Олигонуклеотиды для модуляции экспрессии тау-белка - RU2768285C1

Чертежи

Описание

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Данное изобретение относится к олигонуклеотидам (олигомерам), которые комплементарны к транскрипту тау-белка, ассоциированного с микротрубочками (МАРТ), что приводит к снижению экспрессии тау-белка. Снижение количества транскриптов МАРТ и/или экспрессии тау-белка полезно при ряде медицинских заболеваний, таких как таупатии, болезнь Альцгеймера, лобно-височная деменция (FTD), FTDP-17, прогрессирующий надъядерный паралич (PSP), хроническая травматическая энцефалопатия (СТЕ), кортикобазальная ганглиозная дегенерация (CBD), эпилепсия, синдром Драве, депрессия, судорожные расстройства и двигательные нарушения.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Тау-белок - это белок, связанный с микротрубочками (MAP), который взаимодействует с тубулином и участвует в сборке и стабилизации микротрубочек. Микротрубочки являются критическими структурными компонентами цитоскелета клетки и вовлечены в различные клеточные процессы, включая митоз, цитокинез и везикулярный транспорт. Тау-белок представлен во многих типах клеток и тканей, но особенно много его в нейронах, где он играет критическую роль в регулировании аксонного транспорта и функции.

Изменения уровней экспрессии и/или функции тау-белка способствуют патофизиологии различных нейродегенеративных расстройств. Например, агрегаты неправильно свернутого и гиперфосфорилированного тау-белка находят в нейрофибриллярных включениях, связанных с болезнью Альцгеймера (AD) и связанными с ней таупатиями, такими как прогрессирующий надъядерный паралич (PSP), кортикобазальная ганглиозная дегенерация (CBD), хроническая травматическая энцефалопатия (СТЕ), фронтальная временная деменция (FTD) и FTD с паркинсонизмом, ассоциированным с хромосомой 17 (FTDP-17), болезнь Пика (PiD), болезнь аргирофильной зернистости (AGD), старческое слабоумие с преобладанием бляшек (TPSD), первичная возрастная таупатия (PART), синдром Дауна и литико-бодиговская болезнь. Повышенная экспрессия патологического тау-белка связана с младенческими таупатиями, включая гемимегаленцефалию (НМЕ), комплексом туберозного склероза; очаговой корковой дисплазией типа 2b; и ганглиоглиомами. Кроме того, аномальная экспрессия и/или функция тау-белка также может быть связана с другими заболеваниями, такими как синдром Халлервордена-Шпатца, также известного как нейродегенерация 1 типа с накоплением железа в мозге (NBIA1), ганглиоцитомы и подострый склерозирующий панэнцефалит. Тау-белок также может играть роль при судорожных расстройствах (например, эпилепсии), сетевой дисфункции (например, депрессии) и двигательных расстройствах (например, болезни Паркинсона).

Антисмысловые молекулы, а также молекулы миРНК, которые способны снижать уровень тау-белка путем воздействия на пре-мРНК МАРТ или транскрипты мРНК были описаны в см., например, De Vos et al., 2013 Journal of Neuroscience том 33 стр. 12887, WO 2013/148260, WO 2014/153236, WO 2015/010135, WO 2016/126995, WO 2016/151523, WO 2017/09679 и WO 2018/064593. Антисмысловые олигонуклеотиды, которые способны запускать модуляцию сплайсинга транскрипта МАРТ также описаны в Sud et al., 2014 Mol Ther Nucl Acid 3 e180 и WO 2016/019063.

Нарушения, ассоциированные с тау-белком, такие как AD, являются наиболее частой причиной деменции у пожилых людей, и крайне необходимы надежные и эффективные средства для лечения AD и связанных с ней нейродегенеративных заболеваний, включая таупатии, судорожные расстройства и двигательные нарушения.

ОБЪЕКТ ИССЛЕДОВАНИЯ

Данное изобретение обеспечивает антисмысловые олигонуклеотиды, которые понижают уровень тау-белка как in vivo, так и in vitro. В изобретении идентифицированы три специфических целевых участка на пре-мРНК МАРТ, расположенные в нитроне 1 или 2 пре-мРНК МАРТ человека, на которые могут быть нацелены антисмысловые олигонуклеотиды, для обеспечения эффективного ингибирования тау-белка. В частности, целевое положение с 12051 по 12111, с 39562 по 39593 и/или с 72837 по 72940 SEQ ID NO: 1 является эффективным для снижения уровня тау-белка. Изобретение также обеспечивает эффективные антисмысловые олигонуклеотидные последовательности и соединения, которые способны снижать уровень тау-белка, и их применение для лечения заболеваний или расстройств, таких как нейродегенеративные заболевания, включая таупатии, болезнь Альцгеймера, FTDP-17, судорожные расстройства и двигательные расстройства.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Данное изобретение относится к олигонуклеотидам, нацеленным на нуклеиновую кислоту, кодирующую тау-белок, которые способны модулировать экспрессию тау-белка, и могут быть использованы для лечения и профилактики заболеваний, ассоциированных с функционированием тау-белка.

Соответственно, в первом аспекте изобретение обеспечивает олигонуклеотиды длиной от 10 до 30 нуклеотидов, которые содержат непрерывную нуклеотидную последовательность длиной не менее 10 нуклеотидов с комплементарностью не менее 90% к специфичным участкам МАРТ, которые представлены SEQ ID NO: 3, 4 и 5.

Олигонуклеотид может быть антисмысловым олигонуклеотидом, предпочтительно, с конструкцией гэпмера. Предпочтительно, олигонуклеотид способен ингибировать экспрессию тау-белка за счет расщепления целевой нуклеиновой кислоты. Предпочтительно, расщепление осуществляется за счет рекрутирования нуклеазы.

В дополнительном аспекте в изобретении предложены фармацевтические композиции, содержащие олигонуклеотиды по изобретению, и фармацевтически приемлемые разбавители, носители и/или вспомогательные вещества.

В дополнительном аспекте в изобретении предложены способы in vivo или in vitro модуляции экспрессии тау-белка в клетке-мишени, которая экспрессирует тау-белок, путем введения в эффективном количестве олигонуклеотида или композиции по изобретению в указанную клетку.

В дополнительном аспекте изобретение относится к способам лечения или профилактики заболевания, нарушения или дисфункции, связанных с активностью тау-белка in vivo, включающим введение терапевтически или профилактически эффективного количества олигонуклеотида по изобретению субъекту, страдающему или восприимчивому к заболеванию, расстройству или дисфункции.

В дополнительном аспекте олигонуклеотид или композиция по данному изобретению используется для лечения или профилактики болезни Альцгеймера (AD), прогрессирующего надъядерного паралича (PSP), лобно-височной деменции (FTD) или FTDP-17.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фиг. 1. Результат скрининга библиотеки олигонуклеотидов (Пример 1), которая охватывает все интронные участки МАРТ. Каждая точка представляет собой олигонуклеотидное соединение, ось абсцисс указывает его положение в транскрипте МАРТ, а ось у указывает количество остаточного мРНК МАРТ по сравнению с контролем (низкое число соответствует значительному снижению МАРТ). А, В и С обозначают три участка транскрипта МАРТ, выбранные в качестве целевых участков для дальнейших олигонуклеотидных соединений.

Фиг. 2. Соединение 9_103 (последовательность нуклеотидных оснований представлена в SEQ ID NO 9).

Фиг. 3. Соединение 9_104 (последовательность нуклеотидных оснований представлена в SEQ ID NO 9).

Фиг. 4. Соединение 11_1 (последовательность нуклеотидных оснований представлена в SEQ ID NO 11).

Фиг. 5. Соединение 49_38 (последовательность нуклеотидных оснований представлена в SEQ ID NO 49).

Фиг. 6. Соединение 49_189 (последовательность нуклеотидных оснований представлена в SEQ ID NO 49).

Соединения, показанные на Фиг. 2, 3, 4, 5 и 6, продемонстрированы в протонированной форме, где атом S фосфоротиоатной связи протонирован, очевидно, присутствие протона будет зависеть от кислотности окружающей среды молекулы и наличия альтернативного катиона (например, когда олигонуклеотид находится в форме соли). Протонированные фосфоротиоаты существуют в таутомерных формах.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Олигонуклеотид

Термин «олигонуклеотид» при использовании в данном документе, имеет значение, как его обычно понимает специалист в данной области техники, как молекула, содержащая два или более ковалентно связанных нуклеозидов. Такие ковалентно связанные нуклеозиды могут также называться молекулами нуклеиновой кислоты или олигомерами. Олигонуклеотиды обычно получают в лаборатории с помощью твердофазного химического синтеза с последующей очисткой и выделением. При упоминании последовательности олигонуклеотида, понимают последовательность или порядок фрагментов нуклеотидных оснований или их модификаций, ковалентно связанных нуклеотидов или нуклеозидов. Олигонуклеотид по изобретению искусственно создан и является химически синтезированным и, как правило, очищенным или выделенным. Олигонуклеотиды по изобретению могут содержать один или более модифицированных нуклеозидов или нуклеотидов, например, нуклеозидов, модифицированных по 2'-сахару.

Антисмысловые олигонуклеотиды

Термин «антисмысловой олигонуклеотид», при использовании в данном документе, определен как олигонуклеотид, способный модулировать экспрессию целевого гена путем гибридизации с целевой нуклеиновой кислотой, в частности, с непрерывной последовательностью целевой нуклеиновой кислоты. Антисмысловые олигонуклеотиды фактически не являются двухцепочечными, а поэтому не представляют собой миРНК или кшРНК. Предпочтительно, антисмысловые олигонуклеотиды по данному изобретению являются одноцепочечными. Понятно, что одноцепочечные олигонуклеотиды по данному изобретению могут образовывать шпильки или межмолекулярные дуплексные структуры (дуплекс между двумя молекулами одного олигонуклеотида), пока степень внутренней или межмолекулярной самокомплементарности составляет менее 50% всей длины олигонуклеотида.

Преимущественно, одноцепочечный антисмысловой олигонуклеотид по изобретению не содержит нуклеозиды РНК, поскольку это будет снижать устойчивость к нуклеазе.

Преимущественно, антисмысловой олигонуклеотид по изобретению содержит один или более модифицированных нуклеозидов или нуклеотидов, таких как нуклеозидов, модифицированных по 2'-сахару. Кроме того, предпочтительно, чтобы немодифицированные нуклеозиды представляли собой нуклеозиды ДНК.

Непрерывная нуклеотидная последовательность

Термин «непрерывная нуклеотидная последовательность» относится к участку олигонуклеотида, который комплементарен целевой нуклеиновой кислоте или целевой секвенции. Термин используется в данном документе взаимозаменяемо с термином «непрерывная последовательность нуклеотидных оснований» и термином «последовательность олигонуклеотидного мотива». В некоторых вариантах осуществления изобретения все нуклеотиды олигонуклеотида составляют непрерывную нуклеотидную последовательность. В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид содержит непрерывную нуклеотидную последовательность, как например участок гэпмера F-G-F', и может необязательно содержать дополнительный нуклеотид(-ы), например, участок нуклеотидного линкера, который можно использовать для присоединения функциональной группы к непрерывной нуклеотидной последовательности. Участок нуклеотидного линкера может быть или не быть комплементарен целевой нуклеиновой кислоте. Понятно, что непрерывная нуклеотидная последовательность олигонуклеотида не может быть длиннее, чем олигонуклеотид как таковой, и что олигонуклеотид не может быть короче смежной нуклеотидной последовательности.

Нуклеотиды

Нуклеотиды представляют собой строительные блоки олигонуклеотидов и полинуклеотидов и, для целей данного изобретения, включают как встречающиеся в природе, так и не встречающиеся в природе нуклеотиды. По своей природе такие нуклеотиды, как нуклеотиды ДНК и РНК, содержат фрагмент сахара рибозы, фрагмент нуклеотидного основания и одну или более фосфатных групп (которая отсутствует у нуклеозидов). Нуклеозиды и нуклеотиды могут также взаимозаменяемо называться «звеньями» или «мономерами».

Модифицированный нуклеозид

Термин «модифицированный нуклеозид» или «модификация нуклеозида», при использовании в данном документе, относится к нуклеозидам, модифицированным по сравнению с эквивалентным нуклеозидом ДНК или РНК путем введения одной или более модификаций во фрагмент сахара или фрагмент (нуклеотидного) основания. В предпочтительном варианте осуществления изобретения модифицированный нуклеозид содержит модифицированный фрагмент сахара. Термин модифицированный нуклеозид также может использоваться в данном документе взаимозаменяемо с термином «нуклеозидный аналог», или модифицированные «звенья», или модифицированные «мономеры». Нуклеозиды с немодифицированным фрагментом сахара ДНК или РНК называют в данном документе нуклеозидами ДНК или РНК. Нуклеозиды с модификациями на участке основания в нуклеозиде ДНК или РНК все равно, как правило, обозначают ДНК или РНК, если они подчиняются спариванию оснований по Уотсону-Крику.

Модифицированная межнуклеозидная связь

Термин «модифицированная межнуклеозидная связь» определен, как его обычно понимает специалист в данной области техники, как связь, отличная от фосфодиэфирных (РО) связей, которая ковалентно соединяет вместе два нуклеозида. Следовательно, олигонуклеотиды по изобретению могут содержать модифицированные межнуклеозидные связи. В некоторых вариантах осуществления изобретения модифицированная межнуклеозидная связь увеличивает устойчивость олигонуклеотида к нуклеазе по сравнению с фосфодиэфирной связью. Для встречающихся в природе олигонуклеотидов межнуклеозидная связь включает фосфатные группы, создающие фосфодиэфирную связь между соседними нуклеозидами. Модифицированные межнуклеозидные связи особенно эффективны при стабилизации олигонуклеотидов для применения in vivo, и могут служить для защиты от нуклеазного расщепления на участках нуклеозидов ДНК или РНК в олигонуклеотиде по изобретению, например на гэп-участке G гэпмерного олигонуклеотида, а также на участках модифицированных нуклеозидов, например участке F и участке F'.

В варианте осуществления изобретения олигонуклеотид содержит одну или более межнуклеозидных связей, модифицированных из природной фосфодиэфирной, например одну или более модифицированных межнуклеозидных связей, которые, например, являются более устойчивыми к действию нуклеазы. Устойчивость к нуклеазе может определяться посредством инкубации олигонуклеотида в сыворотке крови или путем выполнения анализа устойчивости к нуклеазе (например, с фосфодиэстеразой змеиного яда (SVPD)), оба из которых хорошо известны в данной области техники. Межнуклеозидные связи, которые способны усиливать устойчивость олигонуклеотида к нуклеазе, называют межнуклеозидными связями, устойчивыми к нуклеазе. В некоторых вариантах осуществления изобретения по меньшей мере 50% межнуклеозидных связей в олигонуклеотиде или его непрерывной нуклеотидной последовательности являются модифицированными, например, по меньшей мере 60%, например, по меньшей мере 70%, например, по меньшей мере 75%, например, по меньшей мере 80%, или, например, по меньшей мере 90% межнуклеозидных связей в олигонуклеотиде или его непрерывной нуклеотидной последовательности являются модифицированными. В некоторых вариантах осуществления изобретения все межнуклеоизидные связи олигонуклеотида или его непрерывной нуклеотидной последовательности являются модифицированными. Понятно, что в некоторых вариантах осуществления изобретения нуклеозиды, которые связывают олигонуклеотид по изобретению с ненуклеотидной функциональной группой, как, например, в конъюгате, могут быть связаны фосфодиэфирной связью. В некоторых вариантах осуществления изобретения все межнуклеоизидные связи олигонуклеотида или его непрерывной нуклеотидной последовательности представляют собой межнуклеозидные связи, устойчивые к нуклеазе.

Модифицированные межнуклеоизидные связи могут быть выбраны из группы, состоящей из фосфоротиоатной, дифосфоротиоатной и боранофосфатной связей. В некоторых вариантах осуществления изобретения модифицированные межнуклеозидные связи совместимы с рекрутированием РНКазыН олигонуклеотида по изобретению, например фосфоротиоатные, дифосфоротиоататные или боранофосфатные связи.

В некоторых вариантах осуществления изобретения межнуклеозидная связь включает серу (S), как например, фосфоротиоатная межнуклеозидная связь.

Преимуществом олигонуклеотида по изобретению является использование фосфоротиоатных межнуклеозидных связей.

Фосфоротиоатные межнуклеозидные связи особенно полезны вследствие устойчивости к нуклеазе, эффективной фармакокинетики и простоты использования. В некоторых вариантах осуществления изобретения по меньшей мере 50% межнуклеозидных связей в олигонуклеотиде или его непрерывной нуклеотидной последовательности являются фосфоротиоатными, например, по меньшей мере 60%, например, по меньшей мере 70%, например, по меньшей мере 75%, например, по меньшей мере 80%, или, например, по меньшей мере 90%, межнуклеозидных связей в олигонуклеотиде или его непрерывной нуклеотидной последовательности являются фосфоротиоатными. В некоторых вариантах осуществления изобретения все межнуклеоизидные связи олигонуклеотида или его непрерывной нуклеотидной последовательности являются фосфоротиоатными.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид содержит как фосфоротиоатные межнуклеозидные связи, так и по меньшей мере одну фосфодиэфирную связь, например, 2, 3 или 4 фосфодиэфирные связи, в дополнение к фосфородитиоатной связи(ям). В гэпмерном олигонуклеотиде фосфодиэфирные связи, если они присутствуют, предпочтительно не располагаются между смежными нуклеозидами ДНК в гэп-участке G.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид содержит одну или несколько нейтральных межнуклеозидных связей, в частности, межнуклеозидную связь, выбранную из фосфотриэфирной, метилфосфонатной, MMI, амида-3, формацетальной или тиоформацетальной.

Дополнительные межнуклеозидные связи раскрыты в WO 2009/124238 (включенной в данный документ посредством ссылки). В одном из вариантов осуществления изобретения межнуклеозидная связь выбрана из связей, раскрытых в WO 2007/031091 (включенной в данный документ посредством ссылки). В частности, межнуклеозидная связь может быть выбрана из -O-Р(O)₂-О-, -O-P(O,S)-O-, -O-P(S)₂-O-, -S-P(O)₂-O-, -S-P(O,S)-O-, -S-P(S)₂-O-, -O-P(O)₂-S-, -O-P(O,S)-S-, -S-P(O)₂-S-, -O-PO(R^H)-C-, 0-PO(OCH₃)-0-, -O-PO(NR^H)-O-, -O-PO(OCH₂CH₂S-R)-O-, -O-PO(BH₃)-O-, -O-PO(NHR^H)-O-, -O-P(O)₂-NR^H-, -NR^H-P(O)₂-O-, -NR^H-CO-O-, -NR^H-CO-NR^H-, и/или межнуклеозидная связь может быть выбрана из группы, состоящей из: -О-СО-О-, -O-CO-NR^H-, -NR^H-CO-CH₂-, -О-CH₂-CO-NR^H-, -O-CH₂-CH₂-NR^H-, -CO-NR^H-CH₂-, -CH₂-NR^HCO-, -O-CH₂-CH₂-S-, -S-CH₂-CH₂-O-, -S-CH₂-CH₂-S-, -CH₂-SO₂-CH₂-, -CH₂-CO-NR^H-, -О-СН₂-СН₂-NR^H-CO -, -CH₂-NCH₃-O-CH₂-, где R^H выбран из водорода и C1-4-алкила.

Связи, устойчивые к нуклеазе, например, фосфоротиоатные связи, являются особенно эффективными на участках олигонуклетида, способных к рекрутингу нуклеазы при образовании дуплекса с целевой нуклеиновой кислотой, например, на участке G для гэпмеров. Однако фосфоротиоатные связи могут также быть применимы на участках, не способных к рекрутингу нуклеаз, и/или участках, увеличивающих аффинность для гэпмеров, например, на участках F и F'. В некоторых вариантах осуществления изобретения гэпмерные олигонуклеотиды могут содержать одну или более фосфодиэфирных связей на участке F или F', или на обоих участках F и F', при этом все межнуклеозидные связи на участке G могут быть фосфоротиоатными.

Преимущественно, все межнуклеозидные связи непрерывной нуклеотидной последовательности олигонуклеотида являются фосфоротиоатными, или все межнуклеозидные связи олигонуклеотида являются фосфоротиоатными связями.

Нуклеотидное основание

Термин нуклеотидное основание включает пуриновый (например, аденин или гуанин) и пиримидиновый (например, урацил, тимин и цитозин) фрагменты, присутствующие в нуклеозидах и нуклеотидах, которые образуют водородные связи при гибридизации нуклеиновой кислоты. В контексте данного изобретения термин нуклеотидное основание также охватывает модифицированные нуклеотидные основания, которые могут отличаться от встречающихся в природе нуклеотидных оснований, но функционировать при гибридизации нуклеиновой кислоты. В этом контексте «нуклеотидное основание» относится как к встречающимся в природе основаниям, таким как аденин, гуанин, цитозин, тимидин, урацил, ксантин и гипоксантин, так и к вариантам, не встречающимся в природе. Такие варианты, например, описаны в Hirao et al. (2012) Accounts of Chemical Research vol 45 page 2055 и Bergstrom (2009) Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry Suppl. 37 1.4.1.

В некоторых вариантах осуществления изобретения фрагмент нуклеотидного основания модифицирован путем замены пурина или пиримидина на модифицированный пурин или пиримидин, например замещенный пурин или замещенный пиримидин, например, нуклеотидное основание, выбранное из изоцитозина, псевдоизоцитозина, 5-метилцитозина, 5-тиозолоцитозина, 5-пропинилцитозина, 5-пропинилурацила, 5-бромурацила, 5-тиазолурацила, 2-тиоурацила, 2'-тиотимина, инозина, диаминопурина, 6-аминопурина, 2-аминопурина, 2,6-диаминопурина и 2-хлор-6-аминопурина.

Фрагменты нуклеотидных оснований могут быть обозначены буквенным кодом для каждого соответствующего основания, например А, Т, G, С или U, причем каждая буква может необязательно включать модифицированные нуклеотидные основания с эквивалентной функцией. Например, в иллюстративных олигонуклеотидах фрагменты нуклеотидных оснований выбраны из А, Т, G, С и 5-метилцитозина. Для ЗНК-гэпмеров необязательно можно использовать нуклеозиды ЗНК 5-метилцитозины.

Модифицированный олигонуклеотид

Термин «модифицированный олигонуклеотид» описывает олигонуклеотид, содержащий один или более нуклеозидов с модифицированным сахаром и/или модифицированные межнуклеозидные связи. Термин «химерный» олигонуклеотид представляет собой термин, который используется в литературе для описания олигонуклеотидов с модифицированными нуклеозидами.

Комплементарность

Термин «комплементарность» описывает способность нуклеозидов/нуклеотидов к спариванию оснований по Уотсону-Крику. Пары оснований по Уотсону-Крику представляют собой гуанин (О)-цитозин (С) и аденин (А)-тимин (Т)/урацил (U). Понятно, что олигонуклеотиды могут содержать нуклеозиды с модифицированными нуклеотидными основаниями, например, 5-метилцитозин часто используется вместо цитозина, и в связи с этим термин комплементарность охватывает спаривание оснований по Уотсону-Крику между немодифицированными и модифицированными нуклеотидными основаниями (см., например, Hirao et al (2012) Accounts of Chemical Research vol 45 page 2055 и Bergstrom (2009) Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry Suppl. 37 1.4.1).

Термин «% комплементарности», при использовании в данном документе, относится к доле нуклеотидов (в процентах) непрерывной нуклеотидной последовательности в молекуле нуклеиновой кислоты (например, олигонуклеотиде), которые по всей непрерывной нуклеотидной последовательности комплементарны к сравнительной последовательности (например, целевой последовательности или последовательности мотива). Процентную комплементарность рассчитывают путем подсчета выровненных нуклеотидных оснований, которые комплементарны (согласно спариванию оснований по Уотсону-Крику) между двумя последовательностями (при выравнивании целевой последовательности 5'-3' и олигонулеотидной последовательности 3'-5'), деления на общее количество нуклеотидов в олигонуклеотиде и умножения на 100. При таком сравнении нуклеотидное основание/нуклеотид, который не выравнивается (не образует пару оснований), называют несовпадением. Предпочтительно, вставки и делеции не допустимы при подсчете % комплементарности к непрерывной нуклеотидной последовательности. Понятно, что при определении комплементарности химические модификации нуклеотидных оснований не принимают во внимание, поскольку сохраняется функциональная способность нуклеотидных оснований образовывать пары оснований по Уотсону-Крику (например, 5-метилцитозин считают идентичным цитозину в контексте расчета % идентичности).

Термин «полностью комплементарен» относится к комплементарности на 100%.

Далее представлен пример олигонуклеотидного мотива, который полностью комплементарен к целевой нуклеиновой кислоте.

Далее представлен пример олигонуклеотида (SEQ ID NO: 49), который полностью комплементарен к целевой нуклеиновой кислоте (SEQ ID NO: 4).

5' gaaggttgaaatgagaattgatttgagttaaa 3' (SEQ ID NO: 4)

3' actcttaactaaactcaatt 5' (SEQ ID NO: 49)

Идентичность

Термин «идентичность», при использовании в данном документе, относится к доле нуклеотидов (выраженной в процентах) непрерывной нуклеотидной последовательности в молекуле нуклеиновой кислоты (например, олигонуклеотиде), которые по всей непрерывной нуклеотидной последовательности идентичны сравнительной последовательности (например, последовательности мотива). Таким образом, процент идентичности рассчитывают путем подсчета количества выровненных нуклеотидных оснований, которые идентичны (совпадение) между двумя последовательностями (в непрерывной нуклеотидной последовательности соединения по изобретению и сравнительной последовательности), деления этого количества на общее количество нуклеотидов в олигонуклеотиде и умножения на 100. Следовательно, процент идентичности = (совпадения × 100) / длину выровненного участка (например, непрерывной нуклеотидной последовательности). Вставки и делеции не допустимы при подсчете процента идентичности непрерывной нуклеотидной последовательности. Понятно, что при определении идентичности химические модификации нуклеотидных оснований не принимают во внимание, поскольку сохраняется функциональная способность нуклеотидных оснований образовывать пары оснований по Уотсону-Крику (например, 5-метилцитозин считают идентичным цитозину в контексте расчета % идентичности).

Гибридизация

Термин «гибридизация» или «гибридизировать», при использовании в данном документе, необходимо понимать как две цепи нуклеиновой кислоты (например, олигонуклеотид и целевая нуклеиновая кислота), образующие водородные связи между парами оснований на противоположных цепях, тем самым образуя дуплекс. Аффинность связывания между двумя цепями нуклеиновой кислоты представляет собой силу гибридизации. Ее часто описывают в контексте температуры плавления (Т_m), которую определяют как температуру, при которой половина олигонуклеотидов спарена с целевой нуклеиновой кислотой. При физиологических условиях Т_m не строго пропорциональна аффинности (Mergny and Lacroix, 2003, Oligonucleotides 13:515-537). Свободная энергия Гиббса в стандартном состоянии ΔG° представляет собой более точное представление аффинности связывания и относится к константе диссоциации (K_d) реакции уравнением ΔG°=RTln(K_d), где R представляет собой газовую постоянную, а Т представляет собой абсолютную температуру. Следовательно, очень низкая ΔG° реакции между олигонуклеотидом и целевой нуклеиновой кислотой отражает сильную гибридизацию между олигонуклеотидом и целевой нуклеиновой кислотой. ΔG° представляет собой энергию, связанную с реакцией, когда концентрации водных растворов составляют 1 М, рН составляет 7, а температура составляет 37°С. Гибридизация олигонуклеотидов с целевой нуклеиновой кислотой представляет собой самопроизвольную реакцию, а для самопроизвольных реакций ΔG° меньше нуля. ΔG° может быть измерена экспериментально, например, с помощью метода изотермической титрационной калориметрии (ITC), как описано в Hansen et al., 1965, Chem. Comm. 36-38 и Holdgate et al., 2005, Drug Discov Today. Специалист в данной области техники знает, что для измерений ΔG° доступно коммерческое оборудование. ΔG° также можно количественно оценить, используя модель ближайшего соседа, как описано в SantaLucia, 1998, Proc Natl Acad Sci USA. 95: 1460-1465, с применением термодинамических параметров, полученных соответствующим образом, описанных в Sugimoto et al., 1995, Biochemistry 34:11211-11216 и McTigue et al., 2004, Biochemistry 43:5388-5405. Для того чтобы иметь возможность модулировать необходимую целевую нуклеиновую кислоту с помощью гибридизации олигонуклеотиды по данному изобретению гибридизируются с целевой нуклеиновой кислотой с предполагаемыми величинами ΔG° ниже -10 ккал для олигонуклеотидов, которые составляют 10-30 нуклеотидов в длину. В некоторых вариантах осуществления изобретения степень или силу гибридизации измеряют по свободной энергии Гиббса в стандартном состоянии ΔG°. Олигонуклеотиды могут гибридизироваться с целевой нуклеиновой кислотой с предполагаемыми значениями ΔG° ниже -10 ккал, например ниже -15 ккал, например ниже -20 ккал, и, например ниже -25 для олигонуклеотидов, которые составляют 8-30 нуклеотидов в длину. В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотиды гибридизируются с целевой нуклеиновой кислотой с предполагаемым значением ΔG° от -10 до -60 ккал, например, от -12 до -40, например, от -15 до -30 ккал или от -16 до -27 ккал, например, от -18 до -25 ккал.

Целевая нуклеиновая кислота

В соответствии с данным изобретением целевая нуклеиновая кислота представляет собой нуклеиновую кислоту, которая кодирует тау-белок млекопитающего и может, например, представлять собой последовательность гена, РНК, мРНК, пре-мРНК, зрелую мРНК или кДНК. Следовательно, мишенью может называться целевая нуклеиновая кислота тау-белка или целевая нуклеиновая кислота МАРТ, эти термины могут использоваться взаимозаменяемо. Олигонуклеотид по изобретению может, например, воздействовать на участки экзонов МАРТ млекопитающего или может, например, воздействовать на участок интрона в пре-мРНК МАРТ (см. Таблицу 1)

Соответственно, целевая нуклеиновая кислота кодирует тау-белок, в частности тау-белок млекопитающего, например, тау-белок человека (см., например, Таблицы 2 и 3, в которых представлены последовательности пре-мРНК для тау-белка человека и обезьяны).

В некоторых вариантах осуществления изобретения целевая нуклеиновая кислота выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и 2, или их природных вариантов (например, последовательностей, кодирующих белок тау-белка млекопитающих). При использовании олигонуклеотида по изобретению в исследовании или диагностике целевая нуклеиновая кислота может представлять собой кДНК или синтетическую нуклеиновую кислоту, полученную из ДНК или РНК.

Для применения in vivo или in vitro олигонуклеотид по изобретению обычно способен ингибировать экспрессию тау-белка в клетке, которая экспрессирует целевую нуклеиновую кислоту МАРТ. Непрерывная последовательность нуклеотидных оснований олигонуклеотида по изобретению, как правило, комплементарна к целевой нуклеиновой кислоте МАРТ, что измерено по всей длине олигонуклеотида, необязательно, за исключением одного или двух несовпадений и, необязательно, с исключением линкерных участков на основе нуклеотидов, которые могут связывать олигонуклеотид с необязательной функциональной группой, например, в конъюгате, или других некомплементарных конечных нуклеотидов (например, участка D' или участка D''). Целевая нуклеиновая кислота в некоторых вариантах осуществления изобретения может быть РНК или ДНК, например, как информационная РНК, например, как зрелая мРНК или пре-мРНК.

В некоторых вариантах осуществления изобретения целевая нуклеиновая кислота представляет собой РНК или ДНК, кодирующую тау-белок млекопитающего, например, как тау-белок человека, например, последовательность МАРТ pre-мРНК человека, например, раскрытую как SEQ ID NO 1. Дополнительная информация относительно иллюстративных целевых нуклеиновых кислот представлена в Таблицах 2 и 3.

Fwd = смысловая цепь. Положения в геноме предоставляют последовательность пре-мРНК (последовательность генома). Ссылка NCBI предоставляет последовательность мРНК (последовательность кДНК).

*База данных сравнительных последовательностей Национального центра биотехнологической информации представляет собой исчерпывающий объединенный, не избыточный, хорошо реферированный набор сравнительных последовательностей, в том числе геномов, транскриптов и белков. Она размещена по адресу www.ncbi.nlm.nih.gov/refseq.

Целевая последовательность

Термин «целевая последовательность», при использовании в данном документе, относится к последовательности нуклеотидов, присутствующих в целевой нуклеиновой кислоте, которая содержит последовательность нуклеотидных оснований, комплементарную олигонуклеотиду по изобретению. В некоторых вариантах осуществления изобретения целевая последовательность состоит из участка на целевой нуклеиновой кислоте с последовательностью нуклеотидных оснований, которая комплементарна к непрерывной нуклеотидной последовательности олигонуклеотида по изобретению. Этот участок целевой нуклеиновой кислоты может взаимозаменяемо называться целевой нуклеотидной последовательностью, целевой последовательностью или целевым участком. В некоторых вариантах осуществления изобретения целевая последовательность длиннее, чем комплементарная последовательность одного олигонуклеотида и может, например, представлять предпочтительный участок целевой нуклеиновой кислоты, на который может воздействовать несколько олигонуклеотидов по изобретению.

В некоторых вариантах осуществления изобретения целевая последовательность представляет собой последовательность, выбранную из любого участка в Таблице 4 (R1_R_2254). В частности, целевая последовательность может быть выбрана из одного из участков группы, состоящей из участков R_223, R_738 или R_1298.

В некоторых вариантах осуществления целевая последовательность представляет собой последовательность, выбранную из интрона мРНК МАРТ человека, такого как интрон 1 или 2 мРНК тау-белка человека (см. выше Таблица 1).

Олигонуклеотид по изобретению содержит непрерывную нуклеотидную последовательность, которая комплементарна или гибридизируется с целевой нуклеиновой кислотой, например целевой последовательностью, описанной в данном документе.

Целевая последовательность, к которой комплементарен олигонуклеотид или с которой он гибридизируется, как правило, содержит непрерывную последовательность нуклеотидных оснований из по меньшей мере 10 нуклеотидов. Непрерывная нуклеотидная последовательность составляет от 10 до 100 нуклеотидов, например, от 12 до 60, например, от 13 до 50, например, от 14 до 30, например, от 15 до 25, например, от 16 до 20 смежных нуклеотидов.

В одном варианте осуществления изобретения целевая последовательность представляет собой SEQ ID NO: 3, соответствующую участку А. В некоторых вариантах осуществления целевая последовательность выбрана из положения от 12051 до 12111 SEQ ID NO: 1, такого как положение от 12051 до 12079, положение от 12085 до 12111 или положение от 12060 до 12078 SEQ ID NO: 1.

В другом варианте осуществления изобретения целевая последовательность представляет собой SEQ ID NO: 4, соответствующую участку В. В некоторых вариантах осуществления целевая последовательность выбрана из положения от 39562 до 39593 SEQ ID NO: 1, такого как положение от 39573 до 39592 SEQ ID NO: 1.

В другом варианте осуществления изобретения целевая последовательность представляет собой SEQ ID NO: 5, соответствующую участку С. В некоторых вариантах осуществления целевая последовательность выбрана из положения от 72837 до 72940 SEQ ID NO: 1, такого как положение от 72861 до 72891 или положение от 72862 до 72890 из SEQ ID NO: 1.

Клетка-мишень

Термин «клетка-мишень», при использовании в данном документе, относится к клетке, которая экспрессирует целевую нуклеиновую кислоту. В некоторых вариантах осуществления изобретения клетка-мишень может находиться in vivo или in vitro. В некоторых вариантах осуществления клетка-мишень представляет собой клетку млекопитающего, например, клетку грызуна, например, клетку мыши, или клетку крысы, или клетку обезьяны, или клетку человека.

В некоторых вариантах осуществления клетка-мишень экспрессирует мРНК тау-белка, например пре-мРНК тау-белка или зрелую мРНК тау-белка. Поли(А)-хвост мРНК тау-белка, как правило, не принимают во внимание в случае нацеливания антисмысловым нуклеотидом.

Встречающийся в природе вариант

Термин «встречающийся в природе вариант» относится к вариантам гена или транскриптов МАРТ, которые происходят с того же генетического локуса, что и целевая нуклеиновая кислота, но могут отличаться, например, посредством дегенерации генетического кода, приводящей к нескольким кодонам, кодирующим одну и ту же аминокислоту, или вследствие альтернативного сплайсинга пре-мРНК, или наличия полиморфизма, такого как однонуклеотидный полиморфизм (ОНП), и аллельных вариантов. На основании наличия последовательности с достаточной комплементарностью к олигонуклеотиду, олигонуклеотид по изобретению, следовательно, может быть нацелен на целевую нуклеиновую кислоту и ее встречающиеся в природе варианты.

В некоторых вариантах осуществления встречающиеся в природе варианты по меньшей мере на 95%, например, по меньшей мере на 98%, или по меньшей мере на 99%, гомологичны целевой нуклеиновой кислоте МАРТ млекопитающего, например, целевой нуклеиновой кислоте, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO 1 и 2. В некоторых вариантах осуществления встречающиеся в природе варианты по меньшей мере на 99% гомологичны целевой нуклеиновой кислоте МАРТ человека с SEQ ID NO: 1.

Модуляция экспрессии

Термин «модуляция экспрессии», при использовании в данном документе, необходимо понимать как общий термин, обозначающий способность олигонуклеотида изменять количество тау-белка по сравнению с количеством тау-белка до введения олигонуклеотида. Как альтернативный вариант, модуляцию экспрессии можно определить путем сравнения с контрольным экспериментом. В целом понятно, что контроль представляет собой индивид или клетку-мишень, на которые воздействуют композицией физиологического раствора, или индивид или клетка-мишень, которых подвергают воздействию ненацеливающего олигонуклеотида (имитация).

Один тип модуляции заключается в способности олигонуклеотида ингибировать, подавлять, снижать, угнетать, устранять, останавливать, блокировать, предотвращать, ослаблять, уменьшать, предупреждать или завершать экспрессию тау-белка, например, посредством деградации мРНК или блокировки транскрипции. Другой тип модуляции заключается в способности олигонуклеотида восстанавливать, увеличивать или усиливать экспрессию тау-белка, например, путем восстановления сайтов сплайсинга, или предотвращения сплайсинга, или устранения или блокировки ингибирующих механизмов, например подавления микроРНК.

Модифицированные нуклеозиды с высокой аффинностью

Модифицированный нуклеозид с высокой аффинностью представляет собой модифицированный нуклеотид, который при включении в олигонуклеотид усиливает аффинность олигонуклеотида к его комплементарной мишени, например, согласно измерениям температуре плавления (T^m). Модифицированный нуклеозид с высокой аффинностью по данному изобретению предпочтительно приводит к увеличению температуры плавления от +0,5 до +12°С, более предпочтительно, от +1,5 до +10°С, и наиболее предпочтительно, от +3 до +8°С на модифицированный нуклеозид. В данной области техники известны многочисленные модифицированные нуклеозиды с высокой аффинностью, которые включают, например, много 2'-замещенных нуклеозидов, а также замкнутые нуклеиновые кислоты (ЗНК, LNA) (см., например, Freier & Altmann; Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443 и Uhlmann; Curr. Opinion in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213).

Модификации сахара

Олигомер по изобретению может содержать один или более нуклеозидов, которые содержат фрагмент модифицированного сахара, т.е. модификация фрагмента сахара по сравнению с фрагментом сахара рибозы в ДНК и РНК.

Были получены многочисленные нуклеозиды с модификацией фрагмента сахара рибозы, главным образом с целью улучшения некоторых свойств олигонуклеотидов, например аффинности и/или устойчивости к нуклеазе.

Такие модификации включают те, в которых модифицирована рибозная кольцевая структура, например путем замены на кольцо гексозы (ГНК) или бициклическое кольцо, которое, как правило, имеет бирадикальный мостик между атомами углерода С2 и С4 в рибозном кольце (ЗНК), или несвязанное кольцо рибозы, в котором, как правило, отсутствует связь между атомами углерода С2 и С3 (например, UNA). Другие нуклеозиды с модифицированным сахаром включают, например, нуклеиновые кислоты на основе бициклогексозы (WO 2011/017521) или трициклические нуклеиновые кислоты (WO 2013/154798). Модифицированные нуклеозиды также включают нуклеозиды, в которых фрагмент сахара заменен фрагментом, отличным от сахара, например, как в случае пептидно-нуклеиновых кислот (ПНК) или морфолинонуклеиновых кислот.

Модификации сахара также включают модификации, полученные посредством замены заместительных групп на рибозном кольце на группы, отличные от водорода или 2'-ОН-группы, природно встречающиеся в нуклеозидах ДНК или РНК. Заместители могут, например, быть введены в положения 2', 3', 4' или 5'.

Нуклеозид модифицированный по 2'-сахару

Нуклеозид, модифицированный по 2'-сахару представляет собой нуклеозид, который имеет заместитель, отличный от Н или -ОН в положении 2' (2'-замещенный нуклеозид) или содержит 2'-связанный бирадикал, способный к образованию мостика между углеродом в положении 2' и вторым углеродом в рибозном кольце, например, нуклеозиды ЗНК (с 2'-4' бирадикальным мостиком).

Действительно, много внимания было уделено разработке нуклеозидов с 2'-замещенным сахаром, и было установлено, что многочисленные 2'-замещенные нуклеозиды обладают полезными свойствами при включении в олигонуклеотиды. Например, 2'-модифицированный сахар может придавать олигонуклеотиду повышенную аффинность связывания и/или повышенную устойчивость к нуклеазе. Примеры 2'-замещенных модифицированных нуклеозидов представляют собой 2'-O-алкил-РНК, 2'-O-метил-РНК, 2'-алкокси-РНК, 2'-O-метоксиэтил-РНК (МОЕ), 2'-амино-ДНК, 2'-фтор-РНК и 2'-F-AHK нуклеозид. Для дополнительных примеров см., например, в Freier & Altmann; Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443, и Uhlmann; Curr. Opinion in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213, и Deleavey and Damha, Chemistry and Biology 2012, 19, 937. Ниже приведены изображения некоторых 2'-замещенных модифицированных нуклеозидов.

В контексте данного изобретения нуклеозиды с 2'-замещенным сахаром не включают молекулы с 2'-мостиком типа ЗНК.

Замкнутые нуклеозиды нуклеиновых кислот (ЗНК нуклеозиды)

«Нуклеозид ЗНК» представляет собой нуклеозид, модифицированный по 2'-сахару, который включает бирадикальное связывание С2' и С4' кольца сахара рибозы указанного нуклеозида (также упоминается как «2'-4' мостик»), которое ограничивает или замыкает конформацию рибозного кольца. Эти нуклеозиды в литературе также называют мостиковой нуклеиновой кислотой или бициклической нуклеиновой кислотой (БНК, BNA). Замыкание конформации рибозы связано с повышенной аффинностью гибридизации (стабилизация дуплекса), когда ЗНК включают в олигонуклеотид, с комплементарной молекулой РНК или ДНК. Это можно определить по стандартной методике путем измерения температуры плавления дуплекса олигонуклеотид/комплементарная цепь.

Неограничивающие иллюстративные нуклеозиды ЗНК описаны в WO 99/014226, WO 00/66604, WO 98/039352, WO 2004/046160, WO 00/047599, WO 2007/134181, WO 2010/077578, WO 2010/036698, WO 2007/090071, WO 2009/006478, WO 2011/156202, WO 2008/154401, WO 2009/067647, WO 2008/150729, Morita et al., Bioorganic & Med. Chem. Lett. 12, 73-76, Seth et al. J. Org. Chem. 2010, Vol 75(5) pp. 1569-81, и Mitsuoka et al., Nucleic Acids Research 2009, 37(4), 1225-1238, и Wan и Seth, J. Medical Chemistry 2016, 59, 9645-9667.

2'-4' мостик содержит от 2 до 4 атомов мостика и, в частности, имеет формулу -X-Y-, где

X представляет собой кислород, серу, -CR^aR^b-, -C(R^a)=C(R^b)-, -C(=CR^aR^b)-, -C(R^a)=N-, -Si(R^a)₂-, -SO₂-, -NR^a-; -O-NR^a-, -NR^a-O-, -C(=J)-, Se, -O-NR^a-, -NR^a-CR^aR^b-, -N(R^a)-O- или -O-CR^aR^b-;

Y представляет собой кислород, серу, -(CR^aR^b)_n-, -CR^aR^b-O-CR^aR^b-, -C(R^a)=C(R^b)-, -C(R^a)=N-, -Si(R^a)₂-, -SO₂-, -NR^a-, -C(=J)-, Se, -O-NR^a-, -NR^a-CR^aR^b-, -N(R^a)-O- или -O-CR^aR^b-;

при условии, что -X-Y- не является -О-О-, Si(R^a)₂-Si(R^a)₂-, -SO₂-SO₂-, -C(R^a)=C(R^b)-C(R^a)=C(R^b), -C(R^a)=N-C(R^a)=N-, -C(R^a)=N-C(R^a)=C(R^b), -C(R^a)=C(R^b)-C(R^a)=N- или -Se-Se-;

J представляет собой кислород, серу, =СН₂ или =N(R^a);

R^a и R^b независимо выбраны из водорода, галогена, гидроксила, циано, тиогидроксила, алкила, замещенного алкила, алкенила, замещенного алкенила, алкинила, замещенного алкинила, алкокси, замещенного алкокси, алкоксиалкила, алкенилокси, карбоксила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила, формила, арила, амино, алкиламино, карбамоила, алкиламинокарбонила, аминоалкиламинокарбонила, алкиламиноалкиламинокарбонила, алкилкарбониламина, карбамида, алканоилокси, сульфонила, алкилсульфонилокси, нитро, азидо, тиогидроксилсульфидалкилсульфанила, арилоксикарбонила, арилокси, арилкарбонила, гетероарила, гетероарилоксикарбонила, гетероарилокси, гетероарилкарбонила, -OC(=X^a)R^c, -OC(=X^a)NR^cR^d и -NR^eC(=X^a)NR^cR^d;

или два геминальных R^a и R^b вместе образуют необязательно замещенный метилен;

или два геминальных R^a и R^b вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют циклоалкил или галогенциклоалкил только с одним атомом углерода -X-Y-;

в котором замещенный алкил, замещенный алкенил, замещенный алкинил, замещенный алкокси и замещенный метилен представляют собой алкил, алкенил, алкинил и метилен, замещенный от 1 до 3 заместителями, независимо выбранными из галогена, гидроксила, алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкоксиалкила, алкенилокси, карбоксила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила, формила, гетероцилила, арила и гетероарила;

Х^а представляет собой кислород, серу или -NR^c;

R^c, R^d или R^cнезависимо выбраны из водорода и алкила; а также

n представляет собой 1, 2 или 3.

В другом конкретном варианте осуществления X представляет собой кислород, серу, -NR^a-, -CR^aR^b- или -C(=CR^aR^b)-, в частности, кислород, серу, -NH-, -СН₂- или -С(=СН₂)-, еще конкретнее, кислород.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения, Y представляет собой -CR^aR^b-, -CR^aR^b-CR^aR^b- или -CR^aR^b-CR^aR^b-CR^aR^b-, в частности, -СН₂-СНСН₃-, -СНСН₃-СН₂-, -СН₂-СН₂- или -СН₂-СН₂-СН₂-.

В конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -O-(CR^aR^b)_n-, -S-CR^aR^b-, -N(R^a)CR^aR^b-, -CR^aR^b-CR^aR^b-, -O-CR^aR^b-O-CR^aR^b-, -CR^aR^b-O-CR^aR^b-, -C(=CR^aR^b)-CR^aR^b-, -N(R^a)CR^aR^b-, -O-N(R^a)-CR^aR^b- или-N(R^a)-O-CR^aR^b-.

В конкретном варианте осуществления изобретения, R^a и R^b независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, галогена, гидроксила, алкила и алкоксиалкила, в частности, водорода, галогена, алкила и алкоксиалкила.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения, R^a и R^b независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, фтора, гидроксила, метила и -СН₂-О-СН₃, в частности водорода, фтора, метила и -СН₂-О-СН₃.

Преимущественно, один из R^a и R^b в -X-Y- представляют собой как указано выше, а все остальные одновременно являются водородом.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения R^a представляет собой водород или алкил, в частности, водород или метил.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения R^b представляет собой водород или алкил, в частности, водород или метил.

В конкретном варианте осуществления изобретения один или оба из R^a и R^b представляют собой водород.

В конкретном варианте осуществления изобретения только один из R^a и R^b представляет собой водород.

В одном конкретном варианте осуществления изобретения один из R^a и R^b представляет собой метил, а другой является водородом.

В конкретном варианте осуществления изобретения R^a и R^b оба одновременно являются водородом.

В конкретном варианте осуществления изобретения -X-Y- представляет собой -O-СН₂-, -S-CH₂-, -S-CH(СН₃)-, -NH-CH₂-, -О-СН₂СН₂-, -O-СН(СН₂-O-СН₃)-, -O-СН(СН₂СН₃)-, -О-СН(СН₃)-, -О-СН₂-О-СН₂-, -О-СН₂-О-СН₂-, -СН₂-О-СН₂-, -С(=СН₂)СН₂-, -С(=СН₂)СН(СН₃)-, -N(OCH₃)CH₂- или -N(CH₃)CH₂-;

В конкретном варианте осуществления изобретения -X-Y- представляет собой -O-CR^aR^b-, где R^a и R^b независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, алкила и алкоксиалкила, в частности, водорода, метила и -СН₂-О-СН₃.

В конкретном варианте осуществления -X-Y- представляет собой -O-СН₂- или -О-СН(СН₃)-, в частности, -O-СН₂-.

Мостик 2'-4' может быть расположен либо ниже плоскости кольца рибозы (бета-D-конфигурация), либо выше плоскости кольца (альфа-L-конфигурация), как показано в формуле (А) и формуле (В) соответственно.

Нуклеозид ЗНК по изобретению, в частности, имеет формулу (А) или (В).

где

W представляет собой кислород, серу, -N(R^a)- или -CR^aR^b-, в частности, кислород;

В представляет собой нуклеотидное основание или модифицированное нуклеотидное основание;

Z представляет собой межнуклеозидную связь с соседним нуклеозидом или 5'-концевой группой;

Z* представляет собой межнуклеозидную связь с соседним нуклеозидом или 3'-концевой группой;

R¹, R², R³, R⁵ и R^5* независимо выбраны из водорода, галогена, алкила, галогеналкила, алкенила, алкинила, гидрокси, алкокси, алкоксиалкила, азида, алкенилокси, карбоксила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила, формила и арила; а также

X, Y, R^a и R^b, как описано выше.

В конкретном варианте осуществления в определении -X-Y-, R^a представляет собой водород или алкил, в частности, водород или метил. В другом конкретном варианте осуществления в определении -X-Y-, R^b представляет собой водород или алкил, в частности водород или метил. В более конкретном варианте осуществления в определении -X-Y-, R^a и R^b представляют собой водород. В конкретном варианте осуществления изобретения в определении -X-Y-, только один из R^a и R^b представляет собой водород. В одном конкретном варианте осуществления изобретения в определении -X-Y-, один из R^a и R^b представляет собой метил, а другой представляет собой водород. В конкретном варианте осуществления изобретения в определении -X-Y-, R^a и R^b оба одновременно представлены метилами.

В более конкретном варианте осуществления изобретения в определении X, R^a представляет собой водород или алкил, в частности, водород или метил. В другом конкретном варианте осуществления изобретения в определении X, R^b представляет собой водород или алкил, в частности, водород или метил. В конкретном варианте осуществления изобретения в определении X, один или оба из R^a и R^b представляют собой водород. В конкретном варианте осуществления изобретения в определении X, только один из R^a и R^b представляет собой водород. В одном конкретном варианте осуществления изобретения в определении X, один из R^a и R^b представляет собой метил, а другой представляет собой водород. В конкретном варианте осуществления изобретения в определении X, R^a и R^b оба одновременно являются метилами.

В конкретном варианте осуществления изобретения в определении Y, R^a представляет собой водород или алкил, в частности, водород или метил. В конкретном варианте осуществления изобретения в определении Y, R^b представляет собой водород или алкил, в частности водород или метил. В конкретном варианте осуществления изобретения в определении Y, один или оба из R^a и R^b представляют собой водород. В конкретном варианте осуществления изобретения в определении Y, только один из R^a и R^b представляет собой водород. В одном конкретном варианте осуществления изобретения в определении Y, один из R^a и R^b представляет собой метил, а другой представляет собой водород. В конкретном варианте осуществления изобретения в определении Y, R^a и R^b оба одновременно представляют собой метил.

В конкретном варианте осуществления изобретения R¹, R², R³, R⁵ и R^5* независимо выбраны из водорода и алкила, в частности, водорода и метила.

В более конкретном преимущественном варианте осуществления изобретения R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представляют собой водород.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения R¹, R², R³ все одновременно представляют собой водород, один из R⁵ и R^5* представляет собой водород, а другой представляет собой, как определено выше, в частности, алкил, более конкретно, метил.

В конкретном варианте осуществления изобретения R⁵ и R^5* независимо выбраны из водорода, галогена, алкила, алкоксиалкила и азида, в частности, из водорода, фтора, метила, метоксиэтила и азида. В конкретных преимущественных вариантах осуществления изобретения один из R⁵ и R^5* представляет собой водород, а другой - алкил, в частности, метил, галоген, в частности, фтор, алкоксиалкил, в частности, метоксиэтил или азид; или R⁵ и R^5* одновременно представляют собой водород или галоген, в частности, оба одновременно представляют собой водород или фтор. В таких конкретных вариантах осуществления изобретения W преимущественно является кислородом, a -X-Y-преимущественно представляет собой -О-СН₂-.

В конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -О-СН₂-, W представляет собой кислород, a R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представляет собой водородам. Такие ЗНК раскрыты в WO 99/014226, WO 00/66604, WO 98/039352 и WO 2004/046160, которые включены в данный документ посредством ссылки и включают нуклеозиды, общеизвестные в данной области техники, как бета-D-окси-ЗДК и альфа-L-окси-ЗДК.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения -X-Y- представляет собой -S-CH₂-, W представляет собой кислород, a R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представляют собой водород. Такие тио-ЗНК нуклеозиды раскрыты в WO 99/014226 и WO 2004/046160, которые включены в данный документ посредством ссылки.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения -X-Y- представляет собой -NH-CH₂-, W представляет собой кислород, a R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представляют собой водород. Такие амино-ЗНК нуклеозиды раскрыты в WO 99/014226 и WO 2004/046160, которые включены в данный документ посредством ссылки.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -О-СН₂СН₂- или -ОСН₂СН₂СН₂-, W представляет собой кислород, a R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представляют собой водород. Такие LNA нуклеозиды раскрыты в WO 00/047599 и Morita et al., Bioorganic & Med. Chem. Lett. 12, 73-76, которые включены в данный документ посредством ссылки и включают общеизвестные в данной области техники 2'-O-4'С-этиленовые мостиковые нуклеиновые кислоты (ЭНК).

В другом конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -О-СН₂-, W представляет собой кислород, R¹, R², R³ все одновременно представляют собой водород, один из R⁵ и R^5* представляет собой водород, а другой представлен не водородом, а алкилом, например, метилом. Такие 5'-замещенные ЗНК нуклеозиды раскрыты в WO 2007/134181, который включен в данный документ посредством ссылки.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -O-CR^aR^b-, в котором один или оба R^a и R^b представлены не водородами, в частности, являются алкилами, такими как метил, W представляет собой кислород, R¹, R², R³ все одновременно представляют собой водород, один из R⁵ и R^5* представляет собой водород, а другой представлен не водородом, в частности, алкилом, например, метилом. Такие бис-модифицированные нуклеозиды ЗНК раскрыты в WO 2010/077578, который включен в данный документ посредством ссылки.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -O-CHR^a-, W представляет собой кислород, a R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представляют собой водород. Такие 6'-замещенные ЗНК нуклеозиды раскрыты в WO 2010/036698 и WO 2007/090071, которые включены в данный документ посредством ссылки. В таких 6'-замещенных ЗНК нуклеозидах, R^a представляет собой, в частности, C₁-C₆ алкил, такой как метил.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -O-СН(СН₂-O-СН₃)-("2'О-метоксиэтилбициклическую нуклеиновую кислоту", Seth et al., J. Org. Chem. 2010, Vol 75(5) pp. 1569-81).

В другом конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -О-CH(СН₂СН₃)-("2'О-этилбициклическую нуклеиновую кислоту", Seth et al., J. Org. Chem. 2010, Vol 75(5) pp. 1569-81).

В другом конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -O-СН(СН₂-O-СН₃)-, W является кислородом и R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представлены водородом. Такие ЗНК нуклеозиды также известны в данной области техники, как циклические MOEs (сМОЕ) и раскрыты в WO 2007/090071.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -О-СН(СН₃)-.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -О-СН₂-О-СН₂- (Seth et al., J. Org. Chem, 2010, см. выше).

В другом конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -О-СН(СН₃)-, W представляет собой кислород, a R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представлены водородом. Такие 6'-метил ЗНК нуклеозиды также известны в данной области техники как сЕТ нуклеозиды, и могут быть представлять собой или (S)-cET или (R)-cET диастереоизомеры, как раскрыто в WO 2007/090071 (бета-D) и WO 2010/036698 (альфа-L), которые включены в данный документ посредством ссылки.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -O-CR^aR^b-, где R^a и R^b не представляет собой водород, W представляет собой кислород, a R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представлены водородом. В конкретном варианте осуществления R^a и R^b оба одновременно представляют собой алкил, в частности, оба одновременно представляют собой метил. Такие 6'-дизамещенные ЗНК нуклеозиды раскрыты в WO 2009/006478 и включены в данный документ посредством ссылки.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y-представляет собой -S-CHR^a-, W представляет собой кислород, a R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представлены водородом. Такие 6'-замещенные тио-ЗНК нуклеозиды раскрыты в WO 2011/156202, которая включена в данный документ посредством ссылки. В конкретном варианте осуществления такого 6'-замещенного тио-ЗНК, R^a представляет собой алкил, в частности, метил.

В конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y-представляет собой -C(=CH₂)C(R^aR^b)-, -C(=CHF)C(R^aR^b)- или -C(=CF₂)C(R^aR^b)-, W является кислородом, a R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представлены водородом. R^a и R^b преимущественно независимо выбраны из водорода, галогена, алкила и алкоксиалкила, в частности, водорода, метила, фтора и метоксиметила. R^a и R^b, в частности, одновременно представляют собой водород, или метил, или один из R^a и R^b представляет собой водород, а другой - метил. Такие винилкарбоновые ЗНК нуклеозиды раскрыты в WO 2008/154401 и WO 2009/067647, обе которые включены в данный документ посредством ссылки.

В конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -N(OR^a)-CH₂-, W представляет собой кислород, a R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представлены водородом. В конкретном варианте осуществления R^a представляет собой алкил, такой как метил. Такие ЗНК нуклеозиды также известны как N-замещенные ЗНК и раскрыты в WO 2008/150729, которая включена в данный документ посредством ссылки.

В конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -O-N(R^a)-, -N(R^a)-O-, -NR^a-CR^aR^b-CR^aR^b- или -NR^a-CR^aR^b-, W представляет собой кислород, a R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представлены водородом. R^a и R^b преимущественно независимо выбраны из водорода, галогена, алкила и алкоксиалкила, в частности, водорода, метила, фтора и метоксиметила. В конкретном варианте осуществления R^a представляет собой алкил, такой как метил, R^b представляет собой водород или метил, в частности, водород. (Seth et al., J. Org. Chem, 2010, см. выше).

В конкретном варианте осуществления изобретения, -X-Y- представляет собой -O-N(CH₃)- (Seth et al., J. Org. Chem, 2010, см. выше).

В конкретном варианте осуществления изобретения R⁵ и R^5* оба одновременно представляют собой водород. В другом конкретном варианте осуществления изобретения один из R⁵ и R^5* представляет собой водород, а другой - алкил, такой как метил. В таких вариантах осуществления, R¹, R² и R³ могут быть представлены, в частности, водородом, a -X-Y- представляет собой, в частности, -O-СН₂- или -O-CHC(R^a)₃-, как -О-СН(СН₃)-.

В конкретном варианте осуществления изобретения, X-Y- представляет собой -CR^aR^b-O-CR^aR^b-, как -СН₂-О-СН₂-, W представляет собой кислород, a R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представлены водородом. В таких конкретных вариантах осуществления R^a может представлять собой, в частности, алкил, такой как метил, a R^b может быть представлен водородом или метилом, в частности, водородом. Такие ЗНК нуклеозиды также известны как конформационно ограниченные нуклеотиды (CRN) и раскрыты в WO 2013/036868, которая включена в данный документ посредством ссылки.

В конкретном варианте осуществления изобретения, X-Y- представляет собой -O-CR^aR^b-O-CR^aR^b-, как -O-СН₂-O-СН₂-, W представляет собой кислород, a R¹, R², R³, R⁵ и R^5* все одновременно представлены водородом. R^a и R^b преимущественно независимо выбраны из водорода, галогена, алкила и алкоксиалкила, в частности, водорода, метила, фтора и метоксиметила. В таком конкретном варианте осуществления R^a может представлять собой, в частности, алкил, такой как метил, a R^b может быть представлен водородом или метилом, в частности, водородом. Такие ЗНК нуклеозиды также известны как СОС нуклеотиды и раскрыты в Mitsuoka et al., Nucleic Acids Research, 2009, 37(4), 1225-1238, которая включена в данный документ посредством ссылки.

Если в данном документе не указано иначе, нуклеозиды ЗНК могут находиться в стереоизоформе бета-D или альфа-L.

Конкретные примеры нуклеозидов ЗНК по изобретению представлены на Схеме 1 (где В имеет значение, указанное выше).

Конкретные нуклеозиды ЗНК представляют собой бета-D-окси-ЗНК, 6'-метил-бета-О-окси-ЗНК, например, (S)-6'-метил-бета-D-окси-ЗНК (ScET) и ENA.

Если одно из исходных веществ или соединений по изобретению содержит одну или более функциональных групп, которые нестабильны или реакционноспособны в реакционных условиях одной или более стадий реакции, до ключевой стадии можно вводить защитные группы (как описано, например, в "Protective Groups in Organic Chemistry" by T.W. Greene and P.G.M. Wuts, 3^rd Ed., 1999, Wiley, New York) с использованием способов, хорошо известных в данной области техники. Такие защитные группы можно удалять на следующей стадии синтеза с использованием стандартных способов, описанных в литературе. Примеры защитных групп представляют собой трет-бутоксикарбонил (Boc), 9-флуоренилметилкарбамат (Fmoc), 2-триметилсилилэтилкарбамат (Теос), карбобензилокси (Cbz) и п-метоксибензилоксикарбонил (Moz).

Соединения, описанные в данном документе, могут содержать несколько асимметрических центров и могут находиться в форме оптически чистых энантиомеров, смесей энантиомеров, таких как, например, рацематы, смеси диастереомеров, диастереомерные рацематы или смеси диастереомерных рацематов.

Термин «асимметрический атом углерода» означает атом углерода с четырьмя различными заместителями. В соответствии с правилом Кана-Ингольда-Прелонга асимметрический атом углерода может находиться в «R»-или «S»-конфигурации.

Определения химических групп

В данном описании термин «алкил», отдельно или в комбинации, означает неразветвленную или разветвленную алкильную группу из 1-8 атомов углерода, в частности, неразветвленную или разветвленную алкильную группу из 1-6 атомов углерода, более конкретно, неразветвленную или разветвленную алкильную группу из 1-4 атомов углерода. Примеры неразветвленных или разветвленных C₁-C₈ алкильных групп представляют собой метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил, изомерные пентилы, изомерные гексилы, изомерные гептилы и изомерные октилы, в частности метил, этил, пропил, бутил и пентил. Конкретные примеры алкила представляют собой метил, этил и пропил.

Термин «циклоалкил», отдельно или в комбинации, означает циклоалкильное кольцо из 3-8 атомов углерода, и в частности, циклоалкильное кольцо из 3-6 атомов углерода. Примеры циклоалкила представляют собой циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил, более конкретно, циклопропил и циклобутил. Конкретный пример «циклоалкила» представляет собой циклопропил.

Термин «алкокси», отдельно или в комбинации, означает группу формулы алкил-О-, в которой термин «алкил» был ранее определен, такую как метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, изобутокси, втор-бутокси и трет-бутокси. В частности, «алкокси» представляет собой метокси и этокси. Метоксиэтокси представляет собой конкретный пример «алкоксиалкокси».

Термин «окси», отдельно или в комбинации, означает группу -О-.

Термин «алкенил», отдельно или в комбинации, означает неразветвленный или разветвленный углеводородный остаток, содержащий этиленовую связь и до 8, предпочтительно до 6, особенно предпочтительно до 4, атомов углерода. Примеры алкенильных групп представляют собой этенил, 1-пропенил, 2-пропенил, изопропенил, 1-бутенил, 2-бутенил, 3-бутенил и изобутенил.

Термин «алкинил», отдельно или в комбинации, означает неразветвленный или разветвленный углеводородный остаток, содержащий тройную связь и до 8, предпочтительно до 6, особенно предпочтительно до 4, атомов углерода.

Термин «галогено» или «галоген», отдельно или в комбинации, означает фтор, хлор, бром и йод, а конкретно, фтор, хлор или бром, более конкретно, фтор. Термин «галогено» в комбинации с другой группой обозначает замещение указанной группы по меньшей мере одним галогеном, в частности, замещение одним-пятью галогенами, в частности, одним-четырьмя галогенами, т.е. одним, двумя, тремя или четырьмя галогенами.

Термин «галогеналкил», отдельно или в комбинации, обозначает алкильную группу, замещенную по меньшей мере одним галогеном, в частности, замещенную одним-пятью галогенами, в частности, одним-тремя галогенами. Примеры галогеналкила включают монофтор-, дифтор- или трифтор-метил, -этил или -пропил, например, 3,3,3-трифторпропил, 2-фторэтил, 2,2,2-трифторэтил, фторметил или трифторметил. Фторметил, дифторметил и трифторметил представляют собой конкретные «галогеналкилы».

Термин «галогенциклоалкил», отдельно или в комбинации, обозначает циклоалкильную группу, как определено выше, замещенную по меньшей мере одним галогеном, в частности, замещенную одним-пятью галогенами, в частности, одним-тремя галогенами. Конкретные примеры «галогенциклоалкила» представляют собой галогенциклопропил, в частности фторциклопропил, дифторциклопропил и трифторциклопропил.

Термин «гидроксил» и «гидрокси», отдельно или в комбинации, означает группу -ОН.

Термин «тиогидроксил» и «тиогидрокси», отдельно или в комбинации, означает группу -SH.

Термин «карбонил», отдельно или в комбинации, означает группу -С(О)-.

Термин «карбокси» или «карбоксил», отдельно или в комбинации, означает группу -СООН.

Термин «амино», отдельно или в комбинации, означает первичную аминогруппу (-NH₂), вторичную аминогруппу (-NH-) или третичную аминогруппу (-N-).

Термин «алкиламино», отдельно или в комбинации, означает аминогруппу, как определено выше, замещенную одной или двумя алкильными группами, как определено выше.

Термин «сульфонил», отдельно или в комбинации, означает группу -SO₂.

Термин «сульфинил», отдельно или в комбинации, означает группу -SO-.

Термин «сульфанил», отдельно или в комбинации, означает группу -S-.

Термин «циано», отдельно или в комбинации, означает группу -CN.

Термин «азидо», отдельно или в комбинации, означает группу -N₃.

Термин «нитро», отдельно или в комбинации, означает группу NO₂.

Термин «формил», отдельно или в комбинации, означает группу -С(O)Н.

Термин «карбамоил», отдельно или в комбинации, означает группу -C(O)NH₂.

Термин «карбамидо», отдельно или в комбинации, означает группу -NH-C(O)-NH₂.

Термин «арил», отдельно или в комбинации, обозначает одновалентную ароматическую карбоциклическую моно- или бициклическую кольцевую систему, содержащую от 6 до 10 атомов углерода в кольце, необязательно замещенные от 1 до 3 заместителями, независимо выбранными из галогена, гидроксила, алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкоксиалкила, алкенилокси, карбоксила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила и формила. Примеры арила включают фенил и нафтил, в частности, фенил.

Термин «гетероарил», отдельно или в комбинации, обозначает одновалентную ароматическую карбоциклическую моно- или бициклическую кольцевую систему из 5-12 атомов в кольце, содержащую 1, 2, 3 или 4 гетероатома, выбранных из N, О и S, при этом оставшиеся атомы в кольце представляют собой углерод, необязательно замещенный от 1 до 3 заместителями, независимо выбранными из галогена, гидроксила, алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкоксиалкила, алкенилокси, карбоксила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила и формила. Примеры гетероарила включают пирролил, фуранил, тиенил, имидазолил, оксазолил, тиазолил, триазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, тетразолил, пиридинил, пиразинил, пиразолил, пиридазинил, пиримидинил, триазинил, азепинил, диазепинил, изоксазолил, бензофуранил, изотиазолил, бензотиенил, индолил, изоиндолил, изобензофуранил, бензимидазолил, бензоксазолил, бензоизоксазолил, бензотиазолил, бензоизотиазолил, бензооксадиазолил, бензотиадиазолил, бензотриазолил, пуринил, хинолинил, изохинолинил, хиназолинил, хиноксалинил, карбазолил или акридинил.

Термин «гетероциклил», отдельно или в комбинации, обозначает одновалентную насыщенную или частично ненасыщенную моно- или бициклическую кольцевую систему из 4 до 12, в частности, от 4 до 9 атомов в кольце, содержащую 1, 2, 3 или 4 гетероатома в кольце, выбранных из N, О и S, при этом оставшиеся атомы в кольце представляют собой углерод, необязательно замещенный от 1 до 3 заместителями, независимо выбранными из галогена, гидроксила, алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкоксиалкила, алкенилокси, карбоксила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила и формила. Примеры моноциклических насыщенных гетероциклилов представляют собой азетидинил, пирролидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиенил, пиразолидинил, имидазолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, тиазолидинил, пиперидинил, тетрагидропиранил, тетрагидротиапиранил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, 1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил, азепанил, диазепанил, гомопиперазинил или оксазепанил. Примеры бициклических насыщенных гетероциклоалкилов представляют собой 8-азабицикло[3.2.1]октил, хинуклидинил, 8-окса-3-азабицикло[3.2.1]октил, 9-азабицикло[3.3.1]нонил, 3-окса-9-азабицикло[3.3.1]нонил или 3-тиа-9-азабицикло[3.3.1]нонил. Примеры частично ненасыщенного гетероциклоалкила представляют собой дигидрофурил, имидазолинил, дигидрооксазолил, тетрагидропиридинил или дигидропиранил.

Фармацевтически приемлемые соли

Термин «фармацевтически приемлемые соли» относится к тем солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства свободных оснований или свободных кислот, которые не являются биологически или в других отношениях нежелательными. Соли образуются с такими неорганическими кислотами, как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, в частности соляная кислота, и такими органическими кислотами, как уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота, N-ацетилцистеин. Кроме того, эти соли могут быть получены при добавлении неорганического основания или органического основания к свободной кислоте. Соли, полученные из неорганического основания, включают, но не ограничиваются ими, соли натрия, калия, лития, аммония, кальция, магния. Соли, полученные из органических оснований, включают, но не ограничиваются ими, соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, в том числе встречающихся в природе замещенных аминов, циклических аминов и основных ионообменных смол,, например, изопропиламина, триметиламина, диэтиламина, триэтиламина, трипропиламина, этаноламина, лизина, аргинина, N-этилпиперидина, пиперидина, полиаминных смол. Соединение формулы (I) также может находиться в форме цвиттер-ионов. Особенно предпочтительные фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I) представляют собой соли соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты и метансульфоновой кислоты.

Защитная группа

Термин «защитная группа», отдельно или в комбинации, обозначает группу, которая селективно блокирует реакционноспособный сайт в мультифункциональном соединении, так что химическая реакция может быть осуществлена селективно по другому незащищенному реакционноспособному сайту. Защитные группы можно удалять. Иллюстративные защитные группы представляют собой амино-защитные группы, карбокси-защитные группы или гидрокси-защитные группы.

Опосредованная нуклеазой деградация

Опосредованная нуклеазой деградация относится к олигонуклеотиду, способному к опосредованию деградации комплементарной нуклеотидной последовательности при образовании дуплекса с такой последовательностью.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид может функционировать посредством опосредованной нуклеазой деградации целевой нуклеиновой кислоты, при этом олигонуклеотиды по изобретению способны к рекрутингу нуклеазы, в частности эндонуклеазы, предпочтительно эндорибонуклеазы (РНКазы), например, РНКазы Н. Примеры структур олигонуклеотидов, которые действуют по опосредованным нуклеазой механизмам, представляют собой олигонуклеотиды, которые, как правило, содержат участок из по меньшей мере 5 или 6 нуклеозидов ДНК подряд и дополнены с одной или обеих сторон нуклеозидами, повышающими аффинность, например, гэпмеры, хедмеры и тейлмеры.

Активность и рекрутинг РНКазы Н

Активность РНКазы Н антисмыслового олигонуклеотида относится к его способности к рекрутингу РНКазы Н при нахождении в дуплексе с комплементарной молекулой РНК. В WO01/23613 представлены способы определения активности РНКазы Н in vitro, которые можно использовать для определения способности к рекрутингу РНКазы Н. Как правило, олигонуклеотид считается способным к рекрутингу РНКазы Н, если он, при наличии комплементарной целевой последовательности нуклеиновой кислоты, характеризуется исходной скоростью, как измерено в пмоль/л/мин, составляющей по меньшей мере 5%, например, по меньшей мере 10% или более 20%, от исходной скорости, определенной при использовании олигонуклеотида, имеющего ту же самую последовательность оснований, что и модифицированный исследуемый олигонуклеотид, но содержащего только мономеры ДНК с фосфоротиоатными связями между всеми мономерами в олигонуклеотиде, и с использованием методологии, представленной Примерами 91-95 WO 01/23613 (включена в данный документ посредством ссылки). Для использования при определении активности РНКазы Н рекомбинантная РНКаза H1 доступна в Lubio Science GmbH, Люцерн, Швейцария.

Гэпмер

Антисмысловой олигонуклеотид по изобретению или его непрерывная нуклеотидная последовательность могут представлять собой гэпмер, также называемым гэпмерным олигонуклеотидом или конструкциями гэпмеров. Антисмысловые гэпмеры широко используются для ингибирования целевой нуклеиновой кислоты посредством опосредованной РНКазой Н деградации. Гэпмерный олигонуклеотид содержит по меньшей мере три отдельных структурных участка, 5'-фланг, гэп и 3'-фланг, F-G-F' в направлении от '5- до -3'. «Гэп»-участок (G) содержит непрерывный фрагмент из нуклеотидов ДНК, которые дают возможность олигонуклеотиду осуществлять рекрутинг РНКазы Н. Гэп-участок дополнен 5'-фланкирующим участком (F), содержащим один или более нуклеозидов с модифицированным сахаром, преимущественно нуклеозидов с высокой аффинностью, содержащих модифицированный сахар, и 3'-фланкирующим участком (F'), содержащим один или более нуклеозидов с модифицированным сахаром, преимущественно нуклеозидов с высокой аффинностью, содержащих модифицированный сахар. Один или более нуклеозидов с модифицированным сахаром на участке F и участке F' усиливают аффинность олигонуклеотида к целевой нуклеиновой кислоте (т.е. представляют собой усиливающие аффинность нуклеозиды с модифицированным сахаром). В некоторых вариантах осуществления один или более нуклеозидов с модифицированным сахаром на участке F и участке F' представляют собой нуклеозиды модифицированные по 2'-сахару, например, 2'-модификации сахара, придающие высокую аффинность, например, независимо выбранные из ЗНК и 2'-МОЕ.

В структуре гэпмера крайние 5'- и 3'-нуклеозиды гэп-участка представляют собой нуклеозиды ДНК, которые расположены рядом с нуклеозидом с модифицированным сахаром участка 5'-(F) или 3'-(F'), соответственно. Фланги могут быть дополнительно определены как содержащие по меньшей мере один нуклеозид с модифицированным сахаром на конце, наиболее удаленном от гэп-участка, т.е. на 5'-конце 5'-фланга и на 3'-конце 3'-фланга.

Участки F-G-F' образуют непрерывную нуклеотидную последовательность. Антисмысловые олигонуклеотиды по изобретению или их непрерывная нуклеотидная последовательность могут содержать участок гэпмера формулы F-G-F'.

Общая длина гэпмера структуры F-G-F' может составлять, например, от 12 до 32 нуклеозидов, например, от 13 до 24, например, от 14 до 22 нуклеозидов, например, от 14 до 17, например, от 16 до 18 нуклеозидов, например, от 16 до 20 нуклеозидов.

В качестве примера гэпмерный олигонуклеотид по данному изобретению может быть представлен следующими формулами:

F_1-8-G_6-16-F'_2-8, например

F_2-8-G_6-14-F'_2-8, например

F_3-8-G_6-14-F'_2-8

при условии, что общая длина гэпмерных участков F-G-F' составляет по меньшей мере 10, например, по меньшей мере 12, например, по меньшей мере 14, нуклеотидов в длину.

В аспекте изобретения антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная нуклеотидная последовательность, состоит из или содержит гэпмер формулы 5'-F-G-F'-3', где участок F и участок F' независимо состоят из или содержат от 1 до 8 нуклеозидов, из которых от 2 до 4 представляют собой нуклеозиды с 2'-модифицированным сахаром и определяют 5'- и 3'-конец участка F и участка F', a G представляет собой участок от 6 до 16 нуклеозидов, которые способны к рекрутингу РНКазы Н.

Участки F, G и F' дополнительно определены ниже и могут быть включены в формулу F-G-F'.

Гэпмер: участок G

Участок G (гэп-участок) гэпмера представляет собой участок из нуклеозидов, как правило, из нуклеозидов ДНК, который дает возможность олигонуклеотиду осуществлять рекрутинг РНКазы, например РНКазы H1 человека. РНКаза Н представляет собой клеточный фермент, который распознает дуплекс между ДНК и РНК и ферментативно расщепляет молекулу РНК. Соответственно, гэпмеры могут иметь гэп-участок (G) из по меньшей мере 5 или 6 смежных нуклеозидов ДНК, например, от 5 до 16 смежных нуклеозидов ДНК, например, от 6 до 15 смежных нуклеозидов ДНК, например, от 7 до 14 смежных нуклеозидов ДНК, например, от 8 до 12 смежных нуклеотидов ДНК, например, от 8 до 12 смежных нуклеотидов ДНК в длину. В некоторых вариантах осуществления изобретения гэп-участок G может состоять из 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 смежных нуклеозидов ДНК. Цитозин (С) ДНК на гэп-участке в некоторых случаях может быть метилирован, такие остатки могут быть указаны как 5'-метилцитозин (^meC, либо буквой «е» вместо «с»). Метилирование цитозина ДНК в гэпе является преимуществом, если в гэпе присутствуют динуклеотиды cg для снижения потенциальной токсичности, модификация не оказывает значительного влияния на эффективность олигонуклеотидов. Сообщалось о применении 5'-замещенных нуклеозидов ДНК, таких, как 5'-метил-ДНК-нуклеозид, в участках с разрывом ДНК (ЕР 2742136).

В некоторых вариантах осуществления изобретения гэп-участок G может состоять из 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 связанных фосфоротиоатными связями смежных нуклеозидов ДНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения все межнуклеозидные связи на гэп-участке представляют собой фосфоротиоатные связи.

Хотя традиционные гэпмеры имеют гэп-участок на основе ДНК, существуют многочисленные примеры модифицированных нуклеозидов, которые делают возможным рекрутинг РНКазы Н при их использовании на гэп участке. Сообщалось что модифицированные нуклеозиды, входящие в состав гэп-участка, способны к рекрутингу РНКазы Н, как, например, альфа-L-ЗНК, С4'-алкилированная ДНК (как описано в РСТ/ЕР 2009/050349 и Vester et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 18 (2008) 2296-2300, оба включены в данный документ посредством ссылки), нуклеозиды, полученные из арабинозы, как АНК и 2'F-АНК (Mangos et al., 2003, J. AM. CHEM. SOC. 125, 654-661), UNA (незамкнутая нуклеиновая кислота) (как описано в Fluiter et al., Mol. Biosyst., 2009, 10, 1039, которая включенная в данный документ посредством ссылки). UNA представляет собой незамкнутую нуклеиновую кислоту, как правило, в которой связь между С2 и С3 рибозы была удалена с образованием незамкнутого остатка «сахара». Модифицированные нуклеозиды, используемые в таких гэпмерах, могут представлять собой нуклеозиды, которые принимают 2'-эндоструктуру (подобную ДНК) при введении в гэп-участок, т.е. модификации, которые делают возможным рекрутинг РНКазы. В некоторых вариантах осуществления изобретения гэп-участок ДНК (G), описанный в данном документе, может необязательно содержать от 1 до 3 нуклеозидов с модифицированным сахаром, которые принимают 2'-эндоструктуру (подобно ДНК) при введении в гэп-участок.

Участок G: «Гэп с прерыванием» Как альтернативный вариант, существуют многочисленные сообщения о вставках модифицированного нуклеозида, который привносит 3'-эндо-конформацию в гэп-участок гэпмеров, при этом сохраняя некоторую активность РНКазы Н. Такие гэпмеры с гэп-участком, содержащим один или более модифицированных нуклеозидов в 3'-эндо-конформации также называют гэпмером с «гэпом с прерыванием» или гэпмером с «прерванным гэпом», см., например, WO 2013/022984. Олигонуклетиды с гэпом с прерыванием сохраняют достаточный участок нуклеозидов ДНК на гэп-участке, чтобы сделать возможным рекрутинг РНКазы Н. Способность олигонуклеотида со структурой гэп с прерыванием к рекрутингу РНКазы Н, как правило, является специфической для последовательности или даже соединения, см. Rukov et al., 2015, Nucl. Acids Res. Vol. 43 pp. 8476-8487, в которой раскрыты олигонуклеотиды с «гэпом с прерыванием», которые осуществляют рекрутинг РНКазы Н, что в некоторых случаях обеспечивает более специфичное расщепление целевой РНК. Модифицированные нуклеозиды, используемые на гэп-участке олигонуклеотидов с гэпом с прерыванием, могут, например, представлять собой модифицированные нуклеозиды, которые придают 3'-эндо-конформацию, например нуклеозиды 2'-O-метил-(ОМе) или 2'-O-МОЕ (МОЕ) или нуклеозиды бета-D-ЗНК (мостик между С2' и С4' кольца сахара рибозы нуклеозида находится в бета-конформации), например нуклеозиды бета-D-окси-ЗНК или ScET.

Как и с гэпмерами, содержащими участок G, описанными выше, гэп-участок гэпмеров с гэпом с прерыванием или с прерванным гэпом содержит нуклеозиды ДНК на 5'-конце гэпа (соседний к 3'-нуклеозиду участка F) и нуклеозид ДНК на 3'-конце гэпа (соседний к 5'-нуклеозиду участка F'). В гэпмерах, которые содержат прерванный гэп, как правило, сохраняется участок из по меньшей мере 3 или 4 смежных нуклеозидов ДНК или на 5'-конце, или на 3'-конце гэп-участка.

Иллюстративные структуры олигонуклеотидов с гэпом с прерыванием включают

F_1-8-[D_3-4-E₁-D_3-4]-F'_1-8

F_1-8-[D_1-4-E₁-D_3-4]-F'_1-8

F_1-8-[D_3-4-E₁-D_1-4]-F'_1-8,

где участок G заключен в скобки [D_n-E_r-D_m], D представляет собой непрерывную последовательность нуклеозидов ДНК, Е представляет собой модифицированный нуклеозид (нуклеозид гэпа с прерыванием или нуклеозид, прерывающий гэп), a F и F' представляют собой участки флангов, как определено в данном документе, и при условии, что общая длина участков гэпмера F-G-F' составляет по меньшей мере 12, например, по меньшей мере 14, нуклеотидов в длину.

В некоторых вариантах осуществления изобретения участок G гэпмера с прерванным гэпом содержит по меньшей мере 6 нуклеозидов ДНК, например 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 нуклеозидов ДНК. Как описано выше, нуклеозиды ДНК могут быть смежными, а могут необязательно идти вперемежку с одним или более модифицированными нуклеозидами, при условии, что гэп-участок G способен к опосредованию рекрутинга РНКазы.

Гэпмер: участки флангов, F и F'

Участок F непосредственно прилегает к 5' нуклеозиду ДНК участка G. Крайний 3' нуклеозид участка F представляет собой нуклеозид с модифицированным сахаром, например, нуклеозид с модифицированным сахаром, обладающий высокой аффинностью, например, 2'-замещенный нуклеозид, например, нуклеозид МОЕ или нуклеозид ЗНК.

Участок F' непосредственно прилегает к 3' нуклеозиду ДНК участка G. Крайний 5' нуклеозид участка F представляет собой нуклеозид с модифицированным сахаром, например, нуклеозид с модифицированным сахаром, обладающий высокой аффинностью, например 2'-замещенный нуклеозид, например, нуклеозид МОЕ или нуклеозид ЗНК.

