Обогащение клетками, совместно экспрессирующими nkx6.1 и c-пептид, полученными in vitro из стволовых клеток - RU2020111055A
Код документа: RU2020111055A
Формула
1. Способ криоконсервирования агрегатов эндокринных клеток поджелудочной железы, полученных in vitro из стволовых клеток, включающий следующие стадии:
(i) обеспечение диссоциации указанных агрегатов эндокринных клеток поджелудочной железы на отдельные клетки;
(ii) обработка указанных отдельных клеток средой для криоконсервации и снижение температуры с получением криоконсервированных отдельных клеток.
2. Способ криоконсервирования агрегатов эндокринных клеток поджелудочной железы по п. 1, где указанные эндокринные клетки представляют собой эндокринные клетки, совместно экспрессирующие NKX6.1 и C-пептид, или эндокринные клетки-предшественники, совместно экспрессирующие NKX2.2 и NKX6.1.
3. Способ обогащения агрегатов эндокринных клеток, полученных in vitro из стволовых клеток, эндокринными клетками, совместно экспрессирующими NKX6.1 и C-пептид, или эндокринными клетками-предшественниками, совместно экспрессирующими NKX2.2 и NKX6.1, при этом указанный способ включает следующие стадии:
(i) обеспечение диссоциации указанных агрегатов эндокринных клеток на отдельные клетки;
(ii) обработка указанных отдельных клеток средой для криоконсервации и снижение температуры с получением криоконсервированных эндокринных клеток,
(iii) оттаивание указанных криоконсервированных эндокринных клеток; и
(iv) обеспечение повторной агрегации указанных эндокринных клеток, полученных после оттаивания.
4. Способ обогащения агрегатов эндокринных клеток по п. 3, где указанные эндокринные клетки из стадии (i) представляют собой эндокринные клетки, совместно экспрессирующие NKX6.1 и C-пептид, или эндокринные клетки-предшественники, совместно экспрессирующие NKX2.2 и NKX6.1.
5. Способ обогащения агрегатов эндокринных клеток по п. 4, где в случае, если указанные эндокринные клетки из стадии (i) представляют собой эндокринные клетки-предшественники, совместно экспрессирующие NKX2.2 и NKX6.1, указанный способ дополнительно включает стадию (v) обеспечения дифференцировки указанных эндокринных клеток-предшественников, совместно экспрессирующих NKX2.2 и NKX6.1, с получением агрегатов эндокринных клеток, совместно экспрессирующих NKX6.1 и C-пептид.
6. Способ по пп. 1-5, где указанные стволовые клетки представляют собой эмбриональные стволовые клетки, предпочтительно человеческие эмбриональные стволовые клетки.
7. Криоконсервированные отдельные эндокринные клетки, совместно экспрессирующие NKX2.2 и NKX6.1 или совместно экспрессирующие NKX6.1 и C-пептид.
8. Криоконсервированные отдельные эндокринные клетки, полученные в соответствии со способом криоконсервирования по п. 1 или 2.
9. Криоконсервированные отдельные эндокринные клетки по п. 7 или 8 для применения в трансплантации субъекту или для применения в лечении диабета.
10. Подвергнутые повторной агрегации эндокринные клетки, предусматривающие по меньшей мере 50%, предпочтительно по меньшей мере 60%, более предпочтительно по меньшей мере 70%, еще более предпочтительно по меньшей мере 80% эндокринных клеток, совместно экспрессирующих NKX6.1 и C-пептид, или эндокринных клеток-предшественников, совместно экспрессирующих NKX2.2 и NKX6.1.
11. Подвергнутые повторной агрегации эндокринные клетки, полученные в соответствии со способом обогащения агрегатов эндокринных клеток по любому из пп. 3-6.
12. Подвергнутые повторной агрегации эндокринные клетки по п. 10 или 11 для применения в трансплантации субъекту, или для применения в лечении диабета, или для применения в качестве лекарственного препарата.
13. Композиция, содержащая подвергнутые повторной агрегации эндокринные клетки по п. 10 или 11 для применения в трансплантации субъекту, или для применения в лечении диабета, или для применения в качестве лекарственного препарата.
14. Лекарственный препарат, содержащий подвергнутые повторной агрегации эндокринные клетки по п. 12 или 13.
15. Устройство, содержащее криоконсервированные отдельные эндокринные клетки по любому из пп. 7-9, или подвергнутые повторной агрегации эндокринные клетки, совместно экспрессирующие NKX6.1 и C-пептид, по любому из пп. 10-12, или композицию по п. 13, или лекарственный препарат по п. 14.
