Способ получения полимеризованных координационных соединений комплекса платины - RU2382056C2

Чертежи

Показать все 11 чертежа(ей)

Описание

Область техники

Настоящее изобретение относится к способу получения конъюгата, в частности координационного соединения, комплекса платины, подходящего для использования в качестве противоопухолевого средства, и блок-сополимера.

Уровень техники

Определенный тип комплексов платины пригоден для использования в качестве противоопухолевого средства, а некоторые из них уже были введены в клиническое применение. В частности, были разработаны конкретные стереоизомеры дихлоро(1,2-циклогександиамин)платины (II) (которая здесь и далее в настоящем документе в некоторых случаях может иметь сокращенное обозначение «Дацг-Pt(хлорато)») в качестве аналогов цисплатина, который давно нашел себе клиническое применение в качестве противоопухолевого средства, и к ним был проявлен большой интерес вследствие их противоопухолевого действия, превосходящего противоопухолевое действие цисплатина. Дацг-Pt(хлорато) не ввели в клиническое применение в основном вследствие его низкой растворимости в воде. В то время, как цис-[(1R2R)]-1,2-циклогександиамин-N,N']оксалат(2-)-О,О-платину (II) (ее также называют оксалиплатином) - одно из различных производных модифицированного Дацг-Pt(хлорато), у которого две группы хлорато, которые представляют собой уходящие лиганды в молекуле, замещены группами оксалато, - в настоящее время широко используют для клинической терапии вследствие его хорошей растворимости в воде и сильного противоопухолевого действия.

С учетом придания еще более улучшенных свойств также были предложены конъюгаты Дацг-Pt и, например, окисленного декстрана или карбоксиметоксидекстрана, которые получают в результате замещения групп хлорато в Дацг-Pt(хлорато) полимером, имеющим карбоксильные группы в своих боковых цепях (см. не являющийся патентом документ 1; упомянутые документы все вместе перечислены далее) и конъюгат блок-сополимера поли(этиленгликоль)-поли(глютаминовая кислота) и Дацг-Pt (см. не являющийся патентом документ 2). В частности, в не являющемся патентом документе 2 сообщают о том, что конъюгат, описанный в данном документе, образует мицеллы полимера и солюбилизируется в водной среде и демонстрирует не только противоопухолевое действие, сопоставимое с противоопухолевым действием оксалиплатина, но также и высокую стабильность лекарства и продолжительный высокий уровень накопления в опухоли.

В не являющемся патентом документе 1 замещение полимером групп хлорато в Дацг-Pt(хлорато) проводят в результате обработки Дацг-Pt(хлорато) нитратом серебра, удаления получающегося в результате хлорида серебра в результате фильтрования, превращения фильтрата в соответствующий диаквокомплекс (иногда сокращенно обозначаемый как Дацг-Pt(гидроксо)), демонстрирующий улучшенную растворимость в воде, в результате перепускания через анионообменную смолу и проведения реакции между комплексом и полимером в воде (см. страницу 1088 документа). В не являющемся патентом документе 2 также реализованы почти та же самая методика за исключением того, что полученный хлорид серебра удаляют в результате центрифугирования (см. правую колонку на странице 226 документа).

Перечень упомянутых документов

Не являющийся патентом документ 1: Y. OHYA et al., J. Biomater. Sci. Polymer Edn., Vol. 7, pp. 1085-1096 (1996).

Не являющийся патентом документ 2: H. Cabral et al., J. Controlled Release, 101 (2005) 223-232.

Описание изобретения

Конъюгат блок-сополимера поли(этиленгликоль)-поли(глютаминовая кислота) и Дацг-Pt, который получали в соответствии со способом, описанным в не являющемся патентом документе 2, в водной среде образовывал мицеллы полимера, которые, говоря конкретно, представляли собой мицеллы полимера, полученные при [ДАЦГ-Pt]/[Glu]=0,75, и их кумулянтный диаметр составлял 40 нм, а кумулянтная полидисперсность была очень низкой (μ₂/Т²=0,03) в соответствии с измерением для них динамического светорассеяния (ДС). Когда изобретатели настоящего изобретения воспроизвели данный способ, то было зафиксировано присутствие иона серебра, перемешанного с конъюгатом Дацг-Pt, и удалить такой ион серебра из полученного конъюгата при использовании обычных способов было невозможно или чрезвычайно трудно. Это, вероятно, обусловлено тем, что ион серебра, который не был удален в результате центрифугирования, захватывался в мицеллы полимера. В случае медицинских препаратов, вводимых в живой организм, присутствия в смеси такого иона серебра необходимо избегать насколько это будет возможно.

Таким образом, цель настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить по существу не содержащий иона серебра конъюгат (или координационное соединение) блок-сополимера и комплекса платины, в особенности, конъюгат блок-сополимера и Дацг-Pt. Один способ достижения цели заключается в тщательном удалении иона серебра до того, как будет получен конъюгат блок-сополимера и комплекса платины. Как описывается в не являющемся патентом документе 1, может быть использован комплекс диаквоплатина, из которого ион серебра был тщательно удален. В то время, как изобретатели настоящего изобретения обнаружили то, что достижения цели настоящего изобретения также можно добиться и при проведении тщательного удаления иона серебра на стадии комплекса бис(нитрато)платина, который соответствует предшественнику комплекса диаквоплатина, и получающийся в результате продукт использовали в качестве исходного материала для комплекса платины.

Кроме того, заявители также обнаружили то, что можно получить раствор, содержащий мицеллы полимера, характеризующиеся одним пиком, в результате уменьшения или устранения тех пиков, которые можно было бы приписать полидисперсным или агрегированным мицеллам при проведении анализа мицелл полимера, полученных в водной среде из конъюгата полимер/комплекс платины, по методу гельпроникающей хроматографии (ГПХ), если используемое соотношение между количествами комплекса бис(нитрато)платина и блок-сополимера будет установлено на уровне конкретного численного значения.

