В-клетки для доставки терапевтических средств in vivo и их дозы - RU2019136194A
Код документа: RU2019136194A
Формула
1. Способ введения генетически модифицированных В-клеток субъекту для обеспечения продуцирования терапевтического средства in vivo, предусматривающий:
введение субъекту двух или более последовательных доз генетически модифицированных В-клеток.
2. Способ по п. 1, где введение предусматривает две или более доз генетически модифицированных В-клеток при субоптимальных концентрациях однократной дозы.
3. Способ по п. 1, где введение предусматривает три или более доз генетически модифицированных В-клеток.
4. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки являются аутологичными по отношению к субъекту.
5. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки являются аллогенными по отношению к субъекту.
6. Способ по п. 1, где субъектом является человек.
7. Способ по п. 1, где терапевтическое средство представляет собой белок, полинуклеотид или малую молекулу, кодируемую ДНК.
8. Способ по п. 7, где белок представляет собой фермент, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, слитый белок, рецептор клеточной поверхности, секретируемый белок, сигнальную молекулу, антигенный фрагмент, фактор свертывания крови или молекулу адгезии.
9. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38- и CD138-.
10. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38+ и CD138+.
11. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38+ и CD138-.
12. Способ по п. 1, где введение предусматривает внутривенную, интраперитонеальную, подкожную или внутримышечную инъекцию.
13. Способ по п. 12, где введение предусматривает внутривенную инъекцию.
14. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки получают с применением транспозона Sleeping Beauty для обеспечения экспрессии терапевтического средства в В-клетках.
15. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки получают с применением рекомбинантного вирусного вектора для обеспечения экспрессии терапевтического средства в В-клетках.
16. Способ по п. 15, где рекомбинантный вирусный вектор кодирует рекомбинантный ретровирус, рекомбинантный лентивирус, рекомбинантный аденовирус или рекомбинантный аденоассоциированный вирус.
17. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки получают путем нацеленной интеграции в геном В-клетки полинуклеотидной последовательности, кодирующей терапевтическое средство.
18. Способ по п. 17, где нацеленная интеграция предусматривает опосредованную нуклеазой с «цинковыми пальцами» интеграцию генов, опосредованную CRISPR/CAS9 интеграцию генов, опосредованную нуклеазой TALE интеграцию генов или опосредованную мегануклеазой интеграцию генов.
19. Способ по п. 18, где нацеленную интеграцию полинуклеотида осуществляют посредством гомологичной рекомбинации.
20. Способ по п. 17, где нацеленная интеграция предусматривает опосредованную вирусным вектором доставку нуклеазы, способной индуцировать расщепление ДНК в сайте-мишени ДНК.
21. Способ по п. 20, где нуклеаза представляет собой нуклеазу с «цинковыми пальцами», нуклеазу CAS9, нуклеазу TALE или мегануклеазу.
22. Способ по любому из пп. 1-21, где генетически модифицированные В-клетки содержат полинуклеотид, характеризующийся последовательностью, идентичной SEQ ID NO: 1.
23. Способ по любому из пп. 1-21, где генетически модифицированные В-клетки содержат полинуклеотид, характеризующийся последовательностью, которая на по меньшей мере приблизительно 85% идентична SEQ ID NO: 1 или на по меньшей мере приблизительно 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более чем 99% идентична SEQ ID NO: 1.
24. Способ по любому из пп. 1-23, где генетически модифицированные В-клетки конструируют в день 2 или день 3 после культивирования.
25. Способ по п. 24, где генетически модифицированные В-клетки конструируют с применением способа, предусматривающего электропорацию.
26. Способ по любому из пп. 1-25, где генетически модифицированные В-клетки собирают для введения субъекту в день 4, день 5, день 6 или день 7 культивирования после конструирования.
27. Способ по любому из пп. 1-25, где генетически модифицированные В-клетки собирают для введения субъекту в день 8 культивирования после конструирования или позже.
28. Способ по п. 27, где генетически модифицированные В-клетки собирают для введения субъекту в день 10 культивирования после конструирования или раньше.
29. Способ по любому из пп. 1-28, где собранные генетически модифицированные В-клетки не продуцируют значительных уровней воспалительных цитокинов.
