Новые оксимовые производные 3,5-секо-4-нор-холестана, фармацевтические композиции, содержащие их, и способ их получения - RU2508289C2

Описание

Настоящее изобретение относится к новым химическим соединениям, в частности, оксимовым производным 3,5-секо-4-нор-холестана и к их применению в качестве лекарственных средств, в частности, в качестве цитопротективных лекарственных средств, в частности, в качестве нейропротективных, кардиопротективных и/или гепатопротективных лекарственных средств.

Указанные лекарственные средства особенно подходят для патологических состояний и повреждений, связанных с дегенерацией или гибелью клеток, в частности, мотонейронов и/или кардиомиоцитов и/или гепатоцитов.

Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, и к способу их получения.

Клеточные дегенеративные процессы характеризуются дисфункцией клеток, часто ведущей к нежелательным видам клеточной активности и гибели клеток.

В клетках выработались механизмы для адаптации в ответ на стресс, которые пролонгируют их жизнь или задерживают или предотвращают гибель клеток (цитопротективные механизмы).

Однако эти цитопротективные механизмы иногда недостаточны, неадекватны или индуцируются слишком поздно для того, чтобы быть эффективными, и клетки погибают. Следовательно, может оказаться полезным иметь в распоряжении новые цитопротективные лекарственные средства, которые способствовали бы цитопротекции.

Основные механизмы гибели клеток делятся по существу на некроз, апоптоз и некроптоз.

Некроз представляет собой так называемую «случайную» гибель клеток, которая происходит во время повреждения ткани. Больше всего поражается плазматическая мембрана клетки, приводя к изменению гомеостаза клетки. Клетки накапливают воду до такой степени, что это ведет к лизису их плазматической мембраны. Этот клеточный лизис приводит к высвобождению содержимого цитоплазмы в окружающую среду. Некроз стоит у истоков воспалительного процесса.

Некроз может поражать группу клеток или ткань, в то время как другие ближайшие части остаются живыми. Возникающая в результате трансформация представляет собой гибель клеток или некроз тканей.

Другими словами, некроз определяется морфологическими изменениями, возникающими, когда клетка гибнет после таких явлений, как значительное повреждение, например прерывание или уменьшение кровообращения в органе, гипертермия (большой подъем температуры), интоксикация химическим веществом, физический шок и т.д.

Один из лучше всего известных видов некроза представляет собой некроз миокарда во время инфаркта (прекращение кровоснабжения сердечной мышцы) вследствие окклюзии (обструкции) коронарной артерии.

Апоптоз представляет собой неотъемлемую часть нормальной физиологии организма. Это физиологическая форма тонко регулируемой гибели клеток, и он необходим для выживания многоклеточных организмов. Апоптоз представляет собой процесс, который играет ключевую роль во время эмбриогенеза.

Клетки, которые находятся в апоптозе или являются апоптозными, изолируют себя от других клеток. Апоптоз обычно вовлекает отдельные клетки в ткани и не вызывает воспаление. Одной из морфологических характеристик апоптоза является значительная конденсация как ядра, так и цитоплазмы, приводящая к значительному уменьшению объема клетки. Затем ядро подвергается фрагментации, и каждый фрагмент окружается двойной оболочкой. Апоптозные тела (цитоплазматические и ядерные элементы) затем высвобождаются и абсорбируются соседними клетками путем фагоцитоза.

Апоптоз может быть вызван различными путями. Например, радиация, присутствие химического соединения или гормона являются стимулами, которые могут вызвать каскад апоптозных явлений в клетке. Внутриклеточные сигналы, такие как неполный митоз или повреждение ДНК, могут также вызвать апоптоз.

Апоптоз также происходит после действия генотоксического агента или в ходе заболевания. Определенные патологические состояния характеризуются аномальным апоптозом, ведущим к потере определенных клеточных популяций, такие как, например, гепатотоксичность, ретинопатии и кардиотоксичность.

По этой причине проводится разграничение между физиологическим апоптозом и патологическим апоптозом. Изобретение преимущественно относится к патологическому апоптозу.

Существуют другие механизмы гибели клеток, например некроптоз, который проявляет характеристики некроза и апоптоза. Клетка, которая гибнет под действием некроптоза, проявляет характеристики, подобные характеристикам клетки, гибнущей в результате некроза, но биохимические стадии данного механизма больше похожи на стадии апоптоза. Этот механизм гибели клеток задействован, например, при ишемии.

Следовательно, также одной из целей настоящего изобретения является предоставление новых лекарственных средств, которые бы обеспечили возможность предотвращения и/или лечения некроза и/или патологического апоптоза и/или некроптоза (антинекротических и/или антиапоптозных и/или антинекроптозных лекарственных средств).

Клеточные дегенеративные процессы, наряду с другими причинами, могут возникать в результате патологических ситуаций, сгруппированных под термином дегенеративных заболеваний или расстройств, травм или воздействия различных факторов.

Эти травмы и факторы могут включать, например, воздействие радиации (УФ, гамма), гипоксии или лишения кислорода, лишения питательных веществ, лишения факторов роста, ядов, клеточных токсинов, выделений организма, токсинов среды, свободных радикалов, реактивных форм кислорода. Могут быть также указаны химические или биологические агенты, используемые в качестве терапевтических средств в контексте способов медицинского лечения, например, цитототоксические средства или противовоспалительные средства; могут быть также упомянуты явления ишемии-реперфузии.

Большинство важных патологических ситуаций, характеризуемых дегенеративным процессом, включают:

- заболевания костей, суставов, соединительной ткани и хрящевой ткани, такие как остеопороз, остеомиелит, артрит, включая, например, остеоартрит, ревматоидный артрит и псориатический артрит, бессосудистый некроз, прогрессирующая оссифицирующая фибродисплазия, рахит, синдром Кушинга;

- мышечные заболевания, такие как мышечная дистрофия, например, мышечная дистрофия Дюшена, миотонические дистрофии, миопатии и миастении;

- кожные заболевания, такие как дерматит, экзема, псориаз, старение или нарушение заживления;

- сердечно-сосудистые заболевания, такие как сердечная и/или сосудистая ишемия, инфаркт миокарда, ишемическая кардиопатия, хроническая или острая сердечная недостаточность, нарушение сердечного ритма, мерцательная аритмия, фибрилляция желудочков, пароксизмальная тахикардия, сердечная недостаточность, гипертрофическая кардиомиопатия, аноксия, гипоксия, побочные эффекты, вызванные лечением противораковыми средствами, поражения сердца, связанные с реперфузией, после ишемии, или случайной, или индуцированной (хирургическим вмешательством);

- циркуляторные заболевания, такие как атеросклероз, артериальный склероз, периферические сосудистые заболевания, цереброваскулярные явления, аневризмы;

- гематологические и сосудистые заболевания, такие как анемия, сосудистый амилоидоз, кровоизлияния, дрепаноцитоз, синдром фрагментации эритроцитов, нейтропения, лейкопения, аплазия костного мозга, панцитопения, тромбоцитопения, гемофилия;

- легочные заболевания, включающие пневмонию, астму, хронические обструктивные легочные заболевания, например, хронический бронхит и эмфизема;

- заболевания желудочно-кишечного тракта, такие как язвенная болезнь; заболевания печени, например, гепатит и, в частности, гепатит вирусного происхождения или имеющий в качестве возбудителя другие инфекционные агенты, алкогольный гепатит, аутоиммунный гепатит, скоротечный гепатит, определенные наследственные метаболические расстройства, болезнь Вильсона, циррозы, алкогольное заболевание печени (ALD), заболевания, вызванные токсинами или медикаментозным лечением; стеатозы, например:

- не алкогольный стеатогепатит (NASH) или стеатоз, сопровождающий экзогенную интоксикацию алкоголем или лекарственными средствами, вирусным или токсическим гепатитом, осложнениями хирургических процедур, метаболическими заболеваниями (такими как сахарный диабет, синдром непереносимости глюкозы, ожирение, гиперлипидемии, дисфункции гипоталамо-гипофизарной оси, абеталипопротеинемия, галактоземии, гликогеновые заболевания, болезнь Вильсона, болезнь Вебера-Кристиана, синдром Рефсума, карнитиновая недостаточность).

- печеночные осложнения воспалительных заболеваний пищеварительного тракта,

- аутоиммунный гепатит.

Посредством действия на стеатоз или действия на печеночный апоптоз, независимо от причины, соединения могут оказывать защитное действие на развитие печеночного фиброза и предотвращать возникновение цирроза.

- заболевания поджелудочной железы, например острый или хронический панкреатит;

- метаболические заболевания, такие как сахарный диабет и несахарный диабет, тиреоидит;

- почечные заболевания, например острые почечные расстройства или гломерулонефрит;

- вирусные и бактериальные инфекции, такие как септицемия;

- тяжелые интоксикации химическими веществами, токсинами или лекарственными средствами;

- дегенеративные расстройства, связанные с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД);

- расстройства, связанные со старением, такие как синдром ускоренного старения;

- воспалительные заболевания, такие как болезнь Крона, ревматоидный артрит;

- аутоиммунные заболевания, такие как красная волчанка;

- стоматологические расстройства, такие как расстройства, приводящие к разрушению ткани, например, периодонтит;

- глазные заболевания или расстройства, включая диабетические ретинопатии, глаукому, дегенерацию желтого пятна, дегенерацию сетчатки, пигментный ретинит, отверстия или разрывы в сетчатке, отслоение сетчатки, ишемию сетчатки, острые ретинопатии, связанные с травмой, воспалительную дегенерацию, послеоперационные осложнения, ретинопатии, вызванные лекарственными средствами, катаракту;

- расстройства слуховых путей, такие как отосклероз и вызванная антибиотиками глухота;

- заболевания, связанные с митохондриями (митохондриальные патологии), такие как атаксия Фридриха, врожденная мышечная дистрофия с митохондриальными структурными аномалиями, определенные миопатии (синдром MELAS, синдром MERFF, синдром Пирсона), синдром MIDD (наследуемые от матери диабет и глухота), синдром Вольфрама, дистония.

Кроме того, нейродегенеративные процессы характеризуются дисфункцией и гибелью нейронов, ведущим к потере неврологических функций, опосредованных мозгом (центральной нервной системой, ЦНС), спинным мозгом и периферической нервной системой (ПНС). Они могут возникать, наряду с другими причинами, в результате патологических ситуаций под общим названием нейродегенеративные заболевания, в результате травмы или в результате воздействия токсинов.

Самыми важными патологическими состояниями, которые характеризуются нейродегенеративным процессом, являются:

- хронические нейродегенеративные заболевания, в частности, хронические демиелинирующие заболевания, наследственные или спорадические, преимущественно болезнь Альцгеймера, болезнь Хантингтона, болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз, спинальная мышечная атрофия, особенно у детей раннего возраста, болезнь Крейтцфельдта-Якоба, рассеянный склероз, лейкодистрофии, включая адренолейкодистрофию, эпилепсия, деменции, шизофрения и неврологические синдромы, связанные со СПИДом;

- нейронные поражения, связанные со старением;

- наследственные или вызванные повреждением периферические нейропатии, такие как болезнь Фабри, болезнь Шарко-Мари-Туса, болезнь Краббе, лейкодистрофии, диабетические нейропатии и нейропатии, вызванные способами противоракового лечения;

- повреждения мозга, периферических нервов или спинного мозга;

- ишемия головного мозга или спинного мозга после цереброваскулярного патологического явления, или вызванная отсутствием кровоснабжения;

- наследственная, вызванная поражением или возрастная дегенерация зрительных сенсорных нейронов, такая как дегенерация желтого пятна, пигментный ретинит или вызванная глаукомой дегенерация зрительного нерва;

- наследственная, травматическая или возрастная дегенерация сенсорных нейронов слуховых нервов, ведущая к нарушению или потере слуха.

Некоторые из путей передачи сигналов, пораженные при указанных патологических состояниях, являются общими для большого числа нейродегенеративных заболеваний. Болезнь Альцгеймера представляет собой самую распространенную форму деменции. Она ведет к атрофии головного мозга, потере нейронов преимущественно в аммониевом роге, и она также поражает холинергические нейроны. Другие патологические состояния, такие как атрофии лобной доли (болезнь Пика, болезнь Крейтцфельдта-Якоба), деменция с тельцами Леви, сосудистые деменции и болезнь Паркинсона, связаны с существенной гибелью клеток, с которой связаны симптомы указанных видов деменции.

Одним из терапевтических подходов к защите нейронов против гибели является подача нейротропных белков.

Эти белки, такие как BDNF (нейротрофический фактор мозгового происхождения), CNTF (цилиарный нейротрофический фактор), NGF (фактор роста нервов), GDNF (нейротрофический фактор глиального происхождения), синтезируются во время эмбрионального развития или после травмы у взрослого. Эти ростовые факторы способствуют выживанию, созреванию и дифференциации нервных клеток. Кроме того, они ингибируют апоптозные механизмы, активируют множественные пути выживания и защищают большое количество нейронных популяций. Их использование предлагается при большинстве форм нейронной дегенерации.

Соединения, которые активировали бы экспрессию нейротропных факторов, или имитировали бы действие этих факторов, имеют терапевтический потенциал для лечения нейродегенеративных синдромов.

В частности, подача нейротрофических молекул для лечения нейронной дегенерации имеет три цели:

- компенсировать потенциальный дефицит нейротрофических факторов, связанных с отсутствием подачи периферическими или центральными мишенями нейронов и/или расстройством обратного транспорта этих факторов;

- не специфически вмешиваться в биохимические пути, вовлеченные в дегенеративный каскад;

- содействовать естественному компенсаторному явлению дендритного роста и арборизации (древовидным разветвлениям) нервных окончаний.

Таким образом, указанные соединения оказали бы благоприятный эффект при большом числе патологических состояний, и, в частности, при патологических состояниях, поражающих периферическую и центральную нервную систему.

Кроме того, двигательные нейроны представляют собой нейроны, которые, в частности, присутствуют в спинном мозге и в стволе головного мозга. Их дегенерация и их гибель может привести к прогрессирующему ослаблению мышц конечностей, затем к атрофии и, возможно, к спастичности (т.е. постоянному сокращению) мышц.