Участок F составляет от 1 до 8 смежных нуклеотидов в длину, например, от 2 до 6, например, от 3 до 4 смежных нуклеотидов в длину. Преимущественно, крайний 5' нуклеозид участка F представляет собой нуклеозид с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах осуществления изобретения два крайних 5' нуклеозида участка F представляют собой нуклеозид с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах осуществления изобретения крайний 5' нуклеозид участка F представляет собой нуклеозид ЗНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения два крайних 5' нуклеозида участка F представляют собой нуклеозиды ЗНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения два крайних 5' нуклеозида участка F представляют собой 2'-замещенные нуклеозиды, например два нуклеозида 3'-МОЕ. В некоторых вариантах осуществления изобретения крайний 5' нуклеозид участка F представляет собой 2'-замещенный нуклеозид, например нуклеозид МОЕ.

Участок F' составляет от 2 до 8 смежных нуклеотидов в длину, например, от 3 до 6, например, от 4 до 5 смежных нуклеотидов в длину. Преимущественно, в вариантах осуществления крайний 3' нуклеозид участка F' представляет собой нуклеозид с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах осуществления изобретения два крайних 3' нуклеозида участка F' представляют собой нуклеозид с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах осуществления изобретения два крайних 3' нуклеозида участка F' представляют собой нуклеозиды ЗНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения крайний 3' нуклеозид участка F' представляет собой нуклеозид ЗНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения два крайних 3' нуклеозида участка F' представляют собой 2'-замещенные нуклеозиды, например два нуклеозида 3' МОЕ. В некоторых вариантах осуществления изобретения крайний 3' нуклеозид участка F' представляет собой 2'-замещенный нуклеозид, например, нуклеозид МОЕ.

Необходимо отметить, что, когда длина участка F или F' равна единице, это преимущественно нуклеозид ЗНК.

В некоторых вариантах осуществления изобретения участок F и участок F' независимо состоят из или содержат непрерывную последовательность нуклеозидов с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах осуществления изобретения нуклеозиды с модифицированным сахаром участка F могут быть независимо выбраны из звеньев 2'-O-алкил-РНК, 2'-O-метил-РНК, звеньев 2'-амино-ДНК, звеньев 2'-фтор-ДНК, 2'-алкокси-РНК, звеньев МОЕ, звеньев ЗНК, звеньев арабинонуклеиновой кислоты (АНК) и звеньев 2'-фтор-АНК.

В некоторых вариантах осуществления изобретения участки F и F' независимо содержат как нуклеозиды ЗНК, так и модифицированные 2'-замещенные нуклеозиды (структура со смешанными крыльями).

В некоторых вариантах осуществления изобретения участки F и F' состоят только из одного типа нуклеозидов с модифицированным сахаром, например только МОЕ, или только бета-D-окси-ЗНК, или только ScET. Такие структуры также называют структурой с однотипными флангами или однотипного гэпмера.

В некоторых вариантах осуществления изобретения все нуклеозиды участка F или участка F' или участка F и участка F' представляют собой нуклеозиды ЗНК, например независимо выбранные из нуклеозидов бета-D-окси-ЗНК, ENA или ScET. В некоторых вариантах осуществления изобретения участок F состоит из 1-5, например 2-4, например 3-4, например 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеозидов ЗНК подряд. В некоторых вариантах осуществления изобретения все нуклеозиды участка F и участка F' представляют собой нуклеозиды бета-D-окси-ЗНК.

В некоторых вариантах осуществления изобретения все нуклеозиды участка F или участка F' или участка F и участка F' представляют собой 2' модифицированные нуклеозиды, например, нуклеозиды ОМе или МОЕ. В некоторых вариантах осуществления изобретения участок F состоит из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 смежных нуклеозидов ОМе или МОЕ. В некоторых вариантах осуществления изобретения участки флангов могут состоять из 2'-замещенных нуклеозидов, например, нуклеозидов ОМе или МОЕ. В некоторых вариантах осуществления изобретения 5'-фланкирующий участок (F) состоит из 2'-замещенных нуклеозидов, например нуклеозидов ОМе или МОЕ, тогда как 3'-фланкирующий участок (F') содержит по меньшей мере один нуклеозид ЗНК, например нуклеозиды бета-D-окси-ЗНК или нуклеозиды сЕТ. В некоторых вариантах осуществления изобретения 3'-фланкирующий участок (F') состоит из 2'-замещенных нуклеозидов, например, нуклеозидов ОМе или МОЕ, тогда как 5'-фланкирующий участок (F) содержит по меньшей мере один нуклеозид ЗНК, например нуклеозиды бета-d-окси-ЗНК или нуклеозиды сЕТ.

В некоторых вариантах осуществления изобретения все модифицированные нуклеозиды участка F и участка F' представляют собой нуклеозиды ЗНК, например, независимо выбранные из нуклеозидов бета-D- окси-ЗНК, ENA или ScET, причем участок F или участок F' или участок F и участок F' могут необязательно содержать нуклеозиды ДНК (фланг с чередованием, см. определение для более подробного описания). В некоторых вариантах осуществления изобретения все модифицированные нуклеозиды участков F и F' представляют собой нуклеозиды бета-В-окси-ЗНК, причем участок F или участок F' или участок F и участок F' могут необязательно содержать нуклеозиды ДНК (фланг с чередованием, см. определение для более подробного описания).

В некоторых вариантах осуществления изобретения крайний 5' и крайний 3' нуклеозиды участка F и участка F' представляют собой нуклеозиды ЗНК, например, нуклеозиды бета-D-окси-ЗНК или ScET.

В некоторых вариантах осуществления изобретения межнуклеозидная связь между участком F и участком G представляет собой фосфоротиоатную межнуклеозидную связь. В некоторых вариантах осуществления изобретения межнуклеозидная связь между участком F' и участком G представляет собой фосфоротиоатную межнуклеозидную связь. В некоторых вариантах осуществления изобретения межнуклеозидные связи между нуклеозидами участка F или участка F', участка F и участка F' представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

ЗНК-гэпмер

ЗНК-гэпмер представляет собой гэпмер, один или оба участка F и участка F' которого содержат или состоят из нуклеозидов ЗНК. Бета-D-Окси-гэпмер представляет собой гэпмер, один или оба участка F и участка F' которого содержат или состоят из нуклеозидов бета-D-окси-ЗНК.

В некоторых вариантах осуществления изобретения ЗНК-гэпмер имеет формулу: [ЗНК]_1-5-[участок G]-[ЗНК]_1-5, где участок G является таким, как указано в определении гэпмера участка G.

В одном варианте осуществления изобретения ЗНК-гэпмер имеет формулу: [ЗНК]₄-[участок G]_10-12-[ЗНК]₄.

МОЕ-гэпмеры

МОЕ-гэпмеры представляют собой гэпмер, в котором участок F и участок F' состоят из нуклеозидов МОЕ. В некоторых вариантах осуществления изобретения МОЕ-гэпмер имеет структуру [МОЕ]_1-8-[Участок G]_5-16-[MOE]_1-8, например [МОЕ]_2-7-[Участок G]_6-14-[MOE]_2-7, например [МОЕ]_3-6-[Участок G]_8-12-[МОЕ]_3-6, где участок G является таким, как указано в определении гэпмера. МОЕ-гэпмеры со структурой 5-10-5 (МОЕ-ДНК-МОЕ) широко используются в данной области техники.

Гэпмеры со смешанными крыльями

Гэпмер со смешанными крыльями представляет собой ЗНК-гэпмер, в котором один или оба участка F и F' содержат 2'-замещенный нуклеозид, например 2'-замещенный нуклеозид, независимо выбранный из группы, состоящей из звеньев 2'-O-алкил-РНК, 2'-O-метил-РНК, звеньев 2'-амино-ДНК, звеньев 2'-фтор-ДНК, 2'-алкокси-РНК, звеньев МОЕ, звеньев арабинонуклеиновой кислоты (АНК) и звеньев 2'-фтор-АНК, например, нуклеозиды МОЕ. В некоторых вариантах осуществления изобретения, в которых по меньшей мере один из участка F и участка F' или оба участка F и F' содержат по меньшей мере один нуклеозид ЗНК, оставшиеся нуклеозиды участка F и участка F' независимо выбраны из группы, состоящей из МОЕ и ЗНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения, в которых по меньшей мере один из участка F и участка F' или оба участка F и F' содержат по меньшей мере два нуклеозида ЗНК, оставшиеся нуклеозиды участков F и F' независимо выбраны из группы, состоящей из МОЕ и ЗНК. В некоторых вариантах осуществления со смешанными крыльями один или оба участка F и F' могут дополнительно содержать один или более нуклеозидов ДНК.

Структуры со смешанными крыльями описаны в WO 2008/049085 и WO 2012/109395, обе из которых включены в данный документ посредством ссылки.

Гэпмеры с чередованием на флангах

Фланкирующие участки могут содержать как ЗНК, так и ДНК-нуклеозид, и их называют «чередующимися флангами», поскольку они содержат чередующийся мотив нуклеозидов ЗНК-ДНК-ЗНК. Гэпмеры, содержащие такие чередующиеся фланги, называются «гэпмерами с чередованием на флангах». «Гэпмеры с чередованием на флангах» представляют собой ЗНК-гэпмерные олигонуклеотиды, в которых по меньшей мере один из флангов (F или F') содержит ДНК в дополнение к ЗНК нуклеозиду(ам). В некоторых вариантах осуществления изобретения по меньшей мере один из участка F или участка F' или оба участка F и F' содержат как нуклеозиды ЗНК, так и нуклеозиды ДНК. В таких вариантах осуществления изобретения фланкирующий участок F или участок F' или оба F и F' содержат по меньшей мере три нуклеозида, причем крайние 5' и 3' нуклеозиды участков F и/или F' представляют собой нуклеозиды ЗНК.

ЗНК гэпмеры с чередованием на флангах раскрыты в WO 2016/127002.

Чередующийся участок фланг может содержать до 3 нуклеозидов ДНК подряд, например, от 1 до 2 или 1, или 2 или 3 нуклеозидов ДНК подряд.

Чередующийся фланг может быть обозначен в виде ряда целых чисел, представляющих ряд нуклеозидов ЗНК (L), за которыми следует ряд нуклеозидов ДНК (D), например

[L]_1-3-[D]_1-4-[L]_1-3

[L]_1-2-[D]_1-2-[L]_1-2-[D]_1-2-[L]_1-2

В конструкциях олигонуклеотидов они часто будут представлены в виде чисел, таких как 2-2-1 обозначающих 5' [L]₂-[D]₂-[L] 3', и 1-1-1-1-1 обозначающий 5' [L]-[D]-[L]-[D]-[L] 3'. Длина фланга (участка F и участка F') в олигонуклеотидах с чередованием на флангах может независимо составлять от 3 до 10 нуклеозидов, например, от 4 до 8, например, от 5 до 6 нуклеозидов, например, 4, 5, 6 или 7 модифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления только один из флангов гэпмерного олигонуклеотида является чередующимся, в то время как другой состоит из нуклеотидов ЗНК. Может быть предпочтительным наличие по меньшей мере двух нуклеозидов ЗНК на 3'-конце 3'-фланга (F'), для придания дополнительной устойчивости к экзонуклеазам. В одном варианте осуществления фланги в гэпмерах с чередованием на флангах имеют общую длину от 5 до 8 нуклеозидов, из которых от 3 до 5 являются нуклеозидами ЗНК. Некоторые примеры олигонуклеотидов с чередующимися флангами:

[L]_1-5-[D]_1-4-[L]_1-3-[G]_5-16-[L]_2-6

[L]_1-2-[D]_2-3-[L]_3-4--[G]_5-7-[L]_1-2-[D]_2-3-[L]_2-3

[L]_1-2-[D]_1-2-[L]_1-2-[D]_1-2-[L]_1-2-[G]_5-16-[L]_1-2-[D]_1-3-[L]_2-4

[L]_1-5-[G]_5-16-[L]-[D]-[L]-[D]-[L]₂

[L]₄-[G]_6-10-[L]-[D]₃-[L]₂,

при условии, что общая длина гэпмерных участков составляет по меньшей мере 12, например по меньшей мере 14 нуклеотидов в длину.

Участок D' или участок D'' в олигонуклеотиде

Олигонуклеотид по изобретению может в некоторых вариантах осуществления изобретения содержать или состоять из непрерывной нуклеотидной последовательности олигонуклеотида, которая комплементарна целевой нуклеиновой кислоте, например гэпмера F-G-F', и дополнительно 5'-и/или 3'-нуклеозидам. Дополнительные 5'- и/или 3'-нуклеозиды могут быть или не быть полностью комплементарными целевой нуклеиновой кислоте. Такие дополнительные 5'- и/или 3'-нуклеозиды могут называться в данном документе участком D' и участком D''.

Добавление участка D' или участка D'' можно использовать с целью присоединения непрерывной нуклеотидной последовательности, например гэпмера, к фрагменту конъюгата или другой функциональной группе. При использовании фрагмента конъюгата для соединения непрерывной нуклеотидной последовательности, он может служить в качестве биорасщепляемого линкера. Как альтернативный вариант, его можно использовать для обеспечения экзонуклеазной защиты или для упрощения синтеза или производства.

Участок D' и участок D'' могут быть присоединены к 5'-концу участка F или 3'-концу участка F', соответственно, для получения структур следующих формул: D'-F-G-F', F-G-F'-D'' или D'-F-G-F'-D''. В этом случае F-G-F' представляет собой участок гэпмера олигонуклеотида, а участок D' или участок D'' составляет отдельную часть олигонуклеотида.

Участок D' или участок D'' может независимо содержать или состоять из 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных нуклеотидов, которые могут быть комплементарны или некомплементарны целевой нуклеиновой кислоте. Нуклеотиды, прилегающие к участку F или участку F', не представляют собой нуклеотид с модифицированным сахаром, например ДНК или РНК или их варианты с модифицированным основанием. Участок D' или участок D'' может служить как биорасщепляемый линкер, подверженный действию нуклеазы (см. определение линкеров). В некоторых вариантах осуществления изобретения дополнительные нуклеотиды на 5'- и/или 3'-конце связаны фосфодиэфирными связями и представляют собой ДНК или РНК. Биорасщепляемые линкеры на основе нуклеотидов, пригодные для использования в качестве участка D' или участка D'', описаны в WO 2014/076195, в которую посредством примера включен динуклеотид ДНК, связанный фосфодиэфирной связью. Применение биорасщепляемых линкеров в полиолигонуклеотидных конструкциях раскрыто в WO 2015/113922, в которой они используются для связывания нескольких антисмысловых конструкций (например, участки гэпмера) в один олигонуклеотид.

В одном варианте осуществления изобретения олигонуклеотид по изобретению содержит участок D' и/или участок D'' в дополнение к непрерывной нуклеотидной последовательности, которая составляет гэпмер.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид по данному изобретению может быть представлен следующими формулами:

F-G-F'; в частности F_2-8-G_6-16-F'_2-8

D'-F-G-F', в частности D'_2-3-F_1-8-G_6-16-F'_2-8

F-G-F'-D'', в частности F_2-8-G_6-16-F'_2-8-D''_1-3

D'-F-G-F'-D'', в частности D'_1-3-F_2-8-G_6-16-F'_2-8-D''_1-3

В некоторых вариантах осуществления изобретения межнуклеозидная связь, расположенная между участком D' и участком F, представляет собой фосфодиэфирную связь. В некоторых вариантах осуществления изобретения межнуклеозидная связь, расположенная между участком F' и участком D'', представляет собой фосфодиэфирную связь.

Конъюгат

Термин конъюгат, при использовании в данном документе, относится к олигонуклеотиду, который ковалентно связан с ненуклеотидным фрагментом (фрагментом конъюгата, или участком С, или третьим участком).

Конъюгация олигонуклеотида по изобретению с одним или более ненуклеотидными фрагментами может улучшать фармакологию олигонуклеотида, например, путем влияния на активность, распределение в клетках, поглощение клеткой или стабильность олигонуклеотида. В некоторых вариантах осуществления изобретения фрагмент конъюгата модифицирует или улучшает фармакокинетические свойства олигонуклеотида путем улучшения клеточного распределения, биодоступности, метаболизма, выведения, проницаемости и/или поглощения клеткой олигонуклеотида. В частности, конъюгат может направлять олигонуклеотид на конкретный орган, ткань или тип клеток и таким образом усиливать эффективность олигонуклеотида в этом органе, ткани или типе клеток. В то же время конъюгат может служить для снижения активности олигонуклеотида в нецелевых типах клеток, тканях или органах, например нецелевой активности или активности в нецелевых типах клеток, тканях или органах.

Конъюгаты олигонуклеотидов и их синтез также был описан в обширных обзорах Manoharan in Antisense Drug Technology, Principles, Strategies, and Applications, S.T. Crooke, ed., Ch. 16, Marcel Dekker, Inc., 2001, and Manoharan, Antisense and Nucleic Acid Drug Development, 2002, 12, 103, каждый из которых включен в данный документ в полном объеме посредством ссылки.

В варианте осуществления изобретения ненуклеотидный фрагмент (фрагмент конъюгата) выбран из группы, состоящей из углеводов (например, N-ацетилглюкозамин (GalNAc)), лигандов рецепторов клеточной поверхности, лекарственных веществ, гормонов, липофильных веществ, полимеров, белков, пептидов, токсинов (например, бактериальных токсинов), витаминов, вирусных белков (например, капсидов) или их комбинаций.

В некоторых вариантах осуществления изобретения конъюгат представляет собой антитело или фрагмент антитела, который обладает специфичной аффинностью к рецептору трансферрина, например, как описано в WO 2012/143379, включенной в данный документ посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления изобретения ненуклеотидный фрагмент представляет собой антитело или фрагмент антитела, например, антитело или фрагмент антитела, которые облегчают доставку через гематоэнцефалический барьер, в частности, антитело или фрагмент антитела, нацеленные на рецептор трансферрина.

Линкеры

Связь или линкер представляет собой соединение между двумя атомами, которое связывает одну химическую группу или сегмент, представляющие интерес, с другой химической группой или сегментом, представляющими интерес, посредством одной или более ковалентных связей. Фрагменты конъюгата могут быть присоединены к олигонуклеотиду непосредственно или через связывающий фрагмент (например, линкер или соединяющий фрагмент). Линкеры служат для ковалентного присоединения третьего участка, например фрагмента конъюгата (участка С), к первому участку, например олигонуклеотиду, или непрерывной нуклеотидной последовательности комплементарной к целевой нуклеиновой кислоте (участок А).

В некоторых вариантах осуществления изобретения конъюгат или конъюгат олигонуклеотида по изобретению может необязательно содержать линкерный участок (второй участок, или участок В, и/или участок Y), который расположен между олигонуклеотидом или непрерывной нуклеотидной последовательностью, комплементарной целевой нуклеиновой кислоте (участок А или первый участок), и фрагментом конъюгата (участок С или третий участок).

Участок В относится к биорасщепляемым линкерам, содержащим или состоящим из физиологически лабильной связи, которая расщепляется в условиях, обычно встречающихся или аналогичных встречающимся в организме млекопитающего. Условия, при которых физиологически лабильные линкеры, подвергаются химической трансформации (например, расщеплению), включают такие химические условия, как рН, температура, окислительные или восстановительные условия, или агенты и концентрация солей, обнаруживаемые или аналогичные встречающимся в клетках млекопитающего. Условия внутри клеток млекопитающего также включают наличие ферментативной активности, как правило, присутствующей в клетке млекопитающего, например, от протеолитических ферментов, или гидролитических ферментов, или нуклеаз. В одном варианте осуществления изобретения биорасщепляемый линкер подвержен расщеплению нуклеазой S1. В предпочтительном варианте осуществления чувствительный к нуклеазе линкер содержит от 1 до 10 нуклеозидов, таких, как 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеозидов, более предпочтительно, от 2 до 6 нуклеозидов и, наиболее предпочтительно, от 2 до 4 связанных нуклеозидов, содержащих по меньшей мере две последовательные фосфодиэфирные связи, такие как, по меньшей мере 3, 4 или 5 последовательные фосфодиэфирные связи. Предпочтительно, нуклеозиды являются ДНК или РНК. Биорасщепляемые линкеры, содержащие фосфодиэфир, описаны более подробно в WO 2014/076195 (включенной в данный документ посредством ссылки).

Участок Y относится к линкерам, которые не обязательно являются биорасщепляемыми, но служат главным образом для ковалетного связывания фрагмента конъюгата (участка С или третьего участка) с олигонуклеотидом (участком А или первым участком). Линкеры участка Y могут содержать цепочную структуру или олигомер из повторяющихся единиц, таких как этиленгликоль, аминокислотные единицы или аминоалкильные группы. Конъюгаты олигонуклеотида по данному изобретению могут быть составлены из следующих элементов участков А-С, А-В-С, A-B-Y-C, A-Y-B-C или A-Y. В некоторых вариантах осуществления линкер (участок Y) представляет собой аминоалкил, например С2-С36 аминоалкильную группу, в том числе, например С6-С12 аминоалкильные группы. В предпочтительном варианте осуществления изобретения линкер (участок Y) представляет собой С6 аминоалкильную группу.

Лечение

Термин «лечение», при использовании в данном документе, относится как к лечению существующего заболевания (например, заболевания или расстройства, указанного в данном документе), так и к предупреждению заболевания, т.е. профилактике. Следовательно, понятно, что лечение, как указано в данном документе, может в некоторых вариантах осуществления изобретения быть профилактическим.

В некоторых вариантах осуществления изобретения лечение проводится пациенту, у которого диагностировано неврологическое расстройство, такое как неврологическое расстройство выбранное из группы, состоящей из нейродегенеративных заболеваний, включая таупатии, болезнь Альцгеймера (AD), прогрессирующий надъядерный паралич (PSP), кортикобазальную ганглиозную дегенерацию (CBD), хроническую травматическую энцефалопатию (СТЕ), фронтальную временную деменцию (FTD) и FTD с паркинсонизмом, ассоциированным с хромосомой 17 (FTDP-17), болезнь Пика (PiD), болезнь аргирофильной зернистости (AGD), старческое слабоумие с преобладанием бляшек (TPSD), первичную возрастную таупатию (PART), синдром Дауна и литико-бодиговскую болезнь. Повышенная экспрессия патологического тау-белка связана с младенческими таупатиями, включая гемимегаленцефалию (НМЕ); комплексом туберозного склероза; очаговой корковой дисплазией 26 типа; и ганглиоглиомой. Кроме того, аномальная экспрессия и/или функционирование тау-белка также может быть связано с другими заболеваниями, такими как синдром Халлервордена-Шпатца, также известного как нейродегенерация с накоплением железа в мозге 1 типа (NBIA1), ганглиоцитомы и подострый склерозирующий панэнцефалит. Тау-белок также может играть роль в судорожных расстройствах (например, эпилепсии), сетевой дисфункции (например, депрессии) и двигательных расстройствах (например, болезни Паркинсона).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Олигонуклеотиды по изобретению

Изобретение относится к олигонуклеотидам, способным модулировать экспрессию тау-белка, например, ингибировать (подавлять) тау-белок. Модуляция осуществляется путем гибридизации с целевой нуклеиновой кислотой, кодирующей тау-белок. Целевая нуклеиновая кислота может представлять собой последовательность МАРТ мРНК млекопитающего, например последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и 2.

Олигонуклеотид по изобретению представляет собой антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на МАРТ, который приводит к снижению экспрессии тау-белка.

В некоторых вариантах осуществления изобретения антисмысловой олигонуклеотид по изобретению способен модулировать экспрессию мишени путем ее ингибирования или подавления. Предпочтительно, такая модуляция дает ингибирование экспрессии по меньшей мере на 20% по сравнению с нормальным уровнем экспрессии мишени, более предпочтительно, ингибирование по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90% по сравнению с нормальным уровнем экспрессии мишени. В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотиды по данному изобретению могут быть способны ингибировать уровни экспрессии мРНК тау-белка in vitro по меньшей мере на 60% или 70% после введения 5 мкМ олигонуклеотида в первичные клетки нейронов. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединения по данному изобретению могут быть способны ингибировать уровни экспрессии тау-белка in vitro по меньшей мере на 50% после введения 0,5 мкМ олигонуклеотида в первичные клетки нейронов. Соответственно, в примерах представлены анализы, которые можно использовать для измерения ингибирования РНК или тау-белка (например, Пример 1 и 3). Целевая модуляция запускается гибридизацией между непрерывной нуклеотидной последовательностью олигонуклеотида и целевой нуклеиновой кислотой. В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид по изобретению содержит несовпадения между олигонуклеотидом и целевой нуклеиновой кислотой. Несмотря на несовпадения гибридизация с целевой нуклеиновой кислотой может все равно быть эффективной для получения желаемой модуляции экспрессии тау-белка. Уменьшение аффинности связывания, возникающее в результате несовпадений, может быть преимущественно скомпенсировано увеличением числа нуклеотидов в олигонуклеотиде и/или увеличением числа модифицированных нуклеозидов, способных повышать аффинность связывания с мишенью, например нуклеозидов, модифицированных по 2'-сахару, в том числе ЗНК, присутствующих в олигонуклеотидной последовательности.

Аспект данного изобретения относится к антисмысловому нуклеотиду, который содержит непрерывную нуклеотидную последовательность длиной по меньшей мере 10 нуклеотидов, по меньшей мере на 90% комплементарную к SEQ ID NO: 3, 4 или 5.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид содержит непрерывную последовательность длиной от 10 до 30 нуклеотидов, которая по меньшей мере на 90% комплементарна, например, по меньшей мере на 91%, например, по меньшей мере на 92%, например, по меньшей мере на 93%, например, по меньшей мере на 94%, например, по меньшей мере на 95%, например, по меньшей мере на 96%, например, по меньшей мере на 97%, например, по меньшей мере на 98% или 100% комплементарна к участку целевой нуклеиновой кислоты или целевой последовательности.

Предпочтительно, олигонуклеотид по изобретению или его непрерывная нуклеотидная последовательность полностью комплементарны (на 100% комплементарны) к участку целевой нуклеиновой кислоты или, в некоторых вариантах осуществления изобретения, могут содержать один или два несовпадения между олигонуклеотидом и целевой нуклеиновой кислотой.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид содержит непрерывную нуклеотидную последовательность длиной от 10 до 30 нуклеотидов, по меньшей мере на 90% комплементарну, например полностью (или 100%) комплементарну к смежным нуклеотидам в положениях от 12051 до 12111, от 39562 до 39593 или от 72837 до 72940 в SEQ ID NO: 1.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотидная последовательность на 100% комплементарна к соответствующему участку целевой нуклеиновой кислоты, присутствующему в SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2.

Предпочтительно, если антисмысловой олигонуклеотид комплементарен к целевой последовательности, выбранной из одного из участков, перечисленных в Таблице 4. В некоторых вариантах реализации непрерывная нуклеотидная последовательность антисмыслового олигонуклеотида является по меньшей мере на 90% комплементарной, например, полностью комплементарной к выбранной целевой последовательности R1-R2254 (Таблица 4). В некоторых вариантах реализации олигонуклеотидная последовательность на 100% комплементарна к R_223, R_738 или R_1298 (см. Таблицу 4).

В некоторых вариантах реализации олигонуклеотидная или смежная нуклеотидная последовательность на 90% комплементарна, например, полностью комплементарна, к участку целевой нуклеиновой кислоты, при этом участок целевой нуклеиновой кислоты выбран из группы, состоящей из положений от 12051 до 12111 SEQ ID NO: 1, например, положений от 12051 до 12079, положений от 12085 до 12111 или положений от 12060 до 12078 SEQ ID NO: 1.

В другом варианте осуществления олигонуклеотидная или непрерывная нуклеотидная последовательность на 90% комплементарна, например, полностью комплементарна, к участку целевой нуклеиновой кислоты, при этом участок целевой нуклеиновой кислоты выбран из группы, состоящей из положений от 39562 до 39593 SEQ ID NO: 1, например, положение от 39573 до 39592 SEQ ID NO: 1.

В другом варианте осуществления олигонуклеотидная или смежная нуклеотидная последовательность на 90% комплементарна, например, полностью комплементарна, к участку целевой нуклеиновой кислоты, при этом участок целевой нуклеиновой кислоты выбран из группы, состоящей из положений от 72837 до 72940 SEQ ID NO: 1, например, положение от 72861 до 72891 или положение от 72862 до 72890 SEQ ID NO: 1.

В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит непрерывную нуклеотидную последовательность длиной от 16 до 22 нуклеотидов, например, от 16 до 20 нуклеотидов, с 100% комплементарностью к смежным нуклеотидам в пределах положения от 12060 до 12078, или от 39573 до 39592, или от 72862 до 72890 SEQ ID NO: 1.

В некоторых вариантах осуществления изобретения непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 10 до 35 нуклеотидов в длину, например, от 10 до 30, например, от 11 до 25, например, от 12 до 22, например, от 14 до 20 или от 14 до 18 смежных нуклеотидов в длину. В одном варианте осуществления олигонуклеотид содержит или состоит из 16 до 22 нуклеотидов в длину. В предпочтительном варианте осуществления олигонуклеотид содержит или состоит из 16 до 20 нуклеотидов в длину.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид или его непрерывная нуклеотидная последовательность содержат или состоят из 22 или менее нуклеотидов, например, 20 или менее нуклеотидов, например, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеотидов. Понятно, что любой интервал, представленный в данном документе, включает конечные точки интервала. Следовательно, если указано, что олигонуклеотид включает от 10 до 30 нуклеотидов, включены как 10, так и 30 нуклеотидов.

В некоторых вариантах осуществления изобретения непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 смежных нуклеотидов в длину. В предпочтительном варианте осуществления олигонуклеотид содержит или состоит из 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеотидов в длину.

В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид или его непрерывная нуклеотидная последовательность содержат или состоят из последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей, перечисленных в Таблице 5 (раздел «Материалы и методы»).

В некоторых вариантах реализации антисмысловая олигонуклеотидная или непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 10 до 30 нуклеотидов с идентичностью по меньшей мере 90%, предпочтительно, с 100% идентичностью, к последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: от 6 до 65 (см. последовательности мотивов, перечисленные в Таблице 5).

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид по изобретению или его непрерывная олигонуклеотидная последовательность содержат или состоят из по меньшей мере 10 до 30 нуклеотидов в длину, которые по меньшей мере на 90% идентичны, предпочтительно, на 100% идентичны, к последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 9, 11, 49, 53, 56 и 62 (см. последовательности мотивов, перечисленные в Таблице 5).

В некоторых вариантах осуществления антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная олигонуклеотидная последовательность содержат или состоят из 10 до 30 нуклеотидов в длину с идентичностью по меньшей мере 90%, предпочтительно, с 100% идентичностью, к последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: от 6 до 37 (см. перечисленные последовательности мотивов в Таблице 5).

В некоторых вариантах осуществления антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная олигонуклеотидная последовательность содержит или состоит из 10 до 30 нуклеотидов в длину с идентичностью по меньшей мере 90%, предпочтительно, с 100% идентичностью, к последовательности SEQ ID NO: 9 или 11 (см. перечисленные последовательности мотивов в Таблице 5).

В некоторых вариантах осуществления антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная олигонуклеотидная последовательность содержит или состоит из 10 до 30 нуклеотидов в длину с идентичностью по меньшей мере 90%, предпочтительно, с 100% идентичностью, к последовательности, выбранной из группы SEQ ID NO: от 38 до 51 (см. перечисленные последовательности мотивов в Таблице 5).

В некоторых вариантах осуществления антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная олигонуклеотидная последовательность содержит или состоит из 10 до 30 нуклеотидов в длину с идентичностью по меньшей мере 90%, предпочтительно, с 100% идентичностью, к последовательности SEQ ID NO: 49 или 51 (см. перечисленные последовательности мотивов в Таблице 5).

В некоторых вариантах осуществления антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная олигонуклеотидная последовательность содержит или состоит из 10 до 30 нуклеотидов в длину с идентичностью по меньшей мере 90%, предпочтительно, с 100% идентичностью, к последовательности, выбранной из группы SEQ ID NO: от 52 до 65 (см. перечисленные последовательности мотивов в Таблице 5).

В некоторых вариантах осуществления антисмысловой олигонуклеотид или непрерывная олигонуклеотидная последовательность содержит или состоит из 10 до 30 нуклеотидов в длину с идентичностью по меньшей мере 90%, предпочтительно, с 100% идентичностью, к последовательности SEQ ID NO: 56 или 62 (см. перечисленные последовательности мотивов в Таблице 5).

Понятно, что непрерывные последовательности нуклеотидных оснований (последовательность мотива) может быть модифицирована, например, для увеличения устойчивости к нуклеазе и/или аффинности связывания с целевой нуклеиновой кислотой.

Способ, с помощью которого модифицированные нуклеозиды (например, модифицированные нуклеозиды с высокой аффинностью) включают в олигонуклеотидную последовательность, как правило, называют конструированием олигонуклеотида.

Олигонуклеотиды по изобретению конструируют с модифицированными нуклеозидами и нуклеозидами ДНК. Преимущественно используют модифицированные нуклеозиды с высокой аффинностью.

В варианте осуществления изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере 1 модифицированный нуклеозид, например, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15 или по меньшей мере 16 модифицированных нуклеозидов. В варианте осуществления изобретения олигонуклеотид содержит от 1 до 10 модифицированных нуклеозидов, например, от 2 до 9 модифицированных нуклеозидов, например, от 3 до 8 модифицированных нуклеозидов, например, от 4 до 7 модифицированных нуклеозидов, например, 6 или 7 модифицированных нуклеозидов. Пригодные модификации описаны в разделе «Определения» под заголовками «модифицированный нуклеозид», «модифицированные нуклеозиды с высокой аффинностью», «модификации сахара», «модификации сахара в положении 2'» и «замкнутые нуклеиновые кислоты (ЗНК)».

В варианте осуществления изобретения олигонуклеотид содержит один или более нуклеозидов с модифицированным сахаром, например, нуклеозидов с 2'-модифицированным сахаром. Олигонуклеотид по изобретению предпочтительно содержит один или более нуклеозидов с 2'-модифицированным сахаром, независимо выбранных из группы, состоящей из нуклеозидов 2'-O-алкил-РНК, 2'-O-метил-РНК, 2'-алкокси-РНК, 2'-O-метоксиэтил-РНК, 2'-амино-ДНК, 2'-фтор-ДНК, арабинонуклеиновой кислоты (ANA), 2'-фтор-АНК и ЗНК. Предпочтительно, если один или более модифицированных нуклеозидов представляют собой замкнутую нуклеиновую кислоту (ЗНК).

В дополнительном варианте осуществления олигонуклеотид содержит по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь. Пригодные межнуклеозидные модификации описаны в разделе «Определения» под заголовком «Модифицированная межнуклеозидная связь». Предпочтительно, если по меньшей мере 75%, например, 80%, например все, межнуклеозидные связи в непрерывной нуклеотидной последовательности представляют собой фосфоротиоатные или боранофосфатные межнуклеозидные связи. В некоторых вариантах осуществления изобретения все межнуклеозидные связи в непрерывной последовательности олигонуклеотида представляют собой фосфоротиоатные связи.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид по изобретению содержит по меньшей мере один нуклеозид ЗНК, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 нуклеозидов ЗНК, например, от 2 до 6 нуклеозидов ЗНК, например, от 3 до 7 нуклеозидов ЗНК, от 4 до 8 нуклеозидов ЗНК или 3, 4, 5, 6, 7 или 8 нуклеозидов ЗНК. В некоторых вариантах осуществления изобретения по меньшей мере 75% модифицированных нуклеозидов в олигонуклеотиде представляют собой нуклеозиды ЗНК, например, 80%, например, 85%, например, 90% модифицированных нуклеозидов представляют собой нуклеозиды ЗНК, в частности, бета-D-окси-ЗНК или ScET. В дополнительном варианте осуществления изобретения все модифицированные нуклеозиды в олигонуклеотиде представляют собой нуклеозиды ЗНК. В дополнительном варианте осуществления изобретения олигонуклеотид может содержать как бета-D-окси-ЗНК, так и один или более из следующих нуклеозидов ЗНК: тио-ЗНК, амино-ЗНК, окси-ЗНК, ScET и/или ENA в любой из бета-D или альфа-L конфигурациях или их комбинации. В дополнительном варианте осуществления изобретения все цитозиновые звенья ЗНК представляют собой 5-метилцитозин. Для стабильности к нуклеазам олигонуклеотиду или непрерывной нуклеотидной последовательности предпочтительно содержать по меньшей мере 1 нуклеозид ЗНК на 5'-конце и по меньшей мере 2 нуклеозида ЗНК на 3'-конце нуклеотидной последовательности.

В варианте осуществления изобретения олигонуклеотид по изобретению способен к рекрутингу РНКазы Н.

В данном изобретения предпочтительная структурная конструкция представляет собой конструкцию гэпмера, как описано в разделе «Определения» под заголовками, например, «Гэпмер», «ЗНК-гэпмер», «МОЕ-гэпмер», «Гэпмер со смешанными крыльями» и «Гэпмер с чередованием на флангах». Конструкция гэпмера включает конструкции гэпмеров с однородными флангами, со смешанными крыльями, с чередованием на флангах и с прерванным гэп-участком. В данном изобретении предпочтительно, если олигонуклеотид по изобретению представляет собой гэпмер формулы F-G-F', в частности, гэпмер формулы 5'-F-G-F'-3', где участок F и участок F' независимо содержат от 1 до 8 нуклеозидов, из которых от 2 до 5 представляют собой нуклеозиды, модифицированные по 2'-сахару и определяют 5'- и 3'- конец участка F и участка F', a G представляет собой участок между от 6 до 16 нуклеозидов, которые способны к рекрутингу РНКазы Н, например участок, содержащий от 6 до 16 нуклеозидов ДНК.

В некоторых вариантах осуществления гэпмер представляет собой ЗНК гэпмер.

В некоторых вариантах осуществления ЗНК гэпмер выбирается из следующих конструкций однородных флангов 4-10-4, 3-11-4, 4-11-4, 4-12-4 или 4-14-2.

В некоторых вариантах осуществления ЗНК гэпмер выбирается из следующих конструкций с чередованием на флангах 3-1-3-10-2, 1-3-4-6-1-3-2, 1-2-1-2-2-8-4 или 3-3-1-8-2-1-2.

В Таблице 5 (раздел «Материалы и методы») перечислены предпочтительные конструкции каждой последовательности мотивов.

Во всех случаях формула F-G-F' может дополнительно включать участок D' и/или участок D'', как описано в разделе «Определения» в пункте «Участок D' или участок D'' в олигонуклеотиде». В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид по данному изобретению имеет 1, 2 или 3 фосфодиэфирных нуклеозидных звена, таких как звенья ДНК, на 5'- или 3'- конце гэпмерного участка.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид выбран из группы олигонуклеотидных соединений с CMP-ID-NO: 6_1; 7_1; 8_1; 9_1; 9_2; 9_3; 9_4; 9_5; 9_6; 9_7; 9_8; 9_9; 9_10; 9_11; 9_12; 9_13; 9_14; 9_15; 9_16; 9_17; 9_18; 9_19; 9_20; 9_21; 9_22; 9_23; 9_24; 9_25; 9_26; 9_27; 9_28; 9_29; 9_30; 9_31; 9_32; 9_33; 9_34; 9_35; 9_36; 9_37; 9_38; 9_39; 9_40; 9_41; 9_42; 9_43; 9_44; 9_45; 9_46; 9_47; 9_48; 9_49; 9_50; 9_51; 9_52; 9_53; 9_54; 9_55; 9_56; 9_57; 9_58; 9_59; 9_60; 961; 9_62; 9_63; 9_64; 9_65; 9_66; 9_67; 9_68; 9_69; 9_70; 971; 9_72; 9_73; 9_74; 9_75; 9_76; 9_77; 9_78; 9_79; 9_80; 9_81; 9_82; 9_83; 9_84; 9_85; 9_86; 9_87; 9_88; 9_89; 9_90; 9_91; 9_92; 9_93; 9_94; 9_95; 9_96; 9_97; 9_98; 9_99; 9_100; 9_101; 9_102; 9_103; 9_104; 9_105; 9_106; 10_1; 10_2; 10_3; 10_4; 10_5; 10_6; 10_7; 10_8; 10_9; 10_10; 10_11; 10_12; 10_13; 10_14; 10_15; 10_16; 10_17; 10_18; 10_19; 10_20; 10_21; 10_22; 10_23; 10_24; 10_25; 10_26; 10_27; 10_28; 10_29; 10_30; 10_31; 10_32; 10_33; 10_34; 10_35; 10_36; 10_37; 10_38; 10_39; 10_40; 10_41; 10_42; 10_43; 10_44; 10_45; 10_46; 10_47; 10_48; 10_49; 10_50; 10_51; 10_52; 10_53; 10_54; 10_55; 10_56; 10_57; 10_58; 10_59; 10_60; 10_61; 10_62; 10_63; 10_64; 10_65; 10_66; 10_67; 10_68; 10_69; 10_70; 10_71; 10_72; 10_73; 10_74; 10_75; 10_76; 10_77; 10_78; 10_79; 10_80; 10_81; 10_82; 10_83; 10_84; 10_85; 10_86; 10_87; 10_88; 10_89; 11_1; 12_1; 13_1; 14_1; 15_1; 16_1; 17_1; 18_1; 19_1; 20_1; 21_1; 22_1; 23_1; 24_1; 24_2; 24_3; 24_4; 24_5; 24_6; 24_7; 24_8; 24_9; 24_10; 24_11; 24_12; 24_13; 24_14; 24_15; 24_16; 24_17; 24_18; 24_19; 24_20; 24_21; 24_22; 24_23; 24_24; 24_25; 24_26; 24_27; 24_28; 24_29; 24_30; 24_31; 24_32; 24_33; 24_34; 24_35; 24_36; 24_37; 24_38; 24_39; 24_40; 24_41; 24_42; 24_43; 24_44; 24_45; 24_46; 24_47; 24_48; 24_49; 24_50; 24_51; 24_52; 24_53; 24_54; 24_55; 24_56; 24_57; 24_58; 24_59; 24_60; 24_61; 24_62; 25_1; 25_2; 25_3; 25_4; 25_5; 25_6; 25_7; 25_8; 25_9; 25_10; 25_11; 25_12; 25_13; 25_14; 25_15; 25_16; 25_17; 25_18; 25_19; 25_20; 25_21; 25_22; 25_23; 25_24; 25_25; 25_26; 25_27; 25_28; 25_29; 25_30; 25_31; 25_32; 25_33; 25_34; 25_35; 25_36; 25_37; 25_38; 25_39; 25_40; 25_41; 25_42; 25_43; 26_1; 26_2; 26_3; 26_4; 26_5; 26_6; 26_7; 26_8; 26_9; 26_10; 26_11; 26_12; 26_13; 26_14; 26_15; 26_16; 26_17; 26_18; 26_19; 26_20; 26_21; 26_22; 26_23; 26_24; 26_25; 26_26; 26_27; 26_28; 26_29; 26_30; 26_31; 27_1; 28_1; 28_2; 28_3; 28_4; 28_5; 28_6; 28_7; 28_8; 28_9; 28_10; 28_11; 28_12; 28_13; 28_14; 28_15; 28_16; 28_17; 28_18; 28_19; 28_20; 28_21; 28_22; 28_23; 28_24; 28_25; 28_26; 28_27; 28_28; 28_29; 28_30; 28_31; 28_32; 28_33; 29_1; 29_2; 29_3; 29_4; 29_5; 29_6; 29_7; 29_8; 29_9; 29_10; 29_11; 29_12; 29_13; 29_14; 30_1; 30_2; 30_3; 30_4; 30_5; 30_6; 30_7; 30_8; 30_9; 30_10; 30_11; 30_12; 30_13; 30_14; 30_15; 30_16; 30_17; 30_18; 30_19; 30_20; 30_21; 30_22; 30_23; 30_24; 30_25; 31_1; 31_2; 31_3; 32_1; 32_2; 32_3; 32_4; 32_5; 32_6; 32_7; 32_8; 32_9; 32_10; 32_11; 32_12; 32_13; 32_14; 32_15; 32_16; 32_17; 32_18; 32_19; 32_20; 32_21; 32_22; 32_23; 32_24; 32_25; 32_26; 32_27; 32_28; 32_29; 32_30; 32_31; 32_32; 32_33; 32_34; 32_35; 32_36; 32_37; 32_38; 32_39; 32_40; 32_41; 32_42; 32_43; 32_44; 32_45; 32_46; 32_47; 32_48; 32_49; 32_50; 32_51; 33_1; 33_2; 33_3; 33_4; 33_5; 33_6; 33_7; 33_8; 33_9; 33_10; 33_11; 33_12; 33_13; 33_14; 33_15; 33_16; 33_17; 33_18; 33_19; 33_20; 33_21; 33_22; 33_23; 33_24; 33_25; 33_26; 33_27; 33_28; 33_29; 33_30; 33_31; 33_32; 33_33; 34_1; 35_1; 35_2; 35_3; 36_1; 37_1; 38_1; 39_1; 40_1; 41_1; 42_1; 43_1; 44_1; 45_1; 46_1; 47_1; 48_1; 49_1; 49_2; 49_3; 49_4; 49_5; 49_6; 49_7; 49_8; 49_9; 49_10; 49_11; 49_12; 49_13; 49_14; 49_15; 49_16; 49_17; 49_18; 49_19; 49_20; 49_21; 49_22; 49_23; 49_24; 49_25; 49_26; 49_27; 49_28; 49_29; 49_30; 49_31; 49_32; 49_33; 49_34; 49_35; 49_36; 49_37; 49_38; 49_39; 49_40; 49_41; 49_42; 49_43; 49_44; 49_45; 49_46; 49_47; 49_48; 49_49; 49_50; 49_51; 49_52; 49_53; 49_54; 49_55; 49_56; 49_57; 49_58; 49_59; 49_60; 49_61; 49_62; 49_63; 49_64; 49_65; 49_66; 49_67; 49_68; 49_69; 49_70; 49_71; 49_72; 49_73; 49_74; 49_75; 49_76; 49_77; 49_78; 49_79; 49_80; 49_81; 49_82; 49_83; 49_84; 49_85; 49_86; 49_87; 49_88; 49_89; 49_90; 49_91; 49_92; 49_93; 49_94; 49_95; 49_96; 49_97; 49_98; 49_99; 49_100; 49_101; 49_102; 49_103; 49_104; 49_105; 49_106; 49_107; 49_108; 49_109; 49_110; 49_111; 49_112; 49_113; 49_114; 49_115; 49_116; 49_117; 49_118; 49_119; 49_120; 49_121; 49_122; 49_123; 49_124; 49_125; 49_126; 49_127; 49_128; 49_129; 49_130; 49_131; 49_132; 49_133; 49_134; 49_135; 49_136; 49_137; 49_138; 49_139; 49_140; 49_141; 49_142; 49_143; 49_144; 49_145; 49_146; 49_147; 49_148; 49_149; 49_150; 49_151; 49_152; 49_153; 49_154; 49_155; 49_156; 49_157; 49_158; 49_159; 49_160; 49_161; 49_162; 49_163; 49_164; 49_165; 49_166; 49_167; 49_168; 49_169; 49_170; 49_171; 49_172; 49_173; 49_174; 49_175; 49_176; 49_177; 49_178; 49_179; 49_180; 49_181; 49_182; 49_183; 49_184; 49_185; 49_186; 49_187; 49_188; 49_189; 49_190; 49_191; 49_192; 50_1; 51_1; 52_1; 53_1; 54_1; 55_1; 56_1; 57_1; 58_1; 59_1; 60_1; 61_1; 62_1; 63_1; 64_1 и 65_1.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид выбран из группы олигонуклеотидных соединений с CMP-ID-NO: 9_102; 9_103; 9_104; 11_1; 49_38; 49_51; 49_179; 49_189; 53_1; 56_1 и 62_1.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид выбран из группы олигонуклеотидных соединений с CMP-ID-NO: 9_102; 9_103; 9_104 и 11_1.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид выбран из группы олигонуклеотидных соединений с CMP-ID-NO: 49_38; 49_51; 49_179 и 49_189.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид выбран из группы олигонуклеотидных соединение с CMP-ID-NO: 53_1; 56_1 и 62_1.

Особенно предпочтительный антисмысловой олигонуклеотид в контексте изобретения представляет собой олигонуклеотидное соединение, выбранное из группы, состоящей из

CTTtAATttaatcactcAT SEQ ID NO: 9; CMP ID NO: 9_102

CTTTaatttaatcacTCAT SEQ ID NO: 9; CMP ID NO: 9_103

CTTTaatttaatcaCtCAT SEQ ID NO: 9; CMP ID NO: 9_104

CTTTaatttaatcaCTCA SEQ ID NO: 11; CMP ID NO: 11_1

TtaaCTCAaatcaaTtctCA SEQ ID NO: 49; CMP ID NO: 49_38

TtaActCAaatcaattCTCA SEQ ID NO: 49; CMP ID NO: 49_51

TTAactCaaatcaatTCtCA SEQ ID NO: 49; CMP ID NO: 49_179

TTAActcaaatcaattCTCA SEQ ID NO: 49; CMP ID NO: 49_189

CAACaccttttaattcATTA SEQ ID NO: 53; CMP ID NO: 53_1

CTCAtcaacaccttttaaTT SEQ ID NO: 56; CMP ID NO: 56_1

TTAactcatcaacaCCTT SEQ ID NO: 62; CMP ID NO: 62_1,

где заглавные буквы представляют собой нуклеозиды бета-D-окси-ЗНК, строчные буквы представляют нуклеозиды ДНК, все С в ЗНК представляют собой 5-метилцитозин, все межнуклеозидные связи представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

В одном варианте осуществления антисмысловой олигонуклеотид представляет собой CMP ID NO: 9_103, как представлено на Фиг. 2.

В одном варианте осуществления антисмысловой олигонуклеотид представляет собой CMP ID NO: 9_104, как представлено на Фиг. 3.

В одном варианте осуществления антисмысловой олигонуклеотид представляет собой CMP ID NO: 11_1, как представлено на Фиг. 4.

В одном варианте осуществления антисмысловой олигонуклеотид представляет собой CMP ID NO: 49_38, как представлено на Фиг. 5.

В одном варианте осуществления антисмысловой олигонуклеотид представляет собой CMP ID NO: 49_189, как представлено на Фиг. 6.

Способы получения

В дополнительном аспекте в изобретении предложены способы получения олигонуклеотидов по изобретению, включающие приведение в контакт нуклеотидных звеньев и получение таким образом ковалентно связанных непрерывных нуклеотидных звеньев, составляющих олигонуклеотид. В способе предпочтительно задействована химия фосфорамидита (см., например, Caruthers et al., 1987, Methods in Enzymology Vol. 154, pp. 287-313). В дополнительном варианте осуществления изобретения способ дополнительно включает приведение непрерывной нуклеотидной последовательности в контакт с конъюгирующим фрагментом (лигандом) для ковалентного присоединения фрагмента конъюгата к олигонуклеотиду. В дополнительном аспекте изобретения предложен способ получения композиции по изобретению, включающий смешивание олигонуклеотида или конъюгированного олигонуклеотида по изобретению с фармацевтически приемлемым разбавителем, растворителем, носителем, солью и/или вспомогательным веществом.

Фармацевтическая соль

Соединения по данному изобретению могут существовать в форме их фармацевтически приемлемых солей. Термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к традиционным солям кислотно-аддитивным или основно-аддитивным, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства соединений по данному изобретению и получены из пригодных нетоксичных органических или неорганических кислот, или органических или неорганических оснований. Кислотно-аддитивные соли включают, например, такие, которые получены из таких неорганических кислот, как соляная кислота, бромоводородная кислота, йодоводородная кислота, серная кислота, сульфаминовая кислота, фосфорная кислота и азотная кислота, и те, которые получены из таких органических кислот, как p-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота, метансульфоновая кислота, щавелевая кислота, янтарная кислота, лимонная кислота, яблочная кислота, молочная кислота, фумаровая кислота и т.п. Основно-аддитивные соли включают такие, которые получены из гидроксидов аммония, калия и четвертичного аммония, например гидроксида тетраметиламмония. Химическое превращение фармацевтического соединения в соль представляет собой способ, хорошо известный химикам-фармацевтам для улучшения физической или химической стабильности, гигроскопичности, текучести и растворимости соединений. Это, например, описано в Bastin, Organic Process Research & Development 2000, 4, 427-435 или в Ansel, In: Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 6^th ed. (1995), pp. 196 and 1456-1457. Например, фармацевтически приемлемая соль соединения, представленная в данном документе, может представлять собой соль натрия.

В дополнительном аспекте в изобретении предложена фармацевтически приемлемая соль антисмыслового олигонуклеотида или его конъюгата. В предпочтительном варианте осуществления изобретения фармацевтически приемлемая соль представляет собой соль натрия или калия.

Фармацевтическая композиция

В дополнительном аспекте в изобретении предложены фармацевтические композиции, содержащие любой из вышеупомянутых олигонуклеотидов и/или конъюгатов олигонуклеотидов или их солей и фармацетически приемлемый разбавитель, носитель и/или вспомогательное вещество. Фармацевтически приемлемый разбавитель включает фосфатно-солевой буферный раствор (ФСБ), а фармацевтически приемлемые соли включают, но не ограничиваются ими, соли натрия и калия. В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтически приемлемый разбавитель представляет собой стерильный фосфатно-солевой буферный раствор. В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид используется в фармацевтически приемлемом разбавителе в виде раствора с концентрацией 50-300 мкМ.

Пригодные составы для использования в настоящем изобретении описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17^th ed., 1985. Для краткого ознакомления со способами доставки лекарственных средств см., например, Langer (Science 249:1527-1533, 1990). В WO 2007/031091 представлены дополнительные пригодные и предпочтительные примеры фармацевтически приемлемых разбавителей, носителей и вспомогательных веществ (включен в данный документ посредством ссылки). Пригодные дозировки, составы, пути введения, композиции, лекарственные формы, комбинации с другими терапевтическими агентами, составы пролекарств также представлены в WO 2007/031091.

Олигонуклеотиды или конъюгаты олигонуклеотидов по изобретению могут быть смешаны с фармацевтически приемлемыми активными или инертными веществами для получения фармацевтических композиций или составов. Композиции и способы получения фармацевтических композиций зависят от ряда факторов, в том числе, но не ограничиваются ими, способа введения, степени заболевания или вводимой дозы.

Эти композиции можно стерилизовать с помощью традиционных способов стерилизации или можно подвергать стерилизующему фильтрованию. Полученные водные растворы можно упаковывать для применения в исходном виде или лиофилизировать, при этом лиофилизированные препараты объединяют со стерильным водным носителем до введения. рН препаратов, как правило, находится между 3 и 11, более предпочтительно, между 5 и 9 или между 6 и 8, и наиболее предпочтительно, между 7 и 8, например, от 7 до 7,5. Полученные композиции в твердой форме могут быть упакованы в виде большого количества однократных единиц дозирования, при этом каждая содержит фиксированное количество вышеупомянутого агента или агентов, например, в виде герметично закрытой упаковки таблеток или капсул. Композиция в твердой форме также может быть упакована в контейнер, предназначенный для извлечения любого количества, например сдавливающийся тюбик, крем или мазь пригодные для местного применения.

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид или конъюгат олигонуклеотида по изобретению представляет собой пролекарство. В частности, применительно к конъюгатам олигонуклеотида фрагмент конъюгата отщепляется от олигонуклеотида, как только пролекарство будет доставлено в место действия, например, клетку-мишень.

Применение

Олигонуклеотиды по изобретению можно использовать как исследовательские реагенты, например, для диагностики, лечения и профилактики.

В исследовании такие олигонуклеотиды можно использовать, чтобы специфично модулировать синтез тау-белка в клетках (например, клеточных культурах in vitro) и подопытных животных, таким образом обеспечивая функциональный анализ мишени или оценку его эффективности в качестве мишени для терапевтического вмешательства. Как правило, целевая модуляция достигается за счет деградации или ингибирования мРНК, вырабатывающей белок, таким образом предотвращается образование белка, или за счет деградации или ингибирования модулятора гена или мРНК, вырабатывающей белок.

При использовании олигонуклеотида по изобретению в исследовании или диагностике целевая нуклеиновая кислота может представлять собой кДНК или синтетическую нуклеиновую кислоту, полученную из ДНК или РНК.

В данном изобретении представлен способ in vivo или in vitro модуляции экспрессии тау-белка в клетке-мишени, которая экспрессирует тау-белок, причем указанный способ включает введение в эффективном количестве в указанную клетку олигонуклеотида по изобретению.

В некоторых вариантах осуществления изобретения клетка-мишень представляет собой клетку млекопитающего, в частности, клетку человека. Клетка-мишень может представлять собой клеточную культуру in vitro или клетку, которая in vivo формирует часть ткани у млекопитающего. В предпочтительных вариантах осуществления целевая клетка присутствует в головном мозге или центральной нервной системе. В частности, подходящими участками-мишенями являются клетки ствола головного мозга, мозжечка, коры головного мозга, лобной коры, продолговатого мозга/моста, среднего и спинного мозга. Для лечения прогрессирующего надъядерного паралича (PSP) предпочтительным является целевое понижение в участках продолговатого мозга/ моста и среднего мозга. Для лечения болезни Альцгеймера, предпочтительным является целевое понижение в участках коры головного мозга, продолговатого мозга/моста и среднего мозга. Подходящие типы клеток представляют собой, в частности, нейроны, нервные клетки, аксоны и базальные ганглии.

При диагностике олигонуклеотиды можно использовать для обнаружения и количественного определения экспрессии МАРТ в клетке и тканях с помощью нозерн-блоттинга, гибридизации in-situ или подобных методов.

Для лечения олигонуклеотиды можно вводить животному или человеку, у которого предполагается заболевание или расстройство, которое можно лечить модуляцией экспрессии тау-белка.

В изобретении предложены способы лечения или профилактики заболевания, включающие введение субъекту, страдающему заболеванием или подверженному заболеванию, терапевтически или профилактически эффективного количества олигонуклеотида, конъюгата олигонуклеотида или фармацевтической композиции по изобретению.

Изобретение также относится к олигонуклеотиду, композиции или конъюгату, как определено в данном документе, для применения в качестве лекарственного препарата.

Олигонуклеотид, конъюгат олигонуклеотида или фармацевтическую композицию по изобретению, как правило, вводят в эффективном количестве.

В изобретении также предложено применение олигонуклеотида или конъюгата олигонуклеотида по изобретению, как описано, для изготовления лекарственного препарата для лечения расстройства, указанного в данном документе, или в способе лечения расстройства, указанного в данном документе.

Заболевание или расстройство, указанное в данном документе, связано с экспрессией тау-белка. В некоторых вариантах осуществления изобретения заболевание или расстройство может быть связано с мутацией в гене тау-белка или гене, белковый продукт которого связан с или взаимодействует с тау-белком. Следовательно, в некоторых вариантах осуществления изобретения целевая нуклеиновая кислота представляет собой мутированную форму последовательности тау-белка, а в других вариантах осуществления изобретения целевая нуклеиновая кислота представляет собой регулятор последовательности тау-белка.

Способы по изобретению предпочтительно используются для лечения или профилактики заболеваний, вызванных аномальными уровнями и/или активностью тау-белка.

Изобретение дополнительно относится к использованию олигонуклеотида, конъюгата олигонуклеотида или фармацевтической композиции, как определено в данном документе, для производства лекарственного препарата для регулирования аномальных уровней и/или активности тау-белка.

В одном варианте осуществления данное изобретение относится к олигонуклеотидам, конъюгатам олигонуклеотидов или фармацевтическим композициям для применение для лечения заболеваний или расстройств, выбранных из таупатий, болезни Альцгеймера (AD), прогрессирующего надъядерного паралича (PSP), кортикобазальной ганглиозной дегенерации (CBD), хронической травматической энцефалопатии (СТЕ), лобно-височной деменции (FTD), FTDP-17, болезни Пика (PiD), болезни аргирофильной зернистости (AGD), старческого слабоумия с преобладанием бляшек (TPSD), первичной возрастной таупатий (PART), синдрома Дауна и литико-бодиговской болезни, младенческих таупатий, включая гемимегаленцефалию (НМЕ); комплекса туберозного склероза, очаговой корковой дисплазии 26 типа, ганглиоглиомы, синдрома Халлервордена-Шпатца, нейродегенерации с накоплением железа в мозге 1 типа (NBIA1), ганглиоцитомы и подострого склерозирующего панэнцефалита, судорожного расстройства (например, эпилепсии), сетевой дисфункции (например, депрессии) и двигательных расстройств (например, болезни Паркинсона).

В некоторых вариантах осуществления болезнь выбрана из болезни Альцгеймера (AD), прогрессирующего надъядерного паралича (PSP), лобно-височной деменции (FTD) или FTDP-17.

Введение

Олигонуклеотиды или фармацевтические композиции по данному изобретению можно вводить парентеральным способом (например, внутривенное, подкожное, внутримышечное, интрацеребральное, интрацеребровентрикулярное, внутриглазное или интратекальное введение).

В некоторых вариантах осуществления изобретения введение осуществляют интратекальным способом.

Преимущественно, например, при лечении неврологических расстройств, олигонуклеотид или фармацевтические композиции по данному изобретению вводят интратекально или интракраниально, например, посредством интрацеребрального или интравентрикулярного введения.

В изобретении также предложено применение олигонуклеотида или его конъюгата, например, фармацевтических солей или композиций по изобретению, для изготовления лекарственного препарата, причем лекарственный препарат имеет лекарственную форму для подкожного введения.

В изобретении также предложено применение олигонуклеотида по изобретению или его конъюгата, например фармацевтических солей или композиций по изобретению, для изготовления лекарственного препарата, причем лекарственный препарат имеет лекарственную форму для интратекального введения.

В изобретении также предложено применение олигонуклеотида или конъюгата олигонуклеотида по изобретению, как описано, для изготовления лекарственного препарата, причем лекарственный препарат имеет лекарственную форму для интратекального введения.

Комбинированные терапии

В некоторых вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид, конъюгат олигонуклеотида или фармацевтическая композиция по изобретению предназначены для использования в комбинированном лечении с другим терапевтическим агентом. Терапевтический агент может представлять собой, например, стандарт для лечения заболеваний или расстройств, описанных выше.

ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Следующие варианты осуществления данного изобретения могут использоваться в сочетании с любыми другими вариантами осуществления, описанными в данном документе.

1. Антисмысловой олигонуклеотид длиной от 10 до 50 нуклеотидов, который включает непрерывную нуклеотидную последовательность длиной по меньшей мере 10 нуклеотидов, например, от 10 до 30 нуклеотидов, с комплементарностью не менее 90%, например 100% комплементарный, к любой целевой последовательности в Таблице 4 (R_1 - R_2254).

2. Олигонуклеотид по варианту осуществления 1, в котором целевая последовательность выбрана из одной из целевых участков R_223, R_738 или R_1298, которые соответствуют SEQ ID NO: 3, 4 или 5, соответственно.

3. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1 или 2, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность на 100% комплементарна к смежным нуклеотидам в положениях от 12051 до 12111, от 39562 до 39593 или от 72837 до 72940 SEQ ID NO: 1.

4. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-3, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность составляет по меньшей мере 16 нуклеотидов и на 100% комплементарна к смежным нуклеотидам в положениях от 12060 до 12078, положениях от 39573 до 39592 или положениях от 72862 до 72890 SEQ ID NO: 1.

5. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-4, в котором олигонуклеотид содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6-65.

6. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-5, в котором олигонуклеотид содержит последовательность SEQ ID NO: 9 или 11.

7. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-5, в котором олигонуклеотид содержит последовательность SEQ ID NO: 49.

8. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-5, в котором олигонуклеотид содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 53, 56 и 62.

9. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1, 2 или 5, или 6, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность имеет от нуля до трех несовпадений по сравнению с целевой нуклеиновой кислотой, к которой она комплементарна.

10. Олигонуклеотид по варианту осуществления 9, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность имеет одно несовпадение по сравнению с целевой последовательностью.

11. Олигонуклеотид по варианту осуществления 9, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность имеет два несовпадения по сравнению с целевой последовательностью.

12. Олигонуклеотид по варианту осуществления 9, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность полностью комплементарна целевой последовательности.

13. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-12, в котором олигонуклеотид способен модулировать экспрессию тау-белка.

14. Олигонуклеотид по варианту осуществления 13, в котором олигонуклеотид способен снижать уровень тау-белка.

15. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-14, в котором олигонуклеотид способен гибридизироваться с целевой последовательностью с ΔG° ниже - 10 ккал.

16. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-15, в котором целевая нуклеиновая кислота расположена в РНК.

17. Олигонуклеотид по варианту осуществления 16, причем РНК представляет собой мРНК.

18. Олигонуклеотид по варианту осуществления 17, в котором мРНК представляет собой пре-мРНК.

19. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-18, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из по меньшей мере 14 смежных нуклеотидов, в частности, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 смежных нуклеотидов.

20. Олигонуклеотид по варианту осуществления 18, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 16 до 22 нуклеотидов.

21. Олигонуклеотид по варианту осуществления 20, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 18 до 20 нуклеотидов.

22. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-21, в котором олигонуклеотид содержит или состоит из 14 до 30 нуклеотидов в длину.

23. Олигонуклеотид по варианту осуществления 22, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 16 до 24 нуклеотидов в длину.

24. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 22 или 24, в котором непрерывная нуклеотидная последовательность содержит или состоит из 18 до 20 нуклеотидов в длину.

25. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-24, в котором олигонуклеотид или непрерывная нуклеотидная последовательность является одноцепочечной.

26. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-25, в котором олигонуклеотид не представляет собой миРНК и не является самокомплементарным.

27. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-26, который включает одну или больше модифицированных молекул.

28. Олигонуклеотид по варианту осуществления 27, в котором один или несколько модифицированных нуклеозидов представляют собой модифицированные нуклеозиды с высокой аффинностью.

29. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 27 или 28, в котором один или несколько модифицированных нуклеозидов представляют собой нуклеозиды, модифицированные по 2'-сахару.

30. Олигонуклеотид по варианту осуществления 29, в котором один или более нуклеозидов модифицированных по 2'-сахару независимо выбраны из группы, состоящей из нуклеозидов 2'-О-алкил-РНК, 2'-О-метил-РНК, 2'-алкокси-РНК, 2'-О-метоксиэтил-РНК, 2'-амино-ДНК, 2'-фтор-ДНК, 2'-фтор-ANA и ЗНК.

31. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 29 или 30, в котором по меньшей мере один или более нуклеозидов модифицированных по 2'-сахару представляют собой нуклеозид ЗНК.

32. Антисмысловой олигонуклеотид по варианту осуществления 31, в котором модифицированный нуклеозид ЗНК выбран из окси-ЗНК, амино-ЗНК, тио-ЗНК, сЕТ и ENA.

33. Антисмысловой олигонуклеотид по вариантам осуществления 31 или 32, в котором модифицированный нуклеозид ЗНК представляет собой окси-ЗНК со следующим 2'-4'-мостиком -О-СН₂-.

34. Антисмысловой олигонуклеотид по варианту осуществления 33, в котором окси-ЗНК представляет собой бета-D-окси-ЗНК.

35. Антисмысловой олигонуклеотид по вариантам осуществления 31 или 32, в котором модифицированный нуклеозид ЗНК представляет собой сЕТ со следующим 2'-4'-мостиком -О-СН(СН₃)-.

36. Антисмысловой олигонуклеотид по варианту осуществления 35, в котором сЕТ представляет собой (S)cET, т.е. 6'(S)метил-бета-D-окси-ЗНК.

37. Антисмысловой олигонуклеотид по вариантам осуществления 31 или 32, в котором ЗНК представляет собой ENA со следующим 2'-4'-мостиком -О-СН₂-СН₂-.

38. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 29 или 30, в котором один или два нуклеозиды модифицированные по 2'-сахару представляют собой МОЕ нуклеозид.

39. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-38, в котором олигонуклеотид содержит по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь.

40. Олигонуклеотид по варианту осуществления 39, в котором модифицированная межнуклеозидная связь устойчива к нуклеазам.

41. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 39 или 40, в котором по меньшей мере 50% межнуклеозидных связей в непрерывной нуклеотидной последовательности представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи или боранофосфатные межнуклеозидные связи.

42. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 39 или 41, в котором 80% межнуклеозидных связей в непрерывной нуклеотидной последовательности представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

43. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 39 или 42, в котором все межнуклеозидные связи в непрерывной нуклеотидной последовательности представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

44. Олигонуклеотид по вариантам осуществления осуществления 1-43, в котором олигонуклеотид способен к рекрутингу РНКазы H1.

45. Олигонуклеотид по варианту осуществления 44, в котором олигонуклеотид или непрерывная нуклеотидная последовательность представляет собой гэпмер.

46. Олигонуклеотид по варианту осуществления 45, в котором гэпмер имеет формулу 5'-F-G-F'-3', где крыловые участки F и F' независимо содержат или состоят из 1 до 8 нуклеозидов, из которых от 2 до 5 представляют собой нуклеозиды, модифицированные по 2'-сахару по вариантам осуществления 32-38, a G представляет собой участок между от 6 до 16 нуклеозидов, которые способны рекрутировать РНКазу Н.

47. Антисмысловой олигонуклеотид по вариантам осуществления 46, в котором каждый крыловой участок (F и F') характеризуется наличием по меньшей мере одного нуклеозида, модифицированного по 2'-сахару, на 5'-конце и 3'-конце крыла, а участок G имеет по меньшей мере один нуклеозид ДНК, прилегающий к крыловым участкам (например, 5'- и 3'-конец G-участка).

48. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 46 или 47, в котором все нуклеозиды, модифицированные по 2'-сахару на участках F и F' идентичны ЗНК нуклеозидам.

49. Олигонуклеотид по варианту осуществления 48, в котором все ЗНК нуклеозиды представляют собой окси-ЗНК нуклеозиды.

50. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 46 или 47, в котором все нуклеозиды, модифицированные по 2'-сахару на участках F и F' представляют собой МОЕ нуклеозиды.

51. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 46-50, в котором

a. участок F имеет длину от 3 до 8 нуклеотидов и состоит из 3 до 5 идентичных ЗНК нуклеозидов и от 0 до 4 нуклеозидов ДНК; и

b. участок F' имеет длину от 2 до 6 нуклеотидов и состоит из 2 до 4 идентичных нуклеозидов ЗНК и от 0 до 2 нуклеозидов ДНК; а

c. участок G имеет размер от 6 до 14 нуклеотидов ДНК.

52. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 46 или 47, в котором по меньшей мере один из участка F или участка F' дополнительно содержит по меньшей мере один нуклеозид, модифицированный по 2'-сахару независимо выбраный из группы, состоящей из 2'-О-алкил-РНК, 2'-О-метил-РНК, 2'-алкокси-РНК, 2'-О-метоксиэтил-РНК, 2'-амино-ДНК и 2'-фтор-ДНК.

53. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 46-50 или 52, в котором нуклеозиды рекрутирующие РНКазу Н в участке G независимо выбраны с ДНК, альфа-L-ЗНК, алкилированой ДНК, АНК и 2'F-АНК, и UNA.

54. Олигонуклеотид по варианту осуществления 53, в котором нуклеозиды на участке G представляют собой нуклеозиды ДНК и/или альфа-L-ЗНК.

55. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 53 или 54, в котором участок G состоит по меньшей мере на 75% из нуклеозидов ДНК.

56. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 53-55, в котором все нуклеотиды в участке G представляют собой ДНК.

57. Олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-56, в котором олигонуклеотиды выбраны из CMP ID NO: 9_102; 9_103; 9_104; 11_1; 49_38; 49_51; 49_179; 49_189; 53_1; 56_1 и 62_1.

58. Олигонуклеотид по варианту осуществления 57, в котором олигонуклеотид представляет собой соединение, выбранное из группы, включающей

CTTtAATttaatcactcAT SEQ ID NO: 9; CMP ID NO: 9_102

CTTTaatttaatcacTCAT SEQ ID NO: 9; CMP ID NO: 9_103

CTTTaatttaatcaCtCAT SEQ ID NO: 9; CMP ID NO: 9_104

CTTTaatttaatcaCTCA SEQ ID NO: 11; CMP ID NO: 11_1

TtaaCTCAaatcaaTtctCA SEQ ID NO: 49; CMP ID NO: 49_38

TtaActCAaatcaattCTCA SEQ ID NO: 49; CMP ID NO: 49_51

TTAactCaaatcaatTCtCA SEQ ID NO: 49; CMP ID NO: 49_179

TTAActcaaatcaattCTCA SEQ ID NO: 49; CMP ID NO: 49_189

CAACaccttttaattcATTA SEQ ID NO: 53; CMP ID NO: 53_1

CTCAtcaacaccttttaaTT SEQ ID NO: 56; CMP ID NO: 56_1

TTAactcatcaacaCCTT SEQ ID NO: 62; CMP ID NO: 62_1,

где заглавные буквы представляют собой нуклеозиды бета-D-окси-ЗНК, строчные буквы представляют нуклеозиды ДНК, все С в ЗНК представляют собой 5-метилцитозин, все межнуклеозидные связи представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

59. Антисмысловой олигонуклеотид по любому одному из вариантов осуществления 1-58, в котором антисмысловой олигонуклеотид представляет собой CMP ID NO: 9_103, как представлено на Фиг. 2.

60. Антисмысловой олигонуклеотид по любому одному из вариантов осуществления 1-58, в котором антисмысловой олигонуклеотид представляет собой CMP ID NO: 9_104, как представлено на Фиг. 3.

61. Антисмысловой олигонуклеотид по любому одному из вариантов осуществления 1-58, в котором антисмысловой олигонуклеотид представляет собой CMP ID NO: 11_1, как представлено на Фиг. 4.

62. Антисмысловой олигонуклеотид по любому одному из вариантов осуществления 1-58, в котором антисмысловой олигонуклеотид представляет собой CMP ID NO: 49_38, как представлено на Фиг. 5.

63. Антисмысловой олигонуклеотид по любому одному из вариантов осуществления 1-58, в котором антисмысловой олигонуклеотид представляет собой CMP ID NO: 49_189, как представлено на Фиг. 6.

64. Конъюгат, содержащий олигонуклеотид по любому одному из вариантов осуществления 1-58, и по меньшей мере один фрагмент конъюгата, ковалентно присоединенный к указанному олигонуклеотиду.

65. Конъюгат олигонуклеотида по варианту осуществления 59, в котором фрагмент конъюгата выбран из углеводов, лигандов к рецепторам клеточной поверхности, лекарственных веществ, гормонов, липофильных веществ, полимеров, белков, пептидов, токсинов, витаминов, белков вирусов или их комбинаций.

66. Конъюгат олигонуклеотида по вариантам осуществления 59 или 65, в котором конъюгат облегчает доставку через гематоэнцефалический барьер.

67. Конъюгат олигонуклеотида по варианту осуществления 66, в котором конъюгат представляет собой антитело или фрагмент антитела, нацеленные на рецептор трансферрина.

68. Конъюгат олигонуклеотида по вариантам осуществления 59-67, содержащий линкер, который расположен между олигонуклеотидом и фрагментом конъюгата.

69. Конъюгат олигонуклеотида по варианту осуществления 68, в котором линкер представляет собой физиологически лабильный линкер.

70. Фармацевтическая композиция, содержащая олигонуклеотид по вариантам осуществления 1-58 или конъюгат согласно вариантам осуществления 59-69 и фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель, соль и/или вспомогательное вещество.

71. Способ получения олигонуклеотида по вариантам осуществления 1-58, содержащий взаимодействующие нуклеотидные звенья, в результате чего образуются ковалентно связанные непрерывные нуклеотидные звенья, которые включены в олигонуклеотид.

72. Способ по варианту осуществления 71 дополнительно включающий реакцию непрерывной нуклеотидной последовательности с ненуклеотидным фрагментом конъюгата.

73. Способ получения композиции по варианту осуществления 70, включающий смешивание олигонуклеотида с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем, солью и/или вспомогательным веществом.

74. Способ in vivo или in vitro модуляции экспрессии тау-белка в клетке-мишени, которая экспрессирует тау-белок, причем указанный способ включает введение в эффективном количестве в указанную клетку олигонуклеотида по вариантам осуществления 1-57, или конъюгата по вариантам осуществления 59-69, или фармацевтической композиции по варианту осуществления 70.

75. Способ лечения или профилактики заболевания, включающий введение субъекту, страдающему заболеванием или подверженному заболеванию, терапевтически или профилактически эффективного количества олигонуклеотида по вариантам осуществления 1-58, или конъюгата по вариантам осуществления 59-69, или фармацевтической композиции по варианту осуществления 70.

76. Олигонуклеотид по варианту осуществления 1-57, или конъюгат по вариантам осуществления 59-69, или фармацевтическая композиция по варианту осуществления 70 для использования в качестве препарата для лечения или профилактики заболевания у субъекта.

77. Применение олигонуклеотида по вариантам осуществления 1-58 или конъюгата по варианту осуществления 59-69 для приготовления лекарственного средства для лечения или профилактики заболевания у субъекта.

78. Способ, олигонуклеотид или применение по вариантам осуществления 75-77, в котором заболевание связано с in vivo активностью тау-белка.

79. Способ, олигонуклеотид или применение по вариантам осуществления 75-78, в котором заболевание связано с надэкспрессией тау-белка и/или аномальными уровнями тау-белка.

80. Способ, олигонуклеотид или применение по варианту осуществления 79, в котором уровень тау-белка понижен по меньшей мере на 30%, или по меньшей мере на 40%, или по меньшей мере на 50%, или по меньшей мере на 60%, или по меньшей мере на 70%, или по меньшей мере на 80%, или по меньшей мере на 90%, или по меньшей мере на 95% по сравнению с экспрессией без олигонуклеотида по варианту осуществления 1-58, или конъюгата по вариантуосуществления 59-69, или фармацевтической композиции по варианту осуществления 70.

81. Способ, олигонуклеотид или применение по варианту осуществления 75-79, в котором заболевание выбрано из таупатий, болезни Альцгеймера (AD), прогрессирующего надъядерного паралича (PSP), кортикобазальной ганглиозной дегенерации (CBD), хронической травматической энцефалопатии (СТЕ), лобно-височной деменции (FTD), FTDP-17, болезни Пика (PiD), болезни аргирофильной зернистости (AGD), старческого слабоумия с преобладанием бляшек (TPSD), первичной возрастной таупатии (PART), синдрома Дауна и литико-бодиговской болезни, младенческих таупатий, включая гемимегаленцефалию (НМЕ), комплекса туберозного склероза; очаговой корковой дисплазии 2б типа, ганглиоглиомы, синдрома Халлервордена-Шпатца, нейродегенерации с накоплением железа в мозге 1 типа (NBIA1), ганглиоцитомы и подострого склерозирующего панэнцефалита, судорожного расстройства (например, эпилепсии), сетевой дисфункции (например, депрессии) и двигательных расстройств (например, болезнь Паркинсона).

82. Способ, олигонуклеотид или применение по вариантам осуществления 75-79, в котором заболевание выбрано из болезни Альцгеймера (AD), прогрессирующего надъядерного паралича (PSP), лобно-височной деменции (FTD) или FTDP-17.

83. Способ, олигонуклеотид или применение по вариантам осуществления 75-82, в котором субъект представляет собой млекопитающее.

84. Способ, олигонуклеотид или применение по варианту осуществления 83, в котором млекопитающее представляет собой человека.

ПРИМЕРЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Последовательности олигонуклеотидных мотивов и олигонуклеотидные соединения

Последовательности мотивов представляют непрерывную последовательность нуклеотидных оснований, присутствующую в олигонуклеотиде.

Структуры относятся к структуре гэпмера, F-G-F'. В классической структуре гэпмера, например, 3-10-3, все нуклеотиды на флангах (F и F') состоят из одинаковых нуклеозидов, модифицированных по 2'-сахару, например, ЗНК, сЕТ и МОЕ, а фрагмент ДНК в середине формирует гэп (G). В гэпмерах с чередованием на флангах фланги олигонуклеотида помечают как ряд целых чисел, представляющих число нуклеозидов модифицированных по 2'-сахару (М), а затем число нуклеозидов ДНК (D). Например, фланг с мотивом 2-2-1 представляет 5' [M]₂-[D]₂-[M] 3', а мотив 1-1-1-1-1 представляет 5' [M]-[D]-[M]-[D]-[M] 3'. Оба фланга имеют нуклеозид с 2'-модифицированным сахаром на 5'- и 3'-конце. Гэп-участок (G) состоит из некоторого количества нуклеозидов ДНК (как правило, от 6 до 16), расположенных между флангами.

Заголовок «Олигонуклеотидное соединение» в таблице представляет собой конкретную структуру последовательности мотива. Заглавные буквы обозначают нуклеозиды бета-D-окси-ЗНК, подчеркнутые заглавные буквы обозначают нуклеозиды МОЕ, строчные буквы обозначают нуклеозиды ДНК, все С в ЗНК представляют собой 5-метилцитозин, например, представляют собой 5-метилцитозин-ДНК, все межнуклеозидные связи представляют собой фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.

Синтез олигонуклеотидов

Синтез олигонуклеотидов в общем известен в данной области техники. Ниже представлен протокол, который может быть использован. Олигонуклеотиды по данному изобретению могут быть получены при небольшом варьировании методик в плане используемого оборудования, носителя и концентраций.

Олигонуклеотиды синтезированы на универсальном уридиновом носителе с использованием фосфороамидитного подхода на Oligomaker 48 в масштабе 1 мкмоль. В конце синтеза олигонуклеотиды отщепляли от твердого носителя с использованием водного раствора аммиака в течение 5-16 часов при 60°С. Олигонуклеотиды очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ (ОФ-ВЭЖХ) или с помощью твердофазной экстракции и характеризовали с помощью СЭЖХ, а молекулярную массу дополнительно подтверждали с помощью ЭРИ-МС.

Удлинение олигонуклеотида

Соединение β-цианоэтилфосфорамидитов (ДНК-А(Бз), ДНК-G(Ибу), ДНК-С(Бз), ДНК-Т, ЗНК-5-метил-С(Бз), ЗНК-А(Бз), ЗНК-G(ДМФА) или ЗНК-Т) осуществляют путем использования раствора 5'-O-ДМТ-защищенного амидита с концентрацией 0,1 М в ацетонитриле и ДЦИ (4,5-дицианоимидазол) в ацетонитриле (0,25 М) в качестве активатора. Для завершающего цикла можно использовать фосфорамидит с желаемыми модификациями, например с С6-линкером для присоединения группы конъюгата или с самой группой конъюгата. Тиолирование для введения фосфортиоатных связей проводят с использованием гидрида ксантана (0,01 М в ацетонитриле/пиридине 9:1). Фосфордиэфирные связи можно вводить с использованием 0,02 М йода в ТГФ/пиридин/вода 7:2:1. Остальные реагенты представляют собой традиционно используемые для олигонуклеотидного синтеза.

Для конъюгации после твердофазного синтеза в заключительном цикле твердофазного синтеза можно использовать коммерчески доступный С6-аминолинкерный фосфорамидит, а после снятия защиты и отщепления от твердого носителя выделяют аминосвязанный олигонуклеотид без защитных групп. Конъюгаты получают посредством активации функциональной группы с использованием стандартных методик синтеза.

Очистка с помощью ОФ-ВЭЖХ

Неочищенные соединения очищают препаративной ОФ-ВЭЖХ на колонке Phenomenex Jupiter C18, 10 мкм, 150×10 мм. В качестве буферных растворов используют 0,1 М ацетат аммония с рН 8 и ацетонитрил при скорости потока 5 мл/мин. Собранные фракции лиофилизируют, что дает очищенное соединение, как правило, в виде белого твердого вещества.

Сокращения:

ДЦИ: 4,5-дицианоимидазол

ДХМ: Дихлорметан

ДМФ: Диметилформамид

ДМТ: 4,4'-диметокситритил

ТГФ: Тетрагидрофуран

Бз: Бензоил

Ибу: Изобутирил

ОФ-ВЭЖХ Обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография

Определение T_m

Дуплексы олигонуклеотида и целевой РНК (связанные фосфатной группой, РО) разбавляют до 3 мМ в 500 мл воды, не содержащей РНКазу, и смешивают с 500 мл 2-кратного T_m-буфера (200 мМ NaCl, 0,2 мМ ЭДТА, 20 мМ фосфата Na, рН 7,0). Раствор нагревают до 95°С в течение 3 мин, а затем дают медленно остыть при комнатной температуре в течение 30 мин. Температуры плавления дуплексов (T_m) измеряют на УФ/ВИД спектрофотометре Lambda 40, оснащенном модулем программирования температуры Пельтье РТР6, с использованием программного обеспечения РЕ Templab (Perkin Elmer). Температуру поднимают от 20°С до 95°С, а затем опускают до 25°С, записывая поглощение при 260 нм. Для оценки T_m дуплекса используют первую производную и локальные максимумы как плавления, так и охлаждения.

Первичные культуры нейронов

Первичные культуры нейронов были получены из переднего мозга трансгенных мышей Е18, экспрессирующих трансгенный тау-белок человека на фоне нокаута тау-белка мыши. (Andorfer et al. J Neurochem 86:582-590 (2003)). Первичные нейроны были получены путем расщепления папаином в соответствии с протоколом производителя (Worthington Biochemical Corporation, LK0031050). Вкратце, передний мозг вырезали из hTau BAC-Tg Е18 эмбрионов мыши, полностью экспрессирующих ассоциированный с микротрубочками ген тау-белка человека (МАРТ), на фоне нокаута тау-белка мыши, и инкубировали при 37°С в течение 30-45 минут в папаине/ДНКазе/сбалансированном солевом растворе Эрла (EBSS). После тритурации и центрифугирования клеточного осадка, реакцию останавливали инкубацией с EBSS, содержащим ингибиторы протеаз, бычий сывороточный альбумин (БСА) и ДНКазу. Клетки тритурировали и промывали Neurobasal (NB, Invitrogen) с добавлением 2% В-27, 100 мкг/мл пенициллина, 85 мкг/мл стрептомицина и 0,5 мМ глутамина.

