Доставка и применение систем crispr-cas, векторов и композиций для целенаправленного воздействия и терапии в печени - RU2016101200A
Код документа: RU2016101200A
Формула
1. Способ модификации организма или отличного от человеческого организма путем манипуляции с целевой последовательностью печени в представляющем интерес локусе генома, включающий:
доставку не встречающейся в природе или сконструированной композиции, содержащей:
A) I. полинуклеотидную последовательность РНК системы CRISPR-Cas, где полинуклеотидная последовательность содержит:
(a) направляющую последовательность, способную гибридизироваться с целевой последовательностью печени в эукариотической клетке,
(b) парную tracr-последовательность, и
(c) tracr-последовательность, и
II. полинуклеотидную последовательность, кодирующую фермент CRISPR, необязательно содержащий по меньшей мере одну или несколько последовательностей ядерной локализации,
где (а), (b) и (с) расположены в 5'-3' ориентации,
где при транскрипции парная tracr-последовательность гибридизируется с tracr-последовательностью, а направляющая последовательность управляет специфичным к последовательности связыванием комплекса CRISPR с целевой последовательностью печени, и
где комплекс CRISPR содержит фермент CRISPR, образующий комплекс с (1) направляющей последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с целевой последовательностью печени, и (2) парной tracr-последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с tracr-последовательностью, и полинуклеотидная последовательность, кодирующая фермент CRISPR, представляет собой ДНК или РНК,
или
B) I. полинуклеотиды, содержащие:
(a) направляющую последовательность, способную гибридизироваться с целевой последовательностью печени в эукариотической клетке, и
(b) по меньшей мере одну или несколько парных tracr-последовательностей,
II. полинуклеотидную последовательность, кодирующую фермент CRISPR, и
III. полинуклеотидную последовательность, содержащую tracr-последовательность,
где при транскрипции парная tracr-последовательность гибридизируется с tracr-последовательностью, а направляющая последовательность управляет специфичным к последовательности связыванием комплекса CRISPR с целевой последовательностью печени, и
где комплекс CRISPR содержит фермент CRISPR, образующий комплекс с (1) направляющей последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с целевой последовательностью печени, и (2) парной tracr-последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с tracr-последовательностью, и полинуклеотидная последовательность, кодирующая фермент CRISPR, представляет собой ДНК или РНК.
2. Способ по п. 1, где любая или все из полинуклеотидной последовательности, кодирующей фермент CRISPR, направляющей последовательности, парной tracr-последовательности или tracr-последовательности представляют собой РНК.
3. Способ по п. 1, где полинуклеотиды, содержащие последовательность, кодирующую фермент CRISPR, направляющую последовательность, парную tracr-последовательность, или tracr-последовательность, представляют собой РНК, и их доставляют посредством липосом, наночастиц, экзосом, микропузырьков или генной пушки.
4. Способ по п. 1, где полинуклеотиды содержатся в векторной системе, содержащей один или несколько векторов.
5. Способ модификации организма или отличного от человеческого организма путем манипуляции с целевой последовательностью печени в представляющем интерес локусе генома, включающий:
доставку не встречающейся в природе или сконструированной композиции, содержащей вирусную векторную систему, содержащую один или несколько вирусных векторов, функционально кодирующих композицию для ее экспрессии, где композиция содержит:
(А) не встречающуюся в природе или сконструированную композицию, содержащую векторную систему, содержащую один или несколько векторов, содержащих:
I. первый регуляторный элемент, функционально связанный с полинуклеотидной последовательностью РНК системы CRISPR-Cas, где полинуклеотидная последовательность содержит:
(a) направляющую последовательность, способную гибридизироваться с целевой последовательностью печени в эукариотической клетке,
(b) парную tracr-последовательность, и
(c) tracr-последовательность, и
II. второй регуляторный элемент, функционально связанный с кодирующей фермент последовательностью, кодирующей фермент CRISPR, необязательно содержащий по меньшей мере одну или несколько последовательностей ядерной локализации,
где (а), (b) и (с) расположены в 5'-3' ориентации,
где компоненты I и II находятся в одном и том же или в различных векторах системы,
где при транскрипции парная tracr-последовательность гибридизируется с tracr-последовательностью, а направляющая последовательность управляет специфичным к последовательности связыванием комплекса CRISPR с целевой последовательностью печени, и
где комплекс CRISPR содержит фермент CRISPR, образующий комплекс с (1) направляющей последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с целевой последовательностью печени, и (2) парной tracr-последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с tracr-последовательностью,
или
(В) не встречающуюся в природе или сконструированную композицию, содержащую векторную систему, содержащую один или несколько векторов, содержащих:
I. первый регуляторный элемент, функционально связанный с:
(a) направляющей последовательностью, способной гибридизироваться с целевой последовательностью печени в эукариотической клетке, и
(b) по меньшей мере одной или несколькими парными tracr-последовательностями,
II. второй регуляторный элемент, функционально связанный с кодирующей фермент последовательностью, кодирующей фермент CRISPR, и
III. третий регуляторный элемент, функционально связанный с tracr-последовательностью,
где компоненты I, II и III находятся в одном и том же или в разных векторах системы,
где при транскрипции парная tracr-последовательность гибридизируется с tracr-последовательностью, а направляющая последовательность управляет специфичным к последовательности связыванием комплекса CRISPR с целевой последовательностью печени, и
где комплекс CRISPR содержит фермент CRISPR, образующий комплекс с (1) направляющей последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с целевой последовательностью печени, и (2) парной tracr-последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с tracr-последовательностью.