Наиболее важными патологическими состояниями, возникающими в результате дегенерации и гибели спинальных и/или бульбарных двигательных нейронов, являются боковой амиотрофический склероз, также известный как болезнь Шарко или болезнь Лу Герига, и спинальная мышечная атрофия, в частности, у детей раннего возраста, также известная как болезнь Верднига-Гоффмана или болезнь Кугельберга-Веландера.

Кроме того, дегенерация двигательных нейронов наблюдается в случаях травм с раздавливанием и/или разрывом спинного мозга или периферических двигательных нервов.

В более общем смысле, термин «спинальная мышечная атрофия» используется для заболеваний, при которых подразумевается дегенерация или гибель двигательных нейронов спинного мозга.

Боковой амиотрофический склероз (ALS) представляет собой нейродегенеративное заболевание, связанное с различными типами включений, таких как тельца Леви, и характеризуется дегенерацией спинальных и корковых двигательных нейронов, при которых смертельный исход иногда связан с лобно-долевой деменцией. В ходе развития ALS дегенеративные явления возникают не только в головном мозге, но также в спинном мозге и, следовательно, в мышцах, ввиду отсутствия иннервации.

В отношении химических структур в литературе имеются некоторые примеры оксимовых производных 3,5-секо-4-нор-холестана. Данные производные в целом описаны в качестве промежуточных продуктов синтеза, в частности, синтеза азастероидов. Оксимовые производные 3,5-секо-4-нор-холестана, обладающие нейропротективными или цитопротективными свойствами, описаны, соответственно, в патентных заявках WO2006/027454 (A1) и WO2007/101925 (A1).

Однако без диффамации известных в настоящее время способов лечения сегодня нет фармакологического лечения, которое действительно эффективно для лечения цитодегенеративных заболеваний, которые характеризуются клеточной дисфункцией и гибелью, и, в частности, для лечения нейродегенеративных заболеваний. Таким образом, еще существует реальная потребность в новых продуктах, обеспечивающих эффективную защиту клеток против явлений дегенерации.

Соединения по настоящему изобретению, кроме своей новизны, проявляют очень интересные фармакологические свойства.

Обнаружено, что они преимущественно оказывают цитопротективное действие, и, в частности, нейропротективное и/или кардиопротективное и/или гепатопротективное действие.

В дополнение к их биологической активности, некоторые из этих новых соединений могут также проявлять полезные свойства в отношении их фармакологической активности, такой как их фармакокинетика, их биодоступность, их растворимость, их устойчивость, их токсичность, их абсорбция и/или их метаболизм. Это делает их очень подходящими для получения лекарственного средства, в частности, для получения лекарственного средства, которое является цитопротективным, и очень конкретно, нейропротективным и/или кардиопротективным и/или гепатопротективным.

Более конкретно, настоящее изобретение относится к новым соединениям, соответствующим формуле (I):

в которой

R₁ может представлять атом водорода или группу -CH₃, -CH₂-CN, -CH₂-OR^a, -CH₂-SR^a, -CH₂-SeR^a, -C(O)OR^a, -O-C(O)NR^aR^b, -C(O)NR^aR^b, в которой

(i) R^a и R^b, одновременно или независимо друг от друга, могут быть выбраны из атома водорода или C₁-C₆ алкильной, C₃-C₆ циклоалкильной, арильной, гетероарильной группы, или

(ii) R^a и R^b, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать не ароматический C₃-C₆ гетероцикл, и указанный гетероцикл может иметь одну или более двойных связей и/или один или более атом(ов) кислорода, серы или азота;

R₂ может представлять атом водорода или C₁-C₈ алкильную, C₂-C₈ алкенильную, C₂-C₈ алкинильную группу, или атом галогена, или группу, соответствующую формуле (A):

в которой

(i) n может представлять целое число, которое может принимать любую из величин от 1 до 8; и

(ii) Q может представлять атом кислорода или группу -NR^a, в которой R^a является таким, как определено ранее, и R^c может представлять атом водорода или C₁-C₆ алкильную, арильную, гетероарильную группу, гетероцикл, C₁-C₆ алкил-C(O)-, арил-C(O)-, гетероарил-C(O)-, гетероцикл-C(O)-, в частности, группу, представленную одной из формул (C) или (D)

или

(iii) Q может представлять группу -O-C(O)- или группу -NR^a-C(O)-, в которой R^a является таким, как определено ранее, и R^c может представлять атом водорода или C₁-C₆ алкильную, арильную, гетероарильную группу, гетероцикл.

R₃ может представлять атом водорода или C₁-C₆ алкильную, C₃-C₆ циклоалкильную, C₂-C₆ алкенильную, C₂-C₆ алкинильную, арильную группу, гетероцикл, или атом галогена, или группу -CN, -CF₃, -NO₂, -OR^a, -SR^a, -SO₂R^a, -NR^aR^b, - OC(O)R^a, -OC(O)NR^aR^b, -C(O)OR^a, -CONR^aR^b, R^a и R^b могут быть такими, как определено ранее;

R₄ может представлять атом водорода или C₁-C₆ алкильную группу, или R₃ и R₄, взятые вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, могут образовывать (C₃-C₆)-циклоалкильную группу;

R₅ может представлять атом водорода или C₁-C₆ алкильную группу, предпочтительно атом водорода или гидроксиаминогруппу (-NH₂-OH), или

R₄ и R₅, взятые вместе, могут образовывать дополнительную углерод-углеродную связь между атомами углерода, к которым они присоединены, или C₃-C₆циклоалкильную группу;

R₆ может представлять атом водорода или C₁-C₆алкильную, C₃-C₆ циклоалкильную, C₂-C₆алкенильную, C₂-C₆ алкинильную, арильную группу, или группу -CN, -OR^a, -SR^a, -SO₂R^a, -NR^aR^b, -OC(O)R^a, -OC(O)NR^aR^b, R^a и R^b могут представлять такие группы, как определено ранее, или гидроксиаминогруппу (-NH₂-OH);

R₇ может представлять C₄-C₁₂ алкильную группу, C₄-C₁₂ алкенильную группу или C₄-C₁₂ алкинильную группу, в частности, группу, выбранную из

а также:

- его SVN, ANTI изомеры, когда они существуют,

- его оптические изомеры (энантиомеры, диастереоизомеры), когда они существуют,

- его аддитивные соли с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием,

- его гидраты и его сольваты,

- его пролекарства,

за исключением следующих соединений:

- сложный эфир оксим-3-N,N-диметилглицина 4-нор-3,5-секохолестан-5-она;

- гидрохлорид сложного эфира оксим-3-N,N-диметилглицина 4-нор-3,5-секохолестан-5-она;

- оксим 4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она;

- диоксим 4-нор-3,5-секохолестан-3,5-диона;

- сложный оксим-3-(4-метил-1-пиперазин)пропановый эфир 4-нор-3,5-секохолестан-5-она;

- оксим 3-аминометил-4-нор-3,5-секохолестан-5-она;

- оксим 4,5-секохолестан-3-ол-5-она;

- оксим 3-метил-4,5-секохолестан-3-ол-5-она;

- оксим 3-N-метилкарбоксамид-4-нор-3,5-секохолестан-5-она;

- 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секохолестан-3-оевая кислота;

- оксим 3,4-нор-2,5-секохолестан-5-она;

- метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секостигмастан-3-оат;

- метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секохолестан-3-оат;

- диоксим 4,5-секохолестан-3,5-диона;

- оксим 4,5-секохолестан-3-ин-5-она;

- оксим 24-метил-A-нор-1,5-секохолест-21-ен-5-она;

- 5-оксим 3-(О-метилоксим)-4,5-секохолестан-3,5-диона;

- оксим 4-метилидин-4,5-секохолестан-5-она;

- оксим 4-метил-4,5-секохолестан-3-ин-5-она;

- метил 5-гидроксиимино-4,5-секохолестан-4-оат;

- 5-гидроксиимино-4,5-секохолестан-4-оевая кислота;

- оксим 3-оксо-4,5-секохолестан-5-она;

- оксим 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-5-она;

- оксим 4,5-секохолестан-4-ол-5-она;

- оксим 3-гидроксиметил-4,5-секохолестан-4-ол-5-она;

- 24-N,N-диэтилкарбамоил-3,5-секо-4-норхолан-5-гидроксиимино-3-оевая кислота.

В соответствии с настоящим описанием,

термин «C_x-C_y алкил» относится к линейному или разветвленному углеводородному радикалу, содержащему от x до y атомов углерода. Таким образом, посредством примеров, в зависимости от перечисленных случаев, изобретение включает линейные или разветвленные углеводородные радикалы, такие как метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, неопентил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-нонил, н-децил, н-ундецил, н-додецил. Предпочтительными являются C₁-C₆ алкильные группы. Алкильные группы могут быть необязательно замещены арильной группой, как определено ниже, и в этом случае она называется арилалкильной группой. Примерами арилакильных групп являются, в частности, бензил и фенетил. Необязательно, алкильные группы могут быть замещены одним или более заместителями, выбранными независимо из атома галогена или группы -CN, -CF₃, -COOR^a, -CONR^aR^b, -O-CONR^aR^b, -NR^aR^b, -OR^a, -SR^b, где группы R^a и R^b могут быть такими, как описано ранее;

термин «C_x-C_y алкенил» относится к линейному или разветвленному, или циклическому углеводородному радикалу, содержащему одну или более двойных связей, имеющему от x до y атомов углерода. Могут быть указаны, например, радикалы этенил, 1-пропенил, 2-пропенил, 1-бутенил, 2-бутенил, 1-пентенил, 2-пентенил, 3-метил-3-бутенил, 1-гексенил, 1-гептенил, 1-октенил. Необязательно, алкенильные группы могут быть замещены одним или более заместителями, выбранными независимо из атома галогена или группы -CN, -CF₃, -COOR^a, -C(O)NR^aR^b, -O- C(O)NR^aRb, -NR^aR^b, -OR^a, -SR^b, где группы R^a, R^b могут быть такими, как описано ранее;

термин «C_x-C_y циклоалкил» относится к насыщенному или частично ненасыщенному циклическому углеводородному радикалу, имеющему от x до y атомов углерода. Циклоалкильные группы, в частности, включают циклопропильный, циклобутильный, циклопентильный, циклопентенильный, циклогексильный, циклогексенильный заместители. Необязательно, циклоалкильные группы могут быть замещены одним или более заместителями, выбранными независимо из атома галогена или группы -CN, -CF₃, -COOR^a, -C(O)NR^aR^b, -O-C(O)NR^aR^b, -NR^aR^b, -OR^a, -SR³, группы R^a, R^b могут быть такими, как описано ранее;

термин «C_x-C_y алкинил» относится к линейному или разветвленному углеводородному радикалу, содержащему по меньшей мере одну тройную связь, имеющему от x до y атомов углерода. Алкинильные группы, в частности, включают 1-пропинильный, 2-пропинильный, 1-бутинильный, 2-бутинильный, 1-пентинильный, 2-пентинильный, 1-гептинильный, 2-гептинильный, 1-октинильный, 2-октинильный заместители. Необязательно, алкинильные группы могут быть замещены одним или более заместителями, выбранными независимо из атома галогена или группы -CN, -CF₃, -COOR^a, -C(O)NR^aR^b, -O-C(O)NR^aR^b, -NR^aR^b, -OR^a, -SR^a, группы R^a, R^b могут быть такими, как описано ранее;

термин «C_x-C_y арил» относится к ароматическому углеводородному радикалу, имеющему от x до y атомов углерода. В соответствии с изобретением предпочтительными являются ароматические углеводородные радикалы, имеющие 6 атомов углерода. Арильные группы, в частности, включают фенильный, нафтильный и бифенильный радикалы. Необязательно, арильные группы могут быть замещены одним или более заместителями, выбранными независимо из атома галогена или алкильной группы, группы -CN, -CF₃, -N₃, -NO₂, -COOR^a, -C(O)NR^aR^b, -O-C(O)NR^aR^b, -NR^aR^b, -OR^a, -SR^a, группы R^a, R^b могут быть такими, как описано ранее;

термин «C_x-C_y гетероцикл» относится к насыщенному, ненасыщенному или ароматическому моно- или полициклическому радикалу, необязательно замещенному, который может иметь от x до y атомов углерода и содержит один или более гетероатомов. Предпочтительно, гетероатомы выбраны из кислорода, серы и азота. Примерами гетероцикла являются фурильный, тиенильный, пиррольный, имидазольный, изотиазольный, тиазольный, изоксазольный, оксазольный, пиридиновый, пиразиновый, пиримидиновый, пиридазиновый, индольный, изоиндольный, индазольный, хинолиновый, изохинолиновый, фталазиновый, хиназолиновый, пирролидиновый, имидазолидиновый, пирразолидиновый, пиперидиновый, пиперазиновый, морфолиновый, тиазолидиновый, фталимидный или бензимидазольный радикалы. Необязательно, гетероциклические группы могут быть замещены одним или более заместителями, выбранными независимо из атома галогена или алкильной группы, группы -CN, -CF₃, -N₃, -NO₂, -COOR^a, - C(O)NR^aR^b, -O-C(O)NR^aR^b, -NR^aR^b, -OR^a, -SR^a, группы R^a, R^b могут быть такими, как описано ранее;

термин «галоген» относится к атому хлора, брома, фтора и йода. Предпочтительно, в соответствии с изобретением, галоген представляет собой атом фтора;

термин «лечение» означает профилактическое, исцеляющее, паллиативное лечение, а также ведение пациента (уменьшение страдания, продление жизни, замедление прогрессирования заболевания) и т.д. Лечение может, кроме того, быть проведено в комбинации с другими ингредиентами или способами лечения, такими как, в частности, другие активные соединения для лечения патологических состояний или травм, определенных в настоящей заявке;

термин «цитопротективный» относится к способности агентов, например, природных или синтетических химических соединений, поддерживать взаимодействия клеток друг с другом или с другими тканями, для защиты клеток против дегенеративных явлений, ведущих к утрате клеточной функции или к нежелательным видам клеточной активности с гибелью клеток или без нее, и/или против дегенеративных заболеваний или расстройств, ведущих к этим клеточным дисфункциям, причем указанная дисфункция или указанные заболевания или расстройства приводят или не приводят к гибели клеток;

термины «нейропротективные» или «кардиопротективные» или «гепатопротективные» относятся к таким же свойствам указанных агентов, а в частности, для клеток нервной системы («нейропротективные») или, в частности, для клеток сердечной системы («кардиопротективные»), или, в частности, для клеток печеночной системы («гепатопротективные»). Поэтому следует понимать, что цитопротективное или нейропротективное, или кардиопротективное, или гепатопротективное соединение представляет собой соединение, которое имеет свойства, описанные выше.

