Локусы функциональности fad2 и соответствующие специфичные к участку-мишени связывающие белки, способные индуцировать направленные разрывы - RU2015112584A

Реферат

1. Способ модификации генома клетки, причем способ включает:сайт-специфическое расщепление участка-мишени в гене FAD2 клетки, тем самым внося разрыв в ген FAD2;где ген FAD2 модифицируют после расщепления.2. Способ по п. 1, где способ дополнительно включает встраивание в разрыв представляющей интерес последовательности нуклеиновой кислоты.3. Способ по п. 1 или 2, где ген FAD2 представляет собой ген FAD2A, FAD2A', FAD2C и/или FAD2C'.4. Способ по п. 1 или 2, где сайт-специфическое расщепление включает введение слитого белка, содержащего ДНК-связывающий домен и домен расщепления или половинный домен расщепления в клетку, или полинуклеотида, кодирующего слитый белок, где слитый белок специфически связывается с участком-мишенью и осуществляет расщепление в участке-мишени или вблизи участка-мишени, тем самым внося разрыв.5. Способ по п. 4, где ДНК-связывающий домен выбран из группы, состоящей из ДНК-связывающего домена мегануклеазы, ДНК-связывающего домена лейциновой молнии, ДНК-связывающий домен белка, подобного активаторам транскрипции (TAL), РНК-направляемой CRISPR-Cas9, рекомбиназы, ДНК-связывающего домена белка с цинковыми пальцами и химерных комбинаций любого из указанных выше.6. Способ по п. 4, где домен расщепления или половинный домен расщепления выбран из группы, состоящей из половинного домена расщепления из эндонуклеазы рестрикции типа IIS, половинного домена расщепления из эндонуклеазы FokI, половинного домена расщепления из эндонуклеазы StsI и хоминг-эндонуклеазы.7. Способ по п. 4, где слитый белок представляет собой нуклеазу с цинковыми пальцами.8. Способ по п. 7, где нуклеаза с цинковыми пальцами содержит от трех до шести доменов цинковых пальцев, каждый домен цинковых пальцев содержит распознающую спиральную