30. Способ по любому из пп. 1-28, где генетически модифицированные В-клетки собирают в момент времени культивирования, в который определено, что они не продуцируют значительных уровней воспалительных цитокинов.
31. Способ по любому из пп. 1-30, где генетически модифицированные В-клетки выращивают в культуральной системе, которая предусматривает каждый из IL-2, IL-4, IL-10, IL-15, IL-31 и мультимеризованного лиганда CD40, на протяжении всего периода культивирования до и после конструирования.
32. Способ по п. 31, где мультимеризованный лиганд CD40 представляет собой меченный HIS лиганд CD40, который мультимеризован с применением антитела к his-метке.
33. Способ по любому из пп. 1-32, дополнительно предусматривающий размножение генетически модифицированных В-клеток перед введением субъекту.
34. Способ по п. 33, где конечная популяция размноженных генетически модифицированных В-клеток демонстрирует высокую степень поликлональности.
35. Способ по п. 33, где какой-либо конкретный клон B-клеток в конечной популяции размноженных генетически модифицированных B-клеток составляет менее 0,2% от общей популяции B-клеток.
36. Способ по п. 33, где какой-либо конкретный клон B-клеток в конечной популяции размноженных генетически модифицированных B-клеток составляет менее 0,05% от общей популяции B-клеток.
37. Способ по любому из пп. 1-36, где генетически модифицированные В-клетки содержат полинуклеотид, кодирующий ген DHFR человека, который придает повышенную устойчивость к метотрексату.
38. Способ по п. 37, где ген DHFR человека, который придает повышенную устойчивость к метотрексату, содержит мутации по типу замены лейцина на тирозин по аминокислоте 22 и фенилаланина на серин по аминокислоте 31.
39. Способ по любому из пп. 1-38, предусматривающий обработку генетически модифицированных В-клеток с помощью метотрексата перед сбором для введения.
40. Способ по п. 39, где обработка с помощью метотрексата предусматривает от 100 нМ до 300 нМ.
41. Способ по п. 40, где обработка с помощью метотрексата предусматривает 200 нМ.
42. Способ по любому из пп. 1-41, где генетически модифицированные В-клетки мигрируют в различные ткани после введения субъекту.
43. Способ по любому из пп. 1-41, где по меньшей мере одна генетически модифицированная B-клетка из популяции генетически модифицированных B-клеток, которые вводят субъекту, мигрирует в одну или более тканей, выбранных из группы, состоящей из костного мозга, кишечника, мышцы, селезенки, почки, сердца, печени, легкого и головного мозга.
44. Способ по п. 43, где по меньшей мере одна генетически модифицированная В-клетка из популяции генетически модифицированных В-клеток, которые вводят субъекту, мигрирует в костный мозг, кишечник, мышцу, селезенку, почку, сердце, печень, легкое и головной мозг субъекта.
45. Способ по любому из пп. 1-44, где терапевтическое средство, продуцируемое генетически модифицированными В-клетками, представляет собой идуронидазу (IDUA).
46. Способ по п. 45, где введение генетически модифицированных В-клеток субъекту приводит к снижению уровней гликозаминогликанов (GAG) в различных тканях субъекта.
47. Способ по п. 45, где введение генетически модифицированных В-клеток субъекту приводит к снижению уровней GAG в одной или более тканях субъекта, выбранных из группы, состоящей из костного мозга, кишечника, мышцы, селезенки, почки, сердца, печени, легкого и головного мозга.
48. Способ по п. 47, где введение генетически модифицированных В-клеток субъекту приводит к снижению уровней GAG в костном мозге, кишечнике, мышце, селезенке, почке, сердце, печени, легком и головном мозге субъекта.
49. Способ по любому из пп. 1-48, где у субъекта имеется мукополисахаридоз типа I (MPS I).
50. Способ по п. 49, где введение генетически модифицированных В-клеток обеспечивает лечение MPS I у субъекта.
51. Способ доставки терапевтического средства во множество тканей in vivo, предусматривающий введение субъекту двух или более доз генетически модифицированных В-клеток.
52. Способ лечения MPS I у субъекта, предусматривающий введение субъекту с MPS I двух или более последовательных доз B-клеток, генетически модифицированных с обеспечением продуцирования IDUA.