Соединения формулы (I), которые являются особенно предпочтительными, представляют собой те, в которых, отдельно или в комбинации:

- заместитель R₁ может быть выбран из группы -CH₃ и группы -CH₂-OH; предпочтительно, заместитель R₁ может представлять группу -CH₃;

- заместитель R₂ может быть выбран из C₁-C₈ алкильной группы, необязательно C₁-C₄ алкильной группы, группы -CH₂-CH₂-CH₃, -CH₂-CH₂-CF₂-CH₃, -CH₂-CH₂-CH(OH)-CF₃, CH₂-CH(OH)-CF₃ и -CH₂-CH₂-OH. Преимущественно, заместитель R₂ может быть выбран из группы -CH₂-CH₂-CH₃ и -CH₂-CH₂-OH;

- заместитель R₃ может быть выбран из атома водорода, алкильной группы или атома фтора. Преимущественно, заместитель R₃ может быть выбран из атома водорода или атома фтора;

- заместители R₄, R₅ и R₆ могут представлять собой атомы водорода;

- если R₄ и R₅, взятые вместе, образуют дополнительную углерод-углеродную связь между атомами углерода, к которым они присоединены, то группа R₃ представляет атом галогена, предпочтительно атом фтора.

В соответствии с другим аспектом изобретения предпочтительный заместитель R₂ может представлять группу, соответствующую следующей формуле (A):

в которой

- n=3

- Q может представлять группу -NR^a, в которой R^a может представлять группу CH₃ и

- R^c может представлять группу, соответствующую формуле (C)

В соответствии с еще одним аспектом изобретения другие предпочтительные соединения представляют собой те, для которых заместитель R₂может представлять группу, соответствующую следующей формуле (A):

в которой

- n=3

- Q может представлять группу NR^a, в которой R^a может представлять группу CH₃, и

- R^c может представлять группу, выбранную из арила, гетероарила, гетероцикла, в частности, группу, соответствующую следующей формуле (D):

В соответствии с другим аспектом изобретения также предпочтительными являются соединения, для которых R₄ вместе с R₅ образует дополнительную связь C-C между атомами углерода, к которым присоединены R₄ и R₅.

Аналогично, предпочтительными являются также соединения, соответствующие формуле (I), в которой R₆ может представлять алкильную группу, в частности, метильную или этильную группу.

Заместитель R₇, который является особенно предпочтительным в соответствии с изобретением, выбран из следующих групп G1, G2 и G5:

Особенно предпочтительными соединениями в соответствии с настоящим изобретением являются:

- оксим 4-нор-3,5-секо-3-(трифторметил)холестан-3-ол-5-она;

- оксим 3-[(N-(+)-биотиноил-N-метил)амино]-4-нор-3,5-секохолестан-5-она;

- оксим 3-[метил(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-4-нор-3,5-секохолестан-5-она;

- оксим 25-фтор-4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она;

- оксим 4-нор-3,5-секохолестан-5-она;

- оксим 3,4-динор-2,5-секохолестан-2-ол-5-она;

- оксим 4-нор-3,5-секохолест-24-ен-3-ол-5-она;

- оксим 24β-этил-4-нор-3,5-секохолест-22-ен-3-ол-5-она,

а также:

- их SYN, ANTI изомеры, когда они существуют,

- их оптические изомеры (энантиомеры, диастереоизомеры), когда они существуют,

- их аддитивные соли с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием,

- их гидраты и их сольваты,

- их пролекарства.

Аддитивные соли с фармацевтически приемлемыми кислотами могут представлять собой, например, соли, образованные с хлористоводородной, бромистоводородной, азотной, серной, фосфорной, уксусной, муравьиной, пропионовой, бензойной, малеиновой, фумаровой, янтарной, винной, лимонной, щавелевой, глиоксиловой, аспарагиновой, алкансульфоновой кислотами, такими как метан- или этансульфоновая, арилсульфоновая кислоты, такие как бензол- или паратолуолсульфоновая кислоты, или карбоновые кислоты.

Определенные предпочтительные соединения по настоящему изобретению содержат один или более атомов фтора. В качестве примера, особенно предпочтительными являются оксим 3,3-дифтор-3-метил-4,5-секохолестан-5-она и оксим 4-нор-3,5-секо-3-(трифторметил)холестан-3-ол-5-она.

Следует отметить, что в настоящем описании атом, который может быть представлен общим термином «галоген», может также представлять собой природный или синтетический радиоактивный изотоп, например для фтора, фтор-18 (¹⁸F). Меченные радиоактивным изотопом соединения формулы (I), в частности, соединения, меченные изотопом¹⁸F, могут быть очень полезны для медицинской визуализации, в частности, для позитронноэмиссионной томографии (PET), которая представляет собой методику визуализации in vivo, разработанную для диагностики заболеваний, например, в области онкологии, неврологии и кардиологии. В таком же аспекте можно указать бром или йод, соответственно меченные радиоактивными изотопами бром-75 (⁷⁵Br) и йод-124 (¹²⁴I).

В соответствии с настоящим описанием общий термин «галоген» может также охватывать природные или синтетические не радиоактивные изотопы, такие как, например, не радиоактивный изотоп фтор-19 (¹⁹F), который может использоваться для биомедицинских исследований, и, в частности, при когнитивной неврологии, и в частности, для магнитно-резонансной визуализации (ЯМР).

Соединения в соответствии с настоящим изобретением обладают очень интересными фармакологическими свойствами. В частности, они обладают выраженными цитопротективными, в частности, нейропротективными свойствами, особенно конкретно, в отношении мотонейронов, и кардиопротективными и гепатопротективными свойствами.

Эти свойства иллюстрируются ниже в экспериментальном разделе. Они оправдывают применение описанных выше соединений, а также их сложных эфиров и/или их аддитивных солей с фармацевтически приемлемыми кислотами в качестве цитопротективных лекарственных средств, в частности, нейропротективных и/или гепатопротективных лекарственных средств.

Абсолютно конкретно, соединения в соответствии с изобретением проявляют выраженную активность в отношении мотонейронов, нейронов центральной нервной системы, двигательных и периферических нервов.

Таким образом, изобретение также относится к применению в качестве лекарственного средства соединений формулы (I), включая оксим 3,4-нор-2,5-секохолестан-5-она, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секостигмастан-3-оат, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секохолестан-3-оат, оксим 4,5-секохолестан-3-ин-5-она, оксим 24-метил-A-нор-1,5-секохолест-22-ен-5-она, оксим 4-метилидин-4,5-секохолестан-5-она, оксим 4-метил-4,5-секохолестан-3-ин-5-она, метил 5-гидроксиимино-4,5-секохолестан-4-оат, оксим 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-5-она и/или 24-N,N-диэтилкарбамоил-3,5-секо-4-норхолан-5-гидроксиимино-3-оевую кислоту, а также их сложные эфиры и/или их аддитивные соли с фармацевтически приемлемыми кислотами.

Следовательно, изобретение дополнительно относится к применению соединения формулы (I), включая оксим 3,4-нор-2,5-секохолестан-5-она, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секостигмастан-3-оат, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секохолестан-3-оат, оксим 4,5-секохолестан-3-ин-5-она, оксим 24-метил-A-нор-1,5-секохолест-22-ен-5-она, оксим 4-метилидин-4,5-секохолестан-5-она, оксим 4-метил-4,5-секохолестан-3-ин-5-она, метил 5-гидроксиимино-4,5-секохолестан-4-оат, оксим 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-5-она и/или 24-N,N-диэтилкарбамоил-3,5-секо-4-норхолан-5-гидроксиимино-3-оевую кислоту, а также их сложные эфиры и/или их аддитивные соли с фармацевтически приемлемыми кислотами, для получения цитопротективного лекарственного средства.

Соединения в соответствии с настоящим изобретением на основании их цитопротективных свойств могут быть использованы для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики некроза и/или патологического апоптоза и/или некроптоза (антинекротических и/или антиапоптозных и/или антинекроптозных лекарственных средств), или для лечения или предотвращения таких расстройств, как:

- заболевания костей, суставов, соединительной ткани и хрящевой ткани, такие как остеопороз, остеомиелит, артрит, включая, например, остеоартрит, ревматоидный артрит и псориатический артрит, бессосудистый некроз, прогрессирующая оссифицирующая фибродисплазия, рахит, синдром Кушинга;

- мышечные заболевания, такие как мышечная дистрофия, например мышечная дистрофия Дюшена, мышечные дистрофии, миотонические дистрофии, миопатии и миастении;

- кожные заболевания, такие как дерматит, экзема, псориаз, старение или нарушение заживления;

- сердечно-сосудистые заболевания, такие как сердечная и/или сосудистая ишемия, инфаркт миокарда, ишемическая кардиопатия, хроническая или острая сердечная недостаточность, нарушение сердечного ритма, мерцательная аритмия, фибрилляция желудочков, пароксизмальная тахикардия, сердечная недостаточность, гипертрофическая кардиомиопатия, аноксия, гипоксия, побочные эффекты, вызванные лечением противораковыми средствами, поражения сердца, связанные с реперфузией, после ишемии, или случайной, или индуцированной (хирургическим вмешательством);

- циркуляторные заболевания, такие как атеросклероз, артериальный склероз, периферические сосудистые заболевания, цереброваскулярные явления, аневризмы;

- гематологические и сосудистые заболевания, такие как анемия, сосудистый амилоидоз, кровоизлияния, дрепаноцитоз, синдром фрагментации эритроцитов, нейтропения, лейкопения, аплазия костного мозга, панцитопения, тромбоцитопения, гемофилия;

- легочные заболевания, включающие пневмонию, астму, хронические обструктивные легочные заболевания, например хронический бронхит и эмфизема;

- заболевания желудочно-кишечного тракта, такие как язвенная болезнь;

- заболевания печени, например гепатит, и, в частности, гепатит вирусного происхождения или имеющий в качестве возбудителя другие инфекционные агенты, алкогольный гепатит, аутоиммунный гепатит, скоротечный гепатит, определенные наследственные метаболические расстройства, болезнь Вильсона, циррозы, алкогольное заболевание печени (ALD), заболевания, вызванные токсинами или медикаментозным лечением; стеатозы, например:

- не алкогольный стеатогепатит (NASH), или стеатоз, сопровождающий экзогенную интоксикацию алкоголем или лекарственными средствами, вирусным или токсическим гепатитом, осложнениями хирургических процедур, метаболическими заболеваниями (такими как сахарный диабет, синдром непереносимости глюкозы, ожирение, гиперлипидемии, дисфункции гипоталамо-гипофизарной оси, абеталипопротеинемия, галактоземии, гликогеновые заболевания, болезнь Вильсона, болезнь Вебера-Кристиана, синдром Рефсума, карнитиновая недостаточность).

- печеночные осложнения воспалительных заболеваний пищеварительного тракта,

- аутоиммунный гепатит.

- Посредством действия на стеатоз или действия на печеночный апоптоз, независимо от причины, соединения могут оказывать профилактическое действие на развитие печеночного фиброза и предотвращать возникновение цирроза и заболеваний поджелудочной железы, например, острого или хронического панкреатита;

- метаболические заболевания, такие как сахарный диабет и несахарный диабет, тиреоидит;

- почечные заболевания, например, острые почечные расстройства или гломерулонефрит;

- вирусные и бактериальные инфекции, такие как септицемия;

- тяжелые интоксикации химическими веществами, токсинами или лекарственными средствами;

- дегенеративные расстройства, связанные с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД);

- расстройства, связанные со старением, такие как синдром ускоренного старения;

- воспалительные заболевания, такие как болезнь Крона, ревматоидный артрит;

- аутоиммунные заболевания, такие как красная волчанка;

- стоматологические расстройства, такие как расстройства, приводящие к разрушению ткани, например, периодонтит;

- глазные заболевания и расстройства, включая диабетические ретинопатии, глаукому, дегенерацию желтого пятна, дегенерацию сетчатки, пигментный ретинит, отверстия или разрывы в сетчатке, отслоение сетчатки, ишемию сетчатки, острые ретинопатии, связанные с травмой, воспалительную дегенерацию, послеоперационные осложнения, ретинопатии, вызванные лекарственными средствами, катаракту;

- расстройства слуховых путей, такие как отосклероз и вызванная антибиотиками глухота;

- заболевания, связанные с митохондриями (митохондриальные патологии), такие как атаксия Фридриха, врожденная мышечная дистрофия с митохондриальными структурными аномалиями, определенные миопатии (синдром MELAS, синдром MERFF, синдром Пирсона), синдром MIDD (наследуемые от матери диабет и глухота), синдром Вольфрама, дистония.

Очень конкретно, лекарственные средства в соответствии с настоящим изобретением, с учетом их нейропротективных свойств, находят применение при лечении или профилактике нейродегенеративных расстройств, например, болезни Хантингтона, хронических нейродегенеративных заболеваний, преимущественно хронических демиелинирующих нейродегенеративных заболеваний, наследственных или спорадических, нейронных поражений, связанных со старением, наследственных или связанных с повреждением нейропатий, диабетических нейропатий или нейропатий, вызванных средствами противоракового лечения, травм головного мозга, периферических нервов или спинного мозга, ишемии головного мозга или спинного мозга, эпилепсии, дегенерации зрительных сенсорных нейронов, которая является наследственной, связанной с повреждениями или со старением, или дегенерацией зрительного нерва, дегенерации слуховых сенсорных нейронов, которая является наследственной, травматической или связанной со старением, лобарных атрофий и сосудистых деменций, и, в частности, спинальной мышечной атрофии, бокового амиотрофического склероза, и патологических состояний вследствие травм спинного мозга или периферических двигательных нервов.

С учетом их нейропротективных свойств в отношении мотонейронов, они могут быть использованы, в частности, при лечении спинальной мышечной атрофии, в частности, бокового амиотрофического склероза или спинальной мышечной атрофии у детей раннего возраста, и при лечении травм спинного мозга или периферических двигательных нервов, как указано выше.