Мыши трансгенные по may-белку (hTau мыши)

Самцы и самки трансгенных мышей (30-40 г), экспрессирующие трансгенный тау-белок, полученный из РАС человека с гаплотипом H1, управляемый промотором тау-белка (Polydoro et al., J. Neurosci. (2009) 29(34): 10741-9), и у которых был удален нативный ген тау-белка мыши, были использованы для оценки переносимости, фармакодинамических конечных точек и концентраций лекарственного средства в тканях.

Животных содержали в питомнике, где поддерживали постоянную температуру (21±2°С) и влажность (50±10%), и 12-часовым режимом освещения (свет включается в 06:00). Все животные имели неограниченный доступ к пище и воде на протяжении всего исследования. Поведенческие исследования проводились с 07:00 до 15:00.

Интрацеребровентрикулярные (ICV) инъекции выполнялись с использованием микрошприца Hamilton, снабженного иглой 27 или 30 калибра, в соответствии с методом Хейли и Маккормика. Игла была снабжена полиэтиленовой защитой на расстоянии 2,5 мм от кончика, чтобы ограничить ее проникновение в мозг. Мышей анестезировали изофлурановым анестетиком (1,5-4%). Мышь, которой собирались выполнить инъекцию, держали за дряблую кожу на задней части шеи большим и указательным пальцами одной руки. Затем, используя легкое, но уверенное надавливание, голову животного обездвиживали, нажимая на твердую плоскую ровную поверхность. Затем кончик иглы вводили через кожу головы и череп примерно на 1 мм латеральнее и на 1 мм каудальнее брегмы. После установки иглы, набирали ASO в объеме 5 микролитров в физиологическом растворе и вводили в правый (или левый) боковой желудочек в течение 20-30 секунд. Перед удалением иглу удерживали на месте в течении 10 секунд. Эта процедура не требует хирургического вмешательства или разреза. Животных согревали на грелках, пока они не оправились от процедуры.

Через 3 дня и/или 4 недели после введения мышей умерщвляли передозировкой изофлурана с последующим быстрым обезглавливанием и отбирали ткань мозга (правый лобный участок коры) на сухом льду для последующего кПЦР для гена тау-белка.

Среды, используемые для клеточного культивирования и дифференциации нейронов, полученных из стволовых клеток человека N2B27 + среда SFA=N2B27 + цитокины S, F, А

N2B27 + среда BGAA=N2B27 + цитокины В, G, Аа, сА + P/S + ламинин

Пример 1. in vitro скрининг ASO нацеленного на нитроны МАРТ

Скринининг антисмыслового олинуклеотида (ASO) выполняли на первичных клетках нейронов мышей гуманизированных тау-белком с 807 ASO, нацеленными на интроны МАРТ.

Способность ASO снижать мРНК МАРТ in vitro измеряли с помощью QUANTIGENE® анализа. Каждое уменьшение уровня мРНК тау-белка стандартизировали путем вычитания фонового сигнала анализа и нормализации каждой лунки с помощью сигнала мРНК гена домашнего хозяйства тубулина.

Первичные культуры нейронов получали, как описано в разделе «Материалы и методы», высевали на 384-луночные планшеты покрытые поли-D-лизином по 10000 клеток на лунку и поддерживали в нейробазальной среде, содержащей В27, глутамакс и пенициллин-стрептомицин. ASO разводили в воде и добавляли к клеткам DIV01 до конечной концентрации в 0,5 мкМ. После добавления ASO нейроны инкубировали при 37°С и 5% СО₂ в течение 5 дней для достижения устойчивого снижения мРНК. Среду отбирали, а клетки промывали 1х дНФБ. Измерение лизата матричной РНК выполняли с использованием системы реагентов QUANTIGENE® 2.0 (AFFYMETRIX®), которая количественно определяет РНК с использованием метода амплификации сигнала разветвленной ДНК, основанного на специально разработанном наборе зондов для улавливания РНК. Клетки лизировали, используя рабочий буферный раствор для лизиса клеток, полученный путем добавления 50 мкл протеиназы К к 5 мл предварительно нагретой смеси для лизиса и разбавляли ДН₂О до конечного разведения 1:4. Рабочий буфер для лизиса добавляли в планшет (45 мкл/лунку), перемешивали тритурированием, герметизировали и инкубировали в течение 30 минут при 55°С. После лизиса лунки хранили при -80°С или сразу же анализировали.

Лизаты разводили в смеси для лизиса в зависимости от конкретного используемого зонда улавливания (тау-белок или тубулин). Затем добавляли всего 27 мкл в лунку планшета для улавливания (384-луночный полистирольный планшет, покрытый зондами улавливания). Реагенты рабочих наборов зондов были получены путем смешивания 2,2 мл воды, свободной от нуклеаз, 1,2 мл лизированой смеси, 184 мкл блокирующего реагента и 66,8 мкл набора специфических 2.0 зондов МАРТ человека (каталожный номер #15486) и мышиного бета-3 тубулина (каталожный номер #SB-17245), согласно инструкциям производителя (QUANTIGENE® 2.0 AFFYMETRIX®). Затем 7 мкл реакционной смеси рабочих зондов добавляли к 27 мкл раствора лизата (или к 27 мкл смеси для лизиса для фоновых образцов) на планшете для улавливания. Планшеты центрифугировали, а затем инкубировали в течение 16-20 часов при 55°С для гибридизации (улавливания целевой РНК). Амплификацию сигнала и обнаружение целевой РНК начинали с 3-х кратной промывки планшетов буфером для удаления несвязанного материала. Добавляли гибридизационный реагент 2.0 Предусилитель (30 мкл/лунку), инкубировали при 55°С в течение 1 часа, затем аспирировали, добавляли промывочный буфер и аспирировали 3 раза. Затем добавляли гибридизационный реагент 2.0 Усилитель (30 мкл/лунку), как описано, инкубировали в течение 1 часа при 55°С и повторяли промывку, как описано ранее. Затем добавляли гибридизационный реагент 2.0 Меченый зонд (30 мкл/лунку), инкубировали в течение 1 часа при 50°С и повторяли промывку, как описано ранее. Наконец, планшеты центрифугировали для удаления остатков промывочного буфера и добавляли 2.0 Субстрат (30 мкл/лунку). Планшеты инкубировали в течение 5 минут при комнатной температуре, и сканировали на многорежимном анализаторе PerkinElmer Envision в режиме люминометра в течение 15 минут.

Для гена, представляющего интерес, средний фоновый сигнал вычитали из среднего сигнала каждого технического повтора. Средний сигнал после вычета фона для гена, представляющего интерес, делится на средний сигнал после вычета фона для РНК гена домашнего хозяйства тубулина. Процент ингибирования для образца, подвергнутого воздействию, рассчитывали относительно не подвергнутого воздействию образца (т.е. чем ниже значение, тем выше ингибирование). Вариабельность фона для образцов, не подвергнутых воздействию, может привести к процентному ингибированию образца подвергнутого воздействию, который равен фону или превышает его, и в этих случаях процент ингибирования выражается как 100% к контрольному ингибированию (то есть отсутствие ингибирования).

На Фиг. 1 показано снижение мРНК МАРТ, достигнутое с помощью всех 807 ASO. На фигуре показаны три участка А, В и С на целевой нуклеиновой кислоте МАРТ. Эти участки имеют высокую распространенность ASO, которые снижают экспрессию целевого гена до 40% или ниже по сравнению с контролем (100%).

Пример 2. in vitro Скрининг ASO, нацеленного на выбранные участки МАРТ

Согласно скринингу по Примеру 1, была сконструирована новая библиотека ASO к целевому участку А, В и С, как показано на Фиг. 1. Секвенции мотивов и олигонуклеотидных компонентов показаны ниже в Таблице 5.

Скрининг был проведен, как описано выше в Примере 1. Результаты приведены в Таблице 6.

Пример 3. Значения IC₅₀ для выбранных олигонуклеотидов

IC₅₀ некоторых из наиболее эффективных олигонуклеотидов из Примера 2 определяли in vitro в первичных нейронах с использованием 96-луночного анализа.

Первичные культуры нейронов получали, как описано в разделе «Материалы и методы», и высевали на покрытые поли-D-лизином 96-луночные планшеты по 50000 клеток на лунку и поддерживали в нейробазальной среде, содержащей В27, глутамакс и пенициллин-стрептомицин. ASO разбавляли водой (для определения IC₅₀) и добавляли к клеткам через 1 день после посева (DIV01). Нейроны подвергали воздействию максимальной концентрацией от 0,5 до 5 мкМ для определения IC₅₀, а для определения ответа на концентрацию использовали разведение примерно 1:4 для вычисления IC₅₀. CMP ID NO: 66_1, соответствующий ASO-001933 в WO 2016/126995, был включен в качестве положительного контроля. После воздействия ASO нейроны инкубировали при 37°С в течение 5 дней для достижения устойчивого снижения мРНК. Среду отбирали, а клетки лизировали следующим образом. Измерение лизата матричной РНК выполняли с использованием набора реагентов QUANTIGENE® 2.0 (AFFYMETRIX®), которая количественно определяет РНК с использованием метода амплификации сигнала разветвленной ДНК, основанного на специально разработанном наборе зондов для улавливания РНК. Рабочий буферный раствор для лизиса клеток готовили добавлением 50 мкл протеиназы К к 5 мл предварительно нагретой смеси для лизиса, и разбавляли до конечного разведения 1:4 с помощью дН₂О. Рабочий буфер для лизиса добавляли в планшет (150 мкл/лунку), перемешивали тритурированием, герметично закрывали и инкубировали в течение 30 мин при 55°С. После лизиса лунки хранили при -80°С или сразу же анализировали.

Лизаты разводили в смеси для лизиса в зависимости от конкретного используемого зонда улавливания (тау или тубулин). Затем в планшет для улавливания добавляли всего 80 мкл/лунку (96-луночный полистирольный планшет, покрытый зондами улавливания). Реагенты рабочих наборов зондов были получены путем смешивания 12,1 мл воды, свободной от нуклеаз, 6,6 мл лизированной смеси, 1 мкл блокирующего реагента и 0,3 мкл набора специфических 2.0 зондов МАРТ человека (каталожный номер #15486) или мышиного бета-3 тубулина (каталожный номер #SB-17245), согласно инструкциям производителя (QUANTIGENE® 2.0 AFFYMETRIX®). Затем 20 мкл реакционной смеси рабочих зондов добавляли к 80 мкл раствора лизата (или к 80 мкл лизированной смеси для фоновых образцов) на планшете для улавливания. Планшеты центрифугировали, а затем инкубировали в течение 16-20 часов при 55°С для гибридизации (улавливания целевой РНК). Амплификацию сигнала и обнаружение целевой РНК начинали с 3-кратной промывки планшетов буфером для удаления несвязанного материала. Добавляли гибридизационный реагент 2.0 Предусилитель (100 мкл/лунку), инкубировали при 55°С в течение 1 часа, затем аспирировали, добавляли промывочный буфер и аспирировали 3 раза. Затем добавляли гибридизационный реагент 2.0 Усилитель (100 мкл/лунку), как описано, инкубировали в течение 1 часа при 55°С и повторяли промывку, как описано ранее. Затем добавляли гибридизационный реагент 2.0 Меченый зонд (100 мкл/лунку), инкубировали в течение 1 часа при 50°С и повторяли промывку, как описано ранее. Наконец, планшеты центрифугировали для удаления избытка промывочного буфера и добавляли 2.0 Субстрат (100 мк/лунку). Планшеты инкубировали в течение 5 минут при комнатной температуре, и сканировали на многорежимном анализаторе PerkinElmer Envision в режиме люминометра в течение 15 минут.

Определение данных. Для гена, представляющего интерес, средний фоновый сигнал вычитали из среднего сигнала каждого технического повтора. Средний сигнал после вычета фона для гена, представляющего интерес, делится на средний сигнал после вычета фона для РНК гена домашнего хозяйства тубулина. Процент ингибирования для образца, подвергнутого воздействию, рассчитывали относительно образца, не подвергнутого воздействию (т.е. чем ниже значение, тем выше ингибирование). Вариабельность фона для образцов, не подвергнутых воздействию, может привести к процентному ингибированию образца, подвергнутого воздействию, который равен фону или превышает его, и в этих случаях процент ингибирования выражается как 100% к контрольному ингибированию (то есть отсутствие ингибирования). Результаты представлены в Таблице 7.

Пример 4. Переносимость in vivo и снижение уровня мРНК тау-белка in vivo

Некоторые из наиболее эффективных олигонуклеотидов из Примера 2 тестировали in vivo на мышах гуманизированных по тау-белку для оценки острой переносимости в ЦНС, а также снижения уровня мРНК МАРТ через 3 или 28 дней после однократной инъекции.

Мышам трансгенным по тау-белку вводили 100 мкг ASO путем интрацеребровентрикулярной (ICV) инъекции (см. раздел «Материалы и методы», пункт «Мыши трансгенные по тау-белку»). CMP ID NO: 66_1, соответствующий ASO-001933 в WO 2016/126995, был включен в качестве положительного контроля. Животные наблюдались на предмет поведенческих побочных эффектов в течение одного часа после однократной инъекции ASO ICV. Острая переносимость тяжести побочных эффектов оценивалась по шкале от нуля (отсутствие побочных эффектов) до 20 (судороги, приводящие к эвтаназии). Шкала переносимости была разделена на 5 нейроповеденческих категорий: 1) гиперактивность 2) снижение активности и возбуждения 3) двигательная дисфункция/атаксия 4) неправильная поза и дыхание и 5) тремор/судороги. Каждая категория была оценена по шкале от 0 до 4 с наихудшим общим баллом 20. Животные наблюдались на предмет изменения поведения в домашней клетке, а затем их забирали из домашней клетки для более подробных наблюдений, которые включали измерение силы захвата и рефлекса выпрямления. Данные об острой переносимости ASO по изобретению представлены в Таблице 8.

Снижение уровня мРНК МАРТ в правом фронтальном участке коры анализировали с помощью кПЦР следующим образом. Отобранную ткань мозга мыши (см. раздел «Материалы и методы», пункт «Мыши трансгенные по тау-белку») гомогенизировали в 10-и кратном объеме буфера с высоким содержанием соли/сахарозы (10 мМ Трис-HCl, рН 7,4, 800 мМ NaCl, 10% сахарозы (мас./об.), 1 мМ EGTA) с добавлением наборов 2 и 3 коктейлей ингибиторов фосфатазы, 1 мМ PMSF (Sigma, Saint Louis, МО) и полный коктейль ингибиторов протеаз без ЭДТА (Roche, Indianapolis, IN) с использованием Quiagen TissueLyzer II. Гомогенат центрифугировали при 20000 х g в течение 20 минут при 4°С. Супернатант центрифугировали при 100000 х g в течение 1 часа при 4°С.

Для синтеза кДНК и последующей ПЦР 300 нг РНК из супернатантов ткани мозга добавляли в 1 лунку 96-луночного планшета (Axygen, PCR-96-C-S). В каждую лунку добавляли 7,5 мкл реакционной смеси (5 мкл 2,5 мМ смеси NTP и 2,5 мкл случайных праймеров на реакцию), центрифугировали планшет при 1000 об/мин и помещали в термоциклер на 3 мин при 70°С. Планшеты немедленно охлаждали на льду и добавляли 4 мкл основной реакционной смеси. Перед ПЦР планшеты ненадолго центрифугировали, чтобы собрать образец на дне лунки. Синтез кДНК проводили при 42°С в течение 60 минут, 95°С в течение 10 минут с последующей выдержкой при 4°С. Образцы кДНК разбавляли водой для молекулярной биологии 1:3 и хранили при -20°С до дальнейшего использования.

Для ПЦР каждый образец анализировали в трех экземплярах с двумя наборами зондов (МАРТ: Taqman Expression assays Hs00902193_m1; GAPDH Taqman Expression assays Hs01922876_u1). К каждой реакции добавляли 4 мкл предварительно разведенной кДНК и 6 мкл реакционной смеси, и центрифугировали планшеты. Образцы инкубировали при 95°С в течение 20 с с последующими 40 циклами при 95°С в течение 1 с и при 60°С в течение 20 с.

Данные анализировали с использованием метода дельта-дельта Ct, где каждый образец сначала нормализовали по GAPDH, а затем выражали в виде процента от контроля, не подвергнутого воздействию (процент ингибирования). Если процент ингибирования был равен или выше, чем в контрольных клетках, процент ингибирования выражали как нулевое ингибирование.

Пример 5. Эффективность in vitro в нейронах производных эмбриональных стволовых клеток человека (hESC).

Выбранные ASO из Примера 2 тестировали в трех различных концентрациях (200 нМ, 8 нМ и 0,32 нМ) в альтернативном in vitro анализе с использованием нейронов, производных эмбриональных стволовых клеток человека (hESC). С целью сравнения были включены два олигонуклеотида предшествующего уровня техники, нацеленные на МАРТ, а именно CMP ID NO: 66 1 соответствующий ASO-001933 в WO 2016/126995 и СРМ ID NO: 67:1 соответствующий соединению No 814907 в WO 2018/064593.

Культивирование и воздействие ASO на эмбриональные стволовые клетки человека (ESC)

Нервные стволовые клетки (NSC) были получены из ESC человека в соответствии с опубликованными методиками (Chambers et al. 2009 Nat. Biotech. 7, 275-280). Нервные стволовые клетки (NSC) пролиферировали в вентрализованные предшественники в течение 1 недели в среде SFA, а затем дифференцировали в нейроны в среде BGAA в течение 6 недель. Информацию о составе среды см. в разделе «Материалы и методы».

Клетки высевали с плотностью 10000 клеток/см² в среду N2B27+SFA в колбу, покрытую полиорнитином и ламинином. Среду меняли на 4-й день. Через 7 дней в среде N2B27+SFA клетки были трипсинизированы и высеяны в качестве вентрализованных предшественников в среду N2B27+BGAA при плотности 50000 клеток/лунку в 96-луночные планшеты.

Среду меняли два раза в неделю, а воздействие ASO начинали при первой смене среды и продолжалось в течение 6 недель. Затем клетки были получены, как описано ниже.

Анализ кПЦР

Нейроны, которые поддавались воздействию, были получены следующим образом: отбор среды с последующим добавлением 125 мкл буфера для лизиса Pure Link® Pro 96 и 125 мкл 70% этанола. РНК очищали в соответствии с инструкцией производителя и элюировали в конечный объем 50 мкл воды, что давало концентрацию РНК 10-20 нг/мкл. РНК разбавляли водой в 10 раз перед проведением одностадийной реакции кПЦР.

Для одностадийной реакции кПЦР смесь для кПЦР (qScriptTMXLE 1-step RT-qPCR TOUGHMIX®Low ROX from QauntaBio) смешивали с двумя зондами Taqman в соотношении 10:1:1 (смесь для кПЦР:зонд 1:зонд 2), чтобы получить реакционную смесь. кПЦР выполняли в виде технических повторений, а зонды Taqman были приобретены у LifeTechnologies: МАРТ_Hs00902193_m1; GAPDH 4325792 (ген домашнего хозяйства, используемый для нормализации).

Затем реакционную смесь (6 мкл) и РНК (4 мкл, 1-2 нг/мкл) смешивали в планшете для кПЦР (MICROAMP®optical 384 well, каталожный номер 4309849). После герметичного заклеивания планшетов, их быстро центрифугировали при 1000 х g в течение 1 минуты при комнатной температуре и переносили в систему ViiaTM 7 (Applied Biosystems, Thermo). Использовали следующие условия для ПЦР: 50°С в течение 15 минут; 95°С в течение 3 минут; 40 циклов: 95°С в течение 5 с с последующим понижением температуры на 1,6°С/с, затем при 60°С в течение 45 с. Данные анализировали с помощью программного обеспечения для ПЦР в режиме реального времени QuantStudioTM. Процент ингибирования для образцов, которые поддавались воздействию ASO, рассчитывали относительно образцов, которые поддавались воздействию контрольным образцом (низкие значения указывают на высокое снижение уровня МАРТ). Результаты в Таблице 9 показаны как среднее значение двух технических повторов.

Измерение тау-белка и белка рТаи в нейронах hESC:

Клетки, промытые НФБ, экстрагировали в буфер, содержащий реагент для экстракции белка Cytobuster (Merck-Millipore #71009), 1% коктейль ингибиторов фосфатазы 3 (Sigma # Р0044), 1% ингибитор протеаз Set III (Calbiochem #539134), 1% ДНКазы-I (Roche #4536282001) и 10 мМ MgCl₂. Клеточный экстракт лизировали пипетированием вверх/вниз, а затем хранили при -20°С до использования.

Общие уровни тау-белка в клеточных экстрактах измеряли с помощью AlphaLISA с использованием формата локального анализа, включающего антитела 5А6 специфические к тау-белку (ID в Реестре Антител DSHB: АВ_528487) и моноклональных антител Тау 4/2 локального производства Roche к тау-белку. Последнее получали путем иммунизации мышей полноразмерным тау-белком человека, то есть самой длинной изоформой характерной для мозга человека, 441 аминокислота. Тау 4/2 связывается с С-концевым эпитопом тау-белка, расположенным между аминокислотами 369 и 441. Вкратце, клеточные экстракты разводили в буфере для анализа AlphaLISA Hi Block (PerkinElmer AL004C) и смешивали с биотинилированными 5А6 гранулами и акцепторными гранулами AlphaLISa, покрытыми Тау 4/2. После инкубации в течение 1 часа при комнатной температуре к смеси добавляют донорные гранулы, покрытые стрептавидином. После инкубации в течение 30 мин образцы измеряли в планшет-ридере Envision (экситация при 680 нм, эмиссия при 615 нм). Стандартная кривая была построена с использованием рекомбинантного тау-белка человека (Merck-Millipore #AG960).

Уровни фосфорилированого тау-белка (Tay-pS422) в клеточных экстрактах измеряли с помощью AlphaLISA с использованием локального формата анализа Roche, содержащего тау-специфические антитела 5А6 (ID в Реестре Антител DSHB: АВ_528487) и Тау-р8422-специфические антитела 5.6.11 (описаны в WO 2010/142423 и Collin et al., 2014, Brain vol 137 P 2834-2846). Перед анализом клеточные экстракты разводят в буфере для анализа В. Буфер В содержит 25 мМ HEPES рН 7,4, 0,5% Triton Х-100, 0,1% Top Block (LuBio Science), 1 мг/мл Dextran500, 10% блокирующего реагента ELISA (Roche). Стандартную кривую получали с использованием ERK-фосфорилированного тау-белка, полученного следующим образом: рекомбинантный тау-белок человека получали, как описано в Grueninger et al. (Neurobiology of Disease 37 [2010] рр. 294-306). Рекомбинантный His-меченный ERK2 (локального производства) активировали инкубацией с активированным МЕКК1 (локального производства). Затем активированный ERK2 инкубировали с тау-белком в молярном соотношении 1:50 в буфере, содержащем 2 мМ АТФ. ERk2 впоследствии удаляли прогоном через Ni-NTA агарозу (Qiagen). Степень фосфорилирования S422 впоследствии определялась масс-спектроскопией.

Результаты приведены в Таблице 9.

Пример 6: IC₅₀ выбранных соединений из Примера 5

Выбранные эффективные ASO из Примера 5 были протестированы в том же анализе нейронов, полученных из hESC, вместе с двумя контролями предшествующего уровня техники (CMP ID 66_1 и CMP ID 67_1) для определения IC₅₀ снижения целевой мРНК, а также снижения тау-белка.

Эксперимент проводили, как описано в Примере 5, с использованием следующих концентраций олигонуклеотидов: 1000, 200, 40, 8, 1,6, 0,32, 0,064, 0,0128, 0,00256 нМ.

Значения IC₅₀ были подобраны с использованием программного обеспечения GraphPad PRISM. Результаты приведены в Таблице 10.

Из этих данных можно увидеть, что CMP ID NO 9_103 и 49_38 по изобретению более эффективны и имеют лучший IC50, чем соединения предшествующего уровня техники по всем параметрам, тогда как CMP ID NO 53_1, по-видимому, имеет лучший максимальный нокдаун, чем соединения предшествующего уровня техники и подобный IC₅₀ как CMP ID NO: 66_1.

Пример 7. Активность in vivo в конкретных участках мозга hTau мыши

Выбранные ASO из Примера 5 тестировали на предмет их способности снижать уровень мишени in vivo в конкретных участках мозга гуманизированных мышей по тау-белку (hTau мыши) через четыре недели после однократного ICV введения низкой дозы.

Мышь гуманизированная по тау-белку, которая используется в этом примере, представляет собой линию трансгенных мышей Roche hTau P301S, которая надэкспрессирует тау-белок человека (самую длинную изоформу характерную для мозга человека) на фоне точечной мутации P301S в тау-белке мыши.

Мышам гуманизированым по тау-белку вводили 25 мкг ASO путем интрацеребровентрикулярной (ICV) инъекции, как описано ниже. CMP ID NO: 66_1, соответствующий ASO-001933 в WO 2016/126995, был включен с целью сравнения.

Оценка in vivo /CV мыши

Уход за животными

Животные разного пола весом от 16 до 23 грамм содержали в питомнике, где поддерживали постоянную температуру (21±2°С) и влажность (55±10%), и с 12-часовым режимом освещения (свет включается в 06:00).

Все животные имели неограниченный доступ к пище и воде на протяжении всего исследования. Все протоколы с использованием мышей были одобрены Датским Национальным Комитетом по Этике Экспериментов на Животных.

Интрацеребровентрикулярные инъекции

Соединения вводили мышам путем интрацеребровентрикулярных (ICV) инъекций. В каждую экспериментальную группу были определены от 6 до 8 мышей разного пола. Перед ICV введением мышей взвешивали и анестезировали изофлураном или Пропофолом (30 мг/кг). Интрацеребровентрикулярные (ICV) инъекции выполнялись с использованием микрошприца Hamilton с FEP катетером, снабженным снабженный иглой 23 калибра, закрепленной на стойке, отрегулированной для проникновения на нужное расстояние (3,9 мм) через кожу и череп в правый боковой желудочек. Мышь, которой выполняли инъекцию, держали за дряблую кожу на задней части шеи большим и указательным пальцами одной руки. Затем, используя легкое, но уверенное надавливание, голову прижимали вверх так, чтобы игла проникла в череп на 1-2 мм справа от средней линии (medio lateral) и на 1-2 мм позади глаза. 5 мкл болюса тестируемого соединения или носителя вводили в течение 30 секунд с заранее определенной скоростью инфузии. Чтобы избежать рефлюкса, мышь удерживали в этом положении еще 5 секунд, прежде чем осторожно потянуть вниз от иглы. Эта процедура не требовала хирургического вмешательства или разреза. Животных помещали под лампу накаливания, пока они не оправились от процедуры.

По окончании исследования (4 недели) ткань головного мозга (кору, продолговатый мозг/мост и средний мозг) отбирали на сухом льду для анализа тау-белка на уровне мРНК и белка.

Гомогенизация тканей

Образцы ткани головного мозга мышей гомогенизировали в буфере для лизиса ткани MagNA Pure LC RNA Isolation (Roche, Indianapolis, IN) с использованием Qiagen TissueLyser П. Для полного лизиса гомогенаты инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре. После лизиса гомогенаты центрифугировали в течение 3 минут при 13000 об/мин, а супернатант использовали для анализа.

Очистка РНК из тканей

РНК очищали из 350 мкл супернатанта с MagNA Pure 96 Cellular RNA LV Kit Large (Roche, Indianapolis, IN). Образцы РНК были нормализованы до 2 нг/мкл в воде, свободной от РНКазы, и хранили при -20°С до дальнейшего использования. Уровни мРНК МАРТ определяли количественно, как описано в Примере 5.

Измерение тау-белка в ткани мозга мыши

Предварительно взвешенную замороженную ткань экстрагировали 10 объемами (вес/объем) буфера для экстракции, содержащего 10 мМ TrisCl рН 7,4, 800 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 10% сахарозы, 1% коктейль ингибиторов фосфатазы 3 (Sigma # Р0044), 1% ингибитор протеаз Set III (Calbiochem #539134). Гомогенат был приготовлен с использованием дезинтегратора тканей PreCellys (20 сек, 6500 об/мин). Затем гомогенат центрифугировали при 10000 х g в течение 20 мин при 4°С и отбирали супернатант для анализа.

Уровни тау-белка в экстрактах измеряли AlphaLISA с использованием набора Total Таи AlphaLISA, поставляемого Perkin Elmer (каталожный номер AL271C). Антитела, используемые в этом анализе и входящие в набор, представляли собой ВТ2 и Таи-12, оба из которых связываются с центральным участком тау-белка. Экстракты разбавляли буфером для анализа HiBlock, а затем 5 мкл каждого образца использовали для анализа. В остальном анализ проводили, как описано поставщиком.

Результаты количественной оценки мРНК и белка представлены в Таблице 11.

Из этих данных можно наблюдать, что, даже при довольно низкой концентрации в 25 мкг для соединений по данному изобретению, наблюдается снижение более чем на 20% в большинстве участках мозга, в то время как контрольное соединение при этой концентрации практически не показывает целевого снижения.

Пример 8. Зависимость «доза-реакция» in vivo и динамика развития у hTau мыши

Зависимость «доза-реакция» двух AS О (CMP ID NO: 9103 и 49 189) оценивали с использованием трех различных доз (25, 50 и 100 мкг), а целевое снижение измеряли в выбранных участках мозга через 1 неделю и 4 недели после введения. Для сравнительных целей два соединения предшествующего уровня техники (CMP ID NO: 66 1 103 и 671) были в некоторых дозах включены в однонедельное исследование.

Эксперимент, по существу, проводился, как описано в Примере 7. Однако тау-белок не измеряли в исследовании зависимости «доза-реакция», которое проводилось в течение 1 недели, поскольку период полураспада тау-белка превышает одну неделю. Результаты приведены в Таблицах 12 и 13.

Из данных в Таблицах 12 и 13 можно видеть, что соединения по изобретению работают значительно лучше, чем соединения предшествующего уровня техники, в частности, при дозе 100 мкг. Также можно заметить, что снижение уровня МАРТ сохраняется в течение 4-х недель. Кроме того, соединения по данному изобретению показывают значительное снижение уровня тау-белка через 4 недели после лечения однократной 100 мкг дозой соединения.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> F. Hoffmann-La Roche AG

<120> ОЛИГОНУКЛЕОТИДЫ ДЛЯ МОДУЛЯЦИИ ЭКСПРЕССИИ ТАУ-БЕЛКА

<130> P34850-EP

<160> 67

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 134004

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 1

acggccgagc ggcagggcgc tcgcgcgcgc ccactagtgg ccggaggaga aggctcccgc 60

ggaggccgcg ctgcccgccc cctcccctgg ggaggctcgc gttcccgctg ctcgcgcctg 120

cgccgcccgc cggcctcagg aacgcgccct cttcgccggc gcgcgccctc gcagtcaccg 180

ccacccacca gctccggcac caacagcagc gccgctgcca ccgcccacct tctgccgccg 240

ccaccacagc caccttctcc tcctccgctg tcctctcccg tcctcgcctc tgtcgactat 300

caggtaagcg ccgcggctcc gaaatctgcc tcgccgtccg cctctgtgca cccctgcgcc 360

gccgcccctc gccctccctc tccgcagact ggggcttcgt gcgccgggca tcggtcgggg 420

ccaccgcagg gcccctccct gcctcccctg ctcgggggct ggggccaggg cggcctggaa 480

agggacctga gcaagggatg cacgcacgcg tgagtgcgcg cgtgtgtgtg tgctggaggg 540

tcttcaccac cagattcgcg cagaccccag gtggaggctg tgccggcagg gtggggcgcg 600

gcggcggtga cttgggggag ggggctgccc ttcactctcg actgcagcct tttgccgcaa 660

tgggcgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg gaggggtccg 720

ataacgaccc ccgaaaccga atctgaaatc cgctgtccct gccgctgttc gccatcagct 780

ctaagaaaga cgtggatcgg gttctagaaa agatgactcc ctgcacgccc ctccctgcac 840

ctcccgagca gtgattccga cagggccttc actgcccctg attttaggcg ggggccggcc 900

ccctcccctt ttcctccttc agaaacccgt aggggacatt tgggggctgg gagaaatcga 960

ggagatgggg aggggtccac gcgctgtcac tttagttgcc cttccccctg cgcacgcctg 1020

gcacagagac gcgagcagcg ccgtgcctga gaacagtgcg cggatcccac tgtgcacgct 1080

cgcaaaggca gggttcacct ggcctggcga tgtggacgga ctcggcggcc gctggtcccc 1140

gttcgcgggc acgcacagcc gcagccacgc acggatgggc gcggggctgc aggtgcatct 1200

cggggcggat ttctttctca gcgctcggag cgcagggcgc ccggcgtgtg cgctccctgc 1260

cggaggcgcg gggctggcgc gcagggctcg cccctcactg cggcagtggg tgtggaccct 1320

ggtgggcgag gaagggggag gataggctgt gcctcctccc actcccgccc ccagcccccc 1380

tttttttccc cctcggaacg cgaggtgcca tcttttttcg gcgtgtcacg tctttacggt 1440

gccatgccaa accgggtggc cgggcttcat aggacagggc ggggcctggc attaaaggga 1500

gggggacaat cagcgctgaa atcttggcgt tttgctgctg cgggcgtgag cactgggggc 1560

gttcgcccag caccttcttc gggggctctt tgctttgtct gtagaggtta cgtgatctgc 1620

gctcccagcc ctggtttctg gcttttattc tgagggtgtt cagtcaacct cccccctacg 1680

cccatgcgcc tctctttcct ttttcgctcc tcatttccga gcccattgtt ggatctcgag 1740

gcttgctggg ttcgatgaac tcgagtcaac cccccgaccc ccggcacgca tggaacgggc 1800

gtgaccgcgc gcagcctcgt ctcggagtct gccggcgccg ggaagcttct gaagggatgg 1860

gattcgagtc tccgtgcgcg ctgcgggcgg cggcagaggg atctcgcccc tccctacacc 1920

ccaagtgtcc tgagggccac gccacaccag gttgcccagc gagggacgct ggctacccat 1980

ccggggatgg gtggggagcc ctggcggggc ctctccggct ttacgccctg ttgcttcgcc 2040

tggccggaga atgtgaggaa ggggcataag gttactggtg cttcggccac acccatcttt 2100

ctgagcccac tggactgggc gcagaggggg gattgccatg gaaaccacag gtgtccggag 2160

aggggatctt ggggctggcc tcaccccttc cctgcggaga ttggggaccc tggggtaggg 2220

ggagccgcgc ccagtcggcc tcctggagga cacgggagga agccccgaac ccccgcgcct 2280

gaggctgttt ctgattggcc cctggaggcc gcagacacgc agataggcgg ccctgggtgt 2340

atttttatta atattatgtc cgtactgatt aatattattt atcttaaata aatttcaccc 2400

gtgtccaagt tcaccgcgcc cccaaaaccg agtctggggc ggcaggggga actcctggcc 2460

aacgaatcca tgcctcgccc tcctgtgatg aacctggtac gcacggtttt ctggttaatt 2520

ctatcgctga aaactggtgc ggggggcgca cttctgagac ggaagagcat ctaggagctg 2580

aatcctccac gcgggtcgcc caggttgatc tgaatttctg gggaatggct tggctgcccg 2640

cccgggacca ggccgaccct ccttgacggt ggcgtagagg gctggagcct gggtactgcg 2700

aggctcctcg catggctggg cccgccgcga ggggttgcag agcggctcag ggatcgattc 2760

aagcatcgtc tctcctccct cgcccccaga cagagctggg cgcggggttc cccttccaga 2820

tggagcgagg gtctcggggt ggccccggaa aaggggagcc cgcggccacg gctacgtatt 2880

gccatctcgc gagcagagat gtcacctcct gcctttggag gaaagggagc ccggtgggga 2940

tgagcgcatt tagcccaatg ctgggaacaa agcgcactcc gcgcttctgc gatttcgctc 3000

cattttgaaa tgtgttggcg ctttggtggg gccgctgcgg tgggcaaggc cgggggcgct 3060

gttaatggag gaacctcagg gggacggtcc ttcgtaggaa actctatcct ggctctgcgc 3120

gcgctttaag gaaatggctt ccctccagga cctcgaggga tgcagctttt gcgcggatga 3180

cggtggggtg ctgaaccagc cggtgcgcct ctggaaatgt ctgggcacgg atcctggggc 3240

catcgacgac tcctccccat tcccagcagg cgggagctct tacattccga gcgagtgacc 3300

cctctcaccc tctggcgctc acacacctgt aactccaaac ctccgtctca gaatggtcca 3360

ggctggaagg gatgatgggg gctccgacag cgactgccta gctcacccct ctgcgtgctc 3420

aggctccagg ctcagcagga ccaatttgag ttctatctga tccccctcgg ccccttaact 3480

gacccatcct acaggagaca gggaaatgtc tttcctaccg cggttgattc tggggtgtca 3540

ttttgtgttt tgtgatggct gcttatattt actgtataag cattgtattt actgtataag 3600

cattgtatta taattactgt ataagctgct tatatttact gtataagcat ctccaaatcc 3660

tccctctacg taaacaaatt aatggataaa cagataagtg tatcccctgc ccccacccct 3720

gctacgcagg tccggagtga ctcttgaagc tcatacattc cttggccaag tttgcttctc 3780

taacagatgt ttatatagca ataacctggc ttggctcttg ggttcacctt tggacgattt 3840

ggggaagggg cttgttggct ttgctgggtt ttggatgagt gacagtccat gactgttcct 3900

gctggaaggg cgtgactttt aagtggtttc taatatcagg cattgctcct ccgacaggaa 3960

caaaagaaat ggatactgcc cataaattgt tagaaaactt agaatcgctt tgattgagga 4020

aaggttagat ttattccggt tggaaaaagt ggcctttcta ttaaacgtgc cctttgaccc 4080

tcatgccctt ggaggtcggt gccagcctgg agatgggata agattgtggt tttccttctg 4140

cctttttaac atctgttgtt acagtccatt tgttgaaaat ttaaagaaac tgttttattc 4200

cactttccct cagcatttat gtgtgtggtt tcagtagctc tgtggctata tgtacgaaca 4260

cgtgttattt ttccaattgg acatgtgata attttccaac tggaccttgc cttctattga 4320

tgtatttatt tagcatcttc cttactccct ccttgaaaaa gaatcactca aaaacaaata 4380

aaaacagccg taggggccta atacagtgct agacatacaa gaggtattcg gtccatacca 4440

aatggatttt atccatgaag gataaatggg gaaatacagt gggaagcagg tgggaaactg 4500

cgtttgactc tgctctttcc tccaccacca ctttcctcat caccgtgttc agagaccccc 4560

aaagccccct cacactccca gaaacacccc cctggccact cctaacttgc catgcccagg 4620

agttaggtgc ttccactagt gacatggagc tggcgtttgg ggggcacctc agcaggtgac 4680

gggaagagaa gaccccagcc tcaccagctg ggctgcagca gggagaggag tcctcatgtt 4740

ccagcaggga ctctcagctg ttttcctgta aaaccatggt tctcaactgg gggccactga 4800

gatgtctaga gagatgtttt tgttttcaca actcggggag ggtgctactg acatcttgtg 4860

ggtagaggcc aggaatgctg ttaaacatcc tacaaggaag gcacaggaca gtctcctaca 4920

tcaaaatatg acccagtccc aatgtcacca ctgctggggt tgacactggc actgctatct 4980

taattacatt cattgagtgt cttttaggag gccctattct aagtgcttgc taagattatc 5040

tcatttaatc ctcacaacac ttccgctatg tagcaggtgc tgttattatc tccgtgatgg 5100

ggaaactgaa gcacagagag ggttagtaac ttgctaaagg tcacagagcc agtgggtggt 5160

ggagctggtt gcctgacact agttccctcc cctctcagcc acatgtgggt ttacttggcc 5220

attgtggact agtctgggaa cccagatatg atctataaca ttgacccagt agaatattga 5280

ttccaaaacc actgtctcac aaatgaattt ttacaagagt ctgtaatcgg agcatgaccc 5340

agaataaggt tagggagatg tggagttaaa gctctcaatt tcttatctgg ccccgacaca 5400

gagagcaagg catttcactc tacattggtg ctctgtttat aaaacaaaga gcaaatatct 5460

cttcctaagg tccttaaacc tcttccccca atccagggtt tctggactgc tctgccatat 5520

gacggggcag ctggtttgat tgacccaggg aaggctggaa atcaagactg ggggatcaag 5580

acgtagattc agtgtggcca aggtcaagtc tctgaggttt agggacatca gatccccagc 5640

ttaggttctg tacctcggca aggtgaaagc gttggcgccc actgatgagg cctgctctga 5700

gattgtgggt gtgggttgag ttgggtgggc ataggcaagt cctcttgtaa gaatcttttg 5760

gcaaagatgg gcctgggagg cttttctcac ttcctggggc ccaggctttg caataagtat 5820

tccattatac tgtggtacct tggggctacc tgagaatcct ctgtctcgcc cctgttgcct 5880

tgccaaagag tttgctgtcc aagaattcct ttcctgtctc caggtgccat gctcctgcca 5940

cctctgccag gttccctgcc tgcccagatg gctcccaact gagtgtgagg aggaatttga 6000

gacaggtttt gagctttctg ggttctccag ttaggaaact ttctgtaagc atgcagatag 6060

aatgggcttc agcaaaatac aaactcgaac aacttccatg tatagtccct taattttctt 6120

tgcttttttc atatttcatc aggctccatg ctgagcccaa tcagggaccc gatagaaatc 6180

caaacaccat gtcagcgagt ccccaagaaa tgcattttgt gccaaggcta ttcaaggaag 6240

gtttgggagc agctcaaggg cagacactgt taccctcccc caggtcccca gtgcagggca 6300

gtgttctgca tgtggaggca gtttggccta atggttaagg aggtaggctc tgatcgggcc 6360

tcctgggcac aaatcccagc tccctgctca ctgtgagacc taagccatat tgtttagctg 6420

cttggagagt tttttgtcat ccacaacttg gagtatgatg gtacctgtct cacgggttgc 6480

catggggttc acacaagcta acccggtact cactagggcc aagcacatag taactgctca 6540

gtaaatggca tcatcggcgg tgtcctgtgg atgagtgctt gtgattggct gaatgaccag 6600

aggggtctaa agatcctggt gatggaatca gttgtacaga taaattgtta cactgagtag 6660

ggatcaagat aggaaaagtc ggcaactacc cagctcccct gcaccaaact gggcagaagt 6720

ggatcctctg aaaattgcac acacccatgt ttaaatgtac acacagaact cttgccacag 6780

gcaagcggag atttgtcatc tgctgtccct gcctcatctt cttcctgaaa tccactccat 6840

gccaggaata aactgcatgc tctccaccag cccaaactga cctgccttcc cgccagccat 6900

cccgggcagg gtgacctggc ttagtacatc gggttcagag atctttccag tttactcgtt 6960

gaataaaaag tgagggctga tcgagaaagt aatggcagtc agggaaggcg aaggaggtaa 7020

agaagagatt ttacaaatga agtaattcaa cagagtgctg acattggtaa actggcaaac 7080

agatttcagg gtggttggtt gagagtagag tagaaaagga ttaaataaag caaacttgtg 7140

gtgtactgaa tcttaggaat tccatgtatc caataagtat agtcatttat gaattaataa 7200

attcggccta agaagccttc ttatcgctta aatcaagact aagtaacaat atatcagttt 7260

taaaaagtca ttatatcaga aaatcattta aatgatacac atagatttcc aagattttac 7320

tttaaccgaa actatataaa tgtgaatttg ttcacccatc ttttgacaca gggctcaggt 7380

cttctcttgg tgtctggatc agccagttga aatttcttgt ctgttttgcc tatgccacat 7440

taataatgca ctgtctgggt cctccgattt cagtttggat tttgggttta cattgtggag 7500

tcatctgaat gcagaatcct tcagggattt tacttttttt tttttttttc atggtcttta 7560

ccatcccatt tgatagtaaa tattactcac ctttatgaag tctttccaaa acattcaact 7620

aaattttctt aaaatcattg aatgatttga agagcttatt cctcagcact tttactccat 7680

cagcttgcac cttatttttt aatctttttt tgagacggag tctcgctcta tcgcccaggc 7740

ttaagtgcaa tggcgcgatc ttggctcact gcgacctcca cctcctgggt tcaagcaatt 7800

ccgcctcagc ctccgccgta gccgggacta caggtacaca ccataatgct cggctgattt 7860

ttgtattttt gtagggatgg ggtatcgcca tgttggccag gctggtcccg aacttctgac 7920

ccaagtgatc cacccacctc ggcctcccaa agtgctggga ttacaggtgt gagccaccgc 7980

gcccggccag cttgcacctt atttaggata tgtgattatt atagcaagtc tggtgtacat 8040

acaagatttt gaatgggcac agatgacctt tagtaagtgc ttggctgtga taagaggcag 8100

tcctgactgc agatcaggct gtgtggaccc cagccttgca tgtttacaga ccttcatgtc 8160

ttattcttac agggtatcag aagaacacct actggggaaa cttataaatt agtaaaaggt 8220

gggcattctc cccgcccatc ttctgtctgt ctgccaggac tagcacagca ctttgaagtc 8280

attcacatag aatcccaact taagagggta aaatcctcct caacagactg aaaataagtt 8340

taaattccct ttgctatatt aactcccctg aggaaagagt cttagatcaa tgtccaacac 8400

taaaaacagt tttaaatcag caagtgagaa ttaaatctga agcaattgat aataatgttt 8460

cattcattcc tctcctttgg ccccgtccac cctactgcta aatccaggca tcaaagagaa 8520

gagggacata attatctcta gtcccagctg ctggttttcc ttccagccta tggcccagtt 8580

ttctgtttta ctgagaaggc tggtgatgtt atcttgggat ctaagtctgc agtttcacca 8640

caaaaagtcc agggatgcac tttcatgctt gtgtcctcct ccctgggata gcaaggatat 8700

tagaagaccc ctggctctgt aattgcttgt catgtgctct acagacgcca cagaatgcca 8760

agaacgaagt gctgggaagg acaaattcat ggaaccgtgg gacggtgctc ctcccccagc 8820

gtaaaggaca gctcctcctc ctgaattgga gccagcgttc taaatcatgt gtcaacagag 8880

ttgtcctgga tcggatccag ttctgccatt gatttgcagg tcatttcagt ggtacctgtt 8940

tccagttgtt cttaattgaa cagtggcacc aaactattgt cttgcctcat ccccctccca 9000

tggcctgtcc cccaaaaaga gacttcttgg gtaattaatc agggcaacat caggcagtct 9060

gggcgcggtg gctcacgcct gtaatcccag cactttggga ggccgaggcg ggcagatcat 9120

gaggttagga gattgagacc atcctggctt tgtgaaaccc cgtctctact aaaaatacaa 9180

aaaattagcc gggcgtggtg gcgggcgcct gtagtcccag ctactcgaga ggctgaggca 9240

ggggaatggc gtgaacccgg gaggtggagg ttgcagtgag ccgagatcgc accactgcac 9300

tctagcctgg gcgacagagc tagacttctt ctcaaaaaaa aaaaaaaaaa ggaatctctt 9360

tggttttata tatttttttt tatatatata atatatatta aaatataata tatatattta 9420

tataatataa tatataaata tattatatat tatatatttt tatatattat atattatata 9480

tattatatat tatatattta tatatttata tattatatat atttatatat tatatattta 9540

tatatattat atatttatat ataatatata ttatatatta tatattatat attatatatt 9600

atatatttat atatattata tattatatat attatatatt atatatttat atattatata 9660

tttatatata ttatatatta tatattatat atttatatat tatatattta tatattatat 9720

atatttatat atattatata ttatatatta tatatgtata tattatatat gttatatatt 9780

atatatattt atatatataa tatattgtat atattatata tctaatatat tatatatatt 9840

atatatatta tatattataa tatatattat atattatata tatttttata tatataatat 9900

gtataatata taatatatat aaaaacatat ataatatata ttatatatta tatatatatt 9960

atatatatta tatatattaa atatatttta tatatattat atatattata tatattaaat 10020

atattttata tatattatat atatatacac atatatatat ataaatgagg ccaggctcgg 10080

tggctcacac ttgtaatccc agcactgtgg gaggatcact tgaagccagg agtctgagac 10140

tagcctgggc aacaaaacaa gatcctgtct ctacaaaagg aaactgtaaa aattagctgg 10200

gcatgatggc atgtgtctgt agccctagct acttgggagg ccgaagcagg aggatcgctt 10260

gagcccagga gttcaaggct acagtgagct atgattgtcc catagcactc cagcctgggt 10320

aacacagcaa ggccctgtct ctaaactttt tttttttaat tctatttata tttacatgta 10380

tttaaatgtg aatattcact acctatttgt tgcatgcctg cattttttat actgggcttg 10440

ccaaaaaccc gaacagcttt ctactttgac aatgtatcag aatttaaatc agcaatatgt 10500

taataagcca agcaaaggtt atatatgcaa ataaaactgt tgtctataac ctcctgttac 10560

actggggcac agcaaaagtc atggtgtagt cgcatgtgaa cctgtccctt tcatagctgc 10620

tcattgccag gaaacatcag gaatagccat ttggaagagt catcagccct cccaccatcc 10680

gttttctgtc ttgtcttttc cctatgagca ggggaaattc cacgctggcc ccaatcccca 10740

gtgcagcggc tcagcctctg cctctgctgc tggtccccat gaggccagct tagaaacgga 10800

ggattttgca gaacatccct aaatccgctt gaataatgaa gtgatcattc ataaactcac 10860

ctgaacctta ttaaaaccta tttaatattt ttcctggata atcctatagg gataacttgc 10920

ctcctgggct tctctccacc gggttcagtt cttcctttag tggtgaagtt cctcccttct 10980

tagcatctca actgtgcctg agaaaaggcc agtggcggct gcactctgtt ccctgtggag 11040

tgttaataaa gactgaataa attgaaataa atccctttca atgtcattaa gtgctataaa 11100

taatcatgaa ccaatgttcg atggctgatg agaaatgcaa gaaaaaattt ttaatcagta 11160

ggattcataa gttgacaatc tgggccaagt taaaaaaaat aaaaataaaa agacttttaa 11220

aaagatctta tcgtttgtta ccagtaagac tgaattccag aagcaagcta ctccctcatt 11280

tgtgggcccc tgttatcact ggctgcttag ggttgccaag ccctgaattc atttgtcaac 11340

taagagattt ttggccaaga ttaagatttc ccatgcctcc atatttccat ctgagaaatg 11400

gagattatac tgtcttcccc ctcagaatgg atgataatgt ggtctctctt ctgttcgcat 11460

agtcatagaa ctgaaataaa acaacttaag agaattcctt tgagcttctc agaagtgctg 11520

cagggctggg ggatgcctcc caggagccgc agtcaggtgc tgatctgaag tctttggtgg 11580

gctgacttta gcctgacctg aaatagtata gctgctgcca cctggctccc ttagcgtcag 11640

tcagacggtg cagctggttc ctaggggtga gggctgagcc agcagggtcc gtgcccagga 11700

gggatgcatg ggtggccaca gcccagcctg cactgatctt gtctgtcccc ttctttggaa 11760

ggaaggagcc ccaaaccagg gtgcaagaca gtgggtgggg gtgccttgag catgacctca 11820

agtgatttcc agcccctgcc agtgctgact tctctgggga agggctggga cttccttctg 11880

ggctcaagtc acgacccttg gatggaattt cctgggagct tttctgtttt ttctggagtt 11940

ttcagttttt tcctaaccag acagggactt ggtacagaat ctcatattct aattatgcct 12000

aggagcagcc tctccccacc actcacagtg tttagcatgt gacaggaatc gattaaggca 12060

tgagtgatta aattaaagcc aggcattgac ttggatggtg taatattctg acatctgttt 12120

ggtgtcaaag gcacggggca ggcgcgttaa ttgaactgct tgcacctggc atttgaattg 12180

agccagagcg gggctaaagt cagtttgcct tcaccctgta aatggagggt ttctccggag 12240

cgtggatggt gggaggtatt tcagggtgta tgcataaccc ccaccctgac aatggcccat 12300

ctcttctcca gcgtggccag gtttgagtgc cagtcctggg tgtccagtgg ccccatagcc 12360

ttgcgtttta gtaaaatgct gcccccatta ccacctggtc tgtgcacttc ggtcactgga 12420

atttgccatc ttccagtccc gaatgtggca agccatggag ccttaagctc ttctccctcc 12480

acatcctgga acagacccgc cagtttcttc caggcattgc ctcagtttgc ccctctgttt 12540

ccagtcacac tctcaccagc gataaaatga ttttagacct tatcatctca ccctcggatc 12600

cttatggaaa caataatgag ttgttccctg tttcaattcc aaaattcata tccaatccgt 12660

tttgcatgcc attgccaaat tcctcccaga gcaaccccgt cacctgccct ggccctctcc 12720

aagtgtggtc ctgccatggg catcgcctgc taagccaagc tggcctcgag ctgcctgccc 12780

gggtccccac accttggctc acctccctgc ccagtcccgc ctcctgccag cctgccctgt 12840

ggctccttca tagatgccgt gctctttctg ccccttgctc acccatggca gccttgcccc 12900

tctctccctg ccccaccccc tatttaaatt gacctgacct tcctcagtgt ccatcttccc 12960

cgaagctttc cccagccttg gcactcaagg tccagaggct acgcgtttcc tctcacctgt 13020

ggcagcgccg tgctccccag tgcctcacag tttccttctt gcccccgctt cctgtgtagg 13080

actcatctgc ccacaggttg cacgtcctgt gagggcaagg actgtgtctt atgtgacttt 13140

ccttctccag tcacagagct gggcacatag atagctcaaa accctcttta ttaacacagt 13200

tggatgttga gaaatcaaac aggccaatgt caaatgagct ctccttattt aaatcaagtc 13260

agttctccac ctcctagcac tcagttccag tactctatat acatggaaat aataaaaaac 13320

acatttcctt tgaaacattc tataatcgtt cctttgccct acttcagacc aacttaacgc 13380

actccccatt ggtccaaatg agttttgcta tacgaagatg ctgataataa tagcagcagt 13440

ggattattct gctaaaacca ttgcctcgtt aatcctcagt cccgaggtgg ggattattat 13500

cctcattttg cagagaagca aactgagact cagagatttc acagctgggg agggagccag 13560

ctcatccctc tgtccaggcc caagctctct cccgcttgcc ttcctgcctc tgcaacctca 13620

gagcatcccc catctggttc tactgcctgt gctagtcgtg caggagccaa aagacacgtc 13680

tttagtgcta aggactggag aagccatgcc ctccagcctc tgtgaatggg tcatatgtaa 13740

catgagcctg gagaaattat ttgaaaccaa aggcaagcct ctaaaccagg ctgctgcttc 13800

atggcgccgg tgacggcaga accaaattta gtgctgtggg caggtccaca cttatcaaat 13860

agagaagctc atttttcttc cggctcacat caagcatgaa aaatgttcac acataccccc 13920

cacacacaca tgctttccgg aggggtccat gtggctagag gctggaagat gtggatgaga 13980

ggagcctggc aggtaagccc agggaagatg acattcagct tcccagacag catctacagg 14040

gagaaattta attaaaagtg gggcggtttc cctgagcaag gcagacaaag tcagccctct 14100

actgttaaga aaaagggtca cagtgagagg ggaggtgagg agactgagtc tgtattttct 14160

agtctgttgg gctacactac ctgatccccc ttcctcaaaa atccacttta ctttccccat 14220

gtctacacca atgtggttca cactctggga ccaggaaaag ggggagtgat ggggaacaga 14280

gaagggagga gctcacacag ctgaggctgg ggttatgcat atcgaattac ttagaatttg 14340

caacctcaca gggtactttc atggcgttga aatacacttc ccacagccac cctccctcta 14400

actaaaagca agagtcattt ctcagttctg gtcttgcctc ccacgttctc ctccacattt 14460

aagaaaatcc accagctaca aagtgaagat accatatgtg atatcccacc ctagtttctg 14520

ttttatcagg gtttggagca ggtggagcag gcagagggat catttcagcc tataaattgt 14580

attaagggtg agtactgagt cattcttcaa gaaaagtttt agaagcatcc aaaactgaag 14640

ggtggagcca cctggagaca gtatcatcag tcctggcccc gagcatggcc tgcataggcc 14700

cccatggatc ccagcgggag ctgcagagtg cgggcacctt ggcacacagc cctgagtgca 14760

aaattaggag ctgggcagag ggcatctctc tgtcgccatt gggcagccca gggcacactg 14820

gtcatagcct tagaccacga acaccctgtg cccgggggac agatgcaacc agtgtgccct 14880

gggctgccca atggcaacag agagatcgac acctggaccc catgtcacgg ggactccact 14940

actaaggctc ctaagactgc caccttccag tgggataagc cctgcctcct actgggccca 15000

caatgtgcag agaacacttg ggactacctg gctttctgga tacacaaata ttgatccaat 15060

ctggactaat tagaaggtca gtcccaataa caaatcgaag tcagctgggc gtgatggctc 15120

actcctataa tcccagcact ttgggaggct gaggtgggca gatcatttga agccagaagt 15180

tcaagaccag cctgggcaac atagcaaaac cctgtctcta ctaaaaatac aaataattag 15240

gctgggtgtg gtggctcatg cctgtaatcc caacagtttg ggaggctgag gcaggtggtc 15300

acctgaggtc aggagtttga gaccagcctg gccaacaggg tgaaaccccg tgtctactaa 15360

aaacataaaa attagccaag catgatggca tgtgcctata atcctggcta ctagggaggc 15420

tgagacagga gagaatcgct tgaatccagg aggtggttgc agtgagctga gatggtgcca 15480

ctgcactcca gcctggttga cagagcaaga ctctgtctca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 15540

