Инсектицидные белки - RU2019105683A

1. Кассета экспрессии, содержащая промотор, функционально связанный с гетерологичной молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей:

(a) нуклеотидную последовательность под любым из SEQ ID NO: 17-37;

(b) нуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична нуклеотидной последовательности под любым из SEQ ID NO: 17-37;

(c) нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, при этом аминокислотная последовательность полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 1-16;

(d) нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, где аминокислотная последовательность полипептида на по меньшей мере 80% сходна с аминокислотной последовательностью под любым из SEQ ID NO: 1-16;

(e) нуклеотидную последовательность, которая комплементарна нуклеотидной последовательности любого из (а)-(d), приведенных выше.

2. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты под любым из SEQ ID NO: 18-37.

3. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 2-10 или SEQ ID NO: 12-16.

4. Вектор или конструкция, содержащие кассету экспрессии по п. 1.

5. Клетка-хозяин, которая содержит кассету экспрессии по п. 1.

6. Клетка-хозяин по п. 5, которая представляет собой бактериальную клетку-хозяина.

7. Клетка-хозяин по п. 5, которая представляет собой растительную клетку.

8. Способ получения полипептида с инсектицидной активностью, включающий культивирование клетки-хозяина по п. 5 в условиях, при которых экспрессируется молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид.

9. Способ получения растения или части растения, характеризующихся повышенной устойчивостью к насекомым по сравнению с контрольными растением или частью растения, включающий:

(a) введение в часть растения молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей кассету экспрессии по п. 1; и

(b) выращивание части растения с получением растения, которое экспрессирует молекулу нуклеиновой кислоты и которое характеризуется повышенной устойчивостью к насекомым по сравнению с контрольными растением или частью растения, которые не содержат молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую кассету экспрессии по п. 1.

10. Способ по п. 8, где кассета экспрессии кодирует полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 85% идентична SEQ ID NO: 9.

11. Способ повышения устойчивости к насекомым у растения или части растения по сравнению с контрольными растением или частью растения, включающий обеспечение экспрессии в растении или части растения кассеты экспрессии по п. 1, где экспрессия кассеты экспрессии приводит к повышенной устойчивости к насекомым у растения или части растения по сравнению с контрольными растением или частью растения.

12. Способ по п. 11, дополнительно включающий введение кассеты экспрессии в растение.

13. Способ по п. 11, дополнительно включающий введение кассеты экспрессии в часть растения и получение растения из части растения.

14. Способ получения растения, характеризующегося повышенной устойчивостью к насекомым по сравнению с контрольным растением, включающий выявление в части растения нуклеиновой кислоты, содержащей кассету экспрессии по п. 1, и получение растения из части растения, за счет чего обеспечивается получение растения с повышенной устойчивостью к насекомым по сравнению с контрольным растением.

15. Способ идентификации растения или части растения, характеризующихся повышенной устойчивостью к насекомым по сравнению с контрольными растением или частью растения, включающий выявление в растении или части растения нуклеиновой кислоты по п. 2, за счет чего обеспечивается идентификация растения или части растения с повышенной устойчивостью к насекомым.

16. Способ по п. 15, где кассету экспрессии или ее диагностический фрагмент выявляют в продукте амплификации из образца нуклеиновой кислоты из растения или части растения.

17. Способ получения растения с повышенной устойчивостью к насекомым по сравнению с контрольными растением или частью растения, включающий скрещивание первого родительского растения со вторым родительским растением, где по меньшей мере первое родительское растение содержит в своем геноме молекулу нуклеиновой кислоты, которая содержит кассету экспрессии по п. 1, и получение поколения потомства, где поколение потомства содержит по меньшей мере одно растение, которое имеет нуклеиновые кислоты в своем геноме и которое проявляет повышенную устойчивость к насекомым по сравнению с контрольным растением.

18. Способ по любому из пп. 9-17, где повышенная устойчивость к насекомым направлена против жесткокрылых и/или чешуекрылых насекомых-вредителей.

19. Способ по любому из пп. 9-18, где повышенная устойчивость к насекомым направлена против видов Diabrotica.

20. Способ по п. 19, где повышенная устойчивость к насекомым направлена против Diabrotica virgifera virgifera, Diabrotica barberi и/или Diabrotica undecimpunctata howardi.

21. Способ по любому из пп. 9-20, где растение или часть растения представляет собой однодольное растение.

