Способы сохранения биологической активности рибонуклеиновых кислот - RU2018116201A
Код документа: RU2018116201A
Формула
1. Способ существенного поддержания или обеспечиваемого иным образом сохранения биологической активности dsRNA, присутствующей в клеточном лизате, для осуществления посттранскрипционного сайленсинга экспрессии гена в целевом организме, включающий стадию добавления к лизату соединения, имеющего функцию средства, сшивающего белок или амин.
2. Способ по п. 1, где средство добавляют к клеткам во время образования лизата или к лизату после его образования.
3. Способ по п. 1, где средство добавляют в участок, в который вводят лизат.
4. Способ по предыдущему пункту, где средство добавляют в участок перед введением лизата.
5. Способ по п. 3, где участок представляет собой почву.
6. Способ по любому из предыдущих пунктов, где сшивающее средство выбрано из группы, состоящей из полиальдегидов, диальдегидов, диэпоксидов, полиэпоксидов, пиридилдисульфидов, полифункциональных карбодиимидов, полифункциональных малеимидов, полифункциональных сложных имидоэфиров, полифункциональных н-гидроксисукцинимидных сложных эфиров и полифункциональных галогенацеталей.
7. Способ по любому из предыдущих пунктов, где средство представляет собой глутаральдегид.
8. Способ по любому из пп. 1-7, где клетки, из которых получают лизат, являются бактериальными клетками, необязательно предварительно инактивированными с помощью инактивации нагреванием.
9. Способ по предыдущему пункту, где бактериальные клетки сконструированы так, чтобы содержать последовательность ДНК, которая при транскрибировании дает двухнитевую РНК, по меньшей мере часть которой содержит последовательность, которая по существу идентична последовательности мРНК гена в эукариотической клетке.
10. Способ по предыдущему пункту, где эукариотом является насекомое, выбранное из группы, состоящей из Diabrotica virgifera virgifera (западный кукурузный жук), Diabrotica barberi (северный кукурузный жук), Diabrotica undecimpunctata howardi (южный кукурузный жук), Diabrotica virgifera zeae (мексиканский кукурузный жук), Diabrotica speciosa (тыквенный жук), нематод, проволочных червей и личинок, а также соответствующих патогенов почвы, таких как бактерии и грибы.
11. Способ по п. 1, где лизат представляет собой лизат бактериальных клеток, средство представляет собой глутаральдегид, при этом глутаральдегид применяют в отношении почвы в количестве от 0,7 до 0,2% по отношению к объему лизата, и указанная биологическая активность по существу поддерживается в течение по меньшей мере 14 дней.
12. Композиция, содержащая клеточный лизат и сшивающее белок средство, отличающаяся тем, что композиция содержит почву, лизат содержит dsRNA, а средство представляет собой глутаральдегид.
13. Клеточный лизат, содержащий сшивающее белок средство, добавленное с целью поддержания биологической активности dsRNA, гетерологично экспрессируемой в клетке.
14. Применение средства, сшивающего белок или амин, для существенной стабилизации или обеспечиваемого иным образом сохранения биологической активности dsRNA, присутствующей в клеточном лизате.
