Лиганды к рецептору фолликулостимулирующего гормона (fsh) в диагностике и лечении опухолей - RU2019113739A
Код документа: RU2019113739A
Формула
1. Лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ), содержащий β-субъединицу фолликулостимулирующего гормона человека (ФСГβ) или последовательность, соответствующую SEQ. ID. no. 2, для применения в медицине.
2. Лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ) по п. 1, содержащий последовательность, соответствующую SEQ. ID. no. 2, которая кодируется последовательностью, соответствующей SEQ. ID. no. 3.
3. Лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ), содержащий последовательность, соответствующую SEQ. ID. no. 2 по п. 1, включающий сайты гликозилирования в остатках аргинина N13 и N30 зрелого белка, причем каждый из упомянутых сайтов гликозилирования включает в себя по два остатка N-ацетилглюкозамина и остатки маннозы.
4. Лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ) по п. 1 для применения в медицине для лечения и/или диагностики опухолей.
5. Лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ) по п. 4 для применения в лечении и/или диагностике опухолей, причем упомянутые опухоли являются первичными или метастатическими солидными опухолями.
6. Лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ) по п. 4 для применения в лечении опухолей, причем упомянутые опухоли включают рак простаты и, в частности, аденокарциному простаты, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак поджелудочной железы, рак почки, рак легких, рак печени, рак яичка, рак яичников, рак мозга и рак щитовидной железы, саркому и нейробластому.
7. Лиганд по п. 4, в котором упомянутая опухоль, и, предпочтительно, упомянутая нейробластома имеет место у пациента детского возраста, и, предпочтительно, у пациента в возрасте до 6 лет.
8. Лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ) по п. 1 для применения в лечении опухолей, в котором упомянутый лиганд конъюгирован с молекулой, имеющей противоопухолевую активность, выбранной из группы, содержащей:
- класс цитотоксических агентов, в котором такие соединения предпочтительно выбираются из группы, включающей: антагонисты пиримидина, такие как капецитабин, ингибиторы фермента, такие как семейство камптотецинов, например, иринотекан;
- класс алкилирующих агентов, в котором такие соединения предпочтительно выбираются из группы, включающей: семейство солей металлов, таких как цисплатин, ДНК-интеркаляторов, таких как доксорубицин, семейство антрациклинов;
- класс модуляторов синтеза белка, в котором такие соединения предпочтительно выбираются из группы, включающей: семейство ингибиторов протеасом, такие как бортезомиб, семейство ингибиторов mTOR, такие как темсиролимус;
- класс ингибиторов митоза, в котором такие соединения предпочтительно выбираются из группы, включающей: семейства ансамитоцина, например, майтанзин, семейства ингибиторов полимеризации микротрубочек, например, ауристатин Е;
- класс β-излучающих радиоактивных изотопов, в котором такие соединения предпочтительно выбираются из группы, включающей:131I,169Er,177Lu,186Re,153Sm,89Sr и90Y.
9. Лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ) по п. 1 в конъюгированной или не конъюгированной форме для применения в лечении опухолей в комбинации с одним или более агентами с противоопухолевой активностью.
10. Лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ) по п. 1 для применения в диагностике опухолей и/или для проведения in vitro анализа, в котором указанный лиганд конъюгирован:
- с флуоресцирующими молекулами, выбранными из группы, включающей: флуоресцеин изотиоцианата (FITC), фикоэритрин (PE) или индоцианин (Cy5); или
- с радиоактивными молекулами, выбранными из группы, содержащей:123I,111In,188Re,18F,35S,99Tc;
- с наночастицами.
11. Лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ), отличающийся тем, что он содержит аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ. ID. no. 2.
12. Лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ) по п. 11, характеризующийся последовательностью по меньшей мере на 90% схожую с последовательностью, соответствующей SEQ. ID. no. 2, предпочтительно на 90-99% и более предпочтительно на 95-97%.
13. Лиганд фолликулостимулирующего гормона человека (ФСГ) по п. 11, в котором упомянутая аминокислотная последовательность характеризуется содержанием сайтов гликозилирования в остатках аргинина N13 и N30 зрелого белка, причем каждый из упомянутых сайтов гликозилирования включает по два остатка N-ацетилглюкозамина и остатки маннозы.
14. Лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ) по п. 11 или представляющий собой β-субъединицу фолликулостимулирующего гормона (ФСГβ), где упомянутый лиганд конъюгирован с молекулой, имеющей противоопухолевую активность, выбранной из группы, содержащей:
- класс цитотоксических агентов, в котором такие соединения предпочтительно выбираются из группы, содержащей: антагонисты пиримидина, такие как капецитабин, ингибиторы фермента, такие как семейство камптотецинов, например, иринотекан;
- класс алкилирующих агентов, в котором такие соединения предпочтительно выбираются из группы, содержащей: семейство солей металлов, таких как цисплатин, ДНК-интеркаляторов, таких как доксорубицин, семейство антрациклинов;
- класс модуляторов синтеза белка, в котором такие соединения предпочтительно выбираются из группы, содержащей: семейства ингибиторов протеасом, такие как бортезомиб, семейства ингибиторов mTOR (мишень рапамицина у млекопитающих), такие как темсиролимус;
- класс ингибиторов митоза, в котором такие соединения предпочтительно выбираются из группы, содержащей: семейства ансамитоцина, например, майтанзин, семейства ингибиторов полимеризации микротрубочек, например, ауристатин Е;
- класс β-излучающих радиоактивных изотопов, в котором такие соединения предпочтительно выбираются из группы, содержащей:131I,169Er,177Lu,186Re,153Sm,89Sr и90Y.
15. Лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ) по п. 11, в котором упомянутый лиганд конъюгирован с молекулой, имеющей диагностическую активность, выбранной из группы, содержащей:
- флуоресцирующие молекулы, выбранные из группы, содержащей: флуоресцеин изотиоцианата (FITC), фикоэритрин (РЕ) или индоцианин (Cy5);
- радиоактивные молекулы, выбранные из группы, содержащей:123I,111In,188Re,18F,35S,99Tc;
- наночастицы.
16. Фармацевтический препарат, включающий лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ), по п. 11, и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей и/или наполнителей.
17. Фармацевтический препарат по п. 16 для внутривенного введения.
18. Применение лиганда рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ) по п. 11 для in vitro инактивации указанного рецептора.
19. Способ получения лиганда рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ) по п. 11, включающий этап модификации С-терминального участка последовательности β субъединицы фолликулостимулирующего гормона человека (ФСГβ) посредством введения аминокислотной последовательности KDEL.
20. Способ получения лиганда рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ) по п. 19, включающий дополнительный этап введения His-метки в N-терминальный конец последовательности β субъединицы фолликулостимулирующего гормона человека (ФСГβ).
21. Лиганд рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ) по п. 11, содержащий последовательность, соответствующую SEQ. ID. no. 2, в котором упомянутая субъединица получена технологией на основе рекомбинантной ДНК.
22. Лиганд фолликулостимулирующего гормона человека (ФСГ) по п. 11 для медицинского применения в лечении нейробластомы, в котором упомянутый лиганд в конъюгированной или не конъюгированной форме используется в комбинации с одним или несколькими агентами с противоопухолевой активностью.
23. Способ получения лиганда рецептора фолликулостимулирующего гормона человека (РФСГ), характеризующийся наличием β субъединицы фолликулостимулирующего гормона человека (ФСГβ), включающий этапы:
I) получение подходящего вектора, трансформированного плазмидой, содержащей последовательность, соответствующую SEQ. ID. no. 3;
II) трансформирование клеток Nicotiana benthamiana вектором с этапа I);
III) отбор клеток Nicotiana benthamiana;
IV) культивирование стабильных клеток Nicotiana benthamiana;
V) приготовление клеточного экстракта;
VI) очистка лиганд рецептора РФСГ,
где культивация упомянутых клеток Nicotiana benthamiana осуществляется в суспензии.
24. Способ по п. 23, в котором вектор с этапа I) представлен Agrobacterium tumefaciens.
25. Способ по п. 23, в котором на этапе II) трансформация осуществляется в течение 48 часов совместного культивирования в темноте при температуре около 25°C и при постоянном перемешивании.
26. Способ по п. 23, в котором на этапе III) используется селективная среда, которая содержит MS с добавлением 0,9% (w/v) агара и антибиотиков.
27. Способ по п. 23, в котором на этапе III) используются карбенициллин и канамицин.
28. Способ по п. 23, в котором на этапе V), клетки Nicotiana benthamiana подвергаются инкубации в питательной среде MS (Мурасиге 1962) с добавлением сахарозы, нафтилуксусной кислоты (NAA) и кинетина в течение 15 дней при температуре 24-27°C и с поддержанием аэрации 50-100 мбар.
29. Способ по п. 23, в котором на этапе V) используется буфер для экстракции, который содержит: 50 ммоль Na2HPO4, 150 мМ NaCl, 20 мМ лимонной кислоты, 40 мМ аскорбиновой кислоты, 5 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты EDTA, 1 мМ фенилметилсульфонил хлорида PMSF, 0,05% (v/v) Tвин-20, pH 6,5 с добавлением 1% (w/v) XAD-4 и 1% (w/v) поливинилполипирролидона (PVPP).
30. Способ по п. 23, в котором этап VI) проводится с последовательным использованием: хроматографической колонки IMAC, колонки для обессоливания и ионообменной хроматографической колонки.
Комментарии