Животные с гуманизированными il-4 и il-4rα - RU2016143376A
Код документа: RU2016143376A
Формула
1. Грызун, характеризующийся гуманизацией эндогенного гена IL-4R грызуна, где гуманизация предусматривает замену по эндогенному локусу IL-4 грызуна нуклеиновой кислоты грызуна, содержащей экзон гена IL-4, последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей по меньшей мере один экзон человеческого гена IL-4, с образованием модифицированного гена IL-4, при этом экспрессия модифицированного гена IL-4 находится под контролем регуляторных элементов грызуна в эндогенном локусе IL-4 грызуна.
2. Грызун по п. 1, где грызун представляет собой мышь или крысу.
3. Грызун по п. 1, где модифицированный ген IL-4 кодирует человеческий или гуманизированный белок IL-4 и содержит участок от экзона 1, начинающегося со стартового кодона ATG, до экзона 4 человеческого гена IL-4.
4. Грызун по п. 1, где грызун представляет собой мышь, которая не способна экспрессировать белок IL-4 мыши.
5. Грызун по п. 1, где грызун представляет собой мышь, у которой экспрессируется белок IL-4Rα мыши, кодируемый эндогенным геном IL-4Rα мыши.
6. Грызун по п. 1, где грызун представляет собой мышь, у которой экспрессируется человеческий или гуманизированный белок IL-4Rα.
7. Мышь по п. 6, где гуманизированный белок IL-4Rα содержит эктодомен человеческого белка IL-4Rα.
8. Мышь по п. 7, где гуманизированный белок IL-4Rα содержит трансмембранный домен и цитоплазматический домен белка IL-4Rα мыши.
9. Мышь по п. 6, где мышь характеризуется заменой по эндогенному локусу IL-4Rα мыши нуклеиновой кислоты мыши, содержащей экзон гена IL-4Rα мыши, последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей по меньшей мере один экзон человеческого гена IL-4Rα, с образованием модифицированного гена IL-4Rα, при этом экспрессия модифицированного гена IL-4Rα находится под контролем регуляторных элементов мыши в эндогенном локусе IL-4Rα мыши.
10. Грызун по п. 1, где грызун представляет собой мышь, и где непрерывный геномный фрагмент последовательности IL-4 мыши, содержащей участок от экзона 1, начинающегося со стартового кодона ATG, до экзона 4 IL-4 мыши, заменен непрерывным геномным фрагментом последовательности человеческого IL-4, содержащей участок от экзона 1, начинающегося со стартового кодона ATG, до экзона 4 человеческого IL-4.
11. Грызун по п. 1, где грызун представляет собой мышь, у которой экспрессируется человеческий или гуманизированный белок IL-4 в сыворотке крови в концентрации по меньшей мере приблизительно 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 или 200% от уровня белка IL-4 мыши, присутствующего в сыворотке крови мыши соответствующей возрастной группы, у которой экспрессируется функциональный эндогенный белок IL-4, но которая не характеризуется указанной заменой.
12. Грызун по п. 1, где грызун представляет собой мышь, у которой экспрессируется человеческий белок IL-4 в сыворотке в концентрации от приблизительно 10 до приблизительно 200%, от приблизительно 20 до приблизительно 150% или от приблизительно 30 до приблизительно 100% от уровня белка IL-4 мыши, присутствующего в сыворотке крови мыши соответствующей возрастной группы, у которой экспрессируется функциональный эндогенный белок IL-4, но которая не характеризуется указанной заменой.
13. Грызун, характеризующийся гуманизацией эндогенного гена IL-4Rα грызуна, где гуманизация предусматривает замену по эндогенному локусу IL-4Rα грызуна нуклеиновой кислоты грызуна, содержащей экзон гена IL-4Rα грызуна, последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей по меньшей мере один экзон человеческого гена IL-4Rα, с образованием гуманизированного гена IL-4Rα, при этом экспрессия гуманизированного гена IL-4Rα находится под контролем регуляторных элементов грызуна в эндогенном локусе IL-4Rα грызуна.
