Трансгенные животные, отличные от человека, продуцирующие модифицированные антитела, содержащие только тяжелые цепи - RU2019108240A
Код документа: RU2019108240A
Формула
1. Локус рекомбинантного иммуноглобулина (Ig), содержащего только тяжелую цепь, содержащий один или несколько V генных сегментов человека, один или несколько D генных сегментов человека и один или несколько J генных сегментов человека, которые при рекомбинации друг с другом в геноме животного, отличного от человека, и после созревания аффинности кодируют вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую определяющие комплементарность области (CDR) и каркасные области (FR), при этом по меньшей мере один из указанных J-сегментов человека содержит кодон, кодирующий другой аминокислотный остаток в первой позиции четвертой каркасной области (FR4), который способен нарушить целостность экспонированного на поверхности гидрофобного пятна, содержащего нативный аминокислотный остаток или связанного с нативным аминокислотным остатком в этой позиции.
2. Локус рекомбинантного Ig, содержащего только тяжелую цепь, по п. 1, дополнительно содержащий генный сегмент константной (С) области, кодирующий константную эффекторную область иммуноглобулина, лишенную функциональности СН1.
3. Локус рекомбинантного Ig, содержащего только тяжелую цепь, по п. 1 или 2, содержащий от двух до 40 D генных сегментов и от двух до 20 J генных сегментов.
4. Локус рекомбинантного Ig, содержащего только тяжелую цепь, по п. 3, отличающийся тем, что более чем один из указанных J-сегментов человека содержат кодон, кодирующий другой аминокислотный остаток в первой позиции четвертой каркасной области (FR4), который способен нарушать целостность экспонированного на поверхности гидрофобного пятна, содержащего нативный аминокислотный остаток или связанного с нативным аминокислотным остатком в этой позиции.
5. Локус рекомбинантного Ig, содержащего только тяжелую цепь, по п. 4, отличающийся тем, что все указанные J-сегменты человека содержат кодон, кодирующий другой аминокислотный остаток в первой позиции четвертой каркасной области (FR4), который способен нарушать целостность экспонированного на поверхности гидрофобного пятна, содержащего нативный аминокислотный остаток или связанного с нативным аминокислотным остатком в этой позиции.
6. Локус рекомбинантного Ig, содержащего только тяжелую цепь, по п. 5, отличающийся тем, что в кодируемой области VH указанный нативный аминокислотный остаток в первой позиции FR4 замещен полярным аминокислотным остатком.
7. Локус рекомбинантного Ig, содержащего только тяжелую цепь, по п. 5, отличающийся тем, что в кодируемой области VH нативный аминокислотный остаток в первом положении FR4 замещен положительно заряженным аминокислотным остатком.
8. Локус рекомбинантного Ig, содержащего только тяжелую цепь, по п. 7, отличающийся тем, что в кодируемой области VH положительно заряженный аминокислотный остаток выбран из группы, состоящей из лизина (K), аргинина (R) и гистидина (H).
9. Локус рекомбинантного Ig, содержащего только тяжелую цепь, по п. 8, отличающийся тем, что в кодируемой области VH положительно заряженный аминокислотный остаток представляет собой аргинин (R).
10. Локус рекомбинантного Ig, содержащего только тяжелую цепь, по п. 9, отличающийся тем, что кодируемая VH область содержит замену триптофана (W) на аргинин (R) в первом аминокислотном остатке в четвертой каркасной области (FR4).
11. Локус рекомбинантного Ig, содержащего только тяжелую цепь, по п. 10, содержащий J4 генный сегмент, в котором кодон для W заменен кодоном для R.
12. Локус рекомбинантного Ig, содержащего только тяжелую цепь, по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что кодируемая область VH содержит одну или несколько дополнительных мутаций в одной или нескольких каркасных областях.
13. Локус рекомбинантного Ig, содержащего только тяжелую цепь, по любому из пп. 1-12, кодирующий человеческое или гуманизированное антитело, содержащее только тяжелую цепь, содержащее указанную область VH.
