Бактериальные штаммы и их применение для борьбы с болезнью растения - RU2746928C2

Чертежи

Описание

По настоящей заявке испрашивается приоритет по предварительной заявке U.S. № 62/320840, поданной 11 апреля 2016 г., и по предварительной заявке U.S. № 62/211282, поданной 28 августа 2015, которые обе во всей своей полноте включены в настоящее изобретение в качестве ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к бактериальным штаммам и популяциям для борьбы с болезнью растения и/или улучшения представляющего интерес агротехнического признака растения.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Болезни растений приводят к большим потерям в сельском хозяйстве. Проявления могут находиться в диапазоне от слабовыраженных признаков до катастрофического повреждения растения, что может привести к значительным экономическим и социальным последствиям. Необходимы способы эффективной борьбы с болезнями растений и вызывающими их патогенами.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к композициям и способам борьбы с болезнью растения и/или для улучшения по меньшей мере одного представляющего интерес агротехнического признака растения. Такие композиции и способы включают группу агентов для биологического регулирования или бактериальных штаммов, которая обеспечивают борьбу с одним или большим количеством патогенов, которые вызывают болезнь растения, и/или улучшает по меньшей мере один представляющий интерес агротехнический признак. Биологические агенты или бактериальные штаммы можно использовать в качестве инокулята для растений. Настоящее изобретение также относится к способам выращивания растения, восприимчивого к болезни растения и способам и композициям для борьбы с болезнью растения. Настоящее изобретение также относится к способам и композициям увеличения устойчивости к болезни растений. Настоящее изобретение также относится к способам и композициям для улучшения жизнеспособности растения и/или улучшения по меньшей мере одного представляющего интерес агротехнического признака.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На фиг. 1 представлено подавления развития азиатской ржавчины сои (ASR) на цельном растении в климатических камерах разными бактериальными штаммами. Фунгицид азоксистробин и (+) контрольный штамм добавляли в качестве положительных контролей, а AFS006 и инокулированный контроль были отрицательными контролями.

На фиг. 2 представлено количество проростков (густота стояния) на акр при использовании бактериальных штаммов AIP061892 и AIP079428. На фиг. 2 показано, что AIP061892 и AIP079428 приводят примерно к 2-кратному увеличению прорастания по сравнению с инокулированным Pythium контролем.

На фиг. 3 представлено количество проростков (густота стояния) на акр при использовании бактериальных штаммов AIP061892 и AIP079428. На фиг. 3 показано, что AIP061892 приводит к 50% восстановлению прорастания по сравнению с инокулированным Rhizoctoniasolani контролем.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

I. Обзор

Настоящее изобретение относится к композициям и способам для улучшения по меньшей мере одного представляющего интерес агротехнического признака и/или улучшения жизнеспособности растения, и/или для борьбы с одной или большим количеством болезней растения. Биологический агент, агент для биологического регулирования, бактериальный штамм, модифицированный бактериальный штамм, модифицированный биологический агент, или модифицированный агент для биологического регулирования или его активный вариант используются в настоящем изобретении для описания микроорганизма, который используют для борьбы с вызывающими болезнь патогенами растений и/или улучшения по меньшей мере одного представляющего интерес агротехнического признака, и/или улучшения жизнеспособности растения.

II. Бактериальные штаммы

Настоящее изобретение относится к различным агентам для биологического регулирования или бактериальным штаммам, которые можно использовать для борьбы с одной или большим количеством болезней растения и/или улучшения по меньшей мере одного представляющего интерес агротехнического признака и/или улучшения жизнеспособности растения. Такие бактериальные штаммы включают AIP27511 (штамм Bacillus drentensis), AIP35174 (штамм Bacillus thuringiensis, AIP25773 (штамм Bacillus flexus), AIP15251 (штамм Bacillus frigoritolerans), AIP61892 (штамм Bacillus subtilus subsp. Subtilus), AIP79428 (штамм Burkholderia vietnamiensis), AIP14931 (штамм Bacillus thuringiensis), AIP39589 (штамм Bacillus acidiceler) и AIP36895 (штамм Bacillus simplex). Настоящее изобретение относится к популяциям клеток, включающих один или большее количество из следующих: AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 и AIP36895, а также популяциям спор, образованных из каждого из этих штаммов, или любым их препаратам.

Таким образом, различные бактериальные штаммы и/или пестицидные композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, включают в качестве активного ингредиента (a) популяцию клеток, включающую один или большее количество из следующих: AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 и AIP36895 или активный вариант любого из них, или (b) популяцию спор, образованных из одного или большего количества из следующих: AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 и AIP36895, или активного варианта любого из них.

AIP27511 депонирован в Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A. 6 августа 2015 г. и ему присвоен номер NRRL No. B-67082.

AIP35174 депонирован в Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A. 6 августа 2015 г. и ему присвоен номер NRRL No. B-67084.

AIP25773 депонирован в Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A. 6 августа 2015 г. и ему присвоен номер NRRL No. B-67085.

AIP15251 депонирован в Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A. 6 августа 2015 г. и ему присвоен номер NRRL No. B-67083.

AIP61892 депонирован в Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A. 6 августа 2015 г. и ему присвоен номер NRRL No. B-67089.

AIP79428 депонирован в Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A. 6 августа 2015 г. и ему присвоен номер NRRL No. B-67081.

AIP14931 депонирован в Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A. 6 августа 2015 г. и ему присвоен номер NRRL No. B-67088.

AIP39589 депонирован в Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A. 6 августа 2015 г. и ему присвоен номер NRRL No. B-67087.

AIP36895 депонирован в Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A. 6 августа 2015 г. и ему присвоен номер NRRL No. B-67086.

Каждый из депозитов, указанных выше, сохранен в соответствии условиями Будапештского договора о признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры. Каждый депозит совершен в основном для удобства специалистов в данной области техники и не служит признанием того, что депозит необходим в соответствии с 35 U.S.C. 112.

Термин "изолированная" включает бактерию, спору или другой объект или вещество, которое (1) было выделено по меньшей мере из некоторых из компонентов, с которыми оно было связано при первоначальном образовании (в природе или в экспериментальной установке) и/или (2) получено, приготовлено, очищено и/или изготовлено вручную человеком. Изолированные бактерии можно отделить по меньшей мере примерно от 10%, примерно 20%, примерно 30%, примерно 40%, примерно 50%, примерно 60%, примерно 70%, примерно 80%, примерно 90% или большего количества других компонентов, с которыми оно было первоначально связано.

При использовании в настоящем изобретении вещество является "чистым", если оно в основном не содержит другие компоненты. Термины "очищать", "очищение" и "очищают" означают бактерию, спору или другой материал, который был выделен по меньшей мере из некоторых из компонентов, с которыми оно было связан или когда он был первоначально получен или образован (например, в природе или в экспериментальной установке), или через некоторое время после его первоначального получения. Бактерию, спору или популяцию бактерий или популяцию спор можно считать очищенной, если она выделена по время или после получения, например, из материала или среды, содержащей бактерию или популяцию бактерий или спор, и очищенная бактерия или популяция бактерий или спор может содержать другие материалы в количестве, составляющем примерно до 10%, примерно 20%, примерно 30%, примерно 40%, примерно 50%, примерно 60%, примерно 70%, примерно 80%, примерно 90% или более примерно 90% все же считать очищенной. В некоторых вариантах осуществления очищенные бактерии или споры и популяции бактерий или популяцию спор обладают чистотой, составляющей более примерно 80%, примерно 85%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или более примерно 99%. В предпочтительных вариантах осуществления культура бактерий не содержит другие виды бактерий в количествах, которые обнаруживаются с помощью обычных бактериологических методик.

"Популяция" означает группу или набор, который включает два или большее количество элементов (т.е. 10, 100, 1000, 10000, 1×10⁶, 1×10⁷ или 1×10⁸, или более). В настоящем изобретении предложены различные композиции, которые включают популяцию по меньшей мере одного бактериального штамма. В предпочтительных вариантах осуществления популяция по меньшей мере одного из бактериальных штаммов (т. е. AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 и AIP36895 или активного варианта любого из них, или споры или предспоры, или комбинация клеток, предспор и/или спор, образованная из одного или большего количества из следующих: AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 и AIP36895 или активного варианта любого из них) включает концентрацию, равную по меньшей мере от примерно 10⁵ КОЕ/мл до примерно 10¹¹КОЕ/мл, от примерно 10⁵КОЕ/мл до примерно 10¹⁰ КОЕ/мл, от примерно 10⁵ КОЕ/мл до примерно 10¹² КОЕ/мл, от примерно 10⁵ КОЕ/мл до примерно 10⁶ КОЕ/мл, от примерно 10⁶ КОЕ/мл до примерно 10⁷ КОЕ/мл, от примерно 10⁷ КОЕ/мл до примерно 10⁸ КОЕ/мл, от примерно 10⁸ КОЕ/мл до примерно 10⁹ КОЕ/мл, от примерно 10⁹ КОЕ/мл до примерно 10¹⁰ КОЕ/мл, от примерно 10¹⁰ КОЕ/мл до примерно 10¹¹ КОЕ/мл, от примерно 10¹¹ КОЕ/мл до примерно 10¹² КОЕ/мл. В других вариантах осуществления концентрация бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта включает равную по меньшей мере примерно 10⁵КОЕ/мл, по меньшей мере примерно 10⁶ КОЕ/мл, по меньшей мере примерно 10⁷ КОЕ/мл, по меньшей мере примерно 10⁸ КОЕ/мл, по меньшей мере примерно 10⁹ КОЕ/мл, по меньшей мере примерно 10¹⁰ КОЕ/мл, по меньшей мере примерно 10¹¹ КОЕ/мл, или по меньшей мере примерно 10¹² КОЕ/мл.

"Спора" означает по меньшей мере одну покоящуюся (при нанесении), но жизнеспособную репродуктивную единицу вида бактерии. Неограничивающие способы, с помощью которых споры получают из каждого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 и AIP36895 (или вариантов любого из них) раскрыты в другом разделе настоящего изобретения. Также следует отметить, что популяции, раскрытые в настоящем изобретении могут включать комбинацию бесспоровых клеток и предспор (клетки на промежуточной стадии образования спор); комбинацию предспор и спор; или комбинацию предспор, бесспоровых клеток и/или спор.

Композиции, включающие бактериальный штамм (т.е. по меньшей мере один из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 и AIP36895 или активный вариант любого из них, или спору или предспору, или комбинацию клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них) могут дополнительно включать сельскохозяйственно приемлемый носитель. Термин "сельскохозяйственно приемлемый носитель" включает любой материал, который облегчает нанесение композиции на предназначенный для этого объект (т.е. на растение или часть растения, восприимчивого к представляющей интерес болезни растения (т.е. к азиатской ржавчине сои (ASR), или к любой другой болезни, раскрытой в настоящем изобретении, или на растение или часть растения для улучшения представляющего интерес агротехнического признака). Носители, использующиеся в композициях для нанесения на растения и части растений, предпочтительно являются нефитотоксичными или лишь слабо фитотоксичными. Подходящий носитель может быть твердым, жидким или газообразным в зависимости от желательного препарата. В одном варианте осуществления носители включают полярные или неполярные жидкие носители, такие как вода, минеральные масла и растительные масла. Дополнительные носители раскрыты в другом разделе настоящего изобретения.

A. Активные варианты бактериального штамма

Настоящее изобретение также относится к активным вариантам AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 и AIP36895. Такие варианты сохраняют способность бороться с одной или большим количеством болезней растения (т.е. уменьшают тяжесть болезни и/или уменьшают развитие болезни) и/или бороться с одним или большим количеством патогенов растений. В некоторых вариантах осуществления варианты сохраняют способность бороться с одной или большим количеством микозов растения и/или с одним или большим количеством патогенных грибов. В других вариантах осуществления варианты сохраняют способность бороться с ASR.

Активные варианты различных бактериальных штаммов, предлагаемых в настоящем изобретении, включают, например, любой изолят или мутант AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 и AIP36895.

В предпочтительных вариантах осуществления бактериальный штамм совместим с биоцидом. Биоцид является химическим соединением, которое может бороться с организмом химическими или биологическими средствами. Биоциды включают пестициды, такие как фунгициды; гербициды; инсектициды, другие химикаты для защиты растений и т.п. Такие соединения подробно обсуждены в другом разделе настоящего изобретения. Бактериальный штамм совместим с биоцидом, если бактериальный штамм способен выживать и/или размножаться в присутствии эффективного количества представляющего интерес биоцида. В случаях, когда бактериальный штамм несовместим с представляющим интерес биоцидом, при желании способы можно использовать для модификации бактериального штамма для придания представляющей интерес совместимости. Такие способы получения модифицированных бактериальных штаммов включают методики селекции и/или методики трансформации.

"Модифицированный бактериальный штамм" означает популяцию, в которой штамм модифицирован (путем селекции и/или трансформации) для придания одного или большего количества дополнительных представляющих интерес признаков. В некоторых случаях модифицированный бактериальный штамм включает любой из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них. В предпочтительных вариантах осуществления модифицированный бактериальный штамм совместим с представляющим интерес биоцидом, включая, но не ограничиваясь только ею, устойчивость к гербициду, фунгициду, пестициду или другому химикату для защиты растений. Модифицированные устойчивые к биоциду штаммы обладают такими же идентификационными признаками, как исходный чувствительный штамм, с тем отличием, что они значительно более устойчивы к конкретному гербициду, фунгициду, пестициду или другому химикату для защиты растений. Их идентификацию легко провести путем сопоставления с характеристиками известного чувствительного штамма. Таким образом, настоящее изобретение относится к изолированным популяциям модифицированных бактериальных штаммов.

