Гуманизированная мышца сердца - RU2018103234A
Код документа: RU2018103234A
Формула
1. Клетка, морула или бластоциста отличного от человека животного, у которой геном несет мутацию в обоих аллелях гена NKX2-5, гена HANDII, гена ТВХ5 или их комбинации такую, чтобы у клетки или бластоцисты отличного от человека животного отсутствовал функциональный белок NKX2-5, белок HANDII, белок ТВХ5 или их комбинация.
2. Клетка, морула или бластоциста отличного от человека животного по п. 1, у которой мутация представляет собой делецию гена NKX2-5, гена HANDII, гена ТВХ5 или их комбинации.
3. Клетка, морула или бластоциста отличного от человека животного по п. 1 или п. 2, причем клетка или бластоциста отличного от человека животного является свиной, бычьей, лошадиной или козьей.
4. Химерное отличное от человека животное, морула или бластоциста, экспрессирующие NKX2-5, HANDII, ТВХ5 человека или их комбинацию и лишенные экспрессии NKX2-5, HANDII, ТВХ5 отличного от человека животного или их комбинации.
5. Химерное отличное от человека животное по п. 4, причем химерное отличное от человека животное производит гуманизированные сердечные клетки и/или гуманизированную сердечную ткань.
6. Химерная свинья, экспрессирующая экзогенный NKX2-5, HANDII, ТВХ5 свиньи или их комбинацию и лишенная экспрессии эндогенного NKX2-5, HANDII, ТВХ5 свиньи или их комбинации (химера свинья-свинья).
7. Химерное отличное от человека животное по п. 4 или п. 5, причем отличное от человека животное относится к свиньим, бычьим, лошадиным или козьим.
8. Способ получения химерного отличного от человека животного, экспрессирующего ген NKX2-5, ген HANDII, ген ТВХ5 человека или их комбинацию, предусматривающий:
а) получение клетки отличного от человека животного, нулевой по NKX2-5, HANDII ТВХ5 или их комбинации, где обе копии гена NKX2-5, гена HANDII, гена ТВХ5 отличного от человека животного или их комбинации несут мутацию, которая предотвращает продуцирование функционального белка NKX2-5, белка HANDII, белка ТВХ5 или их комбинации;
b) создание морулы или бластоцисты отличного от человека животного, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, путем переноса ядра соматической клетки, предусматривающего слияние ядра из указанной клетки отличного от человека животного, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, полученной на этапе а), с энуклеированным ооцитом отличного от человека животного и активацию указанного ооцита к делению таким образом, чтобы формировалась морула или бластоциста отличного от человека животного, нулевая по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации;
c) введение стволовых клеток человека в морулу или бластоцисту, нулевую по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 отличного от человека животного или их комбинации, полученную на этапе b); и
d) имплантацию указанной морулы или бластоцисты, полученной на этапе с), отличному от человека животному, являющемуся псевдобеременной суррогатной матерью, с получением химерного отличного от человека животного, экспрессирующего NKX2-5, HANDII, ТВХ5 человека или их комбинацию.
9. Способ получения химерной свиньи, экспрессирующей экзогенный ген NKX2-5, ген HANDII, ген ТВХ5 или их комбинацию, предусматривающий:
a) получение клетки свиньи, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, где обе копии эндогенного гена NKX2-5, гена HANDII, гена ТВХ5 свиньи или их комбинации несут мутацию, которая предотвращает продуцирование функционального эндогенного белка NKX2-5, белка HANDII, белка ТВХ5 или их комбинации;
b) создание морулы или бластоцисты свиньи, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, путем переноса ядра соматической клетки, предусматривающего слияние ядра из указанной клетки свиньи, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, полученной на этапе а), с энуклеированным ооцитом свиньи и активацию указанного ооцита к делению таким образом, чтобы формировалась морула или бластоциста свиньи, нулевая по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации;
c) введение стволовых клеток свиньи в морулу или бластоцисту, нулевую по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 свиньи или их комбинации, полученную на этапе b); и
d) имплантацию указанной морулы или бластоцисты, полученной на этапе с), свинье, являющейся псевдобеременной суррогатной матерью, с получением химерной свиньи, экспрессирующей экзогенный NKX2-5, HANDII, ТВХ5 свиньи или их комбинацию.
