Отличные от человека животные, содержащие гуманизированный ген фактора активации в-клеток - RU2016123708A
Код документа: RU2016123708A
Формула
1. Генетически модифицированное животное-грызун, геном которого содержит замещение геномного сегмента эндогенного гена Baff грызуна на человеческий геномный сегмент, содержащий экзоны 3-6 гена BAFF человека с образованием гуманизированного гена Baff, причем замещение происходит в эндогенном локусе Baff грызуна, причем гуманизированный ген Baff находится под контролем промотора Baff грызуна в указанном эндогенном локусе Baff грызуна и кодирует гуманизированный белок Baff, содержащий внеклеточную часть белка BAFF человека, кодируемую указанным геном BAFF человека, связанную с внутриклеточной частью белка Baff грызуна, кодируемой указанным геном Baff грызуна, и причем указанный генетически модифицированный грызун экспрессирует указанный гуманизированный белок Baff.
2. Генетически модифицированное животное-грызун по п. 1, причем указанное животное-грызун обнаруживаемым образом не экспрессирует полноразмерный эндогенный белок Baff грызуна.
3. Генетически модифицированное животное-грызун по п. 1 или 2, причем указанное животное-грызун представляет собой мышь или крысу.
4. Генетически модифицированное животное-грызун по п. 3, причем животное-грызун представляет собой мышь.
5. Генетически модифицированное животное-грызун по п. 4, у которого подвергаемый замещению геномный сегмент эндогенного гена Baff мыши содержит экзоны 3, 4, 5, 6 и часть экзона 7 указанного эндогенного гена Baff мыши.
6. Генетически модифицированное животное-грызун по п. 5, у которого гуманизированный белок Baff содержит аминокислоты с 142 по 285 последовательности SEQ ID NO: 5.
7. Генетически модифицированное животное-грызун по п. 6, у которого гуманизированный ген Baff содержит экзон 1 и экзон 2 указанного эндогенного гена Baff мыши.
8. Генетически модифицированное животное-грызун по п. 7, у которого указанный гуманизированный белок Baff содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7.
9. Мышиная эмбриональная стволовая (ЭС) клетка, геном которой содержит замещение экзонов 3-6 и части экзона 7 эндогенного гена Baff мыши на человеческий геномный сегмент, содержащий экзоны 3-6 гена BAFF человека, с образованием гуманизированного гена Baff, причем замещение происходит в эндогенном локусе Baff мыши, причем гуманизированный ген Baff находится под контролем промотора Baff мыши в указанном эндогенном локусе Baff мыши и кодирует гуманизированный белок Baff, содержащий внеклеточную часть человеческого белка BAFF, кодируемую указанным геном BAFF человека, связанную с внутриклеточной частью мышиного белка Baff, кодируемой указанным геном Baff мыши.
10. Эмбрион мыши, полученный из ЭС клетки по п. 9.
11. Способ получения животного-грызуна, которое экспрессирует гуманизированный белок Baff из эндогенного локуса Baff, причем указанный способ предусматривает следующие стадии:
(a) замещение геномного сегмента эндогенного гена Baff грызуна в эндогенном локусе Baff в эмбриональной стволовой (ЭС) клетке грызуна на геномный фрагмент, содержащий экзоны 3-6 гена BAFF человека с образованием гуманизированного гена Baff в эндогенном локусе Baff грызуна, причем гуманизированный ген Baff находится под контролем промотора Baff грызуна в указанном эндогенном локусе Baff грызуна и кодирует гуманизированный белок Baff, содержащий внеклеточную часть человеческого белка BAFF, кодируемую геном BAFF человека, связанную с внутриклеточной частью белка Baff грызуна, кодируемой указанным геном Baff грызуна;
(b) получение модифицированной ЭС клетки грызуна, содержащей указанный гуманизированный ген Baff в эндогенном локусе Baff грызуна; и
(c) получение животного-грызуна с использованием модифицированной ЭС клетки (b).
12. Способ по п. 11, при котором животное-грызун представляет собой мышь или крысу.
13. Способ по п. 11 или 12, при котором животное-грызун обнаруживаемым образом не экспрессирует полноразмерный эндогенный белок Baff грызуна.
14. Способ трансплантации клеток человека мыши, причем способ предусматривает следующие стадии:
(a) обеспечение мыши, геном которой содержит замещение экзонов 3-6 и части экзона 7 эндогенного гена Baff мыши на человеческий геномный сегмент, содержащий экзоны 3-6 гена BAFF человека с образованием гуманизированного гена Baff, причем замещение происходит в эндогенном локусе Baff мыши, причем гуманизированный ген Baff находится под контролем промотора Baff мыши в указанном эндогенном локусе Baff мыши и кодирует гуманизированный белок Baff, содержащий внеклеточную часть человеческого белка BAFF, кодируемую указанным геном BAFF человека, связанную с внутриклеточной частью мышиного белка Baff, кодируемого указанным геном Baff мыши; и
(b) трансплантацию одной или нескольких человеческих клеток мыши.
15. Способ по п. 14, при котором человеческие клетки представляют собой человеческие гемопоэтические стволовые клетки.