Кроме того, заявители неожиданно обнаружили то, что использование в качестве исходного материала для комплекса платины смеси комплекса диаквоплатина или комплекса бис(нитрато)платина с комплексом дигалогеноплатина (комплексом дихлоро-, дииодо- или дибромоплатина) могло бы позволить получить раствор, содержащий мицеллы полимера, характеризующиеся аналогичным единственным пиком и еще более узким распределением частиц по размерам.

Таким образом, в соответствии с настоящем изобретением предлагается способ получения координационного соединения в результате проведения реакции между комплексом платины и полимером, имеющим карбоксильные группы в своих боковых цепях, где в качестве комплекса платины используют смесь комплекса диаквоплатина или комплекса бис(нитрато)платина, в частности, последнего, с комплексом дигалогеноплатина (комплексом дихлоро-, дииодо- или дибромоплатина), а в качестве полимера используют блок-сополимер, описывающийся следующими общими формулами (1) или (2):

где R¹ представляет собой атом водорода или незамещенную или замещенную линейную или разветвленную С₁-С₁₂ алкильную группу; каждый из L¹ и L² независимо представляет собой соединительную группу; R² представляет собой метиленовую группу или этиленовую группу; R³ представляет собой атом водорода, блокирующую группу для аминогруппы, гидрофобную группу или полимеризуемую группу; R⁴ представляет собой гидроксильную группу, блокированную карбоксильную группу, образованную совместно с концевым -СО, или гидрофобную группу; каждый из R⁵ независимо представляет собой атом водорода, ион щелочного металла или блокирующую группу для карбоксильной группы; m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 20000, n представляет собой целое число в диапазоне от 2 до 5000, а х представляет собой целое число в диапазоне от 0 до 5000, при том условии, что х не больше n, а атом водорода или ион щелочного металла составляет 50% и более, предпочтительно 80% и более, а более предпочтительно 100%, от R⁵ для n-x и x, при этом способ включает стадию проведения реакции в водной среде в условиях, при которых комплекс платины (в том числе комплексы платины в состоянии смеси) и блок-сополимер образуют друг с другом координационное соединение, и стадию извлечения полученного таким образом координационного соединения.

В предпочтительном варианте реализации, соответствующем настоящему изобретению, в качестве комплекса диаквоплатина используют диакво(1,2-циклогександиамин)платину (II), в качестве комплекса бис(нитрато)платина используют бис(нитрато)(1,2-циклогександиамин)платину (II), а в качестве комплекса дигалогеноплатина используют дихлоро(1,2-циклогександиамин)платину (II).

В соответствии с еще одним вариантом реализации настоящего изобретения также предлагается способ получения координационного соединения в результате проведения реакции между комплексом платины и полимером, имеющим карбоксильные группы в своих боковых цепях, где в качестве исходного материала используют бис(нитрато)(1,2-циклогександиамин)платину (II), диакво(1,2-циклогександиамин)платину (II) или смесь бис(нитрато)(1,2-циклогександиамин)платины (II) и диакво(1,2-циклогександиамин)платины (II), при этом комплексы платины по существу не содержат иона серебра, а в качестве полимера используют блок-сополимер, описывающийся приведенными выше общими формулами (1) или (2), причем способ включает стадию проведения реакции в водной среде в условиях, при которых комплекс платины (в том числе смесь комплексов платины) и блок-сополимер друг с другом образуют координационное соединение, и стадию извлечения полученного таким образом координационного соединения. В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения соотношение между количествами атомов платины во всех комплексах (комплексе) платины, предпочтительно в бис(нитрато)(1,2-циклогександиамин)платине (II) (которая здесь и далее в настоящем документе может иметь сокращенное обозначение Дацг-Pt(нитрат)), и карбоксилатных групп в блок-сополимере (при расчете на эквиваленты, что используется и далее в настоящем документе) устанавливают большим, чем 0,4, предпочтительно находящимся в диапазоне от 0,45 и более до 0,7 и менее, более предпочтительно от 0,475 и более до 0,6 и менее, а наиболее предпочтительно от 0,5 и более до 0,55 и менее. Конечную концентрацию совокупных комплексов (комплекса) платины в реакционной жидкости водной среды задают равной 2 мг/мл (приблизительно 4,6 мМ) и менее, предпочтительно 1 мг/мл (приблизительно 2,3 мМ) и менее. Хотя данные два задаваемые условия могут быть выбраны независимо, одновременный выбор обоих условий приводит к более предпочтительному результату.

В случае намерения использовать в качестве противоопухолевого средства конъюгата блок-сополимера и комплекса платины, который получают в соответствии с настоящим изобретением, важным фактором, определяющим накопление лекарства в опухоли благодаря действию эффекта улучшенных проникающей способности и удерживания (УПСУ), является распределение частиц по размерам для мицелл полимера. В соответствии с настоящим изобретением предлагается раствор, содержащий мицеллы полимера, которые характеризуются одним пиком при проведении измерения по методу ГПХ и, кроме того, пиком узкого распределения кумулянтного диаметра, что представляет собой один из критериев диаметра частиц, а именно, узким распределением частиц по размерам. Поэтому в соответствии с настоящим изобретением предлагается эффективный способ получения конъюгатов или координационных соединений, которые можно с выгодой использовать в качестве противоопухолевых средств, например, например, тех, которые могут образовывать мицеллы полимера, подходящие для использования при получении стабильного и превосходного эффекта УПСУ.

Далее приводится подробное описание настоящего изобретения.

Основные термины, используемые в настоящем описании изобретения, которые считаются требующими стандартных определений, должны пониматься следующим далее образом, хотя тем самым какого-либо ограничения и не накладывают.

Координационным соединением является соединение, которое считается имеющим координационные связи (связь), где координационная связь существует между платиной комплекса платины и карбоксильной группой блок-сополимера. В описании изобретения термин «конъюгат» блок-сополимера и комплекса платины используют в таком смысле, что он является взаимозаменяемым c термином “координационное соединение”.