Как правило, суточная доза соединения представляет собой минимальную дозу для получения терапевтического эффекта. Эта доза будет зависеть от различных уже указанных факторов. Дозы описанных выше соединений, включая оксим 3,4-нор-2,5-секохолестан-5-она, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секостигмастан-3-оат, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секохолестан-3-оат, оксим 4,5-секохолестан-3-ин-5-она, оксим 24-метил-A-нор-1,5-секохолест-22-ен-5-она, оксим 4-метилидин-4,5-секохолестан-5-она, оксим 4-метил-4,5-секохолестан-3-ин-5-она, метил 5-гидроксиимино-4,5-секохолестан-4-оат, оксим 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-5-она и/или 24-N,N-диэтилкарбамоил-3,5-секо-4-норхолан-5-гидроксиимино-3-оевую кислоту, может в целом составлять для людей от 0,001 до 100 мг на килограмм в сутки.

При необходимости, суточную дозу можно вводить двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью или более отдельными дозами в сутки или множественными субдозами, вводимыми в подходящие интервалы в течение суток.

Выбранное количество будет зависеть от многих факторов, в частности, от пути введения, длительности введения, момента введения, скорости выведения соединения, продукта или различных продуктов, используемых в комбинации с соединением, возраста, массы тела и физического состояния пациента, а также его медицинского анамнеза и любой другой информации, известной в медицине.

Лечащий врач может начать лечение в дозах ниже обычно используемых доз, затем эти дозы постепенно увеличиваются для того, чтобы лучше справиться с любыми побочными эффектами.

Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, которые содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I), включая оксим 3,4-нор-2,5-секохолестан-5-она, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секостигмастан-3-оат, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секохолестан-3-оат, оксим 4,5-секохолестан-3-ин-5-она, оксим 24-метил-A-нор-1,5-секохолест-22-ен-5-она, оксим 4-метилидин-4,5-секохолестан-5-она, оксим 4-метил-4,5-секохолестан-3-ин-5-она, метил 5-гидроксиимино-4,5-секохолестан-4-оат, оксим 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-5-она и/или 24-N,N-диэтилкарбамоил-3,5-секо-4-норхолан-5-гидроксиимино-3-оевую кислоту, или один из его сложных эфиров и/или одну из его аддитивных солей с фармацевтически приемлемыми кислотами в качестве активного ингредиента.

В этих композициях активный ингредиент преимущественно присутствует в физиологически эффективных дозах; указанные композиции могут, в частности, содержать эффективную нейропротективную дозу по меньшей мере одного указанного выше активного ингредиента.

В качестве лекарственных средств соединения, соответствующие формуле (I), включая оксим 3,4-нор-2,5-секохолестан-5-она, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секостигмастан-3-оат, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секохолестан-3-оат, оксим 4,5-секохолестан-3-ин-5-она, оксим 24-метил-A-нор-1,5-секохолест-22-ен-5-она, оксим 4-метилидин-4,5-секохолестан-5-она, оксим 4-метил-4,5-секохолестан-3-ин-5-она, метил 5-гидроксиимино-4,5-секохолестан-4-оат, оксим 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-5-она и/или 24-N,N-диэтилкарбамоил-3,5-секо-4-норхолан-5-гидроксиимино-3-оевую кислоту, а также их сложные эфиры и/или их аддитивные соли с фармацевтически приемлемыми кислотами, могут быть включены в фармацевтические композиции, предназначенные для перорального или парентерального введения.

Фармацевтические композиции в соответствии с изобретением могут дополнительно содержать по меньшей мере один другой терапевтически активный ингредиент, подлежащий применению одновременно, отдельно или с распределением по времени, в частности, в течение лечения у индивида, страдающего патологией или травмой, связанной с дегенерацией или гибелью клеток, и, в частности, сердечных клеток и/или мотонейронов, как определено выше.

Фармацевтические композиции или лекарственные средства в соответствии с изобретением преимущественно содержат один или более инертных эксципиентов или носителей, т.е. фармацевтически неактивных и нетоксичных. Могут быть указаны, например, физиологические, изотонические, забуференные и т.д. солевые растворы, совместимые с фармацевтическим применением и известные специалисту в данной области. Композиции могут содержать один или более агентов или носителей, выбранных из диспергирующих агентов, солюбилизирующих агентов, стабилизаторов, консервантов и т.д. Агенты или носители, используемые в препаративных формах (жидких и/или инъецируемых и/или твердых), представляют собой, в частности, метилцеллюлозу, гидроксиметилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, циклодекстрины, полисорбат 80, маннит, желатин, лактозу, растительные или животные масла, гуммиарабик и т.д. Композиции могут быть составлены в форме инъецируемой суспензии, гелей, масел, таблеток, суппозиториев, порошков, мягких капсул, твердых капсул и т.д., необязательно посредством фармацевтических форм или устройств, обеспечивающих длительное и/или отсроченное высвобождение. Для данного типа препаративной формы преимущественно используется такой агент, как целлюлоза, карбонаты или крахмалы.

Введение можно проводить способом, известным специалисту в данной области, предпочтительно перорально или путем инъекции, обычно внутрибрюшинным, интрацеребральным, интратекальным, внутривенным, внутриартериальным или внутримышечным путем. Введение пероральным путем предпочтительно в случае длительного лечения, причем предпочтительным путем введения является сублингвальный, пероральный или транскутанный (чрескожный).

Для инъекции соединения обычно упаковывают в форме жидких суспензий, которые можно инъецировать, например, посредством шприцев или путем инфузии. Следует понимать, что скорость потока и/или инъецируемая доза, или в целом доза, подлежащая введению, может быть подобрана специалистом в данной области в зависимости от пациента, патологии, способа введения и т.д. Понятно, что повторное введение может быть выполнено, необязательно, в комбинации с другими активными ингредиентами или любыми фармацевтически приемлемыми носителями (буферами, солевыми растворами, изотоническими растворами, в присутствии стабилизаторов и т.д.).

Изобретение может быть применимо для млекопитающих, в частности людей.

Настоящее изобретение дополнительно относится к описанному выше способу получения композиции, отличающемуся тем, что активный ингредиент или активные ингредиенты смешивают известными способами per se с приемлемыми, в частности фармацевтически приемлемыми эксципиентами.

Изобретение, в частности, относится к применению соединения формулы (I), приведенной выше, включая оксим 3,4-нор-2,5-секохолестан-5-она, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секостигмастан-3-оат, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секохолестан-3-оат, оксим 4,5-секохолестан-3-ин-5-она, оксим 24-метил-A-нор-1,5-секохолест-22-ен-5-она, оксим 4-метилидин-4,5-секохолестан-5-она, оксим 4-метил-4,5-секохолестан-3-ин-5-она, метил 5-гидроксиимино-4,5-секохолестан-4-оат, оксим 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-5-она и/или 24-N,N-диэтилкарбамоил-3,5-секо-4-норхолан-5-гидроксиимино-3-оевую кислоту, для получении лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики патологических состояний или травм, связанных с дегенерацией или гибелью клеток, в частности, сердечных клеток и/или нейронов, независимо от того, естественные это явления или случайные.

Более конкретно, изобретение относится к применению соединения формулы (I), приведенной выше, включая оксим 3,4-нор-2,5-секохолестан-5-она, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секостигмастан-3-оат, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секохолестан-3-оат, оксим 4,5-секохолестан-3-ин-5-она, оксим 24-метил-A-нор-1,5-секохолест-22-ен-5-она, оксим 4-метилидин-4,5-секохолестан-5-она, оксим 4-метил-4,5-секохолестан-3-ин-5-она, метил 5-гидроксиимино-4,5-секохолестан-4-оат, оксим 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-5-она и/или 24-N,N-диэтилкарбамоил-3,5-секо-4-норхолан-5-гидроксиимино-3-оевую кислоту, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики некроза и/или патологического апоптоза и/или некроптоза (антинекротические и/или антиапоптозные и/или антинекроптозные лекарственные средства), или для лечения или профилактики расстройств, таких как:

- заболевания костей, суставов, соединительной ткани и хрящевой ткани, такие как остеопороз, остеомиелит, артрит, включая, например, остеоартрит, ревматоидный артрит и псориатический артрит, бессосудистый некроз, прогрессирующая оссифицирующая фибродисплазия, рахит, синдром Кушинга;

- мышечные заболевания, такие как мышечная дистрофия, например мышечная дистрофия Дюшена, мышечные дистрофии, миотонические дистрофии, миопатии и миастении;

- кожные заболевания, такие как дерматит, экзема, псориаз, старение или нарушение заживления;

- сердечно-сосудистые заболевания, такие как сердечная и/или сосудистая ишемия, инфаркт миокарда, ишемическая кардиопатия, хроническая или острая сердечная недостаточность, нарушение сердечного ритма, мерцательная аритмия, фибрилляция желудочков, пароксизмальная тахикардия, сердечная недостаточность, гипертрофическая кардиомиопатия, аноксия, гипоксия, побочные эффекты, вызванные лечением противораковыми средствами, поражения сердца, связанные с реперфузией, после ишемии, или случайной, или индуцированной (хирургическим вмешательством);

- циркуляторные заболевания, такие как атеросклероз, артериальный склероз, периферические сосудистые заболевания, цереброваскулярные явления, аневризмы;

- гематологические и сосудистые заболевания, такие как анемия, сосудистый амилоидоз, кровоизлияния, дрепаноцитоз, синдром фрагментации эритроцитов, нейтропения, лейкопения, аплазия костного мозга, панцитопения, тромбоцитопения, гемофилия;

- легочные заболевания, включающие пневмонию, астму, хронические обструктивные легочные заболевания, например хронический бронхит и эмфизема;

- заболевания желудочно-кишечного тракта, такие как язвенная болезнь;

- заболевания печени, например гепатит, в частности гепатит вирусного происхождения или имеющий в качестве возбудителя другие инфекционные агенты, алкогольный гепатит, аутоиммунный гепатит, скоротечный гепатит, определенные наследственные метаболические расстройства, болезнь Вильсона, циррозы, алкогольное заболевание печени (ALD), заболевания, вызванные токсинами или медикаментозным лечением; стеатозы, например:

- не алкогольный стеатогепатит (NASH) или стеатоз, сопровождающий экзогенную интоксикацию алкоголем или лекарственными средствами, вирусным или токсическим гепатитом, осложнениями хирургических процедур, метаболическими заболеваниями (такими как сахарный диабет, синдром непереносимости глюкозы, ожирение, гиперлипидемии, дисфункции гипоталамо-гипофизарной оси, абеталипопротеинемия, галактоземии, гликогеновые заболевания, болезнь Вильсона, болезнь Вебера-Кристиана, синдром Рефсума, карнитиновая недостаточность).

- печеночные осложнения воспалительных заболеваний пищеварительного тракта,

- аутоиммунный гепатит.

- Посредством действия на стеатоз или действия на печеночный апоптоз, независимо от причины, соединения могут оказывать защитное действие на развитие печеночного фиброза и предотвращать возникновение цирроза и заболеваний поджелудочной железы, например острого или хронического панкреатита;

- метаболические заболевания, такие как сахарный диабет и несахарный диабет, тиреоидит;

- почечные заболевания, такие как, например, острые почечные расстройства или гломерулонефрит;

- вирусные и бактериальные инфекции, такие как септицемия;

- тяжелые интоксикации химическими веществами, токсинами или лекарственными средствами;

- дегенеративные расстройства, связанные с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД);

- расстройства, связанные со старением, такие как синдром ускоренного старения;

- воспалительные заболевания, такие как болезнь Крона, ревматоидный артрит;

- аутоиммунные заболевания, такие как красная волчанка;

- стоматологические расстройства, такие как расстройства, приводящие к разрушению ткани, например периодонтит;

- глазные заболевания или расстройства, включая диабетические ретинопатии, глаукому, дегенерацию желтого пятна, дегенерацию сетчатки, пигментный ретинит, отверстия или разрывы в сетчатке, отслоение сетчатки, ишемию сетчатки, острые ретинопатии, связанные с травмой, воспалительную дегенерацию, послеоперационные осложнения, ретинопатии, вызванные лекарственными средствами, катаракту;

- расстройства слуховых путей, такие как отосклероз и вызванная антибиотиками глухота;

- заболевания, связанные с митохондриями (митохондриальные патологии), такие как атаксия Фридриха, врожденная мышечная дистрофия с митохондриальными структурными аномалиями, определенные миопатии (синдром MELAS, синдром MERFF, синдром Пирсона), синдром MIDD (наследуемые от матери диабет и глухота), синдром Вольфрама, дистония, и, в частности,

- нейродегенеративные заболевания, например, болезнь Хантингтона, хронические нейродегенеративные заболевания, преимущественно, хронические демиелинирующие и нейродегенеративные заболевания, наследственные или спорадические, в частности, рассеянный склероз и лейкодистрофии, поражения нейронов, связанные со старением, наследственные или связанные с повреждением периферические нейропатии, болезнь Шарко-Мари-Туса, диабетические нейропатии или нейропатии, вызванные средствами противоракового лечения, травмы головного мозга, периферических нервов или спинного мозга, ишемии головного мозга или спинного мозга, дегенерация зрительных сенсорных нейронов, которая является наследственной, связанной с повреждениями или со старением, или дегенерацией зрительного нерва, дегенерация слуховых сенсорных нейронов, которая является наследственной, травматической или связанной со старением, лобарные атрофии и сосудистые деменции, заболевания и травмы, связанные с дегенерацией мотонейронов, а более конкретно, спинальная мышечная атрофия, в частности, у детей раннего возраста, боковой амиотрофический склероз, рассеянный склероз и травмы спинного мозга или периферических двигательных нервов.

Изобретение, в частности, относится к применению соединения формулы (I), включая оксим 3,4-нор-2,5-секохолестан-5-она, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секостигмастан-3-оат, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секохолестан-3-оат, оксим 4,5-секохолестан-3-ин-5-она, оксим 24-метил-A-нор-1,5-секохолест-22-ен-5-она, оксим 4-метилидин-4,5-секохолестан-5-она, оксим 4-метил-4,5-секохолестан-3-ин-5-она, метил 5-гидроксиимино-4,5-секохолестан-4-оат, оксим 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-5-она и/или 24-N,N-диэтилкарбамоил-3,5-секо-4-норхолан-5-гидроксиимино-3-оевую кислоту, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения спинальной мышечной атрофии, в частности, у детей раннего возраста, и бокового амиотрофического склероза.