aaaagccatg cctggtggag cactacgtgt aatctcagct atttgggagg ctgaggcacg 15600

agaatcactt gaacctggga ggcagtggtt gcagtgagct gagatcgcgc cactgcactc 15660

cagcctgggc gacagagtga gtgagactcc atttcaaaaa aataataaat ctgagtcact 15720

ttaatattgt tatttggatg tcaacctcta ggtgtttgag acaggagagt gatatggggg 15780

cactggaaac acacaggcac ggggtgtcct cacacttggg tagcccacac gatgtgattt 15840

cagggtgctg ggaggtcccc ccactcccca aattactaac aagtggatag tactttacag 15900

tttatatgat ctcatttgat tcttaacatg agcctgtgag tgaaaaattc cttcccctct 15960

tctacagatt aggacgttga gattcaggga ggttcagagg gattcaggga agtcaagtgg 16020

cacctggagt cccgtggcta atttgaggcc ggtaggggat tcgaacccag gatttgtgct 16080

tcttatgcct gggcttctgc tccctggggc atggtcttcc ccctagcttt cccattcact 16140

gctttagcct aggggtccta ccctttatta aactgccagt gcctcactgc ttttctcccc 16200

caaagacaaa aaaaaagtgt ttttgctttt gttttgtttt tcatgggcag agacctggaa 16260

tttcagcttg agaatttgtg ccatatgata aataaatcaa cagatggctt tttccttaaa 16320

aaaaaaaaaa aaaaaaacta agatgtattt gcagtgaggc ataatttgta ccaaaaagtg 16380

ctcaccacac tgtagtcatg ggggcaggag gcagccgcgg gtgaagggag aaatcttgga 16440

gtccaggcag cccccttctg ggctgaactg gggagctggg ggtgctgcca gccctgccag 16500

gttctcctag gaggcggcag ctcatatggc tgtgggagga ggcagaggga gcctcatatg 16560

cacccacatt tccagggatc tagaagacag aaggaggaaa accaccatca tgttaaagca 16620

gacagttagg taacacatcc tgtaatacaa gttatttttt ccacatctaa aggctaaaaa 16680

tagttgttag aatttaaaga taattggtaa atgagtttct atccttctag tttcacatca 16740

aatggaatca tgctgccttc acatcactag tgcccgttat ttgtgtttaa tttccacaat 16800

gttgtctaat tccactcttt gggcttcccc agggatccag cctccctcac tcgcccatcg 16860

cagggagatg ctttattcat ctttgtgtct tctgtgccgg gcatagcgca tggcacagaa 16920

taagcactca gtaattgatt cacgagtgaa taaatggatg agtgggtgag ttcaatattg 16980

actacaaaaa ccctaaggcc acactggtga gtggctgcgc ctgtagtccc agctgctggg 17040

gaatctgagg caggaggatc tcttgagccc aggagtttga aactagcctg ggcgatatag 17100

cgagaacctg tctcaaatga caaaaacagg gccaggtgca gtggctcacg cctggaatcc 17160

cagcacttta ggaggccaag atgggaggat cacttgaggc caggagtccg agaccagcct 17220

gggcaacata gggagaccct gtctctacaa aaaatttttt aaaaattagc tgggcatggc 17280

ggtgtgcgct tgtagtccca gctactcagg aggctgaggc aggaggatca cttgagccca 17340

ggaaattgag gctgcagcga gccatgatgg caccactgca ctgcagcctg ggcgtcagaa 17400

cgagacctgc tctcaaaaaa acaaacaaac aacaaaaaaa aaggctttct taaagagact 17460

tgagaacaga aaggggaaca gatacataac ttatatattt atttgttcat ctttccacct 17520

tcctggaggg tggaggggaa caggtctgta tttggagttt tgaatgctaa aagtgggaat 17580

acatgtactg tttgccatga tctgttcaaa agttaagcca aatgccttag attctcctga 17640

aaactggaat gccactgtaa actataagcc ccacttcaaa gataaaagat cttgatgaac 17700

agggctgggt ctgtggactg ggcctctccc caccacacaa ggaagggtgg tgccagttga 17760

aggaaaatca cttaaatcct tgctgtctcc taataaggtg tggtcccagg tagggctgtc 17820

agaattagca aattaaaaca cagggcatct gtgaaaatta gaatttcaga taacaacaaa 17880

taattggcat aggctgcata atgtccctca aagatatcag gtcctaatct ccagaacctg 17940

taaatgtgat cttatttgga aaaggggtct ttgtagatgt ggttaaatta aggattttga 18000

gatgggggga ttatcctgta ttatctaggt aggtcctaaa tgcagtcaca ctcatccttg 18060

taagaggaag gaagagagag atggaaaaca cagaagagaa gacaatgtgg tgatggaggc 18120

agagattgga gtgaggtggc cacaagccaa ggactgctgg cagctaccag cagccagaaa 18180

agtccaggaa ccaattctct cttggagctc cagagggagt gtggccctgc tgacacctta 18240

gcttcaacct agtgatcctg attttggact ttggccttca gaagtgtgag ggaatgaata 18300

tctgttgttt taagccacca agtttatggt catttcctac agcagccaca ggaatcaaaa 18360

acagtaagta tgtcccatgc aatgtttgtg acacacacca aaaatattac ttgttgttca 18420

cctgaaattc aaatttaact gggtctcctg tattttattt ggccaaccta gttcccaggc 18480

ccaaagaaag aggcttttga aatttgcaag aaagctggtt ggagctgtca gaaagtggac 18540

tttgtaaaca cagtaccacc gaaccaattt gaactgtact acctctagac aaaagagagg 18600

gcagtcagac agttgttcgt gatttcttct ttcaacagtc atttgagcac ttactacaaa 18660

acagaagcta tgtgtaaggg tggaggcgtt agctgttaat caggacctcc aggctaagtt 18720

tctgtattag tccgttttca cgctgctgat aaagacatac ccgagactgg ggaatttaca 18780

aaagaaagag gtttaattgg acttacagtt ccaagtggct ggggaagcct cacaatcatg 18840

gcagaaggca aggaggagca agccacatct tacatggatg gcagcagaca gacagggaga 18900

gagagcttgt gcaggggaac tcctcttttt aaaaccatca gatctcgtta gacttattca 18960

ctatcaagag aacagcacag aaaagacctg cccccatgat tcagttactt cccaccagat 19020

ccctcccaca acatgtggga attcaagatg agatttgtta ccatatcagt taccaaccct 19080

tccagataaa tcacgtgaaa tatcgccatt aacagagtga gctcaggtgg ttcttcagtg 19140

catttctgat acctgaacct tccctgggaa tttcacagac catcaggctc tccacccttt 19200

gatagcagga tagcagggcc caggttctgc aggaggagat gttaccacag gcctgaaagg 19260

gagggagggg cagatgctac aggaagatgc tggctctgga ttcgctggag gagctttcaa 19320

gggaagtaga tacacactgt ctccatcatt tcatgtccat cacactctaa aatgctttgg 19380

acaagaagca aatgttaaag acaaatgtgg cccattttcc tgtacaaaga gggctgctcc 19440

catgccaggc tattggcact ggtgggcatg aggcttctct gctgccctgg ccggggggtt 19500

ctctcactca ccattggctc tctgacacct ggagagacca ccacccttgg gctttcatga 19560

tgctcacaga atccacactg ttggagcttt aaggagcctg gatcaactgg aacaggcagg 19620

gagtactagg acagcccagc attgccccaa aatatccagg cctgataaaa gagaaaaaca 19680

ggtagctcac aggaaaagga taaaaaaagg aggagggatt taacatgaaa aggtgcttga 19740

tctccctcat aataaaaaga ctgctgattc catccaggca agtgacagaa aaaaaaaatt 19800

taatttaaaa agactgctga taaaaccaca gcgagacact gctgctcagg gatctgaggg 19860

tgtgggcagc caggctgcca cgcatcatgg gtcggagagg aagaccacac ccctggagca 19920

gagggcggct gatctgtcag atgccctttg acagcacctc agcttccaag aattaaccct 19980

ttctatgtga gcagaggcat ccatgggggg acacactggt gaatcatctg ttatgtagaa 20040

gtctggaaaa catcaggatg gaactggtga aataagtgtg gcctctgacg gaatggagcg 20100

gtccgtctgc actgctgcgg gtgcccctca gatcctgtgg gtcagtgaga aaagcagtga 20160

ggaacaaggc aggtactgtg tactgtcctc tgcgtgcaag gaaggccagc gcatgcaaca 20220

gagtccacac agacatagcc taactctgga aggaagaatg agaatgcagt ttcagtggtg 20280

gcctctggtg gggagaaact gggtgaaggg agatgtcatt tccatttctc tactattaat 20340

tttgtattac catgcttaaa tgttactttt tacctttttt tttttttttg agacagggtc 20400

tctctctgtt gcccaggcag gagtgcagtg gtacaatcat ggttcactgc agcctgaacc 20460

tcccaggctc aagcaatcct cccacctcag cctcctgagt agctgggact ataggcacgc 20520

ataccaccgt gcccagctat tttttttaat caagatggag tttttctatg ttgcccaggc 20580

tggtctcaag ctcctggact caagcaatcc tcctgcctca gcctcccaaa gggctgagat 20640

taaaacgtga gtcaccctgc ccagccaatt gctttttaaa aaagattaaa tgcatgtata 20700

cgctcaggca tcagcacact tggaaaggat gaaaatatcc ggaagaaggg ttcttttaaa 20760

aggctcctca agtgatgctg gcaggcatga cgaatgtccc tggtcacaaa agctctgatc 20820

tggcctaacc ctgtcatgtt agagactgga gtgcgtgtgt gtgcgcgcaa agtgtggggg 20880

gatgggggtg agtgtgtgtg gtgtgtaagc atgagtgtgt atgtgtgtgg tgtgggggtg 20940

tgtgctgtgt gagcgtgtgt gagtctgtgt gtgtagtgtg tgtgtgaagt atgtggtgtg 21000

tatgtgtgac gtgaggtgtg tgtggtgtgt gagttgtgta tggtgtgtgc atgagcatgt 21060

gtgtgggcat gtgatgtgtg tgtggtgtgt aagcatgtgt gagtgtgtat gtttgagcat 21120

gtgtggtgtg ttgtgatatg tgtgtggtgt gtgagcatgt gtgtgtgatg tgtctgtgtg 21180

tggtgtgtgt gagcatgtgt gttgtgtgtg tggtgcatgt gtgtggcgtg tgagcgtgtg 21240

tgtgcattgt gtctgtgagc atgtgtgagt gtgtgtgtgt tcagcatata taaggcatgt 21300

aactgaacac agcactttag agggctctcc tggagtcaga gggggtgggt aggaggagaa 21360

gggaggtggg ctagtgtgct gaagtatcta ctccttgtca tagtctgtga caacccagac 21420

tagcccatga gccaccctgt tccctgcatt tccaatgaga cctcggtgga catgttccct 21480

gaggtgaggc tgactgatgt catttgacga tcttgatgcc aaatcctttt atatcaaaaa 21540

caaccagaac actctctttt ctcttagtgc tttcacccag atgaccacat ttcatcctcc 21600

cagccactct gggccaggtg gcactgctgg tttgaaaggg aggtctcccc tggagtaact 21660

tccgtgggcg gattcacacc ctgcccacag tcctgtccca gtcagcccac catggtggtc 21720

tccggttcct ccagaattcc cgcttttcag ctcatcccca cattcccgga gggactgaga 21780

gcgcagcccc agggccctgc tctttggggg ccgtctctac acccagagaa gcagcaaggc 21840

attcctaggt ttctctttca gatgcagaac ttcagtgttc agagatgttc ccactggtcc 21900

tgagagggct cagttcagct ttaatgactg cgctgttgcg tgtgctctgc agagggcggg 21960

tggcccagcg tggctgactg cagttttcct gacgtggagc ccgagcctgc cccgctgttt 22020

attaattaag gatcactctg cttgcagaac cctgaactcc ccagaactgt gaggtgggag 22080

aaccccgaga ggccacctgg ccccacttcc cacctgctgc ccaaaccccc tctctgcctt 22140

cctgacagtc accccaactc ccagtgatcc ccatcaacca tctgacaagg ggactgagag 22200

ggaagagaaa ggaggggccc aaagaggaag gtaaaactgt cgggaacagc ccccaaatgt 22260

gtgacagcct tcagtggagt tgcccacttt cccttttctc ctccctgcag gacctccctt 22320

ctccccagtc ctccccaact tctgaggtta cattgagaaa agtctgcaga gaggtgccag 22380

catcacaagg tgttaaggac cacgagtttg gcattttaac agatgccaga gccacttgag 22440

aaatgtggta actaagccca gagaggtaca gttaacctcc ccagagtcac acagcaggtt 22500

catggcaaag ctggactagc acaggtgtcc ttcccctgca gatccccttc tgtgccccac 22560

atcacctccc tccagtgtct gggccacctg gagatgggcc ctcagactca cccggccaga 22620

ggtgccatct catgggagag gtctggccag gaagcatcga tatttgagat cccaagaaat 22680

gaagacttgg cctgtcagat gacagacttc ggtcatggga acacgtgatc tgttttacac 22740

atgcgtcccc tcagcagcag ctttccagaa cattcccact ttcttctgta gtgagaagaa 22800

ctctttccct gcagcctcct gcccaactcc tccttcagtg tctttgcttc agtgtctttg 22860

ataaaccatt ctgctttgca gagtgcgagc tctgccttgc agggttcgca tctgcctgtg 22920

ctgagtaacc aacgctaagg tcgagtggtc ggtcacctct cataagagct agggttgtct 22980

catgctgatg actaggactt gccctcaagg agaaaaataa atcaaaacaa aagcaaaaac 23040

agcaaacatg catctcttaa agaaggctct gagtccaggt aaatttcctt ccactgaagc 23100

agccaggctg aattcgaatt atctttgccc ctgcttaaaa actaatgcaa attttcctag 23160

agaatatcca ctaattcctg gagggggcat gggcattcct gatgcccatg agaggaccat 23220

ttgctcttcc ctcagtatgc taaataacag aagcgacatt tgttgctgga aagtatcagt 23280

gaagttaata aggtttttct tgcccagggt gagggaacag ttcccaatga caaatgctgt 23340

atgggaaggg gctgtagaac tgccagcccc tttggtccat ccgtaaagtg aactctgtgg 23400

atcctggagg attccagcgt cttttttttt ttttcttttt ttttaagaca gagccttgct 23460

gtcacccagg ctggagtgca gtggcacgat ctcagttcac tgcaacctcc gcctcccggg 23520

ttcaagcgat tctcatgtct cggcctcccg agcagcaaga ctacaggtgc gcaccaccat 23580

gcccgactaa tttttgtatt attagtagag acgggggttt cactctgttg gccaggctgg 23640

tctcaaactc ctgacctcag gtgatccacc cgcctcagcc tcccaaagtg ctgggattac 23700

aggcatgagc caccatgccc agccagcatc tttcattttt ctgtctgctt tggccctttc 23760

ctctctcact gtcttccttt tccatttcca aagtcagtcc atctcactat tagcacaaaa 23820

actgctagag cgcttgtcat tggtcatctc tccctgcacc tggctggtct gttcttggcc 23880

actgaagcgt ttcccccagc tgttgcttta atcattttat tgttattatg ccttacttaa 23940

gaaatggata tgagatgcat ttacctgtct cttcctgcca ctctgcagag ccagtaagat 24000

gtggtggaaa gggcccaggc tttggaggag ggctggctgg ggttggatct tggctgcccc 24060

ctactagctg tgtgaccttg ggtaagtagc tggacctctc tgagcctggt tcggaatcat 24120

agcacctctc tttcagggct gctgtaagga atagcagtgg tgtgtataaa gcagagcgca 24180

cagccagcaa ctggccccta gccacactgc tgagcaccta ctgtgataag ctgccattgt 24240

ggtgtgtgaa gcaaagggga aacatgcctg ctgtagtgag cttcctgtag ggcaggttgt 24300

agaaccagag gtgggttcca aggttacaaa gggactctta gtgtattagt ctgttctcac 24360

attactataa agacctacct gagactggat catttataaa gaaaagaggt ttaattggct 24420

cacattggct gggtgcggtg gctcacgcct gtaatcccag cattttggga ggccaaggcc 24480

ggcggatcac ttgaggtcag gaatttgaga ccagcctggc caacatggtg aaaccctgtc 24540

tcttctaaaa taaaatacaa aaattagctg gccatggtgg tgtgcgcctg gaatcccagc 24600

tactcaggag gctgaggtgg aagaattgct tgagcccggg aggtggaggt tgcagtgagc 24660

caagatcgcc ccactgcact ctagcctggg cagcagactg agactctgtc tcaataaaaa 24720

aaaaaaaaaa gaaaagaaaa agaattgcaa gaaataaatt attgtttatg agctatatgg 24780

tctgtggtac cttgttgtgg gactgggagt cttggcgtct ccctgaccct gcctgttgct 24840

gcagcaccgc tcagccctgc ctgctcccta cctgcctccc ctcggcctct cctgcctcca 24900

ccgggcccct ggtgcctcct ctagagacag tcctcctggg accgattgtg ttctcactta 24960

cacgaggcat ccaggactac agataaccag aggaaggggc gccccccccg cctgccctcc 25020

tccctggcat cctcacgctg cagaggtcag agcctcatcc cagcccctta cctgccccta 25080

ctctgtggag aaccgtggtc agttcgccag gccggatcca cgaacggcct tgtggaagat 25140

ggtgagctca cacccagagc tggctccgat gaccctgtct cctttacatg tttctacctt 25200

cccctcccta ccttccccca ctgctgggcg cagagtggag gcagatgagg tttaaagctc 25260

agaagggctt aaacgggttg gggcgcagtg gctcatgcct gtaatcccgg cactttggga 25320

ggccaaggca gaggatcact tgagcccagg agttcgagac caacctgagc aacatagtga 25380

gaccgcgtct ctacaaaaaa taaaataaat aaaattagct ttgcagggtg gcatgcacct 25440

gcagtccctg ctactcagaa ggctgaggtg ggaggatcgc ttgtgcccag gagtttgagg 25500

ctgcagtgag ctatgctggc accacagcac tccagcctga gtaacagaat gagatcctgt 25560

ctcaaaacaa acaaacaaac aaacaaaaga aggcttaaag ggggctccag gtgggcttgg 25620

cagcacaaag ctatgaagtt ctatcttaga cacaagttct gttactgggc ctttgcaggc 25680

tggcctgggt acctggctgc catagacagg gaaccttcca gatgagctgc aggcgtggag 25740

cacaggagcc agggtgctct tcctgggctc tgtccacagg cagaacgtac acagtctttg 25800

tacacgtccg gcggctctgg tgcctatttt tgtttgtgtt tttcttttgt ttggggggat 25860

ggatttggtt tcccccgagc cctctgtcct cctgtcacct ggctggtgct cggcaatgtt 25920

gaccagctgc ctggctggag ttggcagtgg ctaaggctgt gacagctaac atgttcctga 25980

gtcctctcat ttcttcacca taatgccctg ttgagtttgc agatactgtc tctgttttta 26040

tctcccgggg aaactgaggc tcagagtggc taggccacct tcccatggtc cctcagctca 26100

tgagggccac acagggcatt gcggtggcct tctcctcagc cttgaccctc cggccccagc 26160

attgctgcct caaggggtct cctctgctga gccgtgcacc ttctgcctgg cagctccaac 26220

tctgtggctg tgttcagtgg ctcagcactg ccccttgacc ctccctggcc ttctgcggat 26280

gccagactgg agcactctga caaggtctgg ggtggttgta tgggtcctgt gacctctata 26340

cacctcccag tgcctgggaa tcctgcagat acaccctcct tagccgtccc taaccataga 26400

ggacatttct gaggtccccg agagagtggg gcacccctgc aggatccaac tgctgggccc 26460

aggaaggata gcagcagcat gaggggttcc attagccaca aactcacggc atggaacctt 26520

cacccacctc gcccctcatc tgctgtttag cacctggcac gccgtgtata cttactgatt 26580

attacatttt aatggcaaat tatagtggca aacgtatgca tctttgcaca attgttgtac 26640

agcatgatga acaagtcatt aatagtaaag aataaatgtg aaagtgagaa aaatctgact 26700

gccaaagttt ttactccttc cttccctccc cagactttta aatgaaagtt tagggataat 26760

cccttagttg tcctgctagt aggacttgca attaaaagaa ttgggccaag aacacttcta 26820

cgcttctcct tttaggtttg ggtgtaaatt cggggtattt ctcactgatg aaagcctggt 26880

gcagggcaga ccgtgggaag ctttcatttc cggaatggac catcaacatc ccttggagaa 26940

gaattctctt ctccagaccc agacctggtg tcctggcacc cattgggcaa gtgggtccta 27000

gaagacaaac ctggtcagag cctggaggct gcttagcatt ccccacgcac attagcagct 27060

cggagagctc aggaagccgc agcccctcct tgcctcacca gcctggatca ggacagcatc 27120

ccctggaaga cacacagggc ctggcctctg attacccagc ctggagggaa agctcaatcg 27180

agcatcatgt cacccggtgc ccccatgcag ggtggcactg gtgagacccc caagccaatg 27240

ataccacctc acaggagtgc aggcccattg tggccagatc atcttgactt ttcaagataa 27300

atcagaaatc gtatttccat gagatatccc tatttgcaag tgatggtgac taaattagaa 27360

gtttttgaat attgtaacat gttcgtaggc tgtttgtctg gtttaaactc tatctggagg 27420

aattcaagct agacttcagg aataacttct tgaggcaagg attttgagac cttagggaaa 27480

gaaggacgtc ttgggggtat tctgactgtt gtcctcctgg aagggaagaa cagagaacta 27540

gaagactgcc cttagcgaag ttcaaagcac ctaagcccgg gaccctcagc aagtgttctt 27600

gagtcacaga ttctccctga ggcgcctctt tctggctcca tagaatggct gattctgtaa 27660

ctcggtgagt ttgctttttt tttttcctcc atcacccagg ctggagtgca gtgaagctgg 27720

agtgccgtgg agcgatcact gcaacctctg tctcccaggt tcaagcaatt ctccttcctc 27780

agcctcccaa gtagctggga ttacaagcat gcagcaccac acctggctaa tttttgtgtt 27840

tttaatagag acggcccgaa gtgctaggat tacaggcatg agccaccgcg gccagccata 27900

actctgtgac tcttgttaca aaggccttat attttgctct ttgagggtgg ttttggtttg 27960

atgcctgttg gttgccatct tttaactagg gatgttttat caaaatgccc agccaaagtg 28020

tccaaacaaa ttatacctta aagtttgaaa atgtctggca cttctaattc aatgcctgtt 28080

gtgccaggca ctgggctgct gaggaactga gtcccgtccc tgcaggctag ctagagaaca 28140

cacacacaca cacacacaca cacacacaca gagtggtctt acaagtcagt tttatattct 28200

acctatatgc aataaaggta ttattatgtt gaggtgcctt gatataaaaa tttttcttaa 28260

aggagaggat gcctaaaaca ggcattacct gaaacctcct ctctccagca ttggttgtct 28320

tctgtcatga ctcagggttt tcactgagaa tgggatggaa atgtggtcta aagatagggc 28380

caatgttggg actggatccc ctctgggaag tcagaccagg ctagggcagg tccttgaagc 28440

catcaggaaa agcctctgga gccagaaaca aaacaaaaaa aaaatggtgt taactaaact 28500

cagtctcaaa tcctgaatag gactcaagtc aagcaaaata attaaaggag ttagcaaagg 28560

gcaagtcaga gagaccgagc aacaccaatg tcttccggga gccctgtggc gagtgacaga 28620

gcctggactc tggagtagaa ctcatcttgt gtcttcttct gccactcgtt agctgggtga 28680

ccttgagcca agccccttaa cctcttggac cctatgttct tatctctaag taggggctgg 28740

taatatcttc ccctttgagg aatgccctct aaggggtgtt gtgaagattc ggtaaggtgg 28800

caggggtagg actcctggcc agaaacaggc acataataaa tgctaagtct ctccttctct 28860

ccacctgctg gatgctgtag atactaagga tttcgatgtg aatgagacaa aacccctgcc 28920

ttccaggagc ctttgagaat cagagaacta gacccatttc cagaacaagg ggatgcaggg 28980

tctggataaa gttttgggga tcaatagagc agagggctcc cagaggatcc catagggttg 29040

actcctaact caagggcatg agacaacccc caggaagggc accctggaag gggtccggct 29100

gtccctgatt tacttgtggg cactggggga atgcccggag ccatccagcc ctcagggctc 29160

tgtgtgattc tgggttcctc ccataaaaga taatcagatt ctttcacgtt aatgtctttc 29220

tccacctcat tgcacatcat gcagctattc attgactcag caagtatcag ctttgcatgc 29280

gaccttggcc tacccacttt agcttttagt aatagctccc ttcttgaata atacaaccag 29340

tggggaaaca gaacctaact cttacctctg ggaggcttat ttgctttgag aacatatgtc 29400

ctgcagtttt gttcatatgg cagtgaagtt tcgtgcacac actctagagc caggcagcct 29460

gggttcaaag cgcagctctg ccaggtccta actgcatgaa tttgggcaag tcgctcaacc 29520

tctccatgcc tgagtttcct catctgtaag attggagcaa tggtaatacc tgctttttag 29580

ggttgagaag agaattaaat gaattaagat gggtaaagtg cttagagtgg agctttgcaa 29640

gtagtaagtg ctatgtaagt gttcgattta aaatgaaaga cccttaaata cattctttgt 29700

tcatttcaca agcccttcat ttcacaacct tacatttcac aaccaagctc tgtctcccct 29760

ggaatccagc cataactctg ctcacaagtg tgagacaggc cccagcagag ctgcacgaag 29820

aggagagaag gcagcccccc agactcccaa ccccctgtcc aagatggcaa aaccagaaca 29880

cagcctctgt accaccccag caggtattca gaatctgcaa tctccaaagc ccacttcaat 29940

tgtaaatgta gagccacgtg cgctttaagt cacctgtcac tctggaggct cttttgctca 30000

gttcctcacc attagcaggg atgacaggga gtgcaggagt gcggtcgact cccagatatt 30060

ggagagcgct gggctagctg cccattctcc cggcctccac tcctctttgc tgtccagcca 30120

tcacttgctc tttgaaggca aacaaaacag aaaacagtgc caaaagtatg ggaagaaagc 30180

cagcttctcc cctggggtgc ctgtgatgcc atgcccaccc tccctgacca cgcagcccct 30240

gtggaccctc agggccccaa gcccccattt ccatcacatg cgtacaccca tgtgtgtcca 30300

tagccgccca tctcagtcaa taaggctgct cctgcccact tggaatagtg gtgacaacca 30360

ggagtggctt atgggaacta tcccaatggc ctgacagcat gtccgctgca aaccgctgag 30420

gtaggacact gccctcatgt ctagctgatc agcaagaggc gcagttgctt tcttaggtaa 30480

cattgctgct gtgtcctggc cattgctggg gggtggcact taatctacac cagatttttc 30540

cctcctgtat cttccaagct gcttggatct tggtgctgaa ttaggttgga ctttgtcttg 30600

tggggaaggg aggactatag accctcaacg taagcaatgg tcagactatt ctaagaaaac 30660

tcgccgaatt aaagcatgag gtaaatttag ttctgacttc tgtccacccc actgccactg 30720

tcccctttta tcccatgatc ccttgctttt cttttcctcc tctctcccta tctcttgtgt 30780

ttgacgcatg ataggaattc agaaatatat gtttgtggat ttgtttattc acgtagcaaa 30840

ccatttcttg agtgcctacc atgggccagg tagaatgggc ggccccgggc tgcagtggtt 30900

tcttcagccc ctctccaggg tttacactgt gcaagacggt ttgtgatggg tcctcccatc 30960

gaggaccaca ctcttctttc tctgtgcccc ttggtcctca gtctctgacc ccacttcaaa 31020

ggcagcattc actcagggaa gctcccatac aatgctagtc agagtaaaag tttggacaaa 31080

ttgccaggaa gcagcttgtc agtatgcata aacagccttt aaaatattac tactctttga 31140

cccagaattt cacttctagg aatctgtcct aaggaagtag tcacatgcaa aagatttatg 31200

taccaagatg ttcatcaaag tgttgtttta taacaggaag tctcagaagc tggataaata 31260

tccaacctct ggaaatggtt agatagaata gtatgtagcc attagaaaat tatgtctatg 31320

gggtttaaaa tgtcatggga aaacacttct gacataaaag agcatgagaa ctgtatattt 31380

agcataatct taactatgtt ttagaatgca caggaaaaaa atgtacaaac atattcatag 31440

tgatgtctct ggtggtagga ttatgatcag taagtacttc tgtctcttca tattttcctg 31500

tatttgataa tacatgcata tgttgttttt aaaataagaa aaattttaag tttaaaattg 31560

gagctgaaaa gtgtttttag gtcaggcgag gtggctcaca cctgtaatag caccactttg 31620

ggaggctgag gcagtcagat cacttgagcc caggagttcg agaccagcct ggccaacatg 31680

gtgaaacccc atctctacta aaaataaaaa aattagccat gtgtggtggc acacatctgt 31740

aatcccagct acttgggagg ctgaggcatg agaattgctt gaacccagga ggtggaggtt 31800

gcagtgagcc aagatcgtgc cactgcactc tagtctgggc aacagagtaa gactctatgt 31860

caaagaaaaa aaaaaaagaa aagccttttt aaacagtagc agacataact atataatcct 31920

tactaagctg tcggtcaaat ttttatttat atatttattt tattcattta ttatttttag 31980

acagggtctc actctgttgc ccaggctgga gtacagtggc gtgatcatgg ctctcttcaa 32040

acttgacctc ccgggctcaa gtgatcctcc catcttagcc tcccaagtag atgggaccac 32100

aggtgcatac caccacacct ggctaatttt ttttattttt tatttttaga gatggtgttt 32160

actatgttgc ccaggctagt ctcaaactcc tgggctcaag ctatcctccc acctcggcct 32220

cccgaagtgc tggggttacc agcatgagcc actgtaccca gccctcaaat ttttaaaaat 32280

ctataagaga cattattgga caattagaga aattcacata tggacttata atagtatcag 32340

agtgtgtggt gtgatggttc tggagggaat ggactttttc tttggagaca ggcttttcta 32400

tgcccaccct tttatcttgc taacttatca tcatccaggt tccagcagaa acattacttc 32460

ccccaggaaa tttcttaagg gtgcagtatc atgatgtctg cagcaaattc tcaaatagct 32520

caggaaaaaa gtacgtgtgt ggtatgagtg tgtgtatgta tgtgtgtata tatatacaca 32580

tatatacaca tatatataca tatatgtgta tatatataca tatatgtgta tatatataca 32640

cacacataca catatatata cacacacaca tacatacatg tatttttata taattatata 32700

tgcagagagt gcaaatgttg ccaagttaaa gattggtgag tctaggtgaa gggaatatgg 32760

tatttattgt attatttgtg caacttttct taagtttgaa aattttcaaa acaaaaaatt 32820

ggaggaagaa ggcatgccag tctaccccaa gccctccatt ggaatgctga aaatctaaac 32880

aatgtgattt ggcaatttca tttcttttct gttgtgggcc agtagtcctt agatgttggg 32940

gaagggggta gtcgctgagg tgtggttgac ttaggatgga agaagcagaa gtcaagactc 33000

ccagggtcaa agtggtttgc tctgctgacc caagtgtggg aggcccagag tcagcgtttc 33060

aggtgtgcta attcagcatg gttctattca cggccaaagt ccaccctggg cacctctctg 33120

gcagcaatct tgggtgactc tactaaggcc aggcctccat gaccctatgt ctggatccca 33180

tatctccacc tctcccactg tctcaggaac ggtgcttagc tttttctttt ccctctcctg 33240

tcttctttgc cagcatgtag aaagtttaaa taattcccct ctttacaaca aaacaaaaca 33300

tacccccttc agtcaaccac cctagctctc ttctcctttt cccagccaga tttttttaaa 33360

agcatcctag gccaggcgcg gtgactcacg cctgtaattc cagcactttg ggaggccaag 33420

gtgggtggat cacaaggtca ggagatcgag accatcctgg ctaacatggt gaaaccccat 33480

ctctactaaa aatacaaaaa agtagccggg agtggtggca ggtgcctgta gtcccagcta 33540

ctcgggaggc tgaggcagga gaatggcgtg aacctggtag gcggaggttg cagtgagccg 33600

agatggcgcc actgcactcc agcctgggtg acagagtgag actccgtctc aggaaaaaaa 33660

aaaaaaaaaa aaaaaaaagc atcctcagca ctttggcaac tccatctcct cccaacatgt 33720

ccctgttact ggaatccagc caggactcag ccccgatctt tctactctaa ccagttgtct 33780

cagttaacaa ggacaggttt atgctgcagt gacaaacaag atcccaaatt cttgtggctt 33840

cacacatctg gcaccacctc atcttccagc cttaggagtc atcttttagt tccttgaaaa 33900

ctctttacag ttttctgttg gggccttgtc atatactatt cccctggaat gttctttcct 33960

atcccctccc tttcaccttg ctaacttgtg cccatccttc aggtctcagc agaaacatca 34020

cttccttggg gaagttttct ccaacaccca cactacacag gtgtcccatc tacactccta 34080

tgactttgtg gtacttgtct cacttcattt tccactgcct tccccacaag gcacctgcac 34140

aagggcaagg accgtaccac tgtacctatg tcactcattg ctgtggtcac ctgcactctg 34200

gctgcctacc ttaactacac attagaatca cctgaggagc ttttaaagcc acaatgcaag 34260

actccaccct aggccaattg gatccaaatc cctggggtag ggccagacat cagtggagtt 34320

atatatacat atatatattt tgtttgtttg tttgtttgtt ttttgagaca gagttttgct 34380

ctgtcaccca ggctggagtg cagtggcgcg atcttggctc actgcaagct ccgcctctcg 34440

ggttcacacc attctcctgc ctcagcctcc tgagtggctg gaactacaag tgctcgccac 34500

cacgcccagc taattttttt gtgtttttag tagagatggg gtttcaccgt gttagccagg 34560

atggtctcga tctcctgacc tcatgatctg cctgcctcat cagcctccca gagtgctggg 34620

attacaggca tgagccactg cacccggcca tcagtggata tatttttaaa gcactgcaga 34680

gaattctgtt gcatcagctt gagaaccact gatctgcctt gtgcttcaca tttaaaactt 34740

ttttttaatg aataaataaa ccccaaaaaa ttaatctccc taagcctccc tagaagatag 34800

gatggtaagg atattttcct aggtaaaaat atgttaattt catatttcat gaaatttcat 34860

gtttcatttc aatcaagctc tgtcatacac cttacatggg gcaagcccag tgcctgggca 34920

gggtgtaatt atactcatta cacaggcaag gaaaagtcac attaggtgat ggagcacaaa 34980

taggcagtta atggtttcag ggctagttag gatatgtttg tctttcaatt gcaagtaata 35040

gaagcccaaa gaaattggtt atttatataa tataattgat tggttcccaa atttgaaaaa 35100

ttcaggaata gacccagctt aggtacagct ggatccagtc actcaaacaa tgtcacaaag 35160

aaccctttga caggaatgta tcctgtgttg actctacttt gctctgagta gtctttcccc 35220

aggtgatgat aaaaatggtc atcatcgcca ggcttgtgtc ctgtttagta ggaatataca 35280

agaagagctc agtaaatgct ggccccacca ctaagcaaaa acaaaacttt tgttgttgtt 35340

attgttgttt taaataacag cttagacctt tcttctttcc ttgttattct ctttcatctg 35400

taatccagtt ttctacttct gaagtataga atgttctgat gatttattct tcattaccca 35460

caacttgcac atgtttattt aaaaatgcca ggattgcctg gccgttgtgt gctgttaacc 35520

tttgtttgct gttagtggat ccctgaagtt caggctccca ggggagcaga taatgggtat 35580

ccagttcctg caatatccac cctctggcaa gccaagttcc ttcctgggta aggttttgcc 35640

tacctgcatt cctagggaag tttctgggcc tgaccaccaa gccagctctg agaaggggtg 35700

cataagcccc accatgcttt ggctctgtcc ctatagaata ttttatgttg ttactgaaaa 35760

ctaaaggaag atgggtgcgg tggctcatgc ctgtaatccc agcactttgg gaggccaaga 35820

cagattgatc actcgatgcc aggagttcaa gaccagcctg gccaacatgg tgaaaccttg 35880

tctctacaaa aacaaaacaa aacaaaaatt agccgggtat ggtggcatgc acctgtggta 35940

ccagctactc aagaggctga ggcacaagaa tctcttgaac ctgggaggta gaggttgcag 36000

tgagccgaga tcgcactact gcattccagc ctgggtgaca gagcaagatt ctgtctccaa 36060

aaaaaaaaaa aaaaagaaaa ggaaagctaa aggagagaga ctaaaatgat atcaggttcc 36120

tggagaacaa acagacatga ttttgcttca tggcaggaca gccggaagaa gtgggattat 36180

atcctcacat tacaaataag aaaactgaga ctcagaatgg ttaagtcact tgtcccaggc 36240

cacacagcca gtaaattaca gaaacagaat ttgaacccaa atcttccagc tccaaagctt 36300

gtgttctttt cactacctcc tgcttaattt tttaatttct aagattagac ccttcatcta 36360

tccatgacac ctgcctgtca tcccctgaaa aaaggtgaac gccgttcaga aatttttcta 36420

gcctgagctc actcccagtt cacttatttt tgctttgtca tggctgccca gtccccactt 36480

gtagaccagg aataggtcat ggctgcgggg actacacgct gtcgctgctg caagggccgg 36540

cctctgtttc cggggctgag tgggggccag acctgccagg agcaccatct tctgtgggtc 36600

ctgcctggat gtcacatccc ggccccaaga agtcactgca aaccttcgta ttattgagct 36660

tcacatccta gaatttgctg tcactgtggc tgctgcatga agttgtcctg agagaaacgg 36720

gcattgtcat taacagggaa attgatggtc tgggggaaaa gtcatcctca ttctcttgca 36780

gatctatggg tgattgagac tggctgatgt tgaaggggtt tctcagccat cgtgtgccat 36840

gttatggaac agtggtgtag ccagccattt gacacccagc gctgaccttt gtttaacaac 36900

ctcacctata tatgacaaaa tgattgtcag aaataatcgt gtaatgaaat gactgtaata 36960

atggccagaa aagaaacgca gatagtaaaa tgtttctctt gttgaactct gtacatataa 37020

ttgcaccagg atttttttca aataaaaagt aaatattata ctacaaaaaa gggaaaaagc 37080

acaagcattt attaaatagc tttctatatc tttctgagtt ttgatccttt gattgcagac 37140

tgatgtaata ttttatgtaa atcattgctt ggttactaag tgaactttaa gaaaagtgag 37200

acgtctgcag aagttgccca taatttagca gctactgtat tgtaccattg atgtacggct 37260

ttattttctt gattaattat ttaaacaata taattcacaa ttttaaaata ataaatttcc 37320

acttaaaatg gtatttaaac tcagcaaaat atatcatcta tgagtaaaat ttgtatttac 37380

caagcaaaaa tattacagtt tgtggttcac atgctgtctc actgttttaa attttaaata 37440

caaaaactcc aagtaggctg ggtgtggtgg ctcacacctg taatcccagt actttgggag 37500

gctgaggcag gcatatcgct tgagttcagg agttcaagat ttgcctgggc aacatagtga 37560

gatcctgtct ctactgaaaa caattagctg ggtgtggtgg cacatgcctg cggtcccagc 37620

tactcaggag gctgagatag gaggatcact tgaaccctgg gggacagagg ttgcagtgag 37680

gcaagattgc accactgcac tccagcctgg gtgacagatt gagaccctgt ctcaaaaaaa 37740

gaaaaaaaaa aaagaaacac aaaaactcca ggtggtcgca cagaatgaca ggactgaagt 37800

aacttagctc caatttctgt cttcataatc actgtcctac cattgtctgt gcttagaatc 37860

tacttgctta atgcaggaac atgtgttctc acagagatgg aaaatgcaaa tggcgccaga 37920

agcaagctgg aaattctgaa ccattaagaa tttactctct gccaggcacg gtggctcacg 37980

cctgtaatcc caggactttg ggaggctgag gcaggcagat catctgaggt caggagttca 38040

agaccagcct ggccaacatg gtgaaacttc atctctacaa aaatacaaaa attagccagg 38100

catgatggtg ggtgcctgta atcccagcta ctcgggaggc tgaggcagga gaatcgcttg 38160

cacctgagag gtggaggttg cagtgagccg agatctatct gcaccattgc acttcagcct 38220

gggagacaga gtaagactcc atctcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaagaac ttactctcaa 38280

aataaatacg tgtggctgac tccacatatg gtagggccaa ctgtataact agaagttctc 38340

caaataactt ctgtggagaa aaaaaagttt attaaaggtt aactttttta aagtgctaac 38400

tagaacctta ctaacactga gatcgcacca attgtttata acttagacag ggccgggtgc 38460

agtggctcat gcctataatc ccaacacttt gggaggccga ggcaggtgga tcacttgatg 38520

tcaggagttc gagaccagcc taaccaacat gatgaaaccc catctctact aaaaatacaa 38580

aaattagcca ggcacggtgg tacacgcctg taatcccagc tactggggag ggtgaggcag 38640

gagaatctct tgaacccagg aggcggagat tgcagtgggc caagatcgca ccattgcact 38700

ctagccccag caacaagagt gaaactctgt ttcaaacaaa caaacaaaaa aaaaaacctc 38760

ttggaccagg aaaatatttt ttaagggagg agtattttat cactggcatt gtttaggatt 38820

gcaggcacat gatgctaatg aaaagcagac taactattag ttggttttat tactgttttt 38880

gaactctctc tctccctttt tttttttttt gagacagagt ctctctctct gtcacccagg 38940

ctggaatgca gtgactgcag tctcagctca ctacatcctc tgcctcctca gttcaagtga 39000

ttctcgtgcc tcagcctccc gagtagctgg gattacaggg caccacacca ggctaagttt 39060

ttgtattttt agtagaggca gggtttcacc atgttgccca ggctggtctc aaactcctgg 39120

cctcaagcga tctgcccatc ttgacctccc aaagtgttgg gattacaggc gtgagccacc 39180

gtgcctagcc ctgtttttga actctctaga gacagtccag ccccttatta cttgtcctga 39240

ggcagctgct cccttcacct ggccccccgc attgtgttcc ggacccttgt cctggtggtg 39300

ctaaagaata tctctgtcga tcctttgggg actggggaaa ctgaggccca gtgccacgcg 39360

atgccatttg ttcagggaag attaggtcat ctgctaggtc cccagtcact tgaccttctt 39420

cccagacagg aagaagctgc tctgggtctc tcagtgctcc acgtgtcttt gcacattgaa 39480

atgttttctg attttttttt tttttttttt gctgttacat ttacttttaa aaaataacaa 39540

gcaataaaat gttacatttg agaaggttga aatgagaatt gatttgagtt aaattctagc 39600

agatttttct tagaagaatg atatcatcat ctccagctac ctgcaattga tctactctga 39660

attaagaaag agacttccat ttgttgttta tattttgcac tcttgatgtg tttctttaaa 39720

ttatggtcat gggccaggtg taggagctca cacctgtaat cccagcacct tgggactctg 39780

aggagggagg atcactggag gccaggagtt caagacctcg tctgtacagt aaattttaaa 39840

aattagccag gcatggtagc attcacctgt agtcttagct acttgggagg ctgagatggg 39900

aggattgctt gagccagaac tttgaggcta cagtgagtta ttttcacgcc actgccctct 39960

agcctggctg acagagcaag acctgcctca aaaaaataag taaaaaataa attaaatttc 40020

aatcattagc agtcattagg atatttaaat acagtatgtt gaatcaaagt tacgcatgtg 40080

tgtatttttt tttccagaga gttgtttatc atgtgggttt taatttaact ttaaaaaaat 40140

gttggctgga cagttgccca aatggtatca tcagccattt ggttgagaac gtatgtcctg 40200

cgggctcctc tgtcactgga gttttgctag ctgacagcca ctggctagtt agagactgca 40260

gtcagcacag atgcaggcgt ggacttgcgc acgtaaccat gtcaatgcaa agccatcact 40320

tcttaaaaat tctgaaccct gctgtctgag atggtggtgc agcggataga actctgctct 40380

aagaggcagt agctaattcc atgtcttctt tgcccttgac tagctgagtg actttgcaca 40440

tggggcttgc ctctctgttg ccttgtctgc aaagtggaat catcttttcc ttgctagaca 40500

gaaggtggac cctggaccta tggccttttt gagtttcccc cccgcttctt agaaggacct 40560

ctgatcctac tgagtttaat acccacgggt taataattgg gaaaagcaaa ggaagcgctt 40620

ctgtttaggt aattatatgc atgtttttgt ctttttctgg ctggaaagat atccaagcca 40680

ctgggaaggt ccgtggctac ccagggtagc cctctctggg gagggctgct atatccaaga 40740

gcccctcatg agaatttgaa aatcgaccat ggtagggcct gctgactttt gacagctaat 40800

ggtgtgctga gaattgtccc tccaaagatg cctttccatt ccctcgggag agtctgggca 40860

gcccctactg ggggctggga tgctggctct tccctcagcc tccaccccaa ctgctctctt 40920

ccctcctccc ctccccagcc ccctaatttc tctcacaagg ctttgttctg cagcaacctt 40980

tcctaatgca gtcctggcct cttcgcagct tcattacata accttccgtg gactcctggt 41040

ccaaggatca ccccagaaag ccagtcagag gtaggcacgc agctggggtc catttactta 41100

ccttccccac cccctcggaa ctcagaggtg gtgcaggaat ttggactcca agaattaaca 41160

gctccaccac catcaccaga gccaaaactc aggatgcatg tgcttcatct gctgcttatt 41220

tccagctgag agccagtggt gccatggttc cttagggagc cggtcccctg atgccggctc 41280

ctggccccaa atctctctga tccgggctct tccagaatgt cttgtctcca ccatcgcctt 41340

tgaccaatgg tgtccctttg cctggtaatg tcccctttgc ctgatgatgg ccctgtcact 41400

cctctcttta gcacagagga ggctgtttca tcccttcaag cctgccctcc cttcaagtct 41460

tagctcaagt tcaccttctc cgcagagcct tctccaatct tcttgactac gtctcctctc 41520

agctccagca acctctgtct ctggcactga ttccttactt agctaagaga atcacagaca 41580

cttggggctc aggacaatct gctttctctc ttcttaccca tggccttgga ctgtgtgtac 41640

ctctttgtct ccactcccaa acccaacccc cagagggcag agagcatgtt gtctgtccct 41700

ttgctcagca tgaagccatg cgtgtggtag atcggcagag ttccataact tgtgttgacc 41760

gaggggtcac tttgctctga aattacccct gtgtccttca gtatttgcac agatagcttc 41820

ctggccagac cgaatatatc caagggcatg gcccacctct gctcctgttt ccaggtccct 41880

ggtgggggtt agttcatgcc ttcctcataa tctgcccact ggcctggtcc tcaaggtctt 41940

cccaactgct cagccagagt tgagaaaatg ggtcgctcca tcctgtttgt gtcgttctct 42000

ccttcctggc ccactctcct gcccacaggt atccaggggc tgcctgtagc attagaggac 42060

atacatgcac atgcgtgggc atgggacact cacgtagcct ccaagcacag catcaataat 42120

gcattctgtg ctttatagca tggaaagctg ctctaaactt tattacacag tggacatgtc 42180

tgaagcagct cccaaatcca cccctgagtg tgttggaatt ggcaagccta tcacttggga 42240

gtctagtttt tttgttcgtt aataatagat gcttcctgtg gccccagctt ggcaattttg 42300

atttaaagtg atcttaactg aagagactaa tggacgggtc tgaatttgtg ccttttaagc 42360

acaaagtatt gctcttaatt aactggattc tatcctttga gcaggcagag gccttccccc 42420

aagggcgtca ttaacgatcc acatctggac atcttccaaa gccttcttct gtttcaggcc 42480

aaccgcaggt gtgttcctga acacccagga ggctatgaga gccacatatg cctcccaaat 42540

acacacagtg tgcatgccca gggacataga gcagtgtgca aagtcccatt ccatctctct 42600

ccacctggga gaggatggct cttctgtctg attcatggct caaagtggta aaggagctcc 42660

ccactccccg tcccacgcct actcagagtc tgcaaatatg tatgcgatat gagagctcgt 42720

cagttagctg tcttcagtgt ggcgcacatt tgaggagtct gactcccctc cagcacaggc 42780

caatgtgcac tgctctccta tctttgtacc cccactgttg cactgtgcag aggttggagc 42840

catagaagta ccagagctgt gaaaggagag gccccctctc acctctgccc tggtctccat 42900

ccccactttc tctaggaagc tagtaggtgc tgacagggga gagaagggag gggaggggtc 42960

cagaaacagt ggctcatgcc tgcaatccta gcactttggg aggctgaggc aggaggatca 43020

tttgaggtca ggagtttgag accagcctgg gcaatgtagc aagaccctat ctctacaaaa 43080

agaaaaaatg taattagctg ggtgtggtgg tgggcacctg tagtcctagc tacttgggag 43140

gatgaggtgg gaggattgct tgagcccaag agtttgaggt tacagtaagc tgtgattgca 43200

ccactgcact ccagcctggg caacagagct gagaccctat ctcaaaaaaa gaaaaaaaaa 43260

aagaaaggag agagagagaa agaaaagaaa agaaaaaaaa aaaagaaggg aagggaaagc 43320

ccagaagagt gtggggagag gaggcggccg tcattctggg gccctcagtg tgcacaacca 43380

gataacacat gctctgtggg cttttgtacc attttgcttg agcataaaga aaggaaggct 43440

gcccctaaat agaaagcact ctggaggcaa acaaatctga ctccaatcct ggccctgcca 43500

ctttcccagc tgaggactta gacaagcacc ctagcctctt ggacattctc agagccatct 43560

gctgcaagtg ggtgctgcca tacccacctt actgggcagg cttgggggac caagggtggt 43620

aaatggctca gtctttcatg atgcggccac acagcaggtg cgccatccag gtccatttct 43680

ttccttcctt tcccccaaat caagttgtca ttaaagtact agtccacatt aatgaaatca 43740

actgtattaa ttttctattt gctgctataa taaatcatca gaaatttagt ggcttaaacc 43800

aacacaaatg tattacctta cagttctgga ggccagaagc cctccatagg tgtcactggg 43860

ctgaaatcaa ggttttggca aggttgcggt cctttctgga gggtccaggg gagaatccat 43920

tttcttcctt tttccagctt ctaaaggttt catgcattcc ttggctcatg atcttctata 43980

gctatagtca gaaaaatttt ccatcaatca tcttcaaagc cagcaatggc aggatgagtc 44040

ctcacatcac cttgctctga caccagttct ctgcctccct cttccacatg tcaggaccct 44100

catgattact ttgggctcac tctgataatc tgggatgatc tctctatttt agagtcagct 44160

gactgggaac cttaattcca tctacaaccc caattcctct ttgccatgta cagtgacata 44220

ttcacaggtt ctggggatta ggacgagcct gtctctgaaa ggctacttta catgaaaatt 44280

cattttttta attaagattt ttttttcctc ttgagacaag gtctcactct atggttcagg 44340

ctggagtgca gtggtatgat cacagctcac tgcagcctcg acgtctctgg gctcaggtga 44400

tcctcccacc tcagcttccc tagtagctgg aactacaggg gtgagccccc atgcccagct 44460

aatttttttt tttttttttt tttgagacag agtctcactc agtcacccag gctggtgtgc 44520

agtggtgcaa tctcagctca cagcaacctc cgcctcctgg gttcaagtga ttcttgtgcc 44580

tcagcctccc aaggagctgg gactacaggt gtgcaccacc acgcccgact aatttttgta 44640

tttttagtaa agatggggtt tcaccatgtt ggccaggctg gtctcaaact cctgatctca 44700

agtgatccac caacctcagc ctctcaaagt gctgggatta caggtgtaag ccaacatgcc 44760

cggccccagc taatttttaa atattttttt tgtagagatg gggttttacc attttgtcta 44820

ggctggtctt gaactcctgg gctcaagcaa acctcccacc ttggtctccc aaagtgctgg 44880

gattacagca tgagccactg cactcggcct taagagaaga tttaataatt aatactttac 44940

aacaagatct ggaagaggtg ggatgagtaa ctaaatgagg atacaagtaa cccgggtcat 45000

atttgctaat acccttggtc acattgaact tgatatctta tcagattttc ctaatcagct 45060

cctttagcag cagtgttgca gcatcttatc tcattttgtt ttttgttttt ttgcctagca 45120

catgcctgta aatcactgga ttgaggtgtt tagatgtttg ttgtcctttg gatgcttctt 45180

ataaatccat atttcatggc tccctggaaa gtgctatgca aatgataagc tgcaaggatg 45240

gaaaggaaat tgcagtgctc ctgaattgta aatgggcttt tacgaggagg tttctaatta 45300

ctcgctcttt ctcttgaact gaggagttga agtgtaggtg gcagatccat aacagataat 45360

catgtgtgtg atgtgacttc agcctgagcg tcgaggacca agtcacagag caggaacagc 45420

cactctccag tgtccttggg gctacgtctg aggagaacct gggatttcat atatgacctg 45480

cactggctgg ggggctctct tgacgtaacg tgttccctct gagcatgtta cagattctga 45540

cattcttatg ttccttctgt ggagagacat gtacttagtg acctaactca ctttagcata 45600

tttttgctca tcgtttgtgt agcttaaagg aatcagataa ttaccccctc cccactactt 45660

tcggaagcac aaatgcaatg ccctagaatt gtactgggga ctcaaaaaga aaagagagta 45720

gtaaaatcta ttaaagggga caaagacagc ctatatacta caagctttct atttttatgg 45780

cagagaatgc cattttctaa gtaaacagag aactgcattt gacctgcaat atcaaatgca 45840

tggatttgat gctttggaaa gcaactgttt tctgcgttaa tctgggtgtc ttccgtgaaa 45900

tgtcctcctg cctttggctt aaacactagc tttgtctaca gccattccat cctgaacctg 45960

cccaatcttg tctgaatcct ggtttcacca ctgacaagct gtgtgtcctt gggcaagtta 46020

cttcacctgt ctgtgcttca gagtcctcat ctgtgagttg gggaatctgg acagaatcta 46080

ccccataggg cgtagtgagg atgtgttgaa ttatcccaag tggctacaca gagtaagcac 46140

tcaaatgatg tcatcgttgt catgattgct gttaccagag cctagagttc attctgatac 46200

tcgagtctgt ggcccatcca gcccaggtaa ggaatagttg gaggagttgg gcatgttcag 46260

cttgaagagg agacgacagg ggatatggga tagttgaatc tgtgaagggc cccctgggat 46320

gaagaactgg catgttctgt gtggctccag ggcactgagc aggacccatt tgccaaagtc 46380

tcagggacac agtttctagc tatagacaga aaaattttct gtcactcaga ggatgaaaat 46440

agaatgagcc cccttaagag gtaatgagct ccctgtcatt ggaaggattc cagaagagct 46500

aggtaaccac tttaggtgct atcaaggggc ttttttcttt aaagtccttt ccaaaagctt 46560

ctgagattgc ataaacaata ggaagccatc ttggtgcttt aacacaaact ctccccagtg 46620

atgagggttg agccaaagcc agattggcaa gcagagagga gacttgtgta caaggagttc 46680

ctcgagtcaa ttgctttttc cttgttctag ccagccagag ggctcctgtt ggaaaacagg 46740

agaccggaga ggctgaggcc tgaccaaacc agcttctgca ggccagctgg gaggccacaa 46800

ctcctaccta cgggaaaact gaagggcatc tctattttta gattagcaaa agaaaataaa 46860

tttaagtttg agtctccttt gcaactttta aaagacatct ttattgagat gatcattcac 46920

attctataaa attcccccac tttgagttac aattcagtgg ttttagtctt ccttgatgat 46980

tttgatggtc ttttcttaag gctcttggaa gacccagaag cctctcagac acaggtgggt 47040

gtggagggcg tagcacagag gcagacttct catttcctgg gtctcccctt taatgactct 47100

cagagacccc tccttccccc tgcccctggc ttctacccca ggggtgtaga gttttgccat 47160

tttccaagca gaacttcatt tcctcttctg tgtctacact ctttgtgctt ctttcttgcc 47220

agctttttct cctttgcccg cccttccttc cttccttccc tccctccctc cttccctcct 47280

tccctctttc cctccttccc cccttccacc cttcccccct tccccccttc cctccttcct 47340

tccttccctc cttccttcct tccttcctgc cttccttcct tcctgccttc cttccttcct 47400

gccttccttc cttccttcct tccttccttc cttccttcct ggtatgtgac taatttctgt 47460

ttcaggacat aaatgttgtc caggctgttc tttggtcttt ctgttggata atggacattt 47520

ggcattgaga gaggctgctt tttctgaaat catgttcttg gggcccagaa cctaggtgtg 47580

tgcttctgac tttgttttct tcctgatcca aattctgata tgtccattta aattgatcta 47640

gacccacagg gcactgtggg acagatcctc agtggaacat gactctgtaa cgagagcatt 47700

ttgttttgtc aaaatgagaa catattattg cctttcatct gattgtaaac ataatacatg 47760

tttataaaac agtataatga gacaaaaatg tagacactaa taagggaaaa tctccctaat 47820

tgtatttctc ttcacagaga aagcccctgt tgggcatata tactctagtt tgtttatttg 47880

tttgactaca catatatgta ttcttttctt atgtataaaa attctgaaca tgcacatttc 47940

tgcaactact gttttcactt gatgatgcat ggacctctct agagtgtacg tttcttcttc 48000

cttacaaagc agttggcttc gcccagggta caccaggaca cggttttggc tctgtcccca 48060

gggtgtcacg ggaccagggg atgatctcac agggtctgcc atctgccctg cctggccgga 48120

ggctgcatcg agagggccaa ggggcaccac gtgtcgtggg tactgtcaaa caagagcctt 48180

cagagccttc cacagtcttt cttttgcttc ccagcattgc ttccccgctg gtggactctg 48240

aatctagaac tagctccagg cgcctctcca aattcagacg ggagctgggg cactattata 48300

atgcaaatct aggcaaagcc ctcccaatac caggatccag aatggggtgg ggccctttgc 48360

cctgaaaagc tgtttagttt gaaaatacaa acaggagaca gaaaagtttg gctaaattaa 48420

tggataaagt tttaacgatg gtaaccatag tagggttcat cgacagccag cgatggttct 48480

gaacacttga catgtattaa ctcacctaat ccccacattt tacagacaat gcaaaggagg 48540

ctctgggagg ttgagtgact tgccccaaag tcgcacagct cctaagtgaa ggattcggag 48600

tggactccag gcagcctggt ctgactccct gcactgcgct gtgcttatct ctggccccaa 48660

tgccgccatg cagaagtgtc tgggggcact ttgtctctgt cagacagaat tcggagatgt 48720

gtatgcttgc cctggtatgg cacttctctt tttttgagac agaatctcac tctgtcaccc 48780

tggctggagt gcagtggcat gatctcagct cactgcaacc tccgcctccc aggttcaagc 48840

aattcttgtg cctcagcctc ccaagtagct gggattatag atgtgcacca tcgtgcctag 48900

ctaaattttt gtacttttag taaagatgtt gttttgctgt gttggccaag ctgatctcga 48960

acttttggcc tcaagtgatc tgcctacctc agcctcccaa agtgctggga ttacaggcat 49020

gagccaccat gcctggcagt gtggcacttc ttacgtgtgt tcagcggaca ctgtttatct 49080

tctgtccctc caagacggtg ctgagctcag gtcgttcatt actggcagac aactgctgat 49140

ttccaacaga attgccatcc tcttctcccc tgcgactttc agagtgtgac ctcagactca 49200

aaaattagaa gtgaaaacat cttaaaaact atcacctttt cttcctaatc ctcctctccc 49260

ctccctgtct tccttgttgt ccccatctaa tgaactatca tggcaaaaag agcccatttc 49320

tggtcatttt ctgtggcctt tcaaactccc acctacccca ctgctcctgg gtgcattacc 49380

cgaaagctga gacttcagtg cagaaagtgc caggccctct gtccccccag atcgccttcc 49440

ttgtcttccc tgtgcttgcc tgtcacattg tgtgggttcc agcgctggaa ggaatgagga 49500

acagattctc tggttctcct tttgaagttt accttcgctc caccacttct gagaccttcc 49560

cggaagttgc cccttgtttc tctcctctcc agggctgccc cagagctgcc tctcacctct 49620

tcctgctgtc accccaccac catcagggca gaagttggga caaagcctct cctactggct 49680

cctgcttttc tcccttaggt ccagcctcct cttctccatc ttcaggagtc tccttctcca 49740

ctcacacgtc atgacttcag cacctcgcat cagtccagaa tatgactgct tgttcaagtg 49800

ccacctttct catgcatttt tttctagtga caatcacagc caccctgtgg ggcaggagtg 49860

tcatcatccc catgtttcaa atgaagaatt gcagttcaga gagggcaagt gactggccca 49920

gcctcaacag ctagccagtg gaccccacca gggcttctga ctccagtccg ggttcccttt 49980

ccacccaaat ccatggaggg agctgagccg agaacaggtg tccttcagga agacgtgaag 50040

ccaaagcctc cacctccaaa ctcaggggcc cagggagtcc aggcacccat ccactcacaa 50100

ggctggatat ggtgcattcc aggagagggg ttgggggcga gtggcctctc tgtgtacccg 50160

tggggataga tgcgcaagtg gcatcgccac atcgtgagtc ctggcttcat gggtgagctc 50220

caggtccaac gagaagccaa gcagggggcc cttcaagctc agctttgggc ccgggtcggg 50280

gtacagggta gagcgggcct ccccagcccc tgccatgagg ccaaggcagt gcatcgttcg 50340

cagcgtacat tcagaaacca aagcctagga gctggttatc attccggttt acagctgatg 50400

gaagagcagg tgcttccgag aacccacagt gctctttggc cagtgaccca agggtgcctc 50460

tgagaggcct cgcagcaccc ggaggtgctg ctgaggcaac gccctgactg taagaaggac 50520

cattcatcct cagagagtgg ccgtgatgct gctgcgacag tcccaccatc cctcccgact 50580

ctcactccca acagacttcc cactgtaaag ctgaactctc cagcaaatca cctctcgcca 50640

gactctctcc tcactctctc tgggtccact agaggttcct cagcctctct ttgccttggt 50700

tttcccagct gtaaaatgga gcaaagaggg cctatgtacc cacaaaggtg tggttggagc 50760

gactcctcct acattagggc ctcgagtggg gcttcatgat tggttggtgg aggtctccaa 50820

acccacccag tgccaccgaa ggctgagact gcagatgcaa tgccacaggt gtccttcctc 50880

agcctgggca gctgaacatc atgtgtaaaa cggggataat aagataataa cagccccttg 50940

cacctatgtg gctgtgagga ttaaacaaga taaatgtgta acagtgcctg gctatagaaa 51000

tatttactct tgttattaag ggaagaatat gtgtggctaa aaagggatcg aagatgtaaa 51060

agccaatccc tccccctcta gcatatttaa gggtaatgtt gagttggttt gtggaccatt 51120

tgctgcctgt tagagctgga aggtagggac cccctctcaa cagcgatgct acaaattata 51180

cccattggag gtcaaccaaa agacaaagct tattggctgg acatggtggc tcacacctgt 51240

aatcctagca ctttgggagg ccaaggcagg cggatcactt gagatcagga gttcgagacc 51300

agcctggcca acatggtgaa accccatccc tactaaaaat acaaaaatta gctgggcgtg 51360

gtggtgcaca cctgtaatcc cagctactca ggaggctgag gcaggagaat cactagaacc 51420

caggaggtga aggttgcagt gagccgagat cgcaccactg tactcaaacc gaggcaacag 51480

agggagacgc aatctcaaaa aaaagaaaaa aagacaaagc ttgttaatac cagcatattg 51540

ttaagggaat aaagtaggct gcagaacaac tggtgtaata tggtgccatg tagggaaaat 51600

tacatgtgtg cataggagag gggtctgcaa ggttgtgccc taagatgtta gagtggttcc 51660

tttgcttttc tcttttataa ttttgtattt gacttttaaa taaggaccat aaatcacttt 51720

tataaaatac attctctcca gcccctacta ctcctttaaa gaataagagt ggtttgccca 51780

agaaagacag ttttttttgc tctggttttc ttgattctga catcagagga aactccttct 51840

catccacttg gggctctggg ttcaggggat tcatttcagg cagattaaag tggtgaccag 51900

gggcattcgt ggacacaggg agggacagga gcaccatcag tttgtctcac acaaccactg 51960

tcatcctcac tgaaggctgt tgcctgatca aaaacagtat tgggccaggc acggtggctc 52020

acacctgtaa taccaccact ttgggaggct gaggtgagtg gatcacttga ggtcaggagt 52080

tcgagatcaa cctggccaac atggtgaaac cttgtctcta ctaaaagttc aaaaattagc 52140

caggcgtggt gggtgcctgt agtcccagct acttgggagg ctgaggcagg agaattgctt 52200

gaacccgaga ggtagaggtt gcagtgagcc gagatggcac caccacactc cagcctgggc 52260

gaccgagggg gactctgtct taaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaatatat atatatatat 52320