Комплекс диаквоплатина, комплекс бис(нитрато)платина или комплекс дигалогеноплатина (комплекс дихлоро-, дииодо- или дибромоплатина), которые являются подходящими для использования комплексами платины, могут содержать любые другие лиганды (лиганд) помимо лигандов диакво, бис(нитрато) или дигалогено, если только они будут соответствовать цели настоящего изобретения. Примеры выключают нижеследующее, но не ограничиваются только этим. Комплекс диаквоплатина может включать диакво(1,2-циклогександиамин)платину (II), цис-диамминдиаквоплатину (II), амминдиаквоциклогексиламинплатину (II), цис-амминдиакво(2-метилпиридин)платину (II) и тому подобное, и в особенности предпочтительным является диакво(1,2-циклогександиамин)платина (II). Комплекс бис(нитрато)платина может включать бис(нитрато)(1,2-циклогександиамин)платину (II), цис-диамминдинитроплатину (II), амминдинитроциклогексиламинплатину (II), цис-амминдинитро(2-метилпиридин)платину (II) и тому подобное, и в особенности предпочтительным является бис(нитрато)(1,2-циклогександиамин)платина (II). В числе комплексов дигалогеноплатина (комплексов дихлоро-, дииодо- или дибромоплатина) предпочтительно можно использовать комплекс дихлороплатина, он может включать комплекс дихлоро(1,2-циклогександиамин)платина, цис-диамминдихлороплатину (II), амминдихлороциклогексиламинплатину (II) и цис-амминдихлоро(2-метилпиридин)платину (II) и тому подобное, а в особенности предпочтительным является дихлоро(1,2-циклогександиамин)платина (II).

«По существу не содержащий иона серебра» обозначает состояние, при котором, как максимум, содержится не более, чем 20 ч./млн. серебра, а предпочтительно серебро нельзя обнаружить при использовании обычных методов (например, метода атомной абсорбции), или оно не содержится вообще. По существу не содержащие иона серебра комплекс диаквоплатина или комплекс бис(нитрато)платина, которые используют в качестве исходного материала для комплекса платины, можно получать в результате обработки соответствующего комплекса дихлороплатина нитратом серебра, удаления полученного осадка хлорида серебра и дополнительного удаления все еще остающегося иона серебра, например, при использовании обратноосмотической мембраны, что описывается в документе JP Hei 5(1993)-301884 A. Однако подходящий для использования способ их получения только этим не ограничивается. Кроме того, комплексы бис(нитрато)платина данной марки, например, Дацг-Pt(нитрато), коммерчески доступны в компании W. C. Heraeus GmbH & Co. KG. Таким Дацг-Pt(нитрато) является бис(нитрато)(1,2-циклогександиамин)платина (II) (ее также называют динитратом диакво(1,2-циклогександиамин)платины (II)). Несмотря на то, что данные комплексы платины могут быть любыми существующими стереоизомерами, предпочтительными являются цис-дихлоро(транс-L-1,2-циклогександиаминовые) и другие комплексы платины, имеющие эквивалентную стерическую конфигурацию.

В настоящем изобретении для достижения цели настоящего изобретения можно использовать любой блок-сополимер, описывающийся приведенными выше общими формулами (1) или (2). В то время, как предпочтительными блок-сополимерами являются те, что описываются следующими общими формулами (1-а) или (2-а), или их соли:

где R¹, L¹, L², R³, R⁴ и R⁵ представляют собой то же самое, что было определено для общих формул (1) и (2), соответственно; m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 20000; а n представляет собой целое число в диапазоне от 10 до 60, при том условии, что в числе R⁵ для n атом водорода или ион щелочного металла составляют 50% и более, предпочтительно 80% и более, более предпочтительно 100%.

Приведенные выше определения групп или фрагментов в общих формулах (1), (2), (1-а) и (2-а) необходимо интерпретировать в соответствии с их значениями или содержанием, общепризнанными среди специалистов в соответствующей области техники. Их конкретные примеры приводятся в настоящем документе далее, но не ограничиваются только этим.

В случае R¹ незамещенная или замещенная, линейная или разветвленная С₁-С₁₂ алкильная группа включает метильную, этильную, н-пропильную, изопропильную, н-бутильную, втор-бутильную, трет-бутильную, н-пентильную, н-гексильную, децильную и ундецильную группы. В случае замещенного R¹ заместитель включает ацеталированную формильную группу, цианогруппу, формильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С₁-С₆ алкоксикарбонильную группу, С₂-С₇ ациламидогруппу, три-С₁-С₆ алкилсилоксигруппу с одинаковыми или различными алкильными заместителями, силоксигруппу или силиламиногруппу. Поли(этиленгликолевые) (ПЭГ) сегменты, имеющие такую функциональную группу в одном из своих концевых положений, можно удобным образом получать в соответствии с теми способами получения сегментов ПЭГ блок-полимеров, которые описываются, например, в документах WO 96/32434, WO 96/33233 и WO 97/06202.

Полученные таким образом блок-сополимеры, описывающиеся общими формулами (1), (2), (1-а) или (2-а), в зависимости от использованного способа получения могут использовать любой вариант соединения и могут быть связаны любой соединительной группой, если только они будут соответствовать цели изобретения. Например, способы включают способ получения целевого блок-сополимера в результате использования производного ПЭГ, имеющего концевую аминогруппу, его полимеризации при использовании его концевой аминогруппы и, например, ангидрида N-карбоновой кислоты (NCA) β-бензил-L-аспарагината и/или γ-бензил-L-глютамината для синтезирования блок-сополимера, а после этого либо превращения бензильных групп боковых цепей в другие сложноэфирные группы, либо их неполного или полного гидролиза. В данном случае структура сополимера становится той, что описывается общими формулами (1) или (1-а), а соединительная группа L¹ приобретает структуру, получающуюся из концевой структуры использованного сегмента ПЭГ, которая предпочтительно представляет собой -(СН₂)_b-NH- (где b представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 5).