6. Способ по п. 5, где один или несколько вирусных векторов доставляют посредством липосом, наночастиц, экзосом, микропузырьков или генной пушки.
7. Способ лечения или подавления состояния, вызванного дефектом в целевой последовательности печени в представляющем интерес локусе генома у субъекта или отличного от человека субъекта, нуждающегося в этом, включающий модификацию субъекта или отличного от человека субъекта путем манипуляции с целевой последовательностью печени, и где состояние является чувствительным к лечению или подавлению путем манипуляции с целевой последовательностью печени, включающий обеспечение лечения, включающего:
доставку не встречающейся в природе или сконструированной композиции, содержащей векторную систему на основе AAV или лентивируса, содержащую один или несколько векторов на основе AAV или лентивируса, функционально кодирующих композицию для ее экспрессии, где манипуляцию с целевой последовательностью печени осуществляют с помощью композиции при ее экспрессии, где композиция содержит:
(А) не встречающуюся в природе или сконструированную композицию, содержащую векторную систему, содержащую один или несколько векторов, содержащих
I. первый регуляторный элемент, функционально связанный с полинуклеотидной последовательностью РНК системы CRISPR-Cas, где полинуклеотидная последовательность содержит:
(a) направляющую последовательность, способную гибридизироваться с целевой последовательностью печени в эукариотической клетке,
(b) парную tracr-последовательность, и
(c) tracr-последовательность, и
II. второй регуляторный элемент, функционально связанный с кодирующей фермент последовательностью, кодирующей фермент CRISPR, содержащий по меньшей мере одну или несколько последовательностей ядерной локализации, где (а), (b) и (с) расположены в 5'-3' ориентации,
где компоненты I и II находятся в одном и том же или в различных векторах системы,
где при транскрипции парная tracr-последовательность гибридизируется с tracr-последовательностью, а направляющая последовательность управляет специфичным к последовательности связыванием комплекса CRISPR с целевой последовательностью печени, и
где комплекс CRISPR содержит фермент CRISPR, образующий комплекс с (1) направляющей последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с целевой последовательностью печени, и (2) парной tracr-последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с tracr-последовательностью,
или
(В) не встречающуюся в природе или сконструированную композицию, содержащую векторную систему, содержащую один или несколько векторов, содержащих:
I. первый регуляторный элемент, функционально связанный с:
(a) направляющей последовательностью, способной гибридизироваться с целевой последовательностью печени в эукариотической клетке, и
(b) по меньшей мере одной или несколькими парными tracr-последовательностями,
II. второй регуляторный элемент, функционально связанный с кодирующей фермент последовательностью, кодирующей фермент CRISPR, и
III. третий регуляторный элемент, функционально связанный с tracr-последовательностью,
где компоненты I, II и III находятся в одном и том же или в разных векторах системы,
где при транскрипции парная tracr-последовательность гибридизируется с tracr-последовательностью, а направляющая последовательность управляет специфичным к последовательности связыванием комплекса CRISPR с целевой последовательностью печени, и
где комплекс CRISPR содержит фермент CRISPR, образующий комплекс с (1) направляющей последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с целевой последовательностью печени, и (2) парной tracr-последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с tracr-последовательностью.
