Отличные от человека животные, у которых экспрессируется гуманизированный комплекс c1q - RU2020112751A
Код документа: RU2020112751A
Формула
1. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, содержащее в своем геноме нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1q, где нуклеиновая кислота содержит последовательность нуклеиновой кислоты грызуна и человеческую последовательность нуклеиновой кислоты, где химерный полипептид C1q выбран из группы, состоящей из химерного полипептида C1qa, химерного полипептида C1qb и химерного полипептида C1qc, и где химерный полипептид C1q содержит глобулярный домен в виде головки, который является по сути человеческим, и N-концевую стеблевую область, которая является по сути областью грызуна.
2. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 1, где у животного, представляющего собой грызуна, экспрессируется химерный полипептид C1qa, химерный полипептид C1qb, химерный полипептид C1qc или их комбинация.
3. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 1 или 2, где животное, представляющее собой грызуна, представляет собой крысу или мышь.
4. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 1-3, где химерный полипептид C1q представляет собой химерный полипептид C1qa.
5. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 4, где химерный полипептид C1qa содержит глобулярный домен в виде головки, который является практически идентичным глобулярному домену в виде головки полипептида C1qa человека, и N-концевую стеблевую область, которая является практически идентичной N-концевой стеблевой области полипептида C1qa грызуна.
6. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 5, где глобулярный домен в виде головки полипептида C1qa человека содержит 108-245 из SEQ ID NO: 4.
7. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 4-6, где животное, представляющее собой грызуна, представляет собой мышь.
8. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 7, где химерный полипептид C1qa содержит N-концевую стеблевую область, практически идентичную N-концевой стеблевой области эндогенного полипептида C1qa мыши, и где N-концевая стеблевая область эндогенного полипептида C1qa мыши содержит аминокислоты 23-107 из SEQ ID NO: 1.
9. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 7 или 8, где химерный полипептид C1qa содержит аминокислоты 23-245 из SEQ ID NO: 10.
10. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 4-6, где животное, представляющее собой грызуна, представляет собой крысу.
11. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 10, где химерный полипептид C1qa содержит N-концевую стеблевую область, практически идентичную N-концевой стеблевой области эндогенного полипептида C1qa крысы, и где N-концевая стеблевая область эндогенного полипептида C1qa крысы содержит аминокислоты 23-107 из SEQ ID NO: 7.
12. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 10 или 11, где химерный полипептид C1qa содержит аминокислоты 23-245 из SEQ ID NO: 55.
13. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 1-3, где химерный полипептид C1q представляет собой химерный полипептид C1qb.
14. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 13, где химерный полипептид C1qb содержит глобулярный домен в виде головки, который является практически идентичным глобулярному домену в виде головки полипептида C1qb человека, и N-концевую стеблевую область, которая является практически идентичной N-концевой стеблевой области полипептида C1qb грызуна.
15. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 14, где глобулярный домен в виде головки полипептида C1qb человека содержит аминокислоты 115-251 из SEQ ID NO: 5.
16. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 13-15, где животное, представляющее собой грызуна, представляет собой мышь.
17. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 16, где химерный полипептид C1qb содержит N-концевую стеблевую область, практически идентичную N-концевой стеблевой области эндогенного полипептида C1qb мыши, и где N-концевая стеблевая область эндогенного полипептида C1qb мыши содержит аминокислоты 26-114 из SEQ ID NO: 2.
18. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 168 или 17, где химерный полипептид C1qb содержит аминокислоты 26-251 из SEQ ID NO: 11.
19. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 13-15, где животное, представляющее собой грызуна, представляет собой крысу.
20. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 19, где химерный полипептид C1qb содержит N-концевую стеблевую область, практически идентичную N-концевой стеблевой области эндогенного полипептида C1qb крысы, и где N-концевая стеблевая область эндогенного полипептида C1qb крысы содержит аминокислоты 26-114 из SEQ ID NO: 8.
21. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 19 или 20, где химерный полипептид C1qb содержит аминокислоты 26-251 из SEQ ID NO: 56.
22. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 1-3, где химерный полипептид C1q представляет собой химерный полипептид C1qc.
23. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 22, где химерный полипептид C1qc содержит глобулярный домен в виде головки, который является практически идентичным глобулярному домену в виде головки полипептида C1qc человека, и N-концевую стеблевую область, которая является практически идентичной N-концевой стеблевой области полипептида C1qc грызуна.
24. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 23, где глобулярный домен в виде головки полипептида C1qc человека содержит аминокислоты 113-245 из SEQ ID NO: 6.
25. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 22-24, где животное, представляющее собой грызуна, представляет собой мышь.
26. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 25, где химерный полипептид C1qc содержит N-концевую стеблевую область, практически идентичную N-концевой стеблевой области эндогенного полипептида C1qc мыши, и где N-концевая стеблевая область эндогенного полипептида C1qc мыши содержит аминокислоты 30-113 из SEQ ID NO: 3.
27. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 25 или 26, где химерный полипептид C1qc содержит аминокислоты 30-246 из SEQ ID NO: 11.
28. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 22-24, где животное, представляющее собой грызуна, представляет собой крысу.
29. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 28, где химерный полипептид C1qc содержит N-концевую стеблевую область, практически идентичную N-концевой стеблевой области эндогенного полипептида C1qc крысы, и где N-концевая стеблевая область эндогенного полипептида C1qc крысы содержит аминокислоты 32-115 из SEQ ID NO: 9.
30. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 28 или 29, где химерный полипептид C1qc содержит аминокислоты 32-248 из SEQ ID NO: 57.
31. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из предыдущих пунктов, где химерный полипептид C1q содержит сигнальный пептид C1q грызуна, необязательно эндогенный сигнальный пептид C1q грызуна.
32. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 1, где нуклеиновая кислота, кодирующая химерный полипептид C1q, находится в эндогенном локусе C1q грызуна.
33. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 32, где эндогенная геномная последовательность в эндогенном локусе C1q грызуна была заменена человеческой последовательностью нуклеиновой кислоты.
34. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 1, 2, 32 или 33, где человеческая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует по сути глобулярный домен в виде головки полипептида C1q человека.
35. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 34, где человеческая последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой геномный фрагмент гена C1q человека.
36. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 35, где геномный фрагмент предусматривает 3'-UTR гена C1q человека.
37. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 34-36, где химерный полипептид C1q представляет собой химерный полипептид C1qa, и человеческая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует по сути глобулярный домен в виде головки полипептида C1qa человека.
38. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 37, где глобулярный домен в виде головки полипептида C1qa человека содержит аминокислоты 108-245 из SEQ ID NO: 4.
39. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 37 или 38, где человеческая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует аминокислоты 112-245 из SEQ ID NO: 4.
40. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 34-36, где химерный полипептид C1q представляет собой химерный полипептид C1qb, и человеческая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует по сути глобулярный домен в виде головки полипептида C1qb человека.
41. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 40, где глобулярный домен в виде головки полипептида C1qb человека содержит аминокислоты 115-251 из SEQ ID NO: 5.
42. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 40 или 41, где человеческая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует аминокислоты 118-251 из SEQ ID NO: 5.
43. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 34-36, где химерный полипептид C1q представляет собой химерный полипептид C1qc, и человеческая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует по сути глобулярный домен в виде головки полипептида C1qc человека.
44. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 43, где глобулярный домен в виде головки полипептида C1qc человека содержит аминокислоты 113-245 из SEQ ID NO: 6.
45. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 43 или 44, где человеческая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует аминокислоты 114-245 из SEQ ID NO: 6.
46. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 1, 2 или пп. 32-34, где последовательность нуклеиновой кислоты грызуна кодирует по сути N-концевую стеблевую область полипептида C1q грызуна.
47. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 46, где животное, представляющее собой грызуна, представляет собой мышь, и N-концевая стеблевая область полипептида C1q мыши содержит аминокислоты 23-107 из SEQ ID NO: 1 (для C1qa), аминокислоты 26-114 из SEQ ID NO: 2 (для C1qb) или аминокислоты 30-113 из SEQ ID NO: 3 (для C1qc) соответственно.
48. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 47, где мышь содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1qa, где нуклеиновая кислота содержит мышиную последовательность нуклеиновой кислоты и человеческую последовательность нуклеиновой кислоты, где мышиная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует аминокислоты 23-111 из SEQ ID NO: 1.
49. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 47, где мышь содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1qb, где нуклеиновая кислота содержит мышиную последовательность нуклеиновой кислоты и человеческую последовательность нуклеиновой кислоты, где мышиная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует аминокислоты 26-117 из SEQ ID NO: 2.
50. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 47, где мышь содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1qc, где нуклеиновая кислота содержит мышиную последовательность нуклеиновой кислоты и человеческую последовательность нуклеиновой кислоты, где мышиная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует аминокислоты 30-114 из SEQ ID NO: 3.
51. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 46, где животное, представляющее собой грызуна, представляет собой крысу, и N-концевая стеблевая область эндогенных полипептидов C1q содержит аминокислоты 23-107 из SEQ ID NO: 7 (для C1qa), аминокислоты 26-114 из SEQ ID NO: 8 (для C1qb) и аминокислоты 32-115 из SEQ ID NO: 9 (для C1qc) соответственно.
52. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 51, где крыса содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1qa, где нуклеиновая кислота содержит крысиную последовательность нуклеиновой кислоты и человеческую последовательность нуклеиновой кислоты, где крысиная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует аминокислоты 23-111 из SEQ ID NO: 7.
53. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 51, где крыса содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1qb, где нуклеиновая кислота содержит крысиную последовательность нуклеиновой кислоты и человеческую последовательность нуклеиновой кислоты, где крысиная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует аминокислоты 26-117 из SEQ ID NO: 8.
54. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 51, где крыса содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1qc, где нуклеиновая кислота содержит крысиную последовательность нуклеиновой кислоты и человеческую последовательность нуклеиновой кислоты, где крысиная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует аминокислоты 32-116 из SEQ ID NO: 9.
55. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 1, где животное, представляющее собой грызуна, представляет собой крысу и содержит в своем геноме:
a. в эндогенном локусе C1qa последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный полипептид C1qa крысы/человека, где последовательность нуклеиновой кислоты содержит в 5’-3’ направлении и в функциональной связи первую нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 1-111 полипептида C1qa крысы с SEQ ID NO: 7, и вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 112-245 полипептида C1qa человека с SEQ ID NO: 4;
b. в эндогенном локусе C1qb последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный полипептид C1qb крысы/человека, где последовательность нуклеиновой кислоты содержит в 5’-3’ направлении и в функциональной связи третью нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 1-117 полипептида C1qb крысы с SEQ ID NO: 8, и четвертую нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 118-251 полипептида C1qb человека с SEQ ID NO: 5; и
c. в эндогенном локусе C1qc последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный полипептид C1qc крысы/человека, где последовательность нуклеиновой кислоты содержит в 5’-3’ направлении и в функциональной связи пятую нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 1-116 полипептида C1qc крысы с SEQ ID NO: 9, и шестую нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 114-245 полипептида C1qc человека с SEQ ID NO: 6.
56. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 1, где животное, представляющее собой грызуна, представляет собой мышь и содержит в своем геноме:
a. в эндогенном локусе C1qa последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный полипептид C1qa мыши/человека, где последовательность нуклеиновой кислоты содержит в 5’-3’ направлении и в функциональной связи первую нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 1-111 полипептида C1qa мыши с SEQ ID NO: 1, и вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 112-245 полипептида C1qa человека с SEQ ID NO: 4;
b. в эндогенном локусе C1qb последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный полипептид C1qb мыши/человека, где последовательность нуклеиновой кислоты содержит в 5’-3’ направлении и в функциональной связи третью нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 1-117 полипептида C1qb мыши с SEQ ID NO: 2, и четвертую нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 118-251 полипептида C1qb человека с SEQ ID NO: 5; и
c. в эндогенном локусе C1qc последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный полипептид C1qc мыши/человека, где последовательность нуклеиновой кислоты содержит в 5’-3’ направлении и в функциональной связи пятую нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 1-114 полипептида C1qc мыши с SEQ ID NO: 3, и шестую нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 114-245 полипептида C1qc человека с SEQ ID NO: 6.
57. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 1-56, где у животного, представляющего собой грызуна, не экспрессируется(ются) функциональный(е) эндогенный(е) полипептид(ы) C1qa, C1qb и/или C1qc.
58. Способ получения генетически модифицированного животного, представляющего собой грызуна, предусматривающий модификацию генома животного, представляющего собой грызуна, с тем, чтобы оно содержало нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1q, где нуклеиновая кислота содержит последовательность нуклеиновой кислоты грызуна и человеческую последовательность нуклеиновой кислоты, где химерный полипептид C1q выбран из группы, состоящей из химерного полипептида C1qa, химерного полипептида C1qb, химерного полипептида C1qc и их комбинации, и где химерный полипептид C1q содержит глобулярный домен в виде головки, который является по сути человеческим, и N-концевую стеблевую область, которая является по сути областью грызуна.