Кроме того, сополимер, соответствующий настоящему изобретению, можно получать по способу, в котором синтезируют фрагмент в виде сегмента поли(карбоновой кислоты) или поли(аминокислоты или ее производного), а после этого его связывают с предварительно полученным фрагментом в виде сегмента ПЭГ. В данном случае полученный сополимер, в конечном счете, может иметь ту же самую структуру, что и структура сополимера, полученного по способу, описанному первым, или структуру, соответствующую общим формулам (2) или (2-а). Несмотря на то, что на соединительную группу L² какого-либо конкретного ограничения не накладывают, предпочтительно она представляет собой -(СН₂)_с-СО- (где с представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 5) группы.

Каждый R⁵ независимо может представлять собой атом водорода или блокирующую группу для карбоксильной группы. Блокирующая группа для карбоксильной группы включает нижеследующее, но не ограничивается только этим: бензильная, бензгидрильная или С_{1 - 6} алкильная группа, при этом конкретными примерами алкильной группы являются метильная, этильная, н-пропильная, изопропильная, н-бутильная, втор-бутильная, трет-бутильная, н-пентильная и н-гексильная группы.

Каждый R³ независимо может представлять собой атом водорода или блокирующую группу для аминогруппы, например бензилоксикарбонильную, трет-бутилоксикарбонильную, ацетильную или трифторацетильную группу, и он также может представлять собой гидрофобную группу, такую как бензилкарбонильная или бензгидрилкарбонильная группа и тому подобное, или полимеризуемую группу, такую как акрилоильная или метакрилоильная группа.

Каждый R⁴ независимо может представлять собой гидроксильную группу; блокированную карбоксильную группу, имеющую концевой -СО, например бензилоксикарбонильную, трет-бутилоксикарбонильную или метоксикарбонильную группу; гидрофобную группу, такую как бензилокси- или бензгидрилоксигруппу; или полимеризуемую гидрофобную группу, такую как аллилокси- или винилфенилметоксигруппу. m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 20000, предпочтительно от 10 до 5000, более предпочтительно от 40 до 500, а n представляет собой целое число в диапазоне от 2 до 5000, предпочтительно от 5 до 1000, более предпочтительно от 10 до 60, а наиболее предпочтительно от 15 до 40. Поэтому, несмотря на то, что в настоящем описании изобретения фрагмент в соответствующем случае называют поли(этиленгликолем) и тому подобным, префикс «поли» используют в качестве понятия, включающего также и то, что обычно относят к категории «олиго».

В то время, как х, который определяет соотношение в химическом составе между количествами двух типов повторяющихся звеньев, которые могут присутствовать в сегменте поли(аминокислоты или ее производного), в частности, поли(аспарагиновой кислоты), может представлять собой целое число в диапазоне от 0 до 5000 (но не более, чем n). В данном случае каждое из повторяющихся звеньев может быть распределено статистически или поблочно.

Условия проведения реакции при получении описанного выше координационного соединения, содержащего комплекс платины и блок-сополимер, включают комплекс диаквоплатина, в частности, Дацг-Pt(гидроксо), или комплекс бис(нитрато)платина, в частности, Дацг-Pt(нитрато), присутствующие в водной среде, в частности, в воде, (которая может представлять собой водный раствор, содержащий смешиваемый с водой органический растворитель, такой как метанол, этанол, ацетонитрил, диметилформамид и тому подобное, по мере надобности), в количестве, растворимом в водной среде при температурах в диапазоне 5°С-90°С, хотя это и не является ограничением; затем одновременное присутствие блок-сополимера; и осторожное перемешивание смеси или оставление смеси для отстаивания в течение периода времени, достаточного для получения координационного соединения. Несмотря на невозможность указания достаточного периода времени, поскольку он варьируется в зависимости от температуры реакции, он может иметь продолжительность от 10 до 96 часов при 37°С.

В случае использования в качестве исходного материала для комплекса платины исключительно комплекса диаквоплатина, в особенности, Дацг-Pt(гидроксо), или комплекса бис(нитрато)платина, в особенности, Дацг-Pt(нитрато), используемое соотношение между количествами атомов платины в комплексе платины и карбоксилатных групп в блок-сополимере (при расчете на эквиваленты, то же самое должно использоваться в настоящем документе здесь и далее) в желательном случае устанавливают большим, чем 0,4, предпочтительно находящимся в диапазоне от 0,45 и более до 0,7 и менее, более предпочтительно от 0,475 и более до 0,6 и менее, наиболее предпочтительно 0,5 и более до 0,55 и менее. Координационные соединения, полученные в таких условиях, в водной среде образуют мало агрегированных мицелл полимера или не образуют их вовсе и могут образовывать мицеллы полимера, характеризующиеся практически одним пиком в соответствии с измерениями по методу ГПХ. Кроме того, мицеллы могут инкапсулировать приблизительно 80% и более комплекса платины, который используют в реакции (количество загрузки).

Еще одним предпочтительным вариантом реализации настоящего изобретения является способ, в котором обеспечивают присутствие в водной среде в состоянии смеси в качестве исходных материалов комплекса платины и прохождение реакции с блок-сополимером для комплекса диаквоплатина или комплекса бис(нитрато)платина, предпочтительно Дацг-Pt(гидроксо) или Дацг-Pt(нитрато), в особенности, Дацг-Pt(нитрато), и комплекса дигалогеноплатина, предпочтительно Дацг-Pt(галогено), в особенности, комплекса дихлороплатина, предпочтительно Дацг-Pt(хлорато).

Несмотря на то, что какие-либо теоретические ограничения на объем настоящего изобретения накладывать не следует, можно предположить, что при одновременном присутствии комплекса дигалогеноплатина в данном способе становится возможным выдерживание первоначальной концентрации комплекса бис(нитрато)платина, который вступает в реакцию с блок-сополимером в реакционном растворе, на низком уровне, таком чтобы координационное соединение образовывалось при скорости реакции, подходящей для получения мицелл полимера. Поэтому в широком диапазоне используемого соотношения между количествами комплекса платины и полимера можно получать мицеллы полимера, характеризующиеся практически одним пиком в соответствии с измерениями по методу ГПХ, при незначительном образовании агрегированных мицелл полимера или без образования таковых, что позволяет получать жидкую реакционную смесь, которая содержит мицеллы полимера, характеризующиеся узким распределением частиц по размерам.