8. Способ по любому из пп. 1, 5 или 7, где способ выполняют in vitro и/или ex vivo.
9. Способ по любому из пп. 1, 5 или 7, включающий индуцирование экспрессии.
10. Способ по любому из пп. 1, 5 или 7, где организм или субъект является эукариотом.
11. Способ по п. 10, где организм или субъект является отличным от человека эукариотом.
12. Способ по любому из пп. 1, 5 или 7, где организм или субъект является млекопитающим или отличным от человека млекопитающим.
13. Способ по любому из пп. 5 или 7, где вирусный вектор представляет собой вектор на основе AAV или лентивирусный вектор.
14. Способ по любому из пп. 1, 5 или 7, где ферментом CRISPR является Cas9.
15. Способ по любому из пп. 1, 5 или 7, где экспрессия направляющей последовательности находится под контролем промотора Т7 и управляется экспрессией полимеразы Т7.
16. Способ доставки фермента CRISPR по любому из предыдущих пунктов, включающий доставку в клетку мРНК, кодирующей фермент CRISPR.
17. Способ по любому из пп. 1, 5, 7 или 16, где полинуклеотид или кодирующую фермент последовательность, кодирующие фермент CRISPR, доставляют в клетку путем доставки мРНК, кодирующей фермент CRISPR, в клетку.
18. Способ получения вектора на основе AAV или лентивируса по п. 7, включающий трансфекцию плазмиды(плазмид), содержащей молекулу(молекулы) нуклеиновой кислоты, кодирующую AAV или лентивирус, или состоящей, по сути, из нее, в клетки, инфицированные AAV или инфицированные лентивирусом, и обеспечение rep и/или cap AAV AAV или лентивируса и/или вспомогательных молекул нуклеиновой кислоты, обязательных для репликации и упаковки AAV или лентивируса.
19. Способ получения вектора на основе AAV или лентивируса для применения в способе по п. 7, включающий трансфекцию плазмиды(плазмид), содержащей молекулу(молекулы) нуклеиновой кислоты, кодирующую AAV или лентивирус, или состоящей, по сути, из нее, в клетки, инфицированные AAV или инфицированные лентивирусом, и обеспечение rep и/или cap AAV AAV или лентивируса и/или вспомогательных молекул нуклеиновой кислоты, обязательных для репликации и упаковки AAV или лентивируса.
20. Способ по п. 18 или 19, где rep и/или cap AAV или лентивируса, обязательные для репликации и упаковки AAV или лентивируса, обеспечивают путем трансфекции клеток плазмидой-помощником(плазмидами-помощниками) или вирусом-помощником(вирусами-помощниками).
21. Способ по п. 20, где вирусом-помощником является поксвирус, аденовирус, лентивирус, герпесвирус или бакуловирус.
22. Способ по п. 21, где поксвирусом является вирус осповакцины.
23. Способ по п. 18 или 19, где клетки представляют собой клетки млекопитающего.
24. Способ по п. 18 или 19, где клетки представляют собой клетки насекомого, а вирус-помощник (если присутствует) представляет собой бакуловирус.
25. Способ по любому из пп. 1, 5, 7, 16, 18 или 19, где целевая последовательность в печени фланкирована на своем 3'-конце 5'-NRG (где N представляет собой любой нуклеотид) или расположена перед ним, и где фермент CRISPR представляет собой Cas9 S. pyogenes или S. aureus (или происходит из него).
26. Композиция по любому из пп. 1-25 для применения в медицине или в терапии.
27. Композиция по любому из пп. 1-25 для применения в способе модификации организма или отличного от человеческого организма путем манипуляции с целевой последовательностью печени в представляющем интерес локусе генома или в способе лечения или подавления состояния, вызванного дефектом в целевой последовательности печени в представляющем интерес локусе генома.
28. Применение композиции по любому из пп. 1-25 в редактировании гена или генома ex vivo.
29. Применение композиции по любому из пп. 1-25 в производстве лекарственного препарата для редактирования гена или генома ex vivo или для применения в способе модификации организма или отличного от человеческого организма путем манипуляции с целевой последовательностью печени в представляющем интерес локусе генома или в способе лечения или подавления состояния, вызванного дефектом в целевой последовательности печени в представляющем интерес локусе генома.
