например, миндальное масло, сложные эфиры жирных кислот или этиловый спирт), подсластители, корригенты, агенты, маскирующие вкус и запах, и консерванты (например, метил- или пропил-пара-гидроксибензоаты или сорбиновая кислота).

Фармацевтически приемлемые подсластители, пригодные для использования в фармацевтических композициях по изобретению, предпочтительно включают по меньшей мере один подсластитель с интенсивным вкусом, такой как аспартам, ацесульфам калия, цикламат натрия, алитам, дигидрохалконовый подсластитель, монеллин, стевиозид-сукралоза (4,1',6'-трихлор-4,1',6'-тридезоксигалактосахароза) или, предпочтительно, сахарин, натриевая или кальциевая соль сахарина, и возможно по меньшей мере один объемный подсластитель, такой как сорбит, маннит, фруктоза, сахароза, мальтоза, изомальт, глюкоза, гидрогенизированный глюкозный сироп, ксилит, карамель или мед. Подсластители с интенсивным вкусом обычно используют в низких концентрациях. Например, в случае натриевой соли сахарина указанная концентрация может находиться в диапазоне от примерно 0,04% до 0,1% (масса/объем) от конечной композиции. Объемный подсластитель можно эффективно использовать в более высоких концентрациях, в диапазоне от примерно 10% до примерно 35%, предпочтительно от примерно 10% до примерно 15% (масса/объем). Фармацевтически приемлемые корригенты, которые могут маскировать горькие ингредиенты в композициях с низкими уровнями дозировки, предпочтительно включают фруктовые корригенты, такие как вишневый, малиновый, черносмородиновый или клубничный корригент. Комбинация двух корригентов может обеспечивать очень хорошие результаты. В композициях с высокими уровнями дозировки могут потребоваться более сильные фармацевтически приемлемые корригенты, такие как Карамель-шоколад (Caramel Chocolate), Освежающая мята (Mint Cool), Фантазия (Fantasy) и тому подобное.

Каждый корригент может присутствовать в конечной композиции в концентрации в диапазоне от примерно 0,05% до 1% (масса/объем). Предпочтительным является использование комбинаций указанных сильных корригентов. Предпочтительно использовать корригент, который не претерпевает никаких изменений или не теряет вкус и/или цвет в условиях данной композиции.

Соединения формулы (I) могут быть приготовлены также в виде композиций для парентерального введения инъекциями, обычно внутривенными, внутримышечными или подкожными инъекциями, например болюсной инъекцией или непрерывной внутривенной инфузией. Композиции для инъекций могут быть представлены в стандартной лекарственной форме, например в ампулах или многодозовых контейнерах, в том числе с добавлением консерванта. Они могут находиться в таких формах, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных носителях, и могут содержать рецептурные агенты, такие как агенты, обеспечивающие изотоничность, суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Альтернативно, активный ингредиент может присутствовать в порошковой форме для смешивания с подходящим носителем, например стерильной апирогенной водой, перед использованием.

Соединения формулы (I) также могут быть приготовлены в форме ректальных композиций, таких как суппозитории или удерживающие клизмы, например содержащие традиционные суппозиторные основы, такие как масло какао и/или другие глицериды.

Специалисты в области лечения заболеваний, связанных с посредничеством лиганд-управляемых ионных каналов, легко определят терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) по результатам тестов, представленным ниже. Как правило, подразумевается, что терапевтически эффективная доза будет составлять от примерно 0,001 мг/кг до примерно 50 мг/кг массы тела, более предпочтительно от примерно 0,01 мг/кг до примерно 10 мг/кг массы тела подлежащего лечению пациента. Может оказаться приемлемым введение терапевтически эффективной дозы в форме двух или более субдоз через подходящие интервалы времени на протяжении суток. Указанные субдозы могут быть приготовлены в виде стандартных лекарственных форм, каждая из которых содержит, например, от примерно 0,1 мг до примерно 1000 мг, более конкретно от примерно 1 до примерно 500 мг активного ингредиента на одну стандартную лекарственную форму.

В настоящем описании изобретения "терапевтически эффективное количество" соединения представляет собой количество соединения, в результате введения которого индивидууму или животному уровень этого соединения у индивидуума или животного оказывается достаточно высоким, чтобы вызвать заметный антагонистический ответ в отношении Р2Х7 рецепторов.

Точная дозировка и частота введения зависят от конкретного используемого соединения формулы (I), конкретного состояния, подлежащего лечению, тяжести состояния, подлежащего лечению, возраста, массы и общего физического состояния конкретного пациента, а также других лекарственных средств, которые этот пациент может принимать, что общеизвестно специалистам в данной области. Кроме того, указанное "терапевтически эффективное количество" можно снижать или увеличивать в зависимости от реакции пациента, которого лечат, и/или в зависимости от оценки врача, назначающего соединения по настоящему изобретению. Поэтому упомянутые выше диапазоны эффективных количеств, принимаемых в течение одних суток, представляют собой всего лишь рекомендации.

Номенклатура и структуры

Как правило, использованная в данной заявке номенклатура базируется на ChemSketch™ (ACDLabs) и создана согласно систематической номенклатуре IUPAC (Международный союз по теоретической и прикладной химии). Химические структуры, показанные в данном описании, были получены с использованием ISIS^®, версия 2.2. Любая свободная валентность, показанная на атоме углерода, кислорода, серы или азота в приведенных в данном описании структурах, указывает на присутствие атома водорода, если не указано иное. Если азотсодержащее гетероарильное кольцо показано со свободной валентностью на атоме азота, и на этом гетероарильном кольце показаны переменные, такие как R¹, R², R³ и т.д., то такие переменные могут быть связаны или соединены с атомом азота, имеющим свободную валентность. Если в структуре существует хиральный центр, но для этого хирального центра не показана никакая конкретная стереохимия, то данная структура охватывает оба энантиомера, ассоциированные с данным хиральным центром. Если структура, показанная в данном описании, может существовать в нескольких таутомерных формах, то все такие таутомеры охвачены этой структурой. Подразумевается, что атомы, представленные в структуре, приведенной в данном описании, охватывают все существующие в природе изотопы таких атомов. Так, например, подразумевается, что атомы водорода, представленные в данном описании, включают дейтерий и тритий, и подразумевается, что атомы углерода включают изотопы С¹³ и С¹⁴.