atgtcaaaaa tggggtagtt tttagatcta tagtagttct aaaaacaaag gccatccaag 52380

catgacagat ttacaagcac tattggctat tccagtagtt acaatggagg agagaagctt 52440

ttagttaaaa caaacaaaca acacaacaaa cccagaaacc ttaggtcaaa accaaaattg 52500

tcctctcaga cacaatctgg gaattttctc atgacagtgg gcattagcca actgacatca 52560

gcagcaacca tccgtgtgca cacagtggca ccacctcctc ccaaaaagca gccttcatct 52620

atgccctcat acaatcgttg attattctct ttggattgag gcccggaatt atttaagttt 52680

cttcttgcca gcatgagtct ttcctttctg tatgctcctt atcttctctc tttaatttgg 52740

cagttctgct tgaaatctgg gtctttcatt agtagtagtt caatttggtt ccagaacatt 52800

ctgtggtgtg atgcaatgtg accagagctc acacttcaga gctcttcaag ggccagtctt 52860

actgagcacc tcccagtggc tgcctgtgtg ctgggcgcca cttgtggtgg gcaggagaga 52920

ggaggggaca caaaaggaga cacagctcct tcttagaagc tcaaagttgg ggaccagctg 52980

ccacagaaga gtatgtttag catctgagac accaagatcc agcgtcacaa gggtgtttat 53040

taagcctcct catctctttc tttttctttt tttttttttt tttcctcagg cagtcttact 53100

ctgtcaccca ggctggagtg cagtggcatg atctcggctc actgcatgca accaccacct 53160

cccgggttta agcaattctc ctgcctcagc ctccccagta gctgggatta caggtgccca 53220

ccaccacacc cagctaattt ttgtgttttt agtagagaca gggtttcacc atgttggtca 53280

ggctggtctc gaactcctga cctcagatga ttcacccacc tcggcctccc agtgtgctgg 53340

gattacaggt gtgagccacc gcgcctggcc ttgctgttga ttcatctata gtatgtttga 53400

cttgatgacc tccagttacc ttagacagag gttctcatct aagctccaac tttccatttc 53460

ctttgtcctc gtctttcccc ttaacccctc cacatttctc tcaaaatcac cccacttcta 53520

aaaaatactg tttatttttc ttttaaattt caaattatct atactcattg aaataaatca 53580

aaatagcatg gaataagcga aaaaaatgga tcccaccctt ccccactccc attccctagg 53640

gctaaccata gttaaccatt taatgactag gtttttttgt tgttgttatt ttttatttat 53700

ttattttgag acagagtctt actctgtcac ccaggctgga gtgcagtggt gtgatctcgg 53760

ctcactgcaa cctctgcctc ccaggttcaa gcattctcct gcctctgcct cctgagtagc 53820

tgggattaca ggtgcctgcc accacacctg gctaattttt gtacttttgg tagagacagg 53880

gtttctcaat gttagccagg ctggtctcga actcctggcc tcaagtgatc tgcccacctt 53940

ggccttccaa aatactggga ttaaggtatg agccaccgca cccagccctc ctgggctctt 54000

ttcctttagt tgcactcgct ccccgctcct ggagtagagg gatttccgag agactgtggg 54060

ctccagcctt cacctaggcc caggactagg atgcctgccc taacatttat ctttatacct 54120

taaagcaaaa cagctggacc ataagcattc aagaacaaac tgtgaataag gagaaagttc 54180

tcccaggaaa caagagcttt agttatgttg ggccagccct tatattcctt agctgttacc 54240

agtcactgct tgatttaatc tcggctatca cttggcctga caggtctgct gctggtgcca 54300

ggatgtctgg gttttgaagc ctggctccat tacatacttc ctgtgtgacc ttgggcaact 54360

tactcaacct gtctgttcct cagtttcccc agctgtatta tgtcagcata atagtttgtt 54420

gtgtgaatta aatgaggtaa taactggaaa tgcttcaaac atggttccta tcatgagaaa 54480

tcctgctttc cgcctaaatg tgctggaaaa ttcctggtgg tgcagaacag gagaccagag 54540

caaaggaaag acagggtgca gaagccaaaa attaccttgg agaacaaagc gcatgttaag 54600

gttatttttg gattctaggt ttatctctgc ttggtcttca gttacctaca agagatccat 54660

ttaggggatt tttgtttgtt tttaacgata gctttattga gatataattc atatgccata 54720

aaagtcactc ttttaaaatg tttccggtat attcacaagg ctgtgcagcc ttccctgtcc 54780

ttgattccag tctgagtttt taactgaagg gataaggagg accacgcttt ccccagacca 54840

gaaccgcggg ccagggggcg attccgctga gtcaccgcgg gcgcctggtg cgcggcggcg 54900

gagcccggga ccttccttgg ctgcccccta gcgagggccg cagcgcagcc tgagacaccc 54960

gccggggccg ctccacggcc gtcggattta gactggaagc tcggtccagg tccccagctt 55020

gatgcgcccg cggtgtagga gaccagcccg actcgagctt cccctgagcc cctggactct 55080

tgactccagc agggcctggg taatgaacgt cagctcccct ttcccaaagg ggttgctctg 55140

ttgggaaggc acccgtttga tacagtagca tagagatggg ttttagcatc aaaatatcag 55200

aattcaagcc ttgctctctg cttactagct gtgtgaccct aaaaaggttt ctgaacgtct 55260

ctgagcttca gtttcctcat cattccttct cacggggtgg ttgtgagcat tacagagatc 55320

ctctctgtga agcccctgtg agtggctcat cctgagggct gaaataaaca tgttattaat 55380

aatccaaaac tggcaaggga tgttgactgg tccccctccc ttgcccaagg agctttctag 55440

aacctgagtt atcattacca aactgtactg ccttgagtaa gaaagttaga aggaatggga 55500

aggatggtgg caggtggagg aaggcggatt ggtcatcacc tccttgcagc aagaaacagc 55560

cccagatcgt gggaaaccta cagacctgct agacagacta ggagcaaaag ctggggcttt 55620

aagaatcccc agggaggttc tcctgagaga gtagccagtt ggattttgta agcagagatt 55680

tgtttgggga ggaggtgaca acgtagggag cagaggggca aagctgtcgg gaatcctgcc 55740

ttgagggcag ggatgtgtgt tggggggagt tgggtcactg gggctcggtg gccttgggca 55800

agtttctacc tctcaggtcc tttacccacc tagggtcgcc atcctgccca cctcacaggt 55860

tacagtgagc ctggatgcac tgtcatgggc aggtgcccag gaaaatggca gacatgttcc 55920

aaacagcacg cagcattccc cagtgatgcc cagggtcacc ttggaggtgg gcgagatgcc 55980

tggggtttct cgtccacccc acaacacctc aggggacagc caaagctgtc ccttcaggta 56040

agctgcacag aagatgtgaa ctctgctgca aagactctat tctttgggag caaaagggac 56100

ccagggtctc acctgcacat ccctgtccct gagggcctag gggttcttgg aggccccagc 56160

cttggcaaaa tgaggaagaa ggtgaaggtt gtctgggccc ctgccaggct ccttcctcgg 56220

ccacgcactc cccttcctgc acacacaccc ttctccctcc accccatctc cattgttgtc 56280

agaaaagtca caataaaaag gtccatattg tctagttccc atacttttaa tttttaaaat 56340

tttatttatt tatttattta tgtatttttt gagacagagt cttaacccag gctggagttc 56400

agtggcatga tctaggctca ctgcaacctc tccctcctgg gttcaagtga ttctcatgcc 56460

tcagcctccc gagtagctga gattacagat atgtgccact atgcccagct aatttttgta 56520

tttttagtag agacggggtt tcaccatgtt ggccaggctg gtctcgaact cctggcctca 56580

agtgatctgc ctgcctgagc ctccggaagt gctgggattt caggtgtgag ccaccgcact 56640

cggctccaca cttttcactt attaaaagac tgtggtgtcc atcaatggat gaatgaataa 56700

accaatgtgg actatccctc ccattaccca aggaatgaag cacggagccg tgccaagatc 56760

tggattcaca gtgaaagaag ccagtcacca aaagccacgt gctgtgtgac ttcccttata 56820

cgaaatatcc agaagagata catccatggt gacagaaagt agatgagcag ctggggactg 56880

gcgaagggga gaagggggag cagctgtcta tgaggtccag cctttcttct gggtttggtg 56940

agaatgtttt ggaactagat agaggtgata gttgtacaac attgtgaatg tactaaatgc 57000

cactgaatca ttcattttaa atcgttcttt acgttgcatg aattttaagt caatcaaaaa 57060

cagttgtttg aaaagagaaa agcctatggg tagcggcagc agtgattgga tttatgattc 57120

gattccatgg ctcatccctc ccctgcctca ccccctcgcc ctccgacgtc ttcttctttt 57180

actctgaact gttatctttg ttctcatctc tctctctctc tctcaaccct gcagacactt 57240

ttccctttct ttgtctgccc ccaccctcca gatttccgtg tctccagtgt ctccctacga 57300

ggcatgaatt gagactggga gggtgtgatt ctgaagaagg caccaacagt gactcagcta 57360

gccccttccc ccaccccgcc ccccgggcct caatttagct aaaaaaccac agggacggac 57420

tcaggaggca atacctttcc aagggtccct aaaaaatgtc ccattttagt gtccaggttt 57480

cactcaactt tagtgcctcc cctaaaatgt gttccttacc tcccacccca ctgcatctaa 57540

gtcactgcct gagaaaacag gattgaggaa aggagaaagg aagagagaga gagaggagga 57600

gagagagaga gagggaggaa ggctgatgga tttagaaaag aagaaaacaa gtggtctgag 57660

gaaaacagcc ttggtgtgtt tattttcctg tctgtgtatc gcttctcggc cttttggcta 57720

agatcaagtg tattttcctg tctgtgtgtc tcgcttagat tacagggatc tgtgggtgat 57780

gacacgtctg gtccaggctg cgtagtcacc tcaagggcat gcttattgat gtgtttttca 57840

attcactatc tttgcatggg agtcccaggc caagaggcac agctgcgcca tttgtctgtt 57900

ggtttagata tcctttatcc agttcttcca gagaaatcat cctgcccttc tggaggaggt 57960

gggcagcagg ggtcagagat gggagggaaa ggaaggagcc aggtccttgg ctaggatgcc 58020

agggtcccct gcctctcacc tggcctgggc tggaggcctc ctgctgtcct gtcactgatc 58080

actaccccgc cccagcctcc tgagttagaa gacacaggct aaagtagagt atttcttcat 58140

tgaaaaaccc atacaaaata aaggttcata aaaaataaaa atttagactg ggtgctgtgg 58200

ctcacacctg tgatcccagc actttgggag gccaaggcag gtggatcgct tgagccctgg 58260

ggttcatgac cagcctgggc aacatagtga aaccccatct ctacaaaaaa tacaaaaaat 58320

tagccaggca tggtggtgca tacctgtggt cccagcttct cagcctatgg acccacatag 58380

aatacaatgt cagcataaga agggagccct ggggtcacca aatggtttgg gcggcaaaga 58440

acctgaaggt tgagagaagt ggcttggtta cccagctgtt ggatgtgaga cctggccact 58500

gcttcttcca taccctagac ctgcaccctg acatctcaag taaaaagttg ggggatgttt 58560

tatggtccag gatgaaggaa gggcagtgag gggcagcgga gcatcacttt gcatttctgt 58620

ctgcctctta ctggctgtgt gacctggggc aggtaacttc ccagactcct gggaatcata 58680

acacctatga tgatgatgat gatgatgatg atgatgatga tgacacctac ctcaaggatt 58740

gccctgaagg gtcacagaga tgcctgcaag gcacctgcat ggagcaagcg ccccttctct 58800

ggcaggtgct gggtgagcac tacctgctgc caggccctgg ggctatggca ctgcgtgacc 58860

ctgcaagtcc tacctggcga agctgtcgtt cttgtgctca gtcagtgttg gttgtaagac 58920

tgagaagagt cacttcattt tgctctccag ggacatcttt ctgggtccta ttttctgcct 58980

atgtcaagta gcgcctcaag gatgctcctg aaaatgggct tgtctttctt aacatggcag 59040

gtaggtccca aagcattagc atggggcagc tgacctagcc cagccaatgc agtgcagtga 59100

ctcttgcaac cgagtctaat cagaaggtcc atgaacctac gagcatttcc tgtcccagga 59160

tcagggtgga ggctgagcct ccctgcttag agattcttcc catgcattcc acttttttcc 59220

ccaaaagaaa atattgaccc ttgagaggca cacagtttat ttattttgca tagtaaatag 59280

tagcctgtat tttaaggatg agttgatttc tgcatcagcc cctgtaggtc atcagccttc 59340

tattggtgca tctgactctc tctagccctg cagggatggt ggagggggag gggaaggagg 59400

gatctttatt ggaaaccagg acagtgagac tcattgccct gtcatctgct ctgtggtgct 59460

gaatgaggca gcccaacaga gaaataccct gagcgagcat ccccagcctc caaaacagtg 59520

gcgcattgcc ctgagtcctg ggaatgacct ttgattctcc tgctcctgac ttggaaccca 59580

tggaaacctc tagaagcagc tgaggaaaac ccaacatgaa aagcagaact ccacactgag 59640

aatataggag gtgatcggaa catacaatga ttcttgctaa gaccgattca cagtttttct 59700

tttttttcga tcgaagaaat actggagaag cctaaagaag gagtctaaaa actctggcac 59760

gtgggccaaa actgtccttg agctaagaat gattttcaca tttttaagtg gttgaaaaat 59820

gaaataaaat aagatgatgt tttgtgacac atgaaagcta tgggaaattc aaattctaat 59880

atctataaat agtgttttat cagaacacag tcatgctcat ttatttatgc tcgatggctg 59940

ctttcccgct acaattacgt tgagcagtta caacagagac cacgtggccc acaaagcctt 60000

acaatattta ctatctggcc ctttccagaa aaaaatgtgc cgactcttga ccttaacctc 60060

agcaatttgg gaggccgagg caggcggatc gcttgagctc tggagttcat gaccagcctg 60120

ggcaacatag taagactcca tctctacaaa aaatacaaaa cattagccag gcatggtggt 60180

gcacacctgt ggtcctagcc actcgggaga ctgaggtggg aggatcgcct gagcccagga 60240

agtcgaggct gcagtgagct gtgatggcac cactgcacct cagcctgggc gacagagcaa 60300

gaccttgtct ccaaataaat aaataatgca aagtaaaata aataaaacca tataaaaagg 60360

aatcaattta aaattataat gaaagctggc cgggcatggt ggctcacgcc tgtaatccca 60420

gcactttggg aggctgaggt gggtggatca cgaggccagg agatcgagac catcttggct 60480

aacacggtga aaccccgtct ctactaaaaa tacaaaaaaa aaattagccg ggcacagtgg 60540

cgggcgcctg tagtcccagc tactcgggag gctgaggcag gagaatgtct tgaacccggg 60600

aggtggagct tgcagtgagc cgagatcgtg ccacttgcag tccagcctgg gcgaaagagc 60660

gagactccgt ctcaaaaaca aaaacaaaaa caaaaacaaa aaaaaattat aatgaaagcc 60720

aaggggcata gtagaacaaa ttttctagag ctcattaagt caaatgagtc accagttagt 60780

aaaacgcagt cacggggaag agagggcagg attctttgaa gcagcggctc tcctaaaaac 60840

aacccaccct tgtccagctg ccttccctcc tgagggtgtt ccctttgact gtgtgacccc 60900

catcccctat ttcccaaccg tccaagccca cctctagcat aatacgagct tttaatccct 60960

ctccctgacc ccaacccgat tttgaagccc agtctagtat tttctcaaat acacttcttg 61020

gctccattcc ttcctttcca tcacctctgc cttttcactg catgcttgga ccactgcagt 61080

cagctcccta tgaacagttg ctctctaccc atccaatcgg ccccgcctgc tgctgccaaa 61140

ttcaccgagg gcacctctgt ggtgctgcct gtggacaaag tccaagccag ccacctcacc 61200

cacctacagg tgagtgggga gcagccagcg tgtccagtgg tttaccccat cgccacagac 61260

ttggtgatgt gtcgatgtgc agagaagggg tgttggcagc cacaacacaa gcaaccccgc 61320

cccatgtgag atctaagatg ggcgtgctgg gagccacctc tgagaatcca acagaaggca 61380

gaggggagaa cggctcacac ggcacaaaca ctccttcctt tttttttttt ctttttcctt 61440

tttgaaagga gtctcactct attgcccagg caggagtgca gtggtgcaat ctcagctcac 61500

tgcaacctcc gcctcctagg ttcaagcgat tctccagcct cagcttccca agtagctggg 61560

attacaggta cactccacca tgcccggcta atttttgtgt ttttagtaga gacggggttt 61620

ccctatgttg gccaggctgg tcttgagctc ctgacctcag gtgatctgcc tgccttggcc 61680

tcccaaagtg ctgggattac aggtgtgagc catggggcct agcctccttc catttaaatg 61740

tatgcctaat ttgcccattg agaacggctg agacgcattt taagtggcca gggtctactt 61800

agagttagtg ctcatgacca ggcccaggtc aagcctggct ggccagatgg tgcctttgac 61860

ctgctctgtc tctgtgcaaa ggaatgagct gaaggatggg ggtgcagtgt gtgggcagtg 61920

ggctggggct ggcaggactc agtgactaag ggaagagaac tttcctcact accagcctgt 61980

cttttcaggg caccgcgggg ggctttggga cttggtgatg aacacagcac agagagctgt 62040

ccagcatgcg ggtccctggc ttctcacact tcccaggctc cttcagaggc tctctccaaa 62100

gggagctgct ctctctagaa cccatgaatt tggaatatag gcaaccactg cattggggac 62160

cactgacctc aaacatagag accagagcaa atggggctca tcacgtgaaa ctcatctgga 62220

actctagcag gttcttttat atatatatat atatatatat attttttatt attatacttt 62280

aagttctagg gtacatgtgc acaacatgca ggtttgttac atatgtatac atgtgccatg 62340

ttggtgtgct gcacccatta attcatcatt tacattaggt atatctccta atgctatccc 62400

tccccactcc ccccacccca caacaggccc cagtgtgtga tgttcccctt cctgtgtcca 62460

agtgttctca ttgttcaatt cccacctacg agtgagaaca tgctgtgttt ggtttttttg 62520

tccttgcgat agtttgctga gaatgatggt ttccagcttc atccatgtcc ctacaaagga 62580

catgaactca tcatttttta tggctgcata gtattccatg gtgtatatgt gccacatttt 62640

cttaatccag tctatcattg ttggacattt gggttggttc caagtctttg ctattgtgaa 62700

tagtgccgca ataaacatac gtgtgcatgt gtctttataa cagcatgatt tatattcctt 62760

tggttatata cccagtaatg agatggctgg gtcaaatggt atttctagtt ctagatccct 62820

gaggaatcgc cacactgtct tccacaatgg ttgaactagt ttacagtcct accaacagtg 62880

taaaagtgtt cctatttctc cacatcctct ccagcagctg ttgtttcctg actttttaat 62940

gatcgccatt ctaactggtg tgagatgtta tctcatggtg gttttgattt gcatttctct 63000

gatggccagt gatgatgagc attttttcac atgtctgttg gcgaactcta gcagcttctt 63060

ttcacaagtt catggagaga ggtttcccac tgagggaatc acatctgtct gatcaaaaga 63120

ggcttgggaa atggctctcc tgttcattcc ctgaaaacct ctgatggaac cactgccact 63180

gtggcagccc cagcactggc accccagcca tgattggtgc cccagccaca tctctgctgt 63240

gagccccaga gccctggtta attaatcatc cacgtgttga tggggagagg cccattcaca 63300

aaagcgacat aaagcccagg gagacgtggc cgtggcaaga agggtgtggg actacattcc 63360

gcccccaact gagagattca gaaaccagaa aaaaatggaa aaacatactg tgctcttggg 63420

tgggaaaact aaatatcatg aagggagcaa tttttatagt tttggcctat aatacaattc 63480

cagccgaaat cccagtggaa ctttgagaat ttgcaggaaa aaaaaaaatg tctaaagtac 63540

atctggaaga caaacttaca agaaggtcaa ataattttga aaaagaaaat gatatctaag 63600

cccacctaga gaataagact tgagatccaa agctaaatca ggaggctcta gcaaaattga 63660

cagataagca ggacagagtg catggtgcat tcacctgggg aagagggcag attggtctac 63720

aaataggcct gggtccactg actttagctg ttatatttgg ggagaaactt ttcaacctca 63780

ctccatctta aacctaaaaa tattccagat gaattaataa atataaaaaa ttagaccact 63840

aaaaatgtag aagaaaatgg atgatctttc tataccatag agcaatggaa taaatcacaa 63900

aggaaaacag atttgactat ataaaactta aaccctgccc atcaaaaacc atcagaaacc 63960

aaaataaaag gcaaccaact ggagaagata gttgccacaa atatgatcaa gggttaatgt 64020

tattcataaa ttaagagccc acacaagtca ttagaataag cactgagacc tgaacagaca 64080

agcaaaaaga atgagagtgg gtcggcgcgg cggctcatgc ctgtaatccc agcactttgg 64140

aaggctgaag caggcggatc acttgatccc aggagttcca acaccagcct gagcaacatg 64200

gtgaaaccct gcctctacaa aagtcataaa tattagccgg gtgtgatggc acacgcctgt 64260

agtcccagct actcaggagg ctgaggtggg tggatcactt gagcccggga ggtagagtct 64320

gcagtgagcc aagatcacac cgctgcactc cagctggagc aacagagtga gaccctgact 64380

taaaagaaaa aaaaaaaaaa agaggagaaa aatgctgatc tcactagtaa ttaaaacatc 64440

aggccaggcg cagtggctca cacctttaat cccagcactc tgggaggctg aggcaggcag 64500

atcacttgag atcaggagtt ctagaccagc ttggccaaca tggtgaaatc ccgtctctac 64560

aaaaaataca aaaattcgcc aagcgtggtg gcacatgcct gtgatcccag ctactcggga 64620

ggctgagaca ggagaattgc ttgaacacgg gaggcagagg ttgcagtaag ctgagatcgt 64680

accattccag tccagcctgg gctacagagc gagactctgt cccagaaaaa attaaaacat 64740

cacatattta aacaactcta ggatatcatt taaaaaaaca ttaatagact gttttttaga 64800

gcacttttag gttcacagtg aaactgagtg gaaggtacag agacttcccg tatgttccct 64860

gccctccacg tacagcctcc cccactgcca acgtcctgca ccagagtggt acacttgtta 64920

caaccaatga atcctcatta acatatcatt atcacccaag ttcatagttt acattagtaa 64980

aacatcatct ttcatctata agcacaaaaa ttttttggca tttatttagg tgtatgatta 65040

actcagtgtt gacaagactc acacttcata cccacttgca ctgcatctga gaagcaattg 65100

gtgtctacag ccgctacacc ctcaacaagc ccgatcttgt ttgaaaagca attggtgatg 65160

cttctcaaaa ttctatggac aaagtcagcc gggcatggtg gctcatgcct gtaatcccta 65220

aactttggga ggccgaggca ggcagatcac ctgaggtctg gtgaaaccct gtctctacta 65280

aaaatgcaaa aattacccag gcatggtggc tggggcctgt aatcccagct actcgggagg 65340

ctgaggcagg agaatcgctt gaagcaagga ggcggaggtt tcagtgagcc aagattgcac 65400

cactgcactc cagcctgggt gacaagagtg aaactccatc taaaaaaaaa aaattatgga 65460

caaagttttt caaaaagata tttaatgcaa ctttatttgt aatattggaa catctgaggc 65520

catttcagtg ctaactatta ggggatggtt aggaaaatat ggtacatatg tggaaaggaa 65580

catttggtag ttagtgcccc tgatgtttac aaaggctttt agtgaccaac aaatgctcat 65640

gctataatct tatgtgaaaa aagcaagtag cataattgca actatatttt taatgcatag 65700

aataaaaggc tagaaggaaa tatcacagat ccttgacata cattcccaaa cctttgtaaa 65760

tccgcggatt catgaaaaca gacacatttg cacaagtgcc tgatcttttc tgttatacat 65820

tcattagaag tcaagccctg gtgccacaaa gtatctgcct tttcaaatgt gatcagaatg 65880

ttctcttttg cttcaaggcc atttttcacg aagcagtggc atttttgcct cttcatcaga 65940

gtcaccgtgt gccctggagg actgagaaca gcagagccgt tttaggatgg gacagggcag 66000

ccaggaggat tgggctcact ccctactgag tgcctcactc ccgtacagcc cccatagagg 66060

aagaggggtt caaatttatt cctcagccag atggcatgtg ccgcctgtcc tggaatttca 66120

catcacttat gatggaccaa aattccaaaa gctgaatcca tgattgtcaa agtctggtat 66180

ggcaggatgt caacagtaat cgtttctggg cagagggatg attttctctt cccatcttgc 66240

tttgtataaa tacattttct ataataaggt tgtattactt ttctcatcaa gaaatagcaa 66300

agtactgttt tactcaaaat atgaatagag ccaggcatgg tggcagctta tgcctgtaat 66360

cccaacactt tgagaggcgg atatgggagg atcactttag cccaggagtt tgagaccagc 66420

ctgggcaaca tagtgagacc cccgtcccca ctcccccaaa gaaaacccac aaagcattta 66480

tcctggatta ttcacagggg ccaaaaaaaa aaaaaaattc aggcctccta tagccatgag 66540

ctacgaatat gaaaatatgc aaatgtgtaa gaaaagccag cacatccgat ttttactttt 66600

actttcacac ctctgtccac catgttccaa gagaagaaac ttggtcattg aaaggaatag 66660

atcaaatcca aagaacaaaa ccactgtgct cattaaactt cttagtgttc acaaagcttt 66720

agctgcaggt tgaatggggc aacccgaatt ggctggctca cctgggctgc agggagcaga 66780

gatcgcgaca ctgcactcca gcctgggcaa caaagcgaga ctctatctca aaaaaaaaaa 66840

agttcataaa ttcaaagtta tgaattattt ttaaaataat aataatttac aataaagatg 66900

aggacaaagt gtgagtaaat ggtggtttct atccagctct gttgagctga agtggcatct 66960

ccctgctggg gcttttgggg aagaagggtg tgtgttgctc ttcagatccc aagcctcatg 67020

cccctactgg gccctgtggg gtgcttctca gcccaccagg agagccaccg ttggaacaca 67080

cacgtggggg acctggtggg tgccggtgtg gtgaatgggg gccacagcct gactccagga 67140

agccagcaaa ctcggagctg gaggagtcag gacacccccg atgagtcaag agttggtttt 67200

gctgccagtt gacatctgat tgaaccatct cttcacttct ccgtgcctca ctttccttac 67260

cagacaggct ctgctgatgc tgtccctctc ctgttcagtc gtgccctcac cgttaaagag 67320

aaagagcaaa ctgctgggca gcagcattga tttttttaat gaagtggaaa gagagctggg 67380

aataacaagt cgggcccacc tcacctgcct cacctggtgg gtttatttgt tttgtttttt 67440

tttttttgtt ttgagacaga gtttcaccct gtcacccagg ctggagtgca gtggtgtaat 67500

ctcagctcac tgcaacctcc acctgccagg ttcaattgat tctcctgcct cagcctcccc 67560

agtagctggg attacaggca cctgccacat gcctggctaa ttattgtatt tttagtagag 67620

atggggtttt accatgttgg ccaggctggt ctcgatctcc tgacctcagg tgatccaccc 67680

acctcggcct cccaaagtgc tgagatcaca ggcgtgagcc accatgcctg gccgtcacct 67740

ggtggtgttg aatatgaact gctgcggtgt tggtaaatta agcaagcaga tagatgtaaa 67800

taacgcttgg gcaggaatat ggagcacggg atgaggatgg gcggccaact gttagagagg 67860

gtagcaggga ggctgagatc tgcctgccat gaactgggag gagaggctcc tctctctctt 67920

cacccccact ctgcccccca acactcctca gaacttatcc tctcctcttc tttccccagg 67980

tgaactttga accaggatgg ctgagccccg ccaggagttc gaagtgatgg aagatcacgc 68040

tgggacgtac gggttggggg acaggaaaga tcaggggggc tacaccatgc accaagacca 68100

agagggtgac acggacgctg gcctgaaagg ttagtggaca gccatgcaca gcaggcccag 68160

atcactgcaa gccaaggggt ggcgggaaca gtttgcatcc agaattgcaa agaaatttta 68220

aatacattat tgtcttagac tgtcagtaaa gtaaagcctc attaatttga gtgggccaag 68280

ataactcaag cagtgagata atggccagac acggtggctc acgcctgtaa tcccagcact 68340

ttggaaggcc caggcaggag gatcccttga ggccaggaat ttgagaccgg cctgggcaac 68400

atagcaagac cccgtctcta aaataattta aaaattagcc aggtgttgtg gtgcatgtct 68460

atagtcctag ctactcagga tgctgaggca gaaggatcac ttgagcccag gagttcaagg 68520

ttgcagtaag ctgtgattat aaaactgcac tccagcctga gcaacagagc aagaccctgt 68580

caaaaaaaaa agaaaagaaa aaagaaagaa agaaatttac cttgagttac ccacatgagt 68640

gaatgtaggg acagagattt tagggcctta acaatctctc aaatacaggg tactttttga 68700

ggcattagcc acacctgtta gcttataaat cagtggtatt gattagcatg taaaatatgt 68760

gactttaaac attgcttttt atctcttact tagatcaggc ctgagtggcc tctctttagc 68820

aagagttggt tagccctggg attcttactg tagccacatt aataaacaac atcgacttct 68880

aaacattcta taataccatc ttttggccaa attgacttcg cctcttcctc tctctttcca 68940

aatgaaatgt gtttcatttc actgtcagac cacatggttg gggaccccac agagcacaca 69000

gccctccctc tgccttccca tgctggccct tcacccactg ctggagtgcc aggttggtcc 69060

aagggttgga ccaagttgtc tgaggttgtc tcaaggttgg tcgaggctgt ctccgcgctg 69120

ggttgtgcta caaggagccc ttctttccat gggtgtggct ggcagtgagt gctcacagca 69180

acagcccaca gtgcagcccg agggcaggat ggactcagtc cctgcctcca tacccatttc 69240

taaggaggca aaatggcaaa cactctactt ttctctttta atgctaaaaa taagaaaaca 69300

ccttgcagcc cagggtatgg gtagtgcatg gaagccgtgg agttgtgagg tgggaagtga 69360

cctctgctgg atatgtctat tcaggaagat tgctggagtg ggtggggtct ctgggaggtc 69420

ccctgagtgt gggaagctgg gaccaccagc tttctcgcac agggagtggc catcccagct 69480

tggagaggtt ccaggactgg ttgggaggca cgtttcagat ttctatctgt tgaatcagcg 69540

aagatattgg attatgagga atttgggaat taggaaagtg ggtgcaggtg ggttgggggt 69600

aggtgaagga agacatgggc gtattggggg agcaggggct gctcagaggt gttccagaag 69660

ctctgggtga ggaggtgaga gggaccgggg aatgcagctc ggcccagcct ccctgcctga 69720

ggtcagccat cacgtggtga tggcaagatg gaaatgtgct ttctgactgc tccagccagt 69780

gctgccagat tcagctcccc agggagggca cctgagaggc tccaagccag gagatctgtt 69840

ttctcctttg ttttgttttt ttttgttttg ttttgtttta ttatacttta agttctaggg 69900

tacatgtgca caacgtgcag gtttgttaca tatgtataca tgtgccatgt tggtgtgctg 69960

cacccatcaa cttgtcattt acattaggta tatctcctaa tgctatccct cccccctccc 70020

cccaccccct gttttctcct ttgaatcctt cttagaggcc gggtgcggtg gctcacgcct 70080

gtaatcccag cactttggga ggctgcggca ggaggattgc ttgagcccag gagttccaga 70140

ccagcctggg caacatagtg agacctcgtc tctacagata ataattttaa aaattatccg 70200

ggcatagtgg catgcaccta tagtcccagc tactcaagag gcagaggcag gaggatcact 70260

tgagcccagg aggcggaggt tgccgtgagc caagatccca ccactgcact ccagcctggg 70320

cgacagagac ccccatgtca aataataata ataataaata aatccttctc agtcccttcc 70380

tcactgtgtc cccctccact gaatttttcc acctcctctc ccacttcccc cactcccgct 70440

ttccctctcc ttctctcccc actccatctt tttctttctc tgctgtttct cgtccctccc 70500

tcctctccat cccacaacac tgcctaccct gtccctgccc caccctggtg ctcaggatgt 70560

gtgaagtgag gggtggtagc ccccaagacc tcaaccccga aggttagcct gttgaaacca 70620

ctttctccca gctgcccccc tggcagttgg tgctgctggg ggaaactggg attgggggcc 70680

agattttgcc tcttttcctg acaaagagag atgaagagtt ctctcaccag gtgcctggga 70740

ctggggtgtg ggtgtcccag cctatcccag cgcatctgtt ctgcatcatg attaatagtg 70800

ctgctttcag ccgggcgcgg tggctcacac ctgtaatccc agcactttgg gaggctaagg 70860

tgggcagatc acaaggtcag gagttcgaga ccagcctggc caacatggtg aaacctcgtc 70920

tctactaaaa atacaaaaat taaccaggtg tggtggtggg tgcctgtagt cccagctact 70980

tgggaggctg aggcaggaga atcacttgaa tctgggaagc agaggttgca gtgagccaag 71040

atcgtgccac tgcactccag cctgggtgac agagcgagac tccgtcctaa aaaaaaagga 71100

gttttgctct gtcgcccagg ctggagtgta gtggcgccat ctcggctcac cgcaacctgc 71160

gcctcccggg tgcaagcgat tctcctgcct cagcctccca agtagctagg attacaggcg 71220

cctaccacca cgcccggcca gttcttgtat ttttagaaga gacggggttt caccctgttg 71280

gccaggctcg tctgggactc ctgacctcag gtaatccgcc cacctcagcc tcccaaagtg 71340

ctgggattgc aggcatgagc caccgtgccc agtcaactcc ttctcaaaaa aaaaaaaata 71400

gtgctgcttt ctctttcaag tgtcctgatt tgggtgatag taaatgccac tctacttata 71460

agggatctac ctcagaatgc taattgggac atttttgtag cactctactg ttggcagcag 71520

gtgatgctca caacagcccg tgagggtgga tgacgtccgc ttcacagatg acaaaggagc 71580

ctcatgctca gaccgtgggc tgccagagca ggtccatggc tgcagcccca catggaccat 71640

atttccccct tgtcactctt tccaccaagc tcccttggaa cttcagttat taagctctct 71700

tgggtggaat ccaagttaga atcacaacat gtgcctcata tggattgtgc cagtgaaaaa 71760

tgacattcta tttagaggca gggcagcctg gcttagagtc agtttaaaat atgtattatg 71820

ctgcaacaaa tgtaccatga tcctgtaaga tgttcacaac aagggaactg gatgtggggt 71880

atactgtctg tactaacttc acaagttttc tgtaaatcta aaactgttcc aaaataacaa 71940

gttcgtttaa aattaactcc aggagaccag gtacggtagc taatgcctat aatcccagca 72000

cttcggaagg ctgaggcagg tggattgctt gagcccagga gtttgagaca agcctgggca 72060

acatggtgaa atcctgtctc taaaaaaaat cacaaaaatt agccaggtgt ggtggcgcat 72120

tcctgtagtc ccagctactt gcggggctga ggtgggagaa tcatctgagc ccaggagttt 72180

gaggctgcag tgagctgtga ttgtaccact gcactccaac ctgggcaaca gagcaagacc 72240

ctgtctcaaa aaacaaaaat gaaataaagt ccaggaaaga agtaggtttt accactctta 72300

ttttctgaag agaaaactaa atttaatgtg taaagtgagg acaagttcac caagttagtg 72360

tttgagttgc ctaaaatatg tttgctaaaa ctattcaaag ctttcacata aaacatgatc 72420

agaagttcta tgccaaaaca tatgtgtgtg tatatatata tgcactatat atactgtata 72480

taaaaatgca aaatctaaat tgccaacctt ttagaaattg ctctgaaagg aaagcatttc 72540

aagataattt gcttacccaa agaatatact ttccaagaaa gcaagtaata cttaaggtgt 72600

tcataatcct catcaaatta attcttgcta ctgaaagctt acaaggagct gttttgatgt 72660

cgggtgtgac aggtttgact tggcagaagg tgtcacttta ctaacaacat tttaaataag 72720

tgacagaaga caagaaacta cacgttaaat gccagaacaa agagtgtcta agtggatgct 72780

aagagttgaa atatggctgg atacctgccc aagagagctg aaaagtagat gaaagttggt 72840

tacctataaa ctagtgcacc ctaatgaatt aaaaggtgtt gatgagttaa cttgttatgc 72900

cttccagata agacatgcaa atggggcttc ttcctccttc actacttcca agggatttaa 72960

caaggagacc aatgcaaatg ataaggactg tagggctcaa gctggggaca gattggggaa 73020

agggggacca tcatgcccat atagatgtcc ctgtgccctg gcagtcaagg ctgctgaaaa 73080

ataacaaaac ccagaagtct gcgtgatgct gcctctccat ttgtccaaag ccttcttgcg 73140

gcagtttgca ggcttttgca aaagctccag gaccaaggag ctatgttcat gctggaagct 73200

tgttcaggat tagctgttct ttgtgggatg ggtgcagcca gggccaggtg tccagggaca 73260

gtgttttaac aaagggcatg aggtgtctga tctcacagtg gaactccact tgcctttttt 73320

tcatcttctc attctgcttc atgcacagaa ccagccccat cctgaaactg actctaaatt 73380

actcccgccc caggtggagt gcctttctcg gagttcaaca gagccttcct gtcgcccaag 73440

ggacaactcc actgaatgcc caagccacac ccaaaaccta acaagtaaaa accaaattct 73500

gtgctccccc atcctgggcc attcctggtt tctctactgc tgttggtgat accaccatca 73560

gcttgtccat catgaccctg gccagttcct cccacaaccc tccacagcac ccagggacct 73620

cacctccatt ccatccgaca cagatctcct caccacaaac cttggttttg caacagcagc 73680

catgagacct ttacaccctc cgcccttcat cctgtccccc actgaggccc cagagccatt 73740

ccttaaagca gcgcgccaca aactataacc cacaagccaa ttctggtacc cagcctgttt 73800

tgcacagcca gtgaactgac aatgatcttt tcatacagcc agaaaaacaa aacaaaacaa 73860

aaaacaacaa aaaaaaaccc caccattctg agcatgtgac ttccatgttc aagatgtctc 73920

atgttcagaa aggcccctgg aaaaggagga aggggagctg ggcacaaagg gagaccctct 73980

cagctgagct cctcccatcc agacattttc ctggacttcc tatccaatga cttcccttag 74040

cttcttatca gccacccctg tctgcccagg aggctggaag atgtggcctt ttaactgggc 74100

acagctctgt cctctatcat atcagggctc tgttcccaag gagggtagag agaatggaca 74160

ccaggtggac cctcagcagt ctgtgccaca gagggagtgt ttgcaatttc cagactaaaa 74220

gtccccatgt gcttgacggg gtatgtgact acaacgtgat gcttgacttt tcctcatatg 74280

accagagcca ctttgtccat ctggtacaat gtcagctatc tgctaggggc cctccaggat 74340

tcccagtcaa ttccatatct gcatcaccac cattggcact aaataaaata aaatactcaa 74400

gttcctgctg gtgagcatga gcagtgctac actgggccct tcaaccaagg tgacatgata 74460

atgactgaaa ataatcactg ccacttattg gggacgtctc atctgccagg catggtacaa 74520

agtgctttaa ataagcattc aacaatttca tgctgacaga agccctgtga gccagtggag 74580

ctactactat gcccattata caggggagaa aactgaggca gagagaggtt aggtaattcg 74640

ctcagcctca cacaaccaat aggtggtgga gccaggattt gggccccatc tgcctgactc 74700

tctagaggct ctatcttcca gtcttccaga gttgagtcta agccatgaat aggacaatta 74760

gacagcagag gaaacccatt cagccaccat gtgcatgaag agtaaggaat ttctgtcata 74820

cagaggggag tgaattcact gagctgagag ctgaggaacc attgatctga tggctgagac 74880

accactggga agactggaga ggcttttctg ggcatgcagt gccaggcaca ggaggagctg 74940

agggaagatg actaagaggt actggcaaag aattcagaaa ttctgatgga agctttacat 75000

gttaccatca catccatcca tctatccacc catccatcca cccatatctt cctccctcca 75060

cccaatcatg catacatcca gtcatctata caccacccac ccacccatcc atccatccat 75120

ccatcccttc atccatccca tcatccatcc aattatacat acatccaatc atatatctgt 75180

acataatcca ttcttccctc ggttcatcca tccatccatt catccatcca tccacccatc 75240

ccttccttca tccttcctat catccatcca atcatatatc tgtacataat ccattcttcc 75300

ctcggttcat ccatccatcc attcatccat ccatccaccc atcccttcct tcatccttcc 75360

tatcatccat ccaatcatac atatatccaa tcatacatct gcacatcacc agctcatcca 75420

tctatccatt tatccatcca tccttccttc catccatcat tcatccatca tacatacatc 75480

taaccataca tctctacatc attcattctt ccatcgattc atccaattat ccatcattcc 75540

ttcctccatc catcccatta tccatttgat catacatata tcatctatac atcatccatt 75600

catccatcca tccatccatc cacccatatc ttcatccaat caatcataca tacatcgaat 75660

catctacaca tcacccatcc atccatccat ccattcatct atccacccat ccatccatcc 75720

atccatccat tcatctatcc acccatccat ccatccatcc atccatccat ccatgtaacc 75780

atccagtcat atatccaatt acacatccat ccagttatac attcatacat gcatctaatc 75840

attcaattat acatacacac atccatataa ttctacatcc aattatacct ccatccaatt 75900

acacattcat acacccacct aataaattat taattcatat atccatccat ataattatac 75960

atcaattata catccatcta atcattcagt aattcaccca ccatccagtc atctatccaa 76020

taatacattc atccaatcat ccatccatcc atccacccat tcatccatcc atccgtccgt 76080

ccacccatca tggtatgagc catgatttac cacgatggtc ccctgtggac agcccaggtg 76140

gggcagaact gaagggaagc ccagggctgc ccccataaac atttgcctcc tttacatgga 76200

tgagaactag atccacatgt ataaatcctc atgatttgaa ggtgctttta ccaacattca 76260

ctcatgggat tctcccagga gctctaggag gaggcaggta gagttgaggt catctcacgc 76320

attttacaga tgaggaaacg gaggccctga gaggcaggtc caaggccacc tgaccagaaa 76380

gaagtggaac tgggacttga acccagccat cttgcccctt ggtcccatgc tctctagcct 76440

gtaactcctg cttcctggtg gggcatctcc aggaggaccc tatcggctgg ccatgggcct 76500

gccctggagt cttttgctct gtgtggccat ccttcctccc tcaggagagt gtgtgctccc 76560

agagcacagg ctgtatcttc tgagcatttt gtcccttccc agtacctagc actcagctct 76620

gtatacattg ggctctcaag aattctcaac cttccagagt gtaaggcctt gacctgctca 76680

gccctggata ctgcatgatg cattgataag cccataaaat aaccagggca gattgactcc 76740

cagtggccaa agtgccacag ggaagggaca attcagccct tctaggagga ggaggaggta 76800

gttttctcat ttctattaag gcaacaaaag ctgccttact aaggacattc ttggtggagg 76860

gcgtgactgt caaccactgt gatcatttgg gcctctcttg cccaggcttc ccattctgaa 76920

aggacagttt tattgtaggt acacatggct gccatttcaa atgtaactca cagcttgtcc 76980

atcagtcctt ggaggtcttt ctatgaaagg agcttggtgg cgtccaaaca ccacccaatg 77040

tccacttaga agtaagcacc gtgtctgccc tgagctgact ccttttccaa ggaaggggtt 77100

ggatcgctga gtgtttttcc aggtgtctac ttgttgttaa ttaatagcaa tgacaaagca 77160

gaaggttcat gcgtagctcg gctttctggt atttgctgcc cgttgaccaa tggaagataa 77220

acctttgcct caggtggcac cactagctgg ttaagaggca ctttgtcctt tcacccagga 77280

gcaaacgcac atcacctgtg tcctcatctg atggccctgg tgtggggcac agtcgtgttg 77340

gcagggaggg aggtggggtt ggtccccttt gtgggtttgt tgcgaggccg tgttccagct 77400

gtttccacag ggagcgattt tcagctccac aggacactgc tccccagttc ctcctgagaa 77460

caaaaggggg cgctggggag aggccaccgt tctgagggct cactgtatgt gttccagaat 77520

ctcccctgca gacccccact gaggacggat ctgaggaacc gggctctgaa acctctgatg 77580

ctaagagcac tccaacagcg gaaggtgggc cccccttcag acgccccctc catgcctcca 77640

gcctgtgctt agccgtgctt tgagcctccc tcctggctgc atctgctgct ccccctggct 77700

gagagatgtg ctcactcctt cggtgctttg caggacagcg tggtgggagc tgagccttgc 77760

gtcgatgcct tgcttgctgg tgctgagtgt gggcaccttc atcccgtgtg tgctctggag 77820

gcagccaccc ttggacagtc ccgcgcacag ctccacaaag ccccgctcca tacgattgtc 77880

ctcccacacc cccttcaaaa gccccctcct ctctctttct tcaggggcca gtaggtccca 77940

gagcagccat ttggctgagg gaaggggcag gtcagtggac atctgatctt ggtttagtat 78000

ccttcatttt gggggctctg ggtgtggcct gggcctctgg actttggcca cggtgtttgt 78060

tccagccctt ctcctaacct gtcctttcca gacactcggc atctaggtta ttagcacctc 78120

gcatactttc tgacatgctc ctcagtcctg attttgacca tcttctcttg cttcccatct 78180

gtgtcagtca agactgcatt tggctgtaag aaacagaaac cccaactaac tgtggcattt 78240

acatgaagag gtttactttt ctcacataat cagatgtcta gacttggcca gcacctcaag 78300

ggtcattgat gctctcctgt ctttattttc tgtcatcttt agtggttgga ttgttgcctc 78360

atggttacaa agtggctgct gcacttccag gcatcacatc tgcctttgaa gcaggaacaa 78420

gttgcaaagt aaagtggcca aaagggccct gaaactaaat gtgtcccctt aggaaagcag 78480

gagttttctt gcaagtggca atcttctgct tatgtctcat tggccagagc tgggtcttac 78540

ggccacccct tgctgcgagc aaggctggga cattgagcat tttgccgtcc aacctcttta 78600

gcagaataaa ccaaggggga agaacgttaa tagtggcttt tgagtcacta gttggcagta 78660

tctgcccctc tatctttcca tcctccccat ggagtttcaa ggttcctttc tcagtacttc 78720

ttcaggctct gcacgttcat ttggatcttg tgtcttgggg tgaaaaactg gcccaagtgt 78780

ctccccaagc atccaccttt ggattaattt ggaaaatggc tgtcaagtgc ccgcctcttg 78840

cttggtataa tgctacagct ttagaggacg cagcaggcat gggccttgcc gctgaggttc 78900

ttagcctcat gagaatatcc agatcagatt ctcttggctc cttcttagag ccagtgatgc 78960

aagacacttc ctgctcatct tgtcgggacg gttttacaag ttgcctgcca tcctgagaaa 79020

gtctacaaaa cgatgccaga cctcatgcca gcttcccaag ccttgactct cagtgctccc 79080

tcaacaggat tctggaagaa tctcccaaac aagtcgcaat cccctctgga ccctgtgcag 79140

gcatgagact caagagcatt ggctcccacc cctggtggag ggaacactgc tggggctggg 79200

atcttgcctg gttgctccgc ctgcacccaa gacaaccata attaaaatgt ccttcattga 79260

acttggaaag ccttcaaagc tgacaactcc ttatgtgtac ccggaaaggc ctgggagtgt 79320

gccagggcat tgctcgggag ggacgctgat ttggaagcat ttacctgatg agagactgac 79380

agcagctcct ggtagccgag ctttccctcc tgcctctgct gtgaaggtgg acccatccaa 79440

cagtcaaatg cctgactctg gacaggagcg gacctattta ttgccatgca agggactctg 79500

cacttttgaa ttgtgggtca tgggcttgga tttaggggtt agagctggga gaagtcttgg 79560

aagtcaccta gagatgacac tgccattttg cagatgagga aaccgtccaa tcaaaatgga 79620

ccaaggactt gcccaaagcc tcacagcaaa accataggcc cccgcactaa ccccagagtc 79680

cctgtgctgt cttaagaatc aaatagttgt aagcaatcat ctggttttca gtatttcttc 79740

ttttaaaatg cctggggcca tgcccagcag tctgtttcac tgcagcgttt acacagggct 79800

gccgggcttt cctggtggat gagctgggcg gttcatgagc cagaaccact cagcagcatg 79860

tcagtgtgct tcctggggag ctggtagcag gggctccggg ccctacttca gggctgcttt 79920

ctggcatatg gctgatcccc tcctcactcc tcctccctgc attgctcctg cgcaagaagc 79980

aaaggtgagg ggctgggtat ggctcgtcct ggcccctcta aggtggatct cggtggtttc 80040

tagatgtgac agcaccctta gtggatgagg gagctcccgg caagcaggct gccgcgcagc 80100

cccacacgga gatcccagaa ggaaccacag gtgagggtaa gccccagaga cccccaggca 80160

gtcaaggccc tgctgggtgc cccagctgac ctgtgacaga agtgagggag ctttgcgtgt 80220

ttatcctcct gtggggcagg aacatgggtg gattctggct cctgggaatc ttgggttgtg 80280

agtagctcga tgccttggtg ctcagttacc tccctggctg cctgccagcc tctcagagca 80340

tttagggcct tctggacttc tagatgctcc tcatcttgcc tcagtcagcg cgtcagttcc 80400

agagacttct ctgcagggtt ttctggggca ggtggtggca gacccgtgcc ttcttgacac 80460

ctgaggtcag tccaccctcc tgctcagact gcccagcaca gggtcacctc ccaaggggtg 80520

gaccccaaga tcacctgagc gcacagaggg tgcagatgac tggaccacac cttttggtga 80580

tcttaatgag gtggtcccag aggagctcag acatgcaatc tagcatccag ttctgggact 80640

ctgtctcctt ttcaaacgta ttcatgtaga acaggcatga cgagaatgcc ttgtcaacat 80700

gggtgatggg gaatcaatca gacagggcgc cgggctcaag gctgcagtca cccaagagtg 80760

gctcagccca ccaggcccta ggaaacgcct gcacagcctg gagctcctgg agtcatttcc 80820

ttcatgtctt cttcactgca cttacgtaaa gatgccagcc attggtttgg tgatttggag 80880

ggtgcccagt tgcccaacaa gaaatgcaga agaggcctag ccaggatttc accagcagtg 80940

gagagtagag aagatgtggc cagaaaagag tttcctttcc ctcctaaaga tggtactccc 81000

tgcagctact ggggaagcct gcagcattct ctagggctct gtgtgttgag agcagcccca 81060

ccctggcccc ttctgagtgc atttctgctt tgtgacttga tccgtgaagt cccctgagat 81120

gggcagaggg gatgtcctcg aagctggggc agagcctcat ccttgaacgt gaaggacgtt 81180

tgaagactgt ggcatgatca caggatgaga tcacagggaa cttgagtttc tctcctcctc 81240

tcccttcaca gttatttcac tgagggaaat ccctcccctg cccagaatga aaactctagc 81300

caactcttga cttttccatc actccaaagt agttgaaagt acattagtct ccacagtggc 81360

aaaacagtgt gcaaaagcta aataattaga acagccagtc ccatgtgaca gtcaaagctt 81420

ctaactccat tcaaagttgc agccattccc ctcgagggct ggcagggagg ggaggggtaa 81480

gagaaacagg aaggttctta ctgagttggt cctggtgtga gctgcgtcac actccctgca 81540

gaggtttcaa ggagactctc tctctctctg tctccatggg gaccttattt gaattcttct 81600

actcttaccc cagcctgcca tctccagcta tcctcccctg aagagccctt ctgctgcgct 81660

ggattctggt ggccatgtca tctcctcggc cccgtgggag tctgaagatc tggctgcagc 81720

ctcacctctg aggtcctgct agttgccacc tcttaaacat gatctgaggc tcccatgcac 81780

tctgacctgt gcccacatgg ggcccacggg aaacacgctg gcaagcaaac tgtgggtgtg 81840

cagacggttc tcagggctgc agcacctgtc ctttgctctg cccccaaagc aaggccagcc 81900

catcttccat cctctagtgt tccttggtgg ggccctgacc acagtccacc aggtccctaa 81960

ccagagggga cacacaccag gtgtcctcaa tgtattgcct tgaaacagtt gtgctgggac 82020

tgtgatgggg ggtggccatg tagccacccc caccaccccc aagccactct ctccaaggaa 82080

atcctcctaa agatcccttt acatcctcca tgtggtgggg aggttctaga gttgggtgca 82140

tgtgtcttca gctactgaca atgcagacct tagttggcac ctcgctctgg cctatcctgt 82200

ttgctgttct tggcgctcca gtgaaactcc ccatgggcca tccagttggg gtgcagtgtg 82260

gccaccccct tgcaggttcc tgccttgctg gagagcacag ggccctcctg gctcttgtaa 82320

aacactcccc atggtacaga gaggccagca gtgatgtgag gcccaacctc cctccatggt 82380

gttcccaagc agctcccttt ctggggtcaa ggggtggcaa agacagtgca gcgtccaatt 82440

tctgactcaa gccgggcctg gctatcgcag ctctgcactg tgtgtgacag caaggcaact 82500

cacccagtgc cgtggcagtg accgtgtccg aggaagcctc ctcacaccct ctgtctcaag 82560

gactctggca tttagctgga cttgctgtag ctctgagcct ttctgccatt gccatcacct 82620

tgtcagaaac tcaggccgaa tctgcactca gagttgtgcc caggcagttg agccaacact 82680

tgctcagcga tattgtcaca tgacaaggca ctgtcaccac tgggcgtcgt gggtagcgca 82740

gtgtcggctg gatggacccg gagggtgtct gtgtcatgct agtgctagtg atgggagccc 82800

cgtgagccca ttgcccgccc tcccatgccc tcagcagctg cctggggaca gccaatggcc 82860

tgggtgtttc tgaggctacc acatggcttc caggaaactc gagaaccttt ctctcccttg 82920

cctacactct tcacacaggc ctgtgctggc cagcggtggg gatccggcat tcctatctta 82980

ggtgcagaaa gtgactgact cattgcaggc ctgggagata agactgatgg cccagccagc 83040

aagatgtatg gatttctcag aggcagtggc ctctgtcatt gtcctcagga aatgctggtg 83100

attctggtgg cctgaggtca atgcatgtca acgtggccaa cttgccttat aaactttttt 83160

tctggacaat tgcgtgcact gtcctgtaac agtgtcctgt tgtttatgat gcagaaatag 83220

gtgtttttaa agcctattga ttttggtact attaatgtgg tcaggaactt tctcagtctt 83280

tcttgtttgg ggtgagctgt ggcttcctaa acaggaaccc aagacacccc caaaagctgc 83340

tcaccagcac tgccagcctc cctcttacca agtagcaccc gttcaggaca ttctgcgaaa 83400

ggcatttgcc cagaagttgg gaggaaggaa atgtaacatt ttggggcacc taccatatgc 83460

caggcaccag gctaaacgtg ttcacacaaa ttctcttact aaccctcacc atccttctac 83520

aagacaaact agtatcttca tcttggggtt caagatgagg aaatggaggc tcagagaggt 83580

tgaatgaatg ccggtgcctg gatatgaacc ccatctgcct gactccgcaa cccaggcaaa 83640

gtctttcctt gaacttccca gcagccactg cttagacaca gcctccacaa ccatggctca 83700

gcagcaaatt gcttctctga cctcactcag cctgtgtgtc cttgttgagt gaggcattca 83760

ggaccctggt cccaaagtgg agaaagtctt tcctactagg tcatagctac acctgcatgt 83820

gggtgctgtg ccttttgttt agtgaacttt tatcaccagc atcctcagca atgacatttg 83880

cagagaagcc agagctgagg caccttggta ttcttgggat gtgactttcc tgaatgttta 83940

agggaaaatg cccgaaggta cagagagctt ggtttctagt aaacaataac tgtcttgctt 84000

ttacccccct tcatttgctg acacatacac cagctgaaga agcaggcatt ggagacaccc 84060

ccagcctgga agacgaagct gctggtcacg tgacccaagg tcagtgaact ggaattgcct 84120

gccatgactt gggggttggg gggagggaca tggggtgggc tctgccctga aaagatcatt 84180

tggacctgag ctctaattca caagtccagg agattttagg gagttggttc ttatcaaagg 84240

ttggctactc agatatagaa agagccctag tggttttttt ctaataccat ttctgggtaa 84300

ttcctaaggc atttagtgtt ctgaaagatg ctagccttgt ccagcctggg agttgagaat 84360

gaatgtctaa cagaaactct aggccgggcg tggtggctca cgcctctaat cccagcacta 84420

tgggagaccc aggtgggcag atcacctgag gtcaggagtt tgagaccagc ctggccaaca 84480

tgtgaaatcc tgtctcacta caaataaaaa aattagccgg gtgtggtggt aggtgcctat 84540

aatcccagct actcaggagg ctgaggcagg acaatcgctc gaacccagga ggtggacgtt 84600

gcagtgagcc gagatcgcat cattgcactc cagcctgggc aacaaaagca aaactccgtc 84660

tcaaaaaaaa aaaagaaact caaatatgtg tgacaggcga ttctcactgc aggctgccct 84720

gtggctgatc caggagcaag gccttaacca tgtcatcccc aagcgattgc ttgtaaactt 84780

tcttctgtgc agccttcaac ccttattatg attttcttct caggaaccaa actgctgtat 84840

tcaagaaagg cagctttgtg taatcattta tcataaatat cttaagaaaa atcctagaga 84900

ttcctaattt taggaaatgg gagacctatg gtactgatat aatgtgggct gggcttgttt 84960

tctgtcattt gctagataaa tgaacttgag agcctactgt aaaatgtgga agcttctaga 85020

ttgcagaagg gctggaaaga cactgttctt ttctcccgag tgatgggatc tgtccagtat 85080

ttagagctgc ctctgaggcc atctgattct aggagactct gcctcgttga ggatattttg 85140

aggcctaact acacattcct gcccccagag aggtcacagc ctatagcagg ctgatgtttc 85200

tcatgtcaca tggcacagaa aggcacattt tcgttctcag gctaacaaag agcttcaaaa 85260

actattagaa gggacagtgg ctataagaga agaacctcag tcaatgtgtg aaattaacta 85320

ggaacctggc tcctgtttct tttaggtcat gtttttcagc ttaggtaaaa ctagaggctt 85380

tgataaagca tgacctctag aaatcattgc ttttcataaa tggaagtggg tttgagtttt 85440

ttctactgat tgttagtgca ggtgatgtct acatgccccc agaacatatt ccatgcaaca 85500

aaaaaagccc aggtcaccgt ctttgctggg aacttgactt ttgtgctcac tgaattttaa 85560

gctttctgac agcagcctgg aatcatggag ggataaagta cctattagta agatggaaaa 85620

aggtgtttca ggttggagct gcagtctgtt gagagtaagc tatgggaagg cctgtatacg 85680

aggggtggac ttttcttctg taagtgtcca gagaccaggc ctcctgaaga gggcatgggg 85740

gcttaactta cctggactac tgtgtttaca atactcattt atcttgaact cctcctaacc 85800

cctgagaatt gctacattta gtatttgctg agtacttcct agcatcctag ggaatcaata 85860

gaacattctc ccaaccaggc tgggtgcggt ggctcatgtc tgtaatccca gcactttggg 85920

aggccaaggt aggcagatcc cttgaggcca ggagtgcaag actagcctgg ctgacatggt 85980

gaaaccccgt ctttactaaa aatacaaaag ttagccaggc atggtggtac acacctgtaa 86040

tcccagctac atgggaggag taggaggcag gagaattgct tgaacctggg aggtggaggt 86100

tgctgtgagc cgagatcatg ccactgcact ccagcctggg cgacagagtg agtgagactc 86160

tgtttaaaaa aaaaaaaaaa aaagaacatt ctcctaacct ggcttcttcc tccaggggtg 86220

taattaatca tgtcagtttc ctcattgata cacacacaca cacactacaa tcctgtatcc 86280

attacttttc aaggtacatt tactatttac gtttggggtc cttgtctctt ttttaatagt 86340

gtttcttaaa gtcttgtatt atatcagagt acagtaacat cccagtcaag agcactctag 86400

taagctctag gaggaaagcg acttccggaa ggcagtggag acctgtcctg ttggggcagc 86460

ataggggcag cccctgcctc tggtcagttc tggcgctcag gctcagggtt gcctctgggc 86520

tgttcttccc agagactgac aaagggctcc cataaggcac ctgcagagcc tgtgagaagc 86580

tgaagtcaat gttttcctga caccagttga tctgtgcagg atccattgat ttaaccacct 86640

gctgtgtggc atgcactgtg gtcgatgcca ggaacaggaa ttggaggggc ccatgagcat 86700

ggccagtatc acaggctgga ggtgctgctg cgctctgacc gggcctcttg gggatgagcc 86760

catgtcaacc accttgcctc cgatggggtc gggcccacag gttacctttg tgtgtccatg 86820

accacacctt cctccccgac ctcatccaaa tctctttctt ttccaagccc ctgaatcctt 86880

cagggctgca ggttttgttt aaagcagagc tggtgagttg cataggttgt tgcgttggga 86940

ctagatgggg tgttcaaaga gttgggagtt aaaaaacata aagggtattt attaggagaa 87000

ccaaggagtg taattctcct gttcttaata tgcggccagg ttaatgaatg tcacgtgaat 87060

gaaccagaaa aaaatgaagt gtgcccttga tcagctgggt tggtgtgcag caagctgtgt 87120

gaccagggga cagcagtggt cctgagggcc gtcactgtct gccgtgcaga gcccttcctc 87180

ccacgggggc ctacctcacc tgtgccaagg gcttgtctgt ggtcagtgac ctggatagat 87240

ctgaatgggg cttctttttc gaggagtctt atggcaggtc tctcagtaaa gactccattc 87300

ttgatgatca cacattttgg attttccaaa tctgtcagag aatgggcttg aggcggggtt 87360

tgtgggcact agtttcactg gtttcattta ccaaaaaggg gagcagaagt caagtatggt 87420

ggctcatccc tgtaatccca gaggcaagag aattgcttga gcccaggagt tcgagaccag 87480

cctgagcaac ataaggagac cccgtctcca caaaaatgaa aaataacatt ttagtcagac 87540

gtggtggcat gcatctgtgg tcccagctgc ttgggagggt gagatgggag ggttgtttga 87600

gccctggagt taaagttgca atgagctgtg attgcaccac tgcactctag cctgggtgac 87660

agaacgagac cctgtctcaa aaaaaaaaaa aaagaaagaa aaaaaggaaa aaaaaaactc 87720

atgcctgtaa tcccagcact ttggggaccg gggtgggcag atcacgaggt caggagatca 87780

agactatcct agccaacatg gtgaaacccc gtttctacta aaaatacaaa aattagccag 87840

gtgtggtggc acgtgcctgt aatcccagtt actcgggagg ctgaggcagg agaatcgctt 87900

gaaccaggga gtcagaggtt gcagtgagct gagatcgtgc cactgtactc cagcctgggc 87960

gacagagtga gactctgtct caaaccaaaa aaaaggggtg gggggcgggg gcaggagaac 88020

agtgagaggt agggagagga aaggggattc tcgctacacc caaaccagat accatctaga 88080

ggctagaatc tttgggaggc tcaaattccc tagaaagcag gagaagcttc tgtagccctc 88140

ccgctttccc agtagattaa gcccagggcg gctccagatg tgtgacatgc tctgtgccca 88200

accagagccc atcataggca gaggaataac acccacacca gaagggccct cggaggtcac 88260

cacgtccaag aaccctcttt acagatgagg aaactgaggc ccagagaggg gagagccacc 88320

tagcgagctg gtggcggcta gaccaggaga gctgtcattc caagcaagca aaggcaacga 88380

gacgagccca gagctgtgct cccatctctt tgttaggggg cctgggatgc cctctcagtg 88440

tcattttgtc caggatgatg ctccctctct taagcgatta atgcgccctt gctaaccttt 88500

tgctatcgct gcctcttcaa accagaggag ttgagagttc cgggccggca gaggaaggcg 88560

cctgaaaggc ccctggccaa tgagattagc gcccacgtcc agcctggacc ctgcggagag 88620

gcctctgggg tctctgggcc gtgcctcggg gagaaagagc cagaagctcc cgtcccgctg 88680

accgcgagcc ttcctcagca ccgtcccgtt tgcccagcgc ctcctccaac aggaggccct 88740

caggagccct ccctggagtg gggacaaaaa ggcggggact gggccgagaa gggtccggcc 88800

tttccgaagc ccgccaccac tgcgtatctc cacacagagc ctgaaagtgg taaggtggtc 88860

caggaaggct tcctccgaga gccaggcccc ccaggtctga gccaccagct catgtccggc 88920

atgcctgggg ctcccctcct gcctgagggc cccagagagg ccacacgcca accttcgggg 88980

acaggacctg aggacacaga gggcggccgc cacgcccctg agctgctcaa gcaccagctt 89040

ctaggagacc tgcaccagga ggggccgccg ctgaaggggg cagggggcaa agagaggccg 89100

gggagcaagg aggaggtgga tgaagaccgc gacgtcgatg agtcctcccc ccaagactcc 89160

cctccctcca aggcctcccc agcccaagat gggcggcctc cccagacagc cgccagagaa 89220

gccaccagca tcccaggctt cccagcggag ggtgccatcc ccctccctgt ggatttcctc 89280

tccaaagttt ccacagagat cccagcctca gagcccgacg ggcccagtgt agggcgggcc 89340

aaagggcagg atgcccccct ggagttcacg tttcacgtgg aaatcacacc caacgtgcag 89400

aaggagcagg cgcactcgga ggagcatttg ggaagggctg catttccagg ggcccctgga 89460

gaggggccag aggcccgggg cccctctttg ggagaggaca caaaagaggc tgaccttcca 89520

gagccctctg aaaagcagcc tgctgctgct ccgcggggga agcccgtcag ccgggtccct 89580

caactcaaag gtctgtgtct tgagcttctt cgctccttcc ctggggacct cccaggcctc 89640

ccaggctgcg ggcactgcca ctgagcttcc aggcctcccg actcctgctg cttctgacgt 89700

tcctaggacg ccactaaatc gacacctggg tgcagctgct ccactccctc ggcctcctcc 89760

cgtgctcagg ctgtggccgc acgcgcccct cacgcttgcc cgccactctg catgtcacca 89820

gcacccccgc tccgtgctcc ccaccttgtt tgactctctg gccacttgat ttgtccacaa 89880

cggcccatca gcccacagga ggtttggtgg gtgccttcca ccgacaggat gacgggtgcc 89940

ctcatggtgt ctagaactct ccaaccctcc catgtaggca taagcagccc cactttgcag 90000

atgaggaaac ggaggctcag agaagtacag taacttgccg aaggccaatg agtagtaagt 90060

gacagagcca ggtttgggat ccaggtaggt tgtctctgaa agacacgcct gtcctgcatc 90120

ccacaacgcc tcccaggagg tgctggagtg tggacgccta acacagagat gtgcagggca 90180

cacacagcag gtgacacaca cagcatccag aggtggccca gagctcatgc tgtgcctttg 90240

gcccagtgcc ctgcccccac ccactctgcc ttgtggcagg aagacaagga gcagacacaa 90300

gatctccctg gtccacatgc caccacctcc ctctgcagag gacaagggga tcctcatgct 90360

ggcattggag ggggttgagc agggcccacc ttgagccctc aggagcacga ccacagcagc 90420

cctgcaggga gggattggtg ggaggagagt cccaagtatc agggagagga gagttggtgt 90480

cccacaggag acctcagagc cacaaggcga gcttgttcat aaatttggga cccttagcat 90540

ttcacagtta tttgcagagc ccagaaatgg atgttactga agctcacagt tgcaagcatc 90600

tgttaaattt ttattagatt ttacttttag ggaaaacttt gaaatgctat aaagaagcct 90660

gtgtttaaaa gttaagacag aggctggggg cgatggctca cgcctgtaat ctcagcactt 90720

tgggaggcca aggcaggtgg atcatttgag gttaggagtt cgagaccagc ctggccaaca 90780

tggtgagacc ctgtctctac taaaattaca aaaaattagc tgggcgtggt ggcgggcacc 90840

tgtagtccca gctactgggg aggctgaagc aggataagtg cttgaaccca ggaggcggag 90900

gttacagtga gccaagatca caccactgta ccctaagcct gggcgacaga gtgagactct 90960

gtctcaaaaa ataaaataaa ataaagttaa gagagaaaaa aatatatcct atatcctttg 91020

ttaaattcca aaacagtagg ggacaaataa ctgacttgac aggttactac aatatttcct 91080

gaaatgatgt tttcttgaat actggcctac tagaggttca taggtgtgtt tggattaaaa 91140

aagagttcca tggcccagtg actgggggaa aaaaataaaa gactaaagta agttaaacag 91200

gcttttctgc tgcaggactt gtcagagcct ttaatgtact aatggccatt gtgaccctct 91260

gagaaggtca cagagtgggt ttcccaaact tacttgattc tacctgctaa catttcctgg 91320

aggaagtttg ggaaatgccg atttagcaga ttcttttgtt gtgccgtgga tggtgctggt 91380

tgatgtgggc aaaacaaaga acacgtgagt cagatccgcc tggggctctt actaaagtgc 91440

aggttcccag gtgccacttt aggcttacag acccagttgt ggggtaagcc tgggagtctt 91500

ttagcaggtg attctgccac atagtatagt tggaaaacct ctgggcatac tcattgctgg 91560

tccctctaga aatccaggtg acaatagcca atgagaagct ccaagagacc cagttgtcca 91620

tggggtagag ggaatgtgat attgaaacca aagaagaaaa tctatgatca gttttcagca 91680

gtgactgtca agagaaggag aagggtgagt tagcgctgat gctggctgac aggtcagcgg 91740

gttggtttca ccaaggagtg tgatgaaggc tgatgttgtc tgtgggaatg tatgatggta 91800

actggtttgt agctaatttg gggaagcagt gagaattcgt gccctttgaa gaccagtaag 91860

tggcaagaaa cccaccaggc ctggctcagg gctgggctgg gcttggctcg tctcagagca 91920

gctggggctg gtggccaaag ccaccattag tgaggggcag gccctggggg tacaaccagc 91980

aactagggga caaagacaac cctgccagcc tctcctattc tggaggcgtg tgaccagaaa 92040

tggagatggg ttggtcagca taagatggcc aggaaggtgg aaatcaggac tgctggcaat 92100

ctagccacat gggcagggga gccgggtggt tccaggcagt ttccaaggcc aagagggtga 92160

gcaggcacct cacagggaat cagggccaag cctggctgca gtgtggagac aatgcaccca 92220

cccccatcct tggatcttgc aggaggctgg gtcctcactg agctaccaac atccatggcc 92280

ctgaggcttt taaaacaccc atccatggag tggggctggt cccagtgggg tgaggctgac 92340

cctggcagaa acagggcagg agcctgtggg ttagggagac tgcaccttcc ttagatagcc 92400

tccatgccat catgtccccg tgacagtttc tgctgcgtcc cctctgcatg gtcccaccct 92460

cggccagcct gctgccccct cttgccaggt tgcgctaatc agtgacccca gtgtgctgtg 92520

ttgatactaa caatgcgagg cctagcagat tcaagggaaa agagaaccaa ctgggtttcc 92580

accagaccca actaaacaaa catggaccta tcccagagaa atccagcttc accacagctg 92640

gctttctgtg aacagtgaaa atggagtgtg acaagcattc ttattttata ttttatcagc 92700

tcgcatggtc agtaaaagca aagacgggac tggaagcgat gacaaaaaag ccaaggtaag 92760

ctgacgatgc cacggagctc tgcagctggt caagtttaca gagaagctgt gctttatgtc 92820

tgattcattc tcatatataa tgtggggagt atttgtcact aaagtacagc tgtcatttaa 92880

agtgctttgt attttggggc aggcttttaa aaagtccagc atttattagt tttgatactt 92940

accccaggga agagcagttg gcaggttcat gaagtcatgc tcctaattcc agctttctta 93000

gtgtactttc agtgagaccc tgacagtaaa tgaaggtgtg tttgaaaacc aaacccagga 93060

cagtaaatga aggtgtgttt gaaaaccagc cctaggacag taaatgaagc catcttctca 93120

ctgcataaac tgcacccaga tctttgccca tccttctcag tatttcactt cacccattgt 93180

ttactgtctc aatgactggg gaaatgtctg gggaaatgct cccgtaattg cacagtggcg 93240

tttttcctgg aaaatcccac catggctcta gataagacct atttttctta aaggtatcta 93300

aaatttccag cataaattct gtctgaaaca cctgaatttt aatcagtact ggagcccgga 93360

gggcatctcc agttgccaca tagctctgag cattcagtgg tgtgttgagg gctgctcccg 93420

gaagtgcctg cagagtcagg gctccccagc ctcatctagt gaggcagtgg aagggcctgt 93480

ggggatttgg agagctggcc tgggtctctg aagtgatagt gacagctgct tgtcaatcac 93540

ggtgcacatt tagtgccggg ggcagggggc agggaatacc agcctcatgc atgcatgcat 93600

tcatttgttc cttccttcat tcattcattc agtacacatg ggtacaacat ccctgccctg 93660

gagttgccca gagtctaggg aggggaaaga tctattaccc tgggcctcgg ccagctgggg 93720

agtgctgctg gtggagaggg gccgtgtgca gcgagggaag gaggagtcgt caataccccc 93780

accccagctt tgctttcttg tcatcagccc cagggcccca gcctgtgtcc ctcctctccc 93840

attgctactt catctcctgg gtcctcctta ccaagcctga ccacacagag ggccttggcc 93900

gcttccatgg ggaattggaa agcaataaga tagcatcccc tagaagccca gtgaagtctg 93960

ggacaggacc cttctctgag ctctgacttg ctcttggaaa cacttcgagg cttagcctcc 94020

ccactttgtt tcccaagagt gtgacctgtt cccctccaaa cacccccttc tcctccaggg 94080

ccatgcccac ccgtcaaaat cccccacggg caggacgaac tgtgggtgtc agtcaccatc 94140

tatcctgcat cctggttcca gggccccccc cagccccgcc tccataggga caggcgtgca 94200

gacacccgtc cctggctgct tcctcttgtg gaatgggttc aaaagtaagc agtgttgttt 94260

acactgacaa actgaaaaaa aaagaaaaag agataacatt ggaggcttgg cacagtggct 94320

catgcctgta atcccagcac tttgggaggc taaggtggga ggatgtcccc agcccaagag 94380

ttctagacca gcctgggcaa catagcaaga ccccatctca aaaaaaaaat ttaattggcc 94440

aggcagaggt gggaggatca cttgaaccca aagggtggag gctgcagtga gccgtgatgg 94500

caccactgca ctccagccag ggcaacagag ggagaccctg tctctaaaac aaacaaacaa 94560

acaaacaaac aaaagagtta acattggcca gattaggatt caccagatag tgttaatatt 94620

agtttgattt gagactttaa tcagaaagca catgtgtggt gggggtgggt gtaacctaag 94680

tcaggtagaa tctttccaac ttgggggggg cacactcctg attgtagcca tatgagtctg 94740

tcagtgtggt ggaagagacc atgggttaat gggcaggtaa aaaagcacct tgcctggaat 94800

tgagtagaaa gtaaggccct tcagaccccg tgacacactt ggggacattt tcttgagtaa 94860

catcctaaga ttcatgtacc ttgatgatct ccatcaactt actcatgtga agcaccttta 94920

aaccagtcgt ctccaaattc aggggcacag taacatccaa caggctggag aaagaacgta 94980

ctagaacttc cattcctttt tcatgtcctc ttctaaaagc tttgtcaggg ccaggcgcgg 95040

tggctcacgc ctgtaatccc agcactttgg gaggccgaga cgggtggatc acgaggtcag 95100

gagatcgaga ccatcctggc taacacagtg aaaccccatc tctactaaaa atacaaaaaa 95160

acgagccggg cgtggtggtg ggcgcctgta gtcccagcta ctcgggaggc tgaggcagga 95220

gaatggcgtg aacccaggag gcagagcttg cagtgagccg agattgcacc actgcagtcc 95280

agcctgggcg acagagcgag actccgtctc aaaaaagaaa aagaaaaaga aaaagaactg 95340

tgattgggga ggacggtcac tttcctgttc ttactgatca gaagggatat taagggtacc 95400

tgattcaaac agcctggaga tcactgcttt caaccattac ctgccttatt tatttttagt 95460

tactgtcctt ttttcagttt gtttccctcc tccatgtgct gacttttatt ttgattttat 95520

ttatgtttat gtttaagaca tccacacgtt cctctgctaa aaccttgaaa aataggcctt 95580

gccttagccc caaacacccc actcctggta gctcagaccc tctgatccaa ccctccagcc 95640

ctgctgtgtg cccagagcca ccttcctctc ctaaacacgt ctcttctgtc acttcccgaa 95700

ctggcagttc tggagcaaag gagatgaaac tcaaggtaag gaaaccacct ttgaaaagaa 95760

ccaggctgct ctgctgtggt ttgcaaatgt ggggtttgtt tatttgtttt ttagcctcaa 95820

agacctttct tcaaatgagt tctggcatag aagcaccgtg taaaatagtt agaattctgg 95880

gcaaagggga aaagagagct gggggccatc cctctcagca ccccacaggc tctcatagca 95940

gcagctccta agacacctgg tgggaccttg gtttcgaaat cgctactcta aggctgggca 96000

cggtggctca cacctgtaat cccagctctt taggaggccg aggagggtgg atcacctgag 96060

atcaggagtt cgagaccagc ctggctaaca tggcaaaacc ctgtctctac taaaaataca 96120

aaaattagcc gggcgtggtg ttatgcgtgg tggtaatcgc agctactcgg gaggctgagg 96180

cacaaggatt gcttgaaccc cagaggcaga ggttgtagtt agctccagct tgggcgacag 96240

agcaagaccc tgtcgcaaaa attgtttaaa aaacaaaccc aaaattgcta ctctcattgg 96300

gttcctttgc ccattcctga ttttggcaag agaaatgctt ccagattgcc ctgatctggg 96360

taggacagca tcacgccata gcaacactgc cccgtgagct cactgccccc tcaactagct 96420

tgtggtcctt ggttaatgtc agtttctttt ttgagtttgt gttatgtcta agggtcatct 96480

gctgggtaac ggaacccagg gactgcccta gtccctagac tgtgccatgc ccgactctgc 96540

cagctttgtc agtgatgctg gtgctcgcct cctcgggtgc tcgcctggtc tgagcacacc 96600

caaggagttc ttgaggcctt agggttgttt gcgagagaat gaaagaacac gacctagctc 96660

tctttagcat ccttggtcag gttcaacact gcccccaggg gcctctggtg gagccaacca 96720

ccatcagcca aataaatcca taattagagt cagaaaatgg atgtctgcat atgtgtagtg 96780

cactaatgtc ctgccgatga ttgacatgga gtggagagtg acctgatcat tgctgtgagc 96840

tctgctggcc ttggcacaac tcatgctgat aactaatgca cacagttcct ctgggaggaa 96900

atgtcctcag ggaacttgga gtttgggtgg ggatgtgggt ttgtgtgccc agcaagccct 96960

tgtggttgta gcagacacta gtggcatcta ggaggcaaag ggtcacccca gtcttagcca 97020

cgttttgagt caaggtggcg gagtggggct ggtgttgact cttggtggca gtaacttttc 97080

ccaatggtga aaaacccctc tatcatgttt catttacagg gggctgatgg taaaacgaag 97140

atcgccacac cgcggggagc agcccctcca ggccagaagg gccaggccaa cgccaccagg 97200

attccagcaa aaaccccgcc cgctccaaag acaccaccca gctctggtaa gaagaacgtt 97260

ctcttgaatc ttagaggaag ctgaagctct cagaggtaca gccttcattt taggaggcct 97320

taggccactg agaatgaata acccctggca gctggtcagc agcttgcagt ttactaagca 97380

ctggagtctt cattgccttc tcagtccttt tgatttctga ggcaaatgtt gaatccctac 97440

cttttttttt ttttttcttt tgagacagag tttcgctttt gttatccagg ccggagtgca 97500

gtggtgtgat ctcagctcac tgcatcctcc acctcccagg ttcaagcgat tctcctacct 97560

cagcctccct agtagctggg attacaggca cctgccacta tgcccggcta attttttgta 97620

tttttagtag agacagggtt tcaccatgtt ggccaggctg gtctcgaacg cctgacctca 97680

ggtgatccac ctgcctcggc ctcccaaagt gctgggatta caggcatgag ccaccactcc 97740

cagcctgaat cctcactttt tatcaatgaa gaaattgagg ctgattctgc agcatgataa 97800

aaaaaaatac agaaaaagga aaaaaaagaa agaaatcgag cctctgagag tttgcttgac 97860

tgagtctaac cagctcattt taaacccgag gaaaatgcag tcacatgact actaagtggc 97920

agctctcgga gcctctctgg ccccaagtcc agggttccat agaggcagcc ccagcatggc 97980

atgttttcag tccccaaatg agactctgga gacaaatgtc tctggagaca gagcagcagc 98040

ctggataagt cacaatgggt gacgtcactc agggctcaac ccctgggcag cttaacttgc 98100

tagggacgtt aggagtctgc tgcaaaacct gagggtctta gctgagcagt cacaggctgg 98160

gcccgttgcc ctgggctcct gtgagtaaaa cccagtcaat tttgagtacc cagtaaggca 98220

tccattgagt tattttgcag ccaggagtgc tattaagaac agtcgcggct gggcgtggtg 98280

gctcatgcct gtaatcccag cactttggga ggccaaggtg ggcggatcac ctgaggtcag 98340

gagttcgaga ccagcttggc caacatggca aaaccccgtc tctaataaaa atacaaaata 98400

attagctggg cgtggtggcg ggcgcctgta atcccagctt ctcaggaggg tgaggaagga 98460

gaatcacttg aacccaggag gcagaggttg cagtgagctg agatcgcacc attgcactcc 98520

agcctggatg acaaaagtga gattccttct caaaaaaaaa aaaaaaaaaa cagtcgtcct 98580

ctttggggat tagggacagc ctgcctgcct gcccgagcac ttctctcttc cattgcccca 98640

gtgaagtatt ccaggcccct gggtttagac tctgcaccat gtaggggtgt ctgacctgca 98700

cttgctcctt ggtggcacgg gcagcctatg gcacttgctg cgggctgtga ccaaagcctg 98760

gcctggatct tggatcttgg tgactctgct tctccctggc ctgagggagc tgcccagagc 98820

ctgcccacca cctgctgcgt gtctttgcgg tggcatttct cgcacacatg ccgtgcggtg 98880

gcacccccaa ggatggccat tcactaaggc ccattgtttt tgtcttttcg cttcgtgttt 98940

tctggcctgg tgtttttctc atatacatgt gatccaggga taattcccag aattttgaca 99000

ggattttaag tagcgtttgg atcctgctgt ttttttttca cttaacatcg ggccagttga 99060

ctcacactct gttttttgtt gttgtttttt tgagacggag tctcactgtg tcacccaggc 99120

tgaagtgcag tggcacaatc ttggcatact gcaacctctg cttcccaaat tcaagcagtt 99180

ttcctgcctc agcctcctga gtagctggga ctacaggcac aggccaccac gccctgctaa 99240

tttttgtatt tttagtaaag acagggtttc accattttgg ccagcctagt ctcgaactcc 99300

tgacctcaag tgatccgccc acctcggcct cccaaagtgc tgggattaca ggggactcac 99360

actttgtaac aacctgaaac aacgtgatgc atttcccttt gggtcttacc tgctcttcgg 99420

tggctgcctg caggtggaga gaccctcccc cttgggcccc tcgaccttgt ttcagaatgg 99480

ggcccctgct gggccagctg tgggtgcctg ccacgtgaag gactcattaa ggccctgttt 99540

aagcctgatg ataataaggc tttcgtggat ttttctcttt aagcgactaa gcaagtccag 99600

agaagaccac cccctgcagg gcccagatct gagagaggta ctcgggagcc tacttcgctg 99660

ggagcagcct ccctttgcgt gtgtggccat tcactggctt gtgtttctag agccgggagg 99720

acccttttct gcaatgcagg gttcacacag ggttcgcagc ctgaagatgg agcagtccga 99780

attctcttcc ctgtgcagtt tgcgcagctg tgtttgtctg atgggctttc taatcctgtg 99840

tgctctcctt gacttcaggg acaatggcat tacaggcatg agccaccatg cctggctgtc 99900

tccctatgtt tcagatgaag acataggctt aaggaggtca ggtgacttgc ccacgaccac 99960

tctgtaaata agaggcatga aaagtatttg gagccaccac caccaagccc actggtcacc 100020

ctgggtctct gaagtcaggg aggcaggagg atgggaggtc tgaggaggca gagaggctga 100080

gcctggaggc cctggaggcc gaggccccat ctgttgtttc cttatgtgga aaataagagg 100140

cttcatttgt cctattgcca cagagcgtac tacttcagga acatccaaga catggaaatc 100200

cgcagggcac ggtggctcac gtctataatc ccggcacttt gggaggttga ggtgggagaa 100260

tcgcttgagg ccagaagttc aagaccagcc tgagcaacat agtcagaccc cgtctctata 100320

aaaaacatta tttttaaaaa agacatggaa gtcaaattct aaaaactggt gctggctggg 100380

tgcggtggct catgcctata atcccagcac tttgggaggc cgaggcgggt ggatcacctg 100440

aggtcaggag ttcaagacca gcctggccaa catggtaaaa cctctactaa agaaatcttt 100500

actgaaaata caaaaatcca gtctctacta aaataagtct ctactaaaaa tacaaaaatt 100560

agccaggcgt ggtgctgcac acctgtaata tcagctactc gggaggctga ggcaggagac 100620

tcgcttgatc ccatgcagcg gaggttgcag tgagccgaga tcacgccatt gcactccagc 100680

ctgggcatca gaataagact ccgtctcaaa aaaaaaacca caaaaaaaca aaacaacaac 100740

aaaagaaaac tagtgcttat tcgtcactgg ccaagctgcc cattggctac atgggtgctt 100800

caaagagctg cccttctcca ggtctggcca gcaggtatgt gttacagcaa atgcctgggg 100860

cagcggcagg ggcattgctg cgggaagctt ctggacttgc aggaaagcta agttctcaga 100920

ctgcagggga gctaagcaca cctcggcaca gggtgaggcc tgcggttctc agacttcagt 100980

ctttgtggag cttgagaaaa atgaggcttt gcaggtccca cccctagaga ttctgctcta 101040

tccactcttg aaggggatcg agaaatttgc attttgcaac tcccactttc ctccttgaaa 101100

gctccggaga ttctgacgca gggttccgtg ggccacactt tggaaaatac agacccatga 101160

gatagaatac cagactgttg aagtgtaacg ggggcctggg aagtgcagta acagaagcaa 101220

gtttgagggt aaaggacacc cagaggaggg agggacagca tctgcatgga gaggagaaga 101280

gaccccccag cagcttccag ggtgttggaa gggtgcgcta gtaactgcta tgcatggcag 101340

gtggggaact gtacgtcagg gcacagcagc atgaagcggt atggctcgtg tggacagcta 101400

gggacaggca ggcgtggagc aggcatcctg ttctgaaggc caaatcccac agaggagcca 101460

gggtgctggc aggagccctg aactagccga acagctgaac agctgaacat tcaccctgtg 101520

gggaaagggt cagaagcgtc caggcttgag ggcacagctg ggtctcgtca ctgcatcacc 101580

cttatttagg ataaaggccc tgaagaattg tattagaggt tggcaaagca tatctaccac 101640

ctcctggagc cacgctggcc gcagggatta taattatttc cattttcaaa ttaaggcctc 101700

tgagctcaga gaggggaagt tacttgtctg aggccacaca gcttgttgga gcccatctct 101760

tgacccaaag actgtggagc cgagttggcc acctctctgg gagcgggtat tggatggtgg 101820

ttgatggttt tccattgctt tcctgggaaa ggggtgtctc tgtccctaag caaaaaggca 101880

gggaggaaga gatgcttccc cagggcagcc gtctgctgta gctgcgcttc caacctggct 101940

tccacctgcc taacccagtg gtgagcctgg gaatggaccc acgggacagg cagcccccag 102000

ggccttttct gaccccaccc actcgagtcc tggcttcact cccttccttc cttcccaggt 102060

gaacctccaa aatcagggga tcgcagcggc tacagcagcc ccggctcccc aggcactccc 102120

ggcagccgct cccgcacccc gtcccttcca accccaccca cccgggagcc caagaaggtg 102180

gcagtggtcc gtactccacc caagtcgccg tcttccgcca agagccgcct gcagacagcc 102240

cccgtgccca tgccagacct gaagaatgtc aagtccaaga tcggctccac tgagaacctg 102300

aagcaccagc cgggaggcgg gaaggtgaga gtggctggct gcgcgtggag gtgtgggggg 102360

ctgcgcctgg aggggtaggg ctgtgcctgg aagggtaggg ctgcgcctgg aggtgcgcgg 102420

ttgagcgtgg agtcgtggga ctgtgcatgg aggtgtgggg ctccccgcac ctgagcaccc 102480

ccgcataaca ccccagtccc ctctggaccc tcttcaagga agttcagttc tttattgggc 102540

tctccactac actgtgagtg ccctcctcag gcgagagaac gttctggctc ttctcttgcc 102600

ccttcagccc ctgttaatcg gacagagatg gcagggctgt gtctccacgg ccggaggctc 102660

tcatagtcag ggcacccaca gcggttcccc acctgccttc tgggcagaat acactgccac 102720

ccataggtca gcatctccac tcgtgggcca tctgcttagg ttgggttcct ctggattctg 102780

gggagattgg gggttctgtt ttgatcagct gattcttctg ggagcaagtg ggtgctcgcg 102840

agctctccag cttcctaaag gtggagaagc acagacttcg ggggcctggc ctggatccct 102900

ttccccattc ctgtccctgt gcccctcgtc tgggtgcgtt agggctgaca tacaaagcac 102960

cacagtgaaa gaacagcagt atgcctcctc actagccagg tgtgggcggg tgggtttctt 103020

ccaaggcctc tctgtggccg tgggtagcca cctctgtcct gcaccgctgc agtcttccct 103080

ctgtgtgtgc tcctggtagc tctgcgcatg ctcatcttct tataagaaca ccatggcagc 103140

tgggcgtagt ggctcacgcc tataatccca gcactttggg aggctgaggc aggcagatca 103200

cgaggtcagg agttcgagac caacctgacc aacagggtga aacctcgtct ctactaaaaa 103260

tacaaaaata cctgggcgtg gtggtggtgc gcgcctataa tcccagctac tcaggaggct 103320

gaggcaggag aatcgcttga acccaggagg cagaggttgc agtgagccga gatagtgcca 103380

ctgcactcca gtttgagcaa cagagcgaga ctctgtctca aaacaaaata aaacaaacca 103440

aaaaaaccca ccatggctta gggcccagcc tgatgacctc atttttcact tagtcacctc 103500

tctaaaggcc ctgtctccaa atagagtcac attctaaggt acgggggtgt tggggagggg 103560

ggttagggct tcaacatgtg aatttgcggg gaccacaatt cagcccagga ccccgctccc 103620

gccacccagc actggggagc tggggaaggg tgaagaggag gctgggggtg agaaggacca 103680

cagctcactc tgaggctgca gatgtgctgg gccttctggg cactgggcct cggggagcta 103740

gggggctttc tggaaccctg ggcctgcgtg tcagcttgcc tcccccacgc aggcgctctc 103800

cacaccattg aagttcttat cacttgggtc tgagcctggg gcatttggac ggagggtggc 103860

caccagtgca catgggcacc ttgcctcaaa ccctgccacc tccccccacc caggatcccc 103920

cctgcccccg aacaagcttg tgagtgcagt gtcacatccc atcgggatgg aaatggacgg 103980

tcgggttaaa agggacgcat gtgtagaccc tgcctctgtg catcaggcct cttttgagag 104040

tccctgcgtg ccaggcggtg cacagaggtg gagaagactc ggctgtgccc cagagcacct 104100

cctctcatcg aggaaaggac agacagtggc tcccctgtgg ctgtggggac aagggcagag 104160

ctccctggaa cacaggaggg agggaaggaa gagaacatct cagaatctcc ctcctgatgg 104220

caaacgatcc gggttaaatt aaggtccggc cttttcctgc tcaggcatgt ggagcttgta 104280

gtggaagagg ctctctggac cctcatccac cacagtggcc tggttagaga ccttggggaa 104340

ataactcaca ggtgacccag ggcctctgtc ctgtaccgca gctgagggaa actgtcctgc 104400

gcttccactg gggacaatgc gctccctcgt ctccagactt tccagtcctc attcggttct 104460

cgaaagtcgc ctccagaagc cccatcttgg gaccaccgtg actttcattc tccagggtgc 104520

ctggccttgg tgctgcccaa gaccccagag gggccctcac tggcctttcc tgccttttct 104580

cccattgccc acccatgcac ccccatcctg ctccagcacc cagactgcca tccaggatct 104640

cctcaagtca cataacaagc agcacccaca aggtgctccc ttccccctag cctgaatctg 104700

ctgctccccg tctggggttc cccgcccatg cacctctggg ggcccctggg ttctgccata 104760

ccctgccctg tgtcccatgg tggggaatgt ccttctctcc ttatctcttc ccttccctta 104820

aatccaagtt cagttgccat ctcctccagg aagtcttcct ggattcccct ctctcttctt 104880

aaagcccctg taaactctga ccacactgag catgtgtctg ctgctcccta gtctgggcca 104940

tgagtgaggg tggaggccaa gtctcatgca tttttgcagc ccccacaaga ctgtgcaggt 105000

ggccggccct cattgaatgc ggggttaatt taactcagcc tctgtgtgag tggatgattc 105060

aggttgccag agacagaacc ctcagcttag catgggaagt agcttccctg ttgaccctga 105120

gttcatctga ggttggcttg gaaggtgtgg gcaccatttg gcccagttct tacagctctg 105180

aagagagcag caggaatggg gctgagcagg gaagacaact ttccattgaa ggcccctttc 105240

agggccagaa ctgtccctcc caccctgcag ctgccctgcc tctgcccatg aggggtgaga 105300

gtcaggcgac ctcatgccaa gtgtagaaag gggcagacgg gagccccagg ttatgacgtc 105360

accatgctgg gtggaggcag cacgtccaaa tctactaaag ggttaaagga gaaagggtga 105420

cttgactttt cttgagatat tttgggggac gaagtgtgga aaagtggcag aggacacagt 105480

cacagcctcc cttaaatgcc aggaaagcct agaaaaattg tctgaaacta aacctcagcc 105540

ataacaaaga ccaacacatg aatctccagg aaaaaagaaa aagaaaaatg tcatacaggg 105600

tccatgcaca agagccttta aaatgacccg ctgaagggtg tcaggcctcc tcctcctgga 105660

ctggcctgaa ggctccacga gcttttgctg agacctttgg gtccctgtgg cctcatgtag 105720

tacccagtat gcagtaagtg ctcaataaat gtttggctac aaaagaggca aagctggcgg 105780

agtctgaaga atccctcaac cgtgccggaa cagatgctaa caccaaaggg aaaagagcag 105840

gagccaagtc acgtttggga acctgcagag gctgaaaact gccgcagatt gctgcaaatc 105900

attgggggaa aaacggaaaa cgtctgtttt cccctttgtg cttttctctg ttttcttctt 105960

tgtgcttttc tctgttttca ggatttgcta cagtgaacat agattgcttt ggggccccaa 106020

atggaattat tttgaaagga aaatgcagat aatcaggtgg ccgcactgga gcaccagctg 106080

ggtaggggta gagattgcag gcaaggagga ggagctgggt ggggtgccag gcaggaagag 106140

cccgtaggcc ccgccgatct tgtgggagtc gtgggtggca gtgttccctc cagactgtaa 106200

aagggagcac ctggcgggaa gagggaattc ttttaaacat cattccagtg cccgagcctc 106260

ctggacctgt tgtcatcttg aggtgggcct cccctgggtg actctagtgt gcagcctggc 106320

tgagactcag tggccctggg ttcttactgc tgacacctac cctcaacctc aaccactgcg 106380

gcctcctgtg caccctgatc cagtggctca ttttccactt tcagtcccag ctctatccct 106440

atttgcagtt tccaagtgcc tggtcctcag tcagctcaga cccagccagg ccagcccctg 106500

gttcccacat cccctttgcc aagctcatcc ccgccctgtt tggcctgcgg gagtgggagt 106560

gtgtccagac acagagacaa aggaccagct tttaaaacat tttgttgggg ccaggtgtgg 106620

tggctcacac ctaatcccaa cacctgggga ggccaaggca gaaggatcac ttgagtccag 106680

gagttcaaga ccagcctggg caacataggg agaccctgtc tctacaattt tttttttaat 106740

tagctgggcc tgttggcact ctcctgtagt tccagctact ctagaggctg aggtgggagg 106800

actgcttgag cctgggaggt cagggctgca atgagccatg ttcacaccac tgaacgccag 106860

cctgggcgag accctgtatc aaaaaagtaa agtaaaatga atcctgtacg ttatattaag 106920

gtgccccaaa ttgtacttag aaggatttca tagttttaaa tacttttgtt atttaaaaaa 106980

ttaaatgact gcagcatata aattaggttc ttaatggagg ggaaaaagag tacaagaaaa 107040

gaaataagaa tctagaaaca aagataagag cagaaataaa ccagaaaaca caaccttgca 107100

ctcctaactt aaaaaaaaaa atgaagaaaa cacaaccagt aaaacaacat ataacagcat 107160

taagagctgg ctcctggctg ggcgcggtgg cgcatgcctg taatcccaac actttgggag 107220

gccgatgctg gaggatcact tgagaccagg agttcaaggt tgcagtgagc tatgatcata 107280

ccactacacc ctagcctggg caacacagtg agactgagac tctattaaaa aaaaaatgct 107340

ggttccttcc ttatttcatt cctttattca ttcattcaga caacatttat ggggcacttc 107400

tgagcaccag gctctgtgct aagagctttt gcccccaggg tccaggccag gggacagggg 107460

caggtgagca gagaaacagg gccagtcaca gcagcaggag gaatgtagga tggagagctt 107520

ggccaggcaa ggacatgcag ggggagcagc ctgcacaagt cagcaagcca gagaagacag 107580

gcagaccctt gtttgggacc tgttcagtgg cctttgaaag gacagccccc acccggagtg 107640

ctgggtgcag gagctgaagg aggatagtgg aacactgcaa cgtggagctc ttcagagcaa 107700

aagcaaaata aacaactgga ggcagctggg gcagcagagg gtgtgtgttc agcactaagg 107760

ggtgtgaagc ttgagcgcta ggagagttca cactggcaga agagaggttg gggcagctgc 107820

aagcctctgg acatcgcccg acaggacaga gggtggtgga cggtggccct gaagagaggc 107880

tcagttcagc tggcagtggc cgtgggagtg ctgaagcagg caggctgtcg gcatctgctg 107940

gggacggtta agcaggggtg agggcccagc ctcagcagcc cttcttgggg ggtcgctggg 108000

aaacatagag gagaactgaa gaagcaggga gtcccagggt ccatgcaggg cgagagagaa 108060

gttgctcatg tggggcccag gctgcaggat caggagaact ggggaccctg tgactgccag 108120

cggggagaag ggggtgtgca ggatcatgcc cagggaaggg cccaggggcc caagcatggg 108180

ggggcctggt tggctctgag aagatggagc taaagtcact ttctcggagg atgtccaggc 108240

caatagttgg gatgtgaaga cgtgaagcag cacagagcct ggaagcccag gatggacaga 108300

aacctacctg agcagtgggg ctttgaaagc cttggggcgg ggggtgcaat attcaagatg 108360

gccacaagat ggcaatagaa tgctgtaact ttcttggttc tgggccgcag cctgggtggc 108420

tgcttccttc cctgtgtgta ttgatttgtt tctctttttt gagacagagt cttgctgggt 108480

tgcccaggct ggagtgcagt ggtgcgatca tagctcactg cagccttgaa gtcctgagct 108540

caagagatcc ttccacctca gcctcctgag tagttgggac cacaggcttg caccacagtg 108600

cccaactaat ttcttatatt ttttgtagag atggggtttc actgtgtcgc ccaggatggt 108660

cttgaactcc tgggctcaag tgatcctcct gcctcagcct cgcaaattgc tgggattaca 108720

ggtgtgagcc accatgcccg accttctctt tttaagggcg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 108780

