Животные, отличные от человека, с нарушением в локусе c9orf72 - RU2017145143A
Код документа: RU2017145143A
Формула
1. Грызун, содержащий в своем геноме делецию всей кодирующей последовательности в локусе C9orƒ72.
2. Грызун по п. 1, причем делеция предусматривает делецию по меньшей мере экзонов 2-11 целиком или частично.
3. Грызун по любому из предыдущих пунктов, причем локус C9orƒ72 содержит репортерный ген.
4. Грызун по п. 3, причем репортерный ген является функционально связанным с промотором C9orƒ72.
5. Грызун по п. 4, причем промотор C9orƒ72 представляет собой эндогенный промотор.
6. Грызун по любому из пп. 3-5, причем локус C9orƒ72 лишен геномной последовательности C9orƒ72, содержащей участок с кодирующей части экзона 2 по кодирующую часть экзона 11, и содержит репортерный ген.
7. Грызун по п. 6, причем репортерный ген является функционально связанным с экзоном 1 локуса C9orƒ72.
8. Грызун по любому из пп. 3-7, причем репортерный ген является выбранным из группы, состоящей из lacZ, люциферазы, зеленого флуоресцентного белка (GFP), улучшенного GFP (eGFP), голубого флуоресцентного белка (CFP), желтого флуоресцентного белка (YFP), улучшенного желтого флуоресцентного белка (eYFP), синего флуоресцентного белка (BFP), улучшенного синего флуоресцентного белка (eBFP), DsRed и MmGFP.
9. Грызун по любому из предыдущих пунктов, причем грызун представляет собой крысу или мышь.
10. Грызун по п. 1, причем грызун является гомозиготным в отношении делеции.
11. Грызун по п. 1, причем грызун является гетерозиготным в отношении делеции.
12. Грызун по любому из пп. 1-11, причем у грызуна проявляются в ходе развития один или несколько симптомов ALS и/или FTD, необязательно в возрасте после приблизительно 36 недель или в возрасте после приблизительно 40 недель.
13. Грызун по любому из пп. 1-12, причем у грызуна проявляются прогрессирующие нарушения двигательной функции в возрасте после приблизительно 36 недель, проявляется патология нижних мотонейронов в возрасте после приблизительно 40 недель и/или проявляется снижение массы тела в возрасте после приблизительно 36 недель.
14. Грызун по любому из пп. 1-12, причем у грызуна проявляется в ходе развития одно или несколько из следующего:
(i) митохондриальная дисфункция в мотонейронах, причем митохондриальная дисфункция характеризуется снижением одного или нескольких из митохондриального дыхания, базального дыхания, максимального дыхания, резервной респираторной емкости, выработки АТФ и протонной утечки; или характеризуется повышением соотношения митохондриальной ДНК к ядерной по сравнению с соотношением митохондриальной ДНК к ядерной в мотонейронах контрольного или эталонного грызуна;
(ii) один или несколько симптомов гломерулонефрита, необязательно, в возрасте после приблизительно 35 недель или в возрасте после приблизительно 35-41 недели включительно;
(iii) спленомегалия в возрасте после приблизительно 8 недель;
(iv) лимфаденопатия в возрасте после приблизительно 8 недель, причем необязательно лимфаденопатия является доступной пальпации в возрасте после приблизительно 12-18 недель включительно;
(v) инфильтрация одной или нескольких из плазматических клеток, моноцитов, гранулоцитов и F4/80+ макрофагов, причем необязательно инфильтрация является выявляемой в возрасте после приблизительно 8 недель и в возрасте до 60 недель;
(vi) инфильтрация F4/80+ макрофагов в почку в возрасте после приблизительно 35 недель;
(vii) повышенный уровень одного или нескольких из цитокинов IL-10, IL-12, IL-17, IFN-γ, TNF-α и МСР-1 в сыворотке крови в возрасте после приблизительно 8 недель;
(viii) повышенный уровень IL-12 в сыворотке крови в возрасте после приблизительно 8 недель, который является повышенным приблизительно 6-кратно или более по сравнению с эталонным или контрольным животным, отличным от человека;