Сокращения

В описании схем и примеров использованы следующие сокращения:

СС: колоночная хроматография; DCM: дихлорметан; DEAD: диэтилазодикарбоксилат; DMF: диметилформамид; ЕР: петролейный эфир; EtOAc: этилацетат; EtOH: этанол; ч: часы; MeCN: ацетонитрил; мин: минута(ы); н.: нормальный; ЯМР: ядерный магнитный резонанс; PPh₃: трифенилфосфин; PPh₃O: трифенилфосфина оксид; к.т.: комнатная температура; THF: тетрагидрофуран; ЖХ-МС: жидкостная хроматография/масс-спектрометрия; K₂CO₃: карбонат калия; Na₂SO₄: сульфат натрия; ВЭЖХ: высокоэффективная жидкостная хроматография; о.n.: в течение ночи; CH₃ONa: метоксид натрия; NaCl: хлорид натрия; CDI: 1,1'-карбонилдиимидазол; DBU: 1,5-диазабицикло(5.4.0)ундец-5-ен; HCl: соляная кислота; Y: выход.

Экспериментальная часть

Приведенные ниже примеры иллюстрируют настоящее изобретение. Если конкретно не указано иное, все показатели (в особенности процентные содержания и количества) относятся к массе.

Синтез промежуточных соединений

Большинство замещенных нитрильных производных, использованных в качестве исходных веществ, были приобретены у поставщиков химической продукции:

Некоторые нитрильные производные, использованные в качестве исходных веществ, были синтезированы согласно следующей общей методике:

K₂CO₃ (1,5 экв.) добавляли в раствор подходящего амина (1,0 экв.) и добавляли бромацетонитрил (1,1 экв.) в ACN (10 мл), и эту смесь перемешивали при к.т. Затем выпавшие в осадок соли отфильтровывали, и фильтрат упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией (DCM/AcOEt 1:1 об./об.) с получением чистых нитрильных производных (Y=61-97%).

С использованием этой методики промежуточные соединения 0а (Y=64%) и 0b (Y=70%) были получены, начиная с соответствующих коммерчески доступных исходных веществ.

Получение производных N'-гидроксиэтанимидамида (IV) (Типичная методика)

Гидроксиламина гидрохлорид (2,5 экв.) и K₂CO₃ (2,5 экв.) растворяли в EtOH (20-40 мл), и смесь перемешивали в течение 30 мин при к.т.; затем добавляли подходящее нитрильное производное (1,0 экв.) (V), и реакционную смесь нагревали при температуре дефлегмации в течение 12 ч. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывали, и фильтрат выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали методом СС (DCM/EtOAc 1:1 об./об.) с получением чистого N'-гидроксиэтанимидамида (Y=35-97%).

С использованием этой методики промежуточные соединения 1a (Y=64%), 1b (Y=70%), 1c (Y=72%), 1d (Y=80%), 1e (Y=55%), 1f (Y=82%), 1g (Y=79%), 1h (Y=72%), 1i (Y=46%), 1j (Y=68%), 1k (Y=69%), 1l (Y=82%), 1m (Y=96%), 1n (Y=71%), 1o (Y=79%), 1p (Y=94%), 1q (Y=95%), 1r (Y=72%), 1s (Y=97%), 1u (Y=71%), 1v (Y=47%), 1w (Y=76%), 1x (Y=92%), 1y (Y=56%), 1z (Y=91%), 1aa (Y=76%), 1bb (Y=90%), 1cc (Y=79%), 1dd (Y=72%), 1ee (Y=87%), 1ff (Y=85%), 1gg (Y=61%), 1hh (Y=69%), 1ii (Y=66%), 1jj (Y=88%), 1kk (Y=95%), 1ll (Y=90%), 1mm (Y=84%) были получены, начиная с соответствующего коммерчески доступного нитрильного производного.

Получение 1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-она (II) (Типичная методика)

В раствор подходящего промежуточного соединения IV (1,0 экв.) в 1,4-диоксане (10-30 мл) добавляли CDI (1,5 экв.) и DBU (1,1 экв.) при к.т., и эту смесь перемешивали в течение 3 ч при 105°С. После охлаждения смесь разбавляли водой, промывали EtOAc, доводили до рН 2 добавлением 3 н. HCl и экстрагировали EtOAc. EtOAc-экстракты промывали рассолом, сушили над Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали методом СС (гексан/EtOAc 1:1 об./об.) с получением чистого 1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-она (Y=20-98%).

С использованием этой методики:

промежуточное соединение 2а (Y=87%) было получено, начиная с 1а;

промежуточное соединение 2b (Y=86%) было получено, начиная с 1b;

промежуточное соединение 2с (Y=85%) было получено, начиная с 1с;

промежуточное соединение 2d (Y=61%) было получено, начиная с 1d;

промежуточное соединение 2е (Y=88%) было получено, начиная с 1е;

промежуточное соединение 2f (Y=59%) было получено, начиная с 1f;

промежуточное соединение 2g (Y=85%) было получено, начиная с 1g;

промежуточное соединение 2h (Y=61%) было получено, начиная с 1h;

промежуточное соединение 2i (Y=41%) было получено, начиная с 1i;

промежуточное соединение 2j (Y=90%) было получено, начиная с 1j;

промежуточное соединение 2k (Y=76%) было получено, начиная с 1k;

промежуточное соединение 2l (Y=77%) было получено, начиная с 1l;