tgggcgcact ctcgtcttca ccttccccca gccttgctct gtctctaccc agtcacctct 108840

gcccatctct ccgatctgtt tctctctcct tttacccctc tttcctccct cctcatacac 108900

cactgaccat tatagagaac tgagtattct aaaaatacat tttatttatt tattttgaga 108960

cagagtctca ctctgtcacc caggctggag tgcagtggtg caatctcggc tcactgcaac 109020

ctccgcctcc caggttgaag caactctcct gcctcagcct ccctagtagc tgggattaca 109080

agcacacacc accatgccta gcaaattttt atatttttag tagaggagga gtgtcaccat 109140

gtttgccaag ctggtctcaa actcctggcc tcaggtgatc tgcctacctt ggtctcccaa 109200

agtgctggga ttacaggtgt gagccaccac gcctgccctt aaaaatacat tatatttaat 109260

agcaaagccc cagttgtcac tttaaaaagc atctatgtag aacatttatg tggaataaat 109320

acagtgaatt tgtacgtgga atcgtttgcc tctcctcaat cagggccagg gatgcaggtg 109380

agcttgggct gagatgtcag accccacagt aagtgggggg cagagccagg ctgggaccct 109440

cctctaggac agctctgtaa ctctgagacc ctccaggcat cttttcctgt acctcagtgc 109500

ttctgaaaaa tctgtgtgaa tcaaatcatt ttaaaggagc ttgggttcat cactgtttaa 109560

aggacagtgt aaataattct gaaggtgact ctaccctgtt atttgatctc ttctttggcc 109620

agctgactta acaggacata gacaggtttt cctgtgtcag ttcctaagct gatcaccttg 109680

gacttgaaga ggaggcttgt gtgggcatcc agtgcccacc ccgggttaaa ctcccagcag 109740

agtattgcac tgggcttgct gagcctggtg aggcaaagca cagcacagcg agcaccaggc 109800

agtgctggag acaggccaag tctgggccag cctgggagcc aactgtgagg cacggacggg 109860

gctgtggggc tgtggggctg caggcttggg gccagggagg gagggctggg ctctttggaa 109920

cagccttgag agaactgaac ccaaacaaaa ccagatcaag gtctagtgag agcttagggc 109980

tgctttgggt gctccaggaa attgattaaa ccaagtggac acacaccccc agccccacct 110040

caccacagcc tctccttcag ggtcaaactc tgaccacaga catttctccc ctgactagga 110100

gttccctgga tcaaaattgg gagcttgcaa cacatcgttc tctcccttga tggtttttgt 110160

cagtgtctat ccagagctga agtgtaatat atatgttact gtagctgaga aattaaattt 110220

caggattctg atttcataat gacaaccatt cctcttttct ctcccttctg taaatctaag 110280

attctataaa cggtgttgac ttaatgtgac aattggcagt agttcaggtc tgctttgtaa 110340

atacccttgt gtctattgta aaatctcaca aaggcttgtt gccttttttg tggggttaga 110400

acaagaaaaa gccacatgga aaaaaaattt cttttttgtt tttttgtttg cttgtttttt 110460

tgagacagag tttcactctg tcgcccaggc tggagtgcag tggtgcgatc tccgcccact 110520

gcaagctcca cctcccgggt tcatgctatt ctcctgtctc agcctcccaa gtagctggga 110580

ctgcaggtgc ccgccaccac acctggctaa tttttttgta tttttagtag agacggggtt 110640

tcaccgtgtt agccaggatg gtctcaatct cctgacctcg tcatctgcct gcctcggcct 110700

cccaaagtgc tgagattaca ggcgtgagcc accgtgcccg gccagaaaaa aacatttcta 110760

agtatgtggc agatactgaa ttattgctta atgtcctttg attcatttgt ttaatttctt 110820

taatggatta gtacagaaaa caaagttctc ttccttgaaa aactggtaag ttttctttgt 110880

cagataagga gagttaaata acccatgaca tttccctttt tgcctcggct tccaggaagc 110940

tcaaagttaa atgtaatgat cactcttgta attatcagtg ttgatgccct tcccttcttc 111000

taatgttact ctttacattt tcctgcttta ttattgtgtg tgttttctaa ttctaagctg 111060

ttcccactcc tttctgaaag caggcaaatc ttctaagcct tatccactga aaagttatga 111120

ataaaaaatg atcgtcaagc ctacaggtgc tgaggctact ccagaggctg aggccagagg 111180

accacttgag cccaggaatt tgagacctgg gctgggcagc atagcaagac tctatctcca 111240

ttaaaactat ttttttttat ttaaaaaata atccgcaaag aaggagttta tgtgggattc 111300

cttaaaatcg gagggtggca tgaattgatt caaagacttg tgcagagggc gacagtgact 111360

ccttgagaag cagtgtgaga aagcctgtcc cacctccttc cgcagctcca gcctgggctg 111420

aggcactgtc acagtgtctc cttgctggca ggagagaatt tcaacattca ccaaaaagta 111480

gtattgtttt tattaggttt atgaggctgt agccttgagg acagcccagg acaactttgt 111540

tgtcacatag atagcctgtg gctacaaact ctgagatcta gattcttctg cggctgcttc 111600

tgacctgaga aagttgcgga acctcagcga gcctcacatg gcctccttgt ccttaacgtg 111660

gggacggtgg gcaagaaagg tgatgtggca ctagagattt atccatctct aaaggaggag 111720

tggattgtac attgaaacac cagagaagga attacaaagg aagaatttga gtatctaaaa 111780

atgtaggtca ggcgctcctg tgttgattgc agggctattc acaatagcca agatttggaa 111840

gcaacccaag tgtccatcaa cagacaaatg gataaagaaa atgtggtgca tatacacaat 111900

ggaatactat tcagccatga aaaagaatga gaatctgtca tttgaaacaa catggatgga 111960

actggaggac attatgttaa gtgaaataag ccagacagaa ggacagactt cacatgttct 112020

cacacatttg tgggagctaa aaattaaact catggagata gagagtagaa ggatggttac 112080

cagaggctga ggagggtgga ggggagcagg gagaaagtag ggatggttaa tgggtacaaa 112140

aacgtagtta gcatgcatag atctagtatt ggatagcaca gcagggtgac gacagccaac 112200

agtaatttat agtacattta aaaacaacta aaagagtgta actggactgg ctaacatggt 112260

gaaaccccgt ctctactaaa aatacaaaaa ttagctgggc acggtggctc acgcctgtaa 112320

tcccagcact ttgggaggcc gaggcgggcc gatcacgagg tcaggagatc gagaccatcc 112380

tagctaacat ggtgaaaccc cgtctctact acaaatacaa aaaaaagaaa aaattagccg 112440

ggcatggtgg tgggcgcctg tagtcccagc tactcgggag gctgaggcag gagaatggcg 112500

tgaacccggg aggcggagct tgcagtgagc cgagatcgcg ccactgcact ccagcctggg 112560

cgacaaggca agattctatc tcaaaaaaat aaaaataaaa taaaataaaa taataaaata 112620

aaataaaata aaataaaata aaataaataa aataaaatgt ataattggaa tgtttataac 112680

acaagaaatg ataaatgctt gaggtgatag ataccccatt caccgtgatg tgattattgc 112740

acaatgtatg tctgtatcta aatatctcat gtaccccaca agtatataca cctactatgt 112800

acccatataa atttaaaatt aaaaaattat aaaacaaaaa taaataagta aattaaaatg 112860

taggctggac accgtggttc acgcctgtaa tcccagtgct ttgtgaggct gaggtgagag 112920

aatcacttga gcccaggagt ttgagaccgg cctgggtgac atagcgagac cccatcatca 112980

caaagaattt ttaaaaatta gctgggcgtg gtagcacata ccggtagttc cagctacttg 113040

ggagaccgag gcaggaggat tgcttgagcc caggagttta aggctgcagt gagctacgat 113100

ggcgccactg cattccagcc tgggtgacag agtgagagct tgtctctatt ttaaaaataa 113160

taaaaagaat aaataaaaat aaattaaaat gtaaatatgt gcatgttaga aaaaatacac 113220

ccatcagcaa aaagggggta aaggagcgat ttcagtcata attggagaga tgcagaataa 113280

gccagcaatg cagtttcttt tattttggtc aaaaaaaata agcaaaacaa tgttgtaaac 113340

acccagtgct ggcagcaatg tggtgaggct ggctctctca ccagggctca cagggaaaac 113400

tcatgcaacc cttttagaaa gccatgtgga gagttgtacc gagaggtttt agaatattta 113460

taactttgac ccagaaattc tattctagga ctctgtgtta tgaaaataac ccatcatatg 113520

gaaaaagctc ctttcagaaa gaggttcatg ggaggctgtt tgtatttttt ttttctttgc 113580

atcaaatcca gctcctgcag gactgtttgt attattgaag tacaaagtgg aatcaataca 113640

aatgttggat agcaggggaa caatattcac aaaatggaat gggacatagt attaaacata 113700

gtgcttctga tgaccgtaga ccatagacaa tgcttaggat atgatatcac ttcttttgtt 113760

gttttttgta ttttgagacg aagtctcatt ctgtcaccca ggctggagtt cagtggcgcc 113820

atctcagctc actgcaacct ccatctcccg ggttcaagct attctccttc ctcaacctcc 113880

cgagtagctg ggttgcgcac caccatgcct ggctaacttt tgtattttta gtacagacgg 113940

ggtttcacca cgttggccag gctgctcttg aactcctgac gtcaggtgat ccaccagcct 114000

tgacctccca aagtgctagg attacaggag ccactgtacc cagcctagga tatgatatca 114060

cttcttagag caagatacaa aattgcatgt gcacaataat tctaccaagt ataggtatac 114120

aggggtagtt atatataaat gagacttcaa ggaaatacaa caaaatgcaa tcgtgattgt 114180

gttagggtgg taagaaaacg gtttttgctt tgatgagctc tgttttttaa aatcgttata 114240

ttttctaata aaaatacata gtcttttgaa ggaacataaa agattatgaa gaaatgagtt 114300

agatattgat tcctattgaa gattcagaca agtaaaatta aggggaaaaa aaacgggatg 114360

aaccagaagt caggctggag ttccaacccc agatccgaca gcccaggctg atggggcctc 114420

cagggcagtg gtttccaccc agcattctca aaagagccac tgaggtctca gtgccatttt 114480

caagatttcg gaagcggcct gggcacggct ggtccttcac tgggatcacc acttggcaat 114540

tatttacacc tgagacgaat gaaaaccaga gtgctgagat tacaggcatg gtggcttacg 114600

cttgtaatcg gctttgggaa gccgaggtgg gctgattgct tgagcccagg agtttcaaac 114660

tatcctggac aacatagcat gacctcgtct ctacaaaaaa tacaaaaaat ttgccaggtg 114720

tggtggcatg tgcctgtggt cccagctact tgggaggctg aagtaggaga atcccctgag 114780

ccctgggaag tcgaggctgc actgagccgt gatggtgtca ctgcactcca gcctgggtga 114840

caaagtgaga ccctatctca caaagaaaaa aaacaaaaca aaaaacccaa agcacactgt 114900

ttccactgtt tccagagttc ctgagaggaa aggtcaccgg gtgaggaaga cgttctcact 114960

gatctggcag agaaaatgtc cagtttttcc aactccctaa accatggttt tctatttcat 115020

agttcttagg caaattggta aaaatcattt ctcatcaaaa cgctgatatt ttcacacctc 115080

cctggtgtct gcagaaagaa ccttccagaa atgcagtcgt gggagaccca tccaggccac 115140

ccctgcttat ggaagagctg agaaaaagcc ccacgggagc atttgctcag cttccgttac 115200

gcacctagtg gcattgtggg tgggagaggg ctggtgggtg gatggaagga gaaggcacag 115260

cccccccttg cagggacaga gccctcgtac agaagggaca ccccacattt gtcttcccca 115320

caaagcggcc tgtgtcctgc ctacggggtc agggcttctc aaacctggct gtgtgtcaga 115380

atcaccaggg gaacttttca aaactagaga gactgaagcc agactcctag attctaattc 115440

taggtcaggg ctaggggctg agattgtaaa aatccacagg tgattctgat gcccggcagg 115500

cttgagaaca gccgcaggga gttctctggg aatgtgccgg tgggtctagc caggtgtgag 115560

tggagatgcc ggggaacttc ctattactca ctcgtcagtg tggccgaaca catttttcac 115620

ttgacctcag gctggtgaac gctcccctct ggggttcagg cctcacgatg ccatcctttt 115680

gtgaagtgag gacctgcaat cccagcttcg taaagcccgc tggaaatcac tcacacttct 115740

gggatgcctt cagagcagcc ctctatccct tcagctcccc tgggatgtga ctcgacctcc 115800

cgtcactccc cagactgcct ctgccaagtc cgaaagtgga ggcatccttg cgagcaagta 115860

ggcgggtcca gggtggcgca tgtcactcat cgaaagtgga ggcgtccttg cgagcaagca 115920

ggcgggtcca gggtggcgtg tcactcatcc ttttttctgg ctaccaaagg tgcagataat 115980

taataagaag ctggatctta gcaacgtcca gtccaagtgt ggctcaaagg ataatatcaa 116040

acacgtcccg ggaggcggca gtgtgagtac cttcacacgt cccatgcgcc gtgctgtggc 116100

ttgaattatt aggaagtggt gtgagtgcgt acacttgcga gacactgcat agaataaatc 116160

cttcttgggc tctcaggatc tggctgcgac ctctgggtga atgtagcccg gctccccaca 116220

ttcccccaca cggtccactg ttcccagaag ccccttcctc atattctagg agggggtgtc 116280

ccagcatttc tgggtccccc agcctgcgca ggctgtgtgg acagaatagg gcagatgacg 116340

gaccctctct ccggaccctg cctgggaagc tgagaatacc catcaaagtc tccttccact 116400

catgcccagc cctgtcccca ggagccccat agcccattgg aagttgggct gaaggtggtg 116460

gcacctgaga ctgggctgcc gcctcctccc ccgacacctg ggcaggttga cgttgagtgg 116520

ctccactgtg gacaggtgac ccgtttgttc tgatgagcgg acaccaaggt cttactgtcc 116580

tgctcagctg ctgctcctac acgttcaagg caggagccga ttcctaagcc tccagcttat 116640

gcttagcctg cgccaccctc tggcagagac tccagatgca aagagccaaa ccaaagtgcg 116700

acaggtccct ctgcccagcg ttgaggtgtg gcagagaaat gctgcttttg gcccttttag 116760

atttggctgc ctcttgccag gagtggtggc tcgtgcctgt aattccagca ctttgggaga 116820

ctaaggcggg aggttcgctt gagcccagga gttcaagacc agcctgggca acaatgagac 116880

ccctgtgtct acaaaaagaa ttaaaattag ccaggtgtgg tggcacgcac ctgtagtccc 116940

agctacttgg gaggctgagg tgggaggatt gcctgagtcc gggaggcgga agttgcaagg 117000

agccatgatc gcgccactgc acttcaacct aggcaacaga gtgagacttt gtctcaaaaa 117060

acaatcatat aataatttta aaataaatag atttggcttc ctctaaatgt ccccggggac 117120

tccgtgcatc ttctgtggag tgtctccgtg agattcggga ctcagatcct caagtgcaac 117180

tgacccaccc gataagctga ggcttcatca tcccctggcc ggtctatgtc gactgggcac 117240

ccgaggctcc tctcccacca gctctcttgg tcagctgaaa gcaaactgtt aacaccctgg 117300

ggagctggac gtatgagacc cttggggtgg gaggcgttga tttttgagag caatcacctg 117360

gccctggctg gcagtaccgg gacactgctg tggctccggg gtgggctgtc tccagaaaat 117420

gcctggcctg aggcagccac ccgcatccag cccagagggt ttattcttgc aatgtgctgc 117480

tgcttcctgc cctgagcacc tggatcccgg cttctgccct gaggcccctt gagtcccaca 117540

ggtagcaagc gcttgccctg cggctgctgc atggggctaa ctaacgcttc ctcaccagtg 117600

tctgctaagt gtctcctctg tctcccacgc cctgctctcc tgtcccccca gtttgtctgc 117660

tgtgagggga cagaagaggt gtgtgccgcc cccacccctg cccgggccct tgttcctggg 117720

attgctgttt tcagctgttt gagctttgat cctggttctc tggcttcctc aaagtgagct 117780

cggccagagg aggaaggcca tgtgctttct ggttgaagtc aagtctggtg ccctggtgga 117840

ggctgtgctg ctgaggcgga gctggggaga gagtgcacac gggctgcgtg gccaacccct 117900

ctgggtagct gatgcccaaa gacgctgcag tgcccaggac atctgggacc tccctggggc 117960

ccgcccgtgt gtcccgcgct gtgttcatct gcgggctagc ctgtgacccg cgctgtgctc 118020

gtctgcgggc tagcctgtgt cccgcgctct gcttgtctgc ggtctagcct gtgacctggc 118080

agagagccac cagatgtccc gggctgagca ctgccctctg agcaccttca caggaagccc 118140

ttctcctggt gagaagagat gccagcccct ggcatctggg ggcactggat ccctggcctg 118200

agccctagcc tctccccagc ctgggggccc cttcccagca ggctggccct gctccttctc 118260

tacctgggac ccttctgcct cctggctgga ccctggaagc tctgcagggc ctgctgtccc 118320

cctccctgcc ctccaggtat cctgaccacc ggccctggct cccactgcca tccactcctc 118380

tcctttctgg ccgttccctg gtccctgtcc cagcccccct ccccctctca cgagttacct 118440

cacccaggcc agagggaaga gggaaggagg ccctggtcat accagcacgt cctcccacct 118500

ccctcggccc tggtccaccc cctcagtgct ggcctcagag cacagctctc tccaagccag 118560

gccgcgcgcc atccatcctc cctgtccccc aacgtccttg ccacagatca tgtccgccct 118620

gacacacatg ggtctcagcc atctctgccc cagttaactc cccatccata aagagcacat 118680

gccagccgac accaaaataa ttcgggatgg ttccagttta gacctaagtg gaaggagaaa 118740

ccaccacctg ccctgcacct tgttttttgg tgaccttgat aaaccatctt cagccatgaa 118800

gccagctgtc tcccaggaag ctccagggcg gtgcttcctc gggagctgac tgataggtgg 118860

gaggtggctg cccccttgca ccctcaggtg accccacaca aggccactgc tggaggccct 118920

ggggactcca ggaatgtcaa tcagtgacct gccccccagg ccccacacag ccatggctgc 118980

atagaggcct gcctccaagg gacctgtctg tctgccactg tggagtccct acagcgtgcc 119040

ccccacaggg gagctggttc tttgactgag atcagctggc agctcagggt catcattccc 119100

agagggagcg gtgccctgga ggccacaggc ctcctcatgt gtgtctgcgt ccgctcgagc 119160

ttactgagac actaaatctg ttggtttctg ctgtgccacc tacccaccct gttggtgttg 119220

ctttgttcct attgctaaag acaggaatgt ccaggacact gagtgtgcag gtgcctgctg 119280

gttctcacgt ccgagctgct gaactccgct gggtcctgct tactgatggt ctttgctcta 119340

gtgctttcca gggtccgtgg aagcttttcc tggaataaag cccacgcatc gaccctcaca 119400

gcgcctcccc tctttgaggc ccagcagata ccccactcct gcctttccag caagattttt 119460

cagatgctgt gcatactcat catattgatc acttttttct tcatgcctga ttgtgatctg 119520

tcaatttcat gtcaggaaag ggagtgacat ttttacactt aagcgtttgc tgagcaaatg 119580

tctgggtctt gcacaatgac aatgggtccc tgtttttccc agaggctctt ttgttctgca 119640

gggattgaag acactccagt cccacagtcc ccagctcccc tggggcaggg ttggcagaat 119700

ttcgacaaca catttttcca ccctgactag gatgtgctcc tcatggcagc tgggaaccac 119760

tgtccaataa gggcctgggc ttacacagct gcttctcatt gagttacacc cttaataaaa 119820

taatcccatt ttatcctttt tgtctctctg tcttcctctc tctctgcctt tcctcttctc 119880

tctcctcctc tctcatctcc aggtgcaaat agtctacaaa ccagttgacc tgagcaaggt 119940

gacctccaag tgtggctcat taggcaacat ccatcataaa ccaggtagcc ctgtggaagg 120000

tgagggttgg gacgggaggg tgcagggggt ggaggagtcc tggtgaggct ggaactgctc 120060

cagacttcag aaggggctgg aaaggatatt ttaggtagac ctacatcaag gaaagtgttg 120120

agtgtgaaac ttgcgggagc ccaggaggcg tggtggctcc agctcgctcc tgcccaggcc 120180

atgctgccca agacaaggtg aggcgggagt gaagtgaaat aaggcaggca cagaaagaaa 120240

gcacatattc tcggccgggc gctgtggctc acgcctgtaa ttccagcact ttgggaggcc 120300

aaggtgggtg gatcatgagg tcaggagatt gagaccatcc tggctaacac agtgaaaccc 120360

cgtctctact aaaaatacaa aaaattagcc gggcgtggtg gtgggcgcct gtagtcccag 120420

ctactccgga ggctgaggca ggaaaatggc gtgaacccgg aaggcggagc ttgcagtgag 120480

cggagtgagc agagatcgcg ccactgcact ccagcctggg cgacagagcg agactccgtc 120540

tcaaaaaaaa aaagcacatg ttctcgcttc tttgtgggat ccaggagata gagaatagaa 120600

ggatggttac cagaggctgg gaagggtagt gaggggatgg tggggggatg gtcaatgggt 120660

acaaaaaaaa tagaataaga cctagtattt gatagtgcaa cagggtgact atagtcaata 120720

ataatttaat tgtacattta aaaataacta aaagatagcc gggtgcagtg gcttacgtct 120780

gtaatcccag tactttggga ggctgaggtg ggcgtttgag accagcctgg ccaacatggt 120840

gaaaccccat ctctactaaa aatacaaaaa ttagccaggc atggtggcgg gcgcctgtaa 120900

tcccagctac tcgggaggct gaggcaggag aatcacttga acctgggagg cagaggttgc 120960

agtgagccga gatcttgcca ctgcactcca gcctgggtga cagtgaaact ccgtctcaaa 121020

aataaaaata aaaatacagc tgggcacggt ggctcacgcc tgtaatccca gcactttggg 121080

aggccgaggc gagcggatca caaggtcagg agatatagac catcctggct aacacggtga 121140

aacccggtct ctactaaaaa tacaaaaaat tagccaggcg tggtggcagg tgcctatagt 121200

cccagctact cacaaggctg aggcaggaga atggcatgaa cctgggaggc ggagcttgca 121260

gtgagccgag attgtgccac tgcactccag cctgggcgag agagtgagac tccgtctcaa 121320

aacaaaaaca aaaacaaaaa caaaaacaaa cacacaacaa aaacctaaaa gaatataaat 121380

ggattgtttg taacacaaag gacaaatgtt tgaggggatg gataccccat tttccatgat 121440

gtgattatta tacattgtgt gtctgtatca aaacatctca tgagccccat aaatatatac 121500

acctaactat gtacccacaa aaattaaaaa aatatatttt ttaaggtgaa gagggaggcg 121560

agatgctggc cttaacccct aacccgttgt tctccctgca agctgtccac agggcctctc 121620

agactcgagg ttcagctata tggatgcatg agcttggtcc ccagccaaca tgggagacac 121680

ttcaccatcg gcagcagcta cagcacagga accctgggtc actgccatgt cccctctgtg 121740

actttgttta aacagaaaat gatgctctgg gccggctgtg gtggcccaca cctataatcc 121800

cagcaccttg ggaggcgggg gtgggcagat tgcctgaggt caggagttgg agatcagcct 121860

ggccgacatg gcgaaacccc atgtctacta aaaatacaaa aactagccag gcatggtggc 121920

acatgcctgt aatcccagct acttgggagg ctgaagcagg agaatcactt gaacccagga 121980

ggcagaggct gagtgagcca agatcgtgcc aatgcactcc agcttgggtg agggagtgag 122040

actccgtctc aaaaaaaaaa aaaaagaaag aaaaagaaaa gaaagtgatc ctactggaac 122100

catgcttact cccctcccca cctcacactg tgtagaaatt agtgctgtcg gccaggcgcg 122160

gtggctcatg cctgtaatcg cagcactttg ggaggccaag gcaggcggat cacgaggtca 122220

ggagatcaag accatcctgg ctaacacagt gaaaccctgt ctctactaaa aatacaaaaa 122280

attagccggg catggtggca ggcacctgta gtcccaacta cttgggaggc tgaggcagga 122340

gaatggcatg aacctgggag gcggagcttg cagtgagcca agatcgcgcc actgcatacc 122400

agcctaggtg acagagtgag actcagcaaa aaaagaaaga aagaaagaaa gaaatcagtg 122460

ctgtctatac ttctttctgc agtgatggaa atattctgta tctgtgctgt ccagtatagt 122520

agccactagc tacatgtggc acttgaaaca tggctggtac agttgaggaa gagtggctgc 122580

catatcggac gacacagcta tagattctgt caccccaccc cgagagtcca gagcggggac 122640

ttctgcctta ggccctattc agggctgatt tttacttgaa cccttactgt gggaagagaa 122700

ggccatgaga agttcagtct agaatgtgac tccttatttt ctggctccct tggacacttt 122760

gtgggattta gtctccctgt ggaaagtatt ccacaagtgg tgccactacc ccagctgtga 122820

gagcagctgg gagctgcttt tgtcatcttt ccctggaaag tcctgtgggc tgtctcttcc 122880

tcatgccttg tcccatgctt gggcatggtg tcaagcgtca ggagggagaa agggtcctta 122940

tttatttatt tagagaggga cccttcttct gttcccaggc tggagtgcag tggtgcgatc 123000

tcggctcact gcaacctccg cctcctgggt tcaagtgatt ctcctgcctc agcctcctga 123060

gtagctgaga ttacaggcac atgccaacat gcccggctaa tttttttttt tttttttttt 123120

tttttttttt tttttttttt gagatggagt tgtactctca ttgcccaggc tggaatgtaa 123180

tggcacaatc tcggctcact gcaacctcca cctcctggat tcaagcaatt ctcctgtctc 123240

agcttcccaa gtagctggga ttacaggtgc ccgccaccat gctcaactaa tttttgtatt 123300

ttttttttag tagagacgag gtttcaccat gttggtcaga ctggtctcaa actcctgacc 123360

tcaggtgatc cacctgcctc ggcctcccaa agtgctagga ttacaggcat gagccaccac 123420

gcccggcctg aaagggttct tatttagtgt gcattttgac attcaattta attccaaggt 123480

cttgtggggt catggtttac aggatgttga tatagaaaag acttcactta atgggccggg 123540

cgcagtggct catgcctgta atcccagcac tttgggaggc cgaggcaggc agatcaggag 123600

gtcaggagat tgagaccatc ctggctaaca cagtgaaacc ccatctctac tgaaaataca 123660

aaaaattagc tgggcgtggt ggcaggcacc tgtagtccca gccactcggt tggctgaggc 123720

aggagaatgg catgaacccg ggaggcggag cttgcagtga gcagagacca tgccactgca 123780

ctccagcctg ggcgacagag caagactctg tctcaagaaa aaaaaaaaaa aacagacttt 123840

acttactgga agccaaccaa tgtatattta gagtaatttt tcctgggctg agctgtcatt 123900

tacttttgca gtatctcaag aagaagagtt tacagtgtaa atatttgatg cacactttga 123960

ttatatagat gaagcaaact attttcaaga gctttgcaag gacttacttg tatccaaaca 124020

ccattctaaa aggagtctta cctacttcta aaggctggtc tctacttgga accacttgct 124080

tggccctggt tcaagtcctg ctgcaaacct ggaagtcctg tcattgtctt cttccctcca 124140

gagcagtggc acccaatcta atttttgctg tgccccagca gcccctggca ctttgccctg 124200

tagactgcag acctcatgta atgtatgtta agtccacaga accacagaag atgatggcaa 124260

gatgctcttg tgtgtgttgt gttctaggag gtggccaggt ggaagtaaaa tctgagaagc 124320

ttgacttcaa ggacagagtc cagtcgaaga ttgggtccct ggacaatatc acccacgtcc 124380

ctggcggagg aaataaaaag gtaaaggggg tagggtgggt tggatgctgc ccttgggtat 124440

atgggcatta atcaagttga gtggacaaag gctggtccag ttcccagagg aggaaaacag 124500

aggcttctgt gttgactggc tggatgtggg ccctcagcag catccagtgg gtctccactg 124560

cctgtctcaa tcacctggag ctttagcacg tttcacacct gggccccaac ctggagaggc 124620

tgaccaatgg gtctcagggg cagctcggtt gctggagttt ttgtttttat ttatttttat 124680

gtatttaagg cagggtctct gtattagtcc attctcacac tgctaataaa gacataccca 124740

agactgggta atttataaag gaaagaggtt taatggactc acagttccac atggctgggg 124800

aggcctcaaa atcatggcgg aaggcaaagg agaagcaaag gcatttctta catggcgaca 124860

ggcaagagag cgtgtgcagg ggaactccca tttataaaac catcagacct catgagattt 124920

attcactatc atgagaacag catgggaaag acccgccccc atgattcagt tacctcccac 124980

tgggtccctc ccatgacaca tggaattatg ggagctacaa ttcaagatga gatttgggtg 125040

gggacacagc caaaccatat cagtctccct ctgtcatcca ggctggagtg cactggcatg 125100

atctcggctc actgcagcct ctacctccct gggtcaggtg atcttcccac ctcagcctcc 125160

caggtagctg gaactacagg tacctgccac tatgcctggc taaatatttt gtatttcctg 125220

tggagacgag gttttgccac gttgcccagg ctggtcttga actcctgagg tcaagcaata 125280

tgcccacctc ggcctcccaa ggtgctggga ttacaggtgt gagccacagt gctcggccta 125340

agtcactgca gtttttaaag ctcccaggtg attcttcagt gcagtcaaaa gtgagaactg 125400

gctgggtgcg gtggctcatg cctgtaatcc cagcaccttg ggaggcgaag gtgggcagat 125460

ggcttgaggt caggagttca agaccagcct ggccaacatg gtaaaacccc atctctacta 125520

aaaatacaaa agttagctgg gtgtggtggt gcgtgcctgt aatcccagct acttgggagg 125580

ctgaggcatg agaattgctt gaacccaggg gacagaggtt gtagtgagcc gagatcgtgc 125640

cactgcactc cagcctgggc aacagagtga gattccatct cacaaaaaaa aaaaaaagcg 125700

agaaccactg tcctaggccc tgatgtttgc aggcaactaa aaaaggaagt ggacatcccc 125760

agtcagctgt ggcgcaccaa gaacaagtca tgggaacata acctaatttt ctaaatgggt 125820

tactaggcac ttagagcaaa acaatgatgc cgaaatcctg atttcagcaa agcctctgcc 125880

tgcctgtctt ggaagtatcc acatgaggct gctggggcct tggtgtcccc agcagtttct 125940

agtctctagg tcttgctgtg ggtgtctgtg cagtgagggt gtgtgtggcg ctgggtgagc 126000

tctgtctagg cctggcacag gatgcggtct ggtagctgct gcttctcttc tgcagaagcg 126060

cagccaagca ccctctgggg tttcaggccc acacccagcc tgaagttctg ggagtggctc 126120

actttccaac cttcagggtc tcccagcagc tgactgggga gtggtggagg gaaaagggat 126180

tgtattagtc cgttttcacg ccgctgatga agacataccc gatactgggc agtctaaaag 126240

atagaggtct gatggactca cagttccacg tgactgggga ggcctgacaa tcatggtgga 126300

aggtgaaagg cttgtctcac acggtggcag acaagagaaa agagcttgtg caggggaact 126360

cccctttata aaaccatcag atctcgggag acttattcac tatcatgaga acagcacggg 126420

aaagaccctc ctctatgatt caattacctc ccaccaggtc cctcccacaa catgtaggaa 126480

ttgtgggaac tacaattcaa gatgacattt gggtggggac acagccaaac catatcaggg 126540

cgtcccagaa agggtatagg gtctgagacc caagtcagca tgagaaagta tgcttctcat 126600

ggtggcccag ttgggtggaa gtggcagccg ggccgtcttt ccaccaggcc actcaagtag 126660

cagctgagag acccctgccc tggccagtcc ccgccctccc ctcttgccac tgcctctggt 126720

tctgaacaga tgggcaccct catcttgtat ttgtgattaa tgtctaacaa tgtagttttg 126780

tgagaagggt ttgctgatac agccttgctg cagatgctgc gaactgtggc ctggggcaga 126840

ccttacctcc agacacgccc tgaggcaggg gagggcactg gcccgtagct ggccgagagc 126900

tctcgggttg cgcgacaggg atacttttca gcggctgggt cgctatccaa agtgagaaaa 126960

cgaggaggga ccaggaggct gtccgcctca agagatgtgg gggccaggtc cagttatctg 127020

gggaagcagt aagcttctct gctgtttcta accccaggcc tcccctggtc taaggcaggg 127080

cctcccagcc tcggggcact ttaaagatat ctgggcctgg ccccatcccc acagtctgac 127140

tgagtgggtc tggatagggc ctgagcattg gtgatttcct gggtgaaagg aggcccctca 127200

cagtctctgg aagcttctct gtgttaggaa aagctctggg cttgactctg ctttgaaagt 127260

caagatccgc aaatcctctc agcctcagtt tctccttcag caagatgaaa tggaaatgct 127320

gtacctacgt cccggggtgg ttgtgagacc caaaaaagac aatgttctgg aaggttcctg 127380

gtgcgttgca gtcctctaag aacctgagtt agagccacgc tgagtctcag cttcttggct 127440

ccttctgttt caaactcgtc catgtgatag ctcaggaagg gtaggcaggg ccctgccccc 127500

tactcagaaa acaccatcct ggtcctgggg atccccgcag cattagtccc ctgttttccc 127560

agtgtattga gaaaaattgc taacaagcag tggggcacac caccagcctc ctgggttcct 127620

ttcagtttgg ggatttttgg acattcccag gaatgtctta aaaaacactt caaaaaacat 127680

taacataaat atttttatca aagcctgtat taaatggtct ttcaagaaaa tacagtaaca 127740

ggtcaggcat ggtggctcat gcctgtaacc ccagcacttt gggaggccaa ggcaggcaga 127800

tcacctgaaa tcaggagttc aagaccaacc tggccaacac agccaaatcc catctctaca 127860

aaaaatacaa aaattagctg ggtgtggtgg cacacacctg tagtcccagc tacttgggag 127920

gccgaggcag gagaattgct tgatcccgga ggcggaggtt gcagtgagcc gagatcgtgc 127980

cactgcactc cagcgtgggt gacaaggtga atctttgtct caaaaaaaaa aaaaaaaaaa 128040

agataaaata cagtatacag taatagagaa caatcctttt ttcaaagtag tgaccccaaa 128100

tgaacaaaat atgcatctag cttaaatgcg aacctggttt tctctacgcc cattcaagcc 128160

cctgcaatag gggcccttca ccccgcatcc atggactcct aaaattatat ggaaaatggc 128220

tgtgtgtgag tgtggatgga catgtgcaca catatttttg gctttaccag atgctcaaag 128280

agcctaggac ccaaaaaggg ctgagaatga ccgtgtcggc cacttcaggg tcatcaggaa 128340

ttgctgtgca ctgctcactt ctccagtgaa cactttctgc ttctgtgttt cctggtatcc 128400

tttgggactc ctggctaggt catgtgtttc tctactttca aaagggcttc agccaggcac 128460

gatggcatga gcctgtagtc ccagttgctc tggaggttaa ggtgggaaga ttgcttgagc 128520

ccaggaattt gaggccagcc tgggcaagta gataggtaga tgattgatag atagatagat 128580

agataaatag atggatagat aagtcgctag acagtcatcc atccacccat ccacacataa 128640

aaaggccttt gtcatgtcat gttttgtggc ccacctgcca gtgttgccca cagttgctgc 128700

ccctccaaac tcatcagtca ctggcaaaca ggaggaatgt gtggctcatg tctgggcatc 128760

agtggctgtg ggagacatcc ttgatcttct ccagcttctc cttccacatt ttcctttgca 128820

atctggcaat atctattaaa ataaaatgtg catgcctttt gacctaagag cttcacttct 128880

aggacccact tacacgtgtg tgacatgatg ttcatacggg tttatttatc tgaggttgtt 128940

catacacacc attgcctgta atcactaaag gcgggagcag cctacacatc catccacaga 129000

ggagtagatg ccttttggta catccgtggc gacggaatac taagcagcct gtgtatctat 129060

acactcacac gtgtttgttt atgtgtggaa tatctctgga gggtacacaa gaaacttaaa 129120

atgatcactg tctctgggga gggtacctgg gtgcctggga ggcaggtcag ggaaggagtg 129180

ggcacaggta ttaccaattg gaagacaata aaaacaacag ctcctggcca ggcgcagtgg 129240

ctcacgcctg taatggcagc actctgagag gctgaggcgg gcagattgct tgcgtccagg 129300

agttcaagac cagcctgggc aacatagcaa aaccccgttt ctattaaaaa tacaaaaaat 129360

tagccaggtg tggtggcatg cacctgtaat cccagctact cgggaggctg aggtgggaga 129420

atcacctgag cctgggaggt caaggctgca gtgaggtgag attgtgccac cgcactctag 129480

cctgggcgat agagcaagac cctgtctcaa aaacaaacaa aaaacagtcc ctggcactct 129540

gggccaggcc tggcagggca gttggcaggg ctggtctttc tctggcactt catctcaccc 129600

tccctccctt cctcttcttg cagattgaaa cccacaagct gaccttccgc gagaacgcca 129660

aagccaagac agaccacggg gcggagatcg tgtacaagtc gccagtggtg tctggggaca 129720

cgtctccacg gcatctcagc aatgtctcct ccaccggcag catcgacatg gtagactcgc 129780

cccagctcgc cacgctagct gacgaggtgt ctgcctccct ggccaagcag ggtttgtgat 129840

caggcccctg gggcggtcaa taattgtgga gaggagagaa tgagagagtg tggaaaaaaa 129900

aagaataatg acccggcccc cgccctctgc ccccagctgc tcctcgcagt tcggttaatt 129960

ggttaatcac ttaacctgct tttgtcactc ggctttggct cgggacttca aaatcagtga 130020

tgggagtaag agcaaatttc atctttccaa attgatgggt gggctagtaa taaaatattt 130080

aaaaaaaaac attcaaaaac atggccacat ccaacatttc ctcaggcaat tccttttgat 130140

tcttttttct tccccctcca tgtagaagag ggagaaggag aggctctgaa agctgcttct 130200

gggggatttc aagggactgg gggtgccaac cacctctggc cctgttgtgg gggtgtcaca 130260

gaggcagtgg cagcaacaaa ggatttgaaa cttggtgtgt tcgtggagcc acaggcagac 130320

gatgtcaacc ttgtgtgagt gtgacggggg ttggggtggg gcgggaggcc acgggggagg 130380

ccgaggcagg ggctgggcag aggggagagg aagcacaaga agtgggagtg ggagaggaag 130440

ccacgtgctg gagagtagac atccccctcc ttgccgctgg gagagccaag gcctatgcca 130500

cctgcagcgt ctgagcggcc gcctgtcctt ggtggccggg ggtgggggcc tgctgtgggt 130560

cagtgtgcca ccctctgcag ggcagcctgt gggagaaggg acagcgggta aaaagagaag 130620

gcaagctggc aggagggtgg cacttcgtgg atgacctcct tagaaaagac tgaccttgat 130680

gtcttgagag cgctggcctc ttcctccctc cctgcagggt agggggcctg agttgagggg 130740

cttccctctg ctccacagaa accctgtttt attgagttct gaaggttgga actgctgcca 130800

tgattttggc cactttgcag acctgggact ttagggctaa ccagttctct ttgtaaggac 130860

ttgtgcctct tgggagacgt ccacccgttt ccaagcctgg gccactggca tctctggagt 130920

gtgtgggggt ctgggaggca ggtcccgagc cccctgtcct tcccacggcc actgcagtca 130980

cccctgtctg cgccgctgtg ctgttgtctg ccgtgagagc ccaatcactg cctatacccc 131040

tcatcacacg tcacaatgtc ccgaattccc agcctcacca ccccttctca gtaatgaccc 131100

tggttggttg caggaggtac ctactccata ctgagggtga aattaaggga aggcaaagtc 131160

caggcacaag agtgggaccc cagcctctca ctctcagttc cactcatcca actgggaccc 131220

tcaccacgaa tctcatgatc tgattcggtt ccctgtctcc tcctcccgtc acagatgtga 131280

gccagggcac tgctcagctg tgaccctagg tgtttctgcc ttgttgacat ggagagagcc 131340

ctttcccctg agaaggcctg gccccttcct gtgctgagcc cacagcagca ggctgggtgt 131400

cttggttgtc agtggtggca ccaggatgga agggcaaggc acccagggca ggcccacagt 131460

cccgctgtcc cccacttgca ccctagcttg tagctgccaa cctcccagac agcccagccc 131520

gctgctcagc tccacatgca tagtatcagc cctccacacc cgacaaaggg gaacacaccc 131580

ccttggaaat ggttcttttc ccccagtccc agctggaagc catgctgtct gttctgctgg 131640

agcagctgaa catatacata gatgttgccc tgccctcccc atctgcaccc tgttgagttg 131700

tagttggatt tgtctgttta tgcttggatt caccagagtg actatgatag tgaaaagaaa 131760

aaaaaaaaaa aaaaaggacg catgtatctt gaaatgcttg taaagaggtt tctaacccac 131820

cctcacgagg tgtctctcac ccccacactg ggactcgtgt ggcctgtgtg gtgccaccct 131880

gctggggcct cccaagtttt gaaaggcttt cctcagcacc tgggacccaa cagagaccag 131940

cttctagcag ctaaggaggc cgttcagctg tgacgaaggc ctgaagcaca ggattaggac 132000

tgaagcgatg atgtcccctt ccctacttcc ccttggggct ccctgtgtca gggcacagac 132060

taggtcttgt ggctggtctg gcttgcggcg cgaggatggt tctctctggt catagcccga 132120

agtctcatgg cagtcccaaa ggaggcttac aactcctgca tcacaagaaa aaggaagcca 132180

ctgccagctg gggggatctg cagctcccag aagctccgtg agcctcagcc acccctcaga 132240

ctgggttcct ctccaagctc gccctctgga ggggcagcgc agcctcccac caagggccct 132300

gcgaccacag cagggattgg gatgaattgc ctgtcctgga tctgctctag aggcccaagc 132360

tgcctgcctg aggaaggatg acttgacaag tcaggagaca ctgttcccaa agccttgacc 132420

agagcacctc agcccgctga ccttgcacaa actccatctg ctgccatgag aaaagggaag 132480

ccgcctttgc aaaacattgc tgcctaaaga aactcagcag cctcaggccc aattctgcca 132540

cttctggttt gggtacagtt aaaggcaacc ctgagggact tggcagtaga aatccagggc 132600

ctcccctggg gctggcagct tcgtgtgcag ctagagcttt acctgaaagg aagtctctgg 132660

gcccagaact ctccaccaag agcctccctg ccgttcgctg agtcccagca attctcctaa 132720

gttgaaggga tctgagaagg agaaggaaat gtggggtaga tttggtggtg gttagagata 132780

tgcccccctc attactgcca acagtttcgg ctgcatttct tcacgcacct cggttcctct 132840

tcctgaagtt cttgtgccct gctcttcagc accatgggcc ttcttatacg gaaggctctg 132900

ggatctcccc cttgtggggg caggctcttg gggccagcct aagatcatgg tttagggtga 132960

tcagtgctgg cagataaatt gaaaaggcac gctggcttgt gatcttaaat gaggacaatc 133020

cccccagggc tgggcactcc tcccctcccc tcacttctcc cacctgcaga gccagtgtcc 133080

ttgggtgggc tagataggat atactgtatg ccggctcctt caagctgctg actcacttta 133140

tcaatagttc catttaaatt gacttcagtg gtgagactgt atcctgtttg ctattgcttg 133200

ttgtgctatg gggggagggg ggaggaatgt gtaagatagt taacatgggc aaagggagat 133260

cttggggtgc agcacttaaa ctgcctcgta acccttttca tgatttcaac cacatttgct 133320

agagggaggg agcagccacg gagttagagg cccttggggt ttctcttttc cactgacagg 133380

ctttcccagg cagctggcta gttcattccc tccccagcca ggtgcaggcg taggaatatg 133440

gacatctggt tgctttggcc tgctgccctc tttcaggggt cctaagccca caatcatgcc 133500

tccctaagac cttggcatcc ttccctctaa gccgttggca cctctgtgcc acctctcaca 133560

ctggctccag acacacagcc tgtgcttttg gagctgagat cactcgcttc accctcctca 133620

tctttgttct ccaagtaaag ccacgaggtc ggggcgaggg cagaggtgat cacctgcgtg 133680

tcccatctac agacctgcgg cttcataaaa cttctgattt ctcttcagct ttgaaaaggg 133740

ttaccctggg cactggccta gagcctcacc tcctaataga cttagcccca tgagtttgcc 133800

atgttgagca ggactatttc tggcacttgc aagtcccatg atttcttcgg taattctgag 133860

ggtgggggga gggacatgaa atcatcttag cttagctttc tgtctgtgaa tgtctatata 133920

gtgtattgtg tgttttaaca aatgatttac actgactgtt gctgtaaaag tgaatttgga 133980

aataaagtta ttactctgat taaa 134004

<210> 2

<211> 132218

<212> ДНК

<213> Macaca fascicularis

<220>

<221> примечание

<222> (108730)..(108735)

<223> n — это a, c, g или t

<400> 2

cgggaaaggg cagcgccgag aggaaccagc cgggaggcgc cggacagccg agcggcaggg 60

cgctcgcgcg cgcccactgg tggccggagg agaaggctcc cgcggaggcc gggctgcccg 120

ccccctcccc tggggaggct cgcgctcccg ctgctcgcgc ctgcgccgcc tgccggcctc 180

gggaacgcgc cctcttcccc ggcgcgcgcc ctcgcagtca ccgccaccca ccagctccgg 240

caccaacagc agcgccgctg ccaccgccca ccttctgccg ccgccaccac agccaccttc 300

tcctcctccg ctgtcctctc ccgtcctcgc ctctgtcgac tatcaggtaa gcgccgcggc 360

tccgaaatct gcctcgccgt ccgcccctgt gcacccctgc gccgccgccc ctcgccctca 420

gcctccacag actggggctt cgtgcgccgg gcatcggtcg gggcgaccgc agggcccctc 480

cttgcctccc ctgctcgggg gctggggcca gggcggcctg gaaagggacg tgagcaaggg 540

atgcacgcac gcctgagtgc gcgcgtgtgt gtgtgctgga gggtcttcac ccgcttcgcg 600

ctgaccccag gtggaggccg tgccggcagg gtggggcgcg gcggcggtga cttgggggag 660

ggggctgccc ttcactctcg accgcagtct tttgccgcaa tgggcgtgcg tgggggggga 720

ggggtccgat aacgaccccc gaaaccgaac ctgaaatccg ctgtccctgc cgctgttcgc 780

catcagccct aaggaagatg tggatcgggt tctagaaaag atgactgact ccctgcacgc 840

ccctcccttt acctcccgag cagtgattcc gacagggcct tcactgcccc tgattttagg 900

cgggggccgg ccccctcccc ttttcctcct tcagaaaccc gtaggggaca tttgggggct 960

gggaggaatc gaggagatgg ggaggggtcc aggcgctgtc actttagttg cccttccccc 1020

tgcgcacgcc tggcacagag acgcgagcag cgccgtgcct gagaacagtg cgaggatccc 1080

agtgtgcacg ctcgcaaagg caggggtcac ctggcctggc gatgtggacg gagtcggcgg 1140

ccgccggtcc ccgctcgcgg gcaggcacag cagcagccat gcactgacgg gcgcggggct 1200

gcaggtgcat ctcggggcgg gtttctttct cagcgctccg cgcgcagggt gcccggcgtg 1260

tgcgctccct gccggaggcg cggggctggc gcgcagggct cgcccctcac tgcggcagtg 1320

ggtgtggatc ctggtgggcg aggagggggg aggataggct gtgcctcctc ccactcccga 1380

ggtgccatct tttttcggcg tgtcacgtct ttacggtgcc atgccaaacc gggtggccgg 1440

gcttcgtagg acagggcggg gcctggcatt aaagggaggg ggacaatcag cgctgaaatc 1500

ttggcgtttt gctgctgcgg gcgtgagcgc tgggggcgtt cacccagcac cttcttcggg 1560

ggctctttgc tttgtctgta gaggttacgt gatctgcgct cccagccctg gtttctggct 1620

tttattctga gggtgtttag ccaacctccc cccaccccca agcacctctt tcctttttcg 1680

ttcctcattt ccgagcccat tgttggatct cgaggcttgc tggggtcgac gaacccgagt 1740

caaccccccg acccccggca cgcatggaac gggcgtgacc gcgcgcagcc tcgtctcgga 1800

gtctgcgggc gccaggaagc ttctgaaggg atgggattcg agtctccgtg ctgcgctgcg 1860

ggcggcggca gagggatcac gcccctccca acaccccgag tgtcctgagg gccaagccac 1920

accaggttgc ccaacgaggg acgctggcta cccattcggg gatgggtggg gagccccggt 1980

ggggcctctc cagctttacg ccctgttgct tcgcctggcg ggagaatgtg aggagggggc 2040

ataaggttac tggtgctgcg gccacaccca tttttctgag cccactggag ggggcacaga 2100

gggggaattg ccatgggaac cacaggcgtc cggagagggg accttggggc tggccccacc 2160

ccttccctgg ggagattggg gaccctgggg taggcggggc cgcgcccagt tggcctcctg 2220

gaggacacgg gaggaagccc ccaacccctg cacctgagac tctaattggc ctctggcggc 2280

cgcagatagg cagcccttgg gtgtattttt attaatatta tgtctgtact gattaatatt 2340

atttatcgta aatgcgggat ttcacccgta tccaagttca ccgtaccccc aaaaccgagt 2400

ctggggctgc aaggagaact cctggccaag gcatccgagc ctcgccctcc tgtgatgaac 2460

ctggtacgcg ccgttttctg gttaattcta tcgatgaaaa ctggtgcggg ggggcgcact 2520

tctgagacga acgagcatct aggagctgaa tcctccacgc gggctgccca ggttgatctg 2580

aatttccggg gaatggcttg actggggaac tagagcccgc ccgggaccag gctgaccttc 2640

ctcgacggtg gcgtcgaggg ctggagcctg agtgctgcga ggcttcccgc atggctgagc 2700

caccgcgagg ggttgcagag cggctcaggg gtcagttcaa gcatcttctc tcctccctcg 2760

cccccagaca gagctgggcg cgggattccg gttccagatg gagtgagggt ctcgggacgg 2820

ccctggaaaa ggggagccca cggtcaaggc tgcctattgc catctcgagc agagatgtca 2880

cctgctgccg ttggaggaaa gggagcccgg tggggatgag cgcatttagc ccaatgctgg 2940

gaacaaagca caatccgcgc ttctgcgatt tcgctccatt ttgaaatgtg ttggcgcttt 3000

ggttgggcca ctgcggtggg caaggccggg gaaggagggg gctgctgtta atggagaaac 3060

ctcaggggga cggtccttcg tgcaacaatt aggaaactcc atcctgactc tgtgcgcgct 3120

ttaaggaggt ggcttcgctc caggtcctcg agggatgcag ctttggcgcg gatgacggtg 3180

gggtgcttgc ctctggaaat gtctgggcac ggatcccggg gccatcgacg actcctcccc 3240

atccccagca ggcgggagct cttacattcc gagcgactgc tctcaccctc tggcgctcac 3300

acacctgtaa ctccaaacct ccgtctcaga atggtccggg ttggaaggga tgatgggggc 3360

tcggacagcg actgcccagc tcacccctct gcgcgctcag gctccaggct cagcaggacc 3420

aatttgagtt atatctgatc cccctgcccc cgtaactgac ccatcctaca ggagacaggg 3480

aaatgtcttt cctaccgcgg ttgattctag ggtgtcattt tgtgttttgc gatggctgct 3540

tatatttact acataagaat tgtttatttt ccatctccaa atcctccctc tacataaata 3600

aataaatgga taaacagata agtgtgtccc ccgcccccac ccccgctagg caggtctgga 3660

gtgacccttg aagctcatcc attccttggc caagtttgcc tccctaacag atatttatac 3720

agcaataacc cggcttggct cttgggttca cctttagacg atttggggaa ggggcttgtt 3780

ggctttgctg gtttttggat gagtgacagt ccatgactgt tcctgctgga agggcgtggc 3840

ttttaagtgg tttctaatat caggcactgc tcctctgaga ggaacaaaag aaatggatac 3900

ctgcccataa attgctagaa aacttagaat tggtttgatt gaggaaaggt tagatttatt 3960

ccggttggaa aaagaggcct ttctattaaa ggggcccttt gaccctcatg cccttggagg 4020

tcagtgccag cctggagatg tgataagatt gtggttttcc ttctgccttt ttaacatccg 4080

ttgatacagt ccatttgttg aaaattttaa gaaacgtgtt ttattccact ttccctcagc 4140

atttatgtgt gtggcttcag tggctctgtg gctacatgta caaacacatg ttatttttcc 4200

aattggacat gttataattt tccaactgga ccttgccttc tattgatgta tttatttagc 4260

atcttcctta ctccctcctt gaaaaagact cactcaaaaa caagtaaaaa caaccgtagg 4320

ggcctaatac agtgctagac atacaagagg tatccggtcc ataccaaatg gattttatcc 4380

atgaaggata aatggggaaa cacaggttaa gagaaacaga aggtggggct ttatttatgg 4440

tcacggcaga aggaaggtct ggggacaaac tcagttcagt ctatcccagc cctgtgtccc 4500

agtgacgctc agctgcctgt gctcttgggc cacctcctcc cgccccctcc ccctccccac 4560

tgcagcactc ccatagcctg gtccctatgg cccacctccc tcttattggc cagaggtgaa 4620

gatgagagga aaggagagag accaccctct accctaggga aggaagaccc tgccctggca 4680

ccttttggta cttggtgcag taggtcggtg ggaagcgggt gggaaaccac atttgactct 4740

gctccttcct ccgccaccac tttcctcatc accgtgttca gagaccccca aagccccttc 4800

acactcccag aaacagcccc ctggtcattc ctaacttgcc atgcccagga gttaggcgct 4860

tccactagtg acagggagct ggcgtttggg gggcacctca gcaggtgacg gggagagaag 4920

cctgcagcct caccagctgg gctgcagcag agagaggagc cctcatgttc cagcagggac 4980

tctcagctgt ttgcctgtaa aaccatgctt ctcacctggg ggccactgag atgtctagag 5040

agatgttttt cttttcacaa cttgaggagg gtgctactga catctcgtag atagaggcca 5100

gggatgctgc tgaacatcct acatggcaca ggacagtctc ctacatcaaa atatgaccca 5160

accccagtgt taccactgct ggggctgaca ctggcattgc taccttaatt acattcattg 5220

attgtcttct aggagccctg ttctaagtgc ttgtctcaga ttatctcatt taatcctcac 5280

aacaattccc ctatgtagca ggtgctgtta ttatctccat gctggggaaa ctgaagcaca 5340

gagagggtta gtaacttgct aaaggtcata gagccagtgg gtggtggagc tgggtgcctg 5400

ccactagctc cctcccctct cagccacacg tgggtttact tggccattgt ggactagtct 5460

gggaacccaa atatgatcta taacattgac ccagtagata ttgattctaa aaccactgtt 5520

tcacaaatga acttttacaa gagtctgtaa ttggagcatg acccagaata agtttaggga 5580

gatgtggagt ttaaagctct caatttctta tctggccccg acacagagag caaggcattt 5640

cactctacct tggtgctctg tttataaaac aaagagcaaa tatctcttcc caaggtcctt 5700

aaacttctac tccctaatgc agggtttctg gactgatctg ccagatgaag gggcagctgg 5760

tttgattgac ccagggaagg ctggaaatca agactggggg atcaagatgt agattcagtg 5820

tggccaagtc aagtctctgt ggtttaggga catcagatgc ccagcttagg ttctgtacct 5880

cggcaaggta aaagcgttgg tgcccactga tgaggccagc tctgagattg tgggtgtggg 5940

ttgagttggg tgggcatagg caagtcctca tgtaagaatc ccttggcaaa gataggcccg 6000

ggaggctttt ctcacttcct ggggcccagg ctttgcaata aatattccat tatactatgg 6060

tgccttgggg ctacctgaga atcctctgtc tcgcccctgt tgccttgcca aagaggttgc 6120

tgtccaagaa ttcctttcct gtctccagat gccatgctcc tgccacctct gccaggttcc 6180

ctgcctgccc agatggctcc cacctgagta tgaggaggag tttgaggctg gcccaggaca 6240

ggttttgagc tttctgggtt ctccggttag gaagctttct gtaagcatgc agatacaatg 6300

ggcatcagca aaatacaaac tggaacaatt tccaggtata ttcccttaat tttctttgct 6360

tttttcatat ttcatcaggc tccatgctga gcccaatcag ggacctgata aaaatccaaa 6420

caccatgtca gcgagtcccc aagaaatgca ttttgtgcca aggctattca aggaagtttt 6480

gggagcagct caagggcaga cactgttacc cttcccccag gtccccagtg cagggcagtg 6540

tcctgcatgt ggaggcagtt tggcctaatg gttaaggagg caggctctga ttgggcctcc 6600

tggacataag tcccagctcc ctgctcactg tgggacctaa gccatgttgt ttagctgttt 6660

ggagagtttt ttgtcatcca taacttggag tatgatggtg cctgtctcac gggttgccat 6720

ggggttcaaa caagctaacc tggtactcac cagggcccta cacatagtaa ctgctcagta 6780

aattgcatca ttggcagtgt cctatggata agtgcttgtg attggctgaa tgagcagagg 6840

ggtctaaaga ccctggtgat ggaatcagtt gtacagataa attgttacac tgagtaggga 6900

tcaagttagg aaaagtgggt aactgcccag ctcccctgca gccaaacttt gggcagacgt 6960

ggaccctctg aaaattgcac acacccatgt ttttttttgt ttttttgttt tttttttttt 7020

ttgagacaga gtctcgctct gtcgcccagg ctggagtgca gtggccggat ctcagctcac 7080

tgcaagctcc gcctcccggg tttacgccat tctcctgcct cagcctcctg agtagctggg 7140

actacaggcg cccgccacct cgcccggcta gttttttgta tttttagtag agacggggtt 7200

tcaccgtgtt agccaggatg gtctcgatct cctgacctcg tgatccgccc atctcggcct 7260

cccaaagtgc tgggattaca ggcttgagcc accgcgcccg gcctcacaca cccatgttta 7320

aatgtacaca cagaactctt gccacaggca agcagagatt tgtcatctgc tgtccctgct 7380

tcatattctt cctgaaatcc actccatgcc aggaataaac tgcatgctct ccaccagccc 7440

aaaccgacct gccctccctc cagtcatccc gggaagggtg acctggctta gtacattggg 7500

ttcagagatc tttccagttt acttgttgaa taaaaagtga gggctgatta agaaagtaat 7560

ggcagtcagg gaaggcgaag gaggtgaaga agagatttta caaatgaagt aattcaacgg 7620

agtgctgacg ttggtaaact ggtgaacagg tttcagggtg gtcggttgag agtagagtag 7680

aaaagggtta aataaagcaa acttgtggtg tactgaatct taggaattcc atgtatccaa 7740

taagtatagt catttatgaa ttaataaatt aggcctaaga agccttctta tcccttaaat 7800

caagactgag taacaatata tcagttttaa aaagtcatta catcagaaaa taatgtaaat 7860

gatacacata gattttcaag attttacttt aactgaaact atataaatgt aaattcattc 7920

acccatcttt tcacacaggg cccaggtctt ctcttggtgt ctgatcagcc agttgaaatt 7980

tcgtgtctct cttgcctgtg ccatattaat aatgcactgt ctgggtcttc cgatttcagt 8040

ttggattttg gatttatatt gtggagtcat ctgaatgcag aatccctcag ggattttact 8100

tttttctttt tttgcatggt ctttaccatc ctgtttgata gtaaatatta ctcacctttg 8160

tgaagtcttt ctaaaacatt caacttaatt ttcttaaaat cattgaatga tttgaagagc 8220

ttatccttcc ctctgcactt gtattccctc agcttgcacc ttatttattt atttatttat 8280

ttatttattt attgagacag agtctcgctg tgtcgcccag gctcgagtgc agtggtgcga 8340

tctcggctca ctgcaacctc cacctcctgg gttcaagcaa ttctgcctca gcctccccag 8400

tagccgggac tacaagtaca caccataatg ctcgtttgat ttttgtattt ttgtagagat 8460

ggggttatgc catgttgtcc aggctggtcc tgaacttctg acccaggtga tccacccacc 8520

tcggcctccc aaagtgctgg gattacaggc gggagccacc atgcctggcc agcttgcacc 8580

ttagttaggg tatgtgatta ttatagcaag tctggtgtac gtagaagatt ttgaatgggc 8640

acagatgacc tttaggaagt gctgggctgt ggtaagaggc agtcctaact gcagatcagg 8700

ctgtgaggac cccagccttg catgttgaca gaccttcatg tcttattcgt acagggtatc 8760

agaagaacac ctactgggga aacttttaaa taagtaaaag gtgggcgtcc tccccgcctg 8820

tcttccgtct gtctgccagg actagcacag cactttgaag tcattcacat ggaatcccaa 8880

cttaagaggg cactacaaaa tcctctccat cagactgaaa ataagtttaa attccctttc 8940

ttatattaac tcccctgagg aaagagtctt agatcaatgt ccaatactaa aaacagtttt 9000

aaatcagcga gtgagaatta aatctgaaac cattgataat aacgtttcat tcattcctct 9060

cctttggcct catccaccct actgctaaat ccaggcatca aagagaagag ggacataatt 9120

atctctggtc ccagctgctg gttttccttc cagcctatgg cccagttttc cgttttactg 9180

agaaggctgg tgatgttggc ttgggatcta catctgcagt tgtaccacaa aaagtccagg 9240

gatgcacttg catccttgta tccgcctccc tgggatagca aggatattag aagacccctg 9300

gatccataat tgcttgtcac gttatctgca gacgccacag aatgccaaga acaaagtgct 9360

gggaaggacc aattcatgga accatgggac ggtgctcgtc ccccagcgta aaggacagct 9420

cctcctcctg aattgcagcc agcattctaa atcgtgtgtc aacagagttg tcctggatcg 9480

gatccagttc tcccattgat ttgcaggtca cttcaggggt gcctgttcca gttgttctta 9540

actgaatgct ggcagcaaac tgttgtctta cctcatccct ctaccacggc ctattcctcc 9600

aaaagagact tcttgggtaa tcacggcaac atcaggcagc cgggcgcggt ggctcacgcc 9660

tgtaatccca gcgctttggg aggcggaggc gggcggatca caaggttagg agattgagac 9720

catcctggtt aacacggtga aaccctgtct ctactaaaaa tacaaaaaat tagccaagcg 9780

tggtggcagg tgcctgtagt ctcagctact caggaggctg aggcgggaga atggcttgaa 9840

cccgggaggc ggagcttgca gtgagccgag attgtgccac tgtactctat cctgggtgac 9900

agagcaagat ttcatctcaa aaagattctc tttggtttta tatgtatata agtgaggcca 9960

ggctcggtag ctcacacttg taatcccagc attgtgggag gatcgcttga agccaggagt 10020

ctgagactag cctgggcaac aaagcaagac cctgtcttta caaaagaaaa ctaaaaatta 10080

gctgggcgtg atggcatgct tctgtagccc tgtctacttg ggaggctgaa gcaggaggat 10140

cacttgagcc cgaagttcaa ggctacagtg aactatgatt gtcccactgc actccagcct 10200

gggtaacaca gcaaggtcct gtctctaaac atttttttaa aattctattt atatttacat 10260

gtatttaaat gtgaatattc actacctatt tgttgcatgc ctggattttt tatattgggc 10320

ttgctgaaaa cctgaacagc tttctacttg acaatgcatc agaatttaaa tcagcgtgtt 10380

aataagccaa gcaaaggtta tataggcaaa taaaactgtt gtctgtaacc tcctgtaaca 10440

ttggagcaca gcaaaaatca tggtatagac acatatgaac ctgtcccttt catagctgct 10500

cactgccagg aaacatcagg aatagccgtt tggaagagtc accggccctc ccaccatccg 10560

ttttctgtct tgtcttttcc ctatgagcag gggaaattcc ccactggccc caatccccgg 10620

tgcagcggct cagcctctgc ctctgccgcc gctttccatg aggccagctt agaaacagag 10680

gattttgcag aacatcccta aatccgcttg aataaaggag tgatcattca taaactcacc 10740

tgaaccttct taaaacctat ttaatatttt tcccggataa tcctatcgag ataacttgcc 10800

tcctgggctt ctctccacca ggttcagttc ttcctttagt ggtgaagttc ctcccttctt 10860

agcatctcag ctgtgcctga gaaaaggcca gcggtagctg cactctgttc cctgtggagt 10920

gttaataaag actgaataaa ttgaaataaa tccctttcaa tgtcactaaa gtgctataaa 10980

taatcatgaa ccaatgtttg atggcggatg agaaatgcaa gaaaaaattt ttaatcagta 11040

ggattcatgt tataagttga cagtctgggc caggttaaaa aaataaaaat aaaaagactt 11100

taagaaagat cttatcattt gttaccagca agactgaatt ccagaagcga gccacaccct 11160

cattttgtgg gcccctgtta tcactggctg cttagggttg ccaagccctg aattcatttg 11220

tcaactaaga ggtttttggc caagattaag gtttcccatg cctccatatt tccatctgag 11280

aaatggagat tatgctgtct tccccctcag aatggatgat aatgtggtct ctcttctctt 11340

ctcatagtca tagaactgaa ataaaacaac ttaagagaat tcctttgagc ttctcaaaag 11400

tgctgcagga ctaggggatg cctcccggga gccgcagtcg ggtgctgatc tgaagtcttt 11460

ggtgggctga ctttagcctg acctgaaata gtatagctgc tgccacctgg ctcccttagt 11520

gccaaactgt gcagctggtt cctaggggtg agggctgagc cagcaaggtc tgtgcccagg 11580

agggatgcat gggtggccac agaacagcct gcactgatct tgtctgtccc ctgctttaga 11640

aggaaggaga cccaaaccag gatgcaagac agtgggtggc ggtgccttga gcatgacctc 11700

aagtgatttc cagcccctgc cagtgctgac ttctctgggg aagggctggg acttccttct 11760

gagctcaagt catgaccctt acatagaatt tcctgggagc ttttccattt ttctggagtt 11820

ttcagtttct tcctaaccag acagggactt ggtacagaat ctcatattct aattatgccc 11880

aggagcaacc tctccccacc acttacagcg tttagcatgt gacaggaatt gattaaggca 11940

tgagtgatta aattaaagcc aggcattgac ttggatggtg taatattctg atgactgttt 12000

ggtggcaaag gcacggggca gactcattaa ttgaactgct tgcacctgga atttgaattg 12060

agccagagcg gggctgaagt cagtttgcct tcaccctgtg aatggagggt ttctccggag 12120

cgtggatggt gggaggtatt tcaggatgta tgcgtaaccc ccaccctggc aatggcacat 12180

cttttctcca gcgtggccag gtttgagtgc cagtcctggg tgtccatagc cttgcgtttt 12240

agtaaaatgc tgcccccatt accacctggt ctgtccactt cggtcactgg aatttgccgt 12300

cttccagtcc ccagtgtggc aagccatgga gactcaagct cttccccctc cacatcctgg 12360

aacagacccg ccagtttctt ccaggcattg cctcagtttg cccctctctt tccagtcaca 12420

ctctcaccag cgataacatg attttaggcc ttatcacctc accctcggat ccttatggaa 12480

acaatgagtt gttccctgtt tcagttccaa aattcatatc caatccgttt tgcgtgccat 12540

tgccaaattc ttcccagagc aaccccgtca cctgccctgg ccctctccac gtgtggtcct 12600

gccatgagca tcacctgcta agccaagctg gcctcgagct gcctgcctgg gtccccacac 12660

cttggttcac ctccctgccc agtcccacct cccgcttcct gccagcctgc cctgtggctc 12720

cttcatagac gccgtgctct ttctgcccct tgctcaccca tggcagcttt gcccctctct 12780

ccctgcccta ccccatatgt aaatcgccct gaccttcctc agtgtccatc ctccctgaag 12840

ctttccccag ccttgacact caaggtccag aggctgcgcg tttcctctta cctgtggcag 12900

agccgcgctc ctcagtgctc acagttcccc tcttgccccc gcttcctgtg taggactcat 12960

ctgcccacag gttgcacgtc ttatgaaggc aaggactgtg tcttacgtga ctttccttct 13020

ccagtcacag agctgggcac atatatagct caaaaccctc ttgattaaca caggtggatg 13080

ctgagaaatc aaacaggcga tgtcaaatga gctctcctta tttaaatcaa gtcagttctc 13140

cacctcctag ttactcagtt ccagtactgt atatacttgg aaataataaa aaccacattt 13200

cctttaaaac attctataat tgttcctttg ccctacttca gactgactta acacactccc 13260

cattggtcca aatgagtttt gccatacgaa gatgctgata ataatagcag cagtggatta 13320

ttctactaaa accattgcct cgttaatcct cagtcccaac gaggtgggga ttattatcct 13380

cattttgcag agaagcaaac tgaggctcag agatttcaca gctggggagg gagccagatc 13440

atgcttctgt ccaggcccaa gctctccccc gcttgccttc ctgcctctgc aacctcagag 13500

catcccccat ctggttccac tggctatgct agttgtgcgg gaaccaaaag ccccgtctct 13560

agtgctgagg actggagaag ccatggcctc caggctctgt gaatgggtca catgtaacct 13620

gagcctggag aaattgtttg aaactgaagg caagcctcta aaccaggctg ctgcttcatg 13680

gcgccggtga cggcagaacc aaatttagtg ctgtgggcag gtccacactt atcagaaaga 13740

gaagctcatt tttcttctgg ctcacatcaa gcatgaaaaa tgttcacaca cacaccccaa 13800

acacatacac actccggagg ggtccatgtg gctagaggct ggaagatgtg gatgagagga 13860

gcctggcggg taagcccagg gaagatgaca ttcagcttcc cagacagtgt ctacagggag 13920

aaatttaatt aaaagtgggg cgggttccct gagcaaggca gacaaagtca gccctctacg 13980

gttaagaaaa agggtcacag tgagaggaaa ggtgaagaga ctgagtctgt attttccagt 14040

ctgttgggcg acacgcctga tcccccttcc tcaaaaatcc actttacttt ccccatgtct 14100

acaccagtgt ggttcacact ctgggacaag gaaaaggggg agtgatgggg aacagagaag 14160

ggaggagctc acacagctga ggctggggtt atgcatatcg aattacttag aatttgcaac 14220

ctcacagggt acttttatgg cattgaaata cacttcccac agccaccctc cctctaacta 14280

aaagcaagag tcatttctca gttctggtct tgccgcccac cttctcctcc acattttaaa 14340

aaatccaccg gctgcaaagt gaagacacca tatgtgagat cccaccctag tttctgtttt 14400

atcagggttt ggagcaggtg gagcaggcag agggatcatt tcagcctgta cattgtatta 14460

agtattaagc gtgagtgctg agtcattctt caagaaaagt tttatgaagc acccaaaact 14520

gaagggtgga gccacctgga gacagtagcc tcagtcctgg ccctgagcac agcctgcata 14580

ggcccctctg gatcccggcg ggagctgcag agtgtgggca ccttggcaca cagccctgag 14640

tgcaaaatta ggagctgggc agagggcatc tctgtcgcca ttgggaagcc cagggcacac 14700

tggtcatagc cgtagaccac gagcacccta cacccggggg acagatgcaa ccagtgtgcc 14760

ctgggctgcc caatggcaac agagagattg acacctggat cccgtgtcac agggactcca 14820

ctaccaagac tcccgagact gccaccttcc agtgggataa gccctgcctc ctactgggcc 14880

cacaatgtac agagaacact tgggacgacc tggctttctg gatacacaaa tattgatcca 14940

atctgggcta attagaaggt cagtcccagt aaaaaatcaa agtcagctgg gtgtgaggct 15000

cactcctgta atcccagcac tttgaaaggg caaggcaggc agatcatttg aagccagaag 15060

ttcaagacca gcctgggcaa catagcaaaa ccctgtctct actaaaaata caaataatta 15120

ggctgggtgt ggtggctcat gcctataatc ccaacacttt gggaggccga ggcaggtaga 15180

cacctgaggt caggagtttg agaccagcct ggccaacaca gcaaaacccc gtctgtacta 15240

aaaacacaaa aattagccaa gcgtgatggc atgcacctgt aatcctggct accggggagg 15300

ctgagacagg agagaatcat ttgaatccag gaggcagagt tgcagtgagc tgagattgga 15360

ccattacact ccagcctggg tgatacagca agactctgtc tcaaaaaaaa aaaaaaaaaa 15420

aaaaaaaaaa aagctggacc tggtggtgca ctacctgtaa tcccagctat ttggaggctg 15480

aggctcaaga atcacttgaa cccgggaggc agtggttgca gtgagccgag tccagcctgg 15540

gtgacagagt gagtgagact ccatttcaaa aaaataataa atctgagtca ctttaatatt 15600

cttatttgga tgtcaacctc taggtgtttg agacagggga gtgacatggg ggcacggtgt 15660

aacctcacac ttgggaagcc cacatgatgc gatatcaggg tgctgggagg tccccccact 15720

ccctaaatta ctaacaagtg gatagtactt tgcagtttat atgatcttat ttgattcttg 15780

acatgagcct gtgagtgaaa aattccttcc cctcttctac agattaggac attgagattc 15840

agggagcttc agcgggattc aggaagtcaa gtggcacctg gagtcccgcg gctaatttga 15900

ggctggtagg agagtcgaac ccaggacttg tgcttctcac gcctgggttt ctgcttccta 15960

gtgcatggtc ttccccctag ctttcccatt cactgcttta gcctagggct cttacccttt 16020

attaaactgc cagtgcctcc ctgcttttct tgcccaaaga caaaaaagtg tttttgtttc 16080

tgttttgttt ttcatagggc agagacctgg aatttcagct tgagaactta taccatatga 16140

taaataaatc atcaacagat ggctttttcc ttaaaaaaaa aaaaaaaaaa aactctaaga 16200

tgtatatgca gggaggcata atttgtgcca aaaagtgctc accacactgt agtcatgggg 16260

gcaggaggca gccgcaggtg aagggagaaa tctcagagtc caagcagccc ccttctgggc 16320

tgaactgggg agctgggggc actgccagcc ctgccaggtt ctcctaggag gcggcagttc 16380

atatggccgt gggaggaggc agagggagcc tcatgtgtac ccacatttcc agggatccag 16440

aagacagaag gaggaaaact accatcatgt taaagcagac agttaggtaa cacatcctgt 16500

aatacaagtt attttttcca catctaaagg ctaaaaatag ttgctagaat ttaaagataa 16560

ttggtaaatg agtttctatc cttctagttt cacatcaaat ggaatcacgc tgccttcaca 16620

ttactagtgc ccgttatttg tgtttaattt ccacaatgtt gtctaattcc actctttggg 16680

cttccccagg gatccagact ccctcactcg cccgtcgcgg ggaaatgctt tatttatctt 16740

tgtgtcctct gagctgggca tagcacatgg cactgaataa gcactcagta attgattcgt 16800

gaatgaataa atggatgagt gggtgagttc aatatcgact acaaaacccc taaggccaca 16860

tgctagtgag tggctgcgcc tgtagtccca gctgctcggg aatctgaggc aggaggatct 16920

cttgagccca ggagtttgaa accagcctgg gcgatatagc gagaacctat ctcaaatgac 16980

aaaaacaggg ccaggtgcaa tggcttacgc ctggaatccc agcgctttag gagaccgaga 17040

tgggaggatc acttgaggcc aggagttcaa gaccagcctg ggcaacatag ggagaccctg 17100

tcactacaat tttttttttt ttttttaatt agctgggcat ggcggcgtgc acttgtagtt 17160

ccagatactc gggaagctga ggcaggcaga tcacttgagc ccaggaaatt aaggctgcag 17220

cgagccatga tggcaccact gcactgcagc ctgggcgtca gaatgagacc tgttctcaaa 17280

aaacaaacaa acaacaacaa aaaagtacag cctttcttaa agagacttga gaacagaaag 17340

gggaacagat gcataactta tatatttatt tgttcatctt tccaccttcc tggaaggtag 17400

aggggaaccg gtctgcattt ggagttttga gtgctaaaag tgggaatcat gcactgtttg 17460

ccatgatctg ttcaaaagtt aagccaaatg ccttagattc tcctgaaaac tggaatgcca 17520

ctgtaagcta tgagccccac ttcaaagata aaagatcttg atgaacaggg ttgggtctgt 17580

ggactgggcc tctccctgcc aaacaaggaa gggtggtgac cagttgaagg caaatcactt 17640

aaatccttac cgtctcctaa taggtgtggt cccaggtagg gctgtcagaa ttagcaaatt 17700

aaaacatagg gcatctatgt aaattagaat ttcagataac aacaaataat tggcataggc 17760

tgcataatgt cccccaaaga tatcaggtcc taatctccag aacctgtaaa tgtgatctga 17820

tttggaaaag gggtctttgc agatgtggtt aaattaagga ttttgagatg ggggaattat 17880

cctgtattat ctaggcaggt cctaaatgca gtcacactca tccttgtaag aggaaggaag 17940

agggagatgg aaaacacaga agagaagacg atgtggtgat agaggcagag attggagtga 18000

tgtggccaca agccaaggac tgctggcagc caccagcagc cagaaaaggc caggaaccaa 18060

ttttctcttg gacctccaga gggagtgtgg ccctgctgac accttaactt caacctagtg 18120

atccttattt tggactttgg ccttcagaag tgtgagggaa tgaatatctg ttgttttaag 18180

acaccaagtt tatggtcctt tcctacagca gccacaggaa acaaaaacaa taagtatgcc 18240

ccatgcaatg tttgggacac acaccaaaaa tattgcttgt tgttcacctg aaattcaaat 18300

ttaactgggc atcctgtatt ttatttggcc aacctagtcc ccaggcccaa agaaagaggc 18360

ttttgaaatt tgcaagaaag ctggttggag ctgtcagaaa gtggactttg taaacacagt 18420

accactgaac caatttgaac cttactacct ctaggcaaaa gagagggcag tcagacagtt 18480

tttcgtgatt tattctttca acagtcattt gagtgcttac tacaaaacag aagctatgtg 18540

taagggtgga ggtgttagct gttaatcagg acctccaggc taagttactg tattagtcca 18600

ttttcatgct gctgataaag acatacccga gactgggcaa tttacagaag aaagaggttt 18660

aattggactt acagttccat gtgactgggg aagcctcaca tggtagaagg caaggaggag 18720

caagtcacat cttacatgga tggcagcagg caaagagaga gagagcgcac gcttgtgcag 18780

gagaactcct ctttttaaac ccatcagatc tcgttagact tattcactat caagataaca 18840

gcacagaaaa gacctgcccc catgattcag ttacctccca ctgggtccct cccacaacac 18900

gtgggaattc aaggtgagat ttgttaccat gtcagttacc aactgttcca gataaatcac 18960

gtgaaatagc accattaaca gagtgagctc aggtggttct tcagtgcatt tctgatacct 19020

gagccttccc tgggaatttc acagcccatc aggctccccc tacttcgatg gcaggatggc 19080

agggcccagg ttaggcagga ggagatgtta tcacaggcct gaaaggcagg gaggggcaga 19140

tgctacagga aggtgctggc tctggattcc ctggcggagc tttcaaggga agtagatgca 19200

cactgtctcc atcatttcat gtccataaca ctctaaaatg ctttggacaa ggagcaaaag 19260

ttaaagacaa atgtggccca ttttcctgta caaagagggc tgcccccatg ccaggctgtt 19320

ggcatcagtg ggcatgaggc ttttctgctg ccatagtggg ggggttctct cactcaccat 19380

tggctctctg acacctggag agacccccac ccttgggctt ttgtgatgct cacggaatcc 19440

acactgttgg agctttaagg cacctgggtc aactggaaca ggcaggggat actaggacag 19500

cccagcattg ccccaaaata tccgggcctg ataaaagaga aaaacaggta gctcacagga 19560

aacggataaa aaaaggaaga gggatttaac atgaaaaggt gcttgatctc tctcataata 19620

aaaagactgc tgattccatc caggcaagtg acagaaaaaa aaaattttag tttaaaaaga 19680

ttgctgataa aaccacagca agatgctgct gctcagggat ctgagggtgt gggcagccag 19740

gctgccacac atcatgagtg ggagaggaag accacacccc tggaacaaag ggcagctatc 19800

tgtcagatgt cctttgacag caccgcagct tccaagaatt aaccctttcc atgtgagcag 19860

aggcatccat gcgggggaca cactggtgaa tcatctgtta tgcagaagtc tggaaaacat 19920

cagggtggaa ccggcgaaat aagtgtggcc tctgaaggaa tggagcggtc cctctgtgct 19980

gcttcgggtg cccctgagat cctgcgggcc agtgagaaag cagtgaggaa caaggcggat 20040

actgtgcact gtcctctgcg tgcaaggaag gctagtgcat gcgacggagt ccacacagac 20100

acagcctaac tctggaagga agaacaagaa tccagtttca gtggtggcct ctggcgggga 20160

gaaactgggt ggaggaagat gtcatttcca tttttctact attaattttt tattaccatg 20220

cttaaatatt actttttacc tttttttttt ttttttttga gacagggtat ctttctgttg 20280

cccaggcagg aatgcagtgg tgcagcctca acttcctagg ctcaagcaat cctcccacct 20340

cagcctcttg agtagctgag actacaggca cgcatgccac cacacccagc tatttttttt 20400

tttatcgaga tggaggcttt ctgtgttgcc cagggtggtc tcaaactcct ggactcaagc 20460

agtcctcctg cctcggcctc ccaaaggact gggattacaa cgtgagtcat cctgaccagc 20520

caattacttt tttaaaaaga ttaaatgcat gtatatgctc aggcatcagc acacttggaa 20580

aggacgagaa tatctggaag aagggttctt ttaaaaggct cctcaagtga cgctggcagg 20640

cataacgaat gtccctggtc acaaaagctc tgatctggcc taaccctctc atattagaga 20700

ctggaaagag tgtgtgtgtg tgtggtgtgt gcaaagtgtg gaggatgggg gtgagtgtgt 20760

gtggtgtgta agcatgaatg tgtatgtgtg tggtgggggg gtgtgctgtg tgagcatgta 20820

tgtgagtctg tgtgtgtgta gtgtgtgtga gctatatggt gtgtatgtgt gatgtgtgtg 20880

aggtgtgtgt ggtgtgtgtg tatggtgtgt gtgtgatgtg tgtggtgtgt gagcatgtgt 20940

gaatgtgtga ttgtgtatgt ttgagaatat gtggtgtggt gtgatatgtg tgtgtggtgt 21000

gtgagcgtgt gtgtgtgatg tgtctgtatg tggtgtgtgt gagcgtgtgt gttgtgtgtg 21060

tgtggtgggt gtgtgcagta tgtgagtgtg tgtgtgcaat gtgtctgtga acatgtgtgt 21120

gcagtgtgtc tgtgagcatg tgtgagtgag tgtgtgagtg agtatgtata cagcatatat 21180

aaggcatgaa actgaacaca gcacctttag agtgctctcc tggagtcaga gggggtgggc 21240

aggaggagaa gggaggtggg ctagtgtgct gaagtgtcta ctccttgtca tggtttgtga 21300

caacccagat tagcccatga gccaccctgg tccctgcatt tccaatgaga cctcggtggt 21360

catgttctct gaggtgaggc tgactggtgt catttgatga tcttgatacc aaatcctttt 21420

gtatcaaaaa caaccggaac actctgtttt ctcttagtgc tttcacccag atgaccacat 21480

ttcatcctcc cagccactcc gggccaggtg gcactgctgg tttgaaaggg aagcctcccc 21540

tggagtaact tccgtgggcg gattcacacc ctacccacac tcctgtccca gtcggcccac 21600

catggtggtc tctggttcct ccagaattcc cacttttcag ctcatcccca cattcccgga 21660

gggactgaga gcacagcccc caaggccctg ctctttgggg gcagtctcca cacccagaga 21720

agcagcaagg cattcctagg tttctctttc agatgcagaa cttcagtgct cagaggtgtt 21780

cccaccagtc ctcagagggc tcagttctgc tttaatgatc gtgctgttgc gtgggctcag 21840

cagagggcgg gtggcccagt gtggctgagt gcagttttcc tgacatggag tccgagcctg 21900

ccccgctgtt tattaattca ggatcactct ccttgcagaa ccctgaactc cccagaactg 21960

tgaggtggga gaaccccgag aggccacctg gccctgcttc ccacctactg cccacacccc 22020

ctctctgcct tcctgacagt caccccaact cccagtgatc cccatcaatc atctgacaag 22080

gggactgaga gggaagagaa aggaggggcc caaagagaaa ggtaaaagtg ttgggagcag 22140

cccccaaatg tgtgacatcc ttcagcagag ttgcccactt tcccttttct cctccctgca 22200

ggacctccct tctcctcagt cctgcccaac ttctgaggtt acattgagaa aagtccgcag 22260

aggtgccagc atcacaaggt gttaaggacc acgagtttgg cattttaaca gatgccagag 22320

ccacttgaga aatgtggtaa ctaagcccag agaggtacag ttacctcccc agagtcacac 22380

agcaggttca tggcaaagca aaggtgtcct tccccctgca gatccctttc tgtgccccac 22440

atcatcttcc tccagtgtgt gggccacctg gagacaggct ctcacactca cctggccaga 22500

ggtgccatct tgtgggaaag gcttggccag gaagcatcga tatttgagat cccaaaaaat 22560

gaaggcttgg cctgtcagat gacagacttc ggtcatgggg acgcatgatc tgttttacac 22620

acacgtcccc tcagcagcag ccttccagaa cattcccact ttcttctgta atgagaagaa 22680

ctctttccct gcagcctcct gcccatctcc tcctgggaga gccttgcttc agtgtctttg 22740

ataaatcatt ctgttttgca gagtgcgagc tctgcctcgg agggttcgca tccacctgtg 22800

ttgagtaacc aatacgaagg tcgagtggtc acccctcata agagctaggg ttgtctcatg 22860

cctggggact aggacttgcc ctcaaggaaa aaaaaaaatc aaaacaaaag caaaaacaac 22920

aaacatgcct ctctcaaaga aagctctgag tccaggtaaa tttccttcca ctgaagcagc 22980

caggctgaat ttgaattctc tttgcctctg cttaaaaact aatgcaaatt ttcctagaga 23040

atgcccacta attcctggag ggggcacggg cattcctgat gcccatgaga ggaccatttg 23100

ctcttccctc agtgtgctaa ataacagaag cgacatttgt tgctggaaag tatcagtgag 23160

gttaataagg tgtctcctgc ccagggtgag ggagcagttc ccaatgacaa atgctgtgtg 23220

ggaaggggcc ataaaactgc cagccccttt cgtccaccca taatgtggtg aaccctgtgg 23280

atcctggagg atttcagcat ctttttttat ttttattttt attttttaga cggagtctcg 23340

ctctgttgcc caggctggag tgcagtggct ggatctcagc tcattgcaag ctccgcctcc 23400

cgggttcacg ccattctcct gcctcagcct cccgagtagc tgggactaca ggcacccgcc 23460

acctcgcccg gctagttttt tgtatttttt agtagagatg gggtttcacc gtgttagcta 23520

ggatggtctt gatctcctga cctcgtgatc cgcccgtctt ggcctcccaa agtgctgggt 23580

ctcggcctcc caaagtgctg ggattacagg cttgagccac cgtgcccggc ctttttttct 23640

ttttcttttt tgagaaggag tctctctgtt gcccagactt gctctgttgc caggctggag 23700

ggcggaagtg cagtggcacg atctcggttc actgcaaccc ccgcctcctg ggttcaagcg 23760

attctcatgt ctcagcctcc cgagtagcta agattacagg tgcgcaccac catgcctgac 23820

taatttttgt attattagta gaggggtgtt tcattatgtt ggccaggctg gtctcaaact 23880

cctgacctca ggtgatccac ccagctcagc ctcccaaagt gatggaatta caggtatgaa 23940

ccaccacacc cagccagcat ctttcatttt tctgtccact ttggcccttt cctctctcac 24000

tgtcttcctt ttccatttcc aaagtcagtc catctcacta ttagcacaaa aactgctaga 24060

gcgctcgtca ttggtcatct ctccctgcac ctggctggtc tgttcttagg cactgaagtg 24120

tttcccccag ctgttgcttt aatcattttg ttatcatgcc ttacttaaga aatgaacatg 24180

agatgcattt atgtgtctct ttctgccact ctgcagagcc agtaagatgt ggtggaaagg 24240

gcccaggctt tggaggaggg ctggctgggg ttggatcttg gctgctccct actagctgtg 24300

tgaccttggg taagtagctg gacctctctg agcctggttc ggaatcatag cacctctctt 24360

tcagggctgc tgtaaggaat agcagcgatt tgtgtaaagc agagagcaca gctagcacct 24420

ggcccctagc cacactacag agcacttact gtgataagct gccattgtgg tgtgtgaagc 24480

aaaagggaaa tgcctgctgt agtaagcttc ctgtagggca gttcgtagaa ccagagatgg 24540

gtttcaaggt tacaaaggga ctcttagtgt attagtccat tctcacatta ctataaagac 24600

ctacctgaga ctggatcatt tataaagaaa agaggtttaa ttggctcaca ctggctgggc 24660

acggtggctt acgcctgtaa tcccaacatt ttgggagacc aaggccggcg gatctcttga 24720

gatcaggaat ttgagaccag cctggccaac atggtgaaac tctgtctctt ctaaaataaa 24780

atacaaaaat tatctgggca tggtggtgtg tgcctggaat cccagctact tgggaggctg 24840

aggtgggaga actgcttgag cccaggaggc ggaagttgca atgagccaag atcgccccac 24900

tgcactccag cctgggcagc cgactgagac tccgtctcga aaaaaagaaa agtaaaagaa 24960

ctgcaagaaa taaattgttg tttgtgagcc atatggtctg tggtacctcg ttgtggtact 25020

gggagtcttt tgtctccctg accctgcctg ttgctgcagc accgctcagc cctgcctgct 25080

ccctaccttc ctccccttgg cctctcctgc ctccactggg cccctggtgc ctcctctaga 25140

gacagtcctc ctgggaccag ttgtgttctc atttacacga ggcatccagg actacagaga 25200

accagaggaa ggggcgcccg cccgccctcc tccctggcat cctcacgctg cagaggtcag 25260

agcctcatcc cggcccctta cctgccccta ccctgcagag aactgtggtc agttcctgag 25320

gccagatcca tgaacggcct tgtggaagat ggtgagctca cacccagagc tggctccgat 25380

gaccctttct cctttacatg tttctacctt cccctcgtta ccttccccca ctgccaggca 25440

cagagtggag gcaggttggg tttaaagctc agaagggctt aaagggggtg gggcgcagtg 25500

gctcatgcct gtaatcccag cactttggga ggccaaggca gaggatcact tgagcccagc 25560

agttcgagac cagcctgggc aacatagtga gaccgcgtct ctacaaaaaa taaaataaat 25620

aaaattagct tggcatggtg gcatgcacct gcagtccctg ctactcagaa ggctgaggtg 25680

ggaggatcac ttgtgcccag gagtttgagg ctgcagtggg ctgtgctggc accacagcac 25740

tccagcctga gtaacagaat gagatcctgt ctcaaaacaa acaaacaaaa aaagaaggct 25800

taaaggggac tccaggtggg cctggcagca caaagctatg aaggtctgtc ttagacacaa 25860

gctctgttac taggcctttg cacgctggcc tgggtacctg gctgccatag acagggaacc 25920

ttccagatga gctgtaggcg tggagcacag gagccagggt gctcttcctg ggctgtgtcc 25980

acaggcagta tgtacaccgg ctttgtacac gtccagcggg tccagtgcat atttttgttt 26040

gtgtttttct tttgtttcgg ggggtggatt tggttttccc ctgagtcctc tgtcctcctg 26100

tcacctggct ggtgctcggc aatgttgacc agctgcctgg ctggagttgg cagtggctga 26160

ggctgtgagc taacatgttc ctgagtcctc ccatttcttc accataatgc cctgttgagt 26220

ttgcagatac tgtctctgtt tttatctccc agggaaactg aggttcagag tggctaggcc 26280

accttcccac agtccctcag ctcatgaggg ccacacaggg cattgaggtg gcctcctcct 26340

cagccttgac tctctggccc catctttgct gcctcaaggg gtctcctctc ctgaactgtg 26400

caccttctgc ctggcagctc caactctatg gctgttttca gtggctcagc actgcccctt 26460

gaccttccct ggccctctgc agatgccagg ctggagcact ctggcaaggt ctggggtggt 26520

tacatgggtc ctgtcacttc tatacacctc ccagtgcctg ggaatcctgc agatacgccc 26580

tccttagcca tccctaacac atagaggaca tttctgaggt ccctgagaga gtggggcacc 26640

tctgcaggat ccaactgccg ggcccaggaa ggatagcagc agcgtgaggg gttccattag 26700

ccacaaactc atggcatgga gcctccaccc acctcgcccc tcatctgctg tttagcacct 26760

ggcacgctgt gtatacttac taattattat ataataatag caaattatag tggcaaatgt 26820

atgcatcttt gcacagttgt tatacagcac gatgagcaag tcattaatag taaggaataa 26880

atgtgaaggt gagaaaaatc tgactgccaa agtttttact ccttccttcc ctccccagac 26940

ttttaaatga aagttcaggg ataatccctt agttgtcctg gtagtaggac tcgtaattaa 27000

aataattggg ccaagaaccc ttctgtgctt ctccttttag gtttgggtgt aaattcgggg 27060

tgtttctcac tggcgaaagc ctggtgcagg acagaccctg ggaagctttc tcttccagaa 27120

aggaccatca acatcccttg cagaagaatt ctcttctcca gactcagacc cggtgtcctg 27180

gcacccactg ggcaagtggg tcctagaaga caaacctggt cagagctgga ggctgcttag 27240

cattccccat gcacactagc agctcggaga gctcaggaag ccgcagcccc tccttgcctc 27300

accagcctgg gtcaggacag cgtcccctgg aggatgcaca gggcctggcc tctggtcacc 27360

cagcctggag ggaaagctca atcgagcatc atgtcacccg gtgcccccat gcagggtggc 27420

actggtgaga cccccaagcc aatgatacta cctcacagga gtgcgggccc agtgtggcca 27480

gatcaccttg acttttcaag ataaatcaga aatcgtattt ctgtgagata tccctatttt 27540

ccagtgatgg tgactaaatt agaagttgtt gaattttgta acatgctcct aggctgtttg 27600

tctggtttaa actctatctg gaggaattca agctagactt caggaataac ttcttgaggc 27660

aagggttttg agaccttagg gaaacaggga cgtctcgggg gtattctgac tgttgtcctc 27720

ctggaaggga agaacaggga actagaagat tgcccttagt gaagtccaaa gcacctaaac 27780

ccgggaccct cagcggtgtt cttaagtcac agattctccc tgaggcctct ctctggctcc 27840

atagaatggc tgattctgta actctgtgag tctttttttt ttggagacag agtcttgcac 27900

tgtcacccag gctggagtgc agtggagctg gagtgccata gagcaatctt ggctcactgc 27960

aacctctgtc tcccaggttc aagcaactct cctacctcag cctcccaagt agctgggatt 28020

gcaagcatgc accaccacat ctggctaatt tttgtgtttt tagtactgat ggcccaaagt 28080

gctaggatta caggcatgag ccaccgtgtc cagccataac tcttgttatg taactcttgt 28140

tacaaaggcc ttatattttg ctctttgagg ttggttttag tttgatgcct gttggttgcc 28200

atcttttaac tagggatgtt ttatcaaagt acccaaccaa agtatctaaa caaattatac 28260

tttaaagttt gaaaatgtcc agcatgtcta attgaatgcc tgttgtgcca ggcactgggc 28320

tgctgaggaa ctgagtccca tccctggagg ctagctagag aacacacaca cacacacaca 28380

gtggtctcac aagtcagttt tatattctac ctctatgcaa taagggtatt attatgttga 28440

ggtactttga cataaaaagt ttttcttaaa ggagaggatg cctagaacag gcattacctg 28500

aagcctcctc tctccagcat tggttgtctt ctgtcacgac tcagggtttt tcattgagaa 28560

tgggatggaa atgtggtcta aatatagggc ccatgttggg actggatccc ctctgggaag 28620

tcagaccagg ctagggcagg tccctagagt catcaggaaa agcctctgga gccagaaaca 28680

aaacaaaaca aaaaaatgat gttaactaaa ctcagtccca aatcctgaat tggagtcagg 28740

tcaagcaaaa taatcaaagg agtcagcaaa gggcaagtca gagagaccaa gtgacaccag 28800

cgtcttccca ggagccctgt ggcgagtgac agagcctgga ctctggaata ggactcatct 28860

tgtgtctcct gccactcatt agctgggtga ccttgagcca agccccttaa cctgttggac 28920

cccatgttct tacctctaag tgggggctgg taatatcttc cccttcaagg aatgccctct 28980

aaggggtgtt gtgaagatca ggtaaggtgg caggggtggg acttctggcc aggaacagac 29040

gcataatcaa tgctaaatct ctcctcctct ccacctgctg gatgctgcag atcctaaaga 29100

tttcaatgtg aataagacaa aacccctgcc ctccaggagc ctttgagaat cagagaacta 29160

gacccattta cagaacaaag ggatgcagag tctggatgaa gttttgggga ttcatagagc 29220

agagggctac ccagccccag tctggacatc gctaggtcaa ctgtagcccc tcagtggctg 29280

atttagccca gaggatccca tagggttgac tcctaactca agggcatgag acaaccccca 29340

ggaaaggcac cgtggaaagg gtctggctgt ccctgattta cctgtgggca ctgggggaat 29400

gccctcaggg ctctgtgtgg ttctgggttc ctccagtaaa aagtaatcaa attctttcac 29460

gttaatgtct ttctccacct cattgcacat catgcagcta ttcattgact cagcaactat 29520

cagctttgca tgcaaccttg gcctacccgc tttagctttt agtaatagct cccctcttga 29580

gtaacacaaa ccagtgggga aacagaacct aactcttacc tctgggaggg ttatttgctt 29640

tgagaacatc tgtcctgcag tttcgctcat atggcagtga agttttgtgc acacactcta 29700

gagccaggga gcctgggttc aaaccccagc tctgccaggt cctaactgca tgaatttggg 29760

caagtcactc aacctctcca tgcttgagtt tcctcatctg taagattgga gcagtggtaa 29820

tacctgcttc ttagggttca gaagagaatt aaatgaatta agatgggtaa agtgcttaga 29880

atggagcgtt gcaagtagta agtgctatgt aagtgtttga tttaaaatga aagaccctta 29940

aatacattct ttgtgcattt cagaagccct tcattttgca tttctttttt tttttttttt 30000

tttttttttg agatggggtc ttgctctatc acccaggctg gagtgcagtg gcacgatctc 30060

agctcactgc aggtttcacc tcccgggttt acgctattct cctgcctcag cctcccgagt 30120

agctgggact ataggcaccc gccaccacgc ctggctaatt tttttgtatt ttcagtagag 30180

atggggtttc accgtgttag ccaggatagt ctcgatctcc tgacctcgtg atcctcccgt 30240

ctcagcctcc caaagtgctg ggattacaga catgagccac tgcgcccggc ctcattttgc 30300

atttcacaac caagctgtct cccctggaat ccagccataa ctctgctcac aagtgtgaga 30360

caggccccag cagagctgca cgaagaggag agaaggcagc cccccaggtc cccaactccc 30420

tgtccaagat ggcaaaacca gaacacagcc tcctccctac cccagcagga gttcagaatc 30480

tgcaatctcc aaaacccact tcaattttaa gtgtagagcc aggtgcgctt ttaagtcacc 30540

tgtcactctg gaggctcttt tgctcagttc ctcaccatta gcagggatga cagggagtgc 30600

aggagtacag ttggctccca gatattggag cgtgctgggc cagctgcccg ttctcccagc 30660

ctccactcct ctttgctgtc cagccatcac ttgctccttg aaggctaacg aaacaaaaaa 30720

cagtgccaag agcgtgggaa gaaagccagc ttctcccctg gggtagctgt gatatcatgc 30780

ccaccctccc tgaccacgca gcccctgggg accctcaggg ccccaagcac ccatttccat 30840

tgcacatgta cacccgtgtg cagccatggc cgcccatctc agtcaatagg gctgctcctg 30900

cccacttgga attgcggtga caaccaagag tggcttatgg gaactatccc aatgacctga 30960

cagcatgtcc gctgcaaacc gctgacgggg gacactgccc tcatctctag ctcatcagcg 31020

agaggcacag ttgctttctt aggtaacatt gctgctgtct ctgggcattg ctgggggttg 31080

gcacttaatc tacaccgaat ttttccctcc tgtatcttcc gagctgcttg gatcttggtg 31140

ctgaattaga ttggacttta tcttgtgggg aagggaggac tataaacccc caacgtaagc 31200

aatggtcaga ctattctaag gaaacttgcc aaatttaaca tgaggtaaat ttagttctga 31260

cttctgtcca ccccactgct actgtccctt tttatcccat gatcccttgc ttttcttttc 31320

cttctctctc cctatctctt gggttcaaca catgatagga attcagaaat atatgtttgc 31380

gaatttgttt attcacgtag caaaccattt cttgagtgcc taccatgggc caggtagaat 31440

gggcagcccc gggatacagt ggtctctaca gcccctctcc tgggtttgta ctgtgcgaga 31500

tgatttagga tgggttctcc catcaaggac cacagtcttc tttctctgtg ccccttggtc 31560

ctcagtctct gaccccactt caaaggcagc attcactcag ggaagctccc atacggtgct 31620

agtcagagta aaagtttgga caaattgcca ggaagcagct tgtcagtatg cataaacagc 31680

cttaaaaata ttactactct ttgacccaga atttcacttc taggaatctg tcctaaggaa 31740

atagtcacat gcaaaagatt tatataccag gatgttcatc aaagtgttgt ttataacagg 31800

aagtctcaga agctggttaa atatccaacc tctggaaatg gttatgcaga atagtatgta 31860

gctattagaa atttatgtct atggggttta aaatgtcatg ggaaaacact tctgacataa 31920

aagagcatga taattatata tttaacataa tcttaactat gttttagaat gtacaggaag 31980

aaagaaatgt acaaacatat tcattgtgat gtctctggtg gtaggattat gatcagtaag 32040

tgcttctgtc ttcatatttt cctgtgtttg ataatacatg catatgttgt ttataaaata 32100

agaaaaattt taagtttaaa attggagttg aaaagtcttt ttaggctggg cgaggtggct 32160

cacacctgta acaccagcac tttgggaggc tgaggtggtc agatcacttg agcccaggag 32220

tttgagacca gcctggctga catggtgaaa ccccatctct actaaaaatt taaaaattag 32280

ccatgtgtgg tggcgcacac ctgtaatccc agctacttgg gaggcagagg catgagaatt 32340

gcttgaaccc aggaggtgga ggttgcagtg agccaagatc gtgccactgc actccagtct 32400

gggcaacaga gtaagacttt atgtcaaaaa aaaaaaaaaa aaagacaagt ctttttaaac 32460

agtagcagcc ataactaaat ataatccata ctaagccctg gatcaaattt ttatttatgt 32520

atttatttta ttcatttatt atttttagac agggtctcac tctgttgcct gggctggagt 32580

acagtggcat gatcatggct catttcagac ttgacctcct gggctcaagc gatcctcaca 32640

tcttagcctg ccaagtacat gggaccacag gtgcatgcca ccacacctgg ctaatttatt 32700

ttattttatt tttttagaga tggtgtttac tatgttgccc aggctggtct caaactcctg 32760

ggctcaagct atcctcccac ctcggcctcc caaagtgctg gggttaccag catgagccac 32820

tgtacccagc cctcaaattt taaaaaatct ataagggaca ttattggaca attagagaaa 32880

ttcgcatatg gacttataat agtatcagag tgtgtggtat gatggttctg gagggaatgg 32940

actttttctt taaagatagg cttttctatg cccacccttt taccttgcta acttatcatc 33000

atccaggttc cagcagaaac attacttcct ccaagaaagt tcttaagggt gcagtatctg 33060

cagcaaattc tcaaatagct caggaaaaaa gtatgtgtgt ggtatacaca cacacacata 33120

tatatacaca tacatacata tattttatgt aattatatat gcagagagtg caaatgttgc 33180

caagttgaag attggtgaat ctaggtgaag agaatatggt atttattgta ttatctgtgc 33240

aacttttctt aggtttgaaa attttcaaaa caaaaaattg gaggaagaag acgtgccagt 33300

ctaccccaag ccctccactg gaatgctgga aatctaaaca atggcaattt catttctttt 33360

ctgttgtggg ccagtagtcc ttagatgttg gggaagcggg tagttgctgg ggtgtggttg 33420

acttaggatg gaagaagcag aagtcaagac tcccagggtc aaggtgcttt gctcttctga 33480

cccaagtgtg ggaggcccag agtcagcgtt tcaagtgtgc taattcagca tggttctgtt 33540

cacggccaaa gtccaccctg ggcacctctc tggcagcaat cttgggtgac tctactaagg 33600

tcaggcctcc ctgaccctat gtctggatcc catacctcca actctcccac tgtctcagga 33660

acagtgctta gcttttcttt tccctctcct gtcttccttg ccagcatcta gaaagtttaa 33720

ataattcccc tctttacaac aaaacaaaac ataccccctt cagtaaccca ccctagctct 33780

cttctccttt tcctagccag atttttttaa aagcatcctc agcactttgg caacctccat 33840

ctcctcccag catgccctat tactggaatc cagccaggac tcagccccaa tctttctact 33900

ctaaccactt gtctcagtta acaaggacag gtttatgctg cagtgacaaa caagacccaa 33960

attcctatgg cttcacacat ctggcactac ctcatcttcc agccttagga gtcatctttt 34020

agttccttga aaactctctg cagtttcctc ttggggcctt gtcatatgct attcccctgg 34080

aaatgttctt tcctatcccc tccctttcac cttgctaact tgtgcccatc cttcaggtct 34140

cagcaaaaac atcactttct tggggaagtt ttctccaata cccacactac acaggtgccc 34200

cattgacact cctatgactt tgtggcactt gtctcacttg atttcccact gccttcccca 34260

caagacacct ttacaagggc aaggaccgta ccactgtacc tatttcactc actgctgtgg 34320

tcacctgcac tctggctgcc taccttaact acacattaga atcacctgag gagcttttaa 34380

agccacaatg taagactcca ccctaggcca attggatcca aatccctggg gtagggccag 34440

ccatcagtgg agatatatat atatatatat atttttgaga cagagtttag ctgggactac 34500

aggtgctcac caccacaccc agctaatttt tttgtgtttt tagtagagat ggggtttcac 34560

cgtaagcaag gatggtcttg atctccttac ctcatgatct acctgcctca gcctcccaaa 34620

gtgctggaat tacaggcgtg agccaccatg cctggccatc agtggatata tttttaatgt 34680

actgcaggga attctgttgc atcagcttga gaaccactga tctgccttgt gcttcacatt 34740

taaaactttt tttctaatga ataaataaac ccctgaaaaa attaatctcc ctaagcctcc 34800

ctagaagata ggatggtaag gatattttcc taggtaaaaa tatgttaatt tcatatttca 34860

tgaaatttca tgtttcattt caatcaagct ctgtcataca ccttacatgg ggcaggccca 34920

gtgcctgagc agggtgtaat tattcaggca aggaaaagtc acattaggtg atggagcaca 34980

aataggcagt taatggtttc agggttagtt agaatatgtt tgtctttcaa ttgcaagtaa 35040

tagaagccca aagaaattgg ttattcatat aatataattg attggttccc aaatttgaaa 35100

aattcaggaa tagacccagc ttaggtacag ctggatccag tcactcaaat aatgtcacaa 35160

tgaacccttt gacaggaatg taccgtgtct tgactctact ttgctctgag tagtctttgc 35220

ccaggtgatg ataaaaatgg ccatcatcat caggcttgtg tcctgtttac taggaatata 35280

caagaagagc tcagtaaatg ctggccccac cactaagcaa aaacaaaacc tttggggttg 35340

ttgttgttat tgttgtttta aatcacagct tagaccttcc ttctttcctt gttattctct 35400

ttcatctgta atccagtttt ctaattctga agtatagaat gttcagatca tttattcttc 35460

attacccaca acttgcacat gtttatttaa aatgccagga ttgcctggcc attgtgtgct 35520

gttaaccttt gtttgctgtt agtggatccc tgaagttcag gctcccaggg gagcagataa 35580

tgggtgtcta gttcctgcag tatctaccct ctggcaagcc aagttacttc ctgggtaagg 35640

ttttgcctac cctgcattcc cagggaagtt tctgggcctg accaccaagc cagctctgag 35700

gagaggtgca taagccccac catgctttgg ttctgtccct atagaatatt ttatgttgtt 35760

atcgaaaact aaaggaagat gggtgctgtg gctcaagcct gtaatcccag cactttggga 35820

ggccaagaca ggtggccagg agttcaagac cagcctggcc aacatggtga aaccctgtct 35880

ctacaaaaac aaaacaaaaa ttagccaggt atggtggtgt gcacctgtgg taccagctac 35940

tcaagaggct gaggcacaag aatctcttga acctgggagg tggagtttgc agcgagccga 36000

gatcgcacta ctgcattcca acctgggtaa cagagtgaga ctctgtctcc aaaaaaagaa 36060

aaagaaaagg aaaactaaag gaaagggact aaaatgatat caggttcctg gagaacaaac 36120

agacatgatt ttgcttcatg gcaggacagc tggaagaggt gggattatat cctcacatta 36180

caaataagga aactgagact cagaatggtt aagtcacttg tcccaggcaa cacagccagt 36240

aaattacaga aacagaattt gaacccaaat cttccagctc caaagattgt gttttcacta 36300

cctcctgctt aattttttaa tttctaagat tagaccctac ttcatctatc catgatgcct 36360

acctgtcatc cccccaaaaa gggtgaacgc tgttcagaaa tttttctagc ctgagctcac 36420

tcccaattca cttatttttg ctttgtcacg gctgcccagt ccccactggt agaccaggaa 36480

gtaggtcatg gctgcgggga ccacacgctg tcgctgctgc aagggctggc ctctgtttct 36540

ggggctgagt gggggtcaga cctgccagga gcaccacctt ctgtgggtcc tgcctggatg 36600

tcacatccca gccccaagaa gtcactgcaa acctttgtat tgttgagctt cacatcctag 36660

aattcactgt cactgtggct gctgcatgaa gtggtcctgg gagaaatggg cattggcatt 36720

aacagggaaa ttgatggtct ggggaaaaag tcatcctcat tctattgcag atctatgagt 36780

gattgagact ggctgatgtt gaaggggttt ctcagccatg atgtgccaca ttatggaaca 36840

gtggtgtagg cagccatttg acacccagcg ctgacctttg tttaacaacc tcacctatat 36900

atgacaaaat agttgtcaga aataatcatg taatgaaatg actgtaataa tggccagaaa 36960

agaaatgcag ataataaaat gtttctctta ttgaactctg tacatataat tgcaccagga 37020

tttttttcaa ataaaaagta aatatactac aaaaaaggaa aaaagcacaa gtatttatta 37080

aatagctttt ctatatcttt ctgagcttca atcctttgat tgcagactga tgtaatattt 37140

tatgtaaatc attgtttggt tactaagtga actttaagaa aagtaagatg tctgcaaaag 37200

ttgcccataa tttagtaact actgtattgt accattgatg tacagcttta ttttcttgat 37260

taattcttta aacaatataa ttcacaattt taaaataata aatttccact taaaatggta 37320

tttaaactca gcaaaatata taatctatga gtaaactttg tattactaag caaaaatatt 37380

acactttgtg gttcacatgc tgtctcactg ttttaaattt taaatacaaa aactccaagt 37440

aggctgggtg tggtggctca cacctgtaat cccagtattt tgggaggctg aggcaggtgt 37500

atcacttgag ttcaggaatt cgagatttgc ctgggcaaca tgatgagatc ccgtctctac 37560

tgaaaataat tagctgggtg tggtagtgca catctgcggt cccagctact caggaggctg 37620

agatggggac agaggttgca gtgagccaag atcgcaccac cgtactccag cctgggtgac 37680

agactgagac cctgtctcaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa agaaacaaaa attccaagtg 37740