14. Грызун по п. 13, где грызун представляет собой мышь или крысу.
15. Грызун по п. 13, где гуманизированный ген IL-4Rα кодирует человеческий или гуманизированный белок IL-4Rα и содержит участок от экзона 1, начинающегося со стартового кодона ATG, до экзона 5 человеческого гена IL-4Rα.
16. Грызун по п. 13, где грызун представляет собой мышь, которая не способна экспрессировать белок IL-4Rα мыши.
17. Грызун по п. 13, где грызун представляет собой мышь, у которой экспрессируется белок IL-4 мыши, кодируемый эндогенным геном IL-4 мыши.
18. Грызун по п. 17, где грызун представляет собой мышь, у которой экспрессируется человеческий или гуманизированный белок IL-4.
19. Мышь по п. 18, где мышь характеризуется заменой по эндогенному локусу IL-4 мыши нуклеиновой кислоты мыши, содержащей экзон гена IL-4 мыши, последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей по меньшей мере один экзон человеческого гена IL-4, с образованием модифицированного гена IL-4, при этом экспрессия модифицированного гена IL-4 находится под контролем регуляторных элементов мыши в эндогенном локусе IL-4 мыши.
20. Грызун по п. 13, где грызун представляет собой мышь, и где непрерывный геномный фрагмент последовательности IL-4Rα мыши, содержащей участок от экзона 1, начинающегося со стартового кодона ATG, до экзона IL-4Rα, заменен непрерывным геномным фрагментом последовательности человеческого IL-4Rα, содержащей участок от экзона 1, начинающегося со стартового кодона ATG, до экзона 5 человеческого IL-4Rα.
21. Грызун по п. 13, где грызун представляет собой мышь, у которой экспрессируется человеческий или гуманизированный белок IL-4Rα на иммунных клетках, или В-, и/или Т-клетках, в количестве по меньшей мере приблизительно 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 или 200% от уровня белка IL-4Rα мыши, присутствующего на иммунных клетках, или В-, и/или Т-клетках, мыши соответствующей возрастной группы, у которой экспрессируется функциональный эндогенный белок IL-4Rα мыши, но которая не характеризуется указанной заменой.
22. Грызун по п. 13, где грызун представляет собой мышь, у которой экспрессируется человеческий или гуманизированный белок IL-4Rα на иммунных клетках, или В-, и/или Т-клетках, в количестве от приблизительно 10 до приблизительно 200%, от приблизительно 20 до приблизительно 150% или от приблизительно 30 до приблизительно 100% от уровня белка IL-4Rα мыши, присутствующего на иммунных клетках, или В-, и/или Т-клетках, мыши соответствующей возрастной группы, у которой экспрессируется функциональный эндогенный белок IL-4Rα мыши, но которая не характеризуется указанной заменой.
23. Способ получения грызуна с гуманизированной последовательностью, включающий замену последовательности нуклеиновой кислоты IL-4 грызуна последовательностью нуклеиновой кислоты человеческого IL-4, содержащей один или более экзонов человеческого гена IL-4, с образованием модифицированного гена IL-4, кодирующего человеческий или гуманизированный белок IL-4, при этом замену осуществляют по эндогенному локусу IL-4 грызуна и последовательность модифицированного гена IL-4, содержащая один или более экзонов последовательности человеческого гена IL-4, является функционально связанной с регуляторными элементами или последовательностями грызуна в эндогенном локусе IL-4 грызуна.
24. Способ по п. 23, где грызун представляет собой мышь или крысу.
25. Способ по п. 23, где регуляторные элементы или последовательности грызуна получены от мыши или крысы.
26. Способ по п. 23, где регуляторные элементы или последовательности грызуна представляют собой эндогенные регуляторные элементы или последовательности грызуна в локусе IL-4 грызуна.
27. Способ по п. 23, где последовательность нуклеиновой кислоты человеческого IL-4, замещающая последовательность нуклеиновой кислоты IL-4 грызуна, содержит по меньшей мере один экзон последовательности человеческого гена IL-4.
