Генетически модифицированные животные, отличные от человека, экспрессирующие epo человека - RU2019143093A
Код документа: RU2019143093A
Формула
1. Генетически модифицированная мышь для применения в качестве животной модели эритропоэза человека, несущая
нуклеотидную последовательность, которая кодирует человеческий белок EPO (hEPO), функционально связанную с промотором эндогенного гена EPO мыши в локусе EPO мыши, где функциональная связь приводит к нулевой мутации в гене EPO мыши в локусе гена EPO мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hM-CSF, функционально связанный с промотором эндогенного M-csf мыши в локусе гена M-csf мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену M-csf мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок IL-3, функционально связанный с промотором эндогенного IL-3 мыши в локусе гена IL-3 мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену IL-3 мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hGM-CSF, функционально связанный с промотором эндогенного Gm-csf мыши в локусе гена Gm-csf мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену Gm-csf мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hTPO, функционально связанный с промотором эндогенного ТРО мыши в локусе гена ТРО мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену ТРО мыши, и
трансген SIRPa, который кодирует белок hSirpa, где мышь экспрессирует белок hSirpa,
где генетически модифицированная мышь обладает иммунодефицитом, и где иммунодефицит вызван дефицитом как Rag2, так и IL2rg.
2. Генетически модифицированная мышь для применения в качестве животной модели функции эритроцитов человека, включающая
нуклеотидную последовательность, которая кодирует человеческий белок EPO (hEPO), функционально связанную с промотором эндогенного гена EPO мыши в локусе EPO мыши, где функциональная связь приводит к нулевой мутации в гене EPO мыши в локусе гена EPO мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hM-CSF, функционально связанный с промотором эндогенного M-csf мыши в локусе гена M-csf мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену M-csf мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок IL-3, функционально связанный с промотором эндогенного IL-3 мыши в локусе гена IL-3 мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену IL-3 мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hGM-CSF, функционально связанный с промотором эндогенного Gm-csf мыши в локусе гена Gm-csf мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену Gm-csf мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hTPO, функционально связанный с промотором эндогенного ТРО мыши в локусе гена ТРО мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену ТРО мыши, и
трансген SIRPa, который кодирует белок hSirpa, где мышь экспрессирует белок hSirpa,
где генетически модифицированная мышь обладает иммунодефицитом, и где иммунодефицит вызван дефицитом как Rag2, так и IL2rg.
3. Генетически модифицированная мышь для применения в качестве животной модели патогенной инфекции эритроцитов человека, включающая:
нуклеотидную последовательность, которая кодирует человеческий белок EPO (hEPO), функционально связанную с промотором эндогенного гена EPO мыши в локусе EPO мыши, где функциональная связь приводит к нулевой мутации в гене EPO мыши в локусе гена EPO мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hM-CSF, функционально связанный с промотором эндогенного M-csf мыши в локусе гена M-csf мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену M-csf мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок IL-3, функционально связанный с промотором эндогенного IL-3 мыши в локусе гена IL-3 мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену IL-3 мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hGM-CSF, функционально связанный с промотором эндогенного Gm-csf мыши в локусе гена Gm-csf мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену Gm-csf мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hTPO, функционально связанный с промотором эндогенного ТРО мыши в локусе гена ТРО мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену ТРО мыши, и
трансген SIRPa, который кодирует белок hSirpa, где мышь экспрессирует белок hSirpa,
где генетически модифицированная мышь является иммунодефицитной, и где иммунодефицит вызван дефицитом как Rag2, так и IL2rg.
4. Мышь по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что мышь является гетерозиготной по аллелю, содержащему нуклеотидную последовательность, кодирующую hEPO.
5. Мышь по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что мышь является гомозиготной по аллелю, включающему нуклеотидную последовательность, кодирующую hEPO.
6. Мышь по любому из пп.1-5, отличающаяся тем, что нуклеотидную последовательность, которая кодирует hEPO, содержит геномную кодирующую и некодирующую последовательность EPO человека.
7. Мышь по любому из пп.1-5, отличающаяся тем, что нуклеотидную последовательность, которая кодирует hEPO, содержит последовательность кДНК EPO человека.
