Способы, среда и продукты для культивирования эмбрионов - RU2018122615A

1. Способ культивирования эмбриона для имплантации, при этом способ включает:

инкубацию эмбриона в стадии прекомпактизации в первой среде для культивирования эмбрионов;

добавление второй среды к первой среде для культивирования эмбрионов с образованием смешанной среды для культивирования эмбрионов; и

дальнейшую инкубацию эмбриона в смешанной среде для культивирования эмбрионов для имплантации.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что инкубация эмбриона в стадии прекомпактизации в первой среде для культивирования эмбрионов включает период времени, достаточный для образования эмбриона в стадии посткомпактизации.

3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что инкубация эмбриона в стадии прекомпактизации в первой среде для культивирования эмбрионов включает период времени в интервале от 24 до 72 часов.

4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что инкубация эмбриона в смешанной среде для культивирования эмбрионов включает период времени, достаточный для образования эмбрионом морулы или бластоцисты.

5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что инкубация эмбриона в смешанной среде для культивирования эмбрионов включает период времени в интервале от 24 до 144 часов.

6. Способ по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что первая или вторая среда, или смешанная среда содержит один или несколько антиоксидантов.

7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что первая или вторая среда, или смешанная среда содержит один или несколько антиоксидантов, выбранных из группы, включающей: ацетилкарнитин, ацетилцистеин или липоевую кислоту и/или ее приемлемую соль и/или производное.

8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что концентрация ацетилкарнитина в первой или второй среде, или смешанной среде составляет от 5 мкМ до 1 мМ.

9. Способ по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что первая среда для культивирования эмбрионов содержит более 0,1 мМ пирувата, предпочтительно более 0,20 мМ пирувата, предпочтительно более 0,25 мМ пирувата, предпочтительно более 0,30 мМ пирувата, более предпочтительно 0,32 мМ пирувата или более.

10. Способ по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что первая среда для культивирования эмбрионов содержит более 0,01 мМ аспартата, предпочтительно более 0,10 мМ аспартата, предпочтительно более 0,15 мМ, предпочтительно более 0,20 мМ, предпочтительно более 0,25 мМ, предпочтительно более 0,30 мМ, более предпочтительно 0,32 мМ аспартата или более.

11. Способ по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что первая среда для культивирования эмбрионов содержит более 0,01 мМ глицина, предпочтительно более 0,10 мМ глицина, предпочтительно более 0,15 мМ, предпочтительно более 0,20 мМ, предпочтительно более 0,25 мМ, предпочтительно более 0,30 мМ, более предпочтительно 0,32 мМ глицина или более.

12. Способ по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что первая среда для культивирования эмбрионов содержит один или более из следующих компонентов: по меньшей мере 0,05 мМ глюкозы, предпочтительно по меньшей мере 0,1 мМ глюкозы; по меньшей мере 2 мМ лактата, предпочтительно более 5 мМ лактата; по меньшей мере 0,1 мМ пирувата, предпочтительно по меньшей мере 0,3 мМ пирувата; по меньшей мере 0,01 мМ аспартата, предпочтительно по меньшей мере 0,1 мМ аспартата; по меньшей мере 0,01 мМ глицина, предпочтительно по меньшей мере 0,1 мМ глицина; и/или по меньшей мере 0,1 мМ глутамина и/или по меньшей мере 0,1 мМ аланилглутамина; и необязательно по меньшей мере 0,12 мМ ацетилкарнитина.

13. Способ по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что вторая среда содержит меньше пирувата или лактата, чем первая среда для культивирования эмбрионов, предпочтительно около 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% от содержания пирувата или лактата в первой среде для культивирования эмбрионов, более предпочтительно вторая среда не содержит пируват или содержит менее 10 мМ лактата, предпочтительно менее 5 мМ лактата, предпочтительно 1,24 мМ лактата или менее.

14. Способ по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что вторая среда содержит меньше ацетилкарнитина или EDTA, чем первая среда для культивирования эмбрионов, предпочтительно около 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60% 70%, 80% или 90% от содержания ацетилкарнитина или EDTA в первой среде для культивирования эмбрионов, более предпочтительно вторая среда не содержит или по существу не содержит ацетилкарнитин или EDTA.

15. Способ по любому из пп. 1-14, отличающийся тем, что вторая среда содержит меньше глутамина и/или аланилглутамина, чем первая среда для культивирования эмбрионов, предпочтительно вторая среда содержит около 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% от содержания глутамина и/или аланилглутамина в первой среде для культивирования эмбрионов, предпочтительно вторая среда содержит менее 0,5 мМ глутамина, предпочтительно 0,1 мМ глутамина или менее, предпочтительно не содержит или по существу не содержит глутамин, и/или содержит менее 3 мМ аланилглутамина, предпочтительно менее 1,5 мМ аланилглутамина, предпочтительно не содержит или по существу не содержит аланилглутамина.

16. Способ по любому из пп. 1-15, отличающийся тем, что вторая среда содержит глюкозу при концентрации по меньшей мере 1 мМ, предпочтительно по меньшей мере 5 мМ.

17. Способ по любому из пп. 1-16, отличающийся тем, что вторая среда содержит один или более из следующих компонентов: по меньшей мере 1 мМ глюкозы, по меньшей мере 0,01 мМ аспартата и не содержит или содержит менее 0,5 мМ глицина, предпочтительно менее 0,1 мМ глицина.

