Мыши, у которых вырабатываются связывающие белки, содержащие vl-домены - RU2017106292A

1. Не относящееся к человеку животное, содержащее в своей зародышевой линии локус гибридной цепи иммуноглобулина, содержащий по меньшей мере один нереаранжированный генный сегмент вариабельной области (V_L) легкой цепи, по меньшей мере один нереаранжированный соединяющий (J_L) генный сегмент легкой цепи и константную область тяжелой цепи иммуноглобулина, способную связываться с константной областью легкой цепи,

причем каждый из нереаранжированных генных сегментов V_L и J_L содержат сигнальные последовательности рекомбинации, которые обеспечивают возможность рекомбинации нереаранжированных V_L и J_L генных сегментов таким образом, что не относящееся к человеку животное дополнительно содержит реаранжированный гибридный ген иммуноглобулина, содержащий нуклеотидную последовательность вариабельной области легкой цепи (V_L/J_L), функционально связанную с константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина.

2. Не относящееся к человеку животное по п. 1, в котором по меньшей мере один нереаранжированный V_L генный сегмент легкой цепи выбран из нереаранжированного генного сегмента κ человека, нереаранжированного генного сегмента λ человека и их комбинации.

3. Не относящееся к человеку животное по п. 1, в котором константная область тяжелой цепи содержит ген, выбранный из группы, состоящей из IgM, IgD, IgG, IgE, IgA и их комбинации.

4. Не относящееся к человеку животное по п. 1, где по меньшей мере один нереаранжированный V_L генный сегмент легкой цепи и по меньшей мере один нереаранжированный J_L генный сегмент, соответственно, заменяют эндогенный V_H генный сегмент тяжелой цепи не относящегося к человеку животного и эндогенный J_H генный сегмент тяжелой цепи не относящегося к человеку животного в эндогенном локусе тяжелой цепи не относящегося к человеку животного.

5. Не относящееся к человеку животное по п. 4, в котором по меньшей мере один нереаранжированный V_L генный сегмент легкой цепи заменяет все или по существу все функциональные V_H генные сегменты тяжелой цепи не относящегося к человеку животного в эндогенном локусе тяжелой цепи не относящегося к человеку животного.

6. Не относящееся к человеку животное по п. 4, в котором по меньшей мере один нереаранжированный J_L генный сегмент заменяет все или по существу все функциональные J_L генные сегменты тяжелой цепи не относящегося к человеку животного в эндогенном локусе тяжелой цепи не относящегося к человеку животного.

7. Не относящееся к человеку животное по п. 6, в котором по меньшей мере один нереаранжированный V_L генный сегмент легкой цепи и нереаранжированный J_L генный сегмент легкой цепи являются функционально связанными, и у не относящегося к человеку животного отсутствует функциональный D_H генный сегмент тяжелой цепи между по меньшей мере одним нереаранжированным V_L генным сегментом легкой цепи и по меньшей мере одним нереаранжированным J_L генным сегментом легкой цепи.

8. Не относящееся к человеку животное по п. 7, в котором по меньшей мере один нереаранжированный V_L генный сегмент легкой цепи представляет собой нереаранжированный генный сегмент κ человека, и нереаранжированный J_L генный сегмент легкой цепи представляет собой нереаранжированный генный сегмент κ человека.

9. Не относящееся к человеку животное по п. 1, содержащее В-клетку, которая содержит в своем геноме реаранжированный гибридный ген иммуноглобулина, и при этом реаранжированный гибридный ген содержит реаранжированную вариабельную область κ человека, функционально связанную с геном константной области не относящегося к человеку животного.

10. Не относящееся к человеку животное по п. 1, в котором реаранжированный гибридный ген иммуноглобулина находится в эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина не относящегося к человеку животного.

11. Не относящееся к человеку животное по п. 1, дополнительно содержащее в своей зародышевой линии нереаранжированный V_L генный сегмент легкой цепи человека и нереаранжированный соединяющий J_L генный сегмент легкой цепи человека, функционально связанные с геном константной области легкой цепи.