53. Способ снижения количества гликозаминогликана (GAG) у субъекта с MPS I, предусматривающий введение субъекту двух или более последовательных доз В-клеток, генетически модифицированных с обеспечением продуцирования IDUA.
54. Модифицированная В-клетка, содержащая бифункциональный трансген pKT2/EEK-IDUA-DHFR.
55. Способ доставки терапевтического средства в одну или более тканей in vivo, предусматривающий введение субъекту одной или более доз генетически модифицированных В-клеток, где генетически модифицированные В-клетки являются мигрирующими.
56. Способ по п. 55, где по меньшей мере приблизительно 20% В-клеток мигрируют в анализе хемотаксиса с применением CXCL12.
57. Способ по п. 55, где по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45% или по меньшей мере приблизительно 50% В-клеток мигрируют в анализе хемотаксиса с применением CXCL12.
58. Способ по любому из пп. 55-57, где по меньшей мере приблизительно 20% В-клеток мигрируют в анализе хемотаксиса с применением CXCL13.
59. Способ по любому из пп. 55-58, где по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45% или по меньшей мере приблизительно 50% В-клеток мигрируют в анализе хемотаксиса с применением CXCL13.
60. Способ по п. 55, где по меньшей мере приблизительно 40% В-клеток мигрируют в анализе хемотаксиса с применением CXCL12, и по меньшей мере приблизительно 40% В-клеток мигрируют в анализе хемотаксиса с применением CXCL13.
61. Способ по любому из пп. 55-60, где модифицированные В-клетки генетически сконструированы с обеспечением экспрессии терапевтического средства.
62. Способ по любому из пп. 55-61, где модифицированные В-клетки генетически сконструированы с обеспечением секреции терапевтического средства.
63. Способ по п. 55, где генетически модифицированные В-клетки вводят после пребывания В-клеток в культуре в течение периода менее приблизительно 7 дней после конструирования.
64. Способ по п. 55, где генетически модифицированные В-клетки вводят после пребывания В-клеток в культуре в течение периода 4-9 дней.
65. Способ по п. 55, где генетически модифицированные В-клетки вводят после пребывания В-клеток в культуре в течение периода 5, 6 или 7 дней после конструирования.
66. Способ по любому из пп. 55-65, где терапевтическое средство представляет собой IDUA.
67. Способ по любому из пп. 55-65, где терапевтическое средство представляет собой FIX, LPL или LCAT.
68. Способ по любому из пп. 55-67, где способ предусматривает введение по меньшей мере двух доз модифицированных В-клеток.
69. Способ по любому из пп. 55-68, где введение предусматривает внутривенную инъекцию.
70. Способ введения генетически модифицированных В-клеток субъекту с обеспечением синергетического продуцирования in vivo терапевтического средства, предусматривающий: определение оптимальной концентрации однократной дозы модифицированных В-клеток для индуцирования наибольшего продуцирования in vivo терапевтического средства; уменьшение оптимальной концентрации однократной дозы модифицированных B-клеток с получением субоптимальной концентрации однократной дозы модифицированных B-клеток и введение субъекту двух или более доз при субоптимальной концентрации однократной дозы модифицированных В-клеток.
71. Способ по п. 70, где проводят исследование с использованием множества однократных доз модифицированных B-клеток, в результате чего определяют оптимальную концентрацию однократной дозы модифицированных B-клеток.
72. Способ по п. 71, где увеличение дозы модифицированных В-клеток, присутствующих в некоторой концентрации однократной дозы модифицированных В-клеток, приводит к линейному повышению продуцирования терапевтического средства.
73. Способ по п. 70, где проводят исследование с использованием множества субоптимальных концентраций однократной дозы модифицированных В-клеток, в результате чего определяют оптимальную дозу, при этом полученная в результате доза приводит к большему, чем линейное, повышению по сравнению с более низкими дозами.
74. Способ по п. 70, где субоптимальная концентрация однократной дозы составляет половину или одну треть дозы при оптимальной концентрации однократной дозы.
75. Способ по п. 70, где субоптимальная концентрация однократной дозы составляет менее одной трети дозы при оптимальной концентрации однократной дозы.