промежуточное соединение 2m (Y=76%) было получено, начиная с 1m;

промежуточное соединение 2n (Y=76%) было получено, начиная с 1n;

промежуточное соединение 2о (Y=61%) было получено, начиная с 1о;

промежуточное соединение 2р (Y=48%) было получено, начиная с 1р;

промежуточное соединение 2q (Y=20%) было получено, начиная с 1q;

промежуточное соединение 2r (Y=46%) было получено, начиная с 1r;

промежуточное соединение 2s (Y=98%) было получено, начиная с 1s;

промежуточное соединение 2u (Y=72%) было получено, начиная с 1u;

промежуточное соединение 2v (Y=72%) было получено, начиная с 1v;

промежуточное соединение 2w (Y=75%) было получено, начиная с 1w;

промежуточное соединение 2х (Y=60%) было получено, начиная с 1х;

промежуточное соединение 2у (Y=40%) было получено, начиная с 1у;

промежуточное соединение 2z (Y=82%) было получено, начиная с 1z;

промежуточное соединение 2аа (Y=86%) было получено, начиная с 1аа;

промежуточное соединение 2bb (Y=89%) было получено, начиная с 1bb;

промежуточное соединение 2сс (Y=67%) было получено, начиная с 1сс;

промежуточное соединение 2dd (Y=44%) было получено, начиная с 1dd;

промежуточное соединение 2ее (Y=52%) было получено, начиная с 1ee;

промежуточное соединение 2ff (Y=84%) было получено, начиная с 1ff;

промежуточное соединение 2gg (Y=61%) было получено, начиная с 1gg;

промежуточное соединение 2hh (Y=56%) было получено, начиная с 1hh;

промежуточное соединение 2ii(Y=83%) было получено, начиная с 1ii;

промежуточное соединение 2jj (Y=40%) было получено, начиная с 1jj;

промежуточное соединение 2kk (Y=57%) было получено, начиная с 1kk;

промежуточное соединение 2ll (Y=57%) было получено, начиная с 1ll;

промежуточное соединение 2mm (Y=50%) было получено, начиная с 1mm;

Получение 1,2,4-тиадиазол-5(4Н)-она (IIa) (Типичная методика)

Смесь подходящего промежуточного соединения VI (1,0 экв.) и TCDI (1,5 экв.) в THF (20 мл) перемешивали при к.т.в течение 30 минут. Смесь разбавляли водой и экстрагировали EtOAc; экстракт промывали водой и сушили над Na₂SO₄, фильтровали, и растворитель выпаривали в вакууме. Полученный остаток растворяли в THF (20 мл), в раствор добавляли диэтилэфират трифторида бора (3,0 экв.), и полученную смесь перемешивали при к.т.в течение еще 1 ч. Смесь разбавляли водой и экстрагировали EtOAc; экстракт промывали водой и сушили над Na₂SO₄, фильтровали, и растворитель выпаривали в вакууме. Продукт использовали без очистки на следующей стадии. Этим способом был получен чистый 1,2,4-тиадиазол-5(4Н)-он (Y=66-82%).

С использованием этой методики:

промежуточное соединение 3а (Y=66%) было получено, начиная с промежуточного соединения 1g;

промежуточное соединение 3b (Y=82%) было получено, начиная с промежуточного соединения 1v;

Общие методики синтеза конечных соединений

Способ А

Примеры получения 1-7

В раствор промежуточного соединения 2 (1,0 экв.), подходящего коммерчески доступного спирта (1,0 экв.) и PPh₃ (4,0 экв.) в THF (5-10 мл) при 0°С добавляли по каплям 40% масс, раствор DEAD в толуоле (4,0 экв.); эту реакционную смесь перемешивали при к.т.в течение 24 ч в инертной атмосфере. Растворитель концентрировали при пониженном давлении; остаток растворяли в минимальном количестве диэтилового эфира и охлаждали при -20°С до образования белого осадка (PPh₃O и восстановленный DEAD), который отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом ВЭЖХ с получением чистого целевого соединения (Y=9%-66%).

Согласно этой методике следующие соединения были получены с использованием подходящих промежуточных соединений и спиртов:

Способ В

Примеры получения 8-49

В холодный (0°С) раствор промежуточного соединения 2 (1,0 экв.) в смеси MeCN/DMF (5:1 об./об. 5-10 мл/1-3 мл) добавляли K₂CO₃ (2,5 экв.), затем добавляли подходящий коммерчески доступный галогенид (1,2 экв.). Реакционную смесь оставляли нагреваться до к.т. и перемешивали при этой температуре в течение ночи. Реакцию гасили добавлением воды и экстрагировали EtOAc. Органические слои объединяли, промывали рассолом, сушили над Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом ВЭЖХ с получением чистого целевого соединения (Y=14%-83%).

Согласно этой методике следующие соединения были получены с использованием подходящих промежуточных соединений и реагентов:

Способ С

Примеры получения 50-80

В холодный (0°С) раствор промежуточного соединения 2 (1,0 экв.) в смеси MeCN/DMF (5:1 об./об. 5-10 мл/1-3 мл) добавляли K₂CO₃ (1,1 экв.), затем добавляли коммерчески доступный галогенид (0,8 экв.). Реакционную смесь оставляли нагреваться до к.т. и затем перемешивали при этой температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь гасили добавлением воды и экстрагировали EtOAc. Органические слои объединяли, промывали рассолом, сушили над Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом ВЭЖХ с получением чистого целевого соединения (У=12%-97%).