8. Мышь по любому из пп.1-7, отличающаяся тем, что мышь является гомозиготной по нуклеиновой кислоте, кодирующей hTPO, нуклеиновой кислоте, кодирующей hMcsf, нуклеиновой кислоте, кодирующей hIL-3, и нуклеиновой кислоте, кодирующей hGmcsf.
9. Мышь по любому из пп. 1-8, отличающаяся тем, что мышь дополнительно содержит приживление гематопоэтических клеток человека.
10. Мышь по п. 9, отличающаяся тем, что гематопоэтические клетки человека содержат одну или несколько клеток, выбранных из группы, состоящей из CD34-положительной клетки человека, гемопоэтической стволовой клетки человека, миелоидной клетки-предшественника человека, эритроидной клетки-предшественника человека, миелоидной клетки человека, дендритной клетки человека, моноцита человека, гранулоцита человека, эритроцита человека, нейтрофила человека, тучной клетки человека, тимоцита человека и В-лимфоцита человека.
11. Мышь по п. 10, отличающаяся тем, что мышь содержит клодронат.
12. Мышь по п. 11, отличающаяся тем, что мышь дополнительно содержит инфекцию с патогеном, который нацелен на клетки человека эритроидной линии.
13. Мышь по п. 12, отличающаяся тем, что патоген выбран из Plasmodium sp., Babesia sp. и Theileri sp.
14. Способ идентификации агента, который ингибирует инфекцию патогенным микроорганизмом, нацеленным на клетки человека эритроидной линии, включающий
а. введение агента-кандидата в генетически модифицированную мышь, где мышь включает:
нуклеотидную последовательность, которая кодирует человеческий белок EPO (hEPO), функционально связанную с промотором эндогенного гена EPO мыши в локусе EPO мыши, где функциональная связь приводит к нулевой мутации в гене EPO мыши в локусе гена EPO мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hM-CSF, функционально связанный с промотором эндогенного M-csf мыши в локусе гена M-csf мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену M-csf мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок IL-3, функционально связанный с промотором эндогенного IL-3 мыши в локусе гена IL-3 мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену IL-3 мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hGM-CSF, функционально связанный с промотором эндогенного Gm-csf мыши в локусе гена Gm-csf мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену Gm-csf мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hTPO, функционально связанный с промотором эндогенного ТРО мыши в локусе гена ТРО мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену ТРО мыши, и
трансген SIRPa, который кодирует белок hSirpa, где мышь экспрессирует белок hSirpa,
где генетически модифицированная мышь является иммунодефицитной и где иммунодефицит вызван дефицитом как Rag2, так и IL2rg,
iv. приживление человеческих кроветворных клеток, и
v. инфекцию патогеном, нацеленным на клетки человека эритроидной линии,
b. определение, уменьшает ли агент количество патогена у зараженной патогеном мыши стадии а); и
c. идентификацию агента, который уменьшает количество патогена у зараженной патогеном мыши, в качестве агента, который ингибирует инфекцию патогеном, нацеленным на клетки человека эритроидной линии.
15. Способ идентификации агента, который предотвращает инфекцию патогенным микроорганизмом, нацеленным на клетки человека эритроидной линии, включающий
а. контакт генетически модифицированной мыши с клодронатом, где мышь содержит:
нуклеотидную последовательность, которая кодирует человеческий белок EPO (hEPO), функционально связанную с промотором эндогенного гена EPO мыши в локусе EPO мыши, где функциональная связь приводит к нулевой мутации в гене EPO мыши в локусе гена EPO мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hM-CSF, функционально связанный с промотором эндогенного M-csf мыши в локусе гена M-csf мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену M-csf мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок IL-3, функционально связанный с промотором эндогенного IL-3 мыши в локусе гена IL-3 мыши, и где мышь является гетерозиготным нуль или гомозиготным нуль для гена мышиного IL-3,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hGM-CSF, функционально связанный с промотором эндогенного Gm-csf мыши в локусе гена Gm-csf мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену Gm-csf мыши,
нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок hTPO, функционально связанный с промотором эндогенного ТРО мыши в локусе гена ТРО мыши, и где мышь является гетерозиготной нулевой или гомозиготной нулевой по гену ТРО мыши, и
трансген SIRPa, который кодирует белок hSirpa, где мышь экспрессирует белок hSirpa,
где генетически модифицированная мышь является иммунодефицитной и где иммунодефицит вызван дефицитом как Rag2, так и IL2rg,
iv. приживление человеческих кроветворных клеток,
b. введение агента-кандидата генетически модифицированной мыши стадии а,
c. инъекцию генетически модифицированной мыши стадии а пораженных патогеном ретикулоцитов или эритроцитов, и
д. определение того, предотвращает ли агент инфицирование ретикулоцитов и/или эритроцитов человека мыши стадии а,
е. идентификацию агента, который предотвращает инфицирование ретикулоцитов и/или эритроцитов человека мыши стадии а, в качестве агента, предотвращающего инфекцию патогеном, который нацелен на клетки человека эритроидной линии.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что мышь является гетерозиготной по аллелю, содержащему нуклеотидную последовательность, которая кодирует hEPO.