14. Трансгенное животное, отличное от человека, содержащее локус рекомбинантного Ig, содержащего только тяжелую цепь, по любому из пп. 1-13.
15. Трансгенное животное, отличное от человека, по п. 14, отличающееся тем, что является млекопитающим, отличным от человека.
16. Трансгенное животное, отличное от человека, по п. 15, отличающееся тем, что представляет собой грызуна.
17. Трансгенное животное, отличное от человека, по п. 16, отличающееся тем, что представляет собой крысу или мышь.
18. Трансгенное животное, отличное от человека, по п. 17, отличающееся тем, что представляет собой крысу.
19. Трансгенное животное, отличное от человека, по п. 18, отличающееся тем, что представляет собой UniRat™.
20. Трансгенное животное, отличное от человека, которое не экспрессирует никаких функциональных генов легкой цепи иммуноглобулина и содержит гетерологичный локус Ig, содержащего только тяжелую цепь, содержащий один или несколько V генных сегментов, один или несколько D генных сегментов и один или несколько J генных сегментов, которые при рекомбинации друг с другом и после созревания аффинности кодируют область VH, содержащую определяющие комплементарность области (CDR) и каркасные области (FR), в которой указанный нативный аминокислотный остаток в первой позиции четвертой каркасной области (FR4) указанной области VH замещен другим аминокислотным остатком, который способен нарушать целостность экспонированного на поверхности гидрофобного пятна, содержащего нативный аминокислотный остаток или связанного с нативным аминокислотным остатком в этой позиции, и один или несколько генных сегментов константной эффекторной области, каждый из которых кодирует константную эффекторную область антитела, содержащую функциональность CH1, при этом генные сегменты расположены так, что V, D и J генные сегменты и генные сегменты константной области рекомбинируют с образованием перестроенного аффинно-зрелого локуса гена только тяжелой цепи, кодирующего антитело, содержащее только тяжелую цепь (HCAb).
21. Трансгенное животное, отличное от человека, по п. 20, отличающееся тем, что в указанной области VH нативный аминокислотный остаток в первой позиции FR4 замещен полярным аминокислотным остатком.
22. Трансгенное животное, отличное от человека, по п. 20, отличающееся тем, что в указанной области VH нативный аминокислотный остаток в первой позиции FR4 замещен положительно заряженным аминокислотным остатком.
23. Трансгенное животное, отличное от человека, по п. 22, отличающееся тем, что в указанной области VH положительно заряженный аминокислотный остаток выбран из группы, состоящей из лизина (K), аргинина (R) и гистидина (H).
24. Трансгенное животное, отличное от человека, по п. 23, отличающееся тем, что в указанной области VH положительно заряженный аминокислотный остаток представляет собой аргинин (R).
25. Трансгенное животное, отличное от человека, по п. 24, отличающееся тем, что указанная область VH содержит замену триптофана (W) на аргинин (R) в первом аминокислотном остатке в четвертой каркасной области (FR4).
26. Трансгенное животное, отличное от человека, по п. 25, отличающееся тем, что указанный гетерологичный локус, содержащий только тяжелую цепь, содержит J4 сегмент, в котором кодон для W заменен кодоном для R.
27. Трансгенное животное, отличное от человека, по любому из пп. 20-26, отличающееся тем, что кодируемое антитело, содержащее только тяжелую цепь, содержит одну или несколько дополнительных мутаций в одной или нескольких каркасных областях.
28. Трансгенное животное, отличное от человека, по любому из пп. 20-27, отличающееся тем, что является млекопитающим.
29. Трансгенное животное, отличное от человека по п. 28, отличающееся тем, что является грызуном.
30. Трансгенное животное, отличное от человека, по п. 29, отличающееся тем, что является крысой или мышью.
31. Трансгенное животное, отличное от человека, по п. 30, отличающееся тем, что является крысой.
32. Трансгенное животное, отличное от человека, по п. 31, отличающееся тем, что является UniRat™.
33. Антитело, содержащее только тяжелую цепь, (HCAb) содержащее локус рекомбинантного Ig, содержащего только тяжелую цепь, по любому из пп. 1-13, причем HCAb продуцируется трансгенным животным по любому одному из пп. 14-32.
