Слитые белки, полученные трансгенным способом - RU2002110121A

Реферат

1. Способ получения трансгенного слитого белка, предусматривающий получение трансгенного животного, которое содержит трансген, который обеспечивает экспрессию слитого белка; обеспечение экспрессии трансгена; и выделение слитого белка из молока трансгенного животного.

2. Способ по п.1, где слитый белок включает в себя иммуноглобулиновую субъединицу и фермент.

3. Способ по п.1, где слитый белок включает в себя первый член, слитый со вторым членом, и первый член включает в себя субъединицу распознающей мишень молекулы, а второй член кодирует клеточный токсин.

4. Способ по п.1, где слитый белок включает в себя Ig-субъединицу, специфичную по отношению к опухолевому антигену.

5. Способ по п.4, где опухолевый антиген выбран из группы, состоящей из карциноэмбрионального антигена (СЕА), рецептора трансферрина, TAG-27, рецептора эпидермального фактора роста.

6. Способ по п.1, где слитый белок содержит РНКазу.

7. Способ по п.6, где РНКазой является РНКаза А.

8. Способ по п.1, где слитый белок содержит ангиогенин.

9. Способ по п.1, где слитый белок содержит фермент карбоксипептидазу В.

10. Способ по п.1, где слитый белок продуцируется в молочной железе трансгенного млекопитающего.

11. Способ по п.1, где слитый белок секретируется в молоко трансгенного млекопитающего в концентрации, составляющей, по меньшей мере, около 0,5 мг/мл или выше.

12. Способ по п.1, где слитый белок секретируется в молоко трансгенного млекопитающего в концентрации, составляющей, по меньшей мере, около 1,0 мг/мл или выше.

13. Способ по п.1, где иммуноглобулиновой субъединицей слитого белка является гуманизированное антитело.

14. Способ по п.1, где трансгеном, кодирующим трансгенный слитый белок, является конструкция нуклеиновой кислоты, которая включает в себя:

(a) необязательно изолирующую последовательность;

(b) промотор, специфичный для эпителиальных клеток молочной железы;

(c) нуклеотидную последовательность, которая кодирует сигнальную последовательность, которая может управлять секрецией слитого белка, например, сигнальную последовательность белка, специфичного для молока;

(d) необязательно нуклеотидную последовательность, которая кодирует часть аминоконцевой кодирующей области секретируемого белка, например, белка, секретируемого в молоко, достаточную для того, чтобы обеспечить секрецию слитого белка, например, в молоко трансгенного млекопитающего;

(e) одну или несколько нуклеотидных последовательностей, которые кодируют слитый белок; и

(f) необязательно 3’-нетранслируемую область гена млекопитающего.

15. Изолированная конструкция нуклеиновой кислоты, которая включает в себя:

(a) необязательно изолирующую последовательность;

(b) промотор, специфичный для эпителиальных клеток молочной железы;

(c) нуклеотидную последовательность, которая кодирует сигнальную последовательность, которая может управлять секрецией слитого белка, например, сигнальную последовательность белка, специфичного для молока;

(d) необязательно нуклеотидную последовательность, которая кодирует часть аминоконцевой кодирующей области секретируемого белка, например, белка, секретируемого в молоко, достаточную для обеспечения секреции слитого белка, например, в молоко трансгенного млекопитающего;

(e) одну или несколько нуклеотидных последовательностей, которые кодируют слитый белок; и

(f) необязательно 3’-нетранслируемую область гена млекопитающего, например, гена, специфичного для эпителиальных клеток молочной железы (например, гена белка молока).

16. Отличное от человека трансгенное млекопитающее, которое содержит трансген, который кодирует слитый белок, причем указанный трансген включает в себя промотор, специфичный для эпителиальных клеток молочной железы, нуклеотидную последовательность, которая кодирует сигнальную последовательность, которая может управлять секрецией слитого белка, одну или несколько нуклеотидных последовательностей, которые кодируют слитый белок, где слитый белок включает в себя первый член и второй член, причем второй член представляет собой фермент, продуцируемый в молоко в активной форме, и слитый белок продуцируется в молоко трансгенного млекопитающего в концентрации, составляющей, по меньшей мере, около 0,1 мг/мл.

17. Трансгенное животное по п.16, которое способно секретировать слитый белок в молоко в концентрации, составляющей, по меньшей мере, около 0,5 мг/мл.