(ix) заболевание почки, характеризующееся утолщенной базальной мембраной, образованием цилиндров, отложением иммунных комплексов, мембранопролиферативным гломерулонефритом, интерстициальным мононуклеарным воспалением, гломерулосклерозом, базофильными канальцами или их комбинацией, в возрасте после приблизительно 28-35 недель включительно;
(x) увеличенная популяция миелоидных дендритных клеток в одном или нескольких из селезенки, лимфатических узлов, костного мозга, почки и крови в возрасте после приблизительно 28-35 недель включительно, причем необязательно популяция миелоидных дендритных клеток характеризуется как CD45+CD11b+CD11c+MHCII+;
(xi) повышенный уровень одного или нескольких аутоантител в сыворотке крови в возрасте после приблизительно 8 недель, причем необязательно одно или несколько аутоантител являются выбранными из антител к ревматоидному фактору (антител к RF), антител к дцДНК, антинуклеарных антител (ANA), антител к антигену Смита (anti-Sm), антител к кардиолипину и их комбинаций;
(xii) повышенный уровень F4/80+ макрофагов в одном или нескольких из селезенки, лимфатических узлов, костного мозга, почки и крови в возрасте после приблизительно 28-35 недель включительно, причем необязательно F4/80+ макрофаги характеризуются как CD45+CD11b+F4/80+Ly6G-;
(xiii) увеличенная популяция Т-клеток в одном или нескольких из селезенки, лимфатических узлов, костного мозга, почки и крови в возрасте после приблизительно 28-35 недель включительно, причем необязательно популяция Т-клеток характеризуется как CD8+CD44+, CD8+CD69+, CD8+PD1+, CD4+CD44+, CD4+CD69+ или CD4+PD1+;
(xiv) увеличенная популяция регуляторных Т-клеток в селезенке и/или лимфатических узлах в возрасте после приблизительно 28-35 недель включительно, и при этом популяция регуляторных Т-клеток характеризуется как CD4+FoxP3+; или повышенное содержание фолликулярных Т-хелперных (Tfh) клеток в селезенке, лимфатических узлах и/или крови в возрасте после приблизительно 26 недель, и при этом популяция Tfh-клеток характеризуется как CD4+CXCR5+CD44+ICOS+PD-1+Bcl-6+;
(xv) увеличенная популяция плазматических клеток в одном или нескольких из селезенки, лимфатических узлов и костного мозга в возрасте после приблизительно 8-60 недель включительно, причем необязательно популяция плазматических клеток характеризуется как CD45+CD19-B220-CD138+ или CD45+CD19intB220intCD138+;
(xvi) аутоиммунный лимфопролиферативный синдром (ALPS); или
(xvii) волчаночный нефрит в ходе развития.
15. Выделенная клетка или ткань грызуна, геном которого содержит делецию всей кодирующей последовательности в локусе C9orƒ72.
16. Иммортализированная клеточная линия, полученная из выделенной клетки грызуна по п. 15.
17. Эмбриональная стволовая клетка грызуна, геном которой содержит делецию всей кодирующей последовательности в локусе C9orƒ72.
18. Эмбрион грызуна, полученный из эмбриональной стволовой клетки по п. 17.
19. Способ получения грызуна, геном которого содержит делецию всей кодирующей последовательности в локусе C9orƒ72, причем способ предусматривает модификацию генома грызуна таким образом, чтобы он содержал делецию всей кодирующей последовательности в локусе C9orƒ72, получая таким образом указанного грызуна.
20. Способ по п. 19, причем модификации достигают с помощью процесса, предусматривающего
(a) введение последовательности нуклеиновой кислоты в эмбриональную стволовую клетку грызуна таким образом, чтобы вся кодирующая последовательность в локусе C9orƒ72 была удалена, причем последовательность нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотид, который является гомологичным локусу C9orƒ72;
(b) получение генетически модифицированной эмбриональной стволовой клетки грызуна из (а); и
(c) получение грызуна с применением генетически модифицированной эмбриональной стволовой клетки грызуна из (b).
21. Способ по п. 20, причем последовательность нуклеиновой кислоты содержит один или несколько маркеров для отбора.
