Способ введения вещества в растение - RU2018138200A
Код документа: RU2018138200A
Формула
1. Способ введения вещества в растение, включающий стадии:
получения ферментативно обработанной и выделенной оплодотворенной яйцеклетки посредством
(1-i) выделения оплодотворенной яйцеклетки из ткани растения, содержащей оплодотворенную яйцеклетку, а затем обработки оплодотворенной яйцеклетки ферментным раствором, содержащим фермент, деградирующий ткань растения, в условиях низкого титра,
(1-ii) обработки ткани растения, содержащей оплодотворенную яйцеклетку, ферментным раствором, содержащим фермент, деградирующий ткань растения, в условиях низкого титра, а затем выделения ферментативно обработанной оплодотворенной яйцеклетки, или
(1-iii) обработки ткани растения, содержащей оплодотворенную яйцеклетку, ферментным раствором, содержащим фермент, деградирующий ткань растения, в условиях низкого титра, и одновременно выделения ферментативно обработанной оплодотворенной яйцеклетки; и
(2) введения вещества, выбранного из группы, состоящей из нуклеиновых кислот, белков и пептидов, в полученную ферментативно обработанную и выделенную оплодотворенную яйцеклетку.
2. Способ введения вещества в растение, включающий стадии:
получения ферментативно обработанной и выделенной оплодотворенной яйцеклетки посредством
(1-iv) выделения яйцеклетки и спермия из растения, слияния клеток с получением оплодотворенной яйцеклетки, а затем обработки оплодотворенной яйцеклетки ферментным раствором, содержащим фермент, деградирующий ткань растения, в условиях низкого титра, или
(1-v) обработки ткани растения, содержащей яйцеклетку, ферментным раствором, содержащим фермент, деградирующий ткань растения, в условиях низкого титра, а затем выделения ферментатвно обработанной яйцеклетки и дополнительно слияния яйцеклетки с выделенным спермием; и
(2) введения вещества, выбранного из группы, состоящей из нуклеиновых кислот, белков и пептидов, в полученную ферментативно обработанную и выделенную оплодотворенную яйцеклетку.
3. Способ по п. 1 или 2, где фермент, деградирующий ткань растения, выбран из группы, состоящей из пектиназ, целлюлаз, протеаз, гемицеллюлаз, глюкуронидаз, зимолиаз, хитиназ, глюканаз, ксиланаз, галактаназ, арабинаназ и лигнин-деградирующих ферментов и смесей двух или несколько из этих групп ферментов.
4. Способ по любому из пп. 1-3, где фермент, деградирующий ткань растения, включает пектиназу.
5. Способ по любому из пп. 1-4, где растение представляет собой однодольное растение.
6. Способ по п. 5, где растение выбрано из группы, состоящей из кукурузы, пшеницы, ячменя, риса и сорго.
7. Способ по любому из пп. 1-6, где растение представляет собой кукурузу B73 или сорт кукурузы, происходящий из B73.
8. Способ по любому из пп. 1-6, включающий выделение яйцеклетки из ткани растения, содержащей яйцеклетку, а затем слияние яйцеклетки со спермием с получением оплодотворенной яйцеклетки.
9. Способ по любому из пп. 1-8, где время ферментативной обработки составляет 3 минуты или более и 60 минут или менее.
10. Способ по п. 9, где введение вещества на стадии (2) проводят в пределах 120 минут после ферментативной обработки.
11. Способ по п. 8 или 9, где введение вещества на стадии (2) проводят в пределах 120 минут после слияния со спермием.
12. Способ по п. 9, где фермент, деградирующий ткань растения, включает пектиназу, и количество единиц/мл пектиназы в системе в ходе ферментативной обработки на стадии (1) составляет 60 или менее.
13. Способ по любому из пп. 1-12, где фермент, деградирующий ткань растения, включает пектиназу, и количество единиц/мл пектиназы в системе в ходе ферментативной обработки стадии (1), умноженное на время обработки, составляет 310 или менее.
14. Способ по любому из пп. 1-13, где введение вещества на стадии (2) проводят с использованием способа с PEG или способа электропорации.
15. Способ введения вещества в растение, включающий стадии:
получения ферментативно обработанной и выделенной оплодотворенной яйцеклетки посредством
(1-i) выделения оплодотворенной яйцеклетки из ткани растения, содержащей оплодотворенную яйцеклетку, а затем обработки оплодотворенной яйцеклетки ферментным раствором, содержащим фермент, деградирующий ткань растения, в условиях низкого титра,
(1-ii) обработки ткани растения, содержащей оплодотворенную яйцеклетку, ферментным раствором, содержащим фермент, деградирующий ткань растения, в условиях низкого титра, а затем выделения ферментативно обработанной оплодотворенной яйцеклетки, или
(1-iii) обработки ткани растения, содержащей оплодотворенную яйцеклетку, ферментным раствором, содержащим фермент, деградирующий ткань растения, в условиях низкого титра, и одновременно выделения ферментативно обработанной оплодотворенной яйцеклетки;
(2) введения вещества, выбранного из группы, состоящей из нуклеиновых кислот, белков и пептидов, в полученную ферментативно обработанную и выделенную оплодотворенную яйцеклетку;
(3) проведения формирования каллюса или подобной зародышу структуры из оплодотворенной яйцеклетки, в которую введено вещество; и
(4) регенерации сформированной в виде каллюса или подобной зародышу структуры ткани в среде для регенерации.
16. Способ введения вещества в растение, включающий стадии:
получения ферментативно обработанной и выделенной оплодотворенной яйцеклетки посредством
(1-iv) выделения яйцеклетки и спермия из растения, слияния клеток с получением оплодотворенной яйцеклетки, а затем обработки оплодотворенной яйцеклетки ферментным раствором, содержащим фермент, деградирующий ткань растения, в условиях низкого титра, или
(1-v) обработки ткани растения, содержащей яйцеклетку, ферментным раствором, содержащим фермент, деградирующий ткань растения, в условиях низкого титра, а затем выделения ферментатвно обработанной яйцеклетки и дополнительно слияния яйцеклетки с выделенным спермием;
(2) введения вещества, выбранного из группы, состоящей из нуклеиновых кислот, белков и пептидов, в полученную ферментативно обработанную и выделенную оплодотворенную яйцеклетку;
(3) проведения формирования каллюса или подобной зародышу структуры из оплодотворенной яйцеклетки, в которую введено вещество; и
(4) регенерации сформированной в виде каллюса или подобной зародышу структуры ткани в среде для регенерации.
17. Растение с введенным веществом, полученное способом по любому из пп. 1-16.