Согласно этой методике следующие соединения были получены с использованием подходящих промежуточных соединений и реагентов:

Способ D

Примеры получения 81-134, Примеры получения 139-147 и Примеры получения 150-251

В охлажденный (0°С) раствор промежуточного соединения 2 или 3 (1,0 экв.) в DMF (5-12 мл) добавляли CH₃ONa (1,5 или 3,0 экв.), и эту смесь перемешивали при той же температуре в течение 10 мин. Затем добавляли подходящий коммерчески доступный галогенид (2,5 или 5,0 экв.), и реакционную смесь оставляли нагреваться до к.т., перемешивали при подходящей температуре в течение варьируемого времени (см. конкретные примеры). Реакционную смесь гасили добавлением воды и экстрагировали EtOAc. Органические слои объединяли, промывали насыщенным водным раствором NaCl, сушили над Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом ВЭЖХ с получением чистого целевого соединения (Y=3%-96%).

С использованием этой методики были получены следующие соединения:

Пример 81: соединение (выход 89%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2b и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: в течение ночи при к.т.

Пример 82: соединение (выход 64%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 83: соединение (выход 74%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и (бромметил)-циклопропана (CAS: 7051-34-5); реакционные условия: в течение ночи при к.т.

Пример 84: соединение (выход 67%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 85: соединение (выход 58%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и (бромметил)-циклопентана (CAS: 3814-30-0); реакционные условия: в течение ночи при 80°С.

Пример 86: соединение (выход 50%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 4-(бромметил)-1,1-диметилциклогексана (CAS: 1432681-20-3); реакционные условия: 24 ч при 60°С.

Пример 87: соединение (выход 28%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-(бромметил)-1-метилциклогексана (CAS: 408307-48-2); реакционные условия: 2 недели при 60°С

Пример 88: соединение (выход 18%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 2-(бромметил)- бицикло[2.2.1]гептана (CAS: 55932-58-6); реакционные условия: 2 недели при к.т., затем 7 суток при 60°С.

Пример 89: соединение (выход 36%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 3-(бромметил)тетрагидро-2Н-пирана (CAS: 116131-44-3); реакционные условия: 5 суток при к.т.

Пример 90: соединение (выход 68%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-бром-2-пентин (CAS: 16400-32-1); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 91: соединение (выход 34%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-(бромметил)-бицикло[2.2.1]гептана (CAS: 61192-17-4); реакционные условия: 5 суток при 70°С.

Пример 92: соединение (выход 23%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и (бромметил)-циклогептана (CAS: 3814-32-2); реакционные условия: 9 суток при к.т.

Пример 93: соединение (выход 35%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 4-(бромметил)тетрагидро-2Н-пирана (CAS: 125552-89-8); реакционные условия: 5 суток при к.т.

Пример 94: соединение (выход 24%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 2-(бромметил)тетрагидро-2Н-пирана (CAS: 34723-82-5); реакционные условия: 5 суток при к.т.

Пример 95: соединение (выход 84%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-бром-2-бутина (CAS: 3355-28-0); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 96: соединение (выход 3%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-(бромметил)-1-фтор-циклогексана (CAS: 17171-00-5); реакционные условия: 7 суток при 70°С.

Пример 97: соединение (выход 19%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 2-(бромметил)-1,1-дифтор-циклогексана (CAS: 1817326-97-4); реакционные условия: 5 суток при 70°С.

Пример 98: соединение (выход 14%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 2-(хлорметил)-1,4-диоксана (CAS: 21048-16-8); реакционные условия: 1 месяц при 60°С.

Пример 99: соединение (выход 25%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 2-(бромметил)-1,1-диметил-циклогексана (CAS: 1501249-61-1); реакционные условия: 7 суток при 60°С.

Пример 100: соединение (выход 37%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и бромметокси-метана (CAS: 13057-17-5); реакционные условия: 5 суток при к.т.

Пример 101: соединение (выход 70%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и бромметокси-этана (CAS: 53588-92-4); реакционные условия: в течение ночи при к.т.

Пример 102: соединение (выход 37%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-(бромметокси)-пропана (CAS: 59375-50-7); реакционные условия: 4 суток при к.т.

Пример 104: соединение (выход 65%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2р и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 105: соединение (выход 90%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2s и 4-фторбензилбромида, CAS: 459-46-1; реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 107: соединение (выход 77%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2b и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 108: соединение (выход 79%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2о и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 109: соединение (выход 93%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2d и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 110: соединение (выход 28%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2р и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: 24 ч при к.т., затем 24 ч при 60°С.

Пример 111: соединение (выход 29%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2r и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при к.т., затем 3 ч при 80°С.

Пример 112: соединение (выход 88%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2е и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 113: соединение (выход 59%) было получено, начиная с промежуточного соединения 21 и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 114: соединение (выход 84%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2n и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 115: соединение (выход 31%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2j и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: 48 ч при 60°С.

Пример 116: соединение (выход 50%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2s и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 117: соединение (выход 61%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2f и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 118: соединение (выход 29%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2m и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 119: соединение (выход 80%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2k и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 120: соединение (выход 89%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2с и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 121: соединение (выход 53%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2h и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 122: соединение (выход 50%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2i и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 123: соединение (выход 21%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2q и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 125: соединение (выход 78%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2b и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 126: соединение (выход 75%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2о и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 127: соединение (выход 90%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2d и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 128: соединение (выход 70%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 3-(бромметил)-1,1-дифторциклопентана (CAS: 1695914-13-6); реакционные условия: 24 ч при 60°С.

Пример 129: соединение (выход 96%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2u и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 130: соединение (выход 93%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2u и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: в течение ночи при к.т.

Пример 131: соединение (выход 85%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2u и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 132: соединение (выход 91%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: в течение ночи при к.т.

Пример 133: соединение (выход 64%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 134: соединение (выход 50%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 139: соединение (выход 48%) было получено, начиная с промежуточного соединения 3а и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: в течение ночи при к.т.

Пример 140: соединение (выход 24%) было получено, начиная с промежуточного соединения 3а и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 60С.

Пример 141: соединение (выход 44%) было получено, начиная с промежуточного соединения 3а и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 142: соединение (выход 59%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-бром-2-циклогексилэтана (CAS: 1647-26-3); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 143: соединение (выход 45%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-(2-бромэтил)пиперидина (CAS: 56477-57-7); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 144: соединение (выход 76%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2w и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: 2 ч при 60°С.

