Функциональные локусы fad2 и соответствующие специфичные для сайта-мишени связывающиеся белки, способные индуцировать направленные разрывы - RU2015112583A

Реферат

1. Способ модификации гена FAD2 в клетке сои, включающий:расщепление сайт-специфическим образом сайта-мишени в гене FAD2 клетки сои для создания разрыва в гене FAD2;при этом ген FAD2 модифицируется после расщепления.2. Способ по п. 1, дополнительно включающий интегрирование в разрыв интересующей нуклеотидной последовательности.3. Способ по п. 1 или 2, в котором ген FAD2 представляет собой ген FAD2 2.3, FAD2 2.6 или оба.4. Способ по п. 1 или 2, в котором расщепление сайт-специфическим образом включает введение слитого белка, содержащего ДНК-связывающий домен и расщепляющий домен или расщепляющий полудомен, в клетку, либо полинуклеотида, кодирующего слитый белок, при этом слитый белок специфически связывается с сайтом-мишенью и осуществляет расщепление в, или рядом с сайтом-мишенью для создания, таким образом, разрыва.5. Способ по п. 4, в котором ДНК-связывающий домен выбран из группы, состоящей из ДНК-связывающего домена мегануклеазы, ДНК-связывающего домена лейциновых «молний», подобного активатору транскрипции (TAL) ДНК-связывающего домена, РНК-направляемых CRISPR-Cas9, рекомбиназы, ДНК-связывающего домена белка с «цинковыми пальцами», а также химерных комбинаций любых из вышеперечисленных.6. Способ по п. 4, в котором расщепляющий домен или расщепляющий полудомен выбран из группы, состоящей из расщепляющего полудомена из эндонуклеазы рестрикции типа IIS и хоминг-эндонуклеазы.7. Способ по п. 4, в котором слитый белок представляет собой нуклеазу с «цинковыми пальцами».8. Способ по п. 7, в котором нуклеаза с «цинковыми пальцами» содержит от трех до шести доменов «цинковых пальцев», при этом каждый домен «цинковый палец» содержит спиральную область узнавания, и белок с «цинковыми пальцами» содержит спиральные области