12. Не относящееся к человеку животное по п. 11, в котором ген константной области легкой цепи представляет собой ген константной области легкой цепи не относящегося к человеку животного.

13. Не относящееся к человеку животное по п. 12, в котором нереаранжированный V_L генный сегмент легкой цепи человека представляет собой нереаранжированный V_L генный сегмент κ человека.

14. Не относящееся к человеку животное по п. 13, в котором ген константной области легкой цепи не относящегося к человеку животного представляет собой ген константной области κ легкой цепи не относящегося к человеку животного.

15. Не относящееся к человеку животное, содержащее гибридный иммуноглобулин, содержащий первый полипептид, содержащий первую последовательность вариабельной области легкой цепи человека, слитую с константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина, и второй полипептид, содержащий вторую вариабельную область легкой цепи человека, слитую с константной областью легкой цепи иммуноглобулина.

16. Не относящееся к человеку животное по п. 15, в котором первая последовательность вариабельной области легкой цепи человека содержит последовательность вариабельной области κ человека, и вторая вариабельная область легкой цепи человека выбрана из вариабельной области κ человека и вариабельной области λ человека.

17. Не относящееся к человеку животное по п. 16, в котором константная область тяжелой цепи иммуноглобулина выбрана из константной области тяжелой цепи человека и константной области тяжелой цепи не относящегося к человеку животного.

18. Не относящееся к человеку животное по п. 16, в котором константная область легкой цепи иммуноглобулина выбрана из константной области легкой цепи человека и константной области легкой цепи не относящегося к человеку животного.

19. Не относящееся к человеку животное по п. 16, в котором первый полипептид экспрессируется с модифицированного эндогенного локуса тяжелой цепи иммуноглобулина не относящегося к человеку животного в котором отсутствует функциональный эндогенный V генный сегмент тяжелой цепи.

20. Не относящееся к человеку животное по п. 19, в котором второй полипептид экспрессируется с модифицированного эндогенного локуса легкой цепи иммуноглобулина не относящегося к человеку животного в котором отсутствует функциональный эндогенный V генный сегмент легкой цепи.

21. Не относящееся к человеку животное, содержащее замену в зародышевой линии не относящегося к человеку животного в эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина не относящегося к человеку животного всех или по существу всех функциональных эндогенных генных сегментов вариабельной области (V_H) тяжелой цепи не относящегося к человеку животного по меньшей мере шестью или более нереаранжированными V_L генными сегментами легкой цепи человека и одним или несколькими нереаранжированными J_L генными сегментами легкой цепи человека, причем каждый из нереаранжированных V_L и J_L генных сегментов легкой цепи человека содержит сигнальные последовательности рекомбинации, которые обеспечивают возможность рекомбинации нереаранжированных V_L и J_L генных сегментов таким образом, чтобы Не относящееся к человеку животное, дополнительно содержало реаранжированный гибридный ген иммуноглобулина, содержащий нуклеотидную последовательность вариабельной области (V_L/J_L) легкой цепи, функционально связанную с константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина, причем Не относящееся к человеку животное, неспособно экспрессировать тяжелую цепь иммуноглобулина, полученную из V генного сегмента тяжелой цепи, и при этом не относящееся к человеку животное, содержит популяцию В-клеток селезенки (B220⁺/IgM⁺), размер которой составляет по меньшей мере приблизительно 75% от размера популяции В-клеток селезенки (B220⁺/IgM⁺) у не относящегося к человеку животного дикого типа.

22. Не относящееся к человеку животное по любому из предыдущих пунктов, которое представляет собой крысу.