30. Композиция, содержащая:
A) - I. полинуклеотидную последовательность РНК системы CPISPR-Cas, где полинуклеотидная последовательность содержит:
(a) направляющую последовательность, способную гибридизироваться с целевой последовательностью печени в эукариотической клетке,
(b) парную tracr-последовательность, и
(c) tracr-последовательность, и
II. полинуклеотидную последовательность, кодирующую фермент CRISPR, необязательно содержащий по меньшей мере одну или несколько последовательностей ядерной локализации,
где (а), (b) и (с) расположены в 5'-3' ориентации,
где при транскрипции парная tracr-последовательность гибридизируется с tracr-последовательностью, а направляющая последовательность управляет специфичным к последовательности связыванием комплекса CRISPR с целевой последовательностью печени, и
где комплекс CRISPR содержит фермент CRISPR, образующий комплекс с (1) направляющей последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с целевой последовательностью печени, и (2) парной tracr-последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с tracr-последовательностью, и полинуклеотидная последовательность, кодирующая фермент CRISPR, представляет собой ДНК или РНК,
или
B) I. полинуклеотиды, содержащие:
(a) направляющую последовательность, способную гибридизироваться с целевой последовательностью печени в эукариотической клетке, и
(b) по меньшей мере одну или несколько парных tracr-последовательностей,
II. полинуклеотидную последовательность, кодирующую фермент CRISPR, и
III. полинуклеотидную последовательность, содержащую tracr-последовательность,
где при транскрипции парная tracr-последовательность гибридизируется с tracr-последовательностью, а направляющая последовательность управляет специфичным к последовательности связыванием комплекса CRISPR с целевой последовательностью печени, и
где комплекс CRISPR содержит фермент CRISPR, образующий комплекс с (1) направляющей последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с целевой последовательностью печени, и (2) парной tracr-последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с tracr-последовательностью, и полинуклеотидная последовательность, кодирующая фермент CRISPR, представляет собой ДНК или РНК;
для применения в медицине или терапии; или для применения в способе модификации организма или отличного от человеческого организма путем манипуляции с целевой последовательностью печени в представляющем интерес локусе генома; или для применения в способе лечения или подавления состояния, вызванного дефектом в целевой последовательности печени в представляющем интерес локусе генома; или для применения в редактировании гена или генома ex vivo.
31. Композиция по п. 30, где полинуклеотиды содержатся в векторной системе, содержащей один или несколько векторов.
32. Способ по любому из пп. 1, 5, 7, 16, 18 или 19, где РНК системы CRISPR-Cas является химерной РНК (chiRNA).
33. Применение по любому из пп. 28-29, где РНК системы CRISPR-Cas является химерной РНК (chiRNA).
34. Композиция по любому из пп. 26, 27 или 30, где РНК системы CRISPR-Cas является химерной РНК (chiRNA).
35. Способ любому из пп. 1, 5, 7, 16, 18 или 19, где система CRISPR-Cas представляет собой мультиплексную ферментную систему CRISPR, дополнительно содержащую несколько химерных и/или несколько направляющих последовательностей для нескольких мишеней и одну tracr-последовательность.
36. Применение по любому из пп. 28-29, где система CRISPR-Cas представляет собой мультиплексную ферментную систему CRISPR, дополнительно содержащую несколько химерных и/или несколько направляющих последовательностей для нескольких мишеней и одну tracr-последовательность.
37. Композиция по любому из пп. 26, 27 или 30, где система CRISPR-Cas представляет собой мультиплексную ферментную систему CRISPR, дополнительно содержащую несколько химерных и/или несколько направляющих последовательностей для нескольких мишеней и одну tracr-последовательность.
38. Способ по любому из пп. 1, 5, 7, 16, 18 или 19, где фермент CRISPR является нуклеазой, управляющей расщеплением одной или обеих нитей в определенной точке целевой последовательности.
39. Применение по любому из пп. 28-29, где фермент CRISPR является нуклеазой, управляющей расщеплением одной или обеих нитей в определенной точке целевой последовательности.
40. Композиция по любому из пп. 26, 27 или 30, где фермент CRISPR является нуклеазой, управляющей расщеплением одной или обеих нитей в определенной точке целевой последовательности.
41. Способ по любому из пп. 1, 5, 7, 16, 18 или 19, где фермент CRISPR содержит одну или несколько мутаций.
42. Применение по любому из пп. 28-29, где фермент CRISPR содержит одну или несколько мутаций.