76. Способ по любому из пп. 70-75, где синергетическое продуцирование терапевтического средства in vivo, которое является результатом введения субъекту двух или более доз при субоптимальной концентрации однократной дозы модифицированных В-клеток, происходит в результате внутривенной инъекции продукта на основе В-клеток.
77. Способ по любому из пп. 70-76, где В-клетки сконструированы с обеспечением экспрессии терапевтического средства.
78. Способ по п. 77, где модифицированные В-клетки генетически сконструированы с обеспечением секреции терапевтического средства.
79. Способ по любому из пп. 70-78, где терапевтическое средство представляет собой IDUA.
80. Способ по любому из пп. 70-78, где терапевтическое средство представляет собой FIX, LPL или LCAT.
81. Генетически модифицированная В-клетка, которая сконструирована с обеспечением продуцирования терапевтического средства.
82. Генетически модифицированная B-клетка по п. 81, где генетически модифицированные B-клетки являются аутологичными по отношению к субъекту, которому вводятся генетически модифицированные B-клетки.
83. Генетически модифицированная B-клетка по п. 81, где генетически модифицированные B-клетки являются аллогенными по отношению к субъекту, которому вводятся генетически модифицированные B-клетки.
84. Генетически модифицированная В-клетка по п. 82 или п. 83, где субъектом является человек.
85. Генетически модифицированная В-клетка по п. 81, где терапевтическое средство представляет собой белок, полинуклеотид или малую молекулу, кодируемую ДНК.
86. Генетически модифицированная В-клетка по п. 85, где белок представляет собой фермент, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, слитый белок, рецептор клеточной поверхности, секретируемый белок, сигнальную молекулу, антигенный фрагмент, фактор свертывания крови или молекулу адгезии.
87. Генетически модифицированная B-клетка по п. 81, где терапевтическое средство представляет собой IDUA.
88. Генетически модифицированная B-клетка по п. 81, где терапевтическое средство представляет собой FIX, LPL или LCAT.
89. Генетически модифицированная B-клетка по п. 81, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38- и CD138-.
90. Генетически модифицированная B-клетка по п. 81, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38+ и CD138+.
91. Генетически модифицированная B-клетка по п. 81, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38+ и CD138-.
92. Композиция, содержащая популяцию генетически модифицированных B-клеток, которые сконструированы с обеспечением продуцирования терапевтического средства, где генетически модифицированные B-клетки характеризуются оптимальной миграционной способностью.
93. Композиция по п. 92, где терапевтическое средство представляет собой IDUA.
94. Композиция по п. 92, где терапевтическое средство представляет собой FIX, LPL или LCAT.
95. Композиция, содержащая популяцию генетически модифицированных B-клеток, которые сконструированы с обеспечением продуцирования терапевтического средства, где генетически модифицированные B-клетки в композиции собраны из культуры в момент времени, когда они не продуцируют значительных количеств воспалительных цитокинов.
96. Композиция по любому из пп. 92-95, где генетически модифицированные В-клетки являются аутологичными по отношению к субъекту, которому вводятся генетически модифицированные В-клетки.
97. Композиция по любому из пп. 92-95, где генетически модифицированные В-клетки являются аллогенными по отношению к субъекту, которому вводятся генетически модифицированные В-клетки.
98. Композиция по любому из пп. 96-97, где субъектом является человек.
99. Композиция по п. 92 или п. 95, где терапевтическое средство представляет собой белок, полинуклеотид или малую молекулу, кодируемую ДНК.
100. Композиция по п. 99, где белок представляет собой фермент, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, слитый белок, рецептор клеточной поверхности, секретируемый белок, сигнальную молекулу, антигенный фрагмент, фактор свертывания крови или молекулу адгезии.
101. Композиция по любому из пп. 92-100, где терапевтическое средство представляет собой IDUA.
102. Композиция по любому из пп. 92-100, где терапевтическое средство представляет собой FIX, LPL или LCAT.
103. Композиция по любому из пп. 92-102, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38- и CD138-.
104. Композиция по любому из пп. 92-102, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38+ и CD138+.
105. Композиция по любому из пп. 92-102, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38+ и CD138-.
106. Композиция по любому из пп. 92-105, где генетически модифицированные В-клетки получены с применением транспозона Sleeping Beauty с обеспечением экспрессии терапевтического средства в В-клетках.