23. Мышь, содержащая в геноме своей зародышевой линии модифицированный эндогенный мышиный локус тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащий замену всех нереаранжированных функциональных эндогенных мышиных V_H генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, всех нереаранжированных функциональных эндогенных мышиных обеспечивающих разнообразие D_H генных сегментов тяжелой цепи иммуноглобулина и всех нереаранжированных функциональных эндогенных мышиных соединяющих J_H генных сегментов тяжелой цепи иммуноглобулина множеством нереаранжированных функциональных генных сегментов вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека и всех пяти нереаранжированных функциональных соединяющих генных сегментов легкой цепи иммуноглобулина человека, причем нереаранжированные функциональные генные сегменты и все пять нереаранжированных функциональных являются функционально связанными с интактной эндогенной мышиной константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина в эндогенном мышином локусе тяжелой цепи иммуноглобулина,

причем множество нереаранжированных генных сегментов и пять нереаранжированных генных сегментов подвергаются реаранжировки в В-клетке во время развития В-клетки с образованием реаранжированной нуклеотидной последовательности вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанной с эндогенной мышиной константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина в эндогенном мышином локусе тяжелой цепи иммуноглобулина, и

причем мышь содержит В-клетку, которая дополнительно содержит полипептид, кодируемый нуклеотидной последовательностью реаранжированной вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанной с эндогенной мышиной константной области тяжелой цепи иммуноглобулина.

24. Мышь по п. 23, в которой мышиная эндогенная константная область тяжелой цепи иммуноглобулина содержит интактный эндогенный ген С_Н области.

25. Мышь по п. 23, в которой все функциональные эндогенные мышиные V_H, D_H и J_H генные сегменты заменены по меньшей мере 6 Vκ генными сегментами человека и пятью Jκ генными сегментами человека.

26. Мышь по п. 23, в которой все функциональные эндогенные мышиные V_H, D_H и J_H генные сегменты заменены по меньшей мере 16 Vκ генными сегментами человека и пятью Jκ генными сегментами человека.

27. Мышь по п. 23, в которой все функциональные эндогенные мышиные V_H, D_H и J_H генные сегменты заменены по меньшей мере 30 Vκ генными сегментами человека и пятью Jκ генными сегментами.

28. Мышь по п. 23, в которой все функциональные эндогенные мышиные V_H, D_H и J_H генные сегменты заменены по меньшей мере 40 Vκ генными сегментами человека и пятью Jκ генными сегментами.

29. Мышь по п. 23, причем мышь содержит В-клетку, которая содержит полипептид, кодируемый реаранжированной последовательностью вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанной с эндогенной мышиной константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина.

30. Мышь по п. 23, причем последовательность реаранжированного гена вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека содержит по меньшей мере одно добавление N.

31. Мышь по п. 23, причем мышь является гомозиготной или гетерозиготной по модифицированному локусу эндогенной тяжелой цепи иммуноглобулина.

32. Мышь по п. 23, причем В-клетка представляет собой пре-В-клетку, про-В-клетку, незрелую В-клетку, промежуточную В-клетку или зрелую В-клетку.

33. Мышь, содержащая в своей зародышевой линии первый нереаранжированный (V_K) вариабельный генный сегмент каппа легкой цепи человека и нереаранжированный J (J_K) генный сегмент каппа легкой цепи человека, функционально связанные с эндогенной мышиной константной областью тяжелой цепи в эндогенном мышином локусе тяжелой цепи, причем первый нереаранжированный V_K генный сегмент человека и нереаранжированный J_K генный сегмент человека замещают все функциональные эндогенные мышиные генные сегменты вариабельной области (V_H) тяжелой цепи, все функциональные эндогенные мышиные D_H генные сегменты и все функциональные эндогенные мышиные генные сегменты J (J_H) тяжелой цепи, причем первый нереаранжированный V_K генный сегмент человека и нереаранжированный J_K генный сегмент человека принимают участие в реаранжировании с образованием реаранжированной последовательности V_K/J_K, функционально связанной с эндогенной мышиной константной областью тяжелой цепи у мыши, и при этом мышь дополнительно содержит в своей зародышевой линии второй генный сегмент вариабельной области (V_L) легкой цепи человека и J (J_L) генный сегмент легкой цепи человека, функционально связанные с мышиным геном константной области легкой цепи.