Применение указанных лекарственных средств обычно включает введение пациентам, в частности млекопитающим, более конкретно людям, терапевтически эффективного количества соединения формулы I, включая оксим 3,4-нор-2,5-секохолестан-5-она, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секостигмастан-3-оат, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секохолестан-3-оат, оксим 4,5-секохолестан-3-ин-5-она, оксим 24-метил-A-нор-1,5-секохолест-22-ен-5-она, оксим 4-метилидин-4,5-секохолестан-5-она, оксим 4-метил-4,5-секохолестан-3-ин-5-она, метил 5-гидроксиимино-4,5-секохолестан-4-оат, оксим 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-5-она и/или 24-N,N-диэтилкарбамоил-3,5-секо-4-норхолан-5-гидроксиимино-3-оевую кислоту, в частности, для увеличения выживания клеток, в частности сердечных клеток и/или нейронов, или для стимуляции аксонального роста.

Изобретение дополнительно относится к способу лечения указанных выше, в частности, нейродегенеративных заболеваний, и, в частности, к способу лечения патологических состояний или травм, связанных с дегенерацией или гибелью нейронов, у млекопитающих (в целом пациентов), страдающих указанными патологическими состояниями или травмами, включающему введение указанным млекопитающим терапевтически эффективного количества соединения формулы I, включая оксим 3,4-нор-2,5-секохолестан-5-она, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секостигмастан-3-оат, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секохолестан-3-оат, оксим 4,5-секохолестан-3-ин-5-она, оксим 24-метил-A-нор-1,5-секохолест-22-ен-5-она, оксим 4-метилидин-4,5-секохолестан-5-она, оксим 4-метил-4,5-секохолестан-3-ин-5-она, метил 5-гидроксиимино-4,5-секохолестан-4-оат, оксим 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-5-она и/или 24-N,N-диэтилкарбамоил-3,5-секо-4-норхолан-5-гидроксиимино-3-оевую кислоту, в частности, для увеличения выживания нейронов или стимуляции аксонального роста.

Изобретение дополнительно относится к способу лечения одного из описанных выше расстройств, в частности, патологических состояний или травм, связанных с дегенерацией или гибелью мотонейронов, у млекопитающих (в целом пациентов), страдающих указанными патологическими состояниями или травмами, включающему введение указанным млекопитающим терапевтически эффективного количества соединения формулы I, включая оксим 3,4-нор-2,5-секохолестан-5-она, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секостигмастан-3-оат, метил 5-гидроксиимино-4-нор-3,5-секохолестан-3-оат, оксим 4,5-секохолестан-3-ин-5-она, оксим 24-метил-A-нор-1,5-секохолест-22-ен-5-она, оксим 4-метилидин-4,5-секохолестан-5-она, оксим 4-метил-4,5-секохолестан-3-ин-5-она, метил 5-гидроксиимино-4,5-секохолестан-4-оат, оксим 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-5-она и/или 24-N,N-диэтилкарбамоил-3,5-секо-4-норхолан-5-гидроксиимино-3-оевую кислоту, в частности, для увеличения выживания нейронов. Более конкретно, патологическими состояниями, связанными с дегенерацией или гибелью мотонейронов, являются боковой амиотрофический склероз или спинальные мышечные атрофии у детей раннего возраста.

В соответствии с другим вариантом изобретение также относится к соединениям, имеющим метящую группу, которая может быть выявлена и/или визуализирована непосредственно или косвенно методами выявления и/или визуализации, известными специалисту в данной области, такими как флуоресцентная микроскопия или метод, в котором используется преимущество очень сильного сродства авидинов (стрептовидина или нейтравидина) к биотину (Ka ~10⁷M).

В общем смысле термина «метка» означает такой структурный элемент, как радиоактивный изотоп, или не изотопный структурный элемент, например флуорофор, краситель, гаптен, биотин и т.д.

Термин «флуорофор», как правило, относится к характеристике вещества как являющегося флуоресцентным, т.е. поглощающим световую энергию (свет возбуждения), когда оно возбуждается источником энергии и быстро возвращается в форме флуоресцентного света (эмиссионный свет). Характеристика того, что вещество является флуорофором, обеспечивает возможность предусмотреть применение указанного вещества в качестве флуоресцентной метки в биологических системах (мембранах, клетках, нейронах, митохондриях и т.д.), например, для выполнения визуализации исследуемых клеток.

Биотин представляет собой кофермент, также называемый витамином H,синтезируемый растениями, бактериями и определенными грибами. Биотин обнаруживается посредством авидинов (стрептавидина или нейтравидина), которые обладают очень сильным сродством к биотину (Ka ~10⁷M). Структура биотина следующая:

Из предшествующего уровня техники известно, что включение биотиновой группы в биологически активном веществе обеспечивает возможность выделения и/или идентификации белков-мишеней или других небелковых соединений, которые могут взаимодействовать с указанным активным веществом, с использованием подхода, при котором используется преимущество очень сильного сродства авидинов к биотину. Белки-мишени или другие небелковые соединения, выделенные таким образом, характеризуются, например, масс-спектрометрией. Среди способов применения, известных специалисту в данной области, можно указать, например: диагностические тесты с использованием биотинилированных соединений; ELISA (ферментного иммуносорбентного анализа) с использованием биотинилированных антибиотиков; аффинной хроматографии на основании использования колонки иммобилизованного авидина, на которую загружены биотинилированные соединения; методов протеомного анализа (двумерного электрофореза и масс-спектрометрии) и т.д.

Метящая группа в соответствии с настоящим изобретением может быть выбрана из биотина или группы флуорофоров, таких как 7-нитробенз-2-окса-1,3-диазол-4-ил (формула D); флуорофор BODIPY®; антрацен и флуоресцеин. Предпочтительно, метящая группа в соответствии с настоящим изобретением выбрана из биотина и группы флуорофора 7-нитробенз-2-окса-1,3-диазол-4-ила (формула D).

Соединения в соответствии с настоящим изобретением, меченные биотином или группой флуорофором, представляют собой очень полезные зонды для:

- визуализации и/или выявления клеток, которые находятся в контакте с мечеными соединениями,

- исследования их распределения в живом организме, человека или животного, и их локализации в клеточных компартментах (мембранах, клетках, нейронах, митохондриях, ядре, эндоплазматическом ретикулюме, аппарате Гольжи, лизосомах, эндосомах и других органеллах и т.д.),

- применения способа выявления белков или других небелковых соединений, которые могут взаимодействовать с указанными мечеными соединениями,

- идентификации их молекулярной мишени (мишеней),

- исследования молекулярно-белковых взаимодействий с молекулярной точки зрения,

- выявления моноклональных антител, специфичных для оксима 3,5-секо-4-нор-холестана или его производных,

- разработки и проведения анализов связывания, обеспечивающих возможность, наряду с другими особенностями, оптимизации лигандов с более высоким сродством к рассматриваемой мишени,

- разработки методов анализа,

- разработки новых инструментов для скрининга лигандов.

Включение указанной метящей группы не вызывало потерю биологической активности меченых соединений в соответствии с настоящим изобретением и обеспечивало возможность использования указанных меченых соединений в качестве зондов, в частности в качестве индикаторов или метящих агентов.

Следовательно, другой целью изобретения является поставка соединений формулы (I), имеющих метящую группу, выбранную из группы NBD (нитробензоксадиазола) и биотина.

Изобретение дополнительно относится к применению, в качестве зондов, и, в частности, в качестве индикаторов или метящих агентов, соединений формулы I, в которой:

R₂ может представлять группу, соответствующую следующей формуле (A):

в которой

n может представлять целое число, которое может иметь любую величину от 1 до 8;

Q может представлять атом кислорода или группу -NR^a, в которой R^a является таким, как определено ранее, и

R^c может представлять группу, соответствующую формуле (C) или (D)

Соединения, которые являются особенно предпочтительными в качестве маркеров или меток в соответствии с изобретением, представлены следующими формулами (II), (III):

Соединения формулы (I) в соответствии с изобретением могут быть получены различными способами синтеза, в частности, с использованием реакции оксимирования кетонов, которая хорошо известна специалисту в данной области. Схема, показанная ниже, иллюстрирует процедуру, используемую для получения соединений формулы (I)

В качестве примера, способ, который особенно подходит для получения соединений формулы (I), включает взаимодействие:

(i) соединения формулы (II), в которой группы R₁-R₇ являются такими, как определено ранее, с

(ii) галогенидом гидроксиламина, таким как гидрохлорид гидроксиламина.

Данный способ может быть преимущественно проведен в подходящем растворителе, таком как пиридин.

Соединения формулы (I) могут быть выделены из реакционной среды различными способами, которые хорошо известны специалисту в данной области. Необязательно, соединения формулы (I) могут быть преобразованы в одну из их фармацевтически приемлемых солей. Соединения формулы (II), используемые в качестве исходных продуктов для получения соединений формулы (I), коммерчески доступны или их получают способами, известными специалисту в данной области.

Следующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение без его ограничения. Структуры соединений, описанных в примерах и в способах получения, определяли обычными методами (ядерный магнитный резонанс, масс-спектрометрия и т.д.).

Аббревиатуры:

ТГФ: тетрагидрофуран

AcOH: уксусная кислота

EtOAc: этилацетат

TBAF: фторид тетрабутиламмония

DAST: трифторид (диэтиламино)серы

с: синглет

д: дублет

т: триплет

септ.: септуплет.

Пример 1 - Получение соединений формулы (II)

Пример 1a - Синтез 3,3-дифтор-3-метил-4,5-секохолестан-5-она

Стадия i: получение 3,3-дифтор-5,5-(этилендиокси)-4,5-секохолестана

290 мг (0,65 ммоль) 5,5-(этилендиокси)-4,5-секохолестан-3-она (WO2007/101925) солюбилизируют в 30 мл дихлорметана, затем добавляют 4 мл DAST. Смесь перемешивают при кипении с обратным холодильником в течение 2 дней, охлаждают до 0°C и гидролизуют добавлением по каплям воды. Затем смесь экстрагируют дихлорметаном, органические фазы объединяют, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат 98/2, затем 96/4). Получают 64 мг (выход 55%) ожидаемого продукта в виде коричневого масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 4,01-3,85 (м, 4H); 1,00 (с, 3H); 0,90 (д, 3H); 0,87 (дд, 6H); 0,67 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=469 [M+H]⁺

Стадия ii: получение 3,3-дифтор-4,5-секохолестан-5-она

169 мг (0,36 ммоль) 3,3-дифтор-5,5-(этилендиокси)-4,5-секохолестана добавляют к 15 мл 4N раствора HCl в диоксане при 0°C. Смесь перемешивают в течение 2 ч при 0°C и затем концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат 98/2). Получают 105 мг (выход 69%) ожидаемого продукта в виде желтого масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 3,31 (дд, 1H); 1,09 (с, 3H); 0,90 (д, 3H); 0,86 (дд, 6H); 0,69 (с, 3H)

¹⁹F-ЯМР (CDCl₃): δ (м.д., не калибров.) -86,35 (кв)

MS (ESI+): m/z=440 [M+H]⁺

Пример 1b - Синтез 4-нор-3,5-секохолестан-3,25-диол-5-она

Стадия i: получение 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-25-ол-5-она

Буферный раствор pH=7 получают смешиванием 10 мл 0,1M раствора KH₂PO₄ и 10 мл 0, M раствора NaOH.

200 мг (0,46 ммоль) 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-5-она* добавляют к 2 мл CCl₄ и 2 мл ацетонитрила. Добавляют 2,3 мл ранее полученного буферного раствора, а также 10,3 мг (0,046 ммоль) RuCl₃.H₂O и 342 мг (1,6 ммоль) NaIO₄. Реакционную среду перемешивают в течение 5 дней при 45°C, затем экстрагируют 3 раза дихлорметаном. Органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором NaCl в воде, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат 95/5). Получают 51 мг (выход 24%) ожидаемого продукта в виде бесцветного масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 4,03 (т, 2H); 2,05 (с, 3H); 1,21 (с, 6H); 1,08 (с, 3H); 0,92 (д, 3H); 0,72 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=371 [M-H₂O-AcOH+H]⁺, 389 [M-AcOH+H]⁺

* 3-Ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-5-он описан в статье Rodewald, W. J. et al. Bull. Acad. Pol. Sci., Série des Sciences Chimiques (1963), 11(8), 437-441

Стадия ii: получение 4-нор-3,5-секохолестан-3,25-диол-5-она

Смесь 50 мг (0,4 ммоль) 3-ацетилокси-4-нор-3,5-секохолестан-25-ол-5-она и 2,3 мл 5% раствора KOH в метаноле перемешивают в течение 2,5 ч при окружающей температуре. Затем реакционную среду погружают в воду, перемешивают в течение 15 минут при окружающей температуре, затем экстрагируют 3 раза этилацетатом. Органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором NaCl в воде, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат 9/1, затем 8/2). Получают 21 мг (выход 46%) ожидаемого продукта в виде желтого масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 4,12-3,86 (м, 1H); 3,73-3,53 (м, 1H); 1,21 (с, 6H); 1,08 (с, 3H); 0,92 (д, 3H); 0,66 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=389 [M-H₂O+H⁺], 447 [M+H]⁺

Пример 1c - Синтез 4-нор-3,5-секо-3-(трифторметил)холестан-3-ол-5-она

Стадия i: получение 4-нор-5,5-(этилендиокси)-3,5-секо-3-(трифторметил)холестан-3-ола

200 мг (0,46 ммоль) 5,5-(этилендиокси)-4-нор-3,5-секохолестан-3-ола (WO2007/101925) и 277 мкл (0,555 ммоль) 2M (трифторметил)триметилсилана в безводном ТГФ добавляют к 3 мл безводного ТГФ в атмосфере аргона. Смесь охлаждают до 0°C и добавляют 10 мкл 1M TBAF в ТГФ. Смесь перемешивают в течение 24 ч при окружающей температуре и добавляют 0,3 мл 2M (трифторметил)триметилсилана в ТГФ. Еще через 24 ч при окружающей температуре добавляют 0,3 мл 2M (трифторметил)триметилсилана в ТГФ и 50 мкл 1M TBAF в ТГФ. Смесь перемешивают в течение 72 ч при окружающей температуре, затем добавляют 1N раствор HCl. Смесь перемешивают в течение 15 минут при окружающей температуре, затем экстрагируют 3 раза этилацетатом. Органические фазы объединяют, промывают водой, насыщенным раствором NaCl в воде, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и затем концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (петролейный эфир 100%, затем петролейный эфир/этилацетат 95/5). Получают 63 мг (выход 27%) ожидаемого продукта.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 4,02-3,84 (м, 4H); 3,83-3,67 (м, 1H); 1,00 (с, 3H); 0,91 (д, 3H); 0,86 (дд, 6H); 0,67 (с, 3H)

¹⁹F-ЯМР (CDCl₃): δ (м.д.) -80,30 (д)

MS (ESI+): m/z=443 [M-OCH₂CH₂O+H]⁺

Стадия ii: получение 4-нор-3,5-секо-3-(трифторметил)норхолестан-3-ол-5-она

63 мг (0,125 ммоль) 4-нор-5,5-(этилендиокси)-3,5-секо-3-(трифторметил)холестан-3-ола добавляют к смеси ТГФ/H₂O/AcOH (2 мл/2 мл/2,5 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 дней при окружающей температуре, погружают в смесь H₂O/EtOAc и экстрагируют 3 раза этилацетатом. Органические фазы объединяют, промывают 10% раствором NaHCO₃, затем насыщенным раствором NaCl в воде, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат 95/5). Получают 21 мг (выход 37%) ожидаемого продукта в виде бесцветного масла, которое затем используют без дальнейшей очистки на следующей стадии.