22. Способ по п. 20 или 21, причем последовательность нуклеиновой кислоты содержит один или несколько сайтов для сайт-специфической рекомбинации.
23. Способ по п. 22, причем последовательность нуклеиновой кислоты содержит ген рекомбиназы и маркер для отбора, фланкированные сайтами распознавания для рекомбиназы, причем сайты распознавания для рекомбиназы ориентированы таким образом, чтобы управлять вырезанием.
24. Способ по п. 23, причем последовательность нуклеиновой кислоты дополнительно содержит репортерный ген, который необязательно находится ниже относительно маркера для отбора.
25. Способ по п. 24, причем ген рекомбиназы является функционально связанным с промотором, который управляет экспрессией гена рекомбиназы в дифференцированных клетках и не управляет экспрессией гена рекомбиназы в недифференцированных клетках.
26. Способ по п. 24, причем ген рекомбиназы является функционально связанным с промотором, который является транскрипционно компетентным и регулируемым стадией развития.
27. Способ по п. 26, причем промотор представляет собой или содержит SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 7.
28. Способ по любому из пп. 20-27, дополнительно предусматривающий стадию скрещивания грызуна, полученного в (с), таким образом, чтобы получить грызуна, гомозиготного в отношении делеции.
29. Способ по п. 19 или 20, причем делеция предусматривает делецию по меньшей мере экзонов 2-11 целиком или частично.
30. Способ по п. 29, причем делеция включает в себя участок с кодирующей части экзона 2 по кодирующую часть экзона 11.
31. Способ по п. 29 или 30, причем локус C9orƒ72 содержит репортерный ген.
32. Способ по п. 31, причем репортерный ген является функционально связанным с промотором C9orƒ72.
33. Способ по п. 32, причем промотор C9orƒ72 представляет собой эндогенный промотор.
34. Способ по любому из пп. 31-33, причем локус C9orƒ72 лишен экзонов 2-10 и содержит репортерный ген.
35. Способ по п. 34, причем репортерный ген является функционально связанным с экзоном 1 локуса C9orƒ72.
36. Способ по любому из пп. 32-35, причем репортерный ген является выбранным из группы, состоящей из lacZ, люциферазы, GFP, eGFP, CFP, YFP, eYFP, BFP, eBFP, DsRed и MmGFP.
37. Способ по любому из пп. 19-36, причем грызун представляет собой крысу или мышь.
38. Грызун, полученный с помощью способа по любому из пп. 19-37.
39. Способ идентификации терапевтического кандидата для лечения заболевания или состояния у грызуна, причем способ предусматривает
(а) введение средства-кандидата грызуну по любому из пп. 1-14;
(b) осуществление одного или нескольких анализов для определения того, оказывает ли средство-кандидат воздействие на один или несколько признаков, симптомов и/или состояний, ассоциированных с заболеванием или состоянием; и
(c) идентификацию средства-кандидата, которое оказывает воздействие на один или несколько признаков, симптомов и/или состояний, ассоциированных с заболеванием или состоянием, как терапевтического кандидата.
40. Способ по п. 39, причем заболевание или состояние является выбранным из группы, состоящей из нейродегенеративного заболевания или состояния, воспалительного заболевания или состояния, аутоиммунного заболевания или состояния, системной красной волчанки (SLE), аутоиммунного лимфопролиферативного синдрома (ALPS) и волчаночного нефрита.
41. Способ по п. 40, причем ALPS характеризуется повышенным уровнем IL-10, антител к ревматоидному фактору (anti-RF), антинуклеарных антител (ANA) или их комбинаций в сыворотке крови; волчаночный нефрит характеризуется пролиферацией и/или разрастанием мезангиальной ткани или одной или несколькими аномалиями канальцев.
42. Способ по п. 40, причем нейродегенеративное заболевание или состояние представляет собой боковой амиотрофический склероз (ALS) или лобно-височную деменцию (FTD), воспалительное заболевание или состояние представляет собой гломерулонефрит, или аутоиммунное заболевание или состояние представляет собой гломерулонефрит.