34. Мышь по п. 33, содержащая В-клетку, которая содержит в своем геноме реаранжированную последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области каппа легкой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанную с эндогенной мышиной константной областью тяжелой цепи в эндогенном мышином локусе тяжелой цепи иммуноглобулина.

35. Мышь по п. 33, в которой второй VL генный сегмент человека представляет собой VK генный сегмент человека.

36. Мышь по п. 35, в которой ген константной области легкой цепи представляет собой ген константной области к легкой цепи.

37. Мышь по п. 35, в которой второй VL генный сегмент человека представляет собой генный сегмент человека.

38. Мышь по п. 37, в которой ген константной области легкой цепи представляет собой ген константной области к легкой цепи.

39. Мышь по п. 33, которая экспрессирует антигенсвязывающий белок, причем антигенсвязывающий белок содержит первый полипептид, содержащий первую вариабельную область каппа легкой цепи человека, слитую с мышиной константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина, и второй полипептид, содержащий вторую вариабельную область легкой цепи человека, слитую с мышиной константной областью легкой цепи иммуноглобулина.

40. Мышь по п. 39, в которой вторая вариабельная область легкой цепи человека выбрана из V_K вариабельной области человека и Vλ вариабельной области человека.

41. Мышь по п. 33, которая является гомозиготной или гетерозиготной по указанному эндогенному локусу тяжелой цепи, содержащий первый нереаранжированный V_K генный сегмент человека и нереаранжированный J_K генный сегмент человека, функционально связанные с эндогенной мышиной константной областью тяжелой цепи в эндогенном локусе мышиной тяжелой цепи, причем первый нереаранжированный V_K генный сегмент человека и нереаранжированный J_K генный сегмент человека заменяют все функциональные эндогенные мышиные генные сегменты V_H, D_H и J_H.

42. Применение не относящегося к человеку животного по любому из пп. 1-41 для получения гибридного иммуноглобулинового связывающего белка, который содержит вариабельный домен легкой цепи человека, функционально связанный с константной областью тяжелой цепи.

43. Применение не относящегося к человеку животного по любому из пп. 1-41 для получения антигенсвязывающего белка, содержащего (i) первый полипептид, содержащий первый вариабельный домен легкой цепи, слитый с константной областью тяжелой цепи не относящегося к человеку животного и (ii) второй полипептид, содержащий второй вариабельный домен легкой цепи, слитый с константной областью легкой цепи не относящегося к человеку животного.

44. Применение по п. 43, причем по меньшей мере первый вариабельный домен легкой цепи представляет собой вариабельный домен каппа легкой цепи.

45. Применение по п. 44, причем первый вариабельный домен легкой цепи представляет собой вариабельный домен каппа легкой цепи человека, и второй вариабельный домен легкой цепи представляет собой вариабельный домен легкой цепи человека.

46. Применение по п. 45, причем первый вариабельный домен каппа легкой цепи человека слит с мышиной константной областью тяжелая цепь иммуноглобулина, и причем второй вариабельный домен легкой цепи человека слит с мышиной константной областью легкой цепи иммуноглобулина.

47. Применение мыши по любому из пп. 33-41 для получения гибридомы или квадрогибридомы для получения антитела, которое определено в п. 46.

48. Применение не относящегося к человеку животного по любому из пп. 1-41 для получения биспецифического антитела.

49. Клетка или ткань, полученные из не относящегося к человеку животного по любому из пп. 1-41.

50. Клетка по п. 49, причем клетка выбрана из ES-клетки, В-клетки и гибридомы.

