Грызуны, имеющие сконструированный участок разнообразия тяжелой цепи - RU2018129169A

Код документа: RU2018129169A

Формула

1. Грызун, геном которого содержит вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина, который включает сконструированный участок D_H, где сконструированный участок D_H включает одну или более нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует представляющий интерес полипептид, не являющийся иммуноглобулином, или его часть.

2. Грызун по п. 1, где вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина представляет собой вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина человека.

3. Грызун по п. 1 или 2, где вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина функционально связан с константным участком тяжелой цепи иммуноглобулина.

4. Грызун по п. 3, где константный участок тяжелой цепи иммуноглобулина представляет собой эндогенный константный участок тяжелой цепи иммуноглобулина.

5. Грызун по любому из предыдущих пунктов, где представляющий интерес полипептид, не являющийся иммуноглобулином, представляет собой хемокиновый рецептор.

6. Грызун по п. 5, где хемокиновый рецептор представляет собой атипичный хемокиновый рецептор (ACKR).

7. Грызун по п. 6, где ACKR представляет собой D6 хемокиновый рецептор-ловушку.

8. Грызун по п. 7, где сконструированный участок D_H включает 5, 10, 15, 20, 25 или больше нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует внеклеточную часть D6 хемокинового рецептора-ловушки.

9. Грызун по п. 8, где сконструированный участок D_H включает 25 нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует внеклеточную часть D6 хемокинового рецептора-ловушки.

10. Грызун по п. 8 или 9, где внеклеточная часть D6 хемокинового рецептора-ловушки выбрана из группы, состоящей из N-концевого участка, внеклеточной петли и их комбинаций.

11. Грызун по п. 9, где каждая из 25 нуклеотидных последовательностей кодирует последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности, представленной в таблице 3.

12. Грызун по п. 9, где каждая из 25 нуклеотидных последовательностей кодирует последовательность, которая практически идентична последовательности, представленной в таблице 3.

13. Грызун по п. 9, где каждая из 25 нуклеотидных последовательностей кодирует последовательность, которая идентична последовательности, представленной в таблице 3.

14. Грызун по любому из предыдущих пунктов, где одна или более нуклеотидных последовательностей содержат одну или более нуклеотидных замен, которые увеличивают частоту возникновения соматической гипермутации в одной или более нуклеотидных последовательностях.

15. Грызун по любому из пп. 1–4, где представляющий интерес полипептид, не являющийся иммуноглобулином, представляет собой конотоксин или токсин тарантула.

16. Грызун по п. 15, где конотоксин выбран из группы, состоящей из α-конотоксина, δ-конотоксина, κ-конотоксина, μ-конотоксина, ω-конотоксина и их комбинаций.

17. Грызун по п. 16, где конотоксин представляет собой μ-конотоксин.

18. Грызун по п. 17, где сконструированный участок D_H включает 5, 10, 15, 20, 25 или больше нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует часть μ-конотоксина, токсина тарантула или их комбинаций.

19. Грызун по п. 18, где сконструированный участок D_H включает 26 нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует часть μ-конотоксина и/или токсина тарантула.

20. Грызун по п. 19, где каждая из 26 нуклеотидных последовательностей кодирует последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности, представленной в таблице 4.

21. Грызун по п. 19, где каждая из 26 нуклеотидных последовательностей кодирует последовательность, которая практически идентична последовательности, представленной в таблице 4.

22. Грызун по п. 19, где каждая из 26 нуклеотидных последовательностей кодирует последовательность, которая идентична последовательности, представленной в таблице 4.

23. Грызун по любому из пп. 15–22, где одна или более нуклеотидных последовательностей содержат одну или более нуклеотидных замен, которые увеличивают частоту возникновения соматической гипермутации в одной или более нуклеотидных последовательностях.

24. Грызун по любому из предыдущих пунктов, где сконструированный участок D_H дополнительно включает первую и вторую последовательности сигнала рекомбинации, фланкирующие каждую из одной или более нуклеотидных последовательностей.

25. Грызун по п. 24, где первая последовательность сигнала рекомбинации содержит последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична первой последовательности сигнала рекомбинации, представленной на фигуре 2.

26. Грызун по п. 24, где первая последовательность сигнала рекомбинации содержит последовательность, которая практически идентична первой последовательности сигнала рекомбинации, представленной на фигуре 2.