Увеличение устойчивости к биоциду (т.е. например, устойчивость к гербициду, фунгициду, пестициду или другому химикату для защиты растений) означает способность организма (т.е. бактериальной клетки или споры) выживать и размножаться после воздействия дозы биоцида (например, гербицида, фунгицида, пестицида или другого химиката для защиты растений), которая обычно летальна для немодифицированного организма или значительно подавит рост немодифицированного организма. В предпочтительных вариантах осуществления увеличение устойчивости к биоциду продемонстрировано в присутствии сельскохозяйственно эффективного количества биоцида.

В таких случаях модифицированный бактериальный штамм, обладающий устойчивостью к одному или большему количеству биоцидов, применим для увеличения конкурентоспособности бактериальных штаммов, в особенности по сравнению с другими микробными агентами, которые не устойчивы к гербицидам, фунгицидам, пестицидам или другим химикатам для защиты растений. Поэтому композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, включают измененные с помощью селекции или генной инженерии бактериальные штаммы и модифицированные популяции бактериальных штаммов. Эти бактериальные штаммы или модифицированные бактериальные штаммы можно использовать в качестве инокулята для растений. Их также можно наносить путем нанесения опрыскиванием непосредственно на надземные части растений и можно смешать с гербицидом или другим химикатом, для придания устойчивости к которому они были модифицированы.

Таким образом, активные варианты бактериальных штаммов, раскрытые в настоящем изобретении, включают например, модифицированный штамм, так что активный вариант обеспечивает борьбу с болезнью растения, и также могут размножаться в присутствии по меньшей мере одного биоцида.

Рекомбинантные бактериальные штаммы, обладающие устойчивостью к гербициду, фунгициду, пестициду или другому химикату для защиты растений, можно получить по методикам генной инженерии и такие измененные с помощью или рекомбинантные бактериальные штаммы выращивают для получения модифицированной популяции бактериальных штаммов. Рекомбинантный бактериальный штамм получают путем введения полинкулеотидов в бактериальную клетку-хозяина путем трансформации. Способы трансформации микроорганизмов известны и доступны в данной области техники. См. в целом Hanahan, D. (1983) Studies on transformation of Escherichia coli with plasmids J. Mol. Biol. 166, 557-77; Seidman, C.E. (1994) в: Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel, F.M. et al. eds., John Wiley and Sons, NY; Choi et al. (2006) J. Microbiol. Methods 64:391-397; Wang et al. 2010. J. Chem. Technol. Biotechnol. 85:775-778. Трансформация может происходить путем естественного поглощения депротеинизированной ДНК компетентными клетками из их среды в лаборатории. Альтернативно, клетки можно сделать компетентными путем обработки двухвалентными катионами на холоде, путем электропорации, путем воздействия полиэтиленгликоля, путем обработки волокнистыми наночастицами или по другим методикам, хорошо известным в данной области техники.

Гены устойчивости к гербициду для использования в трансформации рекомбинантного бактериального штамма включают, но не ограничиваются только ими, гены детоксификация фумонизина (патент U.S. № 5792931); мутанты ацетолактатсинтазы (ALS), которые приводят к устойчивости к гербицидам, в частности, гербицидам типа сульфонилмочевины, такие как мутации S4 и/или Hra; ингибиторы глутаминсинтазы, такие как фосфинотрицин или баста (например, ген bar); и устойчивость к глифосату (ген EPSPS); устойчивость к глуфосинату и HPPD (WO 96/38576, патенты U.S. №№ 6758044; 7250561; 7935869; и 8124846), или другие такие гены, известные в данной области техники. Раскрытия WO 96/38576, патента U.S. № 5792931, патента U.S. № 6758044; патента U.S. № 7250561; патента U.S. № 7935869; и патента U.S. № 8124846 включены в настоящее изобретение в качестве ссылки. Ген bar кодирует устойчивость к гербициду баста, ген nptII кодирует устойчивость к антибиотикам канамицину и генетицину и мутанты гена ALS кодируют устойчивость к сульфонилмочевиновым гербицидам, включая хлорсульфурон, метсульфурон, сульфометурон, никосульфурон, римсульфурон, флазасульфурон, сульфосульфурон и триасульфурон, и имидазолиноновым гербицидам, включая имазетапир, имазахин, имазапир и имазаметабенз.

Для идентификации и получения модифицированной популяции бактериальных штаммов путем селекции бактериальные штаммы выращивают в присутствии гербицида, фунгицида, пестицида или другого химиката для защиты растений в качестве селекционного давления. Восприимчивые агенты погибают, а устойчивые агенты выживают и размножаются без конкуренции. Поскольку бактериальные штаммы выращивают в присутствии гербицида, фунгицида, пестицида или другого химиката для защиты растений, устойчивые бактериальные штаммы успешно размножаются и становятся преобладающими в популяции, которая становится модифицированной популяцией бактериальных штаммов. Способы селекции устойчивых штаммов известны и включают патенты U.S. №№ 4306027 и 4094097, которые включены в настоящее изобретение в качестве ссылки. Активный вариант бактериального штамма, включающий модифицированную популяцию бактериальных штаммов, обладает такими же идентификационными признаками, как исходный чувствительный штамм, с тем отличием, что они значительно более более устойчивы к конкретному гербициду, фунгициду, пестициду или другому химикату для защиты растений. Таким образом, их идентификацию легко провести путем сопоставления с характеристиками известного чувствительного штамма.

Другие активные варианты различных бактерий, предлагаемые в настоящем изобретении, можно идентифицировать с использованием, например, методик, с помощью которых определяют близкородственность между 16S рибосомными РНК, методик идентификации групп образовавших производные и функционально идентичных или близко идентичных штаммов, включающих мультилокусное секвенирование-типирование (MLST), деревья сцепленных общих генов, выравнивание полного генома (WGA), среднюю нуклеотидную идентичность и метрику расстояния MinHash (Mash).

В одном объекте активные варианты бактериального штамма (штаммов) AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895 включают штаммы, которые близкородственны с любым из раскрытых штаммов, что установлено по методике Bishop MLST классификации микрорганизмов, описаной в публикации Bishop et al. (2009) BMC Biology 7(1)1741-7007-7-3. Таким образом, в предпочтительных вариантах осуществления активный вариант бактериального штамма, раскрытого в настоящем изобретении включает бактериальный штамм, который попадает по меньшей мере в 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%. 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 98,5%, 98,8%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% или 99,9% порога отсечения последовательности по данным методики классификации микрорганизмов Bishop, описаной в публикации Bishop et al. (2009) BMC Biology 7(1)1741-7007-7-3, которая во всей своей полноте включена в настоящее изобретение в качестве ссылки. Активные варианты бактерий, идентифицированные по таким методикам, сохраняют способность улучшать по меньшей мере один агротехнический признак при нанесении эффективного количества на растение, часть растения или участок выращивания, включая, например, уменьшение тяжести болезни растения и/или уменьшения развития болезни растения.

В другом объекте активный вариант бактериального штамма (штаммов), раскрытого в настоящем изобретении включает штаммы, которые близкородственны с любым из раскрытых штаммов, что установлено по методике средней нуклеотидной идентичности (ANI) методики классификации микроорганизмов. ANI (см., например, Konstantinidis, K.T., et al., (2005) PNAS USA 102(7):2567-72; и Richter, M., et al., (2009) PNAS 106(45):19126-31) и варианты (см., например, Varghese, N.J., et al., Nucleic Acids Research (July 6, 2015): gkv657) основана на суммировании среднего количества нуклеотидов, общих для геномов штаммов, которые выровнены с помощью WGAs. Таким образом, в предпочтительных вариантах осуществления активный вариант бактериального штамма AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, раскрытого в настоящем изобретении включает бактериальный штамм, который попадает по меньшей мере в 90%, 95%, 96%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 98,8%, 99%, 99,5% или 99,8% порога отсечения последовательности по данным методики ANI классификации микрорганизмов, описаной в публикации Konstantinidis, K.T., et al., (2005) PNAS USA 102(7):2567-72, которая во всей своей полноте включена в настоящее изобретение в качестве ссылки. Активные варианты бактерий, идентифицированные по таким методикам, сохраняют способность улучшать по меньшей мере один агротехнический признак при нанесении эффективного количества на растение, часть растения или участок выращивания, включая, например, уменьшение тяжести болезни растения и/или уменьшение развития болезни растения.

В другом объекте активные варианты изолированного бактериального штамма (штаммов), раскрытого в настоящем изобретении, включают штамм(ы), который близкородственен с любым из указанных выше штаммов (например, близкородственен с AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895) на основании идентичности последовательностей 16S рДНК. См. Stackebrandt E, et al., "Report of the ad hoc committee for the re-evaluation of the species definition in bacteriology," Int J Syst Evol Microbiol. 52(3):1043-7 (2002) относительно использования идентичности последовательностей 16S рДНК для определения близкородственности бактерий. В одном варианте осуществления этот по меньшей мере один штамм по меньшей мере на 95% идентичен с любым из указанных выше штаммов на основании идентичности последовательностей 16S рДНК, по меньшей мере на 96% идентичен с любым из указанных выше штаммов на основании идентичности последовательностей 16S рДНК, по меньшей мере на 97% идентичен с любым из указанных выше штаммов на основании идентичности последовательностей 16S рДНК, по меньшей мере на 98% идентичен с любым из указанных выше штаммов на основании идентичности последовательностей 16S рДНК, по меньшей мере на 98,5% идентичен с любым из указанных выше штаммов на основании идентичности последовательностей 16S рДНК, по меньшей мере на 99% идентичен с любым из указанных выше штаммов на основании идентичности последовательностей 16S рДНК, по меньшей мере на 99,5% идентичен с любым из указанных выше штаммов на основании идентичности последовательностей 16S рДНК или по меньшей мере на 100% идентичен с любым из указанных выше штаммов на основании идентичности последовательностей 16S рДНК. Активные варианты бактерий, идентифицированные по таким методикам, сохраняют способность улучшать по меньшей мере один агротехнический признак при нанесении эффективного количества на растение, часть растения или участок выращивания, включая, например, уменьшение тяжести болезни растения и/или уменьшение развития болезни растения.

Метрика расстояния MinHash (Mash) представляет собой методику сопоставления, в которой определены пороги для иерархической классификации микроорганизмов с высоким разрешением и для которой необходимо небольшое количество параметров и стадий (Ondov et al. (2016) Genome Biology 17:132). Расстояние Mash строго соответствует методике средней нуклеотидной идентичности (ANI) для иерархической классификации (см. публикацию Konstantinidis, K.T. et al. (2005) PNAS USA 102(7):2567-72, которая во всей своей полноте включена в настоящее изобретение в качестве ссылки). Это означает, что ANI, составляющая 97%, примерно равна расстоянию Mash, равному 0,03, так что значения, приведенные в качестве подходящих порогов для классификации в литературе по ANI, можно прямо использовать для расстояния Mash.

Активные варианты бактериального штамма (штаммов), раскрытые в настоящем изобретении, включают штаммы, которые близкородственны с любым из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895 на основании расстояния Minhash (Mash) между полными геномными последовательностями ДНК. Таким образом, в предпочтительных вариантах осуществления активный вариант бактериального штамма, раскрытого в настоящем изобретении включает бактериальные штаммы, обладающие геномом с расстоянием Mash до раскрытых штаммов, равным менее примерно 0,015. В других вариантах осуществления активный вариант бактериального штамма, раскрытого в настоящем изобретении включает расстояние, равное менее примерно 0,005, 0,010, 0,015, 0,020, 0,025 или 0,030. Геном, поскольку он связан с расстоянием Mash, включает и бактериальную хромосомную ДНК, и бактериальную плазмидную ДНК. В других вариантах осуществления активный вариант бактериального штамма обладает геномом с расстоянием до раскрытых штаммов, превышающим пороговое значение расстояния Mash, которое больше, чем несходство, обусловленное технической погрешностью. В других случаях активный вариант бактериального штамма обладает геномом с расстоянием до раскрытых штаммов, превышающим пороговое значение расстояния Mash, которое больше, чем несходство, обусловленное технической погрешностью, и обладает расстоянием Mash, равным менее примерно 0,015. В других случаях активный вариант бактериального штамма обладает геномом с расстоянием до раскрытых штаммов, превышающим пороговое значение расстояния Mash, которое больше, чем несходство, обусловленное технической погрешностью, и обладает расстоянием Mash, равным менее примерно 0,005, 0,010, 0,015, 0,020, 0,025 или 0,030.

