Гуманизированные грызуны, которые экспрессируют тяжелые цепи, содержащие домены vl - RU2018122695A
Код документа: RU2018122695A
Формула
1. Способ получения антитела, которое связывается с представляющим интерес антигеном, причем способ предусматривает:
(a) получение клетки млекопитающего, сконструированной для экспрессии антитела, которое является специфическим в отношении представляющего интерес антигена, причем антитело содержит две тяжелые цепи иммуноглобулина и две легкие цепи иммуноглобулина, причем каждая из тяжелых цепей иммуноглобулина включает вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина человека и константный домен тяжелой цепи иммуноглобулина, причем каждый из вариабельных доменов легкой цепи иммуноглобулина человека в пределах тяжелых цепей иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность, идентичную аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина человека тяжелой цепи иммуноглобулина антитела, экспрессированного в B-клетке генетически модифицированного отличного от человека животного, которое содержит в своем геноме:
(i) вставку одного или нескольких генных сегментов VL человека и одного или нескольких генных сегментов JL человека выше не относящейся к человеку константной области легкой цепи иммуноглобулина,
(ii) вставку одного или нескольких генных сегментов VL человека и одного или нескольких генных сегментов JL человека выше не относящейся к человеку константной области тяжелой цепи иммуноглобулина, и
(iii) эктопическую нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, причем белок ADAM6 или его функциональный фрагмент экспрессируется из эктопической последовательности нуклеиновой кислоты ADAM6.
2. Способ по п. 1, при котором не относящаяся к человеку константная область тяжелой цепи иммуноглобулина согласно (ii) представляет собой константную область тяжелой цепи иммуноглобулина грызуна.
3. Способ по п. 1 или 2, при котором не относящаяся к человеку константная область тяжелой цепи иммуноглобулина согласно (ii) представляет собой константную область тяжелой цепи иммуноглобулина мыши.
4. Способ по п. 1 или 2, при котором константный домен тяжелой цепи иммуноглобулина антитела согласно (a) представляет собой константный домен тяжелой цепи иммуноглобулина человека.
5. Способ по п. 1 или 2, при котором константный домен тяжелой цепи иммуноглобулина антитела согласно (a) представляет собой константный домен тяжелой цепи IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека.
6. Способ по п. 1 или 2, при котором константный домен тяжелой цепи иммуноглобулина человека антитела согласно (a) включает CH1, шарнир, CH2, CH3, CH4 или их комбинацию.
7. Способ по п. 1 или 2, при котором один или несколько генных сегментов VL человека и один или несколько генных сегментов JL человека согласно (ii) представляют собой один или несколько генных сегментов Vλ человека и один или несколько генных сегментов Jλ человека.
8. Способ по п. 1 или 2, при котором один или несколько генных сегментов VL человека и один или несколько генных сегментов JL человека согласно (ii) представляют собой один или несколько генных сегментов Vκ человека и один или несколько генных сегментов Jκ человека.
9. Способ по п. 1 или 2, при котором каждая из иммуноглобулиновых легких цепей антитела согласно (a) включает вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина человека и константный домен легкой цепи иммуноглобулина.
10. Способ по п. 9, при котором константный домен легкой цепи иммуноглобулина представляет собой константный домен легкой цепи иммуноглобулина человека.
11. Способ по п. 1 или 2, при котором один или несколько генных сегментов VL человека и один или несколько генных сегментов JL человека согласно (i) представляют собой один или несколько генных сегментов Vλ человека и один или несколько генных сегментов Jλ человека.
12. Способ по п. 1 или 2, при котором один или несколько генных сегментов VL человека и один или несколько генных сегментов JL человека согласно (i) представляют собой один или несколько генных сегментов Vκ человека и один или несколько генных сегментов Jκ человека.
13. Способ по п. 1 или 2, при котором не относящаяся к человеку константная область легкой цепи иммуноглобулина согласно (i) представляет собой константную область легкой цепи иммуноглобулина грызуна.
14. Способ по п. 1 или 2, при котором не относящаяся к человеку константная область легкой цепи иммуноглобулина согласно (i) представляет собой константную область легкой цепи иммуноглобулина мыши.
15. Способ по п. 14, при котором не относящаяся к человеку константная область легкой цепи иммуноглобулина согласно (i) представляет собой Cκ мыши.
16. Способ по п. 1 или 2, при котором эктопическая нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент согласно (iii), присутствует в пределах генных сегментов иммуноглобулина.
17. Способ по п. 1 или 2, при котором генетически модифицированное отличное от человека животное содержит один или несколько эндогенных генных сегментов VL иммуноглобулина и/или один или несколько эндогенных генных сегментов JL иммуноглобулина, которые являются неспособными к реаранжировке для образования домена VL иммуноглобулина у генетически модифицированного отличного от человека животного.
18. Способ по п. 1 или 2, при котором генетически модифицированное отличное от человека животное содержит делецию или замещение одного или нескольких эндогенных генных сегментов тяжелой цепи иммуноглобулина.
19. Способ по п. 1 или 2, при котором генетически модифицированное отличное от человека животное содержит один или несколько эндогенных генных сегментов VH, один или несколько эндогенных генных сегментов DH и один или несколько эндогенных генных сегментов JH, причем эндогенные генные сегменты VH, генные сегменты DH и генные сегменты JH являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированного домена VH иммуноглобулина у генетически модифицированного отличного от человека животного.
20. Способ по п. 1 или 2, при котором генетически модифицированное отличное от человека животное содержит делецию эндогенного гена ADAM6.
21. Способ по п. 1 или 2, при котором генетически модифицированное отличное от человека животное представляет собой грызуна.
22. Способ по п. 1 или 2, при котором генетически модифицированное отличное от человека животное представляет собой крысу.
23. Способ по п. 1 или 2, при котором клетку млекопитающего выбирают из группы, состоящей из клетки HeLa, клетки DU145, клетки Lncap, клетки MCF-7, клетки MDA-MB-438, клетки PC3, клетки T47D, клетки THP-1, клетки U87, клетки SHSY5Y, клетки Saos-2, клетки Vero, клетки CHO, клетки GH3, клетки PC12, ретинальной клетки человека и клетки MC3T3.
24. Способ по п. 1 или 2, причем способ дополнительно предусматривает:
(a) воздействие на генетически модифицированное отличное от человека животное представляющего интерес антигена;
(b) выделение по меньшей мере одного B-лимфоцита генетически модифицированного отличного от человека животного, причем по меньшей мере один B-лимфоцит экспрессирует антитело, которое связывается с представляющим интерес антигеном, причем экспрессированное антитело включает вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанный с не относящимся к человеку константным доменом тяжелой цепи иммуноглобулина;
(c) идентификацию последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина человека;
(d) слияние последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина человека, с последовательностью нуклеиновой кислоты, которая кодирует константный домен тяжелой цепи иммуноглобулина человека; и
(e) введение слитой нуклеиновой кислоты в клетку млекопитающего, тем самым создавая клетку млекопитающего, сконструированную для экспрессии антитела, которое является специфическим в отношении представляющего интерес антигена.
25. Способ по п. 1 или 2, причем способ дополнительно предусматривает выделение экспрессированных тяжелых цепей иммуноглобулина и легких цепей иммуноглобулина из клетки млекопитающего.