Пример 145: соединение (выход 60%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2w и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 146: соединение (выход 69%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2w и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 147: соединение (выход 19%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2w и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 150: соединение (выход 69%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2с и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 151: соединение (выход 47%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2b и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 152: соединение (выход 44%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2а и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 153: соединение (выход 56%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2k и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 154: соединение (выход 33%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2е и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 155: соединение (выход 39%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2l и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 156: соединение (выход 57%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2j и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 157: соединение (выход 48%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2s и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 158: соединение (выход 40%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2f и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 159: соединение (выход 42%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2m и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 160: соединение (выход 62%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2d и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 161: соединение (выход 63%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2о и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 162: соединение (выход 48%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2n и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 48 ч при 50°С.

Пример 163: соединение (выход 47%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2u и 1-(1-бромэтил)-4-фторбензола (CAS: 65130-46-3); реакционные условия: 24 ч при к.т.

Пример 164: соединение (выход 48%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 1-(1-бромэтил)-4-фторбензола (CAS: 65130-46-3); реакционные условия: 24 ч при к.т.

Пример 165: соединение (выход 72%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 2-фторбензилбромида (CAS: 446-48-0); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 166: соединение (выход 84%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 4-(трифторметил)бензилбромида (CAS: 402-49-3); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 167: соединение (выход 71%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 2-хлор-3-(трифторметил)бензилбромида (СAS: 261763-22-8); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 168: соединение (выход 75%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 2-(бромметил)-5-(трифторметил)фурана (CAS: 17515-77-4); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 169: соединение (выход 74%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 3-бромметил-5-метил-изоксазола (CAS: 130628-75-0); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 170: соединение (выход 86%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 2-хлорбензилхлорида (CAS: 611-19-8); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 171: соединение (выход 65%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и (1-хлорметил)-4-фтор-2-метилбензола (CAS: 80141-92-0); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 172: соединение (выход 53%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и (2-бромэтил)бензола (CAS: 103-63-9); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 173: соединение (выход 55%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 3-(бромметил)-6,6-дифторбицикло[3.1.0]гексана (CAS: 1393569-74-8); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 174: соединение (выход 95%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и йодметана (CAS: 74-88-4); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 175: соединение (выход 58%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и бромэтана (CAS: 74-96-4); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 176: соединение (выход 71%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-бромпропана (CAS: 106-94-5); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 177: соединение (выход 86%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-бромбутана (CAS: 109-65-9); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 178 (выход 38%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-бром-2-метилпропана (CAS: 78-77-3); реакционные условия: 3 суток при 60°С.

Пример 179: соединение (выход 84%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 3-циклогексилпропилбромида (CAS: 34094-21-8); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 180: соединение (выход 75%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-(3-бромпропил)пиперидина гидробромида (CAS: 58689-34-2); реакционные условия: 2 суток при 60°С.

Пример 181: соединение (выход 18%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-(2-бромэтил)-4,4-дифторпиперидина гидробромида (CAS: 1996969-81-3); реакционные условия: 2 суток при 60°С.

Пример 182 (выход 26%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-(3-бромпропил)-4,4-дифторпиперидина гидробромида (CAS: 1782084-16-5); реакционные условия: 2 суток при 60°С.

Пример 183: соединение (выход 57%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 4-(бромметил)-1-циклопентена (CAS: 80864-33-1); реакционные условия: 2 ч при к.т. и в течение ночи при 60°С.

Пример 184: соединение (выход 47%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-(бромметил)-4-(трифторметил)циклогексана (CAS: 858121-96-7); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 185: соединение (выход 56%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2g и 1-(бромметил)-4-фторциклогексана (CAS: 1784609-74-0); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 186: соединение (выход 23%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2kk и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 187: соединение (выход 23%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2kk и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 188: соединение (выход 18%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 1-хлорэтилбензола (CAS: 672-65-1); реакционные условия: одна неделя при 60°С.

Пример 189: соединение (выход 76%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 5-хлорметил-2-(трифторметил)пиридина (CAS: 386715-33-9); реакционные условия: 3 суток при 60°С.

Пример 190: соединение (выход 83%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 2-(хлорметил)-5-фторпиримидина (CAS: 1196151-61-7); реакционные условия: 3 суток при 60°С.

Пример 191: соединение (выход 47%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 2-(хлорметил)тиазола (CAS: 3364-78-1); реакционные условия: 3 суток при 60°С.

Пример 192: соединение (выход 84%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 3-бромметил-2-метил-6-трифторметилпиридина (CAS: 917396-30-6); реакционные условия: 4 ч при к.т.

Пример 193: соединение (выход 41%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 5-(хлорметил)тиазола гидрохлорида (CAS: 131052-44-3); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 194: соединение (выход 46%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 2-хлорметилоксазола (CAS: 185246-17-7); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 195: соединение (выход 39%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 5-(хлорметил)-1,3-диметил-1Н-пиразола (CAS: 852227-86-2); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 196: соединение (выход 45%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 3-(хлорметил)-5-метил-1,2,4-оксадиазола (CAS: 1192-80-9); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 197: соединение (выход 29%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 5-(хлорметил)-3-метил-1,2,4-оксадиазола (CAS: 1192-81-0); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 198: соединение (выход 37%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 1-(хлорметил)-3-(трифторметил)-1H-пиразола (CAS: 860807-20-1); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 199: соединение (выход 35%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 5-(хлорметил)оксазола (CAS: 172649-57-9); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 200: соединение (выход 54%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 5-(хлорметил)-4-метил-тиазола гидрохлорида (CAS 1301739-54-7); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 201: соединение (выход 35%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2v и 2-(хлорметил)-1-метил-1H-имидазола гидрохлорида (CAS 19225-92-4); реакционные условия: в течение ночи при к.т.