27. Грызун по п. 24, где первая последовательность сигнала рекомбинации содержит последовательность, которая идентична первой последовательности сигнала рекомбинации, представленной на фигуре 2.

28. Грызун по п. 24, где вторая последовательность сигнала рекомбинации содержит последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична второй последовательности сигнала рекомбинации, представленной на фигуре 2.

29. Грызун по п. 24, где вторая последовательность сигнала рекомбинации содержит последовательность, которая практически идентична второй последовательности сигнала рекомбинации, представленной на фигуре 2.

30. Грызун по п. 24, где вторая последовательность сигнала рекомбинации содержит последовательность, которая идентична второй последовательности сигнала рекомбинации, представленной на фигуре 2.

31. Грызун по п. 24, где первая и вторая последовательности сигнала рекомбинации выбраны из представленных на фигуре 2.

32. Грызун по любому из предыдущих пунктов, где в геноме грызуна отсутствует один или болееэндогенных генных сегментов D_H дикого типа.

33. Грызун по любому из предыдущих пунктов, где в геноме грызуна отсутствует одна или более эндогенных последовательностей сигнала рекомбинации.

34. Грызун по любому из пп. 1–33, где грызун представляет собой крысу или мышь.

35. Выделенная клетка или ткань грызуна, геном которых содержит вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина, который включает сконструированный участок D_H, где сконструированный участок D_H включает одну или более нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует представляющий интерес полипептид, не являющийся иммуноглобулином, или его часть.

36. Иммортализированная клетка, полученная из выделенной клетки грызуна по п. 35.

37. Эмбриональная стволовая клетка грызуна, геном которой содержит вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина, который включает сконструированный участок D_H, где сконструированный участок D_H включает одну или более нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует представляющий интерес полипептид, не являющийся иммуноглобулином, или его часть.

38. Эмбрион грызуна, полученный за счет эмбриональной стволовой клетки грызуна по п. 37.

39. Способ получения грызуна, геном которого содержит вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина, который включает сконструированный участок D_H, при этом способ предусматривает

(a) осуществление вставки фрагмента ДНК в эмбриональную стволовую клетку грызуна, при этом указанный фрагмент ДНК содержит одну или более нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует представляющий интерес полипептид, не являющийся иммуноглобулином, или его часть;

(b) получение эмбриональной стволовой клетки грызуна, образованной на (a); и

40. Способ по п. 39, где представляющий интерес полипептид, не являющийся иммуноглобулином, представляет собой хемокиновый рецептор.

41. Способ по п. 40, где хемокиновый рецептор представляет собой атипичный хемокиновый рецептор (ACKR).

42. Способ по п. 41, где ACKR представляет собой D6 хемокиновый рецептор-ловушку.

43. Способ по п. 42, где фрагмент ДНК включает 5, 10, 15, 20, 25 или больше нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует внеклеточную часть D6 хемокинового рецептора-ловушки.

44. Способ по п. 43, где фрагмент ДНК включает 25 нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует внеклеточную часть D6 хемокинового рецептора-ловушки.

45. Способ по п. 43 или 44, где внеклеточная часть D6 хемокинового рецептора-ловушки выбрана из группы, состоящей из N-концевого участка, внеклеточной петли и их комбинаций.

46. Способ по п. 39, где представляющий интерес полипептид, не являющийся иммуноглобулином, представляет собой конотоксин или токсин тарантула.

47. Способ по п. 46, где конотоксин выбран из группы, состоящей из α-конотоксина, δ-конотоксина, κ-конотоксина, μ-конотоксина, ω-конотоксина и их комбинаций.

48. Способ по п. 47, где конотоксин представляет собой μ-конотоксин.

49. Способ по п. 48, где фрагмент ДНК включает 5, 10, 15, 20, 25 или больше нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует часть μ-конотоксина, токсина тарантула или их комбинаций.

50. Способ по п. 49, где фрагмент ДНК включает 26 нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует часть μ-конотоксина и/или токсина тарантула.

51. Способ по п. 44 или 50, где фрагмент ДНК дополнительно содержит первую и вторую последовательности сигнала рекомбинации, фланкирующие каждую из 25 или 26 нуклеотидных последовательностей.