В примере 10 японской патентной публикации № 2000-506855 А (или WO 97/33894) приведено описание, утверждающее то, что кипячение эквимолярных количеств Дацг-Pt(хлорато) и Дацг-Pt(нитрато) в дистиллированной воде в результате приводит к получению двухъядерного комплекса платины (то есть комплекса платины, содержащего в одной молекуле два атома платины).

Таким образом, несмотря на возникновение предположения о возможности получения координационного соединения, соответствующего настоящему изобретению, также и с участием двухъядерного комплекса в присутствии блок-сополимера, соответствующего настоящему изобретению, необходимо понимать, что координационное соединение, полученное в настоящем изобретении и образующее мицеллы полимера, в основном включает одноядерный комплекс платины, если рассматривать факторы, включающие природу реакционной смеси.

В настоящем изобретении для комплекса бис(нитрато)платина, предпочтительно Дацг-Pt(нитрато), и комплекса дигалогеноплатина, в особенности, комплекса дихлороплатина, предпочтительно Дацг-Pt(галогено), в особенности Дацг-Pt(хлорато), можно проводить перемешивание или обеспечивать одновременное присутствие в водной среде при молярном соотношении, находящемся в диапазоне от 1:9 до 9:1, предпочтительно от 1:4 до 4:1, а более предпочтительно равном 1:1. Такое состояние смеси или одновременного присутствия предпочтительно обуславливает перемешивание комплекса бис(нитрато)платина и комплекса дигалогеноплатина в водной среде, в особенности, в воде. В то время, как к данному состоянию смеси или одновременного присутствия также может привести и одновременное присутствие Дацг-Pt(галогено), в особенности, комплекса дихлороплатина, предпочтительно Дацг-Pt(хлорато), и сильной кислоты за исключением хлористоводородной кислоты, такой как серная кислота, перхлорная кислота, трифторметансульфоновая кислота, азотная кислота, в особенности, азотная кислота; или обеспечение содержания в водном растворе комплекса бис(нитрато)платина иона галогенида, выбираемого из группы, состоящей из ионов хлорида, иодида и бромида, для получения предписанного количества комплекса дигалогеноплатина in situ. Источник такого галогенида включает нижеследующее, хотя и не ограничивается только этим: хлористоводородная кислота, хлорид натрия и хлорид калия в случае иона хлорида; иодид натрия и иодид калия в случае иона иодида; и бромид калия, бромид натрия и бромистоводородная кислота в случае иона бромида. В случае одновременного присутствия таких двух комплексов платины используемое соотношение между количествами комплексов платины и блок-сополимера может находиться в диапазоне от 4:10 до 4:1, предпочтительно от 4,5:10 до 2:1, более предпочтительно от 5:10 до 3:2, при выражении через соотношение (соотношение в эквивалентах) между количествами атомов платины в комплексах платины и карбоксилатных групп в блок-сополимере.

Таким образом получают желательное координационное соединение. Координационное соединение можно эффективно извлекать или очищать в результате использования обычных способов выделения мицелл полимера, например, диализа или ультрафильтрации или их комбинации, поскольку соединение самопроизвольно ассоциируется и образует стабильные мицеллы полимера, инкапсулирующие комплексы платины в реакционном растворе.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 представляет собой диаграмму ГПХ для содержащего мицеллы полимера раствора, полученного в Примере 1. Ось абсцисс представляет собой время удерживания (минуты), а ось ординат представляет собой выходной сигнал (мВ) для ультрафиолетового абсорбциометра.

Фиг. 2 представляет собой график, демонстрирующий распределение частиц по размерам для мицелл в содержащем мицеллы полимера растворе, полученном в Примере 1, измерения которого проводили по методу динамического светорассеяния. Ось абсцисс представляет собой диаметр (нм), а ось ординат представляет собой относительную интенсивность.

Фиг. 3 представляет собой диаграмму ГПХ для содержащего мицеллы полимера раствора, полученного в Примере 2. Ось абсцисс и ось ординат имеют те же значения, что и на Фиг. 1.

Фиг. 4 представляет собой график, демонстрирующий распределение частиц по размерам для мицелл в содержащем мицеллы полимера растворе, полученном в Примере 2, измерения которого проводили по методу динамического светорассеяния. Ось абсцисс и ось ординат имеют те же значения, что и на Фиг. 2.

Фиг. 5 представляет собой диаграммы ГПХ для каждого из реакционных растворов, полученных с использованием атомов платины в комплексе платины и карбоксилатных групп в блок-сополимере при соотношениях, приведенных в Примере 3. Ось абсцисс и ось ординат имеют те же значения, что и на Фиг. 1.

Фиг. 6 представляет собой график, демонстрирующий изменение площадей, приведенных на диаграммах ГПХ Фиг. 5 при этом площади соответствуют количествам соответственно полученных мицелл полимера. Ось абсцисс представляет собой используемое соотношение между количествами атомов платины в комплексе платины и карбоксилатных групп в блок-сополимере, а ось ординат представляет собой площадь пика [мВ·сек] мицелл.

Фиг. 7 демонстрирует диаграммы ГПХ для реакционных растворов, полученных при использовании двух типов комплексов платины при используемых соотношениях, приведенных в Примере 4. Ось абсцисс и ось ординат имеют те же значения, что и на Фиг. 1.

Фиг. 8 представляет собой график, демонстрирующий изменение площадей, приведенных на диаграммах ГПХ Фиг. 7, при этом площади соответствуют количествам соответственно полученных мицелл полимера. Ось абсцисс представляет собой соотношение {[нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II)]/([цис-дихлоро(транс-L-1,2-циклогександиамин)платина (II)]+[цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платина (II)]}, а ось ординат представляет собой площадь пика мицелл [мВ·сек].

Фиг. 9 представляет собой график, демонстрирующий изменение площади, соответствующей количеству мицелл полимера в каждом из реакционных растворов, полученных при изменяющемся используемом соотношении между количествами атомов платины в эквимолярной смеси двух типов комплексов платины и карбоксилата в блок-сополимере в Примере 5. Ось абсцисс представляет собой используемое соотношение между количествами атомов платины в комплексах платины и карбоксилата в блок-сополимере, а ось ординат имеет то же самое значение, что и на Фиг. 8.