При использовании в настоящем изобретении "больше технической погрешности" означает, что оно больше расстояния Mash между двумя штаммами, что обусловлено погрешностями в сборках геномов, при условии, что все сопоставляемые геномы ДНК секвенированы с покрытием по меньшей мере 20× с использованием технологии Illumina HiSeq 2500 секвенирования ДНК м геномы являются по меньшей мере на 99% полными при установленном содержании примесей, равном менее 2%. Хотя 20× покрытие является установившимся в данной области термином, отметим, что примером 20× покрытия является следующий: для генома размером 5 мегаоснований (MB), 100 MB ДНК секвенирования для данного генома необходимо для обеспечения секверирования с покрытием 20× в среднем для каждого положения вдоль генома. Для использования при расчет полноты генома имеется много подходящих последовательностей маркерных генов, включая наборы, приведенные в публикациях Campbell et al. (2013) PNAS USA 110(14):5540-45, Dupont et al. (2012) ISMEJ 6:1625-1628 и the CheckM framework (Parks et al. (2015) Genome Research 25:1043-1055); каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее изобретение в качестве ссылки. Примесь определяется, как выраженное в процентах типичное количество однокопийных маркерных генов, которые обнаруживаются во множестве копий в данной геномной последовательности (например, в публикации Parks et al. (2015) Genome Research 25:1043-1055); каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее изобретение в качестве ссылки. Полноту и содержание примесей рассчитывают с использованием одного и того же набора маркерных генов. Если не указано иное, набором маркеров, использованным для исследования полноты и содержания примесей является набор, приведенный в публикации Campbell et al. (2013) PNAS USA 110(14):5540-45, которая включена в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Типичными стадиями для получения оценки расстояния между рассматриваемыми геномами являются следующие: (1) Следует получить геномы, обладающие качеством, достаточным для сопоставления. Геном достаточного качества определяется, как геномная сборка, образованная с последовательностью ДНК, достаточной для обеспечения по меньшей мере 20× покрытия генома с использованием технологии Illumina HiSeq 2500. Для сопоставления с заявленным микробным геномом геном должен быть полным не менее, чем на 99%, при содержании примесей, равном менее 2%. (2) Геномы следует сопоставлять по методике Minhash, как это показано в публикации Ondov et al. (2016) Genome Biology 17:132, которая во всей своей полноте включена в настоящее изобретение в качестве ссылки. Если не указано иное, используют следующие параметры: размер "эскиза" равен 1000 и "длина k-мера" равна 21. (3) Подтверждение того, что расстояние Mash между этими 2 геномами равно менее 0,005, 0,010, 0,015, 0,020, 0,025 или 0,030. Активные варианты бактерий, идентифицированные по таким методикам, сохраняют способность улучшать по меньшей мере один агротехнический признак при нанесении эффективного количества на растение, часть растения или участок выращивания, включая, например, уменьшение тяжести болезни растения и/или уменьшение развития болезни растения.

III. Препараты

Бактериальные штаммы, предлагаемые в настоящем изобретении (т.е. AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них) можно приготовить в виде клеточной массы, смачивающихся порошков, пеллеты клеток, дустов, гранул, дисперсии, сухого порошка, жидких продуктов на водной или масляной основе и т.п. Такие препараты в дополнение к носителям и другим агентам включают бактерии, предлагаемые в настоящем изобретении, или их активный вариант. Препараты можно использовать в разных способах, раскрытых в другом разделе настоящего изобретения.

Бактериальные штаммы, раскрытые в настоящем изобретении, и их активные варианты можно приготовить так, чтобы они включали по меньшей мере один или большее количество из следующих: средство, увеличивающее объем, растворитель, стимуляторы самопроизвольности, носители, эмульгаторы, диспергирующие средства, средства защиты от замерзания, загустители и/или вспомогательные вещества.

Примеры типичных препаратов включают растворимые в воде жидкости (SL), эмульгирующиеся концентраты (EC), эмульсии в воде (EW), концентраты суспензии (SC, SE, FS, OD), диспергирующиеся в воде гранулы (WG), гранулы (GR) и концентраты капсул (CS); WG; GR; BB; SG; ZC, эти и другие возможные типы препаратов описаны, например, в публикациях Crop Life International и в Pesticide Specifications, Manual on development and use of FAO and WHO specifications for pesticides, FAO Plant Production and Protection Papers - 173, prepared by the FAO/WHO Joint Meeting on Pesticide Specifications, 2004, ISBN: 9251048576. Препараты могут включать активные агрохимические соединения кроме одного или большего количества соединений, предлагаемых в настоящем изобретении.

Препараты или формы для нанесения различных бактериальных штаммов или их активных вариантов могут включать, но не ограничиваются только ими, вспомогательные вещества, такие как средства, увеличивающие объем, растворители, стимуляторы самопроизвольности, носители, эмульгаторы, диспергирующие средства, средства защиты от замерзания, биоциды, твердые носители, поверхностно-активные вещества, загустители и/или другие вспомогательные вещества, такие как адъюванты. Адъювант в этом контексте представляет собой компонент, который усиливает биологическое действие препарата, причем сам компонент не оказывает биологическое воздействие. Примерами адъювантов являются агенты, которые стимулируют удерживание, распределение, прилипание к поверхности листа или проникновение.

Неограничивающими примерами средств, увеличивающих объем, являются, например, вода, полярные и неполярные органические химические жидкости, например, из классов ароматических и неароматических углеводородов (такие как парафины, алкилбензолы, алкилнафталины, хлорбензолы), спирты и полиолы (которые при необходимости также могут быть замещены, превращены в простые эфиры и/или сложные эфиры), кетоны (такие как ацетон, циклогексанон), сложные эфиры (включая жиры и масла) и простые (поли)эфиры, незамещенные и замещенные амины, амиды, лактамы (такие как N-алкилпирролидоны) и лактоны, сульфоны и сульфоксиды (такие как диметилсульфоксид). Если использующимся средством, увеличивающим объем, является вода, также можно использовать, например, органические растворители в качестве вспомогательных растворителей. Важными неограничивающими примерами жидких растворителей являются: ароматические соединения, такие как ксилол, толуол или алкилнафталины, хлорированные ароматические соединения и хлорированные алифатические углеводороды, такие как хлорбензолы, хлорэтилены или метиленхлорид, алифатические углеводороды, такие как циклогексан или парафины, например, фракции нефти, минеральные и растительные масла, спирты, такие как бутанол или гликоль и также их простые и сложные эфиры, кетоны, такие как ацетон, метилэтилкетон, метилизобутилкетон или циклогексанон, сильно полярные растворители, такие как диметилформамид и диметилсульфоксид и также вода. В принципе, можно использовать любой подходящий растворитель. Неограничивающими примерами растворителей являются, например, ароматические углеводороды, такие как ксилол, толуол или алкилнафталины, например, хлорированные ароматические или алифатические углеводороды, такие как хлорбензол, хлорэтилен или метиленхлорид, например, алифатические углеводороды, такие как циклогексан, например, парафины, фракции нефти, минеральные и растительные масла, спирты, такие как метанол, этанол, изопропанол, бутанол или гликоль, например и также их простые и сложные эфиры, кетоны, такие как ацетон, метилэтилкетон, метилизобутилкетон или циклогексанон, например, сильно полярные растворители, такие как диметилсульфоксид и вода.

Неограничивающие примеры подходящих носителей включают, например, соли аммония и измельченные природные минералы, такие как каолины, глины, тальк, мел, кварц, аттапульгит, монтмориллонит или диатомовая земля и измельченные синтетические минералы, такие как тонкоизмельченный диоксид кремния, оксид алюминия и природные или синтетические силикаты, смолы, воска и/или твердые удобрения. Также можно использовать смеси таких носителей. Носители, подходящие для гранул, включают следующие: например, дробленые и фракционированные природные минералы, такие как кальцит, мрамор, пемза, сепиолит, доломит, и также синтетические гранулы из неорганической и органической муки, и также гранулы их органического материала, такого как опилки, бумага, скорлупа кокосовых орехов, сердцевины кукурузных початков и черешки листьев табака.

Также можно использовать сжиженные газообразные средства, увеличивающие объем, или растворители. Неограничивающими примерами являются такие средства, увеличивающие объем или носители, которые при нормальной температуре и нормальном давлении являются газообразными, примерами являются пропелленты для аэрозолей, такие как галогенированные углеводороды, и также бутан, пропан, азот и диоксид углерода. Примерами эмульгаторов и/или пенообразователей, диспергирующих средств или смачивающих агентов, обладающих ионными или неионными характеристиками, или смесей этих поверхностно-активных веществ, являются соли полиакриловой кислоты, соли лигносульфоновой кислоты, соли фенолсульфоновой кислоты или нафталинсульфоновой кислоты, поликонденсаты этиленоксида с жирными спиртами или с жирными кислотами или с жирными аминами, с замещенными фенолами (предпочтительно алкилфенолами или арилфенолами), соли эфиров сульфоянтарной кислоты, производные таурина (предпочтительно алкилтаураты), фосфаты полиэтоксилированных спиртов или фенолов, эфиры жирной кислоты и полиолов и производные соединений, содержащих сульфаты, сульфонаты и фосфаты, примерами являются алкиларилполигликолевые эфиры, алкилсульфонаты, алкилсульфаты, арилсульфонаты, гидролизаты белков, отработанные растворы лигнинсульфита и метилцеллюлоза. Присутствие поверхностно-активного вещества благоприятно, если одно из активных соединений и/или один из инертных носителей нерастворим в воде и если нанесение проводят в воде.

Другие вспомогательные вещества, которые могут содержаться в препаратах и в образованных из них формах для нанесения, включают красящие вещества, такие как неорганические пигменты, примерами являются оксид железа, оксид титана, прусская синяя и органические красители, такие как ализариновые красители, азокрасители и металлофталоцианиновые красители и питательные вещества и питательные микроэлементы, такие как соли железа, марганца, бола, меди, кобальта, молибдена и цинка.

Также могут содержаться стабилизаторы, такие как низкотемпературные стабилизаторы, консерванты, антиоксиданты, светостабилизаторы или другие агенты, которые повышают химическую и/или физическую стабильность. Кроме того, могут содержаться пенообразователи или противовспениватели.

Кроме того, препараты и образованные из них формы для нанесения также могут включать в качестве дополнительных вспомогательных веществ клеящие средства, такие как карбоксиметилцеллюлоза, натуральные и синтетические полимеры в порошкообразной, гранулированной или латексной форме, такие как гуммиарабик, поливиниловый спирт, поливинилацетат и также натуральные фосфолипиды, такие как цефалины и лецитины, и синтетические фосфолипиды. Другие возможные вспомогательные вещества включают минеральные и растительные масла.

Может существовать возможность того, что в препаратах и в образованных из них формах для нанесения, содержатся другие вспомогательные вещества. Примеры таких добавок включают отдушки, защитные коллоиды, связующие, клеящие вещества, загустители, тиксотропные вещества, средства, обеспечивающие проницаемость, стимуляторы удерживания, стабилизаторы, секвестранты, комплексообразующие реагенты, влагоудерживающие средства и распределяющие средства. Вообще-то, активные соединения можно объединить с любой твердой или жидкой добавкой, обычно использующейся для приготовления.

Подходящие стимуляторы удерживания включают все такие вещества, которые снижают динамику поверхностного натяжения, такие как диоктилсульфосукцинат, или увеличивают вязкоэластичность, такие как, например, полимеры гидроксипропилгуара.

Подходящие средства, обеспечивающие проницаемость, в контексте настоящего изобретения включают все такие вещества, которые обычно используют для увеличения проникновения активных агрохимических соединений в растения. Средства, обеспечивающие проницаемость, в этом контексте определяются так, что из (обычно водной) жидкости для нанесения и/или из наносимого опрыскиванием покрытия они могут проникать в кутикулу растения и увеличивать подвижность активных соединений в кутикуле. Эту характеристику можно исследовать по методике, описанной в литературе (Baur et al., 1997, Pesticide Science 51: 131-152). Примеры включают алкоксилаты спиртов, такие как этоксилаты жирных кислот кокосового масла (12), эфиры жирных кислот, такие как метиловые эфиры жирных кислот рапсового или соевого масло, алкоксилаты жирных аминов, такие как таллоуаминэтоксилат (15), или соли аммония и/или фосфония, такие как, например, сульфат аммония или дигидрофосфат аммония.

Различные композиции и препараты, раскрытые в настоящем изобретении могут содержать некоторое количество бактериального штамма, такого как AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них. Такое количество может обладать концентрацией бактериального штамма, равной по меньшей мере от примерно 10⁴ до примерно 10¹¹, по меньшей мере от примерно 10⁵ КОЕ/г до примерно 10¹¹КОЕ/г, от примерно 10⁵КОЕ/г до примерно 10¹⁰ КОЕ/г, от примерно 10⁵ КОЕ/г до примерно 10¹² КОЕ/г, от примерно 10⁵ КОЕ/г до примерно 10⁶ КОЕ/г, от примерно 10⁶ КОЕ/г до примерно 10⁷ КОЕ/г, от примерно 10⁷ КОЕ/г до примерно 10⁸ КОЕ/г, от примерно 10⁸ КОЕ/г до примерно 10⁹ КОЕ/г, от примерно 10⁹ КОЕ/г до примерно 10¹⁰ КОЕ/г, от примерно 10¹⁰ КОЕ/г до примерно 10¹¹ КОЕ/г или от примерно 10¹¹ КОЕ/г до примерно 10¹² КОЕ/г. В других вариантах осуществления концентрация бактериального штамма включает равную по меньшей мере примерно 10⁵КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10⁶ КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10⁷ КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10⁸ КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10⁹ КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10¹⁰ КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10¹¹ КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10¹² КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10⁴ КОЕ/г. Такие концентрации бактериального штамма могут быть в любом препарате представляющего интерес типа, включая, например, смачивающийся порошок, высушенный распылительной сушкой препарат или клеточную массу.