43. Композиция по любому из пп. 26, 27 или 30, где фермент CRISPR содержит одну или несколько мутаций.
44. Способ по п. 41, где фермент CRISPR содержит одну или несколько из мутаций D10A, Е762А, Н840А, N854A, N863A или D986A.
45. Применение по п. 42, где фермент CRISPR содержит одну или несколько из мутаций D10A, Е762А, Н840А, N854A, N863A или D986A.
46. Композиция по п. 43, где фермент CRISPR содержит одну или несколько из мутаций D10A, Е762А, Н840А, N854A, N863A или D986A.
47. Способ по п. 41, где одна или несколько мутаций находятся в домене RuvC1 фермента CRISPR.
48. Применение по п. 42, где одна или несколько мутаций находятся в домене RuvC1 фермента CRISPR.
49. Композиция по п. 43, где одна или несколько мутаций находятся в домене RuvC1 фермента CRISPR.
50. Способ по п. 38, где фермент CRISPR является никазой, управляющей расщеплением в определенной точке целевой последовательности.
51. Применение по п. 39, где фермент CRISPR является никазой, управляющей расщеплением в определенной точке целевой последовательности.
52. Композиция по п. 40, где фермент CRISPR является никазой, управляющей расщеплением в определенной точке целевой последовательности.
53. Способ по п. 50, где никаза является двойной никазой.
54. Применение по п. 51, где никаза является двойной никазой.
55. Композиция по п. 52, где никаза является двойной никазой.
56. Способ по любому из пп. 1, 5, 7, 16, 18 или 19, дополнительно включающие по меньшей мере две или более NLS.
57. Применение по любому из пп. 28-29, дополнительно включающие по меньшей мере две или более NLS.
58. Композиция по любому из пп. 26, 27 или 30, дополнительно включающие по меньшей мере две или более NLS.
59. Способ по любому из пп. 1, 5, 7, 16, 18 или 19, где фермент CRISPR имеет одну или несколько мутаций в каталитическом домене, где при транскрипции парная tracr-последовательность гибридизируется с tracr-последовательностью, а направляющая последовательность управляет специфичным к последовательности связыванием комплекса CRISPR с целевой последовательностью, и где фермент дополнительно содержит функциональный домен.
60. Применение по любому из пп. 28-29, где фермент CRISPR имеет одну или несколько мутаций в каталитическом домене, где при транскрипции парная tracr-последовательность гибридизируется с tracr-последовательностью, а направляющая последовательность управляет специфичным к последовательности связыванием комплекса CRISPR с целевой последовательностью, и где фермент дополнительно содержит функциональный домен.
61. Композиция по любому из пп. 26, 27 или 30, где фермент CRISPR имеет одну или несколько мутаций в каталитическом домене, где при транскрипции парная tracr-последовательность гибридизируется с tracr-последовательностью, а направляющая последовательность управляет специфичным к последовательности связыванием комплекса CRISPR с целевой последовательностью, и где фермент дополнительно содержит функциональный домен.
62. Способ по п. 59, где функциональный домен является доменом активации транскрипции.
63. Применение по п. 60, где функциональный домен является доменом активации транскрипции.
64. Композиция по п. 61, где функциональный домен является доменом активации транскрипции.
65. Способ по п. 62, где доменом активации транскрипции является VP64.
66. Применение по п. 63, где доменом активации транскрипции является VP64.
67. Композиция по п. 64, где доменом активации транскрипции является VP64.