107. Композиция по любому из пп. 92-105, где генетически модифицированные В-клетки получены с применением рекомбинантного вирусного вектора с обеспечением экспрессии терапевтического средства в В-клетках.
108. Композиция по п. 107, где рекомбинантный вирусный вектор кодирует рекомбинантный ретровирус, рекомбинантный лентивирус, рекомбинантный аденовирус или рекомбинантный аденоассоциированный вирус.
109. Композиция по любому из пп. 92-105 и пп. 106-108, где генетически модифицированные В-клетки получены с помощью нацеленной интеграции в геном В-клетки полинуклеотидной последовательности, кодирующей терапевтическое средство.
110. Композиция по п. 109, где нацеленная интеграция предусматривает опосредованную нуклеазой с «цинковыми пальцами» интеграцию генов, опосредованную CRISPR/CAS9 интеграцию генов, опосредованную нуклеазой TALE интеграцию генов или опосредованную мегануклеазой интеграцию генов.
111. Композиция по п. 110, где нацеленная интеграция полинуклеотида осуществлена посредством гомологичной рекомбинации.
112. Композиция по п. 109, где нацеленная интеграция предусматривает опосредованную вирусным вектором доставку нуклеазы, способной индуцировать расщепление ДНК в сайте-мишени ДНК.
113. Композиция по п. 112, где нуклеаза представляет собой нуклеазу с «цинковыми пальцами», нуклеазу CAS9, нуклеазу TALE или мегануклеазу.
114. Композиция по любому из пп. 92-113, где генетически модифицированные В-клетки содержат полинуклеотид, характеризующийся последовательностью, идентичной SEQ ID NO: 1.
115. Композиция по любому из пп. 92-113, где генетически модифицированные В-клетки содержат полинуклеотид, характеризующийся последовательностью, которая на по меньшей мере приблизительно 85% идентична SEQ ID NO: 1 или на по меньшей мере приблизительно 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более чем 99% идентична SEQ ID NO: 1.
116. Композиция по любому из пп. 92-115, где генетически модифицированные В-клетки сконструированы в день 2 или день 3 после культивирования.
117. Композиция по п. 116, где генетически модифицированные В-клетки сконструированы с применением способа, предусматривающего электропорацию.
118. Композиция по любому из пп. 92-117, где генетически модифицированные В-клетки собраны для введения субъекту в день 4, день 5, день 6 или день 7 культивирования после конструирования.
119. Композиция по любому из пп. 92-117, где генетически модифицированные В-клетки собраны для введения субъекту в день 8 культивирования после конструирования или позже.
120. Композиция по любому из пп. 92-119, где генетически модифицированные В-клетки собраны для введения субъекту в день 10 культивирования после конструирования или раньше.
121. Композиция по любому из пп. 92-120, где собранные генетически модифицированные В-клетки не продуцируют значительных уровней воспалительных цитокинов.
122. Композиция по любому из пп. 92-121, где генетически модифицированные В-клетки собраны в момент времени культивирования, в который определено, что они не продуцируют значительных уровней воспалительных цитокинов.
123. Композиция по любому из пп. 92-122, где генетически модифицированные В-клетки выращены в культуральной системе, которая предусматривает каждый из IL-2, IL-4, IL-10, IL-15, IL-31 и мультимеризованного лиганда CD40 на протяжении всего периода культивирования до и после конструирования.
124. Композиция по п. 123, где мультимеризованный лиганд CD40 представляет собой меченный HIS лиганд CD40, который мультимеризован с применением антитела к his-метке.
125. Композиция по любому из пп. 92-124, где генетически модифицированные В-клетки размножены перед введением субъекту.
126. Композиция по п. 125, где конечная популяция размноженных генетически модифицированных В-клеток демонстрирует высокую степень поликлональности.
127. Композиция по п. 126, где какой-либо конкретный клон B-клеток в конечной популяции размноженных генетически модифицированных B-клеток составляет менее 0,2% от общей популяции B-клеток.
128. Композиция по п. 126, где какой-либо конкретный клон B-клеток в конечной популяции размноженных генетически модифицированных B-клеток составляет менее 0,05% от общей популяции B-клеток.