Клеточные массы и смачивающиеся порошки и высушенные распылительной сушкой препараты могут включать бактериальный штамм, такой как AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или спору или предспору, или комбинацию клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них. Количество бактериального штамма может обладать концентрацией бактериального штамма, равной по меньшей мере от примерно 10⁵ КОЕ/г до примерно 10¹¹КОЕ/г, от примерно 10⁷ КОЕ/г до примерно 10¹⁰ КОЕ/г, от примерно 10⁷ КОЕ/г до примерно 10¹¹ КОЕ/г, от примерно 10⁶ КОЕ/г до примерно 10¹⁰ КОЕ/г, от примерно 10⁶ КОЕ/г до примерно 10¹¹ КОЕ/г, от примерно 10¹¹ КОЕ/г до примерно 10¹² КОЕ/г, от примерно 10⁵КОЕ/г до примерно 10¹⁰ КОЕ/г, от примерно 10⁵ КОЕ/г до примерно 10¹² КОЕ/г, от примерно 10⁵ КОЕ/г до примерно 10⁶ КОЕ/г, от примерно 10⁶ КОЕ/г до примерно 10⁷ КОЕ/г, от примерно 10⁷ КОЕ/г до примерно 10⁸ КОЕ/г, от примерно 10⁸ КОЕ/г до примерно 10⁹ КОЕ/г, от примерно 10⁹ КОЕ/г до примерно 10¹⁰ КОЕ/г, от примерно 10¹⁰ КОЕ/г до примерно 10¹¹ КОЕ/г или от примерно 10¹¹ КОЕ/г до примерно 10¹² КОЕ/г. В некоторых вариантах осуществления концентрация бактериального штамма включает равную по меньшей мере примерно 10⁵КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10⁶ КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10⁷ КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10⁸ КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10⁹ КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10¹⁰ КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10¹¹ КОЕ/г, по меньшей мере примерно 10¹² КОЕ/г или по меньшей мере примерно 10¹³КОЕ/г.

При использовании в настоящем изобретении "клеточная масса" включает популяцию клеток, которую отцентрифугировали и/или отфильтровали или сконцентрировали иным образом.

Настоящее изобретение также относится к семени с покрытием, которое включает семя и покрытие на семени, где покрытие включает по меньшей мере один бактериальный штамм, такой как AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или спору или предспору, или комбинацию клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них, где указанный бактериальный штамм или его активный вариант содержится на семени в количестве, равном от примерно 10⁵ КОЕ/семя до примерно 10⁷КОЕ/семя, от примерно 10⁴ КОЕ/семя до примерно 10⁸КОЕ/семя, от примерно 10⁴ КОЕ/семя до примерно 10⁵ КОЕ/семя, от примерно 10⁵ КОЕ/семя до примерно 10⁶ КОЕ/семя, от примерно 10⁶ КОЕ/семя до примерно 10⁷ КОЕ/семя или от примерно 10⁷ КОЕ/семя до примерно 10⁸ КОЕ/семя. Различные представляющие интерес растения раскрыты в другом разделе настоящего изобретения.

Покрытие на семени может дополнительно включать по меньшей мере одно питательное вещество, по меньшей мере один гербицид или по меньшей мере один пестицид, или по меньшей мере один биоцид. См., например, публикации заявок US 20040336049, 20140173979 и 20150033811.

Различные препараты, раскрытые в настоящем изобретении могут быть стабильны в течение не менее 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350 дней, 1,5 лет, 2 лет или дольше. Стабильный означает, что препарат сохраняет жизнеспособные бактерии и/или сохраняет эффективное количество биологически активных бактерий. В одном варианте осуществления стабильный препарат сохраняет по меньшей мере примерно 1%, примерно 10%, примерно 20%, примерно 30% примерно 40%, примерно 50%, примерно 60%, примерно 70%, примерно 80% или примерно 90% содержащихся в препарате КОЕ/г к данному времени хранения по сравнению с количеством КОЕ/г, образовавшимся сразу после получения препарата. В другом варианте осуществления стабильный препарат сохраняет по меньшей мере примерно от 30% до 80%, примерно 50% до примерно 80%, примерно 60% до примерно 70%, примерно 70% до примерно 80%, примерно 40% до примерно 50%, примерно 50% до примерно 60%, примерно 60% до примерно 70% биологической активности препарата к данному времени хранения по сравнению с биологической активностью препарата сразу после получения. В другом варианте осуществления стабильный препарат к данному времени хранения сохраняет по меньшей мере примерно 30%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% биологической активности по сравнению с биологической активностью препарата сразу после получения. В еще одном варианте осуществления стабильный препарат сохраняет любую комбинацию жизнеспособности и биологической активности, указанных выше.

Препараты предпочтительно содержат от 0,00000001% до 98 мас.% активного соединения или, особенно предпочтительно, от 0,01% до 95 мас.% активного соединения, более предпочтительно от 0,5% до 90 мас.% активного соединения в пересчете на массу препарата.

Содержание активного соединения в формах для нанесения, полученных из препаратов, могут меняться в широких пределах. Концентрация активного соединения в формах для нанесения обычно может составлять от 0,00000001% до 95 мас.% активного соединения, предпочтительно от 0,00001% до 1 мас.% в пересчете на массу формы для нанесения. Нанесение проводят обычным образом с учетом форм для нанесения.

Кроме того, бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант можно смешать с биоцидом, таким как фунгицид, инсектицид или гербицид, для увеличения его активности или активности химиката, к которому он добавлен. В некоторых случаях комбинация бактериального штамма и химиката может обладать синергетической активностью, когда смесь этих двух систем обладает активностью, которая превышает ожидающуюся простую аддитивную активность.

В предпочтительных вариантах осуществления бактериальный штамм или его активный вариант совместим с сельскохозяйственными химикатами, использующимися для улучшения характеристик биоцидов. Такие сельскохозяйственные химикаты включают антидоты, поверхностно-активные вещества, клеящие средства, распределяющие средства, средства защиты от УФ-излучения и суспендирующие и диспергирующие средства. Антидоты являются химикатами, которые улучшают или модифицируют характеристики гербицидов. Поверхностно-активные вещества, распределяющие средства и клеящие средства являются химикатами, включаемыми в сельскохозяйственные препараты для опрыскивания, которые меняют механические характеристики препарата для опрыскивания (например, путем изменения поверхностного натяжения или увеличения проницаемости кутикулы). Средства защиты от УФ-излучения улучшают характеристики сельскохозяйственных биоцидов путем уменьшения разложения ультрафиолетовым излучением. Суспендирующие и диспергирующие средства улучшают характеристики биоцидов путем изменения их свойств в баке для опрыскивания. В случаях, когда бактериальный штамм или активный вариант несовместим с представляющим интерес сельскохозяйственным химикатом, при желании способы можно использовать для модификации бактериального штамма для придания представляющей интерес совместимости. Такие способы получения модифицированных бактериальных штаммов включают методики селекции и/или методики трансформации.

Бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, можно использовать для значительного улучшения по меньшей мере одного представляющего интерес агротехнического признака (т.е. ослабления болезни, такой как ASR или вызванная другим представляющим интерес патогенным грибом). Бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, можно использовать с другими пестицидами в эффективной объединенной программе борьбы с вредителями. В одном варианте осуществления агент для биологического регулирования популяции можно смешать с известными пестицидами таким образом, как описано в WO 94/10845, которая включена в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Неограничивающие примеры соединений и композиций, которые можно добавить к препарату, включают, но не ограничиваются только ими, ацетилтрибутилцитрат [трибутиловый эфир 2-(ацетилокси)лимонной кислоты]; агар; скорлупа миндаля; шелуха миндаля; альфа-циклодекстрин; алюмосиликат; алюмосиликат магния [алюминиево-магниевая соль кремниевой кислоты]; силикат алюминия-калия-натрия [алюминиево-калиево-натриевая соль кремниевой кислоты]; силикат алюминия; алюмосиликат натрия [алюминиево-натриевая соль кремниевой кислоты]; алюмосиликат натрия (1:1:1)[ алюминиево-натриевая соль кремниевой кислоты (H4SiO4) (1:1:1)]; бензоат аммония [аммониевая соль бензойной кислоты]; стеарат аммония [аммониевая соль октадекановой кислоты]; амилопектин, гидролизованный кислотой 1-октенилбутандиоат; амилопектин, гидро-1-октадеценилбутандиоат; костяной клей; аскорбилпальмитат; глина аттапульгитового типа; пчелиный воск; бентонит; натриевое производное бентонита; бета-циклодекстрин; костная мука; отруби; панировочные сухари; (+)-бутиллактат; [н-бутиловый эфир (S)-молочной кислоты]; бутиллактат [н-бутиловый эфир молочной кислоты]; бутилстеарат [бутиловый эфир октадекановой кислоты]; известковый сланец; кальцит (Ca(Co₃)); ацетат кальция; моногидрат ацетата кальция [моногидрат кальциевой соли уксусной кислоты]; бензоат кальция [кальциевая соль бензойной кислоты]; карбонат кальция; цитрат кальция [кальциевая соль лимонной кислоты]; октаноат кальция; оксид-силикат кальция (Ca₃O(SiO₄)); силикат кальция [кальциевая соль кремниевой кислоты]; стеарат кальция [кальциевая соль октадекановой кислоты]; сульфат кальция; дигидрат сульфата кальция; полугидрат сульфата кальция; канареечное семя; уголь; диоксид углерода; карбоксиметилцеллюлоза [карбоксиметиловый эфир целлюлозы]; картон; карнаубский воск; камедь цератонии стручковой [камедь плодов рожкового дерева]; каррагенан; казеины; касторовое масло; гидрированное касторовое масло; кошачьи консервы; целлюлоза; ацетат целлюлозы; натриевая соль целлюлозы, смесь с карбоксиметиловым эфиром целлюлозы; целлюлозная пульпа; регенерированная целлюлоза; сыр; хлорофилл a; хлорофилл b; цитрусовая мука; лимонная кислота; моногидрат лимонной кислоты; цитрусовый пектин; цитрусовая пульпа; раковины моллюсков; какао; мука из шелухи какао; шелуха какао; жир печени трески; кофейная гуща; печенье; пробка; стержни кукурузных початков; хлопок; мука из жмыха семян хлопчатника; крупа из нашелушенной пшеницы; моноэфир декановой кислоты с 1,2,3-пропантриолом; декстрины; диглицерилмоноолеат [эфир 9-октадеценовой кислоты с 1,2,3-пропантриолом]; диглицерилмоностеарат [моноэфир 9-октадекановой кислоты с бис(пропандиолом)]; дилаурин [диэфир додекановой кислоты с 1,2,3-пропантриолом]; дипальмитин [диэфир гексадекановой кислоты с 1,2,3-пропантриолом]; дикалийцитрат [дикалиевая соль лимонной кислоты]; динатрийцитрат [динатриевая соль лимонной кислоты]; декагидрат динатрийсульфата; диатомовая земля (менее 1% кристаллического диоксида кремния); моноэфир додекановой кислоты с 1,2,3-пропантриолом; доломит; кора дугласии; яичная скорлупа; яйца; (+)-этиллактат [этиловый эфир (S)-молочной кислоты]; этиллактат [этиловый эфир молочной кислоты]; полевой шпат; рыбная мука; рыбий жир (не соответствующий требованиям 40 CFR 180.950); фуллерова земля; фумаровая кислота; гамма-циклодекстрин; желатины; геллановая камедь; клей (в виде деполимеризованного животного коллагена); глицерин [1,2,3-пропантриол]; глицеринмоноолеат [2,3-дигидроксипропиловый эфир (Z)-9-октадеценовой кислоты]; глицерилдикаприлат [диэфир октановой кислоты с 1,2,3-пропантриолом]; глицерилдимиристат [диэфир тетрадекановой кислоты с 1,2,3-пропантриолом]; глицерилдиолеат [диэфир (9Z)-9-октадеценовой кислоты с 1,2,3-пропантриолом]; глицерилдистеарат; глицерилмономиристат [моноэфир тетрадекановой кислоты с 1,2,3-пропантриолом]; глицерилмонооктаноат [моноэфир октановой кислоты с 1,2,3-пропантриолом]; глицерилмоноолеат [моноэфир (9Z)-9-октадеценовой кислоты с 1,2,3-пропантриолом]; глицерилмоностеарат [моноэфир октадекановой кислоты с 1,2,3-пропантриолом]; глицерилстеарат [эфир октадекановой кислоты с 1,2,3-пропантриолом]; гранит; гуаровая камедь; гуммиарабик; трагакантовая камедь; гипс; гематит (Fe₂O₃); гуминовая кислота; гидрированное хлопковое масло; гидрированное рапсовое масло; гидрированное соевое масло; гидроксиэтилцеллюлоза [2-гидроксиэтиловый эфир целлюлозы]; гидроксипропилцеллюлоза [2-гидроксипропиловый эфир целлюлозы]; гидроксипропилметилцеллюлоза [2-гидроксипропилметиловый эфир целлюлозы]; оксид железа-магния (Fe₂MgO₄); оксид железа (Fe₂O₃); оксид железа (Fe₂O₃); оксид железа (Fe₃O4); оксид железа (FeO); изопропиловый спирт [2-пропанол]; изопропилмиристат; каолин; лактоза; моногидрат лактозы; ланолин; латексный каучук; лауриновая кислота; лецитины; экстракт из корня солодки; известь (химическая) доломитовая; известняк; льняное масло; карбонат магния [магниевая соль угольной кислоты (1:1); бензоат магния; оксид магния; моногидрат оксида-силиката магния (Mg₃O(Si₂O₅)₂); силикат магния; гидрат силиката магния; оксид магния-кремния (Mg₂Si₃O₈); стеарат магния [магниевая соль октадекановой кислоты]; сульфат магния; гептагидрат сульфата магния; яблочная кислота; экстракт солода; солодовая мука; мальтодекстрин; метилцеллюлоза [метиловый эфир целлюлозы]; слюда; минералы группы слюды; молоко; N/A мука из проса; минеральное масло (U.S.P.); 1-монолаурин [2,3-дигидроксипропиловый эфир додекановой кислоты]; 1-мономиристин [2,3-дигидроксипропиловый эфир тетрадекановой кислоты]; мономиристин [диэфир декановой кислоты с 1,2,3-пропантриолом]; мономальмитин [моноэфир гексадекановой кислоты с 1,2,3-пропантриолом]; моноцитрат калия [монокалиевая соль лимонной кислоты; моноцитрат натрия [мононатриевая соль лимонной кислоты]; монтмориллонит; миристиновая кислота; нефелиновый сиенит; азот; мясо нутрии; нейлон; калиевая соль октановой кислоты; натриевая соль октановой кислоты; миндальное масло; масло из ростков пшеницы; олеиновая кислота; раковины устриц; пальмовое масло; гидрированное пальмовое масло; пальмитиновая кислота [гексадекановая кислота]; парафиновый воск; арахисовое масло; арахисовая скорлупа; арахис; сфагнум; пектин; перлит; вспученный перлит; гипс; полиэтилен; полиглицерилолеат; полиглицерилстеарат; ацетат калия [калиевая соль уксусной кислоты]; безводный алюмосиликат; бензоат калия [калиевая соль бензойной кислоты]; бикарбонат калия [монокалиевая соль угольной кислоты]; хлорид калия; цитрат калия [калиевая соль лимонной кислоты]; гумат калия [калиевые соли гуминовых кислот]; миристат калия калиевая соль [тетрадекановой кислоты]; олеат калия [калиевая соль (9Z)-9-октадеценовой кислоты; рицинолеат калия [монокалиевая соль 12-гидрокси-(9Z,12R)-9-октадеценовой кислоты]; сорбат калия [калиевая соль сорбиновой кислоты]; стеарат калия [калиевая соль октадекановой кислоты]; сульфат калия; сульфат калия [монокалиевая соль серной кислоты]; 1,2-пропиленкарбонат [4-метил-1,3-диоксолан-2-он]; пемза; пигмент краснокочанной капусты (получен из кочанов съедобной краснокочанной капусты путем прессования с использованием только подкисленной воды); щепа можжевельника виргинского; кормовая мука; каучук; опилки; сланец; аморфный пирогенный диоксид кремния (не содержащий кристаллов); аморфный осажденный диоксид кремния и гель; диоксид кремния (не содержащий кристаллов); силикагель; осажденный силикагель, не содержащий кристаллов; гидрат диоксида кремния; стеклообразный диоксид кремния; магниевая соль кремниевой кислоты (H₂SiO₃) (1:1); мыло (растворимые в воде натриевые или калиевые соли жирных кислот, полученные омылением жиров и масел или нейтрализацией жирных кислот); килайя [сапонин килайи]; тальк; ацетат натрия [натриевая соль уксусной кислоты]; альгинат натрия; бензоат натрия [натриевая соль бензойной кислоты]; бикарбонат натрия; натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы [натриевая соль карбоксиметилового эфира целлюлозы]; хлорид натрия; цитрат натрия; гумат натрия [натриевые соли гуминовых кислот]; олеат натрия; рицинолеат натрия [мононатриевая соль (9Z,12R)-12-гидрокси-9-октадеценовой кислоты]; стеарат натрия [натриевая соль октадекановой кислоты]; сульфат натрия; сорбит [D-глюцит]; соевый белок; лецитины сои [лецитины сои]; шелуха соевых бобов; жмых соевых бобов; соевая мука; стеариновая кислота [октадекановая кислота]; сера; сиропы, гидрированный гидролизованный крахмал; тетраглицерилмоноолеат [моноэфир (9Z)-9-октадеценовой кислоты с тетраглицерином]; трицитрат кальция [кальциевая соль лимонной кислоты (2:3)]; триэтилцитрат [триэтиловый эфир лимонной кислоты; трицитрат калия трикалиевая соль [лимонной кислоты]; моногидрат трицитрата калия [моногидрат трикалиевой соли лимонной кислоты]; тринатрийцитрат [лимонной кислоты тринатриевая соль]; дигидрат тринатрийцитрата [дигидрат тринатриевой соли лимонной кислоты]; пентагидрат тринатрийцитрата [пентагидрат тринатриевой соли лимонной кислоты]; ультрамарин синий [C.I. Pigment Blue 29]; мочевина; ванилин; вермикулит; винный уксус (в растворе не более 8% уксусной кислоты); витамин C [L-аскорбиновая кислота]; витамин; мука из скорлупы грецких орехов; скорлупа грецких орехов; пшеница; пшеничная мука; масло из зародышей пшеницы; сыворотка; светлое минеральное масло (нефтяное); винтергриновое масло; волластонит (Ca(SiO3)); шерсть; ксантановая камедь; дрожжи; цеолиты (за исключением эриоцита (регистрационный № CAS 66733-21-9)); цеолиты NaA; оксид цинка-железа; оксид цинка (ZnO); и стеарат цинка [цинковая соль октадекановой кислоты].

IV. Способы применения

Бактериальные штаммы или модифицированные бактериальные штаммы или их активные варианты, предлагаемые в настоящем изобретении, можно использовать для любого вида растения для улучшения представляющего интерес агротехнического признака. Представляющие интерес агротехнические признаки включают любой признак, который улучшает жизнеспособность растения или коммерческую ценность. Неограничивающие примеры представляющих интерес агротехнических признаков включают увеличение биомассы, увеличение устойчивости к засухе, тепловую устойчивость, устойчивость к гербициду, устойчивость к засухе, устойчивость к насекомым, устойчивость к грибам, устойчивость к вирусам, устойчивость к бактериям, мужскую стерильность, устойчивость к низким температурам, устойчивость к действию солей, повышение урожайности, увеличение эффективности усвоения питательных веществ, увеличение эффективности усвоения азота, увеличение устойчивости к стрессу, вызванному недостатком азота, увеличение содержания поддающихся ферментации углеводов, уменьшение содержания лигнина, увеличение содержания антиоксиданта, увеличение эффективности усвоения воды, увеличение мощности, увеличение эффективности прорастания, более раннее или усиленное цветение, увеличение биомассы, увеличение отношения биомассы корней к биомассе ростков, увеличение удерживания воды в почве или их комбинация. В другом случае представляющий интерес агротехнический признак включает изменение содержания масла, изменение содержания белка, изменение углеводного состава семян, изменение состава масла в семенах и изменение состава белков в семенах, устойчивость к химикатам, устойчивость к низким температурам, задержку увядания, устойчивость к болезни, устойчивость к засухе, увеличение массы колосьев, усиление роста, улучшение жизнеспособности, устойчивость к низким температурам, устойчивость к гербициду, устойчивость к травоядным, улучшение фиксации азота, улучшение усвоения азота, улучшение структуры корней, увеличение эффективности усвоения воды, увеличение биомассы, увеличение длины корней, увеличение массы семени, увеличение длины проростков, повышение урожайности, повышение урожайности при ограниченном содержании воды, увеличение массы ядра, увеличение содержания влаги в ядре, устойчивость к металлам, увеличение количества колосьев, увеличение количества ядер в колосе, увеличение количества стручков, усиление питания, устойчивость к патогену, устойчивость к вредителям, увеличение способности к фотосинтезу, устойчивость к действию солей, ремонтантность, увеличение мощности, увеличение массы зрелых семян в сухом состоянии, увеличение массы зрелых семян в сыром состоянии, увеличение количества зрелых семян в пересчете на растение, увеличение содержания хлорофилла, увеличение количества стручков в пересчете на растение, увеличение длины стручков в пересчете на растение, уменьшение количества увядших листьев в пересчете на растение, уменьшение количества сильно увядших листьев в пересчете на растение и увеличение количества неувядших листьев в пересчете на растение, заметное модулирование метаболитов, заметное модулирование содержания транскриптов или заметное модулирование протеомы по сравнению с эталонным растением.

В одном неограничивающем варианте осуществления бактериальный штамм или его активный вариант, предлагаемый в настоящем изобретении, можно использовать уменьшения или сокращения содержания вредителя растения. "Вредители" включают, но не ограничивается только ими, насекомые, грибы, бактерии, нематоды, акариды, патогенные простейшие, паразитирующих на животных возбудители фасцилеза и т.п. В одном неограничивающем варианте осуществления бактериальный штамм или его активный вариант, предлагаемый в настоящем изобретении, можно использовать для любого вида растения, восприимчивого к болезни растения. "Растение, восприимчивое к болезни растения" означает, что патоген-возбудитель (возбудители) болезни растения может заразить растение.

Примеры представляющих интерес видов растений включают, но не ограничиваются только ими, кукурузу (Zea mays), Brassica sp. (например, B. napus, B. rapa, B. juncea), в особенностит виды Brassica, использующиеся в качестве источника масла, люцерну (Medicago sativa), рис (Oryza sativa), рожь (Secale cereale), сорго (Sorghum bicolor, Sorghum vulgare), просо (например, просо африканское (Pennisetum glaucum), просо посевное (Panicum miliaceum), просо итальянское (Setaria italica), просо пальчатое (Eleusine coracana)), подсолнечник (Helianthus annuus), сафлор (Carthamus tinctorius), пшеницу (Triticum aestivum), сою (Glycine max), табак (Nicotiana tabacum), картофель (Solanum tuberosum), арахис (Arachis hypogaea), хлопчатник (Gossypium barbadense, Gossypium hirsutum), батат (Ipomoea batatus), маниок (Manihot esculenta), кофе (Coffea spp.), кокос (Cocos nucifera), ананас (Ananas comosus), цитрусовые деревья (Citrus spp.), какао (Theobroma cacao), чай (Camellia sinensis), банан (Musa spp.), авокадо (Persea americana), инжир (Ficus casica), гуаву (Psidium guajava), манго (Mangifera indica), оливу (Olea europaea), папайю (Carica papaya), виноград (Vitus spp.), землянику (Fragaria ananassa), вишню (Prunus spp.), яблоню (Malus domestica), апельсин (Citrus sinensis) кешью (Anacardium occidentale), макадамию (Macadamia integrifolia), миндаль (Prunus amygdalus), сахарную свеклу (Beta vulgaris), сахарный тростник (Saccharum spp.), овес, ячмень, овощи, декоративные растения и хвойные деревья.

Овощи включают следующие: томаты (Lycopersicon esculentum), латук (например, Lactuca sativa), зеленую фасоль (Phaseolus vulgaris), лимскую фасоль (Phaseolus limensis), горохи (Lathyrus spp.) и представителей рода Cucumis, такие как огурец (C. sativus), канталупа (C. cantalupensis) и мускатная дыня (C. melo). Декоративные растения включают азалию (Rhododendron spp.), гортензию (Macrophylla гортензия), гибискус (Hibiscus rosasanensis), розы (Rosa spp.), тюльпан (Tulipa spp.), желтый нарцисс (Narcissus spp.), петунию (Petunia hybrida), гвоздику (Dianthus caryophyllus), пуансеттию (Euphorbia pulcherrima) и хризантему.

Хвойные деревья, которые можно использовать при практическом осуществлении настоящего изобретения, включают, например, сосны, такие как сосна ладанная (Pinus taeda), сосна Эллиота (Pinus elliotii), сосна желтая (Pinus ponderosa), сосна скрученная широкохвойная (Pinus contorta) и сосна лучистая (Pinus radiata); лещадь тисолистная (Pseudotsuga menziesii); тсуга канадская (Tsuga canadensis); ель ситхинская (Picea glauca); секвойя вечнозеленая (Sequoia sempervirens); ели настоящие, такие как пихта благородная (Abies amabilis) и пихта бальзамическая (Abies balsamea); и кедры, такие как туя (Thuja plicata) и кипарисовик нутканский (Chamaecyparis nootkatensis). В предпочтительных вариантах осуществления растениями, рассматриваемыми в настоящем изобретении, являются культурные растения (например, кукуруза, люцерна, подсолнечник, крестоцветные, соя, хлопчатник, сафлор, арахис, сорго, пшеница, просо, табак и т.п.). В других вариантах осуществления растения кукурузы и сои являются оптимальными и в других вариантах осуществления растения кукурузы являются оптимальными.