51. Выделенная мышиная клетка, причем клетка содержит модифицированный эндогенный мышиный локус тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащий замену всех нереаранжированных функциональных эндогенных мышиных генных сегментов вариабельной области V_H тяжелой цепи иммуноглобулина, всех нереаранжированных функциональных эндогенных мышиных обеспечивающих разнообразие D_H генных сегментов тяжелой цепи иммуноглобулина и всех нереаранжированных функциональных эндогенных мышиных соединяющих J_H генных сегментов тяжелой цепи иммуноглобулина множеством нереаранжированных функциональных генных сегментов вариабельной области Vκ легкой цепи иммуноглобулина человека и всеми пятью нереаранжированными функциональными соединяющими Jk генными сегментами легкой цепи иммуноглобулина, причем множество нереаранжированных функциональных генных сегментов и все пять нереаранжированных функциональных являются функционально связанными с интактной эндогенной мышиной константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина в эндогенном мышином локусе тяжелой цепи иммуноглобулина, при этом множество нереаранжированных генных сегментов и пять нереаранжированных генных сегментов способны к реаранжированию в В-клетке во время развития В-клетки с образованием реаранжированной нуклеотидной последовательности вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанной с эндогенной мышиной константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина в эндогенном мышином локусе тяжелой цепи иммуноглобулина.

52. Выделенная клетка по п. 51, причем клетка представляет собой эмбриональную стволовую клетку.

53. Мышь, полученная с использованием эмбриональной стволовой клетки по п. 52.

54. Клетка, выделенная из мыши по п. 23, причем клетка представляет собой В-клетку, которая дополнительно содержит полипептид, кодируемый реаранжированной нуклеотидной последовательностью вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанной с эндогенной мышиной константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина.

55. Гибридома, содержащая линию клеток миеломы, слитую с В-клеткой по п. 54, причем гибридома продуцирует полипептид, кодируемый реаранжированной нуклеотидной последовательностью вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанной с эндогенной мышиной константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина.

56. Мышиная клетка, содержащая в своем геноме первый нереаранжированный V_K генный сегмент человека и нереаранжированный J_K генный сегмент человека, функционально связанные с эндогенной константной областью тяжелой цепи в эндогенном мышином локусе тяжелой цепи, причем первый нереаранжированный V_K генный сегмент человека и нереаранжированный J_K генный сегмент человека заменяют все функциональные эндогенные V_H, D_H и J_H генные сегменты, и при этом мышиная клетка дополнительно содержит второй V_L генный сегмент и J_L генный сегмент человека, функционально связанные с мышиным геном константной области легкой цепи.

57. Клетка по п. 56, которая получена из мыши по любому из пп. 33-41.

58. Клетка по п. 56 или 57, причем клетка представляет собой ES-клетку.

59. Ткань, полученная из мыши по любому из пп. 33-41, содержащая клетки, которые определены в п. 56.

60. Ткань по п. 59, которая содержит В-клетку, содержащую реаранжированную последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области каппа легкой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанную с мышиной константной областью тяжелой цепи в эндогенном мышином локусе тяжелой цепи, и реаранжированную последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанную с мышиным геном константной области легкой цепи.

61. Мышиный эмбрион, содержащий клетку, которая содержит в своем геноме первый нереаранжированный V_K генный сегмент человека и нереаранжированный J_K генный сегмент человека, функционально связанные с эндогенной константной областью тяжелой цепи в эндогенном мышином локусе тяжелой цепи, причем первый нереаранжированный V_K генный сегмент человека и нереаранжированный J_K генный сегмент человека заменяют все функциональные эндогенные V_H, D_H и J_H генные сегменты, и при этом клетка дополнительно содержит второй V_L генный сегмент человека и J_L генный сегмент человека, функционально связанные с мышиным геном константной области легкой цепи.

62. Антигенсвязывающий белок, содержащий гибридную цепь иммуноглобулина, содержащую вариабельный домен легкой цепи, функционально связанный с константной области тяжелой цепи, получают из не относящегося к человеку животного по любому из пп. 1-41 или получают в соответствии с применением по любому из пп. 42-48.

63. Антигенсвязывающий белок по п. 62, причем вариабельный домен легкой цепи представляет собой вариабельный домен легкой цепи человека.

64. Антигенсвязывающий белок по п. 62, причем вариабельный домен легкой цепи человека представляет собой вариабельный домен к легкой цепи человека.