Пример 202: соединение (выход 39%) было получено, начиная с промежуточного соединения 3b и 4-фторбензилбромида (CAS 459-46-1); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 203: соединение (выход 21%) было получено, начиная с промежуточного соединения 3b и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: в течение ночи при к.т.

Пример 204: соединение (выход 70%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2gg и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 205: соединение (выход 67%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2gg и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 206: соединение (выход 62%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2gg и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: 24 ч при 60°С.

Пример 207: соединение (выход 70%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2gg и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 24 ч при 60°С.

Пример 208: соединение (выход 72%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2ll и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 209: соединение (выход 86%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2ll и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 210: соединение (выход 28%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2ll и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 211: соединение (выход 31%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2ll и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 212: соединение (выход 41%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2mm и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 24 ч при к.т.

Пример 213: соединение (выход 32%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2mm и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 214: соединение (выход 39%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2mm и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 215: соединение (выход 46%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2mm и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 216: соединение (выход 29%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2х и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 217: соединение (выход 49%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2х и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: в течение ночи при 60°С.

Пример 218: соединение (выход 37%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2х и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: 24 ч при 60°С.

Пример 219: соединение (выход 36%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2х и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 34 ч при 60°С.

Пример 220: соединение (выход 20%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2у и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: в течение ночи при к.т.

Пример 221: соединение (выход 22%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2у и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 2 ч при к.т.

Пример 222: соединение (выход 26%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2у и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: 24 ч при 60°С.

Пример 223: соединение (выход 20%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2у и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 34 ч при 60°С.

Пример 224: соединение (выход 58%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2z и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 225: соединение (выход 83%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2z и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 226: соединение (выход 53%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2сс и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 227: соединение (выход 68%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2сс и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 228: соединение (выход 37%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2hh и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 229: соединение (выход 48%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2hh и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: в течение ночи при к.т.

Пример 230: соединение (выход 30%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2hh и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 231: соединение (выход 36%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2hh и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 232: соединение (выход 34%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2dd и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 233: соединение (выход 28%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2dd и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 234: соединение (выход 23%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2dd и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 235: соединение (выход 23%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2dd и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 236: соединение (выход 54%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2ii и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 237: соединение (выход 55%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2ii и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 238: соединение (выход 41%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2ii и (бромметил)циклогексана (CAS: 2550-36-9); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 239: соединение (выход 44%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2ii и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 240: соединение (выход 19%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2аа и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Примера 241 (выход 66%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2аа и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 242: соединение (выход 65%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2ее и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 243: соединение (выход 36%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2ее и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 244: соединение (выход 32%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2bb и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 245: соединение (выход 19%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2bb и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5); реакционные условия: 2 суток при 50°С.

Пример 246: соединение (выход 11%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2ff и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: 3 ч при к.т.

Пример 247: соединение (выход 20%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2jj и 4-фторбензилбромида (CAS: 459-46-1); реакционные условия: в течение ночи при к.т.

Пример 248: соединение (выход 20%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2jj и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2); реакционные условия: в течение ночи при к.т.

Пример 249: соединение (выход 25%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2jj и (бромметил)циклогексана; CAS: 2550-36-9; реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 250: соединение (выход 30%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2jj и 4-(бромметил)-1,1-дифторциклогексана (CAS: 858121-94-5), реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Пример 251: соединение (выход 35%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2jj и 3-(бромметил)-1,1-дифторциклопентана; CAS: 1695914-13-6; реакционные условия: в течение ночи при 70°С.

Способ Е

Примеры получения 135-138

В смесь промежуточного соединения 2 (1,0 экв.), Cs₂CO₃ (1,0 экв.) и NaI (0,05 экв.) в DMSO (5-12 мл) добавляли по каплям подходящий коммерчески доступный галогенид (0,75 или 1,0 экв.), и эту реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Реакционную смесь гасили добавлением NH₄Cl и экстрагировали EtOAc. Органические слои объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом ВЭЖХ с получением чистого целевого соединения (Y=19%-39%).

С использованием этой методики были получены следующие соединения:

Пример 135: соединение (выход 33%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2l и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2).

Пример 136: соединение (выход 27%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2l и бензилхлорида (CAS: 100-44-7).

Пример 137: соединение (выход 39%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2k и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2).

Пример 138: соединение (выход 19%) было получено, начиная с промежуточного соединения 2j и 2-хлор-6-фторбензилхлорида (CAS: 55117-15-2).

Примеры получения 148-149

Соединения Примера 148 и Примера 149 были получены путем разделения энантиомеров рацемата Примера 128; что касается методик разделения, см. аналитические методы.

Таблица 1. Списки конечных соединений, которые были получены согласно экспериментальной методике, описанной для соединения Примера 1.

Система очистки

Препаративная ВЭЖХ

Система ВЭЖХ WATERS Quaternary Gradient Mobile 2535, оснащенная детектором УФ/видимой области WATERS UV/Visible Detector 2489 для УФ-детектирования при двух длинах волн. Использовали две подвижные фазы: подвижная фаза А: вода (MilliQ) с 0,05% TFA; подвижная фаза В: ацетонитрил (Chromasolv Sigma-Aldrich) с 0,05% TFA, и условия градиентного элюирования устанавливали конкретно для каждого соединения. Очистки осуществляли на колонке LUNA С18 Phenomenex, 5 мкм, 19×150. Использовали впрыскиваемый объем от 100 до 500 мкл, и скорость потока составляла 15 мл/мин.