MS (ESI+): m/z 459 [M+H]⁺, 481 [M+Na]⁺

Пример 1d - синтез 3-[(N-(+)-биотиноил-N-метил)амино]-4-нор-3,5-секохолестан-5-она

Стадия i: получение 3-[(N-(+)-биотиноил-N-метил)амино]-5,5-(этилендиокси)-4-нор-3,5-секохолестана

500 мг (1,1 ммоль) 5,5-(этилендиокси)-3-(N-метиламино)-4-нор-3,5-секохолестана (WO2007/101925), 232 мг (1,21 ммоль) гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида, 309 мг (2,53 ммоль) N,N-диметиламинопиридина и 327 мг (1,34 ммоль) D(+)-биотина в 80 мл дихлорметана вливают в колбу. Реакционную среду перемешивают в течение 48 ч при окружающей температуре и затем ее промывают 1M раствором HCl, насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. После очистки флэш-хроматографией на силикагеле (дихлорметан/метанол 98/2, затем 95/5) получают 432 мг амида с чистотой по ВЭЖХ 70% и используют без дальнейшей очистки на следующей стадии.

MS (ESI+): m/z=674 [M+H]^*

Стадия ii: получение 3-[(N-(+)-биотиноил-N-метил)амино]-4-нор-3,5-секохолестан-5-она

280 мг (0,41 ммоль) 3-[(N-(+)-биотиноил-N-метил)амино]-5,5-(этилендиокси)-4-нор-3,5-секохолестана добавляют к 5 мл 4N HCl в диоксане при 0°C. Смесь перемешивают в течение ночи при окружающей температуре и затем концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (дихлорметан, затем дихлорметан/метанол 9/1). Получают 146 мг (выход 55%) ожидаемого продукта.

MS (ESI+): m/z=630 [M+H]⁺

Пример 1e: синтез 3-[метил-(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-4-нор-3,5-секохолестан-5-она

Стадия i: получение 5,5-(этилендиокси)-3-[метил-(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-4-нор-3,5-секохолестана

200 мг (0,45 ммоль) 5,5-(этилендиокси)-3-(N-метиламино)-4-нор-3,5-секохолестана, 98 мг (0,49 ммоль) 4-хлор-7-нитробензофуразана и 125 мкл триэтиламина в 15 мл хлороформа вливают в колбу. Раствор перемешивают в течение ночи при окружающей температуре, в защищенном от света месте, и затем реакционную среду промывают 1M раствором HCl, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (дихлорметан). Получают 150 мг (выход 43%) ожидаемого продукта.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 8,45 (д, 1H); 6,06 (д, 1H); 4,07-3,69 (м, 6H); 3,54-3,35 (м, 3H); 0,99 (с, 3H); 0,90 (д, 3H); 0,86 (дд, 6H); 0,66 (с, 3H)

Стадия ii: получение 3-[метил-(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-4-нор-3,5-секохолестан-5-она

110 мг (0,18 ммоль) 5,5-(этилендиокси)-3-[метил-(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-4-нор-3,5-секохолестана добавляют к 4 мл 4N раствора HCl в диоксане при 0°C. Смесь перемешивают в течение ночи при окружающей температуре и затем концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (дихлорметан). Получают 65 мг (выход 63%) ожидаемого продукта.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 8,47 (д, 1H); 6,13 (д, 1H); 4,08-3,80 (м, 2H); 3,60-3,38 (м, 3H); 1,11 (с, 3H); 0,91 (д, 3H); 0,86 (дд, 6H); 0,73 (с, 3H)

Пример 1f - синтез 25-фтор-4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она

Стадия i: получение 25-фторхолест-4-ен-3-она

100 мг (0,247 ммоль) 25-фторхолест-5-ен-3β-ола* и 15 мл ацетона вливают в колбу при 0°C и затем добавляют 160 мкл реагента Джонса. Смесь перемешивают в течение 9 минут при 0°C и затем реакцию останавливают добавлением этанола. После концентрирования в вакууме при температуре ниже 30°C остаток поглощают 10 мл этанола и добавляют 100 мкл 1N раствора хлористоводородной кислоты. Смесь перемешивают в течение 15 минут при 50-60°C и затем концентрируют в вакууме. Полученный остаток поглощают водой и экстрагируют этилацетатом; органическую фазу отделяют, промывают водой, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. После очистки флэш-хроматографией на силикагеле (петролейный эфир, затем петролейный эфир/этилацетат 95/5) получают 69 мг енона с выходом 69%.

LC/UV/MS (254 нм): T_R=5,41 мин, m/z=403 [M+H]⁺

* 25-Фторхолест-5-ен-3β-ол доступен от Steraloids Inc (Wilton, NH)

Стадия ii: получение 25-фтор-4-нор-5-оксо-3,5-секохолестан-3-оевой кислоты

77 мг 25-фтор-4-холестен-3-она солюбилизируют в 7 мл горячего трет-бутанола, затем добавляют 79 мг (0,57 ммоль) K₂CO₃. Раствор 12 мг (0,076 ммоль) KMnO₄ и 191 мг (0,89 ммоль) NaIO₄ в 7 мл воды получают при 60°C, затем по каплям выливают в реакционную среду, не превышая 40°C. Затем реакционную смесь перемешивают при окружающей температуре в течение 1 ч. После охлаждения избыток окисленного агента разрушают добавлением твердого NaHSO₃. Смесь подкисляют до pH=1 добавлением 1N раствора HCl, затем экстрагируют 3 раза диэтиловым эфиром. Органические фазы объединяют, промывают раствором Na₂S₂O₃ в воде и насыщенным раствором NaCl, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Получают 92 мг кислоты и ее используют без дальнейшей очистки на следующей стадии.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 1,34 (д, 6H); 1,12 (с, 3H); 0,92 (д, 3H); 0,73 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=423 [M+H]⁺

Стадия iii: получение метил 25-фтор-4-нор-5-оксо-3,5-секохолестан-3-оата

92 мг (0,218 ммоль) 25-фтор-4-нор-5-оксо-3,5-секохолестан-3-оевой кислоты солюбилизируют в 1 мл метанола и 3 мл дихлорметана. При 0°C добавляют 48 мкл (0,653 ммоль) тионилхлорида и смесь перемешивают в течение 2 ч при 0°C. Затем реакционную среду концентрируют в вакууме, совместно выпаривают с толуолом, затем с дихлорметаном. Получают 78 мг сложного эфира (выход 82%) и используют без дальнейшей очистки на следующей стадии.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 3,66 (с, 3H); 2,65-2,50 (м, 1H); 2,40-2,26 (м, 1H); 1,33 (д, 6H); 1,11 (с, 3H); 0,92 (д, 3H); 0,67 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=437 [M+H]⁺

Стадия iv: получение метил 5,5-(этилендиокси)-25-фтор-4-нор-3,5-секохолестан-3-оата

123 мг (0,282 ммоль) метил 25-фтор-4-нор-5-оксо-3,5-секохолестан-3-оата растворяют в 2 мл триметилортоформиата и 2 мл этиленгликоля. Добавляют 5,4 мг (0,028 ммоль) безводной п-толуолсульфоновой кислоты, затем смесь перемешивают в течение ночи при окружающей температуре. Реакционную среду погружают в этилацетат, промывают 10% раствором NaHCO₃, затем насыщенным раствором NaCl, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат 95/5). Получают 74 мг (выход 54%) ожидаемого продукта в виде желтого масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 3,98-3,87 (м, 4H); 3,64 (с, 3H); 2,65-2,50 (м, 1H); 2,40-2,26 (м, 1H); 1,34 (д, 6H); 0,99 (с, 3H); 0,91 (д, 3H); 0,66 (с, 3H)

Стадия v: получение 5,5-(этилендиокси)-25-фтор-4-нор-3,5-секохолестан-3-ола

385 мкл (0,385 ммоль) 1N раствора LiAlH₄ в ТГФ и 1 мл безводного ТГФ вливают в колбу в атмосфере аргона. Раствор 74 мг (0,154 ммоль) метил 5,5-(этилендиокси)-25-фтор-4-нор-3,5-секохолестан-3-оата в 1 мл безводного ТГФ добавляют по каплям при 0°C к раствору LiAlH₄ в ТГФ. Реакционную среду перемешивают в течение 1 ч при 0°C и затем медленно гидролизуют при 0°C добавлением насыщенного раствора Na₂SO₄. Затем смесь поглощают этилацетатом, промывают 10% раствором NaHCO₃, затем насыщенным раствором NaCl, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Получают 63 мг (выход 90%) ожидаемого продукта в форме масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 4,00-3,86 (м, 4H); 3,55 (т, 2H); 1,33 (д, 6H); 0,98 (с, 3H); 0,91 (д, 3H); 0,66 (с, 3H)

Стадия vi: получение 25-фтор-4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она

63 мг (0,139 ммоль) 5,5-(этилендиокси)-25-фтор-4-нор-3,5-секохолестан-3-ола помещают в смесь ТГФ/H₂O/AcOH (1 мл/1 мл/2 мл). Реакционную среду перемешивают в течение ночи при окружающей температуре, погружают в этилацетат, промывают насыщенным раствором NaHCO₃, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат 98/2, затем 95/5). Получают 17 мг (выход 29%) ожидаемого продукта в виде твердого вещества.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 4,15-3,49 (м, 2H); 1,33 (д, 6H); 0,92 (д, 3H); 0,65 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=391 [M-H₂O+H]⁺, 409 [M+H]⁺

Пример 1g - синтез 4-нор-3,5-секохолестан-5-она

Стадия i: получение 5,5-(этилендиокси)-4-нор-3,5-секо-3-(тозилокси)холестана

1 г (2,3 ммоль) 5,5-(этилендиокси)-4-нор-3,5-секохолестан-3-ола (WO2007/101925) растворяют в 3,5 мл хлороформа при 0°C, затем добавляют 0,39 мл пиридина и 675 мг (3,54 ммоль) тозилхлорида. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 0°C и в течение ночи при окружающей температуре. К смеси добавляют 7 мл диэтилового эфира и 2 мл воды. Органическую фазу декантируют, промывают 2N раствором HCl, затем 5% раствором NaHCO₃, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Получают 1 г ожидаемого продукта с чистотой по ВЭЖХ 83% и используют без дальнейшей очистки на следующей стадии.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 7,78 (д, 2H); 7,34 (д, 2H); 4,00-3,77 (м, 6H); 2,44 (с, 3H); 0,91 (с, 3H); 0,90 (д, 3H); 0,86 (дд, 6H); 0,64 (с, 3H)

Стадия ii: получение 5,5-(этилендиокси)-4-нор-3,5-секохолестана

1 мл (1 ммоль) 1N раствора LiAlH₄ в ТГФ и 3 мл безводного диэтилового эфира помещают в колбу в атмосфере азота. Раствор 500 мг (0,72 ммоль) 5,5-(этилендиокси)-4-нор-3,5-секо-3-(тозилокси)холестана в 2 мл безводного диэтилового эфира по каплям добавляют при 0°C к раствору LiAlH₄. Реакционную среду перемешивают в течение 2 ч при кипении с обратным холодильником и затем медленно гидролизуют при 0°C добавлением насыщенного раствора Na₂SO₄. Затем смесь поглощают водой и экстрагируют 3 раза диэтиловым эфиром. Органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором NaCl, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (100% петролейный эфир, затем петролейный эфир/этилацетат 98/2, затем 95/5). Получают 258 мг ожидаемого продукта с чистотой по ВЭЖХ 85% и его используют без дальнейшей очистки на следующей стадии.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 3,98-3,85 (м, 4H); 1,96 (д, 1H); 1,88-1,74 (м, 1H); 0,95 (с, 3H); 0,89 (д, 3H); 0,86 (дд, 6H); 0,81 (т, 3H); 0,66 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=419 [M+H]⁺

Стадия iii: получение 4-нор-3,5-секохолестан-5-она

250 мг (0,506 ммоль) 5,5-(этилендиокси)-4-нор-3,5-секохолестана помещают в смесь ТГФ/H₂O/AcOH (2 мл/2 мл/5 мл). Реакционную среду перемешивают в течение ночи при окружающей температуре, погружают в этилацетат, промывают 10% раствором NaHCO₃, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (петролейный эфир/диэтиловый эфир 99/1). Получают 89 мг (выход 41%) ожидаемого продукта.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 2,51 (тд, 1H); 2,25 (ддд, 1H); 1,05 (с, 3H); 0,91 (д, 3H); 0,86 (дд, 6H); 0,72 (с, 3H)