129. Композиция по любому из пп. 92-128, где генетически модифицированные В-клетки содержат полинуклеотид, кодирующий ген DHFR человека, который придает повышенную устойчивость к метотрексату.
130. Композиция по п. 129, где ген DHFR человека, который придает повышенную устойчивость к метотрексату, содержит мутации по типу замены лейцина на тирозин по аминокислоте 22 и фенилаланина на серин по аминокислоте 31.
131. Композиция по любому из пп. 92-130, где генетически модифицированные В-клетки обработаны с помощью метотрексата перед сбором для введения.
132. Композиция по п. 131, где обработка с помощью метотрексата предусматривает от 100 нМ до 300 нМ.
133. Композиция по п. 132, где обработка с помощью метотрексата предусматривает 200 нМ.
134. Композиция по любому из пп. 92-133, где генетически модифицированные В-клетки, содержащиеся в композиции, мигрируют в различные ткани после введения субъекту.
135. Композиция по любому из пп. 92-133, где по меньшей мере одна генетически модифицированная В-клетка из популяции генетически модифицированных В-клеток, содержащихся в композиции, мигрирует в одну или более тканей, выбранных из группы, состоящей из костного мозга, кишечника, мышцы, селезенки, почки, сердца, печени, легкого и головного мозга, если композиция на основе генетически модифицированных В-клеток вводится субъекту.
136. Композиция по п. 135, где по меньшей мере одна генетически модифицированная В-клетка из популяции генетически модифицированных В-клеток, содержащихся в композиции, мигрирует в костный мозг, кишечник, мышцу, селезенку, почку, сердце, печень, легкое и головной мозг субъекта, если композиция на основе генетически модифицированных В-клеток вводится субъекту.
137. Композиция по любому из пп. 92-136, где терапевтическое средство, продуцируемое с помощью генетически модифицированных В-клеток, представляет собой идуронидазу (IDUA).
138. Композиция по п. 137, где введение субъекту композиции, содержащей генетически модифицированные В-клетки, приводит к снижению уровней гликозаминогликанов (GAG) в различных тканях субъекта.
139. Композиция по п. 137, где введение субъекту композиции, содержащей генетически модифицированные В-клетки, приводит к снижению уровней GAG в одной или более тканях субъекта, выбранных из группы, состоящей из костного мозга, кишечника, мышцы, селезенки, почки, сердца, печени, легкого и головного мозга.
140. Композиция по любому из пп. 92-139, где композиция вводится субъекту, у которого имеется мукополисахаридоз типа I (MPS I).
141. Композиция по п. 140, где введение композиции, содержащей генетически модифицированные В-клетки, обеспечивает лечение MPS I у субъекта.
142. Композиция по любому из пп. 92-136, где терапевтическое средство, продуцируемое с помощью генетически модифицированных В-клеток, выбрано из FIX, LPL и LCAT.
143. Способ введения композиции по п. 137 субъекту, где указанное введение приводит к снижению уровней GAG в костном мозге, кишечнике, мышце, селезенке, почке, сердце, печени, легком и головном мозге субъекта.
144. Способ введения генетически модифицированных В-клеток субъекту для обеспечения продуцирования терапевтического средства in vivo, предусматривающий введение субъекту оптимальной однократной дозы генетически модифицированных В-клеток.
145. Способ по п. 144, где субъектом является человек.
146. Способ по п. 145, где оптимальная однократная доза является эквивалентной 3 x 107 модифицированных В-клеток/кг для человека.
147. Способ по любому из пп. 144-146, где доза составляет 1,5 x 109 генетически модифицированных В-клеток/кг.
148. Способ по любому из пп. 144-147, где оптимальная однократная доза генетически модифицированных В-клеток приводит к большему, чем линейное, повышению уровней терапевтического средства после инфузии клеток по сравнению с дозой, которая составляет две трети или меньше от оптимальной дозы.
149. Способ по любому из пп. 144-148, где оптимальная однократная доза генетически модифицированных В-клеток приводит к наибольшим уровням in vivo терапевтического средства в пересчете на клетку в контексте однократной инфузии В-клеток.
150. Способ по любому из пп. 144-149, где средство представляет собой IDUA.