Другие представляющие интерес растения включают зерновые растения, которые дают представляющие интерес семена, масличные растения и бобовые растения. Представляющие интерес семена включают семена зерновых, таких как кукуруза, пшеница, ячмень, рис, сорго, рожь и т.п. Масличные растения включают хлопчатник, сою, сафлор, подсолнечник, крестоцветные, маис, люцерну, пальму, кокос и т.п. Бобовые растения включают фасоль, горохи и сухие бобовые. Бобы включают гуар, плоды рожкового дерева, пажитник, сою, фасоль обыкновенную, горох коровий, фасоль золотистую, лимскую фасоль, конские бобы, чечевицу, нут и т.п.

A. Неограничивающие примеры вредители растений

Примеры болезней растений, которые можно лечить или ослаблять, или предупреждать, включают, но не ограничиваются только ими, болезни растений, вызванные грибами, вирусами или вироидами, бактериями, насекомыми, нематодами, простейшими и т.п. Примеры микозов растений, если указать только некоторые, включают, но не ограничиваются только ими, азиатскую ржавчину сои (ASR), серую гниль, пятнистость листьев, селенофомозную пятнистость листьев, бурую пятнистость, комплекс черной ножки, бурую пятнистость, черную коросту, корневую гниль, belly rot, ризоктониоз, настоящую мучнистую росу, антракнозную пятнистость листьев, ложную мучнистую росу, питиозную гниль корней, фитофторозную гниль, фузариоз колоса, синдром внезапной гибели (SDS), фузариозный вилт, стеблевую гниль кукурузы,бурую ржавчину, черную ржавчину, желтую ржавчину, ржавчину пшеницы, ржавчину, паршу яблони, вертициллиозный вилт, бактериальный ожог и бурую гниль.

Патогены растений, рассматриваемые в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются только ими, вирусы или вироиды, бактерии, насекомые, нематоды, грибы и т.п.

В предпочтительных вариантах осуществления бактериальными штаммами, предлагаемыми в настоящем изобретении, являются такие, которые направлены на один или большее количество патогенов растений. Например, различные бактериальные штаммы, предлагаемые в настоящем изобретении, направлены на один или большее количество патогенных грибов, которые вызывают болезнь растения. Например, любой из бактериальных штаммов, предлагаемых в настоящем изобретении, или его активный вариант может обладать фунгицидной активностью по отношению к одному, двум, трем, четырем, пяти, большему количеству патогенных грибов и/или микозов, описанных в настоящем изобретении.

Способы и композиции, раскрытые в настоящем изобретении можно использовать для борьбы с одной или большим количеством патогенных грибов. Патогенным грибом может быть, но не ограничивается только ими, гриб, выбранный из группы, включающей Botrytis spp.,Botrytis cinerea, Cersospora spp, Cercospora sojina, Cercospora beticola, Alternaria spp., Alternaria solani, Rhizoctonia spp., Rhizoctonia solani, Blumeria graminis f. sp. Tritici, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Golovinomyces cichoracearum, Erysiphe lagerstroemiae, Sphaerotheca pannosa, Colletotrichum cereale, Apiognomonia errabunda, Apiognomonia veneta, Colletotrichum spp, Colletotrichum gloeosporiodes, Discula fraxinea, Mycosphaerella spp., Phomopsis spp., Plasmopara viticola, Pseudoperonospora cubensis, Peronospora belbahrii, Bremia lactucae, Peronospora lamii, Plasmopara obduscens, Pythium spp., Pythium cryptoirregulare, Pythium aphanidermatum, Pythium irregulare, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora spp., Phytophthora capsici, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium spp., Fusarium graminearum, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium graminicola, Gibberella zeae, Colletotrichum graminicola, Penicillium spp., Phakopsora sp., Phakopsora meibomiae, Phakopsora pachyrizi, Puccinia triticina, Puccinia recondita, Puccinia striiformis, Puccinia graminis, Puccinia spp.,Sclerotium spp., Sclerotinia ssp., Venturia inaequalis, Verticillium spp, Erwinia amylovora, Monilinia spp., Monilinia fructicola, Monilinia lax и Monilinia fructigena.

В некоторых вариантах осуществления патогенный гриб выбран из группы, включающей Botrytis cinerea, Cercospora sojina, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Colletotrichum cereal, Plasmopara viticola, Peronospora belbahrii, Pythium aphanidermatum, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Phakopsora pachyrizi и Venturia inaequalis

В других вариантах осуществления патогенным грибом является Phakopsora sp., включая Phakopsora pachyrhizi и/или Phakopsora meibomiae.

В предпочтительных вариантах осуществления бактериальными штаммами, предлагаемыми в настоящем изобретении, являются такие, которые направлены на одно или большее количество насекомых или насекомых-вредителей. Термин "насекомые" или "насекомые-вредители" при использовании в настоящем изобретении означает насекомых и других сходных вредителей, таких как, например, отряда Acari, включая, но не ограничиваясь только ими, mites и ticks. Насекомые-вредители, рассматриваемые в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются только ими, насекомые отряда Lepidoptera, например, Achoroia grisella, Acleris gloverana, Acleris variana, Adoxophyes orana, Agrotis ipsilon, Alabama argillacea, Alsophila pometaria, Amyelois transitella, Anagasta kuehniella, Anarsia lineatella, Anisota senatoria, Antheraea pernyi, Anticarsia gemmatalis, Archips sp., Argyrotaenia sp., Athetis mindara, Bombyx mori, Bucculatrix thurberiella, Cadra cautella, Choristoneura sp., Cochylls hospes, Colias eurytheme, Corcyra cephalonica, Cydia latiferreanus, Cydia pomonella, Datana integerrima, Dendrolimus sibericus, Desmiafeneralis, Diaphania hyalinata, Diaphania nitidalis, Diatraea grandiosella, Diatraea saccharalis, Ennomos subsignaria, Eoreuma loftini, Esphestia elutella, Erannis tilaria, Estigmene acrea, Eulia salubricola, Eupocoellia ambiguella, Eupoecilia ambiguella, Euproctis chrysorrhoea, Euxoa messoria, Galleria mellonella, Grapholita molesta, Harrisina americana, Helicoverpa subflexa, Helicoverpa zea, Heliothis virescens, Hemileuca oliviae, Homoeosoma electellum, Hyphantia cunea, Keiferia lycopersicella, Lambdina fiscellaria fiscellaria, Lambdina fiscellaria lugubrosa, Leucoma salicis, Lobesia botrana, Loxostege sticticalis, Lymantria dispar, Macalla thyrisalis, Malacosoma sp., Mamestra brassicae, Mamestra configurata, Manduca quinquemaculata, Manduca sexta, Maruca testulalis, Melanchra picta, Operophtera brumata, Orgyia sp., Ostrinia nubilalis, Paleacrita vernata, Papilio cresphontes, Pectinophora gossypiella, Phryganidia californica, Phyllonorycter blancardella, Pieris napi, Pieris rapae, Plathypena Scabra, Platynota flouendana, Platynota stultana, Platyptilia carduidactyla, Plodia interpunctella, Plutella xylostella, Pontia protodice, Pseudaletia unipuncta, Pseudoplasia includens, Sabulodes aegrotata, Schizura concinna, Sitotroga cerealella, Spilonta ocellana, Spodoptera sp., Thaurnstopoea pityocampa, Tinsola bisselliella, Trichoplusia hi, Udea rubigalis, Xylomyges curiails и Yponomeuta padella.

Насекомые-вредители также включают насекомых, выбранные из отрядов Diptera, Hymenoptera, Lepidoptera, Mallophaga, Homoptera, Hemiptera, Orthroptera, Thysanoptera, Dermaptera, Isoptera, Anoplura, Siphonaptera, Trichoptera, Coleoptera и т.п.; в особенности Lepidoptera. Насекомые-вредители основных культурных растении, рассматриваемые в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются только ими: Маис: Ostrinia nubilalis, мотылек кукурузный; Agrotis ipsilon, совка-ипсилон; Helicoverpa zeae, совка кукурузная; Spodoptera frugiperda, совка травяная; Diatraea grandiosella, огневка кукурузная юго-западная; Elasmopalpus lignosellus, мотылек малый кукурузный; Diatraea saccharalis, огневка тростниковая; западный кукурузный жук, например, Diabrotica virgifera virgifera; северный кукурузный корневой жук, например, Diabrotica longicornis barberi; блошка 11-точечная Говарда, например, Diabrotica undecimpunctata howardi; Melanotus spp., проволочники; Cyclocephala borealis, северный кукурузный жук (личинка жука); Cyclocephala immaculata, южный кукурузный жук (личинка жука); Popillia japonica, хрущик японский; Chaetocnema pulicaria, земляная кукурузная блошка; Sphenophorus maidis, долгоносик кукурузный; Rhopalosiphum maidis, тля кукурузная; Anuraphis maidiradicis, тля кукурузная корневая; Blissus leucopterus leucopterus, земляной клоп; Melanoplus femurrubrum, кобылка красноногая; Melanoplus sanguinipes, миграционный кузнечик; Hylemya platura, личинка мухи ростковой; Agromyza parvicornis, кукурузная минирующая муха; Anaphothrips obscrurus, трипс злаковый; Solenopsis milesta, муравей-вор; Tetranychus urticae, клещик паутинный двупятнистый; Сорго: Chilo partellus, сорговый точильщик; Spodoptera frugiperda, совка травяная; Helicoverpa zea, совка кукурузная; Elasmopalpus lignosellus, малый мотылек кукурузный; Feltia subterranea, granulate cutworm; Phyllophaga crinita, личинка жука; Eleodes, Conoderus и Aeolus spp., проволочники; Oulema melanopus, пьявица красногрудая; Chaetocnema pulicaria, земляная кукурузная блошка; Sphenophorus maidis, долгоносик кукурузный; Rhopalosiphum maidis; тля кукурузная; Sipha flava, тля желтая сахарного тростника; земляной клоп, например, Blissus leucopterus leucopterus; Contarinia sorghicola, галлица сорговая; Tetranychus cinnabarinus, красный паутинный клещ; Tetranychus urticae, клещик паутинный двупятнистый; Пшеница: Pseudaletia unipunctata, совка луговая; Spodoptera frugiperda, совка травяная; Elasmopalpus lignosellus, мотылек малый кукурузный; Agrotis orthogonia, совка прямоугольная; Elasmopalpus lignosellus, мотылек малый кукурузный; Oulema melanopus, пьявица красногрудая; Hypera punctata, слоник листовой клеверный; блошка 11-точечная Говарда, например, Diabrotica undecimpunctata howardi; тля ячменная; Schizaphis graminum, тля злаковая обыкновенная; Macrosiphum avenae, тля злаковая; Melanoplus femurrubrum, краснобедрая кобылка; Melanoplus differentialis, кобылка отличительная; Melanoplus sanguinipes, миграционный кузнечик; Mayetiola destructor, гессенская мушка; Sitodiplosis mosellana, галлица злаковая оранжевая; Meromyza americana, личинка американской меромизы; Hylemya coarctata, муха озимая; Frankliniella fusca, трипс табачный; Cephus cinctus, пилильщик хлебный американский; Aceria tulipae, луковичный клещ тюльпанов; Подсолнечник: Cylindrocupturus adspersus, подсолнечниковый стеблевой долгоносик; Smicronyx fulus, красный долгоносик подсолнечника; Smicronyx sordidus, серый долгоносик подсолнечника; Suleima helianthana, листовертка подсолнечниковая; Homoeosoma electellum, огневка подсолнечниковая; Zygogramma exclamationis, совка подсолнечниковая восклицательная; Bothyrus gibbosus, жук морковный; Neolasioptera murtfeldtiana, галлица подсолнечниковая; Хлопчатник: Heliothis virescens, табачная листовертка; Helicoverpa zea, совка хлопковая; Spodoptera exigua, совка малая; Pectinophora gossypiella, розовый коробочный червь; долгоносик хлопковый, например, Anthonomus grandis; Aphis gossypii, тля хлопковая; Pseudatomoscelis seriatus, блошка хлопковая; Trialeurodes abutilonea, белокрылка окаймленная; Lygus lineolaris, клоп луговой; Melanoplus femurrubrum, краснобедрая кобылка; Melanoplus differentialis, кобылка отличительная; Thrips tabaci, трипс луковый; Franklinkiella fusca, трипс табачный; Tetranychus cinnabarinus, красный паутинный клещ; Tetranychus urticae, клещик паутинный двупятнистый; Рис: Diatraea saccharalis, огневка сахарного тростника; Spodoptera frugiperda, совка травяная; Helicoverpa zea, совка кукурузная; Colaspis brunnea, grape colaspis; Lissorhoptrus oryzophilus, долгоносик рисовый водяной; Sitophilus oryzae, долгоносик рисовый; Nephotettix nigropictus, цикадка зеленая рисовая; земляной клоп, например, Blissus leucopterus leucopterus; Acrosternum hilare, клоп-щитник; Соя: Pseudoplusia includens, пяденица соевая; Anticarsia gemmatalis, гусеница, вредящая соевым культурам; Plathypena scabra, совка клеверная; Ostrinia nubilalis, мотылек кукурузный; Agrotis ipsilon, совка-ипсилон; Spodoptera exigua, совка малая; Heliothis virescens, табачная листовертка; Helicoverpa zea, совка хлопковая; Epilachna varivestis, мексиканский жук; Myzus persicae, тля персиковая зеленая; Empoasca fabae, цикадка картофельная; Acrosternum hilare, клоп-щитник; Melanoplus femurrubrum, краснобедрая кобылка; Melanoplus differentialis, кобылка отличительная; Hylemya platura, личинка мухи ростковой; Sericothrips variabilis, трипс соевый; Thrips tabaci, трипс луковый; Tetranychus turkestani, клещик паутинный атлантический; Tetranychus urticae, клещик паутинный двупятнистый; Ячмень: Ostrinia nubilalis, мотылек кукурузный; Agrotis ipsilon, совка-ипсилон; Schizaphis graminum, тля злаковая обыкновенная; земляной клоп, например, Blissus leucopterus leucopterus; Acrosternum hilare, клоп-щитник; Euschistus servus, щитник коричневый; Jylemya platura, личинка мухи ростковой; Mayetiola destructor, гессенская мушка; Petrobia latens, петробия многоядная; масличный рапс: Vrevicoryne brassicae, тля капустная; Phyllotreta cruciferae, блошка крестоцветная; Phyllotreta striolata, блошка полосатая; Phyllotreta nemorum, блошка земляная светлоногая; Meligethes aeneus, рапсовый цветоед; и цветоеды Meligethes rufimanus, Meligethes nigrescens, Meligethes canadianus и Meligethes viridescens; Картофель: Leptinotarsa decemlineata, колорадский жук.