68. Способ по любому из пп. 1, 5, 7, 16, 18 или 19, дополнительно включающий сведение к минимуму нецелевых модификаций посредством манипуляции с первой и второй целевой последовательностью на противоположных нитях ДНК-дуплекса в представляющем интерес локусе генома в клетке, включающий:
доставку не встречающейся в природе или сконструированной композиции, содержащей:
I. полинуклеотидную последовательность химерной РНК (chiRNA) системы CRISPR-Cas, где полинуклеотидная последовательность содержит:
(a) первую направляющую последовательность, способную гибридизироваться с первой целевой последовательностью,
(b) первую парную tracr-последовательность,
(c) первую tracr-последовательность,
(d) вторую направляющую последовательность, способную гибридизироваться со второй целевой последовательностью,
(e) вторую парную tracr-последовательность, и
(f) вторую tracr-последовательность, и
где необязательно между первой tracr-последовательностью и второй направляющей последовательностью находится линкерная последовательность, в результате чего первая направляющая последовательность и вторая направляющая последовательность расположены последовательно; и
II. полинуклеотидную последовательность, кодирующую фермент CRISPR, содержащий по меньшей мере одну или несколько последовательностей ядерной локализации, где (а), (b), (с), (d), (е) и (f) расположены в 5'-3' ориентации, где полинуклеотидная последовательность содержит линкерную последовательность между первой tracr-последовательностью и второй направляющей последовательностью, в результате чего первая направляющая последовательность и вторая направляющая последовательность расположены последовательно, и где при транскрипции первая и вторая парные tracr-последовательности гибридизируются с первой и второй tracr-последовательностями, соответственно, а первая и вторая направляющие последовательности управляют специфичным к последовательности связыванием первого и второго комплексов CRISPR с первой и второй целевыми последовательностями, соответственно,
или
II. второй регуляторный элемент, функционально связанный с кодирующей фермент последовательностью, кодирующей фермент CRISPR, и где компоненты I и II находятся в одном и том же или в разных векторах системы, и при транскрипции первая парная tracr-последовательность гибридизируется с первой tracr-последовательностью, а первая и вторая направляющие последовательности управляют специфичным к последовательности связыванием первого и второго комплексов CRISPR с первой и второй целевыми последовательностями, соответственно;
где первый комплекс CRISPR содержит фермент CRISPR, образующий комплекс с (1) первой направляющей последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с первой целевой последовательностью, и (2) первой парной tracr-последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации с первой tracr-последовательностью,
где второй комплекс CRISPR содержит фермент CRISPR, образующий комплекс со (1) второй направляющей последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации со второй целевой последовательностью, и (2) второй парной tracr-последовательностью, которая гибридизируется или способна к гибридизации со второй tracr-последовательностью,
где полинуклеотидная последовательность, кодирующая фермент CRISPR, представляет собой ДНК или РНК, и
где первая направляющая последовательность управляет расщеплением одной нити ДНК-дуплекса возле первой целевой последовательности, а вторая направляющая последовательность управляет расщеплением другой нити возле второй целевой последовательности, индуцируя двухнитевой разрыв, с модификацией, таким образом, организма или отличного от человеческого организма путем сведения к минимуму нецелевых модификаций.
69. Способ по любому из пп. 1, 5, 7, 16, 18 или 19, где целевая последовательность в печени представляет собой пропротеинконвертазу субтилизин/кексин типа 9 (PCSK9).
70. Применение по любому из пп. 28-29, где целевая последовательность в печени представляет собой пропротеинконвертазу субтилизин/кексин типа 9 (PCSK9).
71. Композиция по любому из пп. 26, 27 или 30, где целевая последовательность в печени представляет собой пропротеинконвертазу субтилизин/кексин типа 9 (PCSK9).
72. Способ по любому из пп. 1, 5, 7, 16, 18 или 19, где целевая последовательность в печени представляет собой SERPINA1.
73. Применение по любому из пп. 28-29, где целевая последовательность в печени представляет собой SERPINA1.
74. Композиция по любому из пп. 26, 27 или 30, где целевая последовательность в печени представляет собой SERPINA1.
75. Способ по любому из пп. 1, 5, 7, 16, 18 или 19, где целевая последовательность в печени представляет собой Hmgcr.
76. Применение по любому из пп. 28-29, где целевая последовательность в печени представляет собой Hmgcr.
77. Композиция по любому из пп. 26, 27 или 30, где целевая последовательность в печени представляет собой Hmgcr.
78. Способ по любому из пп. 1, 5, 7, 16, 18 или 19, где целевая последовательность в печени представляет собой аполипопротеин В (АроВ).
79. Применение по любому из пп. 28-29, где целевая последовательность в печени представляет собой аполипопротеин В (АроВ).
80. Композиция по любому из пп. 26, 27 или 30, где целевая последовательность в печени представляет собой аполипопротеин В (АроВ).
81. Способ по любому из пп. 1, 5, 7, 16, 18 или 19, где целевая последовательность в печени представляет собой рецептор липопротеинов низкой плотности (LDL-R).
82. Применение по любому из пп. 28-29, где целевая последовательность в печени представляет собой рецептор липопротеинов низкой плотности (LDL-R).
83. Композиция по любому из пп. 26, 27 или 30, где целевая последовательность в печени представляет собой рецептор липопротеинов низкой плотности (LDL-R).