Фиг. 10 представляет собой диаграмму ГПХ для реакционного раствора, полученного в Примере 6, для случая получения двух комплексов платины in situ. Ось абсцисс и ось ординат имеют те же самые значения, что и на Фиг. 1.

Фиг. 11 демонстрирует диаграммы ГПХ для реакционных растворов, полученных при переменной концентрации в реакционном растворе нитрата цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II), для переменного соотношения между количествами атома платины в нитрате цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II) и карбоксилата в блок-сополимере. Ось абсцисс и ось ординат имеют те же значения, что и на Фиг. 1.

Наилучший способ реализации изобретения

Здесь и далее в настоящем документе настоящее изобретение описывается более конкретно, с отнесением к конкретным примерам, которые, однако, не предполагают ограничения настоящего изобретения. Кроме того, в следующих далее примерах использовали комплексы платины, уровень содержания иона серебра, в которых составлял величину, меньшую, чем 5 ч./млн.

Пример 1

В данном примере описывают конкретный пример, в котором в качестве исходных материалов одновременно присутствуют Дацг-Pt(нитрато) и Дацг-Pt(хлорато).

К 217 мг бис(нитрато)(транс-L-1,2-диаминоциклогексан)платины (II) [которую также называют нитратом цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II), и данную номенклатуру используют в настоящем документе здесь и далее] и 189 мг дихлоро(транс-L-1,2-диаминоциклогексан)платины (II) [или цис-дихлоро(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II), и данную номенклатуру используют в настоящем документе здесь и далее] добавляли 220 мл воды и проводили их совместное нагревание вплоть до 70°С до растворения обоих компонентов. Данный раствор охлаждали до приблизительно 37°С и в нем же растворяли 750 мг блок-сополимера поли(этиленгликоль)-поли(глютаминовая кислота) [здесь и далее в настоящем документе сокращенно обозначаемого как ПЭГ-П(Glu), и, если молекулярная масса ПЭГ составляет 12×10³, а степень полимеризации для П(Glu) равна 20, то тогда сополимер сокращенно обозначают как ПЭГ-П(Glu) 12-20] при соотношении {[нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II)+цис-дихлоро(транс-L-1,2-циклогександиамин)платина (II)]/[Glu]=1} и реакции давали возможность протекать при 37°С в течение 72 часов в темном месте. Полученный раствор подвергали неоднократной ультрафильтрации при использовании ультрафильтрационного аппарата (Nippon Millipore: Labscale·TFF system: граничная молекулярная масса 100000) для удаления основной части низкомолекулярных побочных продуктов - NaNO₃ и NaCl - и не вступивших в реакцию комплекса платины и блок-сополимера, которые не образовали мицеллы. Фильтрат концентрировали до получения 55 мл раствора мицелл. Количество комплекса платины, инкапсулированного в мицеллах, составляло 38% от добавленного количества. Анализ раствора по методу ГПХ при использовании жидкостной хроматографии (TOSOH Corporation, AS-8020 series) проводили при использовании следующих далее условий для ГПХ. Диаграмма ГПХ продемонстрирована на Фиг. 1. Отдельно проводили измерения динамического светорассеяния (NICOMP.380ZLS) в соответствии с прилагаемым руководством. Результат продемонстрирован на Фиг. 2.

Условия для ГПХ

Колонка: Waters Ultrahydrogel 500

10 мкм 7,8×300 мм

Детектор: ультрафиолетовый абсорбциометр (длина волны измерения=240 нм)

Температура колонки: приблизительно 40°С

Мобильная фаза: 10 ммоль/л фосфатного буфера (рН 7,4)

Скорость течения: 0,6 мл/мин

Объем вводимого образца: 10 мкл

Как с очевидностью следует из Фиг. 1, необходимо понять то, что агрегированные мицеллы полимера или мицеллы полимера, имеющие очень большой диаметр, не образовывались, поскольку на высокомолекулярном крыле (более короткое время удерживания) никакого пика не наблюдалось. Исходя из Фиг. 2, также необходимо понять то, что средний диаметр частиц для полученных мицелл полимера составлял 33,3 нм при стандартном отклонении 7,9 нм (23,7%).

Пример 2

В данном примере описывают конкретный пример, в котором в качестве исходного материала использовали один лишь Дацг-Pt(нитрато), а координационное соединение получали при конкретном соотношении при расчете на количество карбоксилата (Glu) в блок-сополимере.

К 227 мг нитрата цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II) добавляли 120 мл воды и проводили их совместное нагревание до 70°С до получения раствора. Данный раствор охлаждали до приблизительно 37°С и в нем же растворяли 750 мг ПЭГ-П(Glu) 12-20 при соотношении {[нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II)]/[Glu]=0,525} и реакции для раствора давали возможность протекать при 37°С в течение 72 часов в темном месте. Таким образом полученный раствор подвергали неоднократной ультрафильтрации (граничная молекулярная масса 100000) для удаления основной части низкомолекулярного побочного продукта - NaNO₃ - и не вступивших в реакцию комплекса платины и блок-сополимера, которые не образовали мицелл. Данный раствор подвергали анализу по методу ГПХ, как и в Примере 1. Диаграмма ГПХ продемонстрирована на Фиг. 3. Результат для проведенного отдельно измерения динамического светорассеяния (NICOMP 380ZLS) продемонстрирован на Фиг. 4.

Из Фиг. 3 понятно, что агрегированные мицеллы полимера или мицеллы полимера, имеющие очень большой диаметр, не образовывались, поскольку на высокомолекулярном крыле никакого пика не наблюдалось. Из Фиг. 4 также понятно, что средний диаметр частиц для полученных мицелл полимера составлял 29,9 нм при стандартном отклонении 20,7 нм (69,0%). Несмотря на то, что мицеллы полимера характеризовались более широким распределением по размерам в сопоставлении с тем, что имело место для случая получения в Примере 1, никаких агрегированных мицелл полимера не наблюдалось.

