Животные, отличные от человека, имеющие мутантный ген кинурениназы - RU2018130010A
Код документа: RU2018130010A
Формула
1. Грызун, геном которого содержит мутантный ген кинурениназы (Kynu), при этом мутантный ген Kynu содержит одну или более точечных мутаций в экзоне три и кодирует полипептид Kynu, имеющий замену D93E.
2. Грызун по п. 1, где мутантный ген Kynu содержит экзон три, который содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 42, или кодирует полипептид Kynu, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41.
3. Грызун по п. 1 или 2, где геном грызуна дополнительно содержит вставку нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, где нуклеиновая кислота содержит один или более человеческих VH-сегментов, один или более человеческих DH-сегментов и один или более человеческих JH-сегментов и функционально связана c нуклеиновой кислотой, кодирующей константную область тяжелой цепи иммуноглобулина.
4. Грызун по п. 3, где нуклеиновая кислота, кодирующая константную область тяжелой цепи иммуноглобулина, представляет собой нуклеиновую кислоту, кодирующую константную область тяжелой цепи иммуноглобулина грызуна, которая необязательно представляет собой эндогенную константную область тяжелой цепи иммуноглобулина грызуна.
5. Грызун по любому из предыдущих пунктов, где геном грызуна дополнительно содержит вставку молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельную область легкой цепи человеческого иммуноглобулина, где нуклеиновая кислота содержит один или более человеческих VL-сегментов и один или более человеческих JL-сегментов и функционально связана c нуклеиновой кислотой, кодирующей константную область легкой цепи иммуноглобулина.
6. Грызун по п. 5, где нуклеиновая кислота, кодирующая константную область легкой цепи иммуноглобулина, представляет собой нуклеиновую кислоту, кодирующую константную область легкой цепи иммуноглобулина грызуна, которая необязательно представляет собой эндогенную константную область легкой цепи иммуноглобулина грызуна.
7. Грызун по п. 5 или 6, где человеческие VL- и JL-сегменты представляют собой человеческие Vκ- и Jκ-сегменты и встроены в эндогенный локус легкой κ-цепи, функционально связанны с сегментом гена Cκ грызуна или, где человеческие VL- и JL-сегменты представляют собой человеческие Vλ- и Jλ-сегменты и встроены в эндогенный локус легкой λ-цепи, функционально связанны с сегментом гена Cλ грызуна.
8. Грызун по любому из предыдущих пунктов, где грызун является гомозиготным по мутантному гену Kynu.
9. Грызун по любому из предыдущих пунктов, где грызун представляет собой крысу или мышь.
10. Выделенные клетка или ткань грызуна, геном которого содержит мутантный ген кинурениназы (Kynu), при этом мутантный ген Kynu содержит одну или более точечных мутаций в экзоне три и кодирует полипептид Kynu, имеющий замену D93E.
11. Иммортализированная клетка, полученная из выделенной клетки грызуна по п. 10.
12. Выделенные клетка или ткань грызуна, где клетка грызуна представляет собой эмбриональную стволовую клетку грызуна.
13. Эмбрион грызуна, содержащий выделенную клетку грызуна по п. 12.
14. Способ получения грызуна, предусматривающий
модифицирование генома грызунам таким образом, что модифицированный геном содержит мутантный ген Kynu, который кодирует полипептид Kynu, имеющий замену D93E, и
получение грызуна, содержащего модифицированный геном грызуна.
15. Способ по п.14, где геном грызуна модифицируют способом, предусматривающим:
(a) введение нуклеиновой кислоты в эмбриональную стволовую клетку грызуна, так что экзон три эндогенного гена Kynu грызуна в эндогенном локусе Kynu грызуна подвергают мутации с тем, чтобы он кодировал полипептид Kynu, который содержит замену D93E, при этом нуклеиновая кислота содержит полинуклеотид, гомологичный эндогенному локусу Kynu грызуна; и
(b) получение эмбриональной стволовой клетки грызуна из (a) содержащей модифицированный геном.
16. Способ по п. 14 или 15, где эмбриональная стволовая клетка грызуна из (a) имеет геном, который предусматривает:
(i) вставку нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, где нуклеиновая кислота содержит один или более человеческих VH-сегментов, один или более человеческих DH-сегментов и один или более человеческих JH-сегментов, и функционально связана c нуклеиновой кислотой, кодирующей константную область тяжелой цепи иммуноглобулина, и/или
(ii) вставку нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельную область легкой цепи человеческого иммуноглобулина, где нуклеиновая кислота содержит один или более человеческих VL-сегментов и один или более человеческих JL-сегментов и функционально связана c нуклеиновой кислотой, кодирующей константную область легкой цепи иммуноглобулина.
17. Способ по п. 14 или 15, где способ дополнительно предусматривает скрещивание грызуна, полученного на (с), геном которого содержит мутантный ген Kynu, который кодирует полипептид Kynu, имеющий замену D93E, со вторым грызуном, при этом второй грызун имеет геном, содержащий:
(i) вставку нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельные области тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, где нуклеиновая кислота содержит один или более человеческих VH-сегментов, один или более человеческих DH-сегментов и один или более человеческих JH-сегментов и функционально связана c нуклеиновой кислотой, кодирующей константную область тяжелой цепи иммуноглобулина, и/или
(ii) вставку нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельные области легкой цепи человеческого иммуноглобулина, где нуклеиновая кислота содержит один или более человеческих VL-сегментов и один или более человеческих JL-сегментов, функционально связана c нуклеиновой кислотой, кодирующей константную область легкой цепи иммуноглобулина.
18. Способ по п. 16 или 17, где константная область тяжелой цепи иммуноглобулина представляет собой константную область тяжелой цепи иммуноглобулина грызуна, необязательно эндогенную константную область тяжелой цепи иммуноглобулина грызуна и/или где константная область легкой цепи иммуноглобулина представляет собой константную область легкой цепи иммуноглобулина грызуна, необязательно эндогенную константную область легкой цепи иммуноглобулина грызуна.
19. Способ по любому из пп. 16-18, где человеческие VL- и JL-сегменты представляют собой человеческие Vκ- и Jκ-сегменты, и их встраивают в эндогенный локус легкой κ- цепи в функциональной связи с сегментом гена Cκ грызуна или, где человеческие VL- и JL-сегменты представляют собой человеческие Vλ- и Jλ-сегменты, и их встраивают в эндогенный локус легкой λ- цепи в функциональной связи с сегментом гена Cλ грызуна.
20. Способ по любому из пп. 14-19, где грызун представляет собой крысу или мышь.
21. Способ получения антитела от грызуна, при этом способ предусматривает стадии:
(a) иммунизации грызуна по пп. 1-13 и
(b) выделения антитела из грызуна, клетки грызуна, или клеточной линии гибридомы полученной с использованием клеток грызуна, где антитело связывает антиген.
22. Способ по п. 21, где антиген представляет собой или содержит пептид проксимальной внешней области мембраны (MPER) gp41 HIV-1 (SEQ ID NO:43).
23. Способ по п. 21, где антиген представляет собой или содержит ELLELDKWAS (SEQ ID NO:40).