52. Способ получения грызуна, геном которого содержит вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина, который включает сконструированный участок D_H, при этом способ предусматривает

осуществление модифицирования генома грызуна таким образом, что он содержит вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина, который включает сконструированный участок D_H, где сконструированный участок D_H содержит одну или более нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует представляющий интерес полипептид, не являющийся иммуноглобулином, или его часть, с получением тем самым указанного грызуна.

53. Способ по п. 52, где представляющий интерес полипептид, не являющийся иммуноглобулином, представляет собой хемокиновый рецептор.

54. Способ по п. 53, где хемокиновый рецептор представляет собой атипичный хемокиновый рецептор (ACKR).

55. Способ по п. 54, где ACKR представляет собой D6 хемокиновый рецептор-ловушку.

56. Способ по п. 55, где геном грызуна модифицируют, чтобы он включал 5, 10, 15, 20, 25 или больше нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует внеклеточную часть D6 хемокинового рецептора-ловушки.

57. Способ по п. 56, где геном грызуна модифицируют, чтобы он включал 25 нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует внеклеточную часть D6 хемокинового рецептора-ловушки.

58. Способ по п. 56 или 57, где внеклеточная часть D6 хемокинового рецептора-ловушки выбрана из группы, состоящей из N-концевого участка, внеклеточной петли и их комбинаций.

59. Способ по п. 52, где представляющий интерес полипептид, не являющийся иммуноглобулином, представляет собой конотоксин или токсин тарантула.

60. Способ по п. 59, где конотоксин выбран из группы, состоящей из α-конотоксина, δ-конотоксина, κ-конотоксина, μ-конотоксина, ω-конотоксина и их комбинаций.

61. Способ по п. 60, где конотоксин представляет собой μ-конотоксин.

62. Способ по п. 61, где геном грызуна модифицируют, чтобы он включал 5, 10, 15, 20, 25 или больше нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует часть μ-конотоксина, токсина тарантула или их комбинаций.

63. Способ по п. 62, где геном грызуна модифицируют, чтобы он включал 26 нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует часть μ-конотоксина и/или токсина тарантула.

64. Способ по п. 57 или 63, где геном грызуна модифицируют, чтобы он дополнительно включал первую и вторую последовательности сигнала рекомбинации, фланкирующие каждую из 25 или 26 нуклеотидных последовательностей.

65. Способ по любому из пп. 39–64, где вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина представляет собой вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина человека.

66. Способ по любому из пп. 39–64, где вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина функционально связан с константным участком тяжелой цепи иммуноглобулина.

67. Способ по п. 66, где константный участок тяжелой цепи иммуноглобулина представляет собой эндогенный константный участок тяжелой цепи иммуноглобулина.

68. Способ получения антитела от грызуна, при этом способ предусматривает стадии:

(a) иммунизации грызуна антигеном, причем грызун имеет геном, содержащий вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина, который включает сконструированный участок D_H, где сконструированный участок D_H включает одну или более нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует представляющий интерес полипептид, не являющийся иммуноглобулином, или его часть;

(b) содержания грызуна в условиях, подходящих для того, чтобы у грызуна вырабатывалсяиммунный ответ на антиген; и

69. Способ по п. 68, где клетка грызуна представляет собой В-клетку.

70. Способ по п. 68, где клетка грызуна представляет собой гибридому.

71. Способ по любому из пп. 68–70, где представляющий интерес полипептид, не являющийся иммуноглобулином, представляет собой хемокиновый рецептор.

72. Способ по п. 71, где хемокиновый рецептор представляет собой атипичный хемокиновый рецептор (ACKR).

73. Способ по п. 72, где ACKR представляет собой D6 хемокиновый рецептор-ловушку.

74. Способ по п. 73, где сконструированный участок D_H включает 5, 10, 15, 20, 25 или больше нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует внеклеточную часть D6 хемокинового рецептора-ловушки.

75. Способ по п. 74, где сконструированный участок D_H включает 25 нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует внеклеточную часть D6 хемокинового рецептора-ловушки.

76. Способ по п. 74 или 75, где внеклеточная часть D6 хемокинового рецептора-ловушки выбрана из группы, состоящей из N-концевого участка, внеклеточной петли и их комбинаций.

77. Способ по любому из пп. 68–70, где представляющий интерес полипептид, не являющийся иммуноглобулином, представляет собой конотоксин или токсин тарантула.