Пример 3

В данном примере в качестве исходного материала использовали один лишь Дацг-Pt(нитрато) и исследовали влияние используемого соотношения между количествами атомов платины в комплексе платины и карбоксилата (Glu) в блок-сополимере на конфигурацию мицелл полимера, полученных из координационного соединения.

Нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II) растворяли в воде при 70°С (9,238 ммоль/л). Данный раствор охлаждали до приблизительно 37°С, после этого добавляли водный раствор ПЭГ-П(Glu) 12-40 при соотношениях {[нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II)]/[Glu]=7/10, 6,5/10, 6/10, 5,5/10 и 5/10}. Конечную концентрацию цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II) в каждом из растворов делали равной 2 мг/мл (4,620 ммоль/мл) и реакции для растворов давали возможность протекать при 37°С в течение 96 часов в темном месте. Из каждого из получающихся в результате растворов отбирали часть и подвергали анализу по методу ГПХ при тех же самых условиях, что и в Примере 1. Таким образом полученные диаграммы ГПХ продемонстрированы на Фиг. 5. Корреляция между площадью для мицелл и соотношением [нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II)]/[Glu] представляла собой то, что продемонстрировано на Фиг. 6. Площадь для мицелл достигала максимума тогда, когда соотношение [нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II)]/[Glu] составляло 5,5/10. Исходя из Фиг. 5, следует придти к заключению о том, что, когда соотношение между количествами комплекса платины и карбоксилата находилось в диапазоне от 7/10 до 6/10, образовывались структуры, которые считаются агрегированными мицеллами полимера, поскольку на высокомолекулярном крыле наблюдались пики в виде плечей.

Пример 4

В данном примере исследуют влияние соотношения в смеси между двумя типами комплексов платины на конфигурацию мицелл полимера, полученных из координационных соединений.

Нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II) и цис-дихлоро(транс-L-1,2-циклогександиамин)платину (II) растворяли в воде при 70°С при молярных соотношениях 9:1, 4:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:4 и 1:9 соответственно (в совокупности 2,5 ммоль/л). Данные растворы охлаждали до приблизительно 37°С, в них же растворяли ПЭГ-П(Glu) 12-20 при соотношении {[нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II)+цис-дихлоро(транс-L-1,2-циклогександиамин)платина (II)]/[Glu]=1} и реакциям для растворов давали возможность протекать при 37°С в течение 72 часов в темном месте. Из каждого из реакционных растворов отбирали часть и подвергали анализу по методу ГПХ при тех же самых условиях, что и в Примере 1. Таким образом полученные диаграммы ГПХ продемонстрированы на Фиг. 7. Корреляция между площадью для мицелл и соотношением нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II):цис-дихлоро(транс-L-1,2-циклогександиамин)платина (II) представляла собой то, что продемонстрировано на Фиг. 8. Площадь для мицелл достигала максимума тогда, когда соотношение нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II):цис-дихлоро(транс-L-1,2-циклогександиамин)платина (II) составляло 1:1.

Пример 5

В данном примере исследуют влияние используемого соотношения между количествами атомов платины в комплексах платины и карбоксилата (Glu) в блок-сополимере на конфигурацию мицелл полимера, полученных из координационных соединений, в случае использования двух типов комплексов платины.

Нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II) и цис-дихлоро(транс-L-1,2-циклогександиамин)платину (II) растворяли в воде при 70°С при молярном соотношении 1:1 (в совокупности 2,5 ммоль/л). Данный раствор охлаждали до приблизительно 37°С и в нем же растворяли ПЭГ-П(Glu) 12-20 при соотношениях [нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II)+цис-дихлоро(транс-L-1,2-циклогександиамин)платина (II)]/[Glu] 1/4, 1/2, 1/1 или 1/0,5. После этого реакциям для получающихся в результате растворов давали возможность протекать при 37°С в течение 24 часов в темном месте. Из каждого из реакционных растворов отбирали часть и подвергали анализу по методу ГПХ при тех же условиях, что и в Примере 1. Корреляция между площадью для мицелл и соотношением [нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II)+цис-дихлоро(транс-L-1,2-циклогександиамин)платина (II)]/[Glu] продемонстрирована на Фиг. 9. Площадь для мицелл достигала максимума, когда соотношение [нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II)+цис-дихлоро(транс-L-1,2-циклогександиамин)платина (II)]/[Glu] составляло 1:1.

Пример 6

В данном примере описывают конкретный пример, в котором получение состояния одновременного присутствия двух типов комплексов платины обеспечивают in sute.

Нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II) растворяли в 10 мл воды при 70°С. Данный раствор охлаждали до приблизительно 37°С, к нему же добавляли 10 мкл 1 н. хлористоводородной кислоты, в нем же растворяли 44 мг ПЭГ-П(Glu) 12-40 при соотношении {[нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II)]/[Glu]=0,5/1} и реакции для получающегося в результате раствора давали возможность протекать при 37°С в течение 24 часов. Из реакционного раствора отбирали часть и подвергали анализу по методу ГПХ при тех же самых условиях, что и в Примере 1. Диаграмма ГПХ продемонстрирована на Фиг. 10. Площадь для мицелл полимера составляла 8085 (мВ/сек).

Пример 7

В данном примере в качестве исходного материала использовали один лишь Дацг-Pt(нитрато), что позволило исследовать влияние его концентрации в реакционном растворе, предназначенном для получения координационного соединения, и исследовать влияние используемого соотношения между количествами атомов платины в комплексе платины и карбоксилата (Glu) в блок-сополимере на конфигурацию мицелл полимера, полученных из координационных соединений.

Нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II) растворяли при концентрации 4,620 ммоль/л, 2,309 ммоль/л и 1,155 ммоль/л при 70°С и растворы охлаждали до приблизительно 37°С. В 30 мл каждого из охлажденных растворов с различными концентрациями растворяли ПЭГ-П(Glu) 12-40 при соотношениях {[нитрат цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II)]/[Glu]=7/10, 6/10, 5,5/10, 5/10, 4/10 и 3/10} и реакциям для получающихся в результате растворов давали возможность протекать при 37°С в течение 72 часов в темном месте. Из каждого из реакционных растворов отбирали часть и подвергали анализу по методу ГПХ при тех же самых условиях, что и в Примере 1. Полученные диаграммы ГПХ продемонстрированы на Фиг. 11.