34. Антитело, содержащее только тяжелую цепь, (HCAb) содержащее вариабельную область (VH) тяжелой цепи, содержащую определяющие комплементарность области (CDR) и каркасные области (FR), причем HCAb получают способом, включающим:
i) иммунизацию трансгенного животного, не являющегося человеком, иммуногеном, где трансгенное животное, отличное от человека:
а) не экспрессирует никаких функциональных генов легкой цепи иммуноглобулина; и
b) содержит гетерологичный локус Ig, содержащего только тяжелую цепь, содержащий один или несколько V генных сегментов, один или несколько D генных сегментов и один или несколько J генных сегментов, которые при рекомбинации друг с другом и после созревания аффинности кодируют область VH, содержащую определяющие комплементарность области (CDR) и каркасные области (FR), в которой нативный аминокислотный остаток в первой позиции четвертой каркасной области (FR4) указанной области VH заменен другим аминокислотным остатком, который способен нарушать целостность экспонированного на поверхности гидрофобного пятна, содержащего нативный аминокислотный остаток или связанного с нативным аминокислотным остатком в этой позиции, и один или несколько сегментов гена константной эффекторной области, каждый из которых кодирует константную эффекторную область антитела, включающую функциональность CH1, где сегменты гена расположены таким образом, что V, D и J генные сегменты и сегмент гена константной области рекомбинируют, чтобы получить перестроенный аффинно-зрелый локус гена только тяжелой цепи, кодирующий антитело, содержащее только тяжелую цепь, (HCAb);
ii) выделение последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей HCAb, из B-клеток иммунизированного трансгенного животного, не являющегося человеком; и
iii) получение HCAb из последовательности нуклеиновой кислоты, выделенной на стадии ii).
35. HCAb по п. 34, отличающееся тем, что в указанной области VH указанный нативный аминокислотный остаток в первой позиции FR4 замещен полярным аминокислотным остатком.
36. HCAb по п. 34, отличающееся тем, что в указанной области VH указанный нативный аминокислотный остаток в первой позиции FR4 замещен положительно заряженным аминокислотным остатком.
37. HCAb по п. 36, отличающееся тем, что в указанной области VH положительно заряженный аминокислотный остаток выбран из группы, состоящей из лизина (K), аргинина (R) и гистидина (H).
38. HCAb по п. 37, отличающееся тем, что в указанной области VH положительно заряженный аминокислотный остаток представляет собой аргинин (R).
39. HCAb по п. 38, в котором указанная область VH содержит замену триптофана (W) на аргинин (R) в первом аминокислотном остатке в четвертой каркасной области (FR4).
40. HCAb по п. 39, где указанный гетерологичный локус только тяжелой цепи, содержит сегмент J4, в котором кодон для W заменен кодоном для R.
41. HCAb по любому из пп. 34-40, где кодируемое антитело, содержащее только тяжелую цепь, содержит одну или несколько дополнительных мутаций в одной или большем количестве каркасных областей.
42. HCAb по любому из пп. 34-41, отличающееся тем, что трансгенное животное, отличное от человека, является млекопитающим.
43. HCAb по п. 42, отличающееся тем, что трансгенное животное, отличное от человека, является грызуном.
44. HCAb по п. 43, отличающееся тем, что трансгенное животное, отличное от человека, является крысой или мышью.
45. HCAb по п. 44, отличающееся тем, что трансгенное животное, отличное от человека, является крысой.
46. HCAb по п. 45, отличающееся тем, что трансгенное животное, отличное от человека, является UniRat™.
47. HCAb по любому из пп. 33-46, где HCAb представляет собой человеческое HCAb.
48. Способ лечения расстройства, включающий введение субъекту с указанным расстройством HCAb по любому из пп. 33-46.
49. Применение HCAb по любому из пп. 33-46, для приготовления лекарственного средства для лечения расстройства.
50. HCAb по любому из пп. 33-46, для применения при лечении расстройства.
