Оптимизированные гены и экспрессионные кассеты cln1, и их применение - RU2018145010A
Код документа: RU2018145010A
Формула
1. Полинуклеотид, содержащий открытую рамку считывания CLN1 человека, где последовательность полинуклеотида или его комплемента кодон-оптимизирована для экспрессии в клетке человека.
2. Полинуклеотид по п.1, где указанный полинуклеотид содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1 или нуклеотидную последовательность, обладающую, по меньшей мере, примерно 90% идентичностью с ней или ее комплемент.
3. Экспрессионная кассета, включающая полинуклеотид, содержащий открытую рамку считывания CLN1 человека.
4. Экспрессионная кассета по п.3, где полинуклеотид представляет полинуклеотид по пп.1 или 2.
5. Экспрессионная кассета по п.3 или 4, где полинуклеотид операбельно связан с промотором.
6. Экспрессионная кассета по п.5, где промотор представляет собой промотор бета-актина курицы.
7. Экспрессионная кассета по любому из пп.3-6, где полинуклеотид операбельно связан с энхансером.
8. Экспрессионная кассета по п.7, где энхансер является энхансером цитомегаловируса.
9. Экспрессионная кассета по любому из пп.3-8, где полинуклеотид операбельно связан с интроном.
10. Экспрессионная кассета по п.9, где интрон представляет гибридный/модифицированный интрон MVM.
11. Экспрессионная кассета по любому из пп.3-10, где полинуклеотид операбельно связан с сигналом полиаденилирования.
12. Экспрессионная кассета по п.11, где сигнал полиаденилирования является сигналом полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота.
13. Экспрессионная кассета по любому из пп.3-12, дополнительно содержащая, по меньшей мере, один инвертированный концевой повтор (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV).
14. Экспрессионная кассета по п.13, где экспрессионная кассета содержит два AAV ITR.
15. Экспрессионная кассета по п.14, где два AAV ITR имеют одинаковую нуклеотидную последовательность.
16. Экспрессионная кассета по п.14, где два AAV ITR имеют разные нуклеотидные последовательности.
17. Экспрессионная кассета по любому из пп.13-16, где AAV ITR представляют AAV2 ITR.
18. Экспрессионная кассета по любому из пп.3-17, где экспрессионная кассета представляет геном самокомплементарного AAV.
19. Экспрессионная кассета по любому из пп.3-18, где экспрессионная кассета содержит энхансер, промотор, интрон, открытую рамку считывания CLN1 человека и сайт полиаденилирования.
20. Экспрессионная кассета по п.19, где экспрессионная кассета содержит AAV ITR, энхансер, промотор, интрон, открытую рамку считывания CLN1 человека, сайт полиаденилирования и AAV ITR.
21. Экспрессионная кассета по любому из пп.3-18, где экспрессионная кассета содержит энхансер CMV, промотор бета-актина курицы, гибридный/модифицированный интрон MVM, открытую рамку считывания CLN1 человека и сайт полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота.
22. Экспрессионная кассета по п.21, где экспрессионная кассета содержит мутантный AAV ITR, энхансер CMV, промотор бета-актина курицы, гибридный/модифицированный интрон MVM, открытую рамку считывания CLN1 человека, сайт полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота и AAV ITR дикого типа.
23. Экспрессионная кассета по п.22, содержащая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:7 или последовательность, по меньшей мере, примерно на 90% идентичную ей.
24. Вектор, содержащий полинуклеотид по п.1 или 2 или экспрессионную кассету по любому из пп.3-16.
25. Вектор по п.24, где вектор представляет вирусный вектор.
26. Вектор по п.25, где вектор представляет AAV вектор.
27. Вектор по п.26, где вектор AAV представляет AAV9 вектор.
28. Вектор по п.27, где AAV вектор содержит белки капсида дикого типа.
29. Вектор по п.27, где AAV вектор содержит модифицированный капсидный белок с измененным тропизмом по сравнению с капсидным белком дикого типа.
30. Вектор по п.29, где модифицированный капсидный белок не нацелен на печень.
31. Трансформированная клетка, содержащая полинуклеотид по п.1 или 2, экспрессионную кассету по любому из пп.3-23 и/или вектор по любому из пп.24-30.
32. Трансформированная клетка по п.31, где полинуклеотид, экспрессионная кассета и/или вектор стабильно включаются в геном клетки.
33. Трансгенное животное, содержащее полинуклеотид по п.1 или 2, экспрессионную кассету по любому из пп.3-23, вектор по любому из пп.24-30 и/или трансформированную клетку по п.31 или 32.
34. Фармацевтическая композиция, содержащая полинуклеотид по п.1 или 2, экспрессионную кассету по любому из пп.3-23, вектор по любому из пп.24-30 и/или трансформированную клетку по п.31 или 32 в фармацевтически приемлемом носителе.
35. Способ экспрессии открытой рамки считывания CLN1 в клетке, включающий контактирование клетки с полинуклеотидом по п.1 или 2, экспрессионной кассетой по любому из пп.3-23 и/или вектором по любому из пп. 24-30, тем самым обеспечивая экспрессию открытой рамки считывания CLN1 в клетке.
36. Способ экспрессии открытой рамки считывания CLN1 у субъекта, включающий доставку субъекту полинуклеотида по п.1 или 2, экспрессионной кассеты по любому из пп.3-23, вектора по любому из пп.24-30 и/или трансформированной клетки по п.31 или 32, тем самым обеспечивая экспрессию открытой рамки считывания CLN1 у субъекта.
37. Способ лечения расстройства, связанного с аберрантной экспрессией гена CLN1 или аберрантной активностью продукта гена CLN1 у субъекта, нуждающегося в этом, включающий доставку субъекту терапевтически эффективного количества полинуклеотида по п.1 или 2, экспрессионной кассеты по любому из пп.3-23, вектора по любому из пп.24-30 и/или трансформированной клетки по п.31 или 32, тем самым обеспечивая лечение расстройства, связанного с аберрантной экспрессией гена CLN1 у субъекта.
38. Способ по п.37, где расстройство, связанное с экспрессией гена CLN1, представляет инфантильный, поздний инфантильный, ювенильный нейрональный цероидный липофусциноз или нейрональный цероидный липофусциноз с началом во взрослом возрасте.
39. Способ по любому из пп.36-38, где полинуклеотид, экспрессионную кассету, вектор и/или трансформированную клетку доставляют в нервную систему субъекта.
40. Способ по п.39, где полинуклеотид, экспрессионную кассету, вектор и/или трансформированную клетку доставляют интратекальной, интрацеребральной, внутрижелудочковой, интраназальной, внутриушной, интраокулярной или периокулярной доставкой или любой их комбинацией.
41. Способ по любому из пп.36-38, где полинуклеотид, экспрессионную кассету, вектор и/или трансформированную клетку доставляют внутривенно.