Способы и композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, также можно использовать для борьбы с Hemiptera, такими как Lygus hesperus, Lygus lineolaris, Lygus pratensis, Lygus rugulipennisPopp, Lygus pabulinus, Calocoris norvegicus, Orthops compestris, Plesiocoris rugicollis, Cyrtopeltis modestus, Cyrtopeltis notatus, Spanagonicus albofasciatus, Diaphnocoris chlorinonis, Labopidicola allii, Pseudatomoscelis seriatus, Adelphocoris rapidus, Poecilocapsus lineatus, Blissus leucopterus, Nysius ericae, Nysius raphanus, Euschistus servus, Nezara viridula, Eurygaster, Coreidae, Pyrrhocoridae, Tinidae, Blostomatidae, Reduviidae и Cimicidae. Представляющие интерес вредители также включают Araecerus fasciculatus, ложнослоник кофейный; Acanthoscelides obtectus, зерновка фасолевая; Bruchus rufmanus, зерновка бобовая красноногая; Bruchus pisorum, зерновка гороховая; Zabrotes subfasciatus, бразильская бобовая зерновка; Diabrotica balteata, жук-блошка окаймленная; Cerotoma trifurcata, листоед бобовый; Diabrotica virgifera, мексиканский кукурузный корневой жук; Epitrix cucumeris, potato земляная блошка; Chaetocnema confinis, sweet potato flea beetle; Hypera postica, долгоносик люцерновый; Anthonomus quadrigibbus, цветоед яблонный четырехбугорчатый; Sternechus paludatus, bean stalk weevil; Hypera brunnipennis, долгоносик египетский люцерновый; Sitophilus granaries, долгоносик амбарный обыкновенный; Craponius inaequalis, grape curculio; Sitophilus zeamais, кукурузный долгоносик; Conotrachelus nenuphar, плодовый долгоносик; Euscepes postfaciatus, бататовый долгоносик; Maladera castanea, хрущик азиатский садовый; Rhizotrogus majalis, европейский хрущ; Macrodactylus subspinosus, бронзовка золотистая; Tribolium confusum, малый мучной хрущак; Tenebrio obscurus, большой темный хрущак; Tribolium castaneum, хрущак каштановый; Tenebrio molitor, большой мучной хрущак.

Нематоды включают parasitic нематоды, такие как яванская галловая, цистообразующие и ранящие нематоды, включая Heterodera spp., Meloidogyne spp. и Globodera spp.; в особенности представители цистообразующих нематод, включая, но не ограничиваясь только ими, Heterodera glycines (соевая цистообразующая нематода); Heterodera schachtii (свекловичная цистообразующая нематода); Heterodera avenae (зерновая цистообразующая нематода); и Globodera rostochiensis и Globodera pailida (картофельные цистообразующие нематоды). Ранящие нематоды включают Pratylenchus spp.

Пестицидную активность композиций, предлагаемых в настоящем изобретении, можно исследовать на насекомых-вредителях на ранних стадиях развития, например, когда образуются личинки или другие незрелые формы. Насекомых можно выращивать в полной темноте при температуре, равной от примерно 20°C до примерно 30°C, и относительной влажности, равной от примерно 30% до примерно 70%. Биологические исследования можно проводить, как описано в публикации Czapla and Lang (1990) J. Econ. Entomol. 83 (6): 2480-2485. Методики выращивания насекомых личинок и проведения диологических исследований хорошо известны специалисту с общей подготовкой в данной области техники.

В других вариантах осуществления бактериальные штаммы или их активные варианты (т. е. AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них) обеспечивают борьбу по меньшей мере с одним, двумя, тремя, четырьмя, пятью или большим количеством микозов и/или патогенных грибов, описанных в настоящем изобретении.

В других вариантах осуществления бактериальные штаммы или их активные варианты (т.е. AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них) обеспечивают борьбу по меньшей мере с одним, двумя, тремя, четырьмя, пятью или большим количеством микозов, выбранных из группы, включающей азиатскую ржавчину сои, серую гниль, пятнистость листьев, селенофомозную пятнистость листьев, бурую пятнистость, комплекс черной ножки, бурую пятнистость, черную коросту, корневую гниль, belly rot, ризоктониоз, настоящую мучнистую росу, антракнозную пятнистость листьев, ложную мучнистую росу, питиозную гниль корней, фитофторозную гниль, фузариоз колоса, SDS, фузариозный вилт, стеблевую гниль кукурузы, бурую ржавчину, черную ржавчину, желтую ржавчину, ржавчину пшеницы, ржавчину, паршу яблони, вертициллиозный вилт, бактериальный ожог и бурую гниль.

В других вариантах осуществления бактериальный штамм или его активный вариант (т.е. AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них) обеспечивают борьбу по меньшей мере с одним, двумя, тремя, четырьмя, пятью или большим количеством микозов, выбранных из группы, включающей азиатскую ржавчину сои, серую гниль, селенофомозную пятнистость листьев, бурую пятнистость, комплекс черной ножки, бурую пятнистость, настоящую мучнистую росу, антракнозную пятнистость листьев, ложную мучнистую росу, питиозную гниль корней, фитофторозную гниль, фузариоз колоса, SDS и паршу яблони.

В других вариантах осуществления бактериальные штаммы или их активные варианты (т.е. AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них) обеспечивают борьбу по меньшей мере с одним, двумя, тремя, четырьмя, пятью большим количеством патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cersospora spp, Cercospora sojina, Cercospora beticola, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Blumeria graminis f. sp. Tritici, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Golovinomyces cichoracearum, Erysiphe lagerstroemiae, Sphaerotheca pannosa, Colletotrichum cereale, Apiognomonia errabunda, Apiognomonia veneta, Colletotrichum gloeosporiodes, Discula fraxinea, Plasmopara viticola, Pseudoperonospora cubensis, Peronospora belbahrii, Bremia lactucae, Peronospora lamii, Plasmopara obduscens, Pythium cryptoirregulare, Pythium aphanidermatum, Pythium irregulare, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora capsici, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium graminicola, Gibberella zeae, Colletotrichum graminicola, Phakopsora sp., Phakopsora meibomiae, Phakopsora pachyrizi, Puccinia triticina, Puccinia recondita, Puccinia striiformis, Puccinia graminis, Puccinia spp.,Venturia inaequalis, Verticillium spp, Erwinia amylovora, Monilinia fructicola, Monilinia lax и Monilinia fructigena.

В других вариантах осуществления бактериальные штаммы или их активные варианты (т. е. AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них) обеспечивают борьбу по меньшей мере с одним, двумя, тремя, четырьмя, пятью большим количеством патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cercospora sojina, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Colletotrichum cereal, Plasmopara viticola, Peronospora belbahrii, Pythium aphanidermatum, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Phakopsora pachyrizi и Venturia inaequalisa.

В других вариантах осуществления бактериальные штаммы или их активные варианты (т.е. AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них) обеспечивают борьбу по меньшей мере с одним, двумя или всеми Phakopsora. В других вариантах осуществления бактериальный штамм или модифицированные биологические агенты, раскрытые в настоящем изобретении (т.е. AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них) обеспечивают борьбу по меньшей мере с одним или всеми Phakopsora pachyrhizi и/или Phakopsora meibomiae. В других способах бактериальные штаммы или модифицированные бактериальные штаммы, раскрытые в настоящем изобретении (т.е. AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них) обеспечивают борьбу с Phakopsora pachyrhizi.

B. Способы лечения или предупреждения болезни растения

Настоящее изобретение относится к способам лечения или предупреждения болезни растения, включающим нанесение на растение, у которого имеется болезнь растения или опасность возникновения болезни растения эффективного количества по меньшей мере одного бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта, где бактериальный штамм обеспечивает борьбу с патогеном растения, который вызывает болезнь растения. В некоторых вариантах осуществления бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант может включать по меньшей мере один из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них; или спору или предспору, или комбинацию клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество бактериального штамма или его активного варианта включает равное по меньшей мере примерно от 10¹² до 10¹⁶ КОЕ/га или менее, примерно от 10⁴ до 10¹⁶ КОЕ/га или менее, примерно от 10⁵ до 10¹¹ КОЕ/га.

В некоторых способах, бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант представляет собой антипатогенный агент, который лечит или предупреждает одну, две, три, четыре, пять или большее количество болезней растений. В других способах бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант представляет собой фунгицидный агент, который лечит или предупреждает один, два, три, четыре, пять или большее количество микозов растений. Бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант можно использовать для любых видов растений, восприимчивых к представляющей интерес болезни растения.

Примеры болезней, вызванных патогенными грибами, описанными в настоящем изобретении, приведены в таблице 1. Также приведены неограничивающие примеры типичных видов культурных растений, которые восприимчивы к болезням растений, вызванным патогенами. Например, в таблице 1 показано, что Bortrytis cinerea вызывает серую гниль на цветковых культурных растениях. Поэтому бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант, который обеспечивает борьбу с Bortrytis cinerea, можно наносить на растение, у которого имеется серая гниль или опасность возникновения серой гнили, для лечения или предупреждения серой гнили у растения. Аналогичным образом, в таблице 1 показано, что Rhizoctonia solani вызывает комплекс черной ножки в кукурузе, комплекс черной ножки в сое, бурую пятнистость в дерне и комплекс черной ножки в декоративных растениях. Поэтому бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант, который обеспечивает борьбу с Rhizoctonia solani, можно наносить на растение, у которого имеется комплекс черной ножки или опасность возникновения комплекса черной ножки и/или бурой пятнистости, для лечения или предупреждения комплекса черной ножки, и/или бурой пятнистости у растения. В качестве другого примера в таблице 1 показано, что Colletotrichum cereal, Apiognomonia errabunda, Apiognomonia veneta, Colletotrichum gloeosporiodes, Discula fraxinea вызвываю антракнозную пятнистость листьев. Поэтому бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант, который обеспечивает борьбу с одним или большим количеством следующих: Colletotrichum cereal, Apiognomonia errabunda, Apiognomonia veneta, Colletotrichum gloeosporiodes, Discula fraxinea, можно наносить на растение, у которого имеется антракнозная пятнистость листьев или опасность возникновения антракнозной пятнистости листьев, для лечения или предупреждения антракнозной пятнистости листьев у растения.

Таблица 1

Настоящее изобретение также относится к способам лечения или предупреждения азиатской ржавчины сои (ASR), включающим нанесение на растение, у которого имеется ASR или опасность возникновения ASR, эффективного количества по меньшей мере одного бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта, включающего AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них; или спору или предспору, или комбинацию клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта включает равное по меньшей мере примерно от 10¹² до 10¹⁶ КОЕ/га и бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант обеспечивает борьбу с патогеном растения, который вызывает ASR. В одном варианте осуществления эффективное количество по меньшей мере одного бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта, предлагаемого в настоящем изобретении, используют для некорневого нанесения на растение для лечения или предупреждения ASR.

Бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант или модифицированный бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, можно использовать для любых видов растений, восприимчивого к ASR. "Растение, восприимчивое к азиатской ржавчине сои (ASR)" означает, что патоген-возбудитель (патогены) ASR способен заразить растение. Примеры видов растений, восприимчивых к ASR включают, но не ограничиваются только ими, сою (Glycine max), фасоль обыкновенную (Phaseolus vulgaris), такие как зеленую фасоль и фасоль многоцветковую, лимскую фасоль (Phaseolus limensis), масляные бобы (Phaseolus lunatus), горох коровий (Vigna unguiculata), кайанусы (Cajanus cajan), пахиризусы, такие как хикама (Pachyrhizus erosus). В предпочтительном варианте осуществления используют растение сои.