gttgcacaga atgacaggac tgaagtaact tagctccagt ttctgtcttt ataatcactg 37800

tcctaccatt gtctgtgctt agaatctact tgcttaatgc aggaacatgt gttctcacag 37860

aggtggaaga tgcaaatggc acccgaagca ggctggaaat tctgaaccat taagaattta 37920

ctctctacca ggcacggtgg ctcacgcctg taatcccagg actttgggaa gatgaggcag 37980

gcagatcatc tgaggtcagg agttcaagac cagcctggcc aacatggtga aatcccgtct 38040

ctacaaaaat acaaaaatta gccagacatg atggtgggtg cctataatcc cagctactcg 38100

ggagactgag gtgggagaat cgcttgaacc tgagatgcag aggttgcagt gatctgagat 38160

caatctgcac cattgcactc cagcctggga gacagagtaa gacccatctc aaaacaaaga 38220

aacagaacct actctcaaaa caaatacgtg tggctgactc cacatatggt agggccaact 38280

gtataactag aagttctcca aataacttct gtggagaaaa caaagtttat taaaggatac 38340

tttttttttt taatttattt attattatta tactttaagt tgtagggtac atgtgcataa 38400

cgtgcaggtt tgttacatat gtatacttgt gccatgttgg tgtgctgcac ccatcaactc 38460

gtcatttaca tcaggtataa ctcccaatgc aatccttccc ccctcccccc tccccatgat 38520

aggcccctgt gtgtgatgtt ccccttcctg agtccaagtg atctcattgt tcagttccca 38580

cctatgagtg agaacatgca gtgtttggtt ttctgttctt gtgatagttt gctaagaatg 38640

atggtttcca gctgtatcca tgtccctaca aaggacacaa actcatcctt tttgatggct 38700

gcatagtatt ccatggtgta tatgtgccac attttcttaa tccaatctgt cactgatgga 38760

catttgggtt gattccaagt ctttgctatt gtgaatagtg ctgcaataaa catacgtgtg 38820

catgtgtctt tatagcagca taatttataa tcctttgggt atatacccag taatgggatg 38880

gctgggtcgt atggtacatc tagttctaga tccttgagga atcgccatac tgttttccat 38940

aatggttgaa ctagtttaca atcccaccaa cagtgtaaaa gtgttcctat ttctccacat 39000

cctctccagc acctgttgtt tcctgatttt ttaatgattg ccattctaac tggtgtgaga 39060

tggtatctca ttgtggtttt gatttgcatt tctctgatgg ccagtgatga tgagcatttt 39120

ttcatgtgtc tgttggctgt atgaatgtct tcttttgaga aatgtctgtt catatccttt 39180

gcccactttt tgatggggtt gtttgttttt taaaggatac ttttttaaag tgctatctgt 39240

aactttacat atatattact aacactcaga gatcgcacca attgtttata acttagacca 39300

gggccgggca cagtggctca tgcctataat cccaacactt tgggaggctg aggcaggtgg 39360

atcacctgat gtcaggaatt caaaaccagc ctaatctgca tgatgaaacc ccatctctac 39420

taaaaataca aaaattagcc aggcatggtg gtacacacct gtaatcccag ctgctgggga 39480

gggtgaggca ggagaatctc ctgaacccaa gaggcgaaga ttacagtggg ccgagattgc 39540

gccattgcac tccagcccaa gcaacaagag tgaaactctg tctcaaaaaa aaaaaaaaaa 39600

aaaaatctta gaccaggaaa atttttttta agggaggagt attttatcac tggcattgtt 39660

taggattgct ggcacatgat gctaataaaa agcagactat tagttggttt tattactgtt 39720

tttgaacttt tttttttttt tttttttttt ttgagaaaga gtctcactct gttgcccagg 39780

ctggagcaca gtgactacga tctcagctcg ctacagcctc cgcctcctca gttcaagtga 39840

ttcttgtgcc tcagtctccc gagttgctgg gattacaggg caccacgcca ggctaagttt 39900

ttgtattttt agtagagaca gggtttcgtc atattaccca ggctggtctc aaactcctgg 39960

cctcaagcga tctgcccacc ttgacctccc aaagtgttgg gattacaggc atgagccacc 40020

atgcccggcc ctgtttttga actctctaga gacagtccag ccctttatta cttctcctga 40080

ggcagctgct cccttcacct gggcccccgc attgtgttcc ggacccttgt cctggtggtg 40140

ctgaagaata tctctgtcaa tccttttggg actggggaaa ctgaggccca gtgccacgcg 40200

atgccatttg ttcagggaac attaggtcac ctgctaggtc cccagtcact tgaccttctt 40260

cccagacagg aagaagctgc tctgggtctg agtcctgact ctctcagtgt cccatgtgtc 40320

tttgcacatt gaaatgtttt ctgatggttt tttgctgtta tatttacttt taaaaaataa 40380

ccagcaataa aatgttaggt ttgagaaggt tgaaatgaga attgatttga gttaaactct 40440

agcagatttt tcttagaaga atgatatcat ctccagccac ctgcaattga tctactctga 40500

attaagaaag aggcttccat atgttgttta tattttgcac tcttgatatg tttctttaaa 40560

ttatggtctt gggccaggta tagtagctca cgcctgtaat cccagcacct tgggagtctg 40620

aggagggagg atcacttgag gccaggagtt cgagacctcg tctctacagt acattttaaa 40680

aattagccag gcatggtagc attcacctgt agttctagct acttgggagg ctgaggtggg 40740

aggatggctt gagccagaac tttgaggcta cagtgagtta ttgtcatgcc actgccctcc 40800

agcctcagtg acagagtgag acctgcctca aaaaaaataa gtaaaaaata aattaaattt 40860

caatcattag cagtcatcag gatatttaaa tacatttgtt gaatcaaagt tatgcatgtg 40920

tgtatttttt tttccagaga gttgtttata atgtggattt taatttaact ttaaaaaaat 40980

tttggctgga ctgttgccca aatggtatca ccagccattt ggttgagaac atatgtcctg 41040

caggctcttc tgtcactgga gttttgctag ctgacagcca ctggctagag actgtggtca 41100

gcacagaagc aggcgtggac ttgcgcacgt aagcaggtca atgcaaagcc atcacttctt 41160

aaaaattctg aaccctgctg tctgagatgg tggtgcagcc aatggagctc tgctctagga 41220

agcagaagct aattccatgt ctttgtttgc ccttgactag ctaggtgact ttgcacaccg 41280

ggcttgcctc tcttgttacc ttgtctgcaa agtggaatca tcttttcctt gctggacaga 41340

aggtggaccc tggacctatg ggctttttga gtttttctcc ctcttagaag gacctctgat 41400

cctactgagt ttaacaccca tgggttaata attgggaaaa gcaaaggaag cgcttctgtt 41460

tagataatta tatgcatgtt tttgtctttt tctggctgga aagatgtcca agctactggg 41520

aaggtctgtg cctacccagg gtagccctct ctggggaggg ctgctgtatc caagatcccc 41580

tcaccggaat ttgaaaatca accatagtag ggcctgctga cttttgacag ctaatggtgt 41640

gctgagaatt gtccctccaa agacaccttt ccattccctc gggagagtct gggcagcccc 41700

tcctgggggc tgggatgctg gctcttccct cagcctccac cccaactgct ctcttccctc 41760

cttccctccc cagctcccta atttctctca caaggctttg ttccacagca acctttccta 41820

atgcagtcct ggccagggcc tcttcgcagc ctcattacat aaccttccac agactcctgg 41880

tccaaggatc accccagaaa gccagtcaga ggtaggcacg cagctggggt ccatttactt 41940

accttcccca ccccctcgga actcagaagt ggtgcaggaa tttggactcc aagaattaac 42000

agctccacca ctgtcaccag agccaaaact tcaggatgca tgctctacgt ctgctgctaa 42060

tttccagctg agagccagtg gcactgtggt tccttaggag ccggttccct gatgccggct 42120

cctggcccca aatccctctg atccgggctc ctccagaatg tcttgtctcc accatcccct 42180

ttgaccaatg gtgtctttgc ctggtaatgt cccctttgcc tgatgatggc cctgtcactc 42240

ctctgtctag cacagaggag gccgtttcat cccttcaagc ctgccctccc ttcaagtctt 42300

agctcaagtt caccttcttc acagagcctt ctccaatctt cttggctacg tctccgctca 42360

gctccagcaa cctctgtctc tggcactgat tccttactta gctcagagag tcacagacac 42420

ttgaggctca ggacaatctg ctttctctct tcttacccat agctttggac catgtgtatc 42480

tctttgtctc cactcccaaa cccaaccccc agagggcaga gagcatgttg tctgtccctt 42540

tgctcagcat gaagccctgt gtgtggtagg taggcagagt tgcataactc gtgttgacca 42600

aggggtcact ttgctctgaa attacccctg tgtccttcag tatttgcata gatagcttcc 42660

tggccagccc gaatatatcc aagggcatgg cccacctctg ctcctgtttc taggtccctg 42720

gtggagttag ttcatgcctt cctcataatc tgcccactgg cctggtcctc aaggtcttcc 42780

cagctgctca gctagagctg ggaaaatggg tcgctccatc ctgtttatgt cattctctcc 42840

ctgcctggcc cactctcctg cccacaggta tcctgggact gtctgtagga ttagaggaca 42900

tatgtgcaca tgcttgggca caggacactc acgcagcctc caagcacagc atcaataatg 42960

cattcggtgc attatagcgt ggaaagctgc tctaaacttt attacacagc ggacatgtct 43020

gaagcagctc ccaaatccac ccatgagtgt tttgcaattg gcaagcctat tacttgggag 43080

tccacttttc tctgttcatt aataatagat gcttcctatg gccccagctt ggcaattttg 43140

atttaaagtg atcttaactg aagagactaa tggatgggtc tgaatttgtg ccttttaagc 43200

acaaagtatt gctcttaatt aactggattc tatcctttaa gcaggcagag gctttccccc 43260

aatggcatca ttaatgaacc acatctggac atcttccaaa gccttcttct gtttcaggcc 43320

aatcacaggt gtgttcctga acacccagga ggctgtaaga gccacatatg cctcccaaat 43380

acacacaaca tgtgtgcctg gggacacaga gcagtgtgcg aagtcccatt ccatctctct 43440

ccacttggga gaggatggtt cttccatcta attcatggct caaagtggta aaggagctcc 43500

cccctcccca tgccatgccc actcagagtc tgcaaatatg tatgtgatat aagagctcgt 43560

cagttagctg tcatcagtgt ggcacacatt tgaggagtct gactcccctc cagcacaggc 43620

caatgtgcac tgcactcctt tctttgtgcc tccaccgttg cattgtgcag aagttggggt 43680

catagaagta ccagagctgt gaaaggagag gccccttctc acctctgccc tggtctccat 43740

ccccactttc tctaggaagc tggtaggtgc tgacatggga gagaagggag gggagggggc 43800

caggaacagt ggcttatgcc tgcaatccta gcactttggg aggctgaggc aggaggatca 43860

cttgaggcca ggagtttgag accaggctgg gcaatgtagc aagaccctat ctctacaaaa 43920

agaaaaaatg taattagctg ggtgtggtgg tgggcaccgg tagtcctagc tactcgggag 43980

gatgaggtgg gaggattgat tgagcccagg agtttgaggt tacagtgagc tgtgattgca 44040

ccactgcact ccagcctggg caacagagct gagaccctat ctctaaaaaa aaagaaagaa 44100

agaaagacaa gacaaagaaa gaaagaaaga aagagagaga ggaaagaaag gaaaggaaag 44160

aaagaaaaaa aagagagaga gagagagaag ggaagggaaa gcccagaaga gtagaaggtg 44220

tggggagagg aggtggccgt cattctgggg ccctcagtgt gcactaccag ataacgcatt 44280

ctctgtgggc ttttgcacca ttttgcttga gcataaagaa aggaaggctg cccctaaata 44340

gaaagcactc tggaggcaaa gaaatctggc tccaatcctg gccctgccac tttcccagct 44400

gaggacttag acaagcaccc ttggacattc tcagagccat cagctgcaag tgggtgctgc 44460

catacccacc tcattgggca ggcttggggg accaagggtg gtaaatggct cggggtcttg 44520

catgatgcgg ccacacagca ggtgtgccat ccagatccat ttatttcctt cctttcccca 44580

aaatcaagtt gtcattaaag tgctagtcca cattaatgaa atctgtagac accaactgta 44640

ttagttttct gtttgctgct gtaacaaatc atcagaaatt tagtggctta aaccaacacg 44700

attgtattac tttacagttc tggaggccag aaaccctcca taggtgtccc tgggctgaaa 44760

tcaaggtgtt ggcaaggttg tggtcctttc tggagggtca agggaagagt ccattttctt 44820

cctttttcca gcttctaaag gtttcatgca ttccttggct catgatcttc tatagctata 44880

gaggaaaaaa aatttacatc aatcatcttc aaagccagcc atggcgggat aagtccttct 44940

cacatcacct tgctctgaca ccagctctcc gcctccctct tccacacgtc aggaccctcg 45000

tgattacttt gggctcactc tgataatctg ggatgatctc tctgtttgga agtcagctga 45060

cccagaacct taattccatc tacaacccca attcctcttt gccatgtata gtaacatatt 45120

cacaggttct ggggattagg acgagcctgt ctctgaaagg ctactttaca tgaaaattca 45180

ttttttaatt aagatttttt ttttttcctc ttgagacaag gtctcactct atggtccagg 45240

ctggagtgca gtggagggat cacagctcgc tgtagccttg acgtctctgg gctcaggtga 45300

tcctcccacc tcagcttccc tagtagctgg aactataggt gtgagccacc acgcccagct 45360

aacttttttt tttttttttt tttttttttt ttttttgaga cagagtctca ctcagtcacc 45420

caggccggag tgcagtggtg cgatctcagc tcacagcaac ctctgcctcc tgggttcaag 45480

tgattcttgt gcctcagcct cctgagtagc tgtgactaca gttgtgcacc accacgcccg 45540

actaattttt atatttttag tagagatggg gtttcaccat gttggccagg ctggtctcaa 45600

actcctgacc tcaagtgatc cacccacctc tcatattgct gggattacag gcgtgagcca 45660

ccgtgcgcag ccccagctaa tttttaaata tttttttgtg gagatggggt tttgtcatgt 45720

tgtccaggct ggtcttgaac tcctggactc aagcaatcct ctcaccttgg tctcccaaag 45780

tgctgggatt acaggcatga gccactgcac tcggccttaa gagaagattt aataattaat 45840

attttacaat attaattgta aagaggtagg atgagtaact aaattaggat acaagtaacc 45900

agggtcatat ttgctaatac ctttgatcac tttgcactgg atatcttatc agattttcct 45960

catcagctcc tttagcagca gtgtggcagc atcttatctc attttgtatt tttttgcata 46020

gcacacgcct ataaatcact ggattgaggt gtttagatgt ttgttgtccc ttggatgctt 46080

cttacaaatc catattttat ggctcctgga aagtgctatg caaataataa gctgcaagaa 46140

tggaaaggaa attgcagtgc tcctgaattg taaatgggct tttacgagga ggtttctaat 46200

tactctgctc tttctcttga actgaggagt tgaagtgtaa gtggcagatc cataacagat 46260

aatcatgtgt gtgatgttac ttcagcctga gcctcgagga ccaagtcaca gagcaggaac 46320

agccactccc cagtgtccat ggggccacgt ctgaggagaa ctcagggatt tcatatgtga 46380

tctgcagtgg ctggggggct aagagagcat caagaggatg taatgtgtcc ctctgagtgt 46440

gttacagatt ctgacattct tattttcctt ctgtggagag acatgtactc agtgacccaa 46500

ctcactttag catatgtttg ctcatcattt gtgtagcttg aaggaatcag atattacccc 46560

ctccccgcta tttggaagca cagatgcaat gccctagaat tgtactgggg gctcaaagag 46620

aaaagagagt agtaaaatct attaaagggg acaaagacag cctatatact acaagctttc 46680

tatttttgtg gcagagacgt tgtggtattt tctaagtaaa cagagtcgac ctgcaatatc 46740

aaatgcatgg atttgatgct ttggaaagca actgtcttct gtgttaatct gggtgtcttc 46800

tgtgaaatgt ccccctgcct ttggcttaaa cactagcttt gtctacagcc gctccatcct 46860

gaacctgccc attcttgtct gaatcctggc ttgaccactg acaagctgtg tgtccttggg 46920

caagttactt cacctctctg cttcagcgtc ctcatctgtg agttggggaa tctggacaga 46980

atctccccca tagggtatag tgaaggcttg ttgaattatc ccaagtggct acacagagta 47040

agcattcaac tgatgtcatc gttgtcatga ttgctgttac tggagcctag agttcattct 47100

gatactcaag gctgtggcgc atgtggcccc ggtaaggaac agttggagga gtcgggcatg 47160

ttcaacttga agaggagacg acagggaatg tgggatggtt gaatctgcga agggccccct 47220

gggatgaaga actggcatgt tctgtgtggc tccagggccc tgagcaggac ccatttacca 47280

aagtctcagg gacacagttt ctagctatag acagaaacat tttctgtcaa tcaaagaggg 47340

cgaaaataga atgagccccc ttaagaggta gtgagctccc tgtcattgga aggattccgg 47400

aagagctagg taaccactgt agtgctctca aggggctttt ttctttaaag tcctttccaa 47460

aaggttctga gagtacgtaa acaataggaa gccaccttgg tgctttaaca caaactctcc 47520

ccagtgatga ggtttgagcc aaagccagac tggcaagcag agaggaggct tgtgtacaag 47580

gagttcctcg ggtcaattgc tttttccttg ttctagccag ccagagggct cctgttggaa 47640

aacaggagac cagggaggcg gaggcctgac caaaccagcc tctgcaggcc agctgggaga 47700

ccacaactcc cacctgcggg aaaactgaag ggcatctcta tttttagatt gagcaaaaga 47760

aaataaattt aagtttgagc ctcctttgca acttctaaaa atcatcttta ttgagatgat 47820

cattcacatt ctataaaatt cccccacttt gagttacaat tcagtggttt tagtcttcct 47880

tgatgatgtt gatggtcttt tcataaggct cttggaagat ccagaagcct ctgagacaca 47940

ggtgggtgtg gagggcatag cacagaggca gacttctcat ttcctgggtc tcccctttaa 48000

tgactctcag agacccctcc ttcccctgcc gctggcttcc accccagggc tgtagagctt 48060

tgccactttc caagcagaac ttaatttcct cttctgtgtc tacactcttt gtgcttcttt 48120

cttgccagct ttttctcctt tgcccaccct ccctcccttc ttcccttctt cccttcctcc 48180

cttcctccct tccttcctgg tatgtgacta atttctgttt caggacatag atgttgtcca 48240

ggctgttctt cggcctttct gttggatgat ggacattggc attgagagag gctgcttttt 48300

ctgaaatcat gttttggggc ccaggaccta ggtgtgtgct tctggctttg ttttcttccc 48360

gatccaaatt ctgatatgtc catttaaatt gatgtagacc cacaggacac tgtgggacag 48420

atcctcagtg gaacatgact ccgtaacgag agcgttttgt tttgtcaaaa tgagaacata 48480

ttattgcttt tcatctgatt gtaaacataa tacatgtcta taagacagta taatgagaca 48540

aaaatgtaga cactaataag agaaaatctc cctaattgta tttgtattct cagagaaagc 48600

ccttgttggg catatatact ctagtttgtt tgtttgttta cacatatatg tactcttttc 48660

ttatttataa aaattctgta catgtacatt tctgcaacta ctatttcact tgatgataca 48720

tagacctctc tagaccagcg tgtacatttc ttcctcctta caaagcagtt ggcttcgccc 48780

agggtgcacc aggacacagt tttggctctg tccccagggt gtcacgggac caggagatga 48840

tctcacaggg tctgccatct gccctgcctg gctggaggct gcatcgagag ggccaagggg 48900

caccacgtgt cgtggacact gtcaaacaag agcctttaga gctttccacg gtctttcttt 48960

tgcttcccag cattgcttcc ccgctggtgg actctgaatc tagaactagc tccaggcgcc 49020

tctccaaact cagacggagg ctgcggcatt attataatgc aaatctaggc aaagccctcc 49080

caataccagg atccagaatg gggtggggcc ctttgcccta aaaagctgtt tggtttgaaa 49140

atacaaacag gagacagaaa ggtttggcta aattaatgga tgaagtttta acaatggtaa 49200

ccatagtagg gttcactgac cgccagcgat ggttctgaat acttgacatg tattaactca 49260

tctaatcgcc acattttaca gacaatacaa aggaggctct gggaggttga atgacttgcc 49320

caaagtcgca cagctcctaa gtgaaggatt tggagtggac tccgggcagc ctggtctgac 49380

gccctgcact gcgctgtgct tatctctggc cccaatgccg ccatacagaa gtgtctgggg 49440

gcactttgtc tctgtcaaag agagaattcg gagatgcgta tgcttgccct ggtgtggcat 49500

ttctcttttt ttgagacaga atctcactct atcaccctgg ctcactgcaa cctccgcctc 49560

ccaggttcaa gcaattcttg tgcctcagcc tcctgagtag ctggaattac aggtgtgcac 49620

caccatgccc agctaatttt ttgtattgtt agtagagatg ttgttttgct gtgttggcca 49680

agctgatctc gaatttctgg cctcaagcga tccgcccacc tcagcttcca aagtgctggg 49740

agtacaggca tgagccacca cgcctggccg tgtggcactt tttacgtgtg ttcagcagac 49800

actgtttatc ttctgtcctt ccaagacagt gctgatcagg tcattcatta cagcagacaa 49860

ctgctgattt caaacagaat tgccatcctc ttctcccctg cgactttcag agtgtgacct 49920

cagactcaaa aatcagaagt gaaaacatct taaaaactat caccttttct tcctaatcct 49980

cctctcccct ccctgtcttc cttgttgtcc ccatccaatg aactatcatg gcaaaaagag 50040

cccatttctg gccattttct gtggcctttc aaactcccac ctaccccact gcttctgggc 50100

tcattccctg aaagctgaga cttcggcgca gaaagtgcca ggccctctgt ccccccagat 50160

cgccttcctt gtcttccctg tgcttgcctg tcacattgtg tgggttccag cgctggaagg 50220

aatgagaaac agactctctg gttctccttt tgaagtttac cttcactcca ccacttctga 50280

gaccttccca gaagttgccc cttgtttctc tcccctccag ggctgaccca gagctgcccc 50340

tcacctcttc ctgctgtcac cccaccgcca tcagggcaga ggttgggaca aagcctctcc 50400

tactggctcc tgctattctc cctcaggtcc agcctcctct tctccatctt caggagtctc 50460

cctctccact cacatgtgat gacttcagca cctcgcatca gtccaggaca tcactacttg 50520

ttcaagtatc ttacccatgc attttttcca gtgacattca cagccaccct gtgagacagg 50580

agtgtcatca tctccatgtt tcaaatgaag aatctgcagt tcagagaggg caagtgactg 50640

gcccagcctc aacagccagc cagtggaccc cactaaaccc agggcttctg actgcagtcc 50700

gggttccctt tccacccaaa tccatggagg gaactgagcc gagaacaggt gtccttcagg 50760

aagacgtgaa gccaaagcct ccacctccaa actcaggggc ccagggagtc caggcaccca 50820

tccactcaca aggctggatg tggtgcattc caggagaggg gttgggggca agtggcctct 50880

ccgtgcaccc atggggatag atgcgcacgt ggcatctcca catcatgagg cctggcttcg 50940

tgggttagct ccaggtccat ggagaagcca agtagggggc cctccaagct cagctttggg 51000

cccaggtcag ggtgcaggat agagcaggcc tccctagcat ctgccatgag gccgaggcag 51060

tgcatcgttc acagggcaca ttcagaaacc acaacctaag agccggtcat cagtccgggt 51120

tacggctgat ggaagagcag gtgcttccaa gaacccacaa tgctctttgg ccagtggccc 51180

aaaggtgcct ccaagaggct tcacagcacc cggaggtgct gctgaggcaa cgccctgact 51240

gtaaggagga ccattcaccc tcagagagcg gccgtgatgc tgttgcgaca gtcctaccat 51300

ccctcccaac tctcactccc aacagacttc ccactctaaa gctgaactct ccagcaaatc 51360

acctctcgcc agactctccc ccgactctct ctgggtccac tggaggttcc tcagcctctc 51420

tgtgccttgg ttttcccagc tgtaaaatgg agcaaagagg gcctgtgtac ccccaaaggt 51480

gtggttggag cagctcctcc tacattaggg ccttgagtgg ggcttcgtga ttggttgatg 51540

gaggtctcca aacccaccca gtgccaccga agcctgggac tgcagatgca atgccacagg 51600

tgtccttcct cagcctgggc agctgcacat catgtgtaaa atgggggtaa taagataata 51660

acagccgctt gcacctatgt ggctatgagg attaaacaag ataaatgtgt aacagtgcct 51720

ggctatagaa atatttactc ctgttattaa gggaagaata tgcatggcta aaaagggagg 51780

gaagatgtaa aagccagtcc gtccccctct agcatattta agggtaatgt tgagttggtt 51840

tgtggaccat ttgctgccta ttagagccgg aaggtaggga ccccctctca acagcgatgc 51900

tacaaattat acccattgga ggtcaaccaa aagacaaagc ttattggctg gacctggtgg 51960

ctcacgcctg taatcctagc actttgggag gccaaggcag gtggatcact tgagatcagg 52020

agttcgagac cagcctggct aacatggtga aaccccatct ctactaaaaa tacaaaaatt 52080

agctgggcgt ggtggtgcac gcctgtaatc ccagctactc aggaagctga ggcaggagaa 52140

tcactagaat ccaggaggtg gaggttgcag tgagccaagg tcatactact gtactccaac 52200

ctaggcaaca gagggagact caatctcaaa aaaagaaaaa aagacaaagc ttgttaatac 52260

cagcatattg ttaagggaat aaagtaggct gcagaacagc tggtgtaata tggtgccatg 52320

tagggaaaat tacaagtgta cacaggagaa gagtctgcaa ggatgtgtcc taagatgtta 52380

gagtggtttg tttgcttttt tcttttatca ttttgtattt gacttttaaa taaggaccat 52440

gaatcacttt tataaaatac attctctcca gcccctacta ctcctttaaa gaataagagt 52500

ggtttgccca agaaaggcag ttttttttgc tctggttttc ttgattctga catcagagga 52560

aactccttct catctacttg gggctctggg ttcaggggat tcatttcagg cagattaaag 52620

tggtgaccag ggacatttgt ggacacaggg agggacggga gcaccatcag tttgtctcac 52680

acaaccactg ccatcctcac tgaaggctgt tgcctgatca aaaaaagtat caggccaggc 52740

acggtgactc acgcctgtaa taccaccact ttgggaggct gaggtgagtg gatcacttga 52800

ggtcatgagt tcgagatcat cctggccaat atggtgaaac cccgtctcta ctaaaaatac 52860

aaaaattagc cgggcgtggt agtgggcgca tagtcccagc tacttgggag gctgaggcag 52920

gagaattgct tgaacccaag aggcagaggt tgcagtgagt ggagatggcc ccacctcact 52980

caagcctggg cgaccgaggg agactctgtc taaaaaattt atatatatat tatatatgtc 53040

aaaaatgggg tagtttttag aactatagta gttctaaaaa caaaggccat ccaagcatga 53100

cagatttaca agcactttgg ttattccagt agttacaatg gaggatagaa gcttttagtt 53160

aaaacaaaca acacaacaaa cccagaaacc ttaggtcaaa accaaaattg tcctctcaga 53220

cacaatctgc gaattttctc atgacagtgg gcattagcca actgacatca gccgcaatca 53280

tccgtgtgca cacagtggca ccacctcctc ccaaaaagcg gccttcatcc atgctctcat 53340

acaatcgttg attattgtct ttggattgac gcccagaatt atttcagttt cttcttgcca 53400

gcatgaatct tttctttctg tatgctcctt atcttctctc tttaatttgg cagttctgct 53460

tgaaatctgg gtctttcatt agtaatagtt cagtttggtt ccagaacatt ctgtggtgtg 53520

atgccatgtg accacaagct cacacttcag agctcttcgg gggccagtct taccgagcac 53580

ctctcagtgg ctgcctgtgt gctgggcgct acttgtggtg ggcaagagag aggaggggac 53640

acaaaaggag acacagctcc ttcttagaag ctcaaagttg gggaccagct gccacagaag 53700

agtatcttta gcatcccaga caccaagatc tggccttaca agggtgttta ttaagccttc 53760

tcagctcttt ttcttttttt tttttttttc agacagagtc tcactctatc acccaggctg 53820

gagtgcagtg ggaagatctc ggctcactgc atgcaaccac cacctcccgg gtttaagcga 53880

ttctctgcct cagcctcccc agtagctgag attacaggcg cccaacacca cacccagcta 53940

atttttgtgt tttcagtaga gacagggttt caccatgttg gtcaggctgg tctcgaactc 54000

ctgacctcag atgatttgcc cacctcggcc tcccagtgtg ttgggattac aggcgtgagc 54060

cactgtgcct ggctttgctg ttgcttcagc aaaaagtatg tttgacttga tgacctccag 54120

ttaccttaga cagaggttct catctaagct ccaactttcc atttccattt tcctcgcctt 54180

tccccttaac ccctccacat ttctctcaaa atcaccccag ttctgtggcc gggtgcggtg 54240

gctcatgcct gtaatcccag cactttggga ggctgaggcg ggcgaatcac gaggtcagga 54300

gattgagacc atcctggcta acacggtgga accccgtctc tactgaaaat acaaaaaatt 54360

agccggacgt ggtggtggac gcctgtagtc ccagctactg ggaggctgag gcaggagaat 54420

ggcgtgaacc caggaggcgg agcttgcagt gagccgagat cgcgccactg caatccagcc 54480

tgggcgacag agtgagagac tccgtctcaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaatcaccc 54540