Разделение рацемата

Два энантиомера 148 и 149 получали путем разделения рацемической смеси 128 с использованием системы WATERS Quaternary Gradient Mobile 2535, оснащенной детектором УФ/видимой области WATERS UV/Visible Detector 2489 для УФ-детектирования при двух длинах волн: 220 и 260 нм. Хиральное разделение осуществляли на колонке Kromasil 5-Amycoat (250 мм × 4,6 мм, размер частиц 5 мкм) с использованием смеси н-гексан (Chromasolv Sigma-Aldrich)-этанол (Chromasolv Sigma-Aldrich) 90-10 (об./об.) в качестве изократической подвижной фазы. Образец элюировали с колонки при скорости потока 1,0 мл/мин при комнатной температуре (давление: примерно 600 фунт/кв. дюйм). Смесь растворяли в этаноле в концентрации 1% (масс./об.), и впрыскиваемый объем составлял 15 мкл.

ЖХ-МС

Общая методика ЖХ-МС

ВЭЖХ-измерение осуществляли с использованием модуля Dionex 3000, включающего в себя насос для четырехкомпонентных смесей с дегазатором, автоматический пробоотборник, термостат для колонки (установленный на 29°С), детектор на диодной матрице DAD и колонку, которая конкретно указана в соответствующих способах ниже. Поток из колонки отводили в масс-спектрометр. МС-детектор (LCQ Fleet Thermo Scientific) был скомпонован с источником электрораспылительной ионизации. Масс-спектры получали путем сканирования от 50 до 800 через 0,48 секунды. Напряжение на капиллярной игле составляло 5 кВ в режиме регистрации положительных и отрицательных ионов, и температура источника поддерживалась при 275°С. В качестве газа-распылителя использовали азот; скорость потока составляла 8 л/мин. Сбор данных осуществляли с использованием Thermo Xcalibur Qual Browser.

Методика ЖХ-МС

В дополнение к общей методике проводили обращенно-фазовую ВЭЖХ на колонке Kinetex ХВ-С18 Phenomenex (1,7 мкм, 50×2,1 мм) при скорости потока 0,300 мл/мин. Использовали две подвижные фазы: подвижная фаза А: буферный раствор на основе формиата аммония при рН 3,5; подвижная фаза В: ацетонитрил (Chromasolv Sigma-Aldrich), и их использовали в условиях градиентного элюирования от 15% В до 98% за 4,5 минуты, выдерживание этих условий в течение 1,35 минуты и затем 15% В за 0,1 минуты и выдерживание этих условиях в течение 3 минут для повторного уравновешивания колонки. Использованный впрыскиваемый объем составлял 1 мкл.

Определение характеристик ЯМР

Спектры¹Н-ЯМР и¹³С-ЯМР регистрировали на спектрометре Varian Mercury ЯМР 400 МГц с использованием CDCl₃, DMSO-d6 или CD₃OD в качестве растворителя. Химические сдвиги (δ) приведены в частях на миллион (млн^-1) относительно остаточного сигнала пика не полностью дейтерированных растворителей для¹H-ЯМР, заданного как 7,26 млн^-1 для CHCl₃, и 3,31 млн^-1 для CHD₂OD и 2,50 млн^-1 для DMSO-d₅ растворителей для¹³С-ЯМР, заданного как 77,16 млн^-1 для CHCl₃ и 49,00 млн^-1 для CD₃OD.

Фармакологические примеры

С использованием набора для определения кальция с применением Fluo-8 без стадии отмывки Screen Quest™ было обнаружено, что проиллюстрирванные примерами соединения по изобретению являются ингибиторами Р2Х7

Внеклеточное связывание Bz-ATP (триэтиламмониевая соль 2'(3')-O-(4-бензоилбензоил)аденозин-5'-трифосфата) с рецептором Р2Х7 открывает канал и обеспечивает поступление Са²⁺ в клетки. Такое поступление Са²⁺ измеряли в клетках HEK-293, стабильно трансфицированных геном, кодирующим Р2Х7 рецептор, используя набор для определения кальция с применением Fluo-8 без стадии отмывки Screen Quest™ (AAt Bioquest®, № по каталогу 36316). Сразу после попадания внутрь клетки липофильные блокирующие группы Fluo-8 отщепляются под действием неспецифических клеточных эстераз с образованием в результате отрицательно заряженного флуоресцентного красителя, который остается внутри клеток. Его флуоресценция усиливается при связывании с ионами кальция. Когда клетки HEK-293/Р2Х7 стимулируют Bz-ATP, Са²⁺ поступает в клетки, и сигнал флуоресценции от Fluo-8 NW (без стадии отмывки) возрастает. Этот краситель имеет спектр поглощения, согласующийся с возбуждением при 488 нм под действием аргоновых лазерных источников, и длина волны его излучения находится в диапазоне 515-575 нм.

Клетки HEK-293, стабильно трансфицированные геном, кодирующим Р2Х7 рецептор, высевали в течение ночи в ростовой среде в количестве 10000-20000 клеток на лунку в 384-луночном планшете. Через 24 часа среду удаляли, и клетки предварительно нагружали Fluo-8 NW в количестве 20 мкл/лунка в течение 1 часа при КТ. Затем с использованием системы флуоресцентного лазерного визуализирующего планшет-ридера

FLIPR_TETRA впрыскивали тестируемые соединения в количестве 10 мкл на лунку и референсный антагонист А438079 в 3-кратной концентрации и в течение пяти минут проводили мониторинг кинетики ответа. С использованием FLIPR_TETRA осуществляли второе впрыскивание 15 мкл на лунку 3х референсного активатора (Bz-ATP при ЕС₈₀ (концентрация, которая дает эффект, равный 80% от максимального)) и регистрировали сигнал испускаемой флуоресценции в течение еще трех минут. Весь эксперимент проводили в используемом в анализе буфере с низким содержанием двухвалентных катионов (0,3 мМ Са²⁺ и 0 мМ Mg²⁺). Эффект тестируемых соединений определяли в виде процента ингибирования относительно референсного антагониста и соответственно рассчитывали значения IC₅₀ (концентрация полумаксимального ингибирования). Здесь приведены диапазоны эффективности в виде А, В, С и D, где А означает <200 нМ; В означает 200 нМ-1 мкМ, С означает 1-10 мкМ, D означает >10 мкМ.