65. Антигенсвязывающий белок по любому из пп. 62-64, дополнительно содержащий легкую цепь иммуноглобулина, содержащую вариабельный домен легкой цепи, функционально связанный с константной областью легкой цепи.

66. Антигенсвязывающий белок, получаемый из мыши по любому из пп. 33-41, причем антигенсвязывающий белок содержит вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина человека, слитый с мышиным константным доменом легкой цепи, и вариабельный домен каппа легкой цепи иммуноглобулина человека, слитый с мышиным константным доменом тяжелой цепи.

67. Способ получения антигенсвязывающего белка, предусматривающий воздействие на Не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-41 антигеном, представляющим интерес, и выделение из не относящегося к человеку животного VL домена человека, который специфически связывается с антигеном, представляющим интерес, с высокой аффинностью, или последовательности гена, кодирующей VL домен.

68. Способ по п. 67, причем последовательность гена представляет собой реаранжированную последовательность V(легкой)/J гена человека, слитую с нуклеотидной последовательностью, кодирующей СН область иммуноглобулина.

69. Способ по п. 67, дополнительно предусматривающий экспрессию нуклеотидной последовательности, содержащей реаранжированную последовательность V(легкой)/J гена человека, в подходящей клетке.

70. Способ по п. 67, дополнительно предусматривающий клонирование реаранжированной последовательности V(легкой)/J гена человека в рамку считывания с геном, кодирующим СН область человека, с образованием последовательности связывающего белка человека.

71. Способ по п. 60, дополнительно предусматривающий экспрессию последовательности связывающего белка человека в подходящей клетке.

72. Нуклеотид, содержащий последовательность гена, полученную в результате способа по любому из пп. 67, 68 или 66.

73. Антигенсвязывающий белок, полученный в соответствии с любым из способов 67-71.

74. Способ получения генетически модифицированного не относящегося к человеку животного по любому из пп. 1-41, предусматривающий вставку в эндогенный локус тяжелой цепи по меньшей мере одного нереаранжированного генного сегмента вариабельной области (V_L) легкой цепи и по меньшей мере одного нереаранжированного соединяющего (J_L) генного сегмента легкой цепи в функциональной связи с константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина, способных связываться с константной областью легкой цепи, причем каждый из нереаранжированных V_L и J_L генных сегментов содержит сигнальные последовательности рекомбинации, которые обеспечивают возможность рекомбинации нереаранжированных V_L и J_L генных сегментов таким образом, чтобы мышь дополнительно содержала реаранжированный гибридный ген иммуноглобулина, содержащий нуклеотидную последовательность вариабельной области (V_L/J_L) легкой цепи, функционально связанную с константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина.

75. Способ получения генетически модифицированной мыши по любому из пп. 23-32, предусматривающий замену всех нереаранжированных функциональных эндогенных мышиных V_H генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, всех нереаранжированных функциональных эндогенных мышиных обеспечивающих разнообразие D_H генных сегментов тяжелой цепи иммуноглобулина и всех нереаранжированных функциональных эндогенных мышиных соединяющих J_H генных сегментов тяжелой цепи иммуноглобулина множеством нереаранжированных функциональных генных сегментов вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина человека и всех пяти нереаранжированных функциональных соединяющих генных сегментов легкой цепи иммуноглобулина человека, причем нереаранжированные функциональные генные сегменты и все пять нереаранжированных функциональных являются функционально связанными с интактным эндогенным мышиным геном константной области тяжелой цепи иммуноглобулина в эндогенном мышином локусе тяжелой цепи иммуноглобулина.

76. Способ получения генетически модифицированной мыши по любому из пп. 33-41, предусматривающий замену в эндогенном локусе тяжелой цепи мыши всех функциональных V_H, D_H и J_H генных сегментов мыши первым нереаранжированным V_K генным сегментом человека и нереаранжированным J_K генным сегментом человека, чтобы таким образом обеспечивая функциональную связь первого нереаранжированного V_K генного сегмента человека и нереаранжированного J_K генного сегмента человека с эндогенной константной областью тяжелой цепи, а также вставку в зародышевую линию мыши второго V_L генного сегмента человека и J_L генного сегмента человека, функционально связанного с мышиной константной областью легкой цепи.

