Рекомбинантное получение стевиол-гликозидов - RU2016120635A
Код документа: RU2016120635A
Формула
1. Рекомбинантный полипептид, включающий аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью с SEQ ID NO:6.
2. Рекомбинантный полипептид по п.1, где аминокислотная последовательность обладает по меньшей мере 90% идентичностью с SEQ ID NO:6.
3. Рекомбинантный полипептид по п.1, где аминокислотная последовательность по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:6.
4. Рекомбинантный полипептид по п.1, где аминокислотная последовательность состоит из SEQ ID NO:6.
5. Выделенная нуклеиновая кислота, включающая нуклеотидную последовательность, кодирующую рекомбинантный полипептид по п.1.
6. Выделенная нуклеиновая кислота по п.5, где нуклеотидная последовательность обладает по меньшей мере 80% идентичностью с SEQ ID NO:7.
7. Вектор, включающий выделенную нуклеиновую кислоту по п.5.
8. Клетка-хозяин, включающая вектор по п.7.
9. Клетка-хозяин по п.8, где клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из бактерий, дрожжей, нитчатых грибов, цианобактерий и растительной клетки.
10. Клетка-хозяин по п.9, где клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из Escherichia; Salmonella; Bacillus; Acinetobacter; Streptomyces; Corynebacterium; Methylosinus; Methylomonas; Rhodococcus; Pseudomonas; Rhodobacter; Synechocystis; Saccharomyces; Zygosaccharomyces; Kluyveromyces; Candida; Hansenula; Debaryomyces; Mucor; Pichia; Torulopsis; Aspergillus; Arthrobotrys; Brevibacteria; Microbacterium; Arthrobacter; Citrobacter; Escherichia; Klebsiella; Pantoea; Salmonella Corynebacterium; Clostridium и Clostridium acetobutylicum.
11. Клетка-хозяин по п.9, где клетка-хозяин является клеткой, выделенной из растений, выбранных из группы, состоящей из сои; рапса; подсолнечника; хлопка; кукурузы; табака; люцерны; пшеницы; ячменя; овса; сорго; риса; брокколи; цветной капусты; капусты; пастернака; дыни; моркови; сельдерея; петрушки; томата; картофеля; земляники; арахиса; винограда; кормовых посевных культур; сахарной свеклы; сахарного тростника; бобов; гороха; ржи; льна; деревьев твердых пород; деревьев мягких пород; кормовых культур; Arabidopsis thaliana; риса (Oryza sativa); Hordeum vulgare; просо прутьевидного (Panicum vigratum); Brachypodium spp.; Brassica spp. и Crambe abyssinica.
12. Способ получения композиции стевиол-гликозидов, включающий инкубирование субстрата с рекомбинантным полипептидом, включающим аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью с SEQ ID NO:6.
13. Способ по п.12, дополнительно включающий инкубирование рекомбинантной сахарозосинтазы с субстратом и рекомбинантным полипептидом.
14. Способ по п.13, где рекомбинантная сахарозосинтаза включает аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью с SEQ ID NO:9.
15. Способ по п.13, дополнительно включающий инкубирование рекомбинантной УДФ-гликозилтрансферазы с сахарозосинтазой, субстратом и рекомбинантным полипептидом.
16. Способ по п.15, где рекомбинантная УДФ-гликозилтрансфераза включает аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью с SEQ ID NO:11.
17. Способ по п.12, где субстрат выбран из группы, состоящей из стевиозида, ребаудиозида A, ребаудиозида E и их комбинаций.
18. Композиция стевиол-гликозидов, полученная способом по п.12.
19. Композиция стевиол-гликозидов по п.18, включающая стевиол-гликозидное соединение, выбранное из ребаудиозида D, ребаудиозида E, ребаудиозида Z и их комбинаций.
20. Подсластитель, включающий композицию стевиол-гликозидов по п.18.
21. Способ получения ребаудиозида Z, включающий инкубирование субстрата с рекомбинантным полипептидом, включающим аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью с SEQ ID NO:6
22. Способ по п.21, где субстрат выбран из группы, состоящей из рубузозида, стевиозида и их комбинаций.
