Животные, отличные от человека, содержащие гуманизированный локус asgr 1 - RU2020101936A
Код документа: RU2020101936A
Формула
1. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, содержащие генетически модифицированный эндогенный локус Asgr1, кодирующий модифицированный белок Asgr1, где модифицированный белок Asgr1 содержит цитоплазматический домен, трансмембранный домен и внеклеточный домен, и при этом весь внеклеточный домен или его часть кодируется сегментом эндогенного локуса Asgr1, который был удален и заменен ортологичной последовательностью ASGR1 человека, и где животное, отличное от человека, экспрессирует модифицированный белок Asgr1.
2. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.1, где внеклеточный домен содержит суперспиральный домен и лектиновый домен С-типа, и весь лектиновый домен С-типа или его часть кодируется сегментом эндогенного локуса Asgr1, который был удален и заменен ортологичной последовательностью ASGR1 человека.
3. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.2, где лектиновый домен С-типа представляет собой лектиновый домен С-типа ASGR1 человека.
4. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.2 или 3, где лектиновый домен С-типа содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 28.
5. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.1, где внеклеточный домен содержит суперспиральный домен и лектиновый домен С-типа, и весь суперспиральный домен или его часть кодируется сегментом эндогенного локуса Asgr1, который был удален и заменен ортологичной последовательностью ASGR1 человека.
6. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.5, где суперспиральный домен представляет собой суперспиральный домен ASGR1 человека.
7. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.5 или 6, где суперспиральный домен содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 27.
8. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по любому из пп.2–7, где как весь суперспиральный домен, так и весь лектиновый домен С-типа или часть и того и другого кодируются сегментом эндогенного локуса Asgr1, который был удален и заменен ортологичной последовательностью ASGR1 человека.
9. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.8, где лектиновый домен С-типа представляет собой лектиновый домен С-типа ASGR1 человека, и суперспиральный домен представляет собой лектиновый домен С-типа ASGR1 человека.
10. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.8 или 9, где лектиновый домен С-типа содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 28, и суперспиральный домен содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 27.
11. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по любому из предыдущих пунктов, где ортологичная последовательность ASGR1 человека содержит экзоны 3–8 гена ASGR1 человека.
12. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.11, где ортологичная последовательность ASGR1 человека кодирует сегмент белка ASGR1, содержащий последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 31.
13. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по любому из предыдущих пунктов, где весь цитоплазматический домен или его часть кодируется эндогенной последовательностью Asgr1 животного, отличного от человека.
14. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по любому из предыдущих пунктов, где весь трансмембранный домен или его часть кодируется эндогенной последовательностью Asgr1 животного, отличного от человека.
15. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.13 или 14, где как весь цитоплазматический домен, так и весь трансмембранный домен или часть и того и другого кодируются эндогенной последовательностью Asgr1 животного, отличного от человека.
16. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по любому из предыдущих пунктов, где животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, являются гетерозиготными по генетически модифицированному эндогенному локусу Asgr1.
17. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по любому из пп.1–15, где животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, являются гомозиготными по генетически модифицированному эндогенному локусу Asgr1.
18. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по любому из предыдущих пунктов, где животное, отличное от человека, представляет собой млекопитающее, или геном животного, отличного от человека, представляет собой геном млекопитающего.
19. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п. 18, где животное, отличное от человека, представляет собой грызуна, или геном животного, отличного от человека, представляет собой геном грызуна.
20. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.19, где животное, отличное от человека, представляет собой крысу или мышь, или где геном животного, отличного от человека, представляет собой геном крысы или геном мыши.
21. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.20, где животное, отличное от человека, представляет собой мышь, или геном животного, отличного от человека, представляет собой геном мыши.
22. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.21, где весь цитоплазматический домен или его часть кодируется эндогенной последовательностью Asgr1 мыши.
23. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.22, где цитоплазматический домен содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 29.
24. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.21, где весь трансмембранный домен или его часть кодируется эндогенной последовательностью Asgr1 мыши.
25. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.24, где трансмембранный домен содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 30.
26. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по любому из пп.22–25, где как весь цитоплазматический домен, так и весь трансмембранный домен или часть и того и другого кодируются эндогенной последовательностью Asgr1 мыши.
27. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.26, где цитоплазматический домен содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 29, и трансмембранный домен содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 30.
28. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по любому из пп.21–27, где внеклеточный домен содержит суперспиральный домен и лектиновый домен С-типа, и где как весь суперспиральный домен, так и весь лектиновый домен С-типа или часть и того и другого кодируются сегментом эндогенного локуса Asgr1, который был удален и заменен ортологичной последовательностью ASGR1 человека, и при этом как весь цитоплазматический домен, так и весь трансмембранный домен или часть и того и другого кодируются эндогенной последовательностью Asgr1 мыши.
29. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по любому из пп. 21–28, где лектиновый домен С-типа представляет собой лектиновый домен С-типа ASGR1 человека, и суперспиральный домен представляет собой суперспиральный домен ASGR1 человека, цитоплазматический домен представляет собой цитоплазматический домен Asgr1 мыши, а трансмембранный домен представляет собой трансмембранный домен Asgr1 мыши.
30. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.28 или 29, где лектиновый домен С-типа содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 28, суперспиральный домен содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 27, цитоплазматический домен содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 29, и трансмембранный домен содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 30.
31. Животное, отличное от человека, или геном животного, отличного от человека, по п.30, где модифицированный белок Asgr1 содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 3.
32. Способ оценки доставки терапевтического комплекса в печень посредством интернализации, опосредованной ASGR1 человека, in vivo, предусматривающий:
(а) введение терапевтического комплекса животному, отличному от человека, по любому из пп.1–31, где терапевтический комплекс содержит терапевтическую молекулу и антигенсвязывающий белок или лиганд, которые специфически связывают ASGR1 человека; и
(b) оценку доставки терапевтической молекулы в печень животного, отличного от человека.
33. Способ по п.32, где терапевтическая молекула представляет собой лизосомальный заместительный белок или фермент или нуклеиновую кислоту, кодирующую лизосомальный заместительный белок или фермент, и стадия (b) предусматривает оценку присутствия или активности лизосомального заместительного белка или фермента в печени животного, отличного от человека.
34. Способ по п.32, где терапевтическая молекула представляет собой нуклеиновую кислоту, кодирующую терапевтический секретируемый белок, и стадия (b) предусматривает оценку уровней в сыворотке крови или активности терапевтического секретируемого белка у животного, отличного от человека.
35. Способ оценки эффективности терапевтической молекулы, целенаправленно воздействующей на поверхностный белок клеток печени или на растворимый белок в печени, в отношении интернализации посредством ASGR1 человека in vivo, предусматривающий (а) введение терапевтической молекулы животному, отличному от человека, по любому из пп.1–31, где терапевтическая молекула содержит биспецифический антигенсвязывающий белок, который специфически связывает поверхностный белок клеток печени или растворимый белок и специфически связывает ASGR1 человека; и (b) оценку уровней на клеточной поверхности или активности поверхностного белка клеток печени в печени животного, отличного от человека, или оценку экспрессии или активности растворимого белка в печени животного, отличного от человека.
36. Клетка животного, отличного от человека, содержащая генетически модифицированный эндогенный локус Asgr1, кодирующий модифицированный белок Asgr1, где модифицированный белок Asgr1 содержит цитоплазматический домен, трансмембранный домен и внеклеточный домен, и при этом весь внеклеточный домен или его часть кодируется сегментом эндогенного локуса Asgr1, который был удален и заменен ортологичной последовательностью ASGR1 человека.
37. Клетка животного, отличного от человека, по п.36, где клетка животного, отличного от человека, представляет собой гепатоцит.
38. Клетка животного, отличного от человека, по п.36, где клетка животного, отличного от человека, представляет собой плюрипотентную клетку.
39. Клетка животного, отличного от человека, по п.38, где клетка животного, отличного от человека, представляет собой ES-клетку.
40. Клетка животного, отличного от человека, по п.38, где клетка животного, отличного от человека, представляет собой клетку зародышевой линии.
41. Композиция, содержащая клетку животного, отличного от человека, по любому из пп.36–40.
42. Нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 и их комбинацию.
43. Нуклеиновая кислота по п.42, содержащая последовательность, изложенную под SEQ ID NO:24.
44. Нуклеиновая кислота по п.42 или 43, характеризующаяся тем, что она кодирует аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:24.