78. Способ по п. 77, где конотоксин выбран из группы, состоящей из α-конотоксина, δ-конотоксина, κ-конотоксина, μ-конотоксина, ω-конотоксина и их комбинаций.

79. Способ по п. 78, где конотоксин представляет собой μ-конотоксин.

80. Способ по п. 79, где сконструированный участок D_H включает 5, 10, 15, 20, 25 или больше нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует часть μ-конотоксина, токсина тарантула или их комбинаций.

81. Способ по п. 80, где сконструированный участок D_H включает 26 нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует часть μ-конотоксина и/или токсина тарантула.

82. Способ по п. 75 или 81, где сконструированный участок D_H дополнительно содержит первую и вторую последовательности сигнала рекомбинации, фланкирующие каждую из 25 или 26 нуклеотидных последовательностей.

83. Способ по любому из пп. 68–82, где вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина представляет собой вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина человека.

84. Способ по любому из пп. 68-83, где вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина функционально связан с константным участком тяжелой цепи иммуноглобулина.

85. Способ по п. 84, где константный участок тяжелой цепи иммуноглобулина представляет собой эндогенный константный участок тяжелой цепи иммуноглобулина.

86. Способ по любому из пп. 39–85, где грызун представляет собой крысу или мышь.

87. Грызун, геном которого содержит

вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина человека, который содержит один или более генных сегментов V_H человека, сконструированный участок D_H и один или более генных сегментов J_H человека, при этом сконструированный участок D_H включает:

(i) одну или более нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует внеклеточную часть атипичного хемокинового рецептора (ACKR); и

(ii) первую и вторую последовательности сигнала рекомбинации, фланкирующие каждую из одной или более нуклеотидных последовательностей из (i);

где вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина человека функционально связан с одним или более эндогенными генами константного участка иммуноглобулина таким образом, что грызун характеризуется тем, что при его иммунизации антигеном в нем вырабатываются антитела, содержащие вариабельные домены тяжелой цепи человека, кодируемые одним или более генными сегментами V_H человека, сконструированным участком D_H и одним или более генными сегментами J_H человека, функционально связанными с константными доменами тяжелой цепи грызуна, кодируемыми одним или более эндогенными генами константного участка иммуноглобулина, и где антитела проявляют специфическое связывание с антигеном.

88. Грызун по п. 87, где ACKR представляет собой D6 хемокиновый рецептор-ловушку.

89. Грызун по п. 88, где сконструированный участок D_H включает 25 нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует внеклеточную часть D6 хемокинового рецептора-ловушки.

90. Грызун по п. 89, где внеклеточная часть D6 хемокинового рецептора-ловушки выбрана из группы, состоящей из N-концевого участка, внеклеточной петли и их комбинаций.

91. Грызун, геном которого содержит

(i) одну или более нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует часть токсина; и

92. Грызун по п. 91, где каждая из одной или более нуклеотидных последовательностей кодирует часть μ-конотоксина, токсина тарантула или их комбинаций.

93. Грызун по п. 92, где сконструированный участок D_H включает 26 нуклеотидных последовательностей, каждая из которых кодирует часть μ-конотоксина и/или токсина тарантула.

94. Грызун по п. 87 или 91, где одна или более нуклеотидных последовательностей содержат одну или более нуклеотидных замен, которые увеличивают частоту возникновения соматической гипермутации в одной или более нуклеотидных последовательностях.

95. Грызун по любому из пп. 87–94, дополнительно содержащий вставку из одного или более генных сегментов V_L человека и одного или более генных сегментов J_L человека в эндогенном локусе легкой цепи.

96. Грызун по п. 95, где сегменты V_L и J_L человека представляют собой генные сегменты Vκ и Jκ, и при этом они встроены в эндогенный локус легкой κ-цепи.

97. Грызун по п. 96, где генные сегменты Vκ и Jκ человека функционально связаны с геном Cκ грызуна.

98. Грызун по п. 95, где сегменты V_L и J_L человека представляют собой генные сегменты Vλ и Jλ, и при этом они встроены в эндогенный локус легкой λ-цепи.

99. Грызун по п. 98, где генные сегменты Vλ и Jλ человека функционально связаны с геном Cλ грызуна.

100. Грызун по любому из пп. 87–99, где грызун представляет собой крысу или мышь.