28. Способ по п. 27, где последовательность нуклеиновой кислоты человеческого IL-4, замещающая последовательность нуклеиновой кислоты IL-4 грызуна, содержит по меньшей мере 2 или по меньшей мере 3 экзона последовательности человеческого гена IL-4.
29. Способ по п. 28, где последовательность нуклеиновой кислоты человеческого IL-4, замещающая последовательность нуклеиновой кислоты IL-4 грызуна, содержит все 4 экзона последовательности человеческого гена IL-4.
30. Способ по п. 23, где замену осуществляют по эндогенному локусу IL-4 грызуна и последовательность нуклеиновой кислоты человеческого IL-4, содержащая один или более экзонов последовательности человеческого гена IL-4, является функционально связанной с эндогенными регуляторными элементами или последовательностями грызуна в эндогенном локусе IL-4 грызуна.
31. Способ получения мыши с гуманизированным IL-4, включающий замену последовательности нуклеиновой кислоты IL-4 мыши нуклеиновой кислотой человеческого IL-4 с образованием модифицированного гена IL-4, кодирующего человеческий или гуманизированный белок IL-4.
32. Способ по п. 31, где замену осуществляют по эндогенному локусу IL-4 мыши, и при этом модифицированный ген, кодирующий человеческий или гуманизированный белок IL-4, является функционально связанным с эндогенными регуляторными последовательностями мыши.
33. Способ по п. 31, где замену осуществляют по эндогенному локусу IL-4 мыши, и при этом модифицированный ген, кодирующий человеческий или гуманизированный белок IL-4, является функционально связанным с эндогенными регуляторными последовательностями мыши.
34. Способ получения грызуна с гуманизированной последовательностью, включающий замену последовательности нуклеиновой кислоты IL-4Rα грызуна последовательностью нуклеиновой кислоты человеческого IL-4Rα, содержащей один или более экзонов последовательности человеческого гена IL-4Rα, с образованием модифицированного гена IL-4Rα, кодирующего человеческий или гуманизированный белок IL-4Rα, при этом замену осуществляют по эндогенному локусу IL-4Rα грызуна и модифицированный ген IL-4Rα, кодирующий человеческий или гуманизированный белок IL-4Rα является функционально связанным с регуляторными элементами или последовательностями грызуна в эндогенном локусе IL-4Rα грызуна.
35. Способ по п. 34, где грызун представляет собой мышь или крысу.
36. Способ по п. 34, где регуляторные элементы или последовательности грызуна получены от мыши или крысы.
37. Способ по п. 34, где регуляторные элементы или последовательности грызуна представляют собой эндогенные регуляторные элементы или последовательности грызуна в локусе IL-4Rα грызуна.
38. Способ по п. 37, где последовательность человеческого гена IL-4Rα, замещающая последовательность гена IL-4Rα грызуна, содержит по меньшей мере один экзон последовательности человеческого гена IL-4Rα.
39. Способ по п. 38, где последовательность нуклеиновой кислоты человеческого IL-4Rα, замещающая последовательность нуклеиновой кислоты IL-4Rα грызуна, содержит по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 экзонов последовательности человеческого гена IL-4Rα.
40. Способ по п. 39, где последовательность нуклеиновой кислоты человеческого IL-4Rα, замещающая последовательность нуклеиновой кислоты IL-4Rα грызуна, содержит все 9 экзонов последовательности человеческого гена IL-4Rα.
41. Способ по п. 34, где замену осуществляют по эндогенному локусу IL-4Rα грызуна, и при этом модифицированный ген IL-4Rα, кодирующий человеческий или гуманизированный белок IL-4Rα, является функционально связанным с эндогенными регуляторными элементами или последовательностями грызуна в эндогенном локусе IL-4Rα грызуна.
42. Способ получения мыши с гуманизированной последовательностью, включающий замену экзонов мыши, кодирующих эктодомен IL-4Rα мыши, человеческим геномным фрагментом, кодирующим эктодомен человеческого IL-4Rα, с образованием гуманизированного гена IL-4Rα.