cagttctaaa aaatactctt catttttctt ttaaatttca aattatactc attgaaataa 54600

atcaaaatag catagaataa gcaaaaaaaa tggatcccac ccttcctcac tcccattaca 54660

tagggctaac catagttaac catttaatta ctaggttttt ttgttgttat tatttattta 54720

tttatttatt tatttattta tttagagaca gagtctcatt ctgtcaccca ggctggagtg 54780

cagtggtgtg atctccgctc actgcaacct ccgcctccca ggttcaagca attctcctgc 54840

ctctgcctcc tgagtagctg agattacagg tgcccgccac cacacctggc taatttttgt 54900

acttttggta gagacaaggt ttctccacgt tagccaagct ggtctccaac tcctggcctc 54960

aagttatccg cccaccttcg cctcccaaag tgctgggatt aaggcatgag ccaccacacc 55020

cagccctcct gggctctctt ttcctttagt tgcacacact cccctgttcc tggagtagag 55080

ggatttccta gagactgtgg gctccagcct tcacctaaac ccaggactag gatgcctgtc 55140

ctatcactta tctttataga ttaaagcaaa atagctggac cataagcatt cgagaacaaa 55200

tggtgaataa ggagaaagtt ctcccaggaa acaagagctt tacttcagtt gggccagtgt 55260

ccttatattc cttagctgtt gccagtcact gcttgattta atctcggcta tcacttggcc 55320

tgacaggtct gctgctggtg ccaggatgtc tgggttttta agcctggctc cattacatac 55380

ttcctgtgtg accttgggca acttactcag cctgtctgtt cctcagtttc ctcagctgta 55440

tgatgtcggc ataatagttt gttgtgtgaa ttaaatgagg caataactgg aaatgcttca 55500

aacatggttc ctattaggag aaatcctgct ttctgcctaa atgtgctgca aaattcctgg 55560

tggtgcagag caggagacca gagcaaagga aagacagggt gcagaagcca aaaattacct 55620

tggaggacaa agcgcatgtt aaggttaatt ttggattcta ggtttatctc tgcttggtct 55680

tcagttacct gcgagagatc catttagggg atttttgttt gtttttaacg atagctttat 55740

tgagatataa ttcatatgcc ataaaagtca ctcttttaaa atgtttccgg tatattcaca 55800

aggctgtgca ggcttccctg tgcttgattc cagtctgggt ttttaaccta gcgggtaagg 55860

gggaccagac cagaaccgcg ggccaggcgg cgattccgct gagtcaccgc gggcgcgggt 55920

gcgcggcggc ggagcccggg accttccttg gctgccccct agcgagggcc gcagggcggc 55980

ctgagacacc ggccggggcc gccccacggc cgtcggattt agactggaag cttggtccag 56040

gtcaccagct tgatgcgccc gcggtatggg agaccagccc cactcgggct tcccctgagc 56100

gcccggactc ttgactccag cagggcctgg gttatgacca tcaactcccc tttgccaaag 56160

cgatgctctg ttgggaaggc acccatttga tacagtagcg tagagatggg ttttagcatc 56220

aaaatatcag aattcaaggc ttgctctctg cttactagct gtgtgaccct gaaaagattt 56280

ctgaacgtct ctgagcttca gtttcctcat cattccttct cacggggtgg ttgtgagcat 56340

tacagagatc ctctctggga agcccctgtg agtggctcat cctcagggct gaagtaaaca 56400

tgttattaat aatccaatac tggcaagggg tgttgactga tccccctccc ttccccaagg 56460

agctttctag aacctgagtt atcattacca aactgtgctg ccttgagtaa gaacgataga 56520

aggaacagga aggatggtgg caggtgcagg aaggcagatt ggtcctcgcc tccttgcagc 56580

aagaaacagc cccagatcgt gggaaaccta cagacctgcc agacagacta ggagcaaaag 56640

ctggggcgtt aagaatcccc agggaggttc tcctgaggga gcagccagtt ggattttgta 56700

agcagagatt tggctgggga ggagtgagga cgtggggagc agagggacaa aactgtcggg 56760

aatcctgcct tgagggcagg ggtgtgtgtt ggggggagtt aggtccctgg ggctcggtgg 56820

ccttgggcaa gtttctaccc ctcaggtctt ttacccatct agggactcca tctgtccacc 56880

tcacaggtta cagtgagcct ggatgcactg tcatgggcag gtgcccagga aaatggcaga 56940

catgttccaa atagcaagca gtgttcccca gtgacgtcca gggtcacctc ggaggtgggc 57000

aagatgcctg gggtttcttg tccaccccac aacacctcag gggacagcca aaactgtccc 57060

ttcaggtaag ctgcacagaa gacgtgaact ctgctgggaa gaccctcttc tttgggagca 57120

aaagggaccc agggtctcac ctgcacatcc ctgtccctga gggcctgggg gttcttggag 57180

gcccagcctt ggcaaaatga ggaagaatgt gagggttgtc caggcccctg ccaggctcct 57240

tccttagcca agcactcccc ttcctgcaca catacccttc tccctccact gcgtctccac 57300

tgttgtcaga aaagtcacaa taaaaaggtc cgtattatct agttcccaca cttttaattt 57360

ttttaatttt atttatttat ttatttattt atttatttat tgagacagag tctcactctg 57420

tcacccaggc tggagtgcag tggcacaatc taggctcact gcaacctctg cctcctgggt 57480

tcaagtgatt ctcatgcctc agcctctcaa gtagctgagg ttacaggtac gtgccaccat 57540

gcccagctaa tttttgtatt tttggtagag atggagtttc accttgttgg ccaggctggt 57600

ctcaaactcc tggcctcaag tgatctgcct gcctcagcct ctcgaagtgc tgggatttca 57660

ggcgtcagcc actgcacccg gctccacact tttcacttat taaaagactg tggtgtccat 57720

caatggatga atggataaac caatgtggac tatccctccc attacccaag gaatgaagac 57780

ggaactttgc caagatgtgg attcacagtg aaagaagcca gtcaccaaaa gccacgtgct 57840

atgtgacttc ccttatacga aatatccaga agagatacat ccatggtgac agaaagtaga 57900

tgagcagctg ggggctggca gaggggagaa gggggagcag ctgtctatga gatccagcct 57960

ttcttctggg tttggtgaga atgttttgga actagagaga ggtgatagtt gtacaacatt 58020

gtgaatgtac taaatgccac tgaatcattc attttaaatc gttcgttgta tgttgcatga 58080

attttaagtc aatcaaaaac aattgtttga aaagggaaaa gccaatgggt agtggcagca 58140

gtgattggat tcatgattcg attccatggc tatccctccc cttaccctcc agcgtcttct 58200

tcttttactc tgcactgtca tctttgttcc catctctctc tctctcaacc ctgcagacac 58260

ttttcccttt ctttgtctgc cttcaccctc cagatttctc tgtctcccta tgaggcatga 58320

gttgaggctg ggagggtatg attctgaaga aggcactagg agtgactcag ctagcccctt 58380

cccctcccag ggcctcaatt tagctacaaa accacaggga gggactcagg aggcagtgcc 58440

tttccaaggg tccctaaaaa atgtcccatt ttagtgtcca gtttcactca actttagcgc 58500

ttcccctaaa atgtgttcgt tacctcccac cccactgcct ctaagtcact gcctgagaaa 58560

acaggattga ggaaaggaga aaggaagaga gagagagagg aggagagaga gaaagggagg 58620

aaggctgatg gacttagaaa agcaagaaaa caagtggtct gaggaaaaca gccttggtgt 58680

gtttattttc ctgtctgtgt atcgcttctc ggccttttgg ctaagatcag gtgtattttt 58740

ctgtctgtgt gtctcactta gattacaggg atctgtgggt gataacatgt ctggtccagg 58800

ctgcgtagcc acctcaaggg catgcttatt tatgtgtttt tcaattcact atctttgctt 58860

gggagtccca ggccaagagg cacagctgcg ccatttgtct attggtttag atatccttta 58920

tccagttctt ccagagaaat catcctgccc ttggctctgg aggaggtggg cagtagcggt 58980

cagagagggg agggaaagga aggagccagg tccctggcta ggatgccagg gtcccctgcc 59040

tctcacctgg cctgggctgg agacctcctg ctgtcctgtc actgatcacc accccgcccc 59100

aggctcctga gttagaagac acaggctaaa gtagactatc tctccattga aaaacccata 59160

caaaataaag gttcataaaa aatagaaatt tagaccaagt gctgtggctc acacctgtga 59220

tcccagcact ttgggaagcc aaggcaggtg gattgcttga gccctggagt tcatgaccag 59280

cctgggcaac atagcgaaac tccatctcta caaaaaatac aaaaaattag ccaggcatgg 59340

tggtgcacgt ctgtggtccc agctactcag cctgtggacc tacatagaat acaatgtcag 59400

cataagaagg gagccctggg gtcaccaaat ggtttggggg gcaaagaact tgaaggttga 59460

gagaagtggc ttggtcaccc agctgtcggt tgtgagacct ggccactgct tcttccatac 59520

cctagacctg caccctgaca tctcaggtaa aaagttgggg aatgttttat ggtccaggat 59580

gaaggaacag gcagtgaggg gcagcggagt gtcactttgc atttctgtct gcctggtact 59640

ggctgtgtga cttggacagg taacttccca gactcctggg aatcataata tctatgatga 59700

tgatgatgat gatgacacct acctcaagga ctgccctgaa gggtcacaga gatgcctgca 59760

aggcacctgc atggagcaag cgccccttct ctggcaggtg ccaggtaagc acctcctgtt 59820

gccaggccct gaggctatgg cactgagtga ccctgcaaat cctacctggc gaggctggca 59880

ttcttgtgct cagtcagtgt tggttgtaag accaagagga gtcacttcat tttgctctcc 59940

aggaacatct ttctgggtcc tattttttgc ctatgtcaag cagagcctca aggatgctcc 60000

tgaaaatggg cttgtcttta ttaacatggc aggtaggtcc caaagcatta gcatggggca 60060

gctgacctcc cccagccaat gcagtgcagt gactcttgca accgagtcta atcaggtcca 60120

tgaacctacg agcatttcct gtccaggact ggggtgaagg ctgagcctct ctgcttagag 60180

attcttccca tgcattccac tatttctccc caaagaaaag tattgaccct cgagaggcac 60240

acagtttatt tcttttgcat agtaaatagt agcctgtatt ttaaggaaga attgatttct 60300

gcatcagccc ctgtaagtca tcagccttct attggtgcat ctgactctct ctagctctgc 60360

aggggtgttg gagggggagg ggaaggaggg atctttatta gaaaccagaa tagtgagatc 60420

cattgccctg tcatctgttc catggcgctg aatgaggcgg cccagcagtg aaacaccgtg 60480

agcgagcatc cccagcctgc agaacagtgg ggcactgccc cgagtcctag gaatgaccct 60540

tgattctcct gctcctgact tggaacccat ggaaacctgt agaagcagct gaggaaaacc 60600

caacatgaaa agcagaactc cacactgaga atataggagg tgatcggaac atacagtgat 60660

tcttgctaag actgattcac tgtttttatt ttttttcgat tgaagaaata ctggagaagc 60720

ctaaagaagg agtctaaaaa ctctggccca tgggccaaaa ttgtccttgt gctaagaata 60780

attttcacat tattaaatga ttgaaaaata aaataagaat gttttgtgac acatgaaagc 60840

tatgtgaaat tcaaattcca atatctataa atagtgtttt atcagaacac agtcatgctt 60900

attcattcat ctttgatggc tgctttccca ctgcaaccac gttgagcagt tacaacagag 60960

atcacgtggc ccacaaagtc ttacaatatt tactatctgg ccctttccag aaaaaatgtg 61020

ctgactcttg accttgacct cagcactttg ggaggctgag gcaggtggat cgcttgagcc 61080

ctggagttca tgaccagcct ggacaatatt agtgagactc catctctaca aaaaatacaa 61140

aacattagcc aggcatggtg gtgcacacct gtggtcccag ccacttggga ggctgaggcg 61200

ggaggatagc ctgaacccag gaagttgaag ctgcagtgag ctgtgatagt gccattgcac 61260

ctcagcctgg atgacagagc aagaccttgt ctccaaataa ataaataata caaagtaaag 61320

taaataaaat aatataaaaa cgaatcaatt taaaattata atgaaagcca aggggcatag 61380

tagaacaaat tttctagagc tcattaagtc aaatgagtca ccagttagta aaacgcagtc 61440

agggggaaga gagggcagga ttctttgaag cagcggctct cctaaaaaca gaacccaccc 61500

ttgtccagct gccttccctc ctgagggtgt tccctttgac catgtgaccc ccacccccta 61560

tttcccagcc atccaagccc acctctagca taatacgagc ttctaatccc tctccctgac 61620

cccatcccaa ttttgaagcc cagtctagta ttttctcaac tatacttctt ggctctgttc 61680

cttcctttct atcacctctg ccttttcact gcaagcttgg accactgcag tcacctccct 61740

accaacagtc gttccctacc catccagtcg gccccgcctg ctgctgcaaa attcacctag 61800

ggcacctctg tggtgctgcc cctgcctgtg gacaaagtcc aagccagcca cctcacccac 61860

ctacaggtga gtggggagca gccagcgtgt ccagtggttt accccatcgc cacagacttg 61920

gtgatgtatt gatgtgcaga gaaggggtgt tcgcagccac aacacaagca atcctgcccc 61980

acgtgggacc taagatggac atgctgcaag ccacctctaa gaatccaaca taaggcagag 62040

gggagaatgg ctcacacggc acaaacactc ctttttgttt tgtttttttt ctttttgaga 62100

ggagtctcac tctattgccc aagcaggagt gcagtggcac aatctcagct caccgcaacc 62160

tccgcctccc aggttcaagc gattctccag cctcagcctt ccaagtagct gggatttcag 62220

gggtgcccca ccacacctgg ctaatttttg tgtttttggt agagacgggg tttcaccatg 62280

ttggccaggc tggtcttagc tcctgacctc aggtgatctg cctgccttga cctcccaaag 62340

tgctgggatt acaggtgtga gccatggggc ctagcctcct tccattttaa tgtatgccta 62400

atctgcccat tgagaatggt tgagacacat tttaggtggc cagggtctac ttagagttag 62460

tgctcatgat caggcccagg tccagcctgg ctggccaaat ggtgcctttg acctgctatg 62520

gctctgtgca aaggaatgag ctgatggatg ggggcgcagt gtgtgggcag tgggctgggg 62580

ctggcaggac tcagtgacca agggaagaga actttcctca ccaccaacct gtcttttcag 62640

ggcactgcag gggggctttg ggacttggtg atgaacacag catagtgagc tgtccagcat 62700

gtgggctcct ggattctcac agttcccggg ctccttcaga ggctctctct aaagagagct 62760

gctctctcta gaacccacac atttagaata taggcaacca ctgcaatggg gacaactgac 62820

ctcaaacata gagaccagag tagatggggc tcatcgtgtg aaactcatct tgaactctag 62880

cagcttcttt tcacaagttc atggagagag gttttccact gagggaatca catctgtctg 62940

atcaaacgag gcttgggaaa tggctctcct gttcattccc tggaaacctc tgatggaacc 63000

actgccactg tggcggcccc ggcactggca ccccagccat gattggtgcc ccagccacat 63060

ctctgctgtg agccctggtt aattaatcat ccgtgtgttg acggggagag gcccgttcac 63120

gaaagcggtg taaagcccag ggcgatgtgg ccatggcagg aagggtgcgg gactacgttc 63180

cacccccaac tgagagattc agaaaccaga agaaaatgga aaagcatact gtgctcttgg 63240

gtgggaaaac taaatatgaa gagagcaatt tttatagtgt tggcctataa tacaattcca 63300

gccgaaatcc caatggagct ttgagaattt gcaggaaaaa aaaaattcta aaatatatct 63360

ggaagacaaa acttacaaga aggtttcaaa aataattttg aaaaagaaaa tgatatctga 63420

gcccacctag agaataagac ttgagatcca aagcttaaat caggaggctc tagcaccaaa 63480

actgacagat aaacgggaca gagtacatgg tgcattgacc tgggaaagag ggcagattgg 63540

tctgcaaata ggcctgggtc cattggcttt agctgttgtg tttggggaga aagttttcaa 63600

cctcactcca tcttaaacct aaaaatattc cagatgaatc agtaaatatg aaaaattaga 63660

ccactaaaaa cctagaagaa aatggatgat ctttctgtac catagagcaa tggaataaat 63720

cacaaaggaa aacagatttg actatataaa aattaaaccc tgcctatcaa aaaccatcag 63780

aaaccaaaat aaaaggcaac caactggaga agacagttgc cacaaatatg atcaagggtt 63840

aatgttattc ataaattaat agtccacaca agtcgttaga atgagcactg agacctgaac 63900

agagaagcaa aaagaatgtg agggggtcag cgcggaggct cacgcctata atcccagcac 63960

tttgggaggc caaggcaggc ggatcacgag gtcaggaaat tgcaactata ttttttaatg 64020

catagactaa gaggctagag ggaaatatca cagatcctta acatacattc ccaaaccttt 64080

gtaaatccac agattcatga aaacagacac gtttgcgcaa gtgcctgatc tttcctgtta 64140

tacattcatt agaagtcaag ccctcgtacc acacagtatc tgccttttca aatgtgatca 64200

aaatgttctc ttttgcttca aggccatttt tcataaggca atggcatttt tgcctcttca 64260

tcagagtcac tgtgtgccct ggaggactga aaacagcaga gccgtgttgg gatgggacag 64320

ggcagctggg aagattgggc tcattcccta ctaaatgcct cactcctgta ctgcccccat 64380

agaggaagag gggttcaaat ttattcctca gccagatggc atgtgccccc tctcctggaa 64440

tctcacgtca cttatgatgg accaaaattc caaaagctga atccatgact gtcaaagtct 64500

ggtatggcag gatgtcaaca gtaatcattt ctgggcagag ggatgatttt ctcttcccat 64560

cttgctttgt ataaatacat tttctataat aagattgtat tacttttctc atgaggaaat 64620

agcaaagtac tgttttactc aaaatatgaa tagagccagg catgctagca gcttatgtca 64680

gtaatcccaa cacttttgga ggcggaaatg ggagggtcac tttagcccag gagtttgaga 64740

ccagcctggg taacatagtg agaccccgtc cctcctcccc ccaaaaaaat ctacaaagca 64800

tttatcctgg attattcaca ggggccaaaa aaaaaaagaa aaaaaaaaga aaattcaggc 64860

ctcttatagc catgagctat gaatatgaaa atatgcaaat gtgaaagaaa agccagcaca 64920

tctgagtttt acttttactt tcacacctct gtctaccata ttccaagagg agaaacttgg 64980

tcattgaaag gaatcgatca aatccaaaga acaaaactac tgtgttcatt aaacttctta 65040

gtgttcacaa agctttagct gcaggttgaa tgggacaccc cgaattgggc tcacctgggc 65100

tgcagggagc agagatagca ccactgcact ccagcctggg caacaaagcg agactctctc 65160

ttaaaaaaaa aacaaagttc agaaattcaa agttgtgagt tatttttaaa ataataataa 65220

ttataataat aattcacaat aaagatgagg acaaagtgtg agcaaatggt ggtttctgtc 65280

cggctttgtt gagctgaagc agcctctccc tgctgggact tttggggaaa aagggtatgt 65340

gttgctcttc agatcccaag cctcatgccc ctactgggcc ctgtgtggtg cttctcagca 65400

cactgggaga gccaccgttg gaacgcacac ctgggggacc tggtgggtga cggtgcggtg 65460

agtgggggcc acagcctgac tccagggaag ccagcgagct cagagctgga ggagtcagga 65520

cacccctgat gggtcaagag ttggttttgc tgccagttgg catctgattg aaccatccct 65580

tcacttctcc gtgcctcact ttccttacca gacgtgctct gctgatgcca ttctctcctg 65640

ttcagtccta ccttcaccat tgaagagaaa gagcaaactg ctaggcagca gcattgattt 65700

ttttaaggaa gtggaaagag agctgggaat aacaagtcag gctcacctcc cctacctcac 65760

ctggtgggtt tgtttgtttc gttttgtttt tgttttgaga ctgagtttcg ccctgtcacc 65820

caggctggag tgcagtggtg taatctcggc tcactgcaat ctccacctgc caggttcaat 65880

tgattctcct gcctcagtct cccgagtagc tgggattata ggcacctgcc acacgcctag 65940

ctaattcttg tatttttagt agagatgggg tttcacccta ttggccaggt tggcctcgat 66000

cttctgacct caggtgatcc acccacctcg gcctcccaaa gtgctgggat tacaggcatg 66060

agccaccatg cctcgctctc acctggtggt tttgaatgtg aactgaatgt gttggtaaat 66120

taagcatgcg gatagacgta aataacactt gggcaggaat atggagcaag ggatgaggat 66180

gggtgcccag ctgttggaga gggtgatggg gaggctgcga tctgcctgcc atgaactggg 66240

aggaggggct cctctctctc ttcaccccca ctctgccccc caacactccc tagaacttat 66300

cctcccctct tctttcccca ggcgagcctt gaaccaggat ggctgagccc cgccaggagt 66360

tcgatgtgat ggaagatcac gctgggacgt acgggttggg ggacaggaaa gatcaagagg 66420

gctacaccat gctccaagac caagagggtg acacggacgc tggcctgaaa ggttagtgga 66480

cagccatgca cagcaggccc agatcactgc aagccaaggg gtggcaggaa caatttgcat 66540

ccagaattgt aaagacgttt taaatacatt attgtcttag attgtcagta gagtgaaacc 66600

tcattaattt gagtgggcca agataactca agcagtgaga taatggccag gcacagtggc 66660

tcacgcctat aatcccagca ctttggaagg cccaggcagg agaatccctt gaggccacga 66720

atttgagacc agcctgggca acatagcaag accccgtctc taagaaaaat ttaaaaatta 66780

gctgggtgtt gtggtgcatg tctatagtcc tagctactca ggatgctgag gcggaagaat 66840

cacttgagcc caggagttca aggttgcagt aagctgtgat tatgaaactg cactccaacc 66900

tgagcaacag agcaagaccc tgttggaaaa aaaaaaaagg aagaaattta ccttgagtta 66960

ccctcatgag tgaatgtacg gacaaagatt gcaggggctt gacaatcttt caaatacagg 67020

gtactttttg aggcgttagc cacacctgtt ggcttataaa tcagtagtat tgattagcat 67080

gtaaaatatg tgactttaaa cgttgctttt tatctcttcc ttagatcagg cctgactggc 67140

ctctctttag caagagttgg ttagccctgg gattcttact gtagccacat taataaacga 67200

catcaacttc taaatattct ataataccat cttttgggca aattgacttc gcctcttcct 67260

ttctctttcc aaatgaaatg tttcatttca ctgtcagacc acatggtccg ggaccccacg 67320

gagcacacag ccttccctcc gtctccccat gctggccctt cacccactgc tggagtgccg 67380

agttggtcca agggttggac caagttctca ggttgtctca aggttggtcc aggctgtctc 67440

agtgctggct tgtgctacaa ggagcccttc tttccacggg tgtggcagtg agtgctcaca 67500

gcaacagccc acggtgcagc ccgagggcag ggtggactca gtccctgcct ccatacccat 67560

ttctaagcaa gcaaaatggc aaacactcta cttttctctt ttaatgctaa aaataagaaa 67620

acatgctgca gcccagggta tgggtagtgg atggaagcca tggagttcca aggtgggaag 67680

tgacctctac tggatgcgtc tattcaggaa gatcactgga gtgggtgggg tctctgggag 67740

gtcccctgat tgtgggaagc tgggaccacc agctttctca cacagggagt ggccatccca 67800

gcttggagag gttccaggac tggtttcgac gctcgtttca gatttccatc tgttgaatca 67860

gggaaggtgt tggattatga ggaatttggg aattaggaaa gtgggtgcag gtaggttggg 67920

gggaggtgaa ggaagacatg ggcacattac aggaacaggg gctgctcaga ggtgtccgag 67980

aagctctggg tgaggaggtg agagggagag gggaatgcag cttggcgcag cctccctgcc 68040

tgaggtcagc catcacgtgg tgatggaaag agggaaatgt gctttctgac ggctccagcc 68100

agtgctgcca gattcagctc cccagggagg gcagctgagc ggctccaagc taggagatct 68160

gttttctcct ttgaatcctt cttagaggct gggcatggtg gctcacgcct gtaatcccag 68220

cactttggga ggctgtggcg ggaggatcgc ttgagcccag gagttccaga ccagcctggg 68280

caacataatg ggacctcgtc tctacagata ataattttta aaattacctg ggcatagtgg 68340

catgcaccta tagtcccagc tactcaagag gctgaggcag gaggatcgct tgagcccagg 68400

aggcagaggt tgcagtgagc caagatccca tcactgcact ccagcctagg caaaagagtg 68460

agactcccat gtccaattat aataataata aataaatctt tctcagtccc ttcctcactg 68520

tgtccccctc cactaaactt ttccaccacc tctcccactt ccctcgctcc cgctttccct 68580

ctccttctct ccccactcca tctttttctt tctctgctgt ttcccacccc ttcctcctct 68640

ccatcctgca acactgccta ccctgtcccc gccccaccct ggtgctcagg atgtgttaag 68700

tgagggtggt agcctccaag acctcaaccc cgaaggttag cctgttgaaa ccactctccc 68760

agctgcccct cggcagttgg tgctgttggg ggaaactggg attgggagcc tcttttcctg 68820

acaaagagat gaagagttcc ctcaccaggt gcctgggact ggggtgtggg tgtcacagcc 68880

tatcccagcg catctgtttg catcatgatt aatagtgcta ctttcaactg ggggcggtgg 68940

ctcacgcctg taatcccagc actttgggag gctgaggtgg gtggatcacg aggtcaggag 69000

ttcaagacca gcctggccaa catggtgaaa tcccgtctct actaaaaata caaaaactaa 69060

ccgggtatgg tggtgggcgc ctgtagtccc agttactcag gacgctgagg caggaggatc 69120

aattgaacct gagaggtgga ggttgcagtg agcctagatc atgccactgc actccagcct 69180

gggcaataag cgcaaaactc catctcaaga gaaaaaaaaa atagtgctgc tttcagcctg 69240

ggcacggtgg ctcatgcctg caatcccagc actttgggag gccgatgtgg gtggatcacg 69300

aggtcaggag tccaagacga gcctggttaa catggtgaaa ccatgtcaag gagagactcc 69360

ttctctctct ctcttttttt tttttttttt taagacagag tttcgctctg tcgccaaggc 69420

tggagtgcag tggcaccatc tcggctcact gcaacctccg cctcctgggt tcaagcgatt 69480

ctgctgcctc agtctcccaa gtagctagga ttacaggtgc ccgccaccac gcccagctaa 69540

tttttgtatt tttagtagag acagggtttt accatgttgg ccaggctgat ctcggactcc 69600

tgacctcatg atctgcccac ctcggcctcc cgaagtgctg gctttacacg cacgagccac 69660

tacgcccaat caactccttc tcaaaagaaa aaaaaatagt gctgctttct ctttcaagtg 69720

tcctgatttg agtgatagta aatgccaccc tacttataag ggaactacct cagaatgcta 69780

attgggacat ttttgtagca ctctactatt ggcaataggt gatgctcaca acagcccgtg 69840

agggtggatg acatccactt cacagatgac aaaggagcct cgtggtcaga ccgtgggctg 69900

ccggagcagg tccatggctg cagccccaca tgggccatat ttcccccttg tcactgtttc 69960

caccaagccc ccttggaact tcagttatta aactctcttg ggtggaattc aagttagaat 70020

cacaacagat gcctcatatg aattgtgcca gtgaaaaatg acattctatt tagaggcagg 70080

gcagcctggc ttagagtaag tttaaaatat gtgttatgct gcagcaaatg taccatgatc 70140

ctgtaagatg ttcacaacag gggaactgga tgtggggtat attctctgta ctaacttcgc 70200

aagttttcta taaatctaaa actgttccaa aataacaagt tcctttaaaa ttaactccag 70260

gagaccagat gcagtggcta atgcctgtaa tcccagcact ttggaaggct gaggcaggtg 70320

gattgcttga gcccaggagt ttgaggccag cctgggcaac gtggtgaaat cccatctcta 70380

caaaaaatac aaaaattagc caggtgtggt ggcgcactcc tgtagtccca gctacttggg 70440

ggactgaggt gggagaatca tctgagccca ggagtttgag gctgcagtga gctatgatta 70500

taccactgca ctccaacctg ggcaacagag cgagaccctg tctcaaaaaa caaaaatgaa 70560

ataaagtctg ggaaagaagt gggttttacc actcttattt tctgaagaga aactaaattt 70620

aatgtgtaaa gtgaggacaa gttcaccaag ttagtgtttg agttgcctaa aatatgtttg 70680

ctaaaactat tcaatgcttt cacataaaac atgatcagaa gttctatgcc aaaacatatg 70740

tgtgtgtgta tatatatatg cactatatat actgtatgca aaaatgcaaa atctaaattg 70800

ccaacctttt tgaaactgct ctgaagggaa agcatttgaa gataaattgc ttacccaaag 70860

aacatacttt ccaagaaagc aagtaatact taaggtgttc atagtcctca tcaaattaat 70920

tcttgctact gaaagcttac aaggagctgt ttttatgtcg ggtgtgacag gtttgacttg 70980

gcagaaggtg tcactttact aacaacattt taaataagtg acagaagaca agaaactaca 71040

tgttaaatac cagaacaaag agtgtctaag tggatgctaa gagttgaaat atggctggat 71100

acctgcccaa gacagctgaa aagtagatga aagttggtta cctataaact agtgcaccct 71160

aatgaattaa aaggtgttga tgagttaact tgttatgcct tccagataag acatgcaaat 71220

ggggcttctt cctccttccc tccttccaag gaatttaaca aggagaccaa tgcaaatgat 71280

aagaactgta gggctcaagc tgggaacaga ttggggaaag ggggaccatc atgcccatat 71340

agatgcccct gtgccctggc agtcaaggct tctgaaaaat aacgaaaccc agaagtctgc 71400

atgatgctgc cttatcattt gtccaaagcc ttcttgcggc agtttgcagg ctcttgcgag 71460

ctccaggacc aaggagctat gttcgtgctg gaagcttgtt taggacgagc tgttctttgt 71520

gggatgggtg cagccaaggc caggtgtcca gggatggtgt tttaacaaag cgtgtgaggt 71580

gtctgatctc acagtgcact tgaattccac ttgcattttt ttcatcttct cattctgttt 71640

catgcacaga accagcccca tcctgaaagt gactctaaat tactcctgcc ccaggtggag 71700

tgcctttctc agagttcaac agagccttcc tgtcgcccaa gggacaactc cactgaatgc 71760

ccaggcctaa caaataaaaa ccaaactctg tgctccccca tcctgggcca ttactggttt 71820

ctctactgct gttggtggta ccaccatcaa cttgtccatc atgaccctgg ccagttcctc 71880

ccacaaccct ccacagcacc cagggacctc acctccattc catccgacac agacctcctc 71940

accacaaacc ttggttttgc aacagcagcc ctgagacctt tacaccctcc tcccttcatc 72000

ctgtccccca ccaaggcccc agagccattc cttaaagcag ggctccacaa actatgagcc 72060

acaggccaat tctggtaccc agcctgtttt gcacagccag tgaactgaca atgatctttt 72120

catacaacca gaaaaaaaaa aaaaaaaagc ccaccattct gagtatgtga cttccatgtt 72180

caagatgtct catgttcaga aaggcccctg gaaaaggagg aagggtatga gctgggcaca 72240

aagggagacc ctctcagctg agctcctccc atccagacat tttcctggac ttcctatcca 72300

atgacttccc ttagcttctc atcagccacc cctgcctgcc caggaagctg gcagatgtgg 72360

ccttttaact gggcacagct ctgttctata tcatatcagg gctctgttcc caaggaaggt 72420

agagagaatg gacaccaggt ggaccctcag cagtctgtgc cacagaggga gtgtttgcag 72480

tttccacact aaaagtcccc atgtgcttga cgggatctgt gactacaacg tgatgcttga 72540

cttttcctca tatgaccaga gccactttgt ccatctggtg caatggtcag ctacctgcta 72600

ggggccctcc aggattccca gttgattcca tatctgcatc accaccatca gcactaaata 72660

aaatactcaa gttcctgctg gtgagcatga gcagtgctac attgggccct tcaaccaagg 72720

tgacaaggac tgaaaataat cactgccact tattgggggc ttctcatctg ccaggcatgg 72780

tacaaagtgc tttaaataag cattcaacag tttcatgctg acagaagccc tgtgagccag 72840

tggagctact tccatgccca ttatacaagg gagaaaactg aggcagaggg aggttaggta 72900

attcggtcag catcacacaa ccaataggtg gtggagccag gatttgggcc ccatctgcct 72960

gactctctag aggctctgat ctatccagag ttgagtctaa gccatgaata gggcaattag 73020

aaagcagagg aaacccattc agccaccatg tgcatgagag tgaggaattt ctgtcataca 73080

gaggggagtg aattcactga gctgagagct gaggaaccac tgatctgatg gctgagacac 73140

cactgggaag actggagagg cttttctggg catgcattgc caggcacagg agaagctgag 73200

ggaagatgac taagaggtac tggcaaagaa ctcagaaatt ctgatggaag ctttacatgc 73260

taccatcaca tccatccatc tatccaccca tccatccacc catatcttcc tccatccacc 73320

caatcataca tacatccagt catctgtaca ccacccaccc atccatccat ccatccatcc 73380

atccatccat ccatccatcc atccatccat ccatccattc cttcatccat cccatcatcc 73440

atccaattat acatacatcc aatcatatat atctgtacat catccattct tccctccatt 73500

catccatcca tccacccatc ccttccttca tccttctcat catccatcca atcatacata 73560

tatccagtca tatatctgta catcaccagc tccatctatc catttatcca tccatccttt 73620

ctttcatcca tcaatcatcc atccatcata catacatcca accatacatc tctacatcat 73680

tcattcttcc atcgattcat ccaattatcc atctattcct tcctgtatct atcccattat 73740

ccatttgatc atacatacat catctataca tcatccattc atccaaccat ccattcatcc 73800

atccatccat ccacccatat cttcatccaa tcaatcatac atacatccaa tcatctacac 73860

atcacccatc catccatcca tccacccatc catccaccca tccatccatc catccatcca 73920

tccaatcatc cagtcgtata ttcaattaca catccatcca attatacatt catacatgca 73980

tctaatcatt caattataca tatacacatc catataatta tacatccaat catacctcta 74040

tccaattata cattcataca tccaactaat aaattattaa ttcatatatc catccttata 74100

attatacatc catctaatca ttcagtaatt cacccatcca tccagtcatc tatccaataa 74160

tacattcatc caatcatcca tccatccatc cacccatcca tccatccacc cattcatcca 74220

tccatccatc cacccaccca tcatggtttg agccatgatt tactaccatg gtccactgtg 74280

gacagcccag gtgggattga attgaagaga agcccagggc tgcccccata aacatttggc 74340

tcctttacat cgatgagaac tagatccaca tgtataaatc ctcatgattt gaaggtgctt 74400

ttaccaacat tcactcatgg gattctccca gcagctctag gaggtagagt tgaggtcatc 74460

tcacccattt tacaaatgag gaaacagagg ccctgagagg caggtccaag tccacctgac 74520

cagaaagaag tggaactggg acttgaaccc agccatcttg ccccttggtc ccgtgctctc 74580

tagcctataa ctcccgcttc ctggtagggc acctccagga ggaccctatc ggctggcctt 74640

gggcctgcct ttgagtcttt tgctgtgtgt ggccatcctt cctccctcag gagagtgtgt 74700

actcccagag cacagactgt atcttctgag cattttgtcc cttcccagta cctagcactc 74760

agctctgtat acatcaggct ctcaagaagt ctcaagcttc cagagggtaa ggtcttgacc 74820

tgctctgccc cggatactgc aggatgcatt gataagccca taaaataacc agggcagatt 74880

gactcccagt ggccaaagta ccacagggaa gggacaattc agtccttcta ggaggaggaa 74940

gtagttttct aatttctatt aagccaacaa aagctgcctt actaagggca ttattggtgg 75000

agggtgtgac tgtcaaccac tgtgatcatt tgggcctctc ttgcccaagc ttcccattct 75060

gaaaggacag ttttcttgta ggtacccatg gctgccattt caaatgtaac tcacagcttg 75120

tccatcagtc cttggagatc tttctgtgga cgcttgatgg catccaaaca ccacctaatg 75180

tccacttaga agtaagcacc gtgtctgccc tgagctgact ccttttccaa ggaaggggtt 75240

ggatctctga gtgttttcct aggtgtctgc ttgttaatta atagcaataa acaaagcaga 75300

aggttcatgc gtagctgggc tttctggtat ttgctgcccg ttgaccaatg gaagataaac 75360

ctttgcctca ggtggcacca ctagctggtt aagaggcact ttctcctgtc acccaggagc 75420

aaacgcacat cacctgtgtc ctcgtctgat ggccctggtg tggggcacag tcgtgttggc 75480

agggaaggag gtggggttgg tcccttttgt gggtttgtca caaggccgtg ttccaactgt 75540

ttccatgggg agcaattttc agctccacaa gacactgctc cccagttcct cctgagatta 75600

aaagggggcg ctggggagag gccgccgttc tgaggcctca ccatgtgtgt tccagaatct 75660

cccctgcaga cccccgctga ggatggatct gaggaactgg gctctgaaac ctctgatgct 75720

aagagcactc caacggcgga aggtgggccc cgcttcagac gccccctcca tgcctccagc 75780

ctgtgcttag ctgtgctttg agcctccctc ctggctgcat ctgctgctcc ccctggctga 75840

gaaatgtgct cactcattcg gtgctttgca ggacagtgtg gcgggagctg agccctgctt 75900

cgatgccttg cttgctggtg ctgagcgtgg gcaccttcat cccatgtgtg ctctggaggc 75960

agccaccctt ggagagtccc gcgcacagct ccacaaaacc ccgctccata cgattgtcct 76020

cccatacccc cttcaaaagc cacctcttct ctctttcttc aggggccagc aggtcccaga 76080

gcagccattt ggctgaggga aggggcaggt cagtgcacat ctgatcttgg cttagtatct 76140

ttcattttgg gggttctggg tgtggcctgg gcctctggac tttggccacg atgtttgttc 76200

cggcccttct aacctgtcct ttccagacac tcagcatcta ggttattagg actcacatac 76260

ttcctgacgt gctcctcagt cctgattttg accatcttct cttgcttccc atctgtatca 76320

gtcaagactg catttggctg taagaaacag aaaccccaac taactgtggc atttacatga 76380

agaggtttac ttttctcaca taatcagatg cctgaacttg gccagcacct caagggtcac 76440

tgatgctctc ccgtctttat tttctgtcat ctttagtggt tggattgttg cctcatggtt 76500

acaaagtggc tgctgcactt ccaggcatca catctgcctt tgaagcagga atgagttgca 76560

aagtaaagtg gccaaaaggg ccctgaaact aaatgcgtcc ccttaggaaa acaggagttt 76620

tcttgcaagt ggcagtcttc cacttatgtc tcatcagcca gagctgggtc ttatggccac 76680

cccttgctgc aggcaaggct aggacattga gcattttgcc ttccagcctc tttagcagaa 76740

taaatcaagg gagaagaatg ttaataatgg ctttcaagtg actagttggc agtatctgcc 76800

cgtctgtctc tccatcctcc ccttggaggt tcaaggttcc tttcttagca cttcttcagg 76860

ctctgcacat tcatttggat cttgtgtctt ggggtgaaaa acttgcccaa gtgtctctgc 76920

aagcatctac ctttggatga atttggaaag tggctgtcaa gtgcccgccc cttgcttggt 76980

acaatgctgc atctttagag gatgcagcag gcgtgggcct tgctgctgag gttcttagcc 77040

tcataagaat atccaggtta gattctcttg gctccttctt agagctagtg atgcaagaca 77100

cttcctgttc atcttgtcgg gatggttttg caagttgcct gccatcctga gaaagtctac 77160

aaaacgatgc cagacctcat gccagcttcc caagccttgg ctctcagtgc tccctcaaca 77220

gtctggaaga atctcccaaa caagtctcaa tgccctctgg accctgtgca ggcgtgagac 77280

tcaagagcac tggctcccac ccctggtgga gggagccctg ctggggctgg gatcttgcct 77340

ggttgctctg cctgcaccca agacaaccat aattaaaatg tccttcattg aacttggaaa 77400

gccttcaaag ctgacaactc cttacgtgta cctggagtgg cctgggagtg tgccagggca 77460

ttgcttgaga ggaacactga tttggaagcg tttaccttga tgagagactg acagcagctc 77520

ctggtagccg agctttccct cctgcctctg ctgtgaaggt ggacccatgc gacagtcaaa 77580

tgcctgactt tggataggac cggacctatt tattgccatg caagggactc tgcatttttg 77640

aattatgggt catgggcttg gagacagggg ttagagctgg gagaagtctt ggaagtcacc 77700

tagagaagac actgccattt tgcagatgag gaaactgtcc aatcaaaatg gaccaaggat 77760

ttgcccaaag tctcacagca aaaccatagc ccccgcccta acccccccag tccccgtgct 77820

gtctcagttg taattctcgc cttaaggatc aaatagttat gagcaatcat ctggttttca 77880

gtattctttt aaaatgcctg gggccatgcc cagcagtccc tttcactggg gtttagacag 77940

ggctgccggg ctttcctggt ggatgagctg ggcagttcat gagccagtag cactcagcag 78000

catgtcagtg tgcttcctgg ggagctggca gcaggggctt caggccctgc ttcagggctg 78060

ctttcttgca tatggctgat cccctcctca ctcctcctcc ctgcattgct cctgcacaag 78120

aagcaaaggt gatgggcatg gctcatcctg gctcctctaa ggtggttctc ggtggtttcc 78180

agatgtgaca gcgcccttag tggatgagag agctcccggc gagcaggctg ccgcccagcc 78240

ccacatggag atcccagaag gaaccacagg tgagggtgag ccccagagac ccccaggcag 78300

tcaaggccct gcccggtgcc ccagctgacc tgcgacagaa gtgagggcac tttgcgtgtt 78360

tatcctcctg tggggcagga acatgggtgg attctggctc ctgggaatct tgggttgtga 78420

gtagcttgat gtcttggtgc ccagctacct ccctggctgc ctgccagcct ctcagagcat 78480

ttagggcctt ctggacttct tctagacgct cctcatcttg cctcagtcag cgcatcagtt 78540

ccagggagtt ctctgcagga ttttctgggg caggtggtgg cagacccgtg ccttcttggc 78600

acctgaggtc agccaccctc ctgctcagac tgtccggcac agggccacct cccaaggggt 78660

ggacccaaag atcacctgag cgcacagagg gtgcagatga ctggaccgca tcttttggtg 78720

atcttaatga ggtggtccca gaggagctga gacatgtgat ctagcatcca gttctgggac 78780

tctgtctcct tttcaaacat attcgtgtag gacaggcatg acgagaatgc cttgtcaaca 78840

cgggtgatgg ggaattgatc ggacagggcg ctgggctcaa ggctgcagtc acccaagagt 78900

ggctcagctc cccaggccct aggaaacgcc cgcacagcct ggagctcctg gagtcatttc 78960

cttcatgtct cttcactgca cttacgtaaa gatgccagcc attggtctgg tgatttggag 79020

ggtgcccagt tgcccaacaa gaaatgcaga agaggcctag acaggatttc atcagcaatg 79080

gagagcaggg aagatgtgcc cagaaaagag tttcttttcc ttcctaaaga tggtgctccc 79140

tgcagctact ggggaagcct gcagcgttct ctagggctct gtgtgttgag accagcccca 79200

ccctggcccc ttctgagtgc atttctgctt tgtgacttga tccgtgaggt cccctgagat 79260

gggcagaggg gatgtcctcg aagctggggc agagcctcat ccttgaacgt gaaggatgtt 79320

tgaagaccgt ggcacgatca cgggatgcga tcacggggaa cttcagtttc tctcctcctc 79380

tcccttcagt tatttcactg ggggaaatcc ctcccctgcc cagaatgaaa actctagcca 79440

actcttgact tttccatcac tccaaagtaa ttgaaagtac gttagtctcc acagtggcaa 79500

aacacagtgt gcaaatgcta aataattaga acagccagtc ccatgtgaca gtcaaagctt 79560

ctaactccat tcaaagttgc cgccattccc cttgggggct ggcggggaag ggaggggtag 79620

gagaaacagg aaggttctta ctgagtcggt cctggtgtga gccatgtcac actccctgca 79680

taggtttcaa ggagatactc tttctctctc tctccatggg gaccttattt gaattcttct 79740

agactcttcc cccagcctgc catctccagc tatcctcccc tgaagagccc ttcctctgca 79800

ctggattctg gtggccgtgt catctcggcc ctgtgggagt ctgaagatct ggctgcagcc 79860

tcacctctga ggtcctgctg gttgccacct cttagacatg atctgaggct cccatgcact 79920

ctctctgacc tgtgcccaca tggggcccac gggaaacatg ctggcaagca aactgtgggt 79980

gtgcggacag ttctcaggac tgtagcatct gtcctttgct ctgcccccaa agcaaggcca 80040

gcccatcttc catctgagaa tgggcagatt ctcagtgttc cttggtgggg ccctgatcat 80100

agaccaccag gtccctaacc agaggggaca tgcaccacat gtcctcaacg tattgacttg 80160

aaacattgta ctgggactgt gatgggggtg gccatgtagc cactcccacc acccccaagc 80220

cactctctcc aaggaaatcc tcctaaagat ccctttacac cctccgtgtg gtggggtggt 80280

tctagagttg ggtgcatgtg tcttcagcta ctgacaatgc agaccttagt tggcacctcg 80340

ctctggccca tcctatttgc tgttcttggc actccagtga aactccccat gggccatcca 80400

gttagggtgc agagtggcca cccccttgca ggatcctgcc ttgctggaga gcacagggcc 80460

ctcctggctc ttgtaaaaca ttccgcaggg tacagagagg ccattggtga tgtgaggtcc 80520

aacctccact gtgccctccc tccctccttg ttgtttccaa gcagctccct tgctggggtc 80580

aagcggtggc aaagacagca cagcctccaa tttctgactc acgccaggcc cggctatcac 80640

agctctgcgc tggtgtgtga cagcaaggtg actcacccag tgccgtggca gtgacagtgt 80700

ccagggaagc ctccacatgc tctctgtctc aaggactctg gcatttagtg ggatttgctg 80760

tcactctgag cctttctacc attgccatca ccttgtcaga aactcaggcc gaatctgcac 80820

tcagagctgt gcccaggcag ttgagccaac actcgctcag tgatgttgtt gcatgacaag 80880

gcactgtcac cactgggcct cgtgggcagc gcagtgtcgg ctggatggac ccggagggtg 80940

tctgtgtcat gctagtgcta gtgatgggag ccccctgagc ccattgccta ccctcccatc 81000

cccttagcag ctgcctgggg acagccaatg gcctgggtgt ttctgaggct accacatggc 81060

taccaggaac ctcgagaacc tttctctccc ttgcctacag tcttcacaca ggcctgtgct 81120

ggccagtggt ggggatccag cattcctgtc ttaggtgcag agagtgactg actcattgca 81180

ggcctgggag ataagactga tggcccaacc agcaacatgt atgcatttct cagaggcagt 81240

gacctctatc actgccctca ggaaatgctg gtgattctgg tggcctgagg tcaatgcatg 81300

tcaacgtggc caacttgcct tataaactct tcttctgaac aattgcatgc attgtcctgt 81360

aacagtgtcc tgttgtttat gatgcagaaa ttggtgtttt taaagcacgt tgattttggt 81420

actattgatg tggtcaggaa ctttctcagt ctttcttgtt tggggtgagc tgtggcttcc 81480

taaacaggaa cccaagatac ccccaaaaac tgctcagtag cactgccagc ctccctctta 81540

ccaagtagca cccattcagg gcattctgtg aaaggcattt acccagaagt tgggaggaag 81600

gaaacgtaac attttggggc acctaccata tgccaggcac caggctaaac gtgttcacac 81660

aaattctctt actaaccctc accatccttc tacaagacaa actagtatct tcatctgggg 81720

ttctagatga ggaaatggag gctcagagag gttgaatgaa tgctggtgcc tggatacgaa 81780

ctccgtctgc ctgactccac aacccaggca aagtctttcc ttgaacttcc cagcagccac 81840

tgcttagaca cagtctccac gaccacggct cagcagcaaa ctgcttctct gacctcactc 81900

agcctgtgtg tccttgtgga gtggggcatt cagggcccca gtggagaaag tctttcctac 81960

taggtcatag ccacacctgc atgtgggtgc tgtgcatttt acttagtgaa cttttaccac 82020

cagcatcctc agcaatgaca tttgcagaga agccagagct gaggcacctt agtattcttg 82080

ggacgtgact ttcctgaatg ttttagggaa aataccagaa gacacagaga gcttggtttc 82140

tagcaaacaa taactgtttt gcttttaccc cccttcattt gctgacacat acaccagctg 82200

aggaagcagg catcggagac acccccagcc tggaagacga agctgctggt cacgtgaccc 82260

aaggtcagtg aactggaatt gcctgccgtg actttggggt tgggaggagg gacatggggt 82320

gggctctgcc ctgaaaagat catttaaatg gacccgagcc ctaattcaca aatccaggag 82380

attctaggga gttggttctt atcaaaggtt ggctactcag atatagaaag agccctggtg 82440

gtttttttct aataccattt ctgggcaatt cctaaggcat ttagagttct gaaagaccta 82500

gtccgacctg ggagctgaga atgaatgtct aacaggaact ctaggctggg tatggtgact 82560

cacaccacta atcccaacac aggcgggccg atcacctgag gtcaggcgtt tgagaccagc 82620

ctggccaaca tggtgaattc ctgtctcact acaaataaaa aaattagcca ggtgtccatg 82680

ctggctaaca cggtgaaacc ccatctctac taaaaataca aaaaattagc caggtgtggt 82740

ggcgggtgcc tgttgtccca gctactcggg aagctgaggc aggagaatgg cctgaacccg 82800

ggaggcggag cttacagtga gccgaggtcg cgccactgca ctccagcctg ggcgacagag 82860

cgagactcca tctcaaaaaa aaaaaaaaaa ttagctgggc gtggtggtgg gtgcctgtaa 82920

tcccagctac tcaggaggct gaggcaggac aatcgctcga acccaagagg cggacattgc 82980

agggagccga gatcatgcac tccagcctgg gcaacaagag cgaaactctg tctcaaaaag 83040

aaaaaagaaa ctcaaataca gcgattctca gtgcaggctg ccctctggcc gatccaggag 83100

caaggcctta accatgtcac ccccaagcga ttgcttttaa actttcttct ctgcagcctt 83160

caacccttat gattttcttc tcaggtatca gactgctgtg ttcaagaaag acagctttgt 83220

gtaatcattt atcataaata tcttaagaac tttaaaaatc ctagagattc ctaactttag 83280

gaaatgggag acctgtgata ctgatataat gtgggctggg cttgttttct gtcatttgct 83340

agataaatga acttgaaagc ctactgtaaa atgtggaagc ttctagattg caaaagggct 83400

gggaagatgc tgttcttttc tcctgagtga tgggctctgt ccagtgttca gagctgcctc 83460

tgaggccgtc tgatcctagg agactctgcc tcgttgaggg aattttgagg cctaactaca 83520

cattcctgcc cccagagagg tcacagccta tagcaggctg acgtttctca tctcacatgg 83580

cacagaaagg cacattttca ttcttaggct aacaaagagc ttcaaaaact agaagcttgg 83640

ctcctgtttc ttttaggtca tgtttttcaa cttaggtaaa actagaggtt ttgataacgt 83700

atgacctcta gaaatcattg ctttccataa acagaagtgg atctgagttt tttctactga 83760

tttttagtgc aggctatgtc tacatgccca cagaacatat tccatgcaag agaaaaagcc 83820

caggccacca tctttgctgg gaacttgact tttgcgctca ctgaatttta agctttctga 83880

cagcagcctg gaatcatgga gggataaagt acctattagt aagatggaaa aaggtgtttc 83940

aggatggagc tgcagtcttt tgagagtaag ccatgggaag gcctgtatac gatgggtggg 84000

cttttcttct gtaagtgtct agagaccagg cctcctgaag agggcatggg ggcttaactt 84060

acctggacta ctgtgtttac aatactcatt tatctcgaac tcctcctaac ccctgagaat 84120

tgctacattt aatatttgct gagtacttcc tagcattctc ccaaccaggc tgggtgccgt 84180

ggctcatgtc tgtaatccca gcactttggg aggccaaggc aggcagattt cttgaggcca 84240

gaagtgtgag actagcctgg ctgacatcgt aaaatcccat ctctactaaa aatacaaaag 84300

ttagccgggc atggtggtac acacctgtaa tcccagctac atgggaggag taggaggcag 84360

gagagttgct actgaggcag gagaattgct tgaacctggg aggtggaggt tgctgtgagc 84420

cgagatcata ccactgcact ccagcctggg cgacagagtg agcgagagtc tgtctcaaaa 84480

aaaaaaaaaa aaaagaacgt tctcctaacc tggcttcttc ctccaggggt gtaattaatc 84540

atgtcagttt cctcattgat acacacacac ccccacacct acacacgctg tacaatcctg 84600

tatccattac ttttcaaggt acgtttacta tttatgtttg ggatccttgt ctctttttta 84660

atagtgtttc ttaaagtctt gtattatatc agagtactgt aacatcacag tcaagagcac 84720

tctagtaagc tctaggagga aagcgcctta tggaaggcag tggagacctg tcctgttggg 84780

gcggcatagg ggcagcccct gtctctggtc agttctggcg ctcaggctca gggtttcctg 84840

taggctgctc ttcccagaga ctgaccaagg gctctcataa ggcacctgca gaccctgtaa 84900

gaagcagaag tcagtgtttc ctgacaccag ttgatacgtt caggatccac tgattaaact 84960

acctgctgtg tggcatgcat tgtggtcgat gccagaaata ggaattggag gggcccatga 85020

gcatggccag tatcagactg aaggtgctgc tggaggtgct gctgcgctgt gaccaggcct 85080

cttggggatg agcccgtggc aaccaccctg cctccgatgg ggtgggccca catgttacct 85140

gtgtgtgtcc atgaccacac cttcctcccc cacctcatcc aaatttcttt cttttccaag 85200

cccccgaatc cttcagggct gcaggttttg tttaaagcag agctggtgag ttgcatgggt 85260

ggttgtgttg cgactagatg gggtgttcaa agagttggga gttaaaaaac ataaagggtg 85320

cttattagga gaaccaagga gtataattgt cctgttctta atatgcagcc agattaatga 85380

atgtcacatg aatgaaccag aaaaacatga aatgtgccct tgatcagctg ggttggtgtg 85440

cagcaagctg tgtgaccaag ggacagcagt gctcctgagg gccgtcactg tctgctgtgc 85500

agagcccttc ctcccacggg agcctacctc acctgtgcaa ggggcttgtc tgtggtcagt 85560

gacctggata gatctgaatg gggcttattt tttgaggagt cttatggcag gtctatcagt 85620

aaagactcta ttcttgatga tcacacattt tggattttcc aaatctatca gaggatgggc 85680

ttgaggcaga gtttgtagac actagtttca ctggtttcat ttaccaaaaa ggggagcaga 85740

agtcaagtat ggtggctcat gcctgtaatc ccagaggcag gagaactgct tgagcccagg 85800

aattcgagac cagcctaagc aacataagga gacctgtctc tacaaaaata aaaaataata 85860

tcttagtcag acgtggtggc gtgcctctgt ggtcccagct actcgggaga gtgagatggg 85920

aggatcgttt gagccctgga gttaaagttg caatgagctg tgattgcacc actgcactct 85980

agcctgggtg acagagcgag accctgtctc aaaaaaaaaa aaaaaaaaga aaagaaaaga 86040

aaaaagaaag aaaaaaactc atgcctgtaa tcccagcagt ttggggggct ggggtgggcg 86100

gatcacaagg tcaggagatc gagaccatcc tggccaacat ggtgaaactc catctctact 86160

aaaaacacaa aaattagccg ggtgcggtgg cgtgtgccta taatcccagc tactcaggag 86220

gctgaggcag gagaatcact tgaaccaggg agccggaggt tgcagtgagc cgagatcgcg 86280

ccactgcact ccagcctcgg caacagagtg aaactctgtc tcaaaaaaaa gggaggcggg 86340

ggaacagtga gaggtaggga gaggaaaggg gattctcgct acacccaagc caggtaccat 86400

ctagaggcta gactctttgg gaagctcaaa ttccctagaa agcaggagaa gcttccttag 86460

ccctcccgct ttcccagtag attaagccca tgagcccaag gcggctctag atgtgtgaca 86520

tgctctgtgc acaaccagag cccatcacag gcagaggaat aacacccaca ccagaagggc 86580

cctcagaggt caccacgtcc aggaaccctc cttacagatg aggaaactga ggcccagaga 86640

ggggaggacc cagggagctg gtggcagcta gaccaggaga gttgtcattc caagcaagca 86700

aaggcaacga gatgagccca gagctgtgct cccatctctt tgttaggggg ctaggatgcc 86760

ctctcaatgt cattttgtcc aggatgatgc tccctctctt aagcaattaa tgcgcccttg 86820

ttaacctttt gctatcgctg cctcttcaaa ccagaggagt tgagagttcc gggccagcag 86880

aggaaggcac ctgaaaggcc cctggccaat gagattagtg ctcacgtcca gcctggaccc 86940

tgcaaagagg cctctggggt ctctgggctg tgcatggggg agaaagagcc agaagctccc 87000

atcccactga ccgcgagcct tcctcagcac cgtcccattt gctcagcgcc tcctccaaca 87060

ggaggccctc gagagccctc ccaggagtgg ggacgaaaag gtggggactg ggccgagaag 87120

ggtccgacct ttccgaagtc cgccacccct gcgtatctcc acacagagcc tgaaagtggt 87180

aaggtggtcc aggaagtctt cctcggagag ccaggccccc caggtctgag ccaccagctc 87240

gtgtccagca tgcctggggc tcccctcctg cctgagggcc ccagagaggc cacacgccag 87300

ccttcaggga caggacctga ggacacagag ggtggccaac acgcccctga gctgctcaag 87360

caccagcttc tgggagacct gcaccaggag gggccgccac tgaagggagc cgggggcaaa 87420

gagaggctgg ggagcaagga ggaggtggat gaagaccgcg acgtcgatga gtcctccccg 87480

caagactccc ctccatccag ggtctcccca gtccaagatg ggcagcctcc ccagacagcc 87540

gccagagaag ccaccagcgt cccaggcttc ccagcggagg gtgccattgc cctccctgtg 87600

gatttcctct ccagagtttc cacagagatc ccagcctctg agcccgaggg gcccagtgca 87660

gggtgggctg aagggcagga catgccccct gagttcacgt tccacgtgga aatcacaccc 87720

aacgtgcaga aggagcaggc gcacccggag gaggattcgg gaagggctgc atttccaggg 87780

gctcctggag aggagccaga ggcccggggc ccctctttgg gagaggacac aaaagaggct 87840

gagcttccag agcccactga aaagcagcct gctgctgctc cgcggggaaa acccgtcagc 87900

cgggtccctc aactcaaagg tctgtgtctt gagcttcctc gctccttccc tggggacctc 87960

ccgggcctcc caggctgcgg ttactgccac tgagcttcag gccttcccaa ctcctgctgc 88020

ttccgacatt cctaggacgc cactaaaccg actcctgggt gcagctgctc cactccctcg 88080

gtctcctccc gtgctcaggc tgtggccaca cgcgcccctc acgcttgcct gccactctgc 88140

atgtcaccag cacccccacc gcgtgctccc caccttgttt gactctctgg ccacttgatg 88200

tgtccacaat ggcccatcag cccacaggag gttggtgggt gccctccacc ggcagggtgg 88260

cagcttccct cacggtgtct agaactcgcc aaccctccca tgtaggcaca agcagcccca 88320

ctttgcagat gaggaaacgg aggcccagag aagtgcagta acttgccgaa ggtcactgag 88380

tagtaagtga cagagccagg tttgggatcc aggtaggttg gctctgaaag acatacctgt 88440

cctgcatccc acagcaggac aaccctccca ggaggtgctg gagtgtggac tcctaacacg 88500

gagatgggca gggtacacac agcaggcgac acacacagca ttcagaggtg gcccagagcc 88560

cacactgtgc ctttggccca gcaccctgcc cccacccgct ctgccttgtg gcaggaagat 88620

gaggagcaga cacaagatct ccctggtcca catgccgcca cctccctcag cagaggacga 88680

ggagatccac atgctggcat tgcagggggc tgagcagggc ccatcttgag ccctcaggag 88740

catgaccaca gcagccccac agggtgggat tggtgtgggg agagtcccaa gtatcaggga 88800

gaggagagtt ggtgtcccgc gggagacctc atagccacaa ggcaagcttg tccataaatt 88860

tggggccctt ggaatttcac agttatttgc caagcccaga aatggatgtt actgaagctc 88920

acagttgcaa gcatctgtta aatttttatt agattttact tttagagaaa actttgaaat 88980

gctatagata aagaagcctg tgttgaaaag ttaagacaga ggccaggcac ggtggctcat 89040

gcctgtaatc tcagcacttt gggaggccga ggcaggtgga tcacttgtgg ttagaagttc 89100

gagaccagtc tggccaacat ggtgagaccc tgtctctact aaaaatacaa aaaaattagc 89160

tgggcgtggt gacgggcacc tgtagtccca actacggggg aggctaaagc agaagtgctt 89220

gaacccagga ggcagcagtt acagtgagcc aagatcacac caccgtaccc caagcctggg 89280

cgacagagca agactctgtc tcaaaaaatg aaatgaagta aaataaaata aagttaagag 89340

agaaaaagta tatcctatat cctataacag taggggacaa ataactgacc tgacaggtta 89400

ctacaatatt tcctgaaatg atgttttctt gactaccagc ctactggagg tgtgtctggg 89460

ttaaaaaaga gttccatggc ccagtgactg cgggaaaaaa aaaaaaaaca gactaaacta 89520

agttaaacag gcttttctgc tgctggactt gtcagaacct ttaacgtact aacagtcatt 89580

gtgaccctct gagaaggtca caagtgggtt tcccaaactt actcgattct acctgctaac 89640

atttcctgga ggaggacttg ttcagtgctt ctgcagtttg ggaaatgttg atttagcagg 89700

ggatgttgtt gtgccatgga tggtgctggc tgatatgggc aaaggaaaga acacgtgagt 89760

cagattcgcc tggggctctt attaaagtgc aggttaccgg ggccactttc ggcttacaaa 89820

cccagttgtg gggtaagcct gggagtcttt gagcaggtga ttctgccata tagtatagtt 89880

ggaaaacctc tgggcatact cattgctggt ccctctagaa atccaggtga caatagccaa 89940

cgagaagctc caagagaccc gattgtctgt ggggtagagg gaatatgata ttaaaaccaa 90000

agaaaaaaat ctatcatcag ttttcagcag tgactgtcaa gagaaggaga agggtgagtt 90060

agcactgatg ctggcagaca ggccagtggg ttggtttcac cagggagtgt gatgaaggct 90120

gatgttatct gggatgatgt atgatggtaa ctggtttgta gctaactggg ggaagcggtg 90180

aggatttgtg cccttcgaag accagcaagt ggcaagaaac ccaccaggcc tggctcagcg 90240

ctaggccggg cttggctcgt ctgagagcag ctggggctgg tggccaaagc ccctattagt 90300

gaggggtaag ctttgggggt acaaccagca actaggggac aaagacaagc ctgccaggct 90360

ctcctattct ggaggcaggt gaccaggaat ggagatgggg tggtcagcat aagatggcca 90420

ggaaggtggg aatcagggct gctggcaatc tagccgcatg ggcaagggag ctgggtgact 90480

ccaggcagtt tccaaggccc agagggtgag caggcacctc gcagggaacc agggccaagc 90540

ctggctgcag tgtggagaca actcacccac ccccgtcctt ggatcttgca ggaggctggg 90600

tcctcactga gctaccaata tccatggccc tgaggctttt aaaacacctg tccgtggagt 90660

ggggctggtc ccagtggggt gaggctgacc ctggcagaaa cagggcagga gcctgtgggt 90720

tagggagact gcaccttcct tagatagcct ccgtgtcatc atgtccctgt gacagtttct 90780

gctgcgtccc ttctgcatgg tcccaccctc agccagcctg ctgccccctc ttgccaggtt 90840

gctctaatca gtgaccccag tgtgctatgc tgatactaac aatgtgagac ctagcacatt 90900

caagggagaa gagaaccaac tggtttccac cagacccaac taaacaaaac acggacctat 90960

cccagagaaa tgcaacttca ccacagctgg ctgtttctgt gaacagtgaa aatggagtgt 91020

gacaagcatt cttattttat attttatcag ctcgcatggt cagtaaaagc aaagacggga 91080

ctggaagcga tgacaaaaaa gccaaggtaa gctgacgatg ccacggaact ctgcagctgg 91140

tccagtttac agagaagctg tgctttatgt ctgattcatt ctcatatata atgtggggag 91200

catttgtcac taaagcacag ctgtcattta aagtgctttg tattttgggg caggcttttt 91260

aaaagtccag catttattag ttttgatact taccccaggg aagagaagtt ggcaggttca 91320

tgaagtcatg ctgctaattc cagctttctt agtgtagttt cagtgagacc ctgacagtaa 91380

atgaaggtgt gtttgaaaac caaccccagg acagtaaatg aagttgtgtt tgaaaaccaa 91440

ccccaggaca gtaaatgaag ccatctgctc actgcataaa ctgcaccctg atctttgccc 91500

atccttctca gtatttcact tcacccatcg tttactccct caatgacttg gtgtctggga 91560

aaatgctccc gtaattgcac agtggcgttt ttcctggaaa atcccaccat ggctctagat 91620

aagacctatt tttcttaaag gtatctaaaa tttccagcat aaattctgtc tgaaacagct 91680

gaattttaat cagtcctgga gcccagaggg catctccagt tgccacatag ctctgagcat 91740

tcggtggtgt gttggtgtgt tgggggctgc tcccggaagt gcctgcagag tcagggctcc 91800

ccagcctcac ctagtgaggc agcggaaggg cctgcgggaa tttggagagc tgccctttgg 91860

gtccctgaag tgatagtgac agctgcttgt caatcatggt gcacatttag tgccgggggc 91920

aggggtcagg gaataccagc ctcatgcatg catgcattcg ttcattcatt catgcagcac 91980

acatgggtac gacatccctg ccctggagtt gcctagattc tagggagggg aaagatctat 92040

taccgtggac ctcggccagg tggggagtgc tgctggtgga gaggggccat gtgcagcgag 92100

gaaggagggg tcatcaatac ccccacccca gctttgcttt cttgtcatca gccccagggc 92160

cccagcctgt gtccctcctc tcccactact gcttcatctc ctgggttctc cttaccaagc 92220

ctggccacac agagggtctc ggccgcttcc atggggaatt ggaaagcaat aagataacat 92280

ccccaagaag cccaatgaag tctgggtcag gacccttctc tgagctgact cgctctcgga 92340

aacactttga ggcttagcct ccccactttg ttttctgaga gcgctacctc ttcccctcca 92400

aacatcccct tctcctctgg ggccatgccc acccatcaaa atcccccatg ggtaggatga 92460

attgtgggtg tcagtcacca tctatcccac atcccggttc caggtccccc caccccccgc 92520

cgcctccaca gggacaggta tgcagacacg tgtctctggc tgcttcctca tgtggaatgg 92580

gttcaaaagt tagcagtgtt gtttacactg gcaaactgaa aaagagaaaa cattggaggc 92640

ttggcacagt ggctcatgcc tgtaatccca gcactttggg aggctaaggt gggaggacct 92700

cccgagccca agagttctag accagcctgg gcaacatagc aagaccccat ctctaaaacg 92760

aaaatttaat tggccaggca gaggtgggag gatcacttga gcccaaaagg tagaggctgc 92820

agtgagccgt gatggcacca ctgcactcca gccagggcaa cagagggaga ccctgtctct 92880

aaaaccaaca atgacaaaaa aagagttaac attggccaga ttaggattca ccaaatagtg 92940

ttaatattag tttgatttga gactttaatc agaaagcaca tgtgtggtgg gggtgggcat 93000

aacctaagat agaatctttc caacgtgggg tgggcacact cctgattgag tctatcagtg 93060

tggtggaaga ggccatgggt taatgggcag gcaaaaaagc cccttgcctg gaattgagta 93120

gaaagtaagg cccttcagac ccatgacaca cttggcgaca ttttcttgag taacatccta 93180

agattcatgt accttgatga tctccatcaa cttactcatg tgaagcaccc ttacaccagt 93240

ggtctccaaa ttcaggggca caatcacatc taacaggctg gagaaagaac atactagaac 93300

ttccattcct ttgtcatgtc ctcttctaaa gctttgtcag atgtgagttg agtaagttgg 93360

tcatataaga agtatgactg gggaggatgg tcactttcct gttcttactg atcagatggg 93420

atgttaaggg tacctgattc aaacagcctg gagatcactg ctttcaacca ttacctgcct 93480

tatttatttt tagttactgt ccttttttca gtttgttttc ctcctccatg tgctgacttt 93540

tattttgatt ttatttatgt ttatgtttaa gacatccaca cgttcctctg ctaaaacctt 93600

gaaaaatagg ccttgcctta gccccaaaca ccccactcct ggtagctcag accctctgat 93660

ccaaccctcc agccctgccg tgtgcccaga gccaccttcc tctcctaaat acgtctcttc 93720

tgtcactccc cgaactggca gttctggagc aaaggagatg aaactcaagg taaggaaacc 93780

acctttgaaa agaaccaggc tgctctgctg tggtttgcaa atgtggggtg ttttttgttt 93840

tttgtttttt tagcctcaaa gacctttctt caaatgagct ctgacacaga agcaccgtgt 93900

aaatagttag aattctgggc aaagaggaaa agagagctgg gggccatacc tttcagcacc 93960

ccacaggctc tcatagcagc agcccctcag acacctggtg ggaccttggt ttcgaaattg 94020

ctactctaag gctgggcgcg gtggctcaca ctgtaatccc agctctttgg gaggccgagg 94080

agggtggatc acctgaggtc aggagttcga gaccagcctg gccaacatag tgaaaccctg 94140

tctctactat aaatacaaaa attagccgag catggtggtg tgcacctgta attgcagcta 94200

ctcgggaggc tgaggcacaa gaattgctcg aactccagta gcagaggttg cagtgagcca 94260

agattgtgcc actgggctcc agcttgggtg acagagcaag actctgtcgc aaaatttttt 94320

ttaaaaacaa acccaaaatg gctactctca ttgggttcct ttgcccattc ctgattttgg 94380

taacagaaat gcttccagat tgccctgatc tgggtaggac agcatcaggc cacagcaaca 94440

ctgccctgtg agcccactcc cccctggact agcttgtggt ccttagttaa tgtcagtttc 94500

ttctttgagt ttgtgttatg tctaagggtc atctgctggg tagccgaacc cagggactgc 94560

cctagtccct agactatgcc atgcccgact ctgccagctt tgtcagtgat gctggtgctc 94620

ccctcctcgg gtgctcacct gctctgagca cacccaagga gttcctgacg ccttagggtt 94680

gtatgggaga gaatgaaaga acacaacgta gctctcttta gcatccttgg ccaggttcaa 94740

cactgtctcc aagggcctct ggtggaacca accaccatca gccaaataaa tccataatta 94800

gagtcagaaa atggatgtcc gcctatgcat agtgcactaa tgtcctgccg attgattgac 94860

atggagtgga gagtgacttg atcattgctg taagctctgc tggccttggc acaactcatg 94920

ctgataacca gtgcacatag ttcctctgag aggaaatgtc ctcagggaac ttggagtttg 94980

ggtggggatg tggatttgtg tgcccagcaa gccctcatga ttgtagcaga cacttgtggc 95040

atctagaagg caaagggtca ccccagtctt aaccgcgttt tgagtcaagg tgcggagtgg 95100

ggctggtgtt gactcggtgg cagcaacttt tcccaatggt gaaaaaaccc tcgaccctgt 95160

ttcatttaca gggggctgat gggaaaacga agatcgccac accccgggga gcggcccctc 95220

caggccagaa gggccaagcc aacgccacca ggattccagc aaaaaccccg cccgccccaa 95280

agacaccacc cagctctggt aagaagaatg ttctcttgaa tcttagagga agctgaagct 95340

ctcagaggta tagccttcat tttaggaggc cttaggccac tgagagtgaa cggcccctgg 95400

cagctggtca gcaccttgca gttcactaag caccagagtc ttcatttcct tcgcagttct 95460

tctgatttct gaggcagatg ttgaatcccc acgtttttgt ttgtttgttt tgttttgttt 95520

ttgagatgga gtttcgctct tgttgcccag gctggagtgt ggtggcgcaa tctcagctca 95580

ctgcaacctc cacctcctgg gtttaagcaa ttctcctacc tcagcctccc tagtagctgg 95640

cattacaggc acctgccacc acgcctggct aattttttgt atttttaata gagacggggt 95700

ttcgccatgt tggccaggct ggtctcgaac tcctgacctc aggtgatcca cttgccttga 95760

cctcccatag tgctgggatt acaggcgtga gccaccactg ccagcctgaa tcctcacttt 95820

ttatcagtga agaaattgag gctgattctg cagcacgata aaaaaatata tagaaaaagg 95880

aaaaaaaaaa gaaagaaatc gagcctctga gagtttgctt gactgagtct aaccagctca 95940

ttttaagcct gaggaaaatg tggtcatatg gctactaaat ggcagctctt ggagcctctc 96000

tggccccaag tccagggttc cacagaggca gccccagcat ggtgtgtttg cagtccccaa 96060

atgcgaccgg agacaaatgt ctctggagac agagcagcag cctggatagg tcacaatggg 96120

tgatgtcact tagggctcaa cccccaggca gcttaacttg ctggggacgt taggagtctg 96180

ctgcaaaacc tgagggtctt agctgagcag tcgcaggctg ggcccattgc cctgggctcc 96240

tgtgagtaaa acccagtcag ttttgagtac ccagtaaggc atccatctag ttattttgca 96300

gccggggtgc tattaagaat agtcacggct gggcatggtg gctcacgcct gtaatcccag 96360

cactttggag gctgaggagg gtggatcacc tgaggtcagg agttcgagac cagcctggcc 96420

aacatggcga aaccgtctct actaaaaata caaaaaagtt agctgggcgt ggtagcagat 96480

gcctgtaatc ccaactactc aggaagctga ggcaggagaa tcgcttgaac ccgggaggcg 96540

gaggttgcag cgagccgaga tcatgccatt gcactccagc ctgagcaaca aaagtgtgag 96600

actctttctc gaaaacaaac aaaacaaaca ggccgggcac agtggctcat gcctgtaatc 96660

ccagcacttt gggaggccga ggcgggcgga tcacaaggtc aggaggtcaa gaccatcctg 96720

gctaactcag tgaaatcctg tctactaaaa atacaaaaaa ttagccaggc ttggtggtgg 96780

gcacccgtag tcccagctac tcaggaggct gaggcaggag aatggcgtga acccgggagg 96840

cggagcttgc agtgagccaa gatcgcacca ctgcactcca gcctgggcaa cagagtgaga 96900

cagagtgaga ctcaaaacaa acaaacaaaa aaacgaagaa aacagtcatc ctctttgggg 96960

attagggaca gcctgcctga gcacttctct ctcccattgc cccagtgaag tgttccacca 97020

ttgggtttag accctgcacc acgtaggggt gtctgacctg cacttgctcc ttggcagtgt 97080

gcaggcagcc tgtggctctt gctgcaggct gtggccaaag cctggcctgg atcttggtga 97140

ctctacttct ccctggcctg agggagctgc ccagagcctg cctgtcacct gctgcctgtc 97200

tttgcagtgg catttcacac acacgtggtg cggtggcagc cccaaggatg gccgttcact 97260

aaggcccgtt gtttttgtct ttttgcttcg tgttttctgg cctggtgttt ttctcatata 97320

cgtggtgatc cagggataat tcccagaatt ttgacaggat tttaggtagg gtttggatcc 97380

tgctgttttt tcacttaaca tggggctagt tgactcacac gctgtttttt gttgttgttg 97440

ttttgtgtcg cccactgtgt cgcccaggct ggagtgcagt ggcatgatct tggctcactg 97500

caacctcttc ttcccaggtt caagcaattc tcctgcctca gcctcctgag tagctaggac 97560

tataagcaca ggccaccaag ccctgctaat ttttgtattt ttagtaaaga cagggtttca 97620

ccatgttgac caggctggtc tcgaactcct gacctcaagt gatctgtcca cctcggcctc 97680

ccaaagtgct ggaattacag gggactcaca ctttgtaaca acctgaaaca aggtcatgca 97740

tttccctttg ggtcttacct gctcttcggt ggctgcctgc atgtggagag accctccccc 97800

ttgggcctcc tccaccttgt ttcagaacgg ggcctctgct gggccggccg tgggtgcctg 97860

ccatgtgaag gactcattaa ggccccgttt aaacctgatg ataatgaggt ttttgtggat 97920

ttttctcttt aagcgaccaa gcaagtgcag agaaaaccac cccctgcaga gcccacatct 97980

gagagaggta ctcaggagcc tgcttcactg ggagcagcct ccctttgcat gtgtggctgt 98040

tcactggctt gtgttcctag agccgacagg acccttttct gcaatgcagg gttcacacag 98100

ggttcgcagc ttgaagatgg agcagtccga attctcttcc ccagattttg tgcagctgtg 98160

tttgtccgat gggctttcta atcctgtgtg ctctccttga cttcagggac aatggcatta 98220

caggcatgaa ccaccatgca tggctgtctc cctatttttt tcagctgaag acataggctt 98280

agggaggtca ggtgacttgc ccaagacctc tctgcaagta agaggcatga aaaggatttg 98340

gagccaccac caccaagccc attggtcacc ctgggtctct gaagtcaggg aagcaggagg 98400

atgggagatc tcaggaggca gagaggctga gcctggaggc cctggaggcc gaggccccat 98460

ctgttgtttc cttatgtgga aaagaagagg cttcgtgtgt tctattgcca caaagcttga 98520

ctacttcagg aacatccaag acatggaaat cagcagggca cggtggctaa tgtctataat 98580

cctggcactt tgggaggctg aggtgggaga attgcttgag gccagaagtt caagaccagc 98640

ctgcgtaaca tagtcagacc ccgtctctat aaaaaacatt atttaggccg ggcgcggtgg 98700

ctcaagcctg taatcccagc actgtgggag gcagagacgg gtggatcacg aggtcaggag 98760

atcgagacca tcctggctaa cagggtgaaa ccccgtctct actaaaaaat acaaaaaact 98820

agccgggcga ggtggcgggc gcctgtagtc ccagatactc aggaggctga ggcaggagaa 98880

tggcgtaaac ccgggaggcg gagcttgcag tgagctgaga tccggccact gcactccagc 98940

ctgggcgaca gagcgagact ccgtctcaaa aacaaaacaa aacaaacaaa caaaaaaaaa 99000

cattatttaa aaaagagaca tggaattctt taaatcctaa aaactggtgc tggctgggcg 99060

tggtagctca cgcctgtatt cccagcactt tgggaggctg aggcaggtgg atcacctgag 99120

gtcaggagtt caagaccagc ctggccaaca tgataaaacc tctactaaag aagtctctac 99180

tggcccggcg tggtggctca cgcctgtaat cccagcagtt tgggaggcgg aggcgggcag 99240

atcaggagat caagaccatc ctggctaaca cggtgaaacc ccgtctctac taaaaataca 99300

aaaaattatc caggcgtagt ggcgggcgcc tgtagtccca gctactcggg aggctgaggc 99360

aggagaatgg tgtaaaccca ggaggcggag cttgcagtga gccaagattg cgccactgca 99420

ctccagcctg ggcaacaaag cgagactcca tctcaaaaaa aaagaagtct ctactaaaaa 99480

tacaaaaata cagtctctac taaagtctct actaaaaata caaaaattag ccgggcatgg 99540

cactgcattc ctgtaatccc aggattccca ggattctcct cccagccacg ggaggctgag 99600

gcaggagaat cgcttgaacc cgggaggcgg agcttgcagt gagccgagat cacgccactg 99660

cactccagcc tgggtgacag agcgagactc catctcaaaa caaaacaaaa caaaacaata 99720

acaacaacaa aactagtgct tattcgtcgc tgaccaagct gcccattggc tacatgggtg 99780

cttcaaacaa agagctgccc ttctccagct ctggccagca ggtatgtgtt acagcgaatg 99840

ccaggggcag cggcaggggc attcttgtgg gaagcttcca gaccagcagg aaagctaagt 99900

tctcagactg caggggagca aagcacacct gggcacagag tgaggcctgc agttctcaga 99960

cttcagtctt tggggagctt gagaaaaatg agcttttcag gccccacccc tagagattct 100020

gctctatcca ctctcagtgg ggcccagaaa tgtgcacttt acaagtccta ctttcctcct 100080

tgaaagctcc agagattctg atgcagggtt ccgtgggcca gacttcggaa aacatggacc 100140

catgagacag aatagcagag tgttgaagtg taacagggac ctgggaagtg cagtaacaga 100200

agcaaatctg ggggtaaagg acacccagag gaggaaggga cagcatctgc gtggagagga 100260

gaccccccag cagcttctgg ggtgttggaa aggtgcactt actgctatgc atggcaggtg 100320

gggaactgta tggcagggca cagcagcatg aagtggcatg gctcatgtgg acagttaggg 100380

acaagcaggt atggagcagg catcctgttc tggagcccag atcccacaga ggagccaggg 100440

agctggcagg agccctgaac tagccgaaca gctgaacatt caccctgtgg agaaagggtc 100500

agaagcgtcc aggcttgagg gcacagctgg gtcccgtcac tgtgtcaccc ttatttagga 100560

taaaggccct aaagaattgc actagagatt ggcaaagcat atctaccacc tcctggagcc 100620

accctggctg cagggattat aattatatcc attttcaaat taaggcctct gagctcagag 100680

aggagaagtg acttgtctga gaccacacag cttgttggag cccatctctt gacccaaaga 100740

ccgaggggcc gagttggcca cctctctggg aactggtgtt gtatagtggt tgatggtttt 100800

ccattgcttt cctgggaaag gggtgtctct gtccctaagc aaaaaggcag ggaggaggag 100860

atgcttctcc agggcggccg cctcctgctg ctgtagctgc gcttccaacc tggcttccac 100920

ctgcctaacc cagtggtgag cctgggaatg gacctgcggg acgggcagcc cccagggcct 100980

tttctgaccc ccacctgagt cctggcttca ctcccttcct tcctccccag gtgaacctcc 101040

aaaatcaggg gatcgcagtg gctacagcag ccccggctcc ccgggcactc ccggcagccg 101100

ctcccgcacc ccgtcccttc caacccctcc agcccgggag cccaagaagg tggcggtggt 101160

ccgtactcca cctaagtcgc cgtcttccgc caagagccgc ctgcagacag cccccgtgcc 101220

catgccagac ctgaagaacg tcaagtccaa gatcggctcc accgagaacc tgaagcacca 101280

gccgggaggc gggaaggtaa gagaggctgg ctgcgcgtgg agatgtgggg ggctgcgcct 101340

ggaggggtag ggctgcgcct ggaagggtag ggctgcgcct ggaggggtag ggctgcgcct 101400

ggaggggtag ggctgcgcct ggaggggtag ggctgcacgt ggaggtacgc ggctgaacgt 101460

ggagccatgg ggctgcgcac ggagacatgg ggctgcgcgt ggaggtgcgc ggctgcgtct 101520

ggaggtatgg ggctccccgc acctgggctc ggctaccacc cccgcataac accccggtcc 101580

catccagacc ctcttcaagg aaatttagtt ctttattggg ctctccacta cactgagagt 101640

gctctcctca ggcgagagta cgttctggct cttctcttgc cccttcagcc cctgttaatc 101700

ggacagagat ggcagggctg tgtctccacg gccggaagct ctcatagggc acccacaggg 101760

gctccccacc ttccttctgg gtagaacacg ctgctacccg taggtgggca tctccactta 101820

tgggccatct gcttaggttg ggttcctctg gattctggga agattggggg ttctgttttc 101880

atcagctgat tcttctgggg gcaagtgggt gctcgccagc tctccagctt cctaaaggtg 101940

gagaagcacg gacttccagg ggcctggcct ggaccccttt ctctgctcct gtccctgtgc 102000

ccctcatctg ggtgcgttag gctgacatac aaagcaccgc agtgaaagag cagcagtgtg 102060

cctcctcacc agccagatgt gggcggtggg tatcttccaa ggcctctctg tggcggtgcg 102120

tagccacctc cgccctgcgc cgccagggtc ttctctctgt gtgtgctcct ggtggctctg 102180

cacacgctca tcttataaga acaccatggc ggctgggcgt gatggctcat gcctgtaatc 102240

ccagcatttt gggaggccga ggggggcgga tcatgaggtc aggagttcga gaccagcctg 102300

agcaacagag tggaacctcg tctctactaa aaatacaaaa attagctggg cgtggtggta 102360

gcgcatgcct gtaatcccag ctactcagga ggttgaggca ggagaaccgc ttgaacccag 102420

gaggcagagg ttgccgtgag ctgagatagt gccattgcac tccagtctgc gcgacagagt 102480

gagactccat ctcaaaacaa gaaaagaaaa aagaaagaaa gaaaagaacg ccgttgctta 102540

gggcccagcc tgatgacctc atatttcact taatcacctc tctaaaggcc ctgtctccaa 102600

atagagtcac attctaaggt acggggggtt agggcttcaa catatgaatt tgtggggacc 102660

acagttcagc ccaggacccc cttcccacca cccagcagag ctggggaagg gtgaagagga 102720

ggctgggggt gcagaggacc acggctcact ctgaggctgc agatgtgctg ggccttctgg 102780

gcactgggcc tcggggagct aaggggcttt ctgaaaccct gggcctgtgt gtcagcttgc 102840

cgcccccacg caggcgctct ccacaccgtt gaatttcttt tttttttttt tttttttgag 102900

acggagtctt gctctgtcgc ccaggctgga gtgcagtggc cggatctcag ctcactgcaa 102960

gctccgcctc ccgggttcac gccattctcc tgcctcagcc tcccgagtag ctgggactac 103020

aggcacccgc cacatcgccc ggctagtttt ttgtattttt tagtagagac ggggtttcac 103080

cgtgttagcc aggatggtct cgatctcctg acctcgtgat ccacccgtct cggcctccca 103140

aagtgctggg attacaggct tgagccaccg cgcccggccg aatttcttat cacttgggcc 103200

tgagcctggg ccatgtggag ggagggtggc caccagtgca tgtgagcacc ttgcctcaaa 103260

ccctgccacc taccctggcc caggcttcga tgcaggagcc cccctgcccc tgaacaagcc 103320

tgtgggtgca gcatcgcatc ccgtcaggat ggaaatggac ggttgggtta aaagagatgc 103380

atgtgtagac cctgcctctc tgcatcaagc ctcctttgag tgcccctgcg tgccagaccg 103440

tgcatagagg tggagaagac tcagctgtgc cccggagcac ctcctctcat cgaggaaagg 103500

acagacagtg gctcccctgt ggccgtgggg acaagggcag agctccctgg aacacaggag 103560

ggagggaagg aagagaacat ctcaggatct ccctcttgat ggcaaatgat ctgggttaaa 103620

ttaaaagtcc ggcctctccc tgcttaggca tgtggagctt gtagtggaag agggtctctg 103680

gaccctcacc taccacaatg gcctggttag aggccttggg gaaataactc acaggcgacc 103740

cagggcctct gtcctgtacc acagctgagg gaaactgtcc tgcgcttcca ctggggataa 103800

tgcgctccct cgtctccaga ctttccagtc ctcattcggt tctcgaaagt cgcctccaga 103860

agccccatct cgggaccatt gtgaccttca ttctccaggg tgcctggccc tggtgctgcc 103920

caagaaccca gaggggccct cactggcctt tcctgccttt tctcccattg cccacccatg 103980

tacccccatc ctgctccagc atccagactg ccatccacgc atacccagga tctcctcaag 104040

tcacatgaca ggcagtaccc tcaaagtgct cccttccccc cagtctgaat ctgctgctcg 104100

ctgtctgggg ttccccgccc atgcaccccc gggggcccct gggttctgcc atgccctgcc 104160

cagtgtccca cagcagggaa tgtccttctc tccttatctc ttcccttccc ttaaacccaa 104220

gttcagttgc catctcctcc aggaagtctt cctggatttc cctctctctt ctcaaagccc 104280

ctgaaaaccc tgacgacact gaacatgcgt gtgctgctcc ctagtctggg ccgtgactga 104340

gggtgaaggc cgagtctcac gcgtttttgt agcccccaca agactgcgca ggtggccggc 104400

cctcactgaa tgcggggtta atttaactcg ggctctgtgt gagtggatga ttcaggttgc 104460

cagagacaga accctcagct tagcatggga ggtagctccg ctcttgaccc tgagttcatc 104520

tgaggttgac ttggaaggtg tgggcaccat ttggcccagt tcttacagct ctgaagagat 104580

cagcaggaat ggggctgagc agccaagaca gctttccatc cagaactgtc cctcccactc 104640

tgtgactgcc ctgcctgtgc ccatgagggg tgagagtcag gcgacctcat gccaagtata 104700

gaaaggggca cggccgggcg cggtggctca agcctgtaat cccagcactt tgggaggccg 104760

agacgggtgg atcacgaggt caggagatcg agaccatcct ggcgaacatg gtgaaacccc 104820

gtctctacta aaaaatacaa aaaactagcc gggcgaggta gcgggcgcct gtggtcccag 104880

ctactcggga ggctgaggca ggagaatggc gtgaacccgg gaggcggagc ttgcagtgag 104940

ctgcgatctg gtcactgcac tgcagcctgg gcgacagagc aagactccgt ctcaaaaaaa 105000

aaaaaaaaaa gaaaggggca gacagggtcc caggttacga cgtcatcacg ctgggcggag 105060

acggcacatc caaatgtact aaagggttaa aggagaaagg gtgactttat ttttcttgag 105120

atattttggg ggacgaagta tggaaaagtg gcagaggaca cagtcacagc ctcccttaaa 105180

tgccaggaaa gcctagaaaa attgtctgaa accaaacctc agccatcaca aagaccaaca 105240

catgaatctc caggaaagaa gaaaaaaaag tcatacgggg tccacgcaca agggccttta 105300

aaacgacccg ctggagggtc tcaggcctcc tcctcctcct agactggcct gaagtctcca 105360

cgaggttttg ctgagacctt tgggtccctg tggcctcatg tagtgcccag catacagtaa 105420

gtgctcaata aatgtttggc tacaaaagag acaaagctgg aggagtctga agaatcactc 105480

agtcctgccg gaacagatgc tcacactgaa gacagaagag caggagccaa gtcaggtttg 105540

ggaacctgta gaggctgaaa accaccgcag atcgctgtaa atcgtttggg aacaaaacag 105600

aaaacgtctg ttttctcctt tgtgcttgtc tctgttttcg ggatgtgcta cagtgaacat 105660

gtattgcttt gggggcccca aatggaatta tttttaaagg aaaatgcaga tgatcgggtg 105720

gccacactgg agcactgact gggtaggggt ggagattgca gggaaggaag aagagctggg 105780

tgggatgcca ggcaggaaaa gcccatagac ccccaccgat cttgtggtga gccgtgggca 105840

gcggtgttcc atcctaactg caaaagggag cacctggggg gaagagggga ttcttttaaa 105900

caccattcca gtgcccgagc cccccggacc tgttgtcatc ttgggttggc ttcccctggg 105960

tgactccagt gtgcagctgg ctgagactca gtgaccctgg gttcttactg ctgacaccta 106020

ccctcaacct caaccactgt ggcctcctgt gcaccctgat ctccagtgac tcattttcca 106080

ctttcagtcc caactctatt cctatttgca gattccaagc gcctggctcc tcagtcaact 106140

cagacccagc caggccagcc catgggtccc acatgcccct tgccaaggtt gtccccgccc 106200

tgtctggcct gcgagggtgg gggtatgtcc agacacagag acaaaggacc agcttttaaa 106260

acattttgtt ggagccaggt gtggtgactc acacttaatc ccaacacttg gggaggccaa 106320

ggcagaagga tcacttgagt ccaggagttc gagaccagcc tgggcaacat acggagaccc 106380

tgtctttaca cttttttttt tttttttaat tagctgggca tgttggcact cgcctgtagt 106440

tccagctact ccagaggctg aggtgggagg actgcttgag cctgggaggt caaggctgca 106500

atgagccatg ttcacgccac tgaacgccag cctgggcgag accctgtgtc aaaaaagtaa 106560

agtaaaatga atcctgtaca ttacattaag gcgccccaaa ttgtacttag aaggatttca 106620

tagttttaaa tacttttgtt atttaaaaaa ttaaataact gcagcatata aattaggttc 106680

ttaatggagg gggaaaagaa tacaaggaaa aaaaagaatc tagaaacaaa gataagagca 106740

gaaataaata aaaaaacaca accttgcact cctaacttta aaaaaaaaaa aagtgaagaa 106800

aacacaacca gtaaaacaga acatataaca gcatcaaaag ctgactcctg gctgggcgca 106860

gtggtgcatg cctgtaatcc cagcactttg ccaggctgat gctggaggat cgcttgagac 106920

caggagttca aggttgcagt gagctatgat cacaccacta caccccagcc tgggcaatag 106980

agcgagactg agacctattt aaaaaaaaag aaagaaagaa cagaaaagct ggttccttcc 107040

ttatttcatt cctttattca ttcattcaga caacatttat ggggtacctc tgaacaccag 107100

gctctgtgct aagagctttt gcccccaggg cccaggccag gggacagggg cagatgagca 107160

gagaaacagg gccagttgca gcagcaggag gaattaggat ggagagcttg gccaggaaag 107220

gacatgcaag gggagcaacc cgcacaagtc agcaagccag agaagacaga cagacccttg 107280

tttgggacct gttcagtggc ctttgaaagg acagccccca cccagactgc tgggtgcagg 107340

agctgaagga ggatagtgga acacggtaac gtggagctct tcagagcaaa agcaaaataa 107400

agctagaact ggaggcggct ggagcagccg agggcgtgtg tccagcgtta aggggtgtga 107460

agcttgggcg ctaggagagt tcacactggc agaagagagg ttgcggctgc tgcgagccgc 107520

tggacatcgc ccaataggac agagggtggt ggaggggggg cctgaagaga ggctcagttc 107580

agctgcagtg gccgtgggag tgctgaagtg ggcgggctgt gggcagctgc tggggagggt 107640

tacgcggggg tgagggccca gcaacagcaa cccttcttgg ggggtcactg ggaaacaaag 107700

aggagagctg aagaagcagg gagtcccagg ggccatgcag ggcaagagag aatttgctca 107760

tatggggccc aggctgcagg atcaggagaa ctggggaccc tgtggctgcc agcagggaga 107820

agggagtgta caggatcatg gccaggaaag ggcccggggg ctatgggggg gcctggttgg 107880

ctccgagaag ttggagctga agtcactttc tcggaggatg tccaggccag tagttgggat 107940

gtgaagacct gaagcagcac agagcctgga agcccaggat ggacagaaac ctacctgagc 108000

agtggggctt tgaaagcctt gagtgtgcaa tattgaagat ggccacaaga tggcgataga 108060

atgctgtaac tgtttcttgg ttctgggccg cagcctgggt ggcttgcttc cttccctgtg 108120

tgtgttgatt tgtttctctt ttttgagaca gggtcttgct gagttgccca ggctggagtg 108180

cagtggtgcg atcgtagctc actgcaacct tgaagtcctg agctcaagcg atccttccac 108240

ctcagcctcc tgagtagttg ggaccacagg cttgcaccac agtgcccggc taatttcttg 108300

tattttttgc agagatgtgg tttcactgtg ttgcccagga tggtcttgaa cgcctgggct 108360

caagtgatcc tcctgcctca gcctcccaaa ctgctggtgt gagccaccat gcccgacctt 108420

cacttttttt ttttttgaga cagagtctcg ctctgtcgcc caggctggag tgcagtggcc 108480

ggatctcagc tcactgcaag ctccgcctcc cgggtttacg ccattctcct gcctcagcct 108540

cccgagtagc tgggactaca ggcgcccgcc acctcgcccg gctagttttt tgtatttttt 108600

tttagtagag acggggtttc accgtgttcg ccaggatggt ctcgatctcc tgacctcgtg 108660

atccgcccgt ctcggcctcc caaagtgctg ggattagagg cttgagccac cacgcccggc 108720

cctcttctcn nnnnngggcg tctgtgtgtg cgcctgtgtg cgcgtgtgtg cgtgtgcgtg 108780

cgcctgtgtg tgtgcacgtg cgtgtgtgcg tacgtgcatg tgcgcgcata cgtgtgcgcg 108840

cacacactcg tcttcacctt ctcccagcct tgctctctct ctacccagtc acctctgccc 108900

atctctctga tctatttctc tctcctttta cccctctttc ctcccttctc atacaccact 108960

gacaattata gagaactgag tattctaaaa atactttctt tatttatttt gagacagagt 109020

ctcactctgt catccaggct ggagtgcgat ggtgcaatct cggctcactg caacctccgc 109080

ctcccaggtt caagcaactc tcctgcctca gcctccctag tagctgggat tacagacgcc 109140

caccaccacg cctggctaat ttttatattt gtagtagaga cagggtttca ccatgttggc 109200

caagctggtc tcaaactcct ggcctcaggt gatctgcctg ccctggcctc ccaaagtact 109260

gggattgcag gcctgagtca ccgtgcctgg ccttaaaaat acattatatt taatatcaaa 109320

gccccagttg tcactttaaa aagcatctat gtagaactta tgtggaataa atacagtgaa 109380

tttgtacgtg ggatcgtttg cctctccttc tcaatcaggg ccagggatgc aggtgagctt 109440

gggctgagat gtcagactcc acagtaagtg gggggcagtg ccaggctggg accctcctct 109500

aggacagatc tgtaactctg agaccctcca ggcatctttc cctgtacatc agtgcttctg 109560

aaaaatcttg tgtaaatcaa atcattttaa aggagcttgt ttaaaggaca gtgtaaataa 109620

ttctgaaggt gactctaccc tgttatttga tctcttcctt ggccggttga cttgacagga 109680

catagacagg ttttcctgtg tcagttccca agctgatcac cttggacttg aagagaaggc 109740

ttgtgtgggc atccagtgtc caccccgggt taaattccca gcagagcatt gcactggccc 109800

tgctgagcct ggtgaggcaa agcgcagctc agcaagcagg cagcgctgga gacaggccaa 109860

gcctgggcca gcctgggagc caactgtgag gcacggggct gtggggctgc aggcttgagg 109920

ccagggagag agggctgggc tctttggagt agccttgaga gacctgaacc caaacaaaac 109980

cagatcaagg tctagtgaga gcttagggct gctttgggtg ctccaggaaa ttgattaaac 110040

caagtggaca cacaccccca gccccacctc accacagcct ctccttcagg gtcaaactct 110100

gactcagaca tttctcccct gactgggagt tccctggatc caaattggga gcttgcaacg 110160

ctttgttctc tcccttgatg gtttttgtca gtgcctcccc agagccgaag tgtaatatat 110220

atgtttctgt agctgagaaa ttcaatttca ggattctgat ttcataatga cagccattcc 110280

ccttttctct cccttctgta aatctaagat tctgtaaagg atgttgactt aatgtgacaa 110340

ttggcagtag ttcatgtctg ctttgtaaat acccttgtgt ctattgcaaa atctcataaa 110400

ggcttgttga cttttttgtg gggttagaac aagaaaaagc cacatggaaa aaaatttctt 110460

ttttgttttt tgtttgtttg tttgcgacag agtctcactc tgtcgcccag actggagtgc 110520

agtggcacga tctcggctca ctgcaagttc tgcctcctgg ggtcatgcta ttctcctgcc 110580

tcagcctcct gagtagctag gactacaggc gcctgccatc acacctggct aatttttttg 110640

tattttttag tagagacagg gtttcaccgt gttaaccagg atggtctcga tctcatgacc 110700

tcatgatctg cctgccttgg cttcccaaaa tgctgggatt acaggcgtga gccaccgcgc 110760

ccagctggaa aaaacatttc tatgtatgtg acagacactg agttattgct taatgtcctt 110820

tgattcattt gcttaatttc ttttatggat tagtacagaa aacaaagttc tcttccttga 110880

aaaactggta agtttccttt gtcagataag gagagttatg taacccatga catttccctt 110940

tttgccttgg cttctaggaa gctcaaagct aaatggaatg atcactcttg taattgtcag 111000

tattgatgcc ctccccttct tctaatgtta ctctttacgt tttcctgttt tattattgtg 111060

agtgtgtgtt ttctaattct aagctgttcc cactcctttt tgaaagcagg caaatcggcc 111120

gggcgcggtg gctcaagcct gtaatcccag cactttggga ggctgagacg ggcggatcac 111180

gaggtcagga gatcgagacc atcctggcga acacggtgaa accccgtctc tactaaaaag 111240

tacaaaaaaa ctagccgggc aaggtggcgg gcgcctgtag tcccagctac tcgggaggct 111300

gaggcaggag aatggtgtaa acccgggagg cggagcttgc agtgagctga gatccggcca 111360

ctgcactcca gcctacgcga cagagcgaga ctctgtctca aaaaaaaaaa aaaaaaaaga 111420

aagcaggcaa atcttcttct aagacttatc cagtgaaaag ttatgaataa aaaatgatca 111480

tcaagtctac aggtgctgag gctactacag aggctgaggc cagaggacta cttgagccca 111540

ggaatttgag acctgggctg ggcaacatag caagacccca tctccattaa aactattttt 111600

tattaaaaaa ataatccgca aaggagttta tgtggggttc cttaaaatcg gagggtgaca 111660

tgaattgatt caaagacttg tgcaaagggc gacagcaact ccttgagaag cagtatgaga 111720

aatcctgtcc tacctcctcc cccagctcca gcctgggctg aggcactgtc acagtgtctc 111780

cttgctggca ggagagaatt tcagtgttca ccaaaaagta gtattgtttt tattaggttt 111840

atgaggctgt agccttgagg acaacccagg acaactttgt tgtcacaaag gtagcctgcg 111900

gctacgggaa ctctgagatc tagattcttc tgtggctgct tctgacctga gaaagttgca 111960

gaacctctgt gggcctcaca tggcctcctt gtcctttatg aggggatggt gggcaagaaa 112020

ggtgatgtga cattagagat ttatccatct ctaagggagg agtggattgt acgttgaaac 112080

accagagaag gaattacaaa ggaagaattt gagtatctaa aactgtaggt cggacactcc 112140

tgtattgatt gcagcactat tcacaatagc caagatttgg aagcaacacg agtgtccatc 112200

agcagacgaa tggagaaaga aaatgtggtt catatatgca atggagtatt cagccatgaa 112260

aaagaataag attctgtcat ttgaaacaac atggatggaa ctggaggaca tcatgttaag 112320

tgaaataagc cagacagagg gacagacttc acatgttctc acacatttgt gggagctaaa 112380

aattaaactc atggagacag aaagtagaag gatggttacc agaggctgag aagggtggag 112440

gggagtgggg agaaagtggg gatggttaat gggcacaaaa acatagttag catgaataga 112500

tctagtattg gatagcacaa catcgtgact acagtcaaca ggaatttata gtacatttta 112560

aaacaactaa aagagtgtaa ttggaatgtt cataacacaa gaaatgatca gtgcttgagg 112620

tgatggatac cccatcaccc tgatgtgatt attacacaat gtatgtctgt ttctaaatat 112680

ctcatgtacc ccacaagtat atacacctac tatgtaccca tataaattta aaattaaaaa 112740

tttataaaac acacataaat aagtacattc aaatgtaggc tggacactgt ggttcacacc 112800

tgtaatccca gtgctttgag aggctgaggt gagagaatca cttgagccca ggagtttgag 112860

acctcatcac cacaaagaat ttttaaaaat tagctgggtg ttgtggcaca taccggtagt 112920

cccagctact tgggagacgg aggcaggagg atcgcttgag cccaggagtt taaggctgca 112980

gtgagctacg atggcgccac tgcattccag cctggatgac agagtgagac cctgtctcta 113040

ttttaaaaat aataaaaaga ataaataata aaaataaatt aaaatgtaag tatttgtatg 113100

ttagaaaaaa tacacccatc agccaaaggg gtaaaggagt gatttcagtc ataatcagat 113160

gcaggataag ccagcaatgc agtttctttt attttggtca aagaaataag caaaacaata 113220

ttgtaaacac ccagtcagtg ctggcagcaa tatgaggctg gctctctcac cagggctcac 113280

aggggaaact catgcaaccc ttttagaaag ccatgtggag agttgtactg agaggttttc 113340

gaatatttat aactttgacc cagaaattct attctaggac tctgtgttat gaaaataacc 113400

catcatatgg aaaaagctcc tttcagaaag aggttcatgg gaggctgttt gtatttttct 113460

ttctttgcat caaatccagc tcctgcagga ctgtttgtat tattggagta caaaatggaa 113520

tcaatacaaa tgttggctag cagggggaaa atattcacaa aatggaatgg aacatattat 113580

taaacatagt gcttctgatg accgtagacc atacagaatg cttaggatat gatatcactt 113640

cttttgttct tttttgtttt ttgagacaaa atctccttct gtcacctggg ctggagttca 113700

gtggcacgat ctcagctgac tgcaacttcc atctcccagg ttctcctgcc tcaacctccc 113760

aagtagctgg gactacagtt gcttgccacc atgcccggct aacttttgta ttttttacta 113820

tagacagggt ttcaccttgt tggccaggct gttctcgaac tcctgacctc cggtgatcca 113880

cctgccttgg cctcccaaag tgctgggatt accggtgtga gccaccgcgc ccagcctagg 113940

atatgatatc acttcttaga gcaagataca aaattgcatg tgcacagtaa ttctcccaag 114000

tttaggtaca cagggatggt tacatctaaa cgagacttaa aggaaataca aaaaatgcaa 114060

tcctgattgt gttagggtgg taagaaaacg gttttgtttt tgctttgatg agctgttttt 114120

taaaattgtt atattttcta ataaaaatac atagtgtgtt tgaaggaata taaaagatta 114180

tgaagagatg agttagatgt tgattcatat tgaagattca gatgagtaaa attaaggggg 114240

aaaaacggga tgaaccagaa gccaggctgg agtcccagtc ccagacccga cagcccaggc 114300

tgatggggcc tccagggcag tggtctccac ccagcattct caaaagagcc actgagctct 114360

tgccattttc aagatttcag aaaccacctt ggcatggctg gtctttcact gggatctcca 114420

cttggcaatt atttacatct gagacgaata aaaaccaaag tgctgagatt acatgcgcag 114480

tggctcaggc ttgtaatccc agcactttgg gaagctgagg tgggctgatt gcttgagccc 114540

aggagtttca gaccatcctg gacaacatag cgtgacctca tctctacaaa aaatacaaaa 114600

aaattgccag gtgtggtggc atgtgcctgt ggtcccagct acttgggagg ctgaagtagg 114660

agaatccctt gagtccaggg aggtcgaggc tgcagtgtgc cgggaagatg tcactgcact 114720

ccagcctggg ggacaaagtg agaccctgtc tcactaagaa aaaaaaaaaa aaaaagcact 114780

gtttccagag ttcctgaggg gaaggtcacc gggtgaggaa gacgttctca ctgatctggc 114840

agacaaaatg tcaagttttt ccaactccct aaaccctggt tttctatttc atagttttta 114900

ggcaaattgg taaaaatcat ttctcatcaa aacgctgatt tttcgtacct cccgggtgtc 114960

tacagaaaga accttccaga aatgcagtcg cgggagaccc atccaggcca cccctgctta 115020

tggaagagct gagaaaaagc cccacgggcg catttgctca gcttccgtta cgcacctggt 115080

ggcactgtgg gtgggagggg gctggtgggt ggatggaagg agaaggcact gcccccttgc 115140

agggacagag ccctcttaca gaggggacac cccgcatttg tcttccccac aaagcggcct 115200

gtgtcctgcc tgcgggctca gggcttctta aacctggctg tgtgtcagaa tcaccagggg 115260

aacttttcaa aaccagaggg actggaaaga ctcctccaga tttgaattct aggttagggc 115320

tggggtctga gattttaaaa atccacaggt gattcccatg cccaacaggc ttgagaacag 115380

ccacaggaag ttctctggga atgttccggt gggtctagct aggggtgagt ggagatgcca 115440

gggaacttcc tgttactcac tcatcagtgt ggcctaacac gtttttcact gaccccaggc 115500

tggtgaacgc tcccctctgg ggttcgggcc tgacgatgcc atccttttgt gaagtgagtc 115560

cctgcccctg aggacctgca atcccagctt cgtaaagccc gcggggaatc actcacagtt 115620

ccgggatgcc ttcggggcag ccctctctct gtcccttcag ctcccctggg gtgtgactca 115680

atctcccgcc actccccaga ctgcctctgc caagtccaaa agtggaggca tcctttcgag 115740

caagcaggcg ggtccagggt gacgcgtgtc actcatcgaa aatggaggcg tccttgtgag 115800

aaagcaggcg ggtccagggt gacgcgtgtc actcatcgaa aatggaggcg tccttgtgag 115860

aaagcaggcg ggtccagggt ggtgtgtgtc actcatcaaa agtggaggca tccttgcgag 115920

caagcaggcg ggtccagggt gacgtgtcac tcatcctttt ttctggctat caaaggtgca 115980

gataattaat aagaagctgg atcttagcaa cgtccagtcc aagtgtggct caaaggataa 116040

tatcaaacac gtcccgggag gcggcagtgt gagtaccttc acacgtcccg tgcgccgtgc 116100

tgtggcttga atttttagga agtggcgtga gtgcgtacac ttgcgagaca ctgcatagaa 116160

taaatcctcc ttgggctctg aggatctggc tgcgccccct gggtgaatgt agcccggctc 116220

cccacattcc ctcacacagt caactgttcc cagaagcccc ctcctcatgt tctaggaggg 116280

agtgtcccag catttctggg tccccaggcc gtgcaggctg cgtgtacaga atagggtgtc 116340

tgacggaccc tctctccagc ccctgcctgg gaagctgaga atacccgtca aggtctccct 116400

ccactcacac ccagccctgt ccccaggagc cccatagcgc attgaaagtt gggctgaagg 116460

tggtggcacc tgagactggg ctgccgcctc cacccccgac acctgggcag gttgacgttg 116520

actggctcca ctgtggacag gtgacccgtt tgttctgatg agtggacacc aaggtcttac 116580

cttcctgctc agctgtgcct cctatgtgtt caaggcagga gcggattcct aagcctccaa 116640

cttatgctta gcctgcacca ccctctggca gagactccag atgcaaagag ccaaaccaaa 116700

gtgtgacagg tccctctgcc cagcgttgag gtatggcaga gaaatgctgc ttttggccct 116760

tttagatttg gctgcctctg gtcagaagcg gtggctcatg cctgtaatcc cagcactttg 116820

ggagatgaag acggtaggtt tgcttgagcc caggagttca agtccagcct gggcaacagt 116880

gagacccctg tctctacaaa aaaaatttaa attacccagg tgtggtggtg tgcacctgta 116940

gtcccagcta cttgggaggc tgaggtggga ggatcacctg agtccgggag gcagaggttg 117000

taaggagcca tgatcgcgcc actgcacttc aactgaggca acagagcgag actttgtctc 117060

aaaaaacaat ggtataataa ttttaaaata aatagatttg gcttcctgta aatgtccctg 117120

gtgagattcg ggactcagat cctcaagtcc cactgactca cccgatgagc tgaggcttca 117180

tcatcccctg gccggtctat gtccacgggg caccggaggc tcctctccca ccagcagtct 117240

tggtgagctg aaagcaaact gttaacaccc tggggagctg gaggtatgag accctcgagg 117300

tccaccccaa gggaggcgtt gatttttgag agcaatcacc tgaccctggc tggcagtacc 117360

aggacactgc tgtggctctg gggcgggctg tctccggaaa atgcctggcc tggggcagcc 117420

acccgcatcc agcccagagg gtttattctt gcaatgtgct gctgcttcct gcactgagca 117480

cctggatcct ggcttctgcc ctgaggcccc tggagtccca caagtagcaa gcgcttggcc 117540

tgcggctgct gcatggggct actaacgctt cctcaccagt gtctgctaag tgtctcctct 117600

gtctcccacg ccctgctctc ctgtcgcccc agtttgtctg ctgtgagggg acaaaagaga 117660

tgtgtgcccc cacccctgcc caggtccttg ttcctgggat tgctgttcag ctgtttgagc 117720

tttgatcctg gttctctggc ttcctcaaag tgggctcggc cagaggagga aggccatgtg 117780

ctttctggtt aaagtcgagt ctggtggcct ggtggagact gcgctcctga ggcggagctg 117840

gggatagagc actcatgggc tgcgtggcca acccctctgg tagctgatgc ccaaagacgc 117900

tgcagtgccc aggacatccg ggacctccct ggggcccgcc cgtgtgtcct acgctgtgct 117960

cgtctgtggg ctagcctgtg acccgcgctg tgctcatctg tgggctagcc tgtgacctgg 118020

cagagagcca ccagatgtcc cgggctgagc accgccctct gagcaccttc acaggaagcc 118080

tttctcctgg tgagaagaga tgccagcctc tggcatctgg gggcactgga tccctggcgg 118140

cggctagggc taggtggccc tagtctctcc ccagcctggg ggccccttcc cagcaggttg 118200

gccctgctcc ttctccacct gggacccttc ttcctcctgg ctgggccctg gaagttctgc 118260

aggacctgcc gtccccctcc ctggcctcca ggtatcttga ccaccgccct ggctcccact 118320

gccacccact cctctcctat ctggccgttc cctggtccct gtcccagccc ccctccccct 118380

ctcatgagtt tcctcaccaa ggccagaggg aagagggaag gaggccctgg tcataccagc 118440

acgtccttcc acctccctca gccctggtcc acccccttgg cgccagcctc agagcacagc 118500

tctctccaac ccaggccgca caccgtccgt cctccctgcc cccacgtcct tgccgcagat 118560

cctgtccgcc ctgacacaca ttggcctcag ccatctctgc cccagttaac tccccatcca 118620

taaagagcac acgccagctg acgttaaaat aatttgggat ggttccagtg tagacctaag 118680

tagaagcggg aaccgctgcc cccactgcac cttggtttct ggtggccttg ataaaccatc 118740

ttcagccatg aagccagctg tctcccaggc agctccaggg cagggcttcc tggggagctg 118800

actgataggt gggaggtggc tgcccccttg caccctcagg tgacccacac aaggccactg 118860

ccggaggccc tggggactcc agaatgtcag tcatgacccg cccccaggcc gcacacagcc 118920

acggtttcac agatgccggc ctccagggga cctgtctgtc tgccactcgg agtccccaca 118980

gggtgccccc ccaggggagc tggctctcgg actgagatca gctggcagtc cggactgtca 119040

ttccccgagg gagcggtgcc ctggatccca caggcctccg catgtgtgtc tgtgtccgtt 119100

cgagcttgct gagacattca atctgttggt ttctgttgtg ccgcctaccc accctgtcga 119160

tgatgctttg ctcctgttgc taaagacagg aatgcccagg accctgagtg tgcaggtgcc 119220

cgctggctct cacgtccgag ctgctgaact ccgctgggtc ctgcttactg accgtctttg 119280

ctctagtgct gtccgtggaa gcttttcctg gaataaagcc cacccatcaa ccctcacagc 119340

gcctcccctc tttgaggccc agcagatagc gcactccagc ctttccagca agatttttca 119400

gatgctgtgc atactcatca tattgatcac ttttttcttc atgtctgatt gtgatctgtc 119460

gatttcatgt taggaaaagg agtgactttt ttacccttaa gcctttgctg agcaaatgtc 119520

tgggccttgc acaatgacaa cgggtccctg tttttcccag aggctctttt gttctgcagg 119580

gattgaagac actccaatcc cacagtcccc agctcccctg gagcagggtt ggcagaattt 119640

cgacaacaca tttttccacc ctgaataggg tgcgctcctc atggcagctg ggaaccactg 119700

tccaatcagg gcctgggctt acacagctgc ttctcattgc attacaccct taataaaata 119760

atcccatttt atcctctttg tctctctgtc ttcttctctc tctgcctctc ctcttctcgc 119820

tcctctctca tctccaggtg caaatagtct acaaaccagt tgacctgagc aaggtgacct 119880

ccaagtgtgg ctcattaggc aacatccatc ataaaccagg tagccctgtg gaaggcgagg 119940

gttgggatgg gaaggtgcac ggggtggagg agtcctggcg aggctggaac tgccccagac 120000

ttcgaaaggg gctggaaagg atttgctggg tagaccatca aggagagttg agtgtggaac 120060

ttgcgggagc ccaggaggcg tggtggctcc agctcgctcc tgcccaggcc atgctggcca 120120

agacaaggta aggcgggagt gaagtcaaat aaggcaagca cagaaagaaa gcacatgttc 120180

ttggctgggc gcggtggctc acacctgtaa tcccagcact ttgggaggcc aaggcaggcg 120240

gatcacgagg tcaggagatt gagaccatcc tggctaacac ggtgaaaccc catctctact 120300

aaaattacaa aaaattagcc gggcatggtg gcgggcacct gtagtcccag ctactcagaa 120360

agctgaggca ggaaaatggc atgaacccag gaggcggagc ttgcagtgag ccgagatggc 120420

gccactgcac tccagcctgg gtgacagagc gagactctgt ctcaaaaaaa aaaaaaacac 120480

acacacatgt tctcgcttat ttgtgggatc caggagatag ataatagaag gatgattatc 120540

agaggctggg aagggtagtg aggggatggt ggggagatgg ttaatgggta caaaaaaaaa 120600

tagaataaga cctagtattt gatagtgcaa cagggtgact atagtcaata ataatttaat 120660

tgtacattta aaaataacta aaagatagcc agatgcactg gcttacgtct gtactcccag 120720

cactttggga ggccgaggtg ggcatttgag accagcctgg ccaacatggt aaaaccccat 120780

ctctactaaa aatacaaaaa ttagctgggc gtggtggcgg gcacctgtaa tcccagctac 120840

tcgagaggct gaggcaggag aatcacttga acctggaggc agaggttgca gtgagccaag 120900

atcttgccac tacactccag cctgggtgac agagcgaaac tctgtctcaa aaataaaaat 120960

aactaaaaga atataaatgg attgtttgta acacaaagga caaatgtttg cggggatgga 121020

taccccattt tccatgatgt gattattaca cattgtgttt ctgcatcaaa acatctcatg 121080

aaccccataa atatatatac ctactatgta cccataaaca tttttttaaa aaaatttttc 121140

aaggtgaaga gggaggcaag atgctggcct taagccctaa cccgggattc tcccagcaag 121200

ctgtccacag gtcttctcag gcttgaggtg cagctatatg gatgtgtgag cttggtcccc 121260

agccaacatg gagacacttc actatcggca gcagctacag cacaggaacc ctgggtcact 121320

gccgtgtccc ctctgtgact ttgtttaaac agaaaatgat gctctgggct ggccgcggtg 121380

gctcacgcct ataattccag cactttggga ggctgaggtg ggcagatcat gaggtcagga 121440

gatcgagact atcctggcta acacggtgaa accccatctc tgctaaaaat acaaaaaact 121500

agccgggcgt ggtggcgggc gcctgtagtc ccagctactt gggaggctga ggcaggagaa 121560

tggcgtgaac ccaggaggca gagctgcagt gagctgagat cgcgccactg cactccagcc 121620

tgggtgacag agtgagactc catctcaaag aaaaaataaa ataaaaaaat acttgactta 121680

ctggaagcca accaatgtat aatttagaat aatttctcct gggttgagct gtcacttacc 121740

tttgcagtat ctcaagagga agagttcact gtgtaaatat tgatgcatac tttgattaga 121800

tagatgaagc aaactatttt caagcacttt tcaaggactt acttgtatcc aaacagcatt 121860

ctaaaggaaa gtcttaccta cttctaaagg ctggtctcta cttgaaacct cttgcttggc 121920

cctggttcaa gtcctgctgc aaacctggaa gtcccgtcac tgtcttcttc cctgcagagc 121980

agtggctccc gatctaattt ttgctgtgcc ccagcagccc ctggcacttt gccctgtaga 122040

ccacagacct catgtaatgt gtgctaagtc cacggaactg cggaagatga tggcaagatg 122100

ctcttgtgtg tgttgtgttc taggaggtgg ccaggtggaa gtaaaatctg agaagctgga 122160

cttcaaggac agagtgcagt cgaagatcgg gtccctggac aatatcaccc atgtccctgg 122220

cggaggaaat aaaaaggtaa agggggcggg ttggatgctg cacttgggta tgggcattaa 122280

tcaagtcgag tggacaaaga ctggtccagt tcccagagga ggaaaacaga ggcttctgtg 122340

ttgactggct ggatgtgggc cctcagcagc atccagtggg tctcgactgc ctgtctcaat 122400

caccttcacc aggagcttta gcacatttca cagctgggct ccaacctgga gaggctgact 122460

gatcggtctt aggtgcagct cagttgctgg agtttttgtt tttatttatt tttaagtatt 122520

tgaggcaggg tctctgtatt agtctgttct cacactgcta ataaagacat acccaagact 122580

gcgtaattta taaaggaaag aggtttaatg gactcacagt tccacatggc tggggaggcc 122640

tcaaaatcat ggtggaaagc aaaggagaag caaaggcatg tcttacatag cagcaggcaa 122700

gagagcgtgt gcagggcaac tcccatttat aaaaccatca gacctcatga gacttattca 122760

ctatcatgag aacggcatgg gaaagacccg cccccatgat tcagttacct cccactgggt 122820

ccctcccatg atacatggaa ttatgggaac tacaattcaa gatgagattt gggtggggac 122880

acagccagcc cgtatcattc tccctctgtc atccaggctg gagtgcatta gcatgatctc 122940

agctcactgc agcctctacc tccctgggtc aggtgatcct cccacctcag cctcccaagt 123000

agctggaact acaggtatct gccactatgc ccggctaaat attttgtatt tcctgtggag 123060

acgaggtttt gccatgttgc ccaggctggt cttgaactcc tgaggtcaag caatatgccc 123120

acctcagcct cccaaggtgc tgggattaca ggtgtgagcc acagtgcttg gcctaagtgg 123180

ctgcagtttt taaagctccc aggtgattct ttagtgcagt caaaagtgag aactagctgg 123240

gtgcggtggc tcatgcctgt aatcccagca ccttgggagg ccaaggtggg cagatggttt 123300

agtagagatg atctctacta aaaatacaaa agttagctgg gtgtggtggt gcatgcctgt 123360

aatcccagct acttgggagg ctgaggcatg agaatcgctt taacccaggt ggcagaggtt 123420

gtagtgagcc aagatcatgc cactgcactc cagtctgggg aacagagtga gactccatct 123480

caaaaaaaaa aaaaaaaaaa atgagaacca ctgtcctagg ccctgatgtt tgcagacaac 123540

taaaaaagga agtggacatc cccagtcacc tgtggcgcac caagaacaca tgggaacata 123600

atctaatttt ctaaatgggt tactaggcac ttagagcaaa acaatgatgc tgaaatcctg 123660

atttcaggaa agcctctgcc tgcctgttgt ggaagtgtcc acacgaggct cctggggcct 123720

tggtgtcccc agcagtttct agtctccagg tcttgctgtg ggtgtctgtg cagtgagggt 123780

gtgtgtggcg ctaagcgaga tctgtctagg gctggcacag gatgcggtct ggtagctgct 123840

gcttctcttc tgcagaagcg cagccaagca ccctctgggg tttcctgccc acacccagcc 123900

tgaagttctg ggagtggctc actttccaac cttcagggtc tcccaggagc tgactggggc 123960

gtggtagagg gaaaaggatt gtattagtct gttttcatgc tgccgatgaa gacctatccg 124020

atactgggca atttacaaaa gaaagaggtc tgatggagtt acagttccac gtggctgggg 124080

aggcctcaca atcatggcgg aaggtgagag gcttgtttca catggtggca gacaagaaaa 124140

gagagcttgt gcaggggaac tcccctttat aaagccatca gatctcggga gacttactat 124200

catgagaaca gcactatcat gagaacatag gggcagggaa aacccgcccc tacgattcaa 124260

tcctctccca tcgggtccct cccacaacgt gtaggaattg tgggaactat aattcaagat 124320

gagatttggg tggggtcaca gccaaaccgt atcggggtgt cccagaaagg gtgtgggatc 124380

tgagacccag ctcggcgtga ggaagtttgc ttctcgaggt ggcccagtcg ggtggaagtg 124440

gcaaccaggc tgtctctcca ccaggccact caggtggcag ctgagagacc cctgccctgg 124500

tcagtctccg ccctcccctc ttgccactgc atctggttct gaacagatgg gcaccctcat 124560

cttgtgtttg tgataaatgt ctaaccatgt agttttgtga gaagtgtttg ccgcagatgc 124620

tgtaaactgt ggcctggggc agacctcacc tccagacagg ccctgaggct ggcgagggca 124680

ctggcccata gtagctggcc gagagctctc aggttgtgcc acgcaggaca cagggatact 124740

tttcagtgcc tgggtcacta tccaaagtga gaaaacagcg ggggaccagg aggctgcccg 124800

cctcaaggga tgtgggggcc gggcccagtt atctgaggaa gcagtcagct tctctgctgt 124860

ttccaccagc caggcctccc ctggtctaag gcagggcctc ccagccttgg ggcgctttaa 124920

agatacctgg gcctggcccc atccccacag tctgactgag tgggtcggga taggggcatg 124980

ggcattggcg atttcctggg tgaagggagg cccgctgcag tctctggaag cttctctgtg 125040

ttaggaagag ctctgggctt gactctgctc ggagagtcaa gatccgcaaa tcctctcagc 125100

ctcagtttct ccttcagcaa gatgaaatgg aaatgctgta cctacgtccc agggtggttg 125160

tgagaccccc ccccccaaaa aaaacaatgt tctggaaggt tcctggtgcg ttgcagtcct 125220

ctaagaacct gagttagagc catgctgagt ctcagcttct tggctccttc tgtttccaac 125280

ttgtccatgt gatggctcag gaaggtgggc agggccctgc ccctactcag aaaacatcat 125340

cctggtccca gggatccccg cagcgttagt cccgttttcc gtgtgttgag aaaaattgct 125400

aacaagcagt ggggcacacc accagcctcc tgggttcttt tcagtttggg gatttttgga 125460

cattcccagg aatgtcaact ttctcttaaa aaacacttca aaaaacatta acataaatat 125520

ttttatcaaa gcttgtatta aatggtcttt caagaaaata cagtaacagg ccaggcatgg 125580

tggctcacgc ctgtaacccc agcactttgg gaggccaagg caggcagatc acctgaaatc 125640

aggagttcga caccagcccg gccaatgcag cagaaccccg tctctacaaa aaatacaaaa 125700

attagctggg tgtggtggca cacacctgta gtcccagcta ctcgggaggc cgaggcagaa 125760

ttgcttgatc ccaggaggtg gaggttgcag tgagctgaga ttgcgccact gcactccagc 125820

ctgggtgaca agagtgaaac tttgtctaaa aaaaaaaaaa aaaagaaaaa gaaaatacac 125880

taatagagaa caatctgttt ttcaaagtag tgactgcaaa tgaacaaaat atgcatctag 125940

cttaaacggg agcatggttt tctctatgcc cattcaagcc tgctgcaata ggggcccttc 126000

agcctggatc catggactcc taaaattata tggaaaatgg ctgtgtgggt gtgagcgtgg 126060

gtggacatgt gcacacatat ttttggcttt accagatgct caaagagcct aggacccaac 126120

aagggctgag gataaccctg tcggccgctt cagggtcatc aggaattcct gtgcgctgct 126180

cacttctcca gtgagcgcct tctgcttccg cgtttcctgg tatccttcgg ggctcctggc 126240

taggtcatgt gtttctctac tttctttttt tttctttttt tttttttgag acggagtctc 126300

gctctgccgc ccagactgga gtgcagtggc tggatctcag ctcactgcaa gctccgcctc 126360

ccgggttcac gccattctcc tgcctcagcc tcccgagtag ctgggactac aggcgcccgc 126420

cacctcgccc ggctagtttt ttgtattttt tttttagtag agacggggtt tcaccgtgtt 126480

agccaggatg gtcttgatct cctgacctcg tgatccgccc atctcggcct cccaaagtgc 126540

tgggattaca ggcttgagcc accgcgcctg gcctgtttct ctactttcaa aagggcttca 126600

gccaggcacg gtggcatgag cctgtagtcc cagctgcccg ggaggttcag gtgggaagat 126660

tgcttgagcc caggaatttg aggccagcct gggcaagtag atagataggt agatgataga 126720

tagatagata gatagataga tagatagata gatagataga tagatagata gatagataga 126780

tagatagata gatgtataat agatggatag ataagtcgct agacagactc catcctaaat 126840

cacccatcca cctacccaca cataaaaagg cctttgtcat gtcatgtttt gtggcccacc 126900

tgccagtgct gcccacagtt gctgcccctc caaactcatc agtcactggc aaacaggagg 126960

aatgtgtgtg gctcatgtct gggcatcagt ggctgtggga gacatccttg atcttctcca 127020

gcttctcctt ccacattttc ctttgcaatc tggcaatatc tatcaaaata aaatgcgcat 127080

gccttttgac ctaagagctc cacttctagg acacacttac aggtgtgtga catgatgttc 127140

attcagggtt atttatctga ggttgttcat acacaccatt gcctgtaatc actaaaggcg 127200

ggagcagcct aggcatccat tcacagagga gtagacgcct ttggatacat ccgtggtgac 127260

ggaatactaa gcagcctgtg tacatataca ctcacacatg tgtttgttta tgtgtggaat 127320

atctctgcag gatacacaag aaacttaaaa tgatcactgt ctctggggag ggtacctggg 127380

tgcctgggag gcaggtcagg ggaggagtgg gcacagggat tacgaattgg aagacaataa 127440

aaacaacagc ttctggccag gcacagtggc tcacgcctgt aatggcagca ctctgagagg 127500

ccgaggcggg cggattgctt ccgcccaaga gttcgagacc agcctgggca acatagtgaa 127560

accccgtttc tattaaaaat acaaaaaact agccaggtgt ggtggcatgc acctgtaatc 127620

ccagctaccc gggaggctga ggtgggagaa tcacctgagc ctgggaggtt gaggctgcag 127680

tgaggtgaga ttgcaccacc tcactctagc ctgggtgata gagcaagacc ctgtctcaaa 127740

aacaaacaaa caacagtccc tggcactgtg ggccaggcct ggcagggcag ttggcagggc 127800

tggtctttct ctggcacttc atctcaccct ccctcccttc ctcttctcct tgcagattga 127860

aacccacaag ctgaccttcc gcgagaacgc caaagccaag acagaccacg gggcggaaat 127920

cgtgtacaag tcgccggtgg tgtctgggga cacgtctcca cggcacctca gcaatgtctc 127980

ctccaccggc agcatcgaca tggtagactc gccccagctc gccacgctag ccgacgaggt 128040

gtctgcctcc ctggccaagc agggtttgtg atcaggcccc cggggcggtc aataatcgtg 128100

gagagaagag agagtgagag tgtggaaaaa aaaagaataa tgacccggcc ccgccctctg 128160

cccccagctg ctcctcgcag ttcggttaat cggttcatca cttaaccggc ttttatcgct 128220

cggctttggc tcgggacttc aaaatcagtg atgggaataa gagcaaattg catctttcca 128280

aattgatcgg tgggctaata ataaaatatt ttttaaaaaa cattcaaaaa catggccaca 128340

cccaacattt cctcgggcaa ttccttttga ttcttttttt ttccccctcc atgtagaaga 128400

gggagaagga gaggctgtga aagctgcttc ggggggattt caagagactg ggggtgccca 128460

ccgcctctgg ccctgtcgtg ggggtgtcac agaggcagcg gcagcaacaa aggatttgaa 128520

acttggtgtg ttcgtggagc cacaggcaga cgatgtcaac cttgtgtgag tgtgacgggt 128580

gggggtgggg cgggaggcca tgggggaggc caaggcaggg gctgggcaga ggggagagga 128640

aggacgagaa gggggagtgg gagaggaagc cacatgctgg agaggagatg ccctcctccg 128700

cgccactggg agggccaagg cctccgccac ctgcagtgtc tcagactgag cggctgcctg 128760

tccttggtgg ccagggtctg ctgcgagttg atgtgccacc ctctgcaggg cagcctgtgg 128820

gagaaggggc ggcgggtaag aagagaaggc aagctggcgg gagggtggca ccccgtggat 128880

gacctccttg gaaaagactg accttgatgt cggagggcgc tggcctcttc ctccctccct 128940

gcagggtagg gggcctgagc cgaggggctt ccctctgctc cacagaaacc ctgttttatt 129000

gagttctgaa ggttggaact gcagccatga ttttggccac tttgcagacc tgggacttta 129060

gggctaacca gttctctttg taaggacttg tgcctcttgg gagacgtcca cccgtttcca 129120

agcctgggcc accggcatct ctggagtgtg caggggtctg ggaggcgggt cccgagcccc 129180

ctgtccttcc cacggccact gcagtcaccc ctgtctgccc cactgtgctg tcgtctgcca 129240

tgagaaccca gtcactgcct atacccctca tcacgtcaca atgtccaaat tcccagcctc 129300

accacccccc ttctcagtaa ggaccctggt tggctgtggg aggcacctac tccatactga 129360

gggtgaaatt aagggaaggt aaagtccagg cacaagagtg ggaccccagc ctctcactct 129420

cagttccact catccaactg ggtccctcac cacgaatctc acgacctgat tcggttccct 129480

gcctcctcct cccatcacag atgtgagcca gggcactgct cagctgtgac cctcggtgtt 129540

tctgccttgt tgacatagag agagcccttt ccccccgaga aggcctggcc ccttcctgtg 129600

ctgagcccgc agcaggaggc tgggtgtcct ggttgtcggt gacggcacca ggatgggcgg 129660

gcaaggcacc cagggcaggc ccacagtccc gctgtccccc acttgcaccc cagcttgtgg 129720

ctgccagcct cccagacagc ccagcccgct gctcagctcc acatgcatag aatcagccct 129780

ccacatccca aaaaggggaa cacaccccct tcgaaatggt tttctccccg gtcccagctg 129840

gaagccatgc tgtctgttct gctggagcag ctgaacatat acatagatgt tgccctgccc 129900

tccccatctg caccctgttg cgttgtagtt ggatttgtct gtttatgctt ggattcacca 129960

gagtgactat gatagtgaaa agaaaaaaaa aaaaaaaaaa aggacgcatg tatcttgaaa 130020

tgcttgtaaa gaggtttcta acccaccctc acaaggtgtc tctcaccccc acgctgggac 130080

gcgtgtggcc tgtgtggcgc cgccctgctg gggcctccca aggtttgaaa ggctttcctc 130140

agcatccggg acccaacaga gaccagattc tagcatctaa ggaggccgtt cagctgtgaa 130200

gaaggcctga agcacaggat taggactgaa gcgatgacat ctccttccct acttcccctt 130260

ggggctctct gtgtcagggc agagagtagg tcttgtggct ggtctggctt gcggcacgag 130320

gatggttctc tctggtcaca gcccgaagtc ccacagcagt cctaaaggag gcttacaact 130380

cctgcatcac aagaagaagg aagccagtgc cagctggggg gatctgcagc tcccagaagc 130440

tccatgagcc tcagccaccc cgcagactgg gttcctcgcc aagctcgccc tctggagggg 130500

cagccagcct cccaccaagg gccctgcgac cacagcaggg attgggatga atggcctatc 130560

ctggatctgc tccagaggcc cgagccacct gcctgaggaa ggataagtca ggagacaccg 130620

ttcccaaagc cttgaccaga gcacctcagc ccactgacct tgcacaaact ccatctgctg 130680

ccatgagaaa agggaagccg cctttgcaaa aaattgctgc ctaaagaaac tcagcagcct 130740

caggctcaat tctgccgctt ctggtttggg tacagttaaa ggcaaccctg agggacttgg 130800

cagtagaaat ccagggcatc ccctagggct ggcaacttcg tgtgcagcta gagctttccc 130860

tgcaagaagt ttctgggccc agaactctcc accaggaagc tccctgctgt tcgctaagtc 130920

ccagcaattc tctaagtgaa gggatctgag aatgaggagg aaatgtgggg tagagatttg 130980

gtggtggtta gagacatgcc cccctcatta ctgccaacag tttcggctgc atttttcacg 131040

tacctcggtt cctcttcctg aagttcttgt gccctgctct tcagcaccgt gggccttatc 131100

cggtaggctc tgggatctcc cccttgtggg gcaggctctt ggggccagcc taagatcatg 131160

gtttagggtg atcagtgctg gcagataaat tgcaaaggca cgctggcttg tgacctcaaa 131220

tgacaatccc cccagggctg ggcactcctc ccctcccctc acttctccca cctgcagagc 131280

cagtgtccgt gggtgggcta gataggatat actgtatgcc ggctccttca agctgttgac 131340

tcactttatc aatagttcca tttaaattga cttcaatggt gagactgtat cctgtttgct 131400

attgcttatt gtgctatggg gggagggggg aggaatgtgt aacatagtta acatgggtaa 131460

agggagatct tggggtgcag cacttcaatt gcctcgtaac ccttttcatc atttcaacca 131520

catttgctaa agggagggag cagccacgcg gttagaggcc cttggggttt ctcttttcca 131580

ctgacagcct ttcccaggca gctggccagt tccccattcc ctccccagcc aggtgcaggc 131640

gtagcaatat ggacatctgg ttgctttggc ctgctgccct ctttcagggg tcctaagccc 131700

acaatcatgc ctccctaaga ccctggcatc cttcctttta agccgttggc acctctgtgc 131760

cacctctcac actggctcca gacacagcct gtgcttctgg cagctgagat cactcacttc 131820

cccctcctca tctttgttgg agctccaagt caagccacga ggtcagggcg agggcagagg 131880

tggtcaccag cgtgtcccat ctacagacct gtggcttcgt aagacttctg atttctcttc 131940

agctttgaaa agggttaccc tgggcactgg cctagagtct cacctcctaa tagacttacc 132000

cccatgagtt tgccatgttg agcaggacaa tttctggcac ttgcaagtcc catgatttct 132060

tcggtaattg tgagggtggg gggagggaca tgaaatcatc ttagcttagc ttcctgtctg 132120

tgaatgtcta tatagtgtat tgtgtgtttt aacaaatgat ttacactgac tgttgccgta 132180

aaagtgaatt tggaaataaa gttattactc tgattaaa 132218

<210> 3

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Целевой участок

<400> 3

gattaaggca tgagtgatta aattaaagcc aggcattgac ttggatggtg taatattctg 60

a 61

<210> 4

<211> 32

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Целевой участок

<400> 4

gaaggttgaa atgagaattg atttgagtta aa 32

<210> 5

<211> 104

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Целевой участок

<400> 5

tggttaccta taaactagtg caccctaatg aattaaaagg tgttgatgag ttaacttgtt 60

atgccttcca gataagacat gcaaatgggg cttcttcctc cttc 104

<210> 6

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 6

tcactcatgc cttaatc 17

<210> 7

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 7

taatcactca tgcctta 17

<210> 8

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 8

taatcactca tgcctt 16

<210> 9

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 9

ctttaattta atcactcat 19

<210> 10

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 10

gctttaattt aatcactcat 20

<210> 11

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 11

ctttaattta atcactca 18

<210> 12

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 12

ctttaattta atcactc 17

<210> 13

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 13

tccaagtcaa tgcctggctt 20

<210> 14

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 14

atccaagtca atgcctggct 20

<210> 15

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 15

accatccaag tcaatgcctg 20

<210> 16

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 16

caccatccaa gtcaatgcct 20

<210> 17

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 17

tacaccatcc aagtcaatgc 20

<210> 18

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 18

ttacaccatc caagtcaatg 20

<210> 19

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 19

acaccatcca agtcaat 17

<210> 20

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 20

tacaccatcc aagtcaa 17

<210> 21

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 21

ttacaccatc caagtca 17

<210> 22

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 22

ttacaccatc caagtc 16

<210> 23

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 23

aatattacac catccaa 17

<210> 24

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 24

agaatattac accatccaa 19

<210> 25

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 25

cagaatatta caccatccaa 20

<210> 26

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 26

gaatattaca ccatccaa 18

<210> 27

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 27

aatattacac catcca 16

<210> 28

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 28

agaatattac accatcca 18

<210> 29

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 29

cagaatatta caccatcca 19

<210> 30

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 30

gaatattaca ccatcca 17

<210> 31

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 31

tcagaatatt acaccatcca 20

<210> 32

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 32

agaatattac accatcc 17

<210> 33

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 33

cagaatatta caccatcc 18

<210> 34

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 34

gaatattaca ccatcc 16

<210> 35

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 35

tcagaatatt acaccatcc 19

<210> 36

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 36

agaatattac accatc 16

<210> 37

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 37

cagaatatta caccat 16

<210> 38

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 38

caattctcat ttcaaccttc 20

<210> 39

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 39

tcaattctca tttcaacctt 20

<210> 40

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 40

atcaattctc atttcaacct 20

<210> 41

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 41

aatcaattct catttcaacc 20

<210> 42

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 42

aaatcaattc tcatttcaac 20

<210> 43

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 43

caaatcaatt ctcatttcaa 20

<210> 44

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 44

tcaaatcaat tctcatttca 20

<210> 45

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 45

ctcaaatcaa ttctcatttc 20

<210> 46

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 46

actcaaatca attctcattt 20

<210> 47

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 47

aactcaaatc aattctcatt 20

<210> 48

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 48

taactcaaat caattctcat 20

<210> 49

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 49

ttaactcaaa tcaattctca 20

<210> 50

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 50

tttaactcaa atcaattctc 20

<210> 51

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 51

tttaactcaa atcaattct 19

<210> 52

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 52

ccttttaatt cattag 16

<210> 53

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 53

caacaccttt taattcatta 20

<210> 54

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 54

aacacctttt aattcatt 18

<210> 55

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 55

catcaacacc ttttaattca 20

<210> 56

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 56

ctcatcaaca ccttttaatt 20

<210> 57

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 57

actcatcaac accttttaat 20

<210> 58

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 58

aactcatcaa caccttttaa 20

<210> 59

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 59

taactcatca acacctttta 20

<210> 60

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 60

ttaactcatc aacacctttt 20

<210> 61

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 61

ttaactcatc aacaccttt 19

<210> 62

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 62

ttaactcatc aacacctt 18

<210> 63

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 63

ttaactcatc aacacct 17

<210> 64

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 64

gttaactcat caacacc 17

<210> 65

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 65

gttaactcat caacac 16

<210> 66

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 66

atttccaaat tcacttttac 20

<210> 67

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 67

ccgttttctt accaccct 18

1

<---

Реферат

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к антисмысловому олигонуклеотиду, и может быть применимо в медицине. Изобретение раскрывает антисмысловой олигонуклеотид с модифицированными нуклеозидами в составе, который способен снижать экспрессию тау-белка в клетке-мишени и, как следствие, регулировать функционирование нейронов, в частности влиять на аксонный транспорт в указанных клетках. Данное изобретение может быть использовано в составе лекарственного средства при лечении ряда нейродегенеративных заболеваний, а именно болезни Альцгеймера (AD), прогрессирующего надъядерного паралича (PSP), лобно-височной деменции (FTD) или FTD с паркинсонизмом, ассоциированным с хромосомой 17 (FTDP-17). 5 н. и 9 з.п. ф-лы, 8 пр., 13 табл., 6 ил.

Формула