Хотя в положениях, соответствующих приблизительно 12 минутам, пики мицелл полимера и наблюдались для реакционных растворов нитрата цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II) при всех уровнях концентраций никакого наличия пика мицелл полимера не подтверждалось, если соотношение между количествами атомов платины в комплексе платины и карбоксилата составляло 4/10 и менее.

В случае реакционного раствора, характеризующегося концентрацией нитрата цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II) 4,620 ммоль/л, на высокомолекулярном крыле пиков мицелл полимера наблюдались пики в виде плечей, если соотношение между количествами атомов платины в комплексе платины и карбоксилата находилось в диапазоне от 7/10 до 65/10, что приводит к выводу об образовании агрегированных или полидисперсных мицелл полимера.

Подобным же образом в случае реакционного раствора нитрата цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II) с концентрацией 2,309 ммоль/л на высокомолекулярном крыле наблюдали очень небольшой пик в виде плеча, если соотношение между количествами комплекса платины и карбоксилата составляло 7/10, но при соотношениях 6/10 и менее пик в виде плеча исчезал, и образовывались монодисперсные мицеллы полимера.

Кроме того, в случае реакционного раствора нитрата цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II) с концентрацией 1,155 ммоль/л образовывались монодисперсные мицеллы полимера вне зависимости от соотношения между количествами комплекса платины и карбоксилата.

Исходя из вышеизложенного, будет понятно, что монодисперсные мицеллы полимера легче получать при концентрации нитрата цис-диакво(транс-L-1,2-циклогександиамин)платины (II), не большей, чем 4,620 ммоль/л.

Реферат

Изобретение относится к способу получения конъюгата блок-сополимера и комплекса платины, который может быть использован в качестве противоопухолевого средства. Способ включает взаимодействие в водной среде комплекса диаквоплатины или бис(нитрато)платины в смеси с дигалогеноплатиной с блок-сополимером, формулы (1) или (2): ! ! ! где R1- водород или C1-C12-алкил, L1 и L2 - соединительные группы, R3 - водород, защитная группа для аминогруппы, гидрофобная или полимеризуемая группа, R4 - гидрокси-, карбокси- или гидрофобная группа, R5 - водород, ион щелочного металла или защитная группа для карбоксильной группы, m=5-20000, n=10-60, при условии, что R5 - водород или ион щелочного металла составляет 50% и более в n звеньях. Предложенный способ обеспечивает получение не содержащего иона серебра конъюгата, раствор которого обладает более узким распределением частиц по размеру. 2 н. и 15 з.п. ф-лы, 11 ил.

Формула

1. Способ получения координационного соединения в результате проведения реакции между комплексом платины и полимером, имеющим карбоксильные группы в своих боковых цепях,
где в качестве комплекса платины используют комплекс диаквоплатина или комплекс бис(нитрато)платина в виде смеси с комплексом дигалогеноплатина, который выбирают из комплексов дихлоро-, дииодо- или дибромоплатина, а в качестве полимера используют блок-сополимер, описывающийся следующими общими формулами (1) или (2):

где R¹ представляет собой атом водорода или незамещенную или замещенную линейную или разветвленную C₁-C₁₂ алкильную группу, L¹ и L² независимо друг от друга представляют собой соединительные группы, R³ представляет собой атом водорода, защитную группу для аминогруппы, гидрофобную группу или полимеризуемую группу, R⁴представляет собой гидроксильную группу, защищенную карбоксильную группу, образованную совместно с концевым - СО, или гидрофобную группу, каждый из R⁵ независимо представляет собой атом водорода, ион щелочного металла или защитную группу для карбоксильной группы, m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 20000, n представляет собой целое число в диапазоне от 10 до 60, при том условии, что атом водорода или ион щелочного металла, которые определены как R⁵, составляет 50% и более в n звеньях,
при этом способ включает стадию проведения реакции в водной среде в условиях, при которых комплексы платины и блок-сополимер друг с другом образуют координационное соединение, и
стадию извлечения полученного таким образом координационного соединения из реакционной смеси.

14. Способ получения координационного соединения в результате проведения реакции между комплексом платины и полимером, имеющим карбоксильные группы в своих боковых цепях,
где в качестве исходного материала для комплекса платины используют бис(нитрато)(1,2-циклогександиамин)платину (II), диакво(1,2-циклогександиамин)платину (II) или смесь бис(нитрато)(1,2-циклогександиамин)платины (II) и диакво(1,2-циклогександиамин)платины (II), все из которых, по существу, не содержат иона серебра, и
в качестве полимера используют блок-сополимер, описывающийся следующими общими формулами (1) или (2):

где R¹ представляет собой атом водорода или незамещенную или замещенную линейную или разветвленную C₁-C₁₂ алкильную группу, L¹ и L² независимо друг от друга представляют собой соединительные группы, R³ представляет собой атом водорода, защитную группу для аминогруппы, гидрофобную группу или полимеризуемую группу, R⁴представляет собой гидроксильную группу, защищенную карбоксильную группу, образованную совместно с концевым -СО, или гидрофобную группу, каждый из R⁵ независимо представляет собой атом водорода, ион щелочного металла или защитную группу для карбоксильной группы, m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 20000, n представляет собой целое число в диапазоне от 10 до 60, при том условии, что атом водорода или ион щелочного металла, которые определены как R⁵, составляет 50% и более в n звеньях,
при этом способ включает стадию проведения реакции в водной среде в условиях, при которых комплекс платины и блок-сополимер образуют друг с другом координационное соединение, и
стадию извлечения полученного таким образом координационного соединения из реакционной смеси,
где соотношение между количествами атомов платины в комплексе платины и карбоксилатных групп в блок-сополимере в реакции устанавливают в диапазоне от 0,475 и более до 0,6 и менее.