Животные, отличные от человека, с нарушением в локусе c9orf72 - RU2020115485A
Код документа: RU2020115485A
Формула
1. Выделенный мотонейрон, геном которого содержит делецию с кодирующей части экзона 2 по кодирующую часть экзона 11 эндогенного локуса C9orf72.
2. Мотонейрон по п.1, причем локус C9orf72 содержит репортерный ген.
3. Мотонейрон по п.2, причем репортерный ген является функционально связанным с промотором C9orf72.
4. Мотонейрон по п.3, причем промотор C9orf72 представляет собой эндогенный промотор.
5. Способ получения мотонейрона, который содержит делецию с кодирующей части экзона 2 по кодирующую часть экзона 11 эндогенного локуса C9orf72, причем способ включает культивирование и дифференцировку эмбриональной стволовой клетки (ES) грызуна в мотонейрон, где ES-клетка содержит делецию с кодирующей части экзона 2 по кодирующую часть экзона 11 эндогенного локуса C9orf72.
6. Способ по п.5, в котором эмбриоидные тельца образуются из ES-клетки, и эмбриоидные тельца дифференцируются в мотонейрон.
7. Способ по п.5 или п.6, в котором мотонейрон проявляет митохондриальную дисфункцию и/ или окислительный стресс по сравнению с мотонейроном дикого типа.
8. Способ по любому из пп.5-7, причем локус C9orf72 содержит репортерный ген.
9. Способ по п.8, причем репортерный ген является функционально связанным с промотором C9orf72.
10. Способ по п.9, причем промотор C9orf72 представляет собой эндогенный промотор.
11. Способ по любому из пп.5-10, причем ES-клетка грызуна представляет собой ES-клетку крысы.
12. Способ по любому из пп.5-10, причем ES-клетка грызуна представляет собой ES-клетку мыши.
13. Способ по любому из пп.5-12, причем ES-клетка грызуна является гомозиготной или гетерозиготной в отношении делеции.
14. Способ скрининга средства-кандидата для снижения митохондриальной дисфункции
и/или окислительного стресса в мотонейроне, причем способ включает:
(а) культивирование мотонейрона по любому из пп.1-4 или мотонейрона, полученного способом по любому из пп.5-13, в присутствии или отсутствии средства;
(б) определение того, предупреждает ли, ингибирует ли и/или снижает ли средство митохондриальную
дисфункцию и/или окислительный стресс в популяции мотонейронов по сравнению с контрольной популяцией мотонейронов, культивируемых в отсутствие средства; при этом предупреждение, ингибирование и/или снижение окислительного стресса в мотонейронах указывает на средство-кандидат для снижения митохондриальной дисфункции и/или окислительного стресса в мотонейроне.
15. Нацеливающий вектор для модификации эндогенного локуса C9orf72 грызуна, вектор, содержащий 5' и 3' гомологичные плечи, которые могут подвергаться гомологичной рекомбинации с эндогенным локусом C9orf72, где после гомологичной рекомбинации с нацеливающим вектором часть эндогенного локуса C9orf72 удаляется с кодирующей части экзона 2 по кодирующую часть экзона 11, где грызун является крысой или мышью.
16. Нацеливающий вектор по п.15, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты для вставки, которая заменяет с кодирующей части экзона 2 по кодирующую часть экзона 11 эндогенного локуса C9orf72.
17. Нацеливающий вектор по п.15 или 16, в котором вставка нуклеиновой кислоты кодирует репортерный ген и/или селектируемый маркер.
18. Нацеливающий вектор по п.17, где репортерный ген кодирует любую из β-галактозидазы (lacZ), люциферазы, зеленого флуоресцентного белка (GFP), улучшенного GFP (eGFP), голубого флуоресцентного белка (CFP), желтого флуоресцентного белка (YFP), улучшенного желтого флуоресцентного белка (eYFP), синего флуоресцентного белка (BFP), улучшенного синего флуоресцентного белка (eBFP), DsRed и MmGFP или их комбинацию.
19. Нацеливающий вектор по любому из пп.16-18, причем вставка нуклеиновой кислоты фланкирована сайтами распознавания для сайт-специфической рекомбиназы.
20. Нацеливающий вектор по п.19, дополнительно содержащий последовательность, кодирующую рекомбиназу.
21. Нацеливающий вектор по п.20, в котором последовательность, кодирующая рекомбиназу, функционально связана с промотором.
22. Нацеливающий вектор по п.21, причем промотор регулируется стадией развития, в результате чего рекомбиназа экспрессируется в недифференцированных клетках.
23. Клетка крысы или мышь, содержащая нацеливающий вектор по любому из пп.15-22.