43. Способ по п. 42, где замену осуществляют по эндогенному локусу IL-4Rα мыши, и при этом гуманизированный ген IL-4Rα является функционально связанным с регуляторными последовательностями мыши.
44. Способ по п. 42, где замену осуществляют по эндогенному локусу IL-4Rα мыши, и при этом гуманизированный ген IL-4Rα является функционально связанным с эндогенными регуляторными последовательностями мыши.
45. Грызун, характеризующийся гуманизированным геном IL-4Rα и гуманизированным геном IL-4, где гуманизированный ген IL-4Rα получают в результате замены последовательности, кодирующей эктодомен IL-4Rα грызуна, последовательностью, кодирующей эктодомен человеческого IL-4Rα, при этом гуманизированный ген IL-4Rα содержит последовательность, кодирующую трансмембранный домен IL-4Rα грызуна, и последовательность, кодирующую цитоплазматический домен IL-4Rα грызуна, и где гуманизированный ген IL-4Rα находится под контролем эндогенных регуляторных элементов IL-4Rα грызуна в эндогенном локусе IL-4Rα грызуна; и где гуманизированный ген IL-4 кодирует человеческий или гуманизированный белок IL-4, и при этом гуманизированный ген IL-4 находится под контролем эндогенных регуляторных элементов IL-4 грызуна в эндогенном локусе IL-4R грызуна.
46. Грызун по п. 45, где грызун представляет собой мышь или крысу.
47. Грызун по п. 45, где грызун представляет собой мышь, которая не способна экспрессировать белок IL-4 мыши и не способна экспрессировать белок IL-4Rα мыши.
48. Грызун по п. 45, где регуляторные элементы или последовательности грызуна в эндогенном локусе IL-4 грызуна и/или локусе эндогенного IL-4Rα грызуна получены от мыши или крысы.
49. Грызун по п. 45, где регуляторные элементы или последовательности грызуна представляют собой эндогенные регуляторные элементы или последовательности грызуна в локусе IL-4 грызуна и/или локусе IL-4Rα грызуна.
50. Способ скрининга в отношении антагониста, специфичного к IL-4 или IL-4Rα человека, включающий:
получение мыши с двумя гуманизированными последовательностями IL-4 и IL-4Rα,
индуцирование воспаления легких у указанной мыши,
введение средства указанной мыши,
определение того, уменьшается ли воспаление легких с помощью средства, и
идентификацию средства в качестве антагониста, специфичного к IL-4 или IL-4Rα человека, исходя из его способности уменьшать воспаление легких.
51. Способ по п. 50, где степень воспаления легких определяют путем измерения накопления слизи в дыхательных путях, эозинофильного клеточного инфильтрата в жидкости бронхоальвеолярного лаважа и/или общего IgE, циркулирующего в крови.
52. Способ скрининга в отношении антагониста, специфичного к IL-4 или IL-4Rα человека, включающий:
получение мыши с двумя гуманизированными последовательностями IL-4 и IL-4Rα,
индуцирование кожного воспаления у указанной мыши,
введение средства указанной мыши,
определение того, уменьшается ли кожное воспаление с помощью средства, и
идентификацию средства в качестве антагониста, специфичного к IL-4 или IL-4Rα человека, исходя из его способности уменьшать кожное воспаление.
53. Способ по п. 50 или 52, где гуманизированный ген IL-4Rα получают в результате замены последовательности, кодирующей эктодомен IL-4Rα мыши, последовательностью, кодирующей эктодомен человеческого IL-4Rα, при этом гуманизированный ген IL-4Rα находится под контролем эндогенных регуляторных элементов IL-4Rα мыши в эндогенном локусе IL-4Rα мыши; и где гуманизированный ген IL-4 кодирует человеческий или гуманизированный белок IL-4, и гуманизированный ген IL-4 находится под контролем эндогенных регуляторных элементов IL-4 грызуна в эндогенном локусе IL-4R грызуна.