22. Способ по любому из пп. 9-21, где растение представляет собой просо, просо прутьевидное, маис, сорго, пшеницу, овес, газонную траву, пастбищную траву, лен, рис, сахарный тростник, масличный рапс или ячмень.

23. Способ по любому из пп. 9-22, где молекула нуклеиновой кислоты дополнительно содержит последовательность промотора, выбранную из группы, состоящей из последовательности конститутивного промотора, последовательности тканеспецифичного промотора, последовательности химически индуцируемого промотора, последовательности индуцируемого повреждением промотора, последовательности индуцируемого стрессом промотора и последовательности специфичного для стадии развития промотора.

24. Трансгенное растение, содержащее молекулу нуклеиновой кислоты, которая придает повышенную устойчивость к насекомым, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит кассету экспрессии по п. 1.

25. Трансгенное растение по п. 24, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность, на по меньшей мере 80% идентичную любой из SEQ ID NO: 17-37.

26. Трансгенное растение по п. 24, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность, на по меньшей мере 95% идентичную SEQ ID NO: 36.

27. Трансгенное растение по пп. 24, 25 или 26, где указанное растение представляет собой однодольное растение.

28. Трансгенное растение по любому из пп. 24-27, где указанное растение представляет собой просо, просо прутьевидное, маис, сорго, пшеницу, овес, газонную траву, пастбищную траву, лен, рис, сахарный тростник, масличный рапс или ячмень.

29. Трансгенное растение по любому из пп. 24-28, где молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность промотора, выбранную из группы, состоящей из последовательности конститутивного промотора, последовательности тканеспецифичного промотора, последовательности химически индуцируемого промотора, последовательности индуцируемого повреждением промотора, последовательности индуцируемого стрессом промотора и последовательности специфичного для стадии развития промотора.

30. Трансгенное растение по любому из пп. 24-29, где молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере один дополнительный требуемый признак, где требуемый признак выбран из группы, состоящей из устойчивости к насекомым, переносимости абиотического стресса, мужской стерильности, устойчивости к гербицидам, устойчивости к бактериальным заболеваниям, устойчивости к грибковым заболеваниям, устойчивости к вирусным заболеваниям, устойчивости к нематодам, модифицированного метаболизма жирных кислот, модифицированного метаболизма углеводов, продуцирования ценного с коммерческой точки зрения фермента или метаболита, улучшенной пищевой ценности, улучшенных характеристик при промышленном способе и измененной репродуктивной способности.

31. Трансгенное растение по п. 30, где одна и та же молекула нуклеиновой кислоты или вторая молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует второе пестицидное средство.

32. Трансгенное растение по п. 31, где второе пестицидное средство представляет собой молекулу интерферирующей РНК.

33. Композиция, содержащая подходящий сельскохозяйственный носитель и полипептид с инсектицидной активностью, где полипептид выбран из группы, состоящей из:

a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 1-16; и

b) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1-10, где указанная аминокислотная последовательность характеризуется инсектицидной активностью.

34. Композиция по п. 33, где указанная композиция выбрана из группы, состоящей из порошка, дуста, пеллеты, гранулы, жидкости для распыления, эмульсии, коллоида и раствора.

35. Композиция по п. 33, где указанная композиция получена путем обезвоживания, лиофилизации, гомогенизации, экстракции, фильтрации, центрифугирования, осаждения или концентрирования культуры бактериальных клеток.

36. Композиция по п. 33, содержащая от приблизительно 1% до приблизительно 99% по весу указанного полипептида.

37. Композиция по любому из пп. 33-36, где композиция содержит по меньшей мере второе пестицидное средство.

38. Композиция по п. 37, где композиция содержит молекулу интерферирующей РНК.

39. Способ осуществления контроля популяции чешуекрылых или жесткокрылых вредителей, включающий приведение указанной популяции в контакт с эффективным для контроля насекомых количеством полипептида с инсектицидной активностью, где полипептид выбран из группы, состоящей из:

a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 1-16; и

b) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью под любым из SEQ ID NO: 1-16.

40. Способ уничтожения чешуекрылого или жесткокрылого вредителя, включающий приведение указанного вредителя в контакт с эффективным для контроля насекомых количеством полипептида с инсектицидной активностью, где полипептид выбран из группы, состоящей из:

а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 1-16; и

b) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1-16.

41. Способ повышения урожайности у растения, включающий выращивание в поле растения или его семени, содержащих стабильно встроенную в его геном ДНК-конструкцию по п. 4, где указанное поле заражено вредителем, против которого указанный полипептид характеризуется инсектицидной активностью.