Пример 1h: синтез 4-нор-3,5-секохолест-6-ен-5-она и оксима 7-гидроксиамино-4-нор-3,5-секохолестан-5-она

Стадия i: получение 6-бром-4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она

5,2 г (17,3 ммоль) 4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она (WO2007/101925) растворяют в 91 мл диоксана и 10 мл воды. Добавляют 5,45 г (30,6 ммоль) N-бромсукцинимида и реакционную среду перемешивают в течение 10 ч при 50°C, затем в течение ночи при 30°C. Раствор концентрируют в вакууме, остаток поглощают водой и экстрагируют 3 раза дихлорметаном. Органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором NaCl, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (градиент петролейного эфира/этилацетата от 10/0 до 9/1). Получают 4,88 г (выход 78%) ожидаемого продукта.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 4,49-4,37 (м, 1H); 4,15-3,91 (м, 1H); 3,79-3,68 (м, 1H); 0,95 (с, 3H); 0,90 (д, 3H); 0,86 (дд, 6H); 0,64 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=451/453 [M-H₂O+H]⁺

Стадия ii: получение 4-нор-3,5-секохолест-6-ен-3-ол-5-она

4,88 г (10,4 ммоль) 6-бром-4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она растворяют в 53 мл безводного N,N-диметилформамида, затем добавляют 5,73 г бромида лития и 5,73 г карбоната лития. Реакционную среду перемешивают в течение 6,5 ч при 100°C и затем в течение ночи при 30°C. После охлаждения смесь погружают в диэтиловый эфир и осадок отфильтровывают. Фильтрат промывают дважды 0,1N раствором HCl и затем дважды водой. Органическую фазу отделяют, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (градиент дихлорметана/этилацетата от 10/0 до 8/2). Получают 1,5 г (выход 37%) ожидаемого продукта.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 6,81 (дд, 1H); 5,92 (дд, 1H); 3,68-3,42 (м, 2H); 1,00 (с, 3H); 0,92 (д, 3H); 0,87 (дд, 6H); 0,76 (с, 3H)

Пример 1i- синтез 3,4-динор-2,5-секохолестан-2-ол-5-она

Стадия i: получение метил 3,4-динор-5-метокси-2,5-секохолест-5-ен-2-оата

500 мг (1,28 ммоль) 3,4-динор-5-оксо-2,5-секохолестан-2-оевой кислоты* и 12 мг APTS помещают в 7 мл метанола. Реакционную среду нагревают в течение 2 ч при кипении с обратным холодильником, затем добавляют 423 мкл триметилортоформиата. Нагревание продолжают в течение 2,5 ч, добавляют 423 мкл триметилортоформиата и смесь нагревают при кипении с обратным холодильником еще в течение 3 ч. После охлаждения к смеси добавляют порошкообразный карбонат калия, затем смесь концентрируют в вакууме. Остаток поглощают водой и экстрагируют этилацетатом. Органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором NaCl, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (100% петролейный эфир, затем петролейный эфир/этилацетат 95/5). Получают 331 мг (выход 62%) ожидаемого продукта.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 3,58 (с, 3H); 3,45 (с, 3H); 2,74 (д, 1H); 2,31 (д, 1H); 1,06 (с, 3H); 0,90 (д, 3H); 0,85 (дд, 6H); 0,66 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=405 [M-CH₂+H]⁺

* 3,4-Динор-5-оксо-2,5-секохолестан-2-оевая кислота описана в следующих статьях:

- Arencibia, M. T. et al. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, (1991), 12, 3349-60

- Conca, R. J. et al. J. Org. Chem., (1953), 18, 1104-111.

Стадия ii - получение 3,4-динор-5-метокси-2,5-секохолест-5-ен-2-ола

1,95 мл (1,95 ммоль) 1N раствора LiAlH₄ в ТГФ вливают в колбу в атмосфере аргона. Раствор 327 мг (0,781 ммоль) метил 3,4-динор-5-метокси-2,5-секохолест-5-ен-2-оата в 4 мл безводного ТГФ по каплям добавляют при 0°C к раствору LiAlH₄. Реакционную среду перемешивают в течение 30 минут при 0°C и затем медленно гидролизуют при 0°C добавлением насыщенного раствора Na₂SO₄. Затем смесь экстрагируют 3 раза этилацетатом, органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором NaCl, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Получают 310 мг ожидаемого продукта и его используют без дальнейшей очистки на следующей стадии.

MS (ESI+): m/z=359 [M-OCH₃]⁺

Стадия iii: получение 3,4-динор-2,5-секохолестан-2-ол-5-она

305 мг (0,78 ммоль) 3,4-динор-5-метокси-2,5-секохолест-5-ен-2-ола помещают в смесь ТГФ/H₂O/AcOH (2 мл/2 мл/6 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при окружающей температуре, погружают в этилацетат и экстрагируют 3 раза этилацетатом. Органические фазы объединяют, промывают 10% раствором NaHCO₃, затем насыщенным раствором NaCl в воде, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат 95/5). Получают 245 мг (выход 83%) ожидаемого продукта в виде бесцветного масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 4,01-3,78 (м, 2H); 1,02 (с, 3H); 0,90 (д, 3H); 0,86 (дд, 6H); 0,68 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=359 [M-H_zO+H]⁺

Пример 2 - Синтез соединений формулы (I)

Общий способ A:

1 эквивалент кетона и 6 эквивалентов гидрохлорида гидроксиламина в пиридине (примерно от 10 до 20 мл/ммоль) помещают в колбу. Раствор перемешивают в течение ночи при окружающей температуре, затем реакционную среду концентрируют в вакууме. Полученный остаток поглощают водой и экстрагируют дихлорметаном или этилацетатом; органическую фазу отделяют, промывают водой, сушат над безводным MgSO₄ и концентрируют в вакууме. При необходимости, продукт очищают флэш-хроматографией на силикагеле.

Соединение 1: оксим 3,3-дифтор-4,5-секохолестан-5-она

Оксим 3,3-дифтор-4,5-секохолестан-5-она получают из 3,3-дифтор-4,5-секохолестан-5-она (продукта стадии ii примера 1a) с выходом 87% в соответствии со способом A.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 2,56 (тд, 1H); 2,23 (дд, 1H); 1,09 (с, 3H); 0,90 (д, 3H); 0,85 (дд, 6H); 0,71 (с, 3H)

¹⁹F-ЯМР (CDCl₃): δ (м.д., не калибров.) -86,14 (кв)

MS (ESI+): m/z=405 [M-H₂O+H]⁺, 447 [M+Na]⁺

Соединение 2: оксим 4-нор-3,5-секохолестан-3,25-диол-5-она

Оксим 4-нор-3,5-секохолестан-3,25-диол-5-она получают из 4-нор-3,5-секохолестан-3,25-диол-5-она (продукта стадии ii примера 1b) с выходом 63% в соответствии со способом A.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 3,76-3,52 (м, 2H); 2,43-3,27 (дд, 1H); 1,21 (с, 6H); 1,07 (с, 3H); 0,92 (д, 3H); 0,70 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=422 [M+H]⁺

Соединение 3: оксим 4-нор-3,5-секо-3-(трифторметил)холестан-3-ол-5-она

Оксим 4-нор-3,5-секо-3-(трифторметил)холестан-3-ол-5-она получают из 4-нор-3,5-секо-3-(трифторметил)холестан-3-ол-5-она (продукта стадии ii примера 1c) с выходом 91% в соответствии со способом A.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 4,05-3,80 (м, 1H); 3,36 (дд, 1H); 1,10 (с, 3H); 0,91 (д, 3H); 0,87 (дд, 6H); 0,70 (с, 3H)

¹⁹F-ЯМР (CDCl₃): δ (м.д.) -79,59 (д); -80,96 (д)

MS (ESI+): m/z=474 [M+H]⁺

Соединение 4: оксим 3-[(N-(+)-биотиноил-N-метил)амино]-4-нор-3,5-секохолестан-5-она

Оксим 3-[(N-(+)-биотиноил-N-метил)амино]-4-нор-3,5-секохолестан-5-она получают из 3-[(N-(+)-биотиноил-N-метил)амино]-4-нор-3,5-секохолестан-5-она (продукта стадии ii примера 1d) с выходом 25% в соответствии со способом A.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 4,60-4,47 (м, 1H); 4,40-4,28 (м, 1H); 3,49-3,25 (м, 2H); 3,23-3,10 (м, 1H); 2,90 (с, 3H); 2,73 (д, 1H); 2,51-2,21 (м, 2H); 1,06 (с, 3H); 0,91 (д, 3H); 0,86 (дд, 6H); 0,70 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=645 [M+H]⁺

Соединение 5: оксим 3-[метил-(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-4-нор-3,5-секохолестан-5-она

Оксим 3-[метил-(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-4-нор-3,5-секохолестан-5-она получают из 3-[метил-(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-4-нор-3,5-секохолестан-5-она (продукта стадии ii примера 1e) с выходом 87% в соответствии со способом A.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 8,37 (д, 1H); 6,09 (д, 1H); 4,09-3,79 (м, 2H); 3,65-3,39 (м, 3H); 3,31 (дд, 1H); 1,09 (с, 3H); 0,90 (д, 3H); 0,85 (дд, 6H); 0,70 (с, 3H).

MS (ESI+): m/z=582 [M+H]⁺

Соединение 6: оксим 25-фтор-4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она

Оксим 25-фтор-4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она получают из 25-фтор-4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она (продукта стадии vi примера 1f) с выходом 34% в соответствии со способом A.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 3,75-3,53 (м, 2H); 3,36 (дд, 1H); 1,33 (д, 6H); 1,07 (с, 3H); 0,92 (д, 3H); 0,70 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=424 [M+H]⁺

Соединение 7: оксим 4-нор-3,5-секохолестан-5-она

Оксим 4-нор-3,5-секохолестан-5-она получают из 4-нор-3,5-секохолестан-5-она (продукта стадии iii примера 1g) с выходом 20% в соответствии со способом A.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 3,40-3,26 (м, 1H); 2,00 (д, 1H); 1,04 (с, 3H); 0,91 (д, 3H); 0,86 (дд, 6H); 0,69 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=390 [M +H]⁺

Соединение 8: оксим 4-нор-3,5-секохолест-6-ен-3-ол-5-она и

Соединение 9: оксим 7-гидроксиамино-4-нор-3,5-секохолест-6-ан-3-ол-5-она

195 мг (0,502 ммоль) 4-нор-3,5-секохолест-6-ен-3-ол-5-она (продукта стадии ii примера 1h) и 200 мг гидрохлорида гидроксиламина добавляют к 2 мл пиридина. Раствор перемешивают в течение ночи при окружающей температуре, затем добавляют 200 мг гидрохлорида гидроксиламина и 2 мл пиридина. Реакционную среду перемешивают в течение ночи снова при окружающей температуре, затем ее концентрируют в вакууме.

Остаток поглощают водой и экстрагируют 3 раза этилацетатом. Органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором NaCl, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме.

Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (100% дихлорметана, затем дихлорметан/этилацетат 8/2) для получения 65 мг оксима 4-нор-3,5-секохолест-6-ен-3-ол-5-она (соединение 8).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 6,79 (дд, 1H); 6,22 (д, 1H); 3,67-3,52 (м, 2H); 1,03 (с, 3H); 0,93 (д, 3H); 0,88 (дд, 6H); 0,75 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=404 [M+H]⁺

Элюирование проводят элюентом дихлорметан/метанол 95/5 для получения 71 мг оксима 7-гидроксиамино-4-нор-3,5-секохолест-6-ен-3-ол-5-она(соединения 9).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 3,82 (дд, 1H); 3,4-3,50 (м, 2H); 3,28-3,19 (м, 1H); 1,10 (с, 3H); 0,87 (дд, 6H); 0,70 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=437 [M+H]⁺

Соединение 10: получение оксима 3,4-динор-2,5-секохолестан-2-ол-5-она

Оксим 3,4-динор-2,5-секохолестан-2-ол-5-она получают из 3,4-динор-2,5-секохолестан-2-ол-5-она (продукта стадии iii примера 1i) с выходом 81% в соответствии со способом A.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 3,85-3,54 (м, 2H); 3,37 (дд, 1H); 1,09 (с, 3H); 0,86 (дд, 6H); 0,68 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=392 [M+H]⁺

Соединение 11: получение оксима 4-нор-3,5-секохолест-24-ен-3-ол-5-она

Оксим 4-нор-3,5-секохолест-24-ен-3-ол-5-она получают из 4-нор-3,5-секохолест-24-ен-3-ол-5-она с выходом 74% в соответствии со способом A. Получение 4-нор-3,5-секохолест-24-ен-3-ол-5-она описано в международной заявке WO2008/056059.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ (м.д.) 5,09 (т, 1H); 3,77-3,55 (м, 2H); 3,36 (дд, 1H); 1,68 (с, 3H); 1,60 (с, 3H); 1,08 (с, 3H); 0,92 (д, 3H); 0,70 (с, 3H)

MS (ESI+): m/z=404 [M+H]⁺

Соединение 12: получение оксима 24β-этил-4-нор-3,5-секохолест-22-ен-3-ол-5-она

Оксим 24β-этил-4-нор-3,5-секохолест-22-ен-3-ол-5-она получают из 4-нор-3,5-секохолест-22-ен-3-ол-5-она с выходом 88% в соответствии со способом A. Получение 24β-этил-4-нор-3,5-секохолест-22-ен-3-ол-5-она описано в патенте WO2008/056059.

MS (ESI+): m/z=432 [M+H]⁺

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Соединения тестировали в соответствии со следующими протоколами.

Воздействия соединений формулы (I) на выживание мотонейронов

Для демонстрации нейропротективного действия соединений формулы (I) заявители исследовали их активность на модели invitro утраты трофики мотонейронов у крыс. Может быть полезным обращение к патентной заявке WO 0142784 заявителя, относящейся к культуре мотонейронов спинного мозга.

Спинной мозг эмбрионов крыс E14 иссекают и вентральную часть диссоциируют растиранием после трипсинизации.

Мотонейроны отделяют от других спинальных клеток известным способом (Camu et al., 1993, Purification of spinal motoneurons from chicken and rat embryos by immunopanning. In "Immunoselection Strategies for Neural cell culture", Neuroprotocols: A companion to Methods in Neurosciences 2, 191-199; Henderson et al., 1993, Neutrophins promote motoneuron survival and are present in embryonic limb bud. Nature 363 (6426):266-70).