17. Способ по п. 15, отличающийся тем, что мышь является гомозиготной по аллелю, содержащему нуклеотидную последовательность, которая кодирует hEPO.
18. Способ по любому из пп. 15-17, отличающийся тем, что нуклеотидную последовательность, которая кодирует hEPO, содержит геномную кодирующую и некодирующую последовательность EPO человека.
19. Способ по любому из пп.15-18, отличающийся тем, что нуклеотидную последовательность, которая кодирует hEPO, включает последовательность кДНК EPO человека.
20. Способ по любому из пп. 15-19, отличающийся тем, что мышь гомозиготна по: нуклеиновой кислоте, кодирующей hTPO, нуклеиновой кислоте, кодирующей hMcsf, нуклеиновой кислоте, кодирующей hIL-3, и нуклеиновой кислоте, кодирующей hGmcsf.
21. Способ по любому из пп. 15-20, отличающийся тем, что гематопоэтические клетки человека содержат одну или несколько клеток, выбранных из группы, состоящей из CD34-положительной клетки человека, гемопоэтической стволовой клетки человека, миелоидной клетки-предшественника человека, эритроидной клетки-предшественника человека, миелоидной клетки человека, дендритной клетки человека, моноцита человека, гранулоцита человека, эритроцита человека, нейтрофила человека, тучной клетки человека, тимоцита человека и В-лимфоцита человека.
22. Способ по любому из пп. 15-21, отличающийся тем, что патоген выбран из Plasmodium sp., Babesia sp. и Theileri sp.
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что патогеном является Plasmodium sp. и Plasmodium sp. выбран из P. falciparum и P. vivax.
24. Способ получения мыши, содержащей гематопоэтическую систему человека, включающий
трансплантация популяции клеток, включающей гематопоэтические клетки-предшественники человека, генетически модифицированной мыши по любому из пп.1-13.
25. Способ по п. 24, отличающийся тем, что трансплантация включает инъекцию в хвостовую вену, инъекцию в печень плода или ретроорбитальную инъекцию.
26. Способ по п. 24 или 25, отличающийся тем, что генетически модифицированную мышь облучают сублетально перед трансплантацией.
27. Способ по любому из пп. 24-26, отличающийся тем, что гематопоэтические клетки-предшественники человека представляют собой CD34+ клетки.
28. Способ по любому из пп. 24-27, отличающийся тем, что гематопоэтические клетки-предшественники человека происходят из печени плода, костного мозга взрослого человека или пуповинной крови.
29. Способ получения мыши, инфицированной человеческим патогеном, который нацелен на клетки человека эритроидной линии, включающий:
трансплантацию популяции клеток, содержащей гематопоэтические клетки-предшественники человека, генетически модифицированной мыши по любому из пп. 1-13,
инъекцию мыши клодроната, и
инъекцию мыши пораженных паразитом эритроцитов человека (PRBC).
30. Способ по п. 29, отличающийся тем, что способ дополнительно включает инъекцию мыши эритроцитов здорового человека.
31. Способ по п.29, отличающийся тем, что паразит выбран из Plasmodium sp., Babesia sp. и Theileri sp.
32. Способ по п. 31, отличающийся тем, что паразит представляет собой Plasmodium sp. и Plasmodium sp. выбран из P. falciparum и P. vivax.