77. Антигенсвязывающий белок, содержащий:

(i) первый полипептид, содержащий первый вариабельный домен (VL1) легкой цепи, слитый с первой константной областью (СН) тяжелой цепи иммуноглобулина; и

(ii) второй полипептид, содержащий второй вариабельный домен (VL2) легкой цепи, слитый с константной областью (CL) легкой цепи;

причем VL1 и VL2 объединяются, специфически связываясь с антигеном, представляющим интерес.

78. Антигенсвязывающий белок по п. 77, в котором VL1 и VL2 не являются идентичными.

79. Антигенсвязывающий белок по п. 77, в котором VL1 и VL2 являются человеческими.

80. Антигенсвязывающий белок по п. 77, в котором VL1 и VL2 независимо выбраны из и Vλ доменов.

81. Антигенсвязывающий белок по п. 80, в котором VL1 представляет собой домен человека.

82. Антигенсвязывающий белок п. 77, в котором СН представляет собой мышиный СН домен, и CL представляет собой мышиный CL домен.

83. Антигенсвязывающий белок по п. 77, в котором СН представляет собой СН человека, и CL представляет собой CL человека.

84. Антигенсвязывающий белок по п. 77, в котором CL представляет собой человека.

85. Антигенсвязывающий белок по п. 77, в котором СН содержит от N-конца к С-концу СН1 домен, шарнирную область, СН2 домен и СН3 домен.

86. Антигенсвязывающий белок по п. 77, в котором СН является изотипом, выбранным из группы, состоящей из IgM, IgD, IgG, IgA и IgE.

87. Антигенсвязывающий белок по п. 86, в котором изотип представляет собой IgG, выбранный из группы, состоящей из IgG1, IgG2A, IgG2b, IgG2C, IgG3 и IgG4.

88. Антигенсвязывающий белок по п. 87, в котором изотип выбран из IgG1, IgG2 и IgG4.

89. Антигенсвязывающий белок по п. 88, в котором IgG СН3 домен содержит модификацию, которая снижает или исключает связывание IgG СН3 с белком А.

90. Антигенсвязывающий белок по п. 77, в котором ни VL1, ни VL2 содержит аминокислотную последовательность, полученную из DH генного сегмента.

91. Антигенсвязывающий белок по п. 77, в котором VL1 кодируется последовательностью, которая содержит:

(А) количество соматических гипермутаций, которое от приблизительно 1,5-кратно до приблизительно 5-кратно выше или больше, чем количество соматических гипермутаций, присутствующих в VL2; и/или

(b) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 или более N добавлений.

92. Антигенсвязывающий белок по п. 77, дополнительно содержащий

(i) третий полипептид, содержащий третий вариабельный домен (VL3) легкой цепи, слитый со второй константной областью (СН) тяжелой цепи иммуноглобулина; и

(ii) четвертый полипептид, содержащий четвертый вариабельный домен (VL4) легкой цепи, слитый со второй константной областью (CL) легкой цепи иммуноглобулин;

93. Антигенсвязывающий белок по п. 92, в котором (a) VL1 и VL3 являются идентичными, и/или (b) VL2 и VL4 являются идентичными.

94. Антигенсвязывающий белок по любому из пп. 77-93, в котором антигенсвязывающий белок является биспецифическим.

95. Антигенсвязывающий белок по п. 94, в котором первая и вторая константные области тяжелой цепи иммуноглобулина представляют собой один и тот же изотип, но отличаются тем, что одна из первой или второй константных областей тяжелой цепи иммуноглобулина неспособна связываться с белком А по сравнению с другой тяжелой цепью иммуноглобулина, причем изотип представляет собой IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.

96. Антигенсвязывающий белок по п. 77, в котором СН представляет собой мышиный СН, и CL представляет собой мышиный .