23. Способ по п.21, дополнительно включающий инкубирование рекомбинантной сахарозосинтазы с субстратом и рекомбинантным полипептидом.
24. Способ по п.23, где рекомбинантная сахарозосинтаза включает аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью с SEQ ID NO:9.
25. Способ по п.23, дополнительно включающий инкубирование рекомбинантной УДФ-гликозилтрансферазы с сахарозосинтазой, субстратом и рекомбинантным полипептидом.
26. Соединение ребаудиозид Z, полученное способом по п.21.
27. Соединение ребаудиозид Z по п.26, где соединение ребаудиозид Z включает смесь ребаудиозида Z1 (Reb Z1) и ребаудиозида Z2 (Reb Z2).
28. Способ синтеза ребаудиозида Z из ребаудиозида E, включающий:
получение реакционной смеси, включающей ребаудиозид E, субстрат, выбранный из группы, состоящей из сахарозы, уридин-дифосфата (УДФ) и уридиндифосфатглюкозы (УДФ-глюкозы), и HV1,
инкубирование реакционной смеси в течение времени, достаточного для получения ребаудиозида Z, где глюкоза ковалентно связана с ребаудиозидом E с получением ребаудиозида Z, глюкоза ковалентно связана с C2’-13-O-глюкозой ребаудиозида E с получением ребаудиозида Z1, и глюкоза ковалентно связана с C2’-19-O-глюкозой ребаудиозида E с получением ребаудиозида Z2.
29. Способ по п.28, дополнительно включающий добавление сахарозосинтазы к реакционной смеси.
30. Способ по п.29, где сахарозосинтаза выбрана из группы, состоящей из сахарозосинтазы 1 Arabidopsis, сахарозосинтазы 3 Arabidopsis и сахарозосинтазы Vignaradiate.
31. Способ по п.30, где сахарозосинтаза является сахарозосинтазой 1 Arabidopsis thaliana.
32. Способ синтеза ребаудиозида D из ребаудиозида E, включающий:
получение реакционной смеси, включающей ребаудиозид E, субстрат, выбранный из группы, состоящей из сахарозы, уридин-дифосфата (УДФ) и уридиндифосфатглюкозы (УДФ-глюкоза), и UGT76G1; и
инкубирование реакционной смеси в течение времени, достаточного для получения ребаудиозида D, где глюкоза ковалентно связана с ребаудиозидом E с получением ребаудиозида D.
33. Способ по п.32, дополнительно включающий добавление сахарозосинтазы к реакционной смеси.
34. Способ по п.33, где сахарозосинтаза выбрана из группы, состоящей из сахарозосинтазы 1 Arabidopsis, сахарозосинтазы 3 Arabidopsis и сахарозосинтазы Vignaradiate.
35. Способ по п.34, где сахарозосинтаза является сахарозосинтазой 1 Arabidopsis thaliana.
36. Соединение ребаудиозид Z1, включающее структуру:
37. Соединение ребаудиозид Z2, включающее структуру:
38. Подсластитель, включающий соединение, имеющее химическую структуру:
39. Подсластитель по п.38, дополнительно включающий по меньшей мере один компонент из числа наполнителя, объемообразующего вещества и ингибитора слеживания.
40. Пищевой продукт, включающий подслащивающее количество подсластителя по п.38.
41. Пищевой продукт по п.40, выбранный из группы, состоящей из напитков, кондитерских изделий, хлебобулочных изделий, печенья и жевательной резинки.
42. Подсластитель, включающий соединение, имеющее химическую структуру:
43. Подсластитель по п.42, дополнительно включающий по меньшей мере один компонент из числа наполнителя, объемообразующего вещества и ингибитора слеживания.
44. Пищевой продукт, включающий подслащивающее количество подсластителя по п.42.
45. Пищевой продукт по п.44, выбранный из группы, состоящей из напитков, кондитерских изделий, хлебобулочных изделий, печенья и жевательной резинки.