10. Способ получения человеческих или гуманизированных сердечных клеток у отличного от человека животного, предусматривающий:
a) получение клетки отличного от человека животного, нулевой по NKX2-5, HANDII ТВХ5 или их комбинации, где оба аллеля гена NKX2-5, гена HANDII, гена ТВХ5 отличного от человека животного или их комбинации несут мутацию, которая предотвращает продуцирование функционального белка NKX2-5, белка HANDII, белка ТВХ5 отличного от человека животного или их комбинации;
b) создание морулы или бластоцисты отличного от человека животного, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, путем переноса ядра соматической клетки, предусматривающего слияние ядра из указанной клетки отличного от человека животного, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, полученной на этапе а), с энуклеированным ооцитом отличного от человека животного и активацию указанного ооцита к делению таким образом, чтобы формировалась бластоциста отличного от человека животного, нулевая по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации;
c) введение стволовых клеток человека в бластоцисту или морулу отличного от человека животного, нулевую по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, полученную на этапе b); и
d) имплантацию указанной бластоцисты или морулы, полученной на этапе с), отличному от человека животному, являющемуся псевдобеременной суррогатной матерью, с получением отличного от человека животного, экспрессирующего человеческие или гуманизированные сердечные клетки.
11. Способ по п. 8 или 10, предусматривающий, что отличное от человека животное относится к свиньим, бычьим, лошадиным или козьим.
12. Способ по п. 8, 9 или 10, предусматривающий, что стволовая клетка человека представляет собой тканеспецифическую стволовую клетку, плюрипотентную стволовую клетку, мультипотентную взрослую стволовую клетку, индуцированную плюрипотентную стволовую клетку или стволовую клетку пуповинной крови (UCBSC).
13. Способ по п. 8, 9 или 10, предусматривающий, что индуцированная плюрипотентная клетка получена из фибробласта.
14. Отличное от человека животное, полученное согласно способу по любому из пп. 8-13.
15. Химерное сердце, ткань химерного сердца и/или клетки химерного сердца, полученные способом, предусматривающим
a) получение клетки отличного от человека животного, нулевой по гену NKX2-5, гену HANDII, гену ТВХ5 или их комбинации, где оба аллеля генов NKX2-5, HANDII, ТВХ5 отличного от человека животного или их комбинации несут мутацию и/или делецию, которая предотвращает продуцирование функционального белка NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации;
b) создание бластоцисты или морулы отличного от человека животного, нулевой по гену NKX2-5, гену HANDII, гену ТВХ5 или их комбинации, путем переноса ядра соматической клетки, предусматривающего слияние ядра из указанной клетки отличного от человека животного, нулевой по гену NKX2-5, гену HANDII, гену ТВХ5 или их комбинации, полученной на этапе а), с энуклеированным ооцитом отличного от человека животного и активацию указанного ооцита к делению таким образом, чтобы формировалась бластоциста отличного от человека животного, нулевая по гену NKX2-5, гену HANDII, гену ТВХ5 или их комбинации, или применение генного редактирования для получения бластоцисты отличного от человека животного, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации;
c) введение донорских стволовых клеток человека в бластоцисту отличного от человека животного, нулевую по гену NKX2-5, гену HANDII, гену ТВХ5 или их комбинации, полученную на этапе b); и
d) имплантацию указанной бластоцисты, полученной на этапе с), отличному от человека животному, являющемуся псевдобеременной суррогатной матерью, с получением отличного от человека животного, экспрессирующего химерное сердце, ткань химерного сердца и/или клетки химерного сердца.
16. Химерное сердце человека/отличного от человека животного.
17. Ткань химерного сердца человека/отличного от человека животного.
18. Клетки химерного сердца человека/отличного от человека животного.
19. Химерное сердце, ткань химерного сердца и/или клетки химерного сердца по любому из пп. 15-18, причем отличным от человека животным является свинья.
20. Экзогенный орган, полученный путем комплементации бластоцисты, причем бластоциста содержит клетки, которые являются нуль-зиготными по генам NKX2-5, HANDI и ТВХ5 или их комбинации.