Клетки центрифугируют в градиенте плотности. Мотонейроны обогащены фракцией крупных клеток (самых плотных). Клетки данной фракции инкубируют с антителом против p75, поверхностного антигена, присутствующего на мотонейронах.

Добавляют вторичные антитела, связанные с магнитными шариками, и смесь клеток пропускают через колонку в магните (Arce et al., 1999 Cardiotrophin-1 requires LIFRbeta to promote survival of mouse motoneurons purified by a novel technique. J. Neurosci Res 55(1): 119-26). Удерживаются только мотонейроны: их чистота составляет порядка 90%.

Мотонейроны высевают при низкой плотности в культуральные лунки на полиорнитин-ламининовую подложку в нейробазальную среду (GIBCO) с добавками в соответствии с публикацией Raoul et al., 1999, Programmed cell death of embryonic motoneurons triggered through the Fas death receptor. J Cell Biol 147(5):1049-62.

В каждую серию включены отрицательные контроли (отсутствие трофических факторов) и положительные контроли (в присутствии BDNF (нейротрофического фактора мозгового происхождения) в концентрации 1 нг/мл, GDNF (нейротрофического фактора глиального происхождения) в концентрации 1 нг/мл и CNTF (цилиарного нейротрофического фактора) в концентрации 10 нг/мл, выпускаемых американской компанией PEPROTECH, Inc. и компанией Sigma-Aldrich.

Тестируемые соединения добавляют через 60 минут после высевания и культуры выдерживают при 37°C в атмосфере 5% CO₂ в течение 3 дней.

Мотонейроны имеют спонтанную тенденцию гибнуть в отсутствие нейротрофических факторов (Pettmann and Henderson, 1998, Neuronal cell death. Neuron 20(4):633-47). Через 3 дня выживание оценивают измерением флуоресценции после инкубации клеток в присутствии кальцеина, который становится флуоресцентным в живых клетках.

После 3 дней культивирования при 37°C, в атмосфере 5% CO₂ и при насыщающей влажности, в среде с добавлением нейротрофических факторов выживают до 50% первоначально высеянных мотонейронов, тогда как в культуральной среде без добавления нейротрофических факторов выживают менее чем 15% мотонейронов.

Нейропротективную активность тестируемых соединений оценивали по их способности предотвращать гибель мотонейронов при их добавлении к нейробазальной среде (GIBCO), в сравнении с выживанием мотонейронов в среде, к которой были добавлены нейротрофические факторы.

Соединения формулы I в соответствии с изобретением проявили нейропротективную активность в концентрации, способной обеспечить лучшую выживаемость мотонейронов в нейробазальной среде.

Выживаемость выражают числом живых клеток после обработки тестируемым соединением относительно выживания, вызванного нейротрофическими факторами. Следовательно, данное отношение может представлять выживаемость в процентах вследствие использования тестируемого соединения относительно выживаемости, вызванной нейротрофическими факторами. Если отношение больше чем 0, то соединения обладают положительным эффектом в отношении выживания мотонейронов.

Получены следующие результаты:

Таким образом, показано, что на основании их трофического эффекта в отношении спинальных мотонейронов соединения формулы (I) в соответствии с изобретением потенциально могут использоваться в качестве лекарственного средства, в частности, при лечении амиотрофий, в частности при лечении бокового амиотрофического склероза или спинальных мышечных атрофий раннего детского возраста и при лечении травм спинного мозга.

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ПРИМЕРЫ

Пример 1: Цитопротективные действия оксима 4-нор-3,5-секохолестан-5-она (Пример 7) в коллагеновых VI-дефицитных человеческих мышечных клетках (миобластах)

Предпосылки:

Унаследованные мутации в генах, кодированного коллагена VI у человека, вызывают два мышечных заболевания, миопатия Бетлема и врожденная мышечная дистрофия Ульриха (UCMD). Ранее было показано, что коллагеновые VI-дефицитные мышечные волокна демонстрировали скрытую митохондриальную дисфункцию с повышенной чувствительностью к селективному ингибитору ATPase олигомецина, который вызывал митохондриальную деполяризацию и повышал апоптоз (Irwin; Nat. Genet. 2003; Angelin; PNAS 2007). Данные дефекты были обратимы и могли быть нормализованы путем навешивания коллагеновых VI-дефицитных мышечных волокон на коллаген VI или добавлением циклоспорина A (CsA), ингибитор поры изменения мембранной проницаемости (РТР). Интересно, что лечение с CsA сокращало число апоптическиих ядер и восстанавливало нормальную ультраструктуру мышц как у мышей с коллагеновым VI-дефицитом (Irwin; Nat. Genet. 2003) так и у пациентов с UCMD (Merlini; PNAS 2008).

Методы:

Человеческие миобласты из нормального контроля и пациентов UCMD сеяли в пластмассовых тарелках с площадью 35 мм² и выращивали в течение 2 дней в питательной среде скелетной мышцы, с добавлением 15% эмбриональной бычьей сыворотки и 1% пенициллин-стрептомицина (фирма Sigma), в 5% CO₂ при 37°C. Затем оценивали митохондриальный мембранный потенциал на основании методов, описанных Irwin et al. (Nat. Genet. 2003). Вкратце, миобласты выдерживали с 20 нМ сложным метиловым эфиром перхлората тетраметилродамина (TMRM) в течение 30 минут при 37°C, дважды промывали и помещали под софоксный микроскоп с отображением изменений в реальном времени флуоресценции TMRM, при использовании 5 мкМ олигомецина (при время=0) для обнаружения деполяризации митохондриального трансмембранного потенциала в больных миобластах. При время=80 минут, 5 мкМ карбонилцианида 4-(трифторметокси)фенилгидразон (FCCP) добавляли для разрушения митохондриального трансмембранного потенциала. Эффекты of оксима 4-нор-3,5-секохолестан-5-она измеряли после 24-ой предварительной обработки. Каждый эксперимент повторяли три раза. Данные выражали как среднее значение ± стандартная ошибка средней (SEM).

Результаты:

Оксим 4-нор-3,5-секохолестан-5-он (Пример 7) предотвращал снижение митохондриального трансмембранного потенциала, замещенного в необработанных миобластах UCMD, при замещении олигомицином. Следовательно, данное соединение защищает мышечные клетки.

Пример 2: Цитопротективные действия оксима 25-фтор-4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она (Пример 6) и оксима 4-нор-3,5-секохолест-6-ен-3-ол-5-она (Пример 8) в основных гепатоцитах, интоксицированных палмитатом натрия

Тестированные соединения: оксим 25-фтор-4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она (Пример 6) и оксим 4-нор-3,5-секохолест-6-ен-3-ол-5-она (Пример 8)

Методы

Основные гепатоциты получали из эмбрионов мышей Е15.5. Клетки культивировали в среде НАМ, содержащей эмбриональную бычью сыворотку, инсулин, EGF и коллаген, в течение 2 двух дней в 96-луначном планшете. На третий день клетки инкубировали с тестируемыми соединениями (1, 3, 10 мкМ, солюбилизированном в ДМСО, 0.1% конечная концентрация в культурной среде) в течение 1 дня, затем интоксицировали 0,2 мМ талмитата натрия в течение 24 часов при 37°С (8 ячеек на концентрацию). ДМСО используют в качестве отрицательного контроля. Выживание клеток измеряли после окрашивания кальцеином после 24 часов инкубирования. Общую флуоресценцию измеряли в каждой ячейке с использованием Plate RUNNER HD®. Каждый эксперимент повторяли независимо 4 раза. Соединение рассматривают в качестве гепатопротективного, если спасение клетки является значительно более большим, чем наблюдаемое в ДМСО. Данный результат должен быть подтвержден по меньшей мере 3 раза из 4.

Результаты:

Соединение оксим 25-фтор-4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она (Пример 6) тестировали при 3-х концентрациях 1, 3 и 10 мкМ шесть раз. Выживание клеток было выше, чем в ДМСО при концентрации 10 мкМ. Данный результат повторяли 4 раза.

Соединение оксим 4-нор-3,5-секохолест-6-ен-3-ол-5-она (Пример 8) тестировали при концентрациях 1, 3 и 10 мкМ пять раз. Выживание клеток было намного выше, чем выживание клеток в ДМСО при трех тестируемых концентрациях. Данный результат повторяли пять раз.

Выводы:

Соединения оксим 25-фтор-4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она (Пример 6) и оксим 4-нор-3,5-секохолест-6-ен-3-ол-5-она (Пример 8) предотвращали смерть клеток при 10 мкМ и при 1, 3 и 10 мкМ, соответственно, в гепатоцитах, интоксицированных палмитатом натрия. Таким образом, тестируемые соединения могут быть рассмотрены как гепатопротективные.

Пример 3: Цитопротективные действия оксима 3,4-динор-2,5-секохолестан-2-ол-5-она (Пример 10) в основных кардиомиоцитах, интоксицированных доксорубицином

Первичные культуры кардиомиоцитов получали от однодневных самцов крыс. Кардиомиоциты новорожденной крысы (NBCM) предварительно обрабатывали в течение 1 часа тестируемым соединением перед интоксикацией в течение 24 часов 1 мкМ доксорубицином. Соединения тестировали при концентрациях 10, 3, 1 и 0,3 мкМ в 16 ячейках для каждой концентрации.

Для оценки числа NBCM и жизнеспособности, каждый планшет содержал 16 контрольных ячеек, обработанных ДМСО без доксорубицина (положительный контроль), и 16 ячеек с ДМСО и доксоубицином для контроля токсичности доксорубицина (негативный контроль). Культуры CMNB маркировали 2 мкг/мл кальцеин-АМ 30 минут при 37°С и остаточная флуоресценция подавлялась гемоглабином 6,6 мг/мл. Автоматический сбор изображения всех клеток в индивидуальных ячейках 96-ячеечного планшета осуществляли с использованием Plate Runner® (Trophos, Marseille) с 40 мсек излучением при 520 нм (голубой цвет). Выживание клеток определяли в каждой ячейке с использованием программного обеспечения Tina V4.9^© (Trophos, Marseille) в общей флуоресценции. Полученные данные анализировали односторонним ANOVA с заключительным тестом Dunnet.

Соединение оксим 43,4-динор-2,5-секохолестан-2-ол-5-она (Пример 10) тестировали при концентрациях 0,3, 1, 3 и 10 мкМ. Выживание клеток было намного выше, чем в отрицательном контроле при концентрации 10 мкМ. Данный результат повторяли три раза.

Реферат

Изобретение относится к оксимовым производным 3,5-секо-4-нор-холестана формулы (I), к их применению в качестве лекарственных средств, обладающих цитопротективным, а именно нейропротективным, кардиопротективным и/или гепатопротективным действием, а также к фармацевтическим композициям на их основе. В формуле (I) Rпредставляет -СН, Rпредставляет C-Cалкильную группу, необязательно замещенную 1-4 заместителями, выбранными из атома галогена, гидроксильной группы, или группу, соответствующую формулев которой (i) n представляет целое число, которое может принимать любую из величин от 1 до 4; и (ii) Q представляет атом кислорода или группу -NR, в которой Rвыбирают из атома водорода или C-Cалкильной группы, и Rпредставляет атом водорода или группу, представленную одной из формул (С) или (D)или (iii) Q представляет группу -О-С(О)- или группу -NR-C(O)-, в которой Rявляется таким, как определено ранее, и Rпредставляет атом водорода или C-Cалкильную, арильную, гетероарильную группу, гетероцикл, Rпредставляет атом водорода; Rпредставляет атом водорода; Rпредставляет атом водорода или гидроксиаминогруппу (-NH-ОН); или Rи R, взятые вместе, образуют дополнительную углерод-углеродную связь между атомами углерода, к которым они присоединены; Rпредставляет атом водорода; Rпредставляет группу, выбранную из G1, G2, G3, G4, G5 или G6, необязательно замещенную атомом галогена или гидроксильную группу. 12 н. и 10 з.п. ф-лы, 2 пр.

Формула

1. Соединение, соответствующее формуле (I):

в которой
- R₁ представляет -СН₃,
- R₂ представляет C₁-C₈ алкильную группу, необязательно замещенную 1-4 заместителями, выбранными из атома галогена, гидроксильной группы, или группу, соответствующую формуле (А):

в которой
(i) n представляет целое число, которое может принимать любую из величин от 1 до 4; и
(ii) Q представляет атом кислорода или группу -NR^a, в которой R^a выбирают из атома водорода или C₁-C₆ алкильной группы, и R^c представляет атом водорода или или группу, представленную одной из формул (С) или (D)

Или
(iii) Q представляет группу -О-С(О)- или группу -NR^a-C(O)-, в которой R^a является таким, как определено ранее, и R^c представляет атом водорода или C₁-C₆ алкильную, арильную, гетероарильную группу, гетероцикл,
- R₃ представляет атом водорода;
- R₄ представляет атом водорода;
- R₅ представляет атом водорода или гидроксиаминогруппу (-NH₂-ОН); или
- R₄ и R₅, взятые вместе, образуют дополнительную углерод-углеродную связь между атомами углерода, к которым они присоединены;
- R₆ представляет атом водорода;
- R₇ представляет группу, выбранную из

необязательно замещенную атомом галогена или гидроксильную группу;
за исключением следующих соединений:
- оксим 4-нор-3,5-секохолестан-3-ол-5-она;
- оксим 3-аминометил-4-нор-3,5-секохолестан-5-она;
- оксим 4,5-секохолестан-3-ол-5-она;
- оксим 3-метил-4,5-секохолестан-3-ол-5-она;
- оксим 3,4-нор-2,5-секохолестан-5-она;
- оксим 4,5-секохолестан-4-ол-5-она;
- оксим 3-гидроксиметил-4,5-секохолестан-4-ол-5-она.

8. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₂ представляет группу, соответствующую формуле (А):

в которой
- n=3
- Q представляет группу -NCH₃ и
- R^c представляет группу, представленную формулой (С)

9. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₂ представляет группу, соответствующую формуле (А):

в которой
- n=3
- Q представляет группу -NCH₃ и
- R^c представляет группу, представленную формулой (D)

10. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₇ представляет группу, выбранную из