59. Способ по п. 58, где геном животного, представляющего собой грызуна, модифицируют с тем, чтобы он содержал нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1qa, нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1qb, и нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1qc.
60. Способ по п. 58 или 59, где нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1q, вводят в эндогенный локус C1q грызуна.
61. Способ по п. 60, где нуклеиновая кислота, кодирующая химерный полипептид C1q, заменяет нуклеотидную последовательность эндогенного гена C1q грызуна в эндогенном локусе C1q грызуна.
62. Способ по любому из пп. 58-61, где животное, представляющее собой грызуна, представляет собой мышь или крысу.
63. Способ по п. 62, где указанная модификация предусматривает
a. введение молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей человеческую последовательность нуклеиновой кислоты, в геном эмбриональной стволовой (ES) клетки грызуна,
b. получение ES-клетки грызуна, в которой человеческая последовательность нуклеиновой кислоты интегрирована в эндогенный локус C1q в функциональной связи с эндогенной последовательностью нуклеиновой кислоты грызуна так, чтобы кодировать указанный химерный полипептид C1q, и
c. получение животного, представляющего собой грызуна, из ES-клетки грызуна, полученной на стадии b.
64. Способ по п. 63, где молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1qa, нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1qb, и нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный полипептид C1qc.
65. Химерный полипептид C1q, содержащий глобулярный домен в виде головки, который является по сути человеческим, и N-концевую стеблевую область, которая является по сути областью грызуна, где химерный полипептид C1q выбран из группы, состоящей из химерного полипептида C1qa, химерного полипептида C1qb и химерного полипептида C1qc.
66. Химерный полипептид C1q, полученный из животного, представляющего собой грызуна, по любому из пп. 1-57.
67. Химерный белок C1q, предусматривающий один или более химерных полипептидов C1q по п. 65 или 66.
68. Химерный белок C1q по п. 67, где белок содержит по меньшей мере один химерный C1qa, по меньшей мере один химерный C1qb и по меньшей мере один химерный полипептид C1qc.
69. Химерный белок C1q по п. 68, где белок содержит 6 каждого из химерного полипептида C1qa, химерного полипептида C1qb и химерного полипептида C1qc.
70. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая функциональный химерный полипептид C1q, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты грызуна и человеческую последовательность нуклеиновой кислоты, где человеческая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует по сути глобулярный домен в виде головки полипептида C1q человека, и последовательность нуклеиновой кислоты грызуна кодирует по сути N-концевую стеблевую область родственного полипептида C1q грызуна, и где полипептид C1q выбран из полипептида C1qa, полипептида C1qb или полипептида C1qc.
71. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая химерный белок C1q грызуна, содержащая одну или более из первой, второй или третьей нуклеотидных последовательностей, где:
a. первая нуклеотидная последовательность кодирует химерный полипептид C1qa,
b. вторая нуклеотидная последовательность кодирует химерный полипептид C1qb, и
c. третья нуклеотидная последовательность кодирует химерный полипептид C1qc,
где каждая из первой, второй и третьей нуклеотидных последовательностей содержит последовательность нуклеиновой кислоты грызуна и человеческую последовательность нуклеиновой кислоты, где человеческая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует по сути глобулярный домен в виде головки полипептида C1qa, C1qb и C1qc человека соответственно, и последовательность нуклеиновой кислоты грызуна кодирует по сути N-концевую стеблевую область родственного полипептида C1q грызуна, полипептида C1qa, C1qb и C1qc соответственно.
72. Клетка, содержащая выделенную нуклеиновую кислоту по п. 70 или 71.
73. Клетка по п. 72, где клетка представляет собой эмбриональную стволовую клетку.
74. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, содержащее клетку по п. 73.
75. Модель, представляющая собой трансгенного грызуна, для испытания биспецифического антиген-связывающего белка на основе C1q, где антиген-связывающий белок связывает как C1q человека, так и представляющий интерес антиген, отличный от антигена грызуна, предусматривающая генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 1-57 и дополнительно предусматривающая представляющий интерес антиген, отличный от антигена грызуна, или клетку, экспрессирующую представляющий интерес антиген, отличный от антигена грызуна.