С использованием анализа поглощения YO-PRO®-1 было обнаружено, что проиллюстрированные примерами соединения по изобретению являются ингибиторами Р2Х7.

YO-PRO®-1 представляет собой флуоресцентный ДНК-связывающий краситель с молекулярной массой (MW) 374 Да (Molecular Probes®, № по кат. Y3603). В основе этого метода лежит предполагаемая способность YO-PRO®-1 проникать через расширенную или "большую пору", формируемую рецептором Р2Х7, и связываться с внутриклеточной ДНК, вследствие чего многократно усиливается интенсивность его флуоресценции. Этот краситель имеет спектр поглощения, согласующийся с возбуждением при 488 нм под действием аргоновых лазерных источников, и длина волны его излучения находится в диапазоне 515-575 нм. Цель этого анализа заключалась в подтверждении взаимодействия антагонистов с рецептором Р2Х7 с использованием альтернативного считывания данных по Са²⁺-чувствительным флуоресцентным красителям.

Клетки HEK-293, стабильно трансфицированные геном, кодирующим Р2Х7 рецептор, высевали в течение ночи в ростовой среде в количестве 20000 клеток на лунку в 384-луночном планшете. Через 24 часа среду удаляли, клетки промывали используемым в анализе буфером с низким содержанием двухвалентных катионов (0,3 мМ Са²⁺ и 0 мМ Mg²⁺) и затем предварительно нагружали 5 мкМ красителем YO-PRO^®-1 в количестве 20 мкл на лунку.

Сразу же начинали измерение флуоресценции на системе FLIPR_TETRA. Затем с использованием FLIPR_TETRA впрыскивали тестируемые соединения в количестве 10 мкл лунку и референсный антагонист А438079 в 3-кратной концентрации и в течение пяти минут проводили мониторинг кинетики ответа. С использованием FLIPR_TETRA осуществляли второе впрыскивание 10 мкл на лунку 3х Bz-ATP EC₈₀ (30 мкМ) и регистрировали сигнал испускаемой флуоресценции в течение еще 60 минут. Весь эксперимент проводили в используемом в анализе буфере с низким содержанием двухвалентных катионов (0,3 мМ Са²⁺ и 0 мМ Mg²⁺).

Эффект тестируемых соединений определяли в виде процента ингибирования относительно референсного антагониста и соответственно рассчитывали значения IC₅₀.

В анализе автоматизированным методом пэтч-кламп (метод локальной фиксации потенциала) было обнаружено, что проиллюстрированные примерами соединения по изобретению активны в отношении канала Р2Х7 человека.

Для проведения прямого мониторинга блокирования канала Р2Х7 был разработан и осуществлен электрофизиологический анализ на автоматизированном приборе для электрофизиологических исследований QPatch16X.

Клетки HEK-293, экспрессирующие каналы Р2Х7, культивировали в среде ЕМЕМ (минимальная необходимая среда Игла).

За 72 часа до начала эксперимента во флаконы Т225 высевали 5 миллионов клеток. Непосредственно перед экспериментом клетки дважды промывали, открепляли от стенок флаконов, используя смесь трипсина и EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота), ресуспендировали в растворе для суспендирования и помещали в QPatch16X.

В день эксперимента подготавливали хранившиеся при -20°С соединения (20 мМ в 100%-ном DMSO) (первое разведение 1:20 в 100%-ном DMSO для приготовления 1 мМ исходного раствора, затем приготовление 1 микроМ раствора во внеклеточном растворе + последовательное разведение 1:10).

Стандартные эксперименты с фиксацией потенциала на целой клетке осуществляли при комнатной температуре. В этих экспериментах использовали многоканальную технологию, и данные регистрировали при 2 кГц.

Внутриклеточный раствор содержал (в мМ): 135 CsF, 10 NaCl, 1 EGTA (этиленгликольтетрауксусная кислота), 10 HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота), (рН 7,2 регулировали с использованием CsOH), a внеклеточный раствор содержал (в мМ): 145 NaCl, 4 KCl, 0,5 MgCl₂, 1 CaCl₂, 10 HEPES, 10 Glc (глюкоза) (рН 7,2 регулировали с использованием NaOH).

После установления герметичного контакта и перехода в конфигурацию "целая клетка" потенциал клеток фиксировали при -80 мВ. Ток через канал P2XR7 вызывали, применяя только 100 мкМ BzATP (4 раза), а затем в присутствии возрастающих концентраций исследуемых соединений (1, 10, 100 и 1000 нМ).

Периоды предварительного инкубирования 5-8 соответствуют возрастающим концентрациям интересующего соединения (1, 10, 100 и 1000 нМ), как проиллюстрировано на фигуре (прикладной протокол).

Фигура: прикладной протокол

Измеряли максимальный входящий ток, вызванный BzATP в отсутствие или в присутствии возрастающих концентраций исследуемых соединений, и выполняли нормирование. Потенциальный агонистический эффект измеряли в виде % от контроля и в виде величины IC₅₀, определенной посредством аппроксимации данных из кривых зависимости доза-ответ, используя следующее уравнение:

Y=100/(1+10^((LogIC₅₀ - Х)*коэффициент Хилла)),

где:

X: логарифм концентрации;

Y: нормированный ответ, уменьшается от 100% до 0% по мере увеличения X;

LogIC₅₀: в тех же логарифмических единицах, что и X;

коэффициент Хилла (HS): или коэффициент наклона, безразмерная величина.

Реферат

Изобретение относится к соединениям нижеследующей формулы (I)

или их фармацевтически приемлемым солям, к содержащим их фармацевтическим композициям и к способам получения указанных соединений. Технический результат: получены новые соединения, которые могут быть использованы в лечении состояний или заболеваний, опосредованных рецептором Р2Х7. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 2 табл., 251 пр., 1 ил.

Формула