18. Способ по любому из пп. 1-17, отличающийся тем, что смешанная среда для культивирования эмбрионов содержит один или более из следующих компонентов: по меньшей мере 0,5 мМ глюкозы, предпочтительно по меньшей мере 3 мМ глюкозы; менее 15 мМ аспартата, предпочтительно менее 6 мМ лактата; менее 1,0 мМ пирувата, предпочтительно менее 0,2 мМ пирувата; по меньшей мере 0,01 мМ аспартата; и по меньшей мере 0,01 мМ глицина, предпочтительно по меньшей мере 0,05 мМ глицина; и необязательно по меньшей мере 0,06 мМ глутамина, предпочтительно по меньшей мере 0,1 мМ глутамина и/или необязательно по меньшей мере 0,06 мМ аланилглутамина, предпочтительно по меньшей мере 0,1 мМ аланилглутамина и/или необязательно по меньшей мере 0,01 мМ ацетилкарнитина.

19. Способ по любому из пп. 1-18, отличающийся тем, что концентрация аммония во время культивирования составляет менее 300 мкМ, предпочтительно менее 190 мкМ.

20. Способ по любому из пп. 1-19, отличающийся тем, что способ не включает удаление эмбриона из первой среды для культивирования эмбрионов и/или промывку эмбриона перед добавлением второй среды.

21. Способ по любому из пп. 1-20, отличающийся тем, что эмбрион представляет собой человеческий эмбрион.

22. Способ по любому из пп. 1-20, отличающийся тем, что эмбрион представляет собой эмбрион животного.

23. Способ культивирования эмбриона для имплантации, при этом способ включает использование смешиваемой среды, добавленной к первой культуральной среде для культивирования эмбриона.

24. Способ культивирования эмбриона для имплантации, при этом способ включает культивирование эмбриона в одной или нескольких культуральных средах, содержащих ацетилкарнитин и/или его приемлемую соль и/или производное.

25. Способ вспомогательной репродукции, при этом способ включает культивирование эмбриона для имплантации с применением способа по любому из пп.1-24 и имплантацию эмбриона субъекту.

26. Способ по п. 25, отличающийся тем, что способ вспомогательной репродукции включает оплодотворение in vitro.

27. Способ по п. 25 или 26, отличающийся тем, что субъект представляет собой субъекта-животного.

28. Способ по п. 25 или 26, отличающийся тем, что субъект представляет собой субъекта-человека.

29. Смешиваемая среда для добавления к среде для культивирования эмбрионов, при этом среда содержит глюкозу при концентрации по меньшей мере 1 мМ, предпочтительно по меньшей мере 3,5 мМ; и 10 мМ лактата или менее, предпочтительно 1,24 мМ лактата или менее; и/или 2 мМ пирувата или менее, предпочтительно 0,16 мМ пирувата или менее; предпочтительно среда не содержит или по существу не содержит лактат и/или пируват.

30. Смешиваемая среда по п. 29, отличающаяся тем, что среда содержит 0,01 мМ ацетилкарнитина или менее, или 0,01 мМ EDTA или менее, предпочтительно среда по существу не содержит ацетилкарнитин или EDTA.

31. Смешиваемая среда по п. 29 или 30, отличающаяся тем, что среда содержит менее 0,01 мМ глутамина или менее 3 мМ, предпочтительно 1,5 мМ аланилглутамина или менее, предпочтительно среда не содержит или по существу не содержит глутамин и/или аланилглутамин.

32. Смешиваемая среда по любому из пп. 29-31, отличающаяся тем, что среда содержит один или более из следующих компонентов: по меньшей мере 3,5 мМ глюкозы; по меньшей мере 0,01 мМ аспартата, предпочтительно по меньшей мере 0,06 мМ аспартата; и 0,5 мМ или менее, предпочтительно 0,1 мМ глицина или менее; и предпочтительно среда не содержит или по существу не содержит глицин.

33. Способ культивирования эмбриона для имплантации, при этом способ включает:

инкубацию эмбриона в стадии прекомпактизации в первой среде для культивирования эмбрионов;

добавление смешиваемой среды по любому из пп. 29-32 к первой среде для культивирования эмбрионов с образованием смешанной среды для культивирования эмбрионов; и

дальнейшую инкубацию эмбриона в смешанной среде для культивирования эмбрионов для имплантации.

34. Комбинированный продукт, содержащий:

(i) первую среду для культивирования эмбрионов; и

(ii) смешиваемую среду по любому из пп. 29-32.

35. Комбинированный продукт по п. 34, отличающийся тем, что комбинированный продукт, кроме того, содержит одно или более из следующего: (а) инструкции по культивированию эмбриона в среде для культивирования эмбрионов; (b) инструкции по добавлению смешиваемой среды к среде для культивирования эмбрионов с образованием смешанной среды для культивирования эмбрионов; (c) инструкции по инкубации эмбриона в смешанной среде для культивирования эмбрионов; и (d) инструкции по имплантации эмбриона.

36. Набор для выполнения способа по любому из пп. 1-28.

37. Набор, содержащий:

(i) первую среду для культивирования эмбрионов; и

(ii) смешиваемую среду по любому из пп. 29-32.

38. Животное, отличное от человека, полученное с использованием способа по любому из пп. 25-28.

39. Способ витрификации эмбриона, включающий:

инкубацию эмбриона в стадии прекомпактизации в первой среде для культивирования эмбрионов;

добавление второй среды к первой среде для культивирования эмбрионов с образованием смешанной среды для культивирования эмбрионов;

дальнейшую инкубацию эмбриона в смешанной среде для культивирования эмбрионов; и

замораживание эмбриона.

40. Витрифицированный эмбрион, полученный с применением способа по п. 39.