Применение рецептора edg2 на модели сердечно-сосудистой недостаточности у животных - RU2005118095A

Реферат

1. Миокардиальные клетки млекопитающего, которые содержат вектор с аденовирусной последовательностью для одновременной экспрессии рецептора, сопряженного с G-белком, EDG2 и GFP.

2. Миокардиальные клетки млекопитающего по п.1, где эта аденовирусная векторная последовательность состоит из рекомбинантного аденовируса, дефектного по Е1/Е3-области, который экспрессирует рецептор, сопряженный с G-белком, EDG2 и GFP под контролем двух независимых промоторов.

3. Миокардиальные клетки млекопитающего по п.2, где этими двумя независимыми промоторами являются два промотора CMV.

4. Миокардиальные клетки млекопитающего по одному из пп.1-3, которые содержат белок рецептора, сопряженного с G-белком, EDG2 и белок GFP.

5. Миокардиальные клетки млекопитающего по п.1, где этим млекопитающим является кролик, мышь или крыса.

6. Способ получения миокардиальной клетки, охарактеризованной в п.1, где

а) сердце млекопитающего удаляют оперативными способами ветеринарии,

b) сердце обрабатывают и подвергают расщеплению коллагеназой,

c) выделенные кардиомиоциты инфицируют аденовирусным вектором, состоящим из рекомбинантного аденовируса, дефектного по Е1/Е3-области, который экспрессирует рецептор, сопряженный с G-белком, EDG2 и GFP под контролем двух независимых промоторов.

7. Млекопитающее, имеющее миокард, который содержит аденовирусный вектор для одновременной экспрессии рецептора, сопряженного с G-белком, EDG2 и GFP.

8. Млекопитающее по п.7, где вектор с аденовирусной последовательностью состоит из рекомбинантного аденовируса, дефектного по Е1/Е3-области, который экспрессирует рецептор, сопряженный с G-белком, EDG2 и GFP под контролем двух независимых промоторов.

9. Млекопитающее по п.8, где этими двумя независимыми промоторами являются два промотора CMV.

10. Млекопитающее по одному из пп.7-9, миокард которого содержит белок рецептора, сопряженного с G-белком, EDG2 и белок GFP.

11. Млекопитающее по п.7, где этим млекопитающим является кролик, мышь или крыса.

12. Способ получения млекопитающего, охарактеризованного в п.7, где

a) получают вектор с аденовирусной последовательностью для одновременной экспрессии рецептора, сопряженного с G-белком, EDG2 и GFP,

b) подготавливают млекопитающее,

c) вектор с аденовирусной последовательностью a) переносят в миокард млекопитающего b) при помощи катетера.

13. Способ идентификации соединения, которое модифицирует активность рецептора, сопряженного с G-белком, EDG2, где

a) получают трансформированные клетки из сердечной мышцы, которые экспрессируют рецептор EDG2 или слитый белок, содержащий рецептор EDG2,

b) необязательно осуществляют обработку клеток a) с использованием изопротеренола и/или лизофосфатидной кислоты,

c) получают химическое соединение,

d) клетки a) или b) взаимодействуют с химическим соединением c),

e) определяют сократимость клеток d) и сравнивают с сократимостью клеток, которые имеют те же самые характеристики, что и клетки a), но которые не взаимодействовали с химическим соединением c),

где относительное увеличение или уменьшение сократимости клеток, которые взаимодействовали с химическим соединением d], вызванное этим соединением, показывает способность такого соединения модифицировать активность рецептора EDG2.

14. Способ идентификации соединения, которое модифицирует активность рецептора, сопряженного с G-белком, EDG2, где

a) получают из сердечной мышцы трансформированные клетки, которые экспрессируют рецептор EDG2 или слитый белок, содержащий рецептор EDG2,

b) необязательно выполняют обработку клеток a) с использованием изопротеренола и/или лизофосфатидной кислоты,

c) получают химическое соединение,

d) клетки a) или b) взаимодействуют с химическим соединением c),

e) сократимость клеток d) определяют и сравнивают с сократимостью клеток того же клеточного типа, что и клетки a), но которые не экспрессируют рецептор EDG2 или слитый белок, содержащий рецептор EDG2,

где относительное увеличение или уменьшение сократимости клеток, которые экспрессируют рецептор EDG2 или слитый белок, содержащий рецептор EDG2, вызванное этим соединением, показывает способность этого соединения модифицировать активность рецептора EDG2.

15. Рекомбинантный аденовирусный вектор, состоящий из одного полинуклеотида из следующих групп:

a) полинуклеотида с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:5,

b) полинуклеотида, который на 95% идентичен полинуклеотиду SEQ ID NO:5,

c) полинуклеотида, который имеет по меньшей мере ту же самую длину, что и полинуклеотид SEQ ID NO:5, и который гибридизуется с полинуклеотидом SEQ ID NO:5 при применении гибридизации с жесткими условиями.

16. Рекомбинантный аденовирусный вектор по п.15, содержащий полинуклеотидную последовательность, которая кодирует белок SEQ ID NO:2.

17. Применение аденовирусного вектора, охарактеризованного в пп.15 и 16, для конструирования трансгенных млекопитающих, где рецептор, сопряженный с G-белком, EDG2 временно или постоянно экспрессируется по меньшей мере в одной ткани.

18. Применение аденовирусного вектора по п.17, где этой тканью является часть сердца.