76. Способ отбора кандидатного лекарственного средства, которое целенаправленно воздействует на представляющий интерес антиген, предусматривающий
a. введение представляющего интерес антигена в генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по любому из пп. 1-57,
b. приведение указанного животного, представляющего собой грызуна, в контакт с представляющим интерес кандидатным лекарственным средством, где кандидатное лекарственное средство направлено на C1q человека и представляющий интерес антиген, и
c. оценивание в отношении того, является ли кандидатное лекарственное средство эффективным в предупреждении появления, снижении количества или устранении клеток, характеризующихся наличием или экспрессией представляющего интерес антигена.
77. Способ по п. 76, где стадия введения предусматривает экспрессию в животном, представляющем собой грызуна, представляющего интерес антигена.
78. Способ по п. 76, где стадия введения предусматривает введение в указанное животное, представляющее собой грызуна, клетки, экспрессирующей представляющий интерес антиген.
79. Способ по любому из пп. 76-78, где представляющий интерес антиген представляет собой ассоциированный с опухолью антиген.
80. Способ по любому из пп. 76-78, где клетка представляет собой бактериальную клетку, такую как клетка Staphylococcus, и антиген представляет собой бактериальный антиген, такой как антиген Staphylococcus.
81. Способ по любому из пп. 76-78, где антиген представляет собой вирусный антиген.
82. Способ по п. 80 или 81, где стадия введения предусматривает инфицирование грызуна представляющим интерес антигеном.
83. Способ по п. 76, где животное, представляющее собой грызуна, представляет собой иммунокомпетентную мышь или иммунокомпетентную крысу.
84. Способ по п. 76, где кандидатное лекарственное средство представляет собой антитело или антиген-связывающий белок.
85. Способ по п. 84, где антитело или антиген-связывающий белок соответственно представляет собой биспецифическое антитело или биспецифический антиген-связывающий белок, который способен к связыванию как белка C1q человека, так и представляющего интерес антигена.
86. Способ оценивания того, активирует ли кандидатное антитело путь с участием комплемента, предусматривающий
a. обеспечение клетки, экспрессирующей представляющий интерес антиген на поверхности клетки, кандидатного антитела, содержащего человеческую Fc-область и направленного на представляющий интерес антиген, и образца сыворотки крови от генетически модифицированного животного, представляющего собой грызуна, по любому из пп. 1-57;
b. смешивание клетки с кандидатным антителом с обеспечением возможности связывания антитела с представляющим интерес антигеном, экспрессируемым на поверхности клетки;
c. добавление образца сыворотки крови к смеси клетка-антитело с обеспечением связывания гуманизированных белков C1q в образце сыворотки крови с антителами, связанными с представляющим интерес антигеном на клетке; и
d. измерение цитотоксичности в отношении клетки.
87. Способ оценивания кандидатного биспецифического антитела, целенаправленно воздействующего на представляющий интерес антиген и C1q человека, предусматривающий
a. смешивание клетки или вируса, экспрессирующих представляющий интерес антиген, кандидатного биспецифического антитела и образца крови от генетически модифицированного животного, представляющего собой грызуна, по любому из пп. 1-57 и инкубирование с обеспечением связывания антитела с представляющим интерес антигеном, экспрессируемым клеткой или вирусом, и с молекулами гуманизированного C1q в образце крови; и
b. измерение доли выживших относительно клетки или вируса.
88. Способ по п. 87, где клетка представляет собой бактериальную клетку, такую как клетка Staphylococcus, и антиген представляет собой бактериальный антиген, такой как антиген Staphylococcus.
89. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 55, где крыса содержит в своем геноме:
a. в эндогенном локусе C1qa последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный полипептид C1qa крысы/человека, который содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 55;
b. в эндогенном локусе C1qb последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный полипептид C1qb крысы/человека, который содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 56; и
c. в эндогенном локусе C1qa последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный полипептид C1qc крысы/человека, который содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 57.
90. Генетически модифицированное животное, представляющее собой грызуна, по п. 56, где мышь содержит в своем геноме:
a. в эндогенном локусе C1qa последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный полипептид C1qa мыши/человека, который содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 10;
b. в эндогенном локусе C1qb последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный полипептид C1qb мыши/человека, который содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 11; и
c. эндогенном локусе C1qa последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный полипептид C1qc мыши/человека, который содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 12.
Комментарии