Как дополнительно подробно описано в настоящем изобретении, в предпочтительных вариантах осуществления бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант обеспечивает борьбу с одним или большим количеством грибов, которые вызывают ASR (такими как, например, Phakopsora). ASR вызывается одним или большим количеством патогенных грибов рода Phakopsora. В неограничивающих вариантах осуществления патогенными грибами, которые вызывают ASR, являются Phakopsora pachyrhizi или Phakopsora meibomiae. Патоген ASR хорошо приспособлен для рассеивания на большие расстояния, поскольку споры могут легко переноситься ветром, что делает его идеальным средством для распространения на новые, не зараженные ржавчиной регионы. Первичным средством распространения являются споры, которые могут легко переноситься ветром и с каплями дождя. Эти патогены являются облигатными патогенами, жизнеспособными и размножающимися только на живых хозяевах. В выращиваемой сое первыми симптомами являются светло-коричневые многоугольные поражения размером от 2 до 5 мм на верхней поверхности листа. Эти поражения развиваются в вулканообразные поражения, известные, как пустулы, которые появляются на нижней поверхности листа, где образуются уредоспоры.

В других вариантах осуществления бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант обеспечивает борьбу с Phakopsora pachyrhizi. В других вариантах осуществления бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант обеспечивает борьбу с Phakopsora meibomiae. Различные методики исследования для определения такой активности раскрыты в другом разделе настоящего изобретения.

Термин "лечить" или "лечение" или его производные включает значительное подавление, замедление или обращение прогрессирования патологического состояния, значительное ослабление симптомов патологического состояния или существенное предупреждение появления симптомов или патологических состояний, обусловленных патогеном, который вызывает болезнь растения.

Термины "борьба с патогенами" и "защита растения от патогена" означают одно или большее количество из следующих: подавление или уменьшение роста, прорастания, размножения и/или распространения представляющего интерес патогена; и/или уничтожение, удаление, разрушение, или проводимое иным образом уменьшение наличия и/или активности представляющего интерес патогена. Само по себе растение, обработанное бактериальным штаммом, предлагаемым в настоящем изобретении, может продемонстрировать уменьшение тяжести болезни или уменьшение развития болезни в присутствии патогенов растений на статистически значимое количество.

Термин "предупреждение" и его варианты означают заблаговременное противодействие росту бактерий, грибов, вирусов, насекомых или других вредителей, распространению, заражению, прорастанию споры и росту гифов. В этом случае композицию наносят до воздействия патогенов.

Термины "улучшать" и "улучшение" относятся к улучшению состояния обработанного растения, вызванное композициями и способами, предлагаемыми в настоящем изобретении. Улучшение может проявляться в виде уменьшения роста патогена и/или увеличения у пораженного растения высоты, массы, количества листьев, корневой системы или урожайности. В целом термин означает улучшение физиологического состояния пораженного растения.

Термин "подавлять" и все варианты этого термина включает ограничение или прекращение роста бактерий, грибов, вирусов, нематод, насекомых или любых других вредителей, а также прорастания споры.

Термин "исключение" относится к существенному истреблению или удалению бактерий, грибов, вирусов, нематод, насекомых или любых других вредителей вследствие их взаимодействия с композицией, предлагаемой в настоящем изобретении, необязательно, в соответствии со способами, предлагаемыми в настоящем изобретении, описанными ниже.

Термины "задерживание", "замедление" и все их варианты включают замедление прогрессирования роста бактерий, грибов, вирусов, нематод, насекомых или любых других вредителей и прорастания споры. Выражение "задержка начала" интерпретируется, как предупреждение или замедление прогрессирования роста бактерий, грибов, вирусов, нематод, насекомых или любых других вредителей, заражения, инфицирования, прорастание споры и роста гифов в течение периода времени, в котором рост, заражение, инфицирование, прорастание споры и рост гифов указанных бактерий, грибов, вирусов, нематод, насекомых или любых других вредителей не прогрессирует по мере развития или проявляется позже, чем при отсутствии обработки, предлагаемой в настоящем изобретении.

Растение, часть растения или участок выращивания, обработанный бактериальным штаммом, предлагаемым в настоящем изобретении, или его активным вариантом, может продемонстрировать уменьшение тяжести болезни или уменьшение развития болезни в присутствии патогенов растений на статистически значимое количество. Уменьшение тяжести болезни или уменьшение развития болезни может составлять от примерно 10% до примерно 20%, от примерно 20% до примерно 30%, от примерно 30% до примерно 40%, от примерно 40% до примерно 50%, от примерно 50% до примерно 60%, от примерно 60% до примерно 70%, от примерно 70% до примерно 80%, от примерно 80% до примерно 90% или от примерно 90% до примерно 100% по сравнению с необработанными контрольными растениями. В других случаях растение, обработанное бактериальным штаммом, предлагаемым в настоящем изобретении, или его активным вариантом, может продемонстрировать уменьшение тяжести болезни или уменьшение развития болезни в присутствии патогена растения по меньшей мере примерно на 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или примерно на 100% более значительное по сравнению с необработанными контрольными растениями. Методики оценки тяжести болезни растения известны и включают, измерение выраженной в процентах площади пораженного листа (Godoy et al. (2006) Fitopatol. Bras. 31(1) 63-68 или измерение количества урединиумов (см. пример 1).

"Антипатогенные композиции" или "антипатогенные" означает, что композиции способны подавлять проникший патогенный организм, бороться с ним, предупреждать его проникновение и/или уничтожать его. В предпочтительных вариантах осуществления антипатогенная композиция ослабляет симптомы болезни, вызванные воздействием патогена, на статистически значимое количество, включая, например, от по меньшей мере примерно 10% до по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере от примерно 20% до примерно 50%, по меньшей мере от примерно 10% до примерно 60%, по меньшей мере от примерно 30% до примерно 70%, по меньшей мере от примерно 40% до примерно 80% или по меньшей мере от примерно 50% до примерно 90% или более. Следовательно, способы, предлагаемые в настоящем изобретении, можно использовать для защиты растений от болезни, в особенности от тех болезней, которые вызваны патогенами растений.

Исследования по определению антипатогенной активности хорошо известны в данной области техники, как и методики количественной оценки устойчивости к болезни растений после заражения патогеном. См., например, патент U.S. № 5614395, который включен в настоящее изобретение в качестве ссылки. Такие методики включают, определение зависимости от времени среднего диаметра повреждения, биомассы патогена и общего содержания пораженных тканей растения. Например, растение, экспрессирующее антипатогенный полипептид или на поверхность которого нанесена антипатогенная композиция, характеризуется уменьшением некроза тканей (т.е. диаметра поражения) или уменьшением количества погибших растений после воздействия патогена по сравнению с контрольными растениями, которое не обрабатывали антипатогенной композицией. Альтернативно, антипатогенную активность можно оценить по уменьшению биомассы патогена. Например, растение экспрессирующее антипатогенный полипептид или на поверхность которого нанесена антипатогенная композиция, воздействуют представляющим интерес патогеном. По истечении некоторого времени отбирают образцы инокулированных патогеном тканей и экстрагируют РНК. Отношение содержания специфического транскрипта РНК патогена к содержанию специфического транскрипта растения позволяет определить количество биомассы патогена. См., например, публикацию Thomma et al. (1998) Plant Biology 95:15107-15111, которая включена в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Кроме того, антипатогенные исследования in vitro включают, например, нанесение антипатогенной композиции в различных концентрациях на бумажный диск и помещение диска на агар, содержащий суспензию представляющего интерес патогена. После инкубации вокруг дисков образуются четкие зоны подавления, в которых находится антипатогенный полипептид в эффективной концентрации (Liu et al. (1994) Plant Biology 91:1888-1892, которая включена в настоящее изобретение в качестве ссылки). Кроме того, для исследования антипатогенных характеристик композиции in vitro можно использовать микроспектрофотометрический анализ (Hu et al. (1997) Plant Mol. Biol. 34:949-959 and Cammue et al. (1992) J. Biol. Chem. 267: 2228-2233, обе публикации включены в настоящее изобретение в качестве ссылки).

C. Способы придания устойчивости к болезни растений и/или улучшения жизнеспособности растения и/или улучшения представляющего интерес агротехнического признака

Настоящее изобретение также относится к композициям и способам придания устойчивости растения к болезни, вызванной патогенами растений. Соответственно, композиции и способы также применимы для защиты растений от патогенных грибов, вирусов, нематод и насекомых. Настоящее изобретение относится к способам придания устойчивости к болезни, вызванной патогеном растения, включающим нанесение на растение, которое восприимчиво к болезни растения, вызванной патогеном растения, эффективного количества по меньшей мере одного бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта. В некоторых вариантах осуществления бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант может включать по меньшей мере один из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них; или спору или предспору, или комбинацию клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них. В некоторых вариантах осуществления бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант обеспечивает защитную реакцию на патоген, который вызывает болезнь растения. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта включает равное по меньшей мере примерно от 10¹² до 10¹⁶ КОЕ/га.

Защитная реакция растения может проявиться после нанесения бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта на растение, но до воздействия патогена и/или после воздействия патогена на растения, обработанное бактериальным штаммом, предлагаемым в настоящем изобретении, или его активным вариантом.

В некоторых способах, бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант придает устойчивость к одному, двум, трем, четырем, пяти или большему количеству патогенов растений, описанных в настоящем изобретении. В других способах бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант придает устойчивость к одному, двум, трем, четырем, пяти или большему количеству патогенных грибов растений, описанных в настоящем изобретении.

"Устойчивость к болезни" означает, что у растения не возникают симптомы болезни, которые появляются вследствие взаимодействий растение-патоген. Это означает, что предупреждено возникновение болезни растений и связанных с ней симптомов вследствие воздействия патогенов или, альтернативно, симптомы болезни, вызванные патогеном, сведены к минимуму или ослаблены по сравнению с контролем. Настоящее изобретение также относится к способам улучшения жизнеспособности растения и/или улучшения представляющего интерес агротехнического признака, включающим нанесение на растение эффективного количества по меньшей мере одного бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта, или его активного производного. В некоторых вариантах осуществления бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант может включать по меньшей мере один из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них; или спору или предспору, или комбинацию клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта включает равное по меньшей мере примерно от 10¹² до 10¹⁶ КОЕ/га.

"Улучшенная жизнеспособность растения" означает, если указать только некоторые, увеличенный рост и/или урожайность растения, увеличение устойчивости к стрессу и/или увеличение устойчивости к гербициду. Увеличение устойчивости к стрессу означает усиление способности растения ослаблять или предупреждать симптомы, связанные с одним или большим количеством стрессов. Стресс может представлять собой биотический стресс, который возникает вследствие повреждения растений другими живыми организмами, такими как патоген (например, бактерии, вирусы, грибы, паразиты), насекомые, нематоды, сорняки, культурные или местные растения. Стресс также может представлять собой абиотический стресс, такой как обусловленный экстремальными температурами (высокими или низкими), сильными ветрами, засухой, соленостью, химической токсичностью, воздействием окислителей, наводнением, торнадо, пожарами, радиацией и воздействием тяжелых металлов. Неограничивающие примеры улучшенных агротехнических признаков раскрыты в другом разделе настоящего изобретения. В предпочтительных вариантах осуществления эффективное количество бактериального штамма или его активного варианта улучшает жизнеспособность растения или улучшает представляющий интерес агротехнический признак на статистически значимое количество, включая, например, составляющее от по меньшей мере примерно 10% до по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере от примерно 20% до примерно 50%, по меньшей мере от примерно 10% до примерно 60%, по меньшей мере от примерно 30% до примерно 70%, по меньшей мере от примерно 40% до примерно 80% или по меньшей мере от примерно 50% до примерно 90% или более.

D. Способы нанесения на растение или часть растения

Бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант наносят в эффективном количестве. Эффективное количество бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта, является количеством, достаточным для борьбы с патогеном, лечением, предупреждением, подавлением патогена, который вызывает болезнь растения, и/или уменьшения тяжести болезни растения или уменьшения развития болезни растения. В других вариантах осуществления эффективное количество бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта, является количеством, достаточным для улучшения представляющего интерес агротехнического признака и/или стимулирования или увеличения жизнеспособности растения, роста или урожайности растения, восприимчивого к болезни. Норма расхода бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта, необходимая для улучшения представляющего интерес агротехнического признака, может меняться в зависимости от патогена, с которым проводят борьбу, защищаемого культурного растения, эффективности бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта, тяжести болезни, климатических условий и т.п.

Обычно норма расхода бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта равна от 10⁷ до 10¹⁶ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар. В других вариантах осуществления при инокуляции в поле норма расхода бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта равна от 3×10⁷до 1×10¹¹ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар. (Это соответствует примерно от 1 кг до 10 кг приготовленного материала на гектар). В других вариантах осуществления при инокуляции в поле норма расхода бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта равна от 3×10⁷до 1×10¹⁶ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар; от примерно 1×10¹² до примерно 1×10¹³ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар, от примерно 1×10¹³ до примерно 1×10¹⁴ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар, от примерно 1×10¹⁴ до примерно 1×10¹⁵ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар, от примерно 1×10¹⁵ до примерно 1×10¹⁶ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар, от примерно 1×10¹⁶ до примерно 1×10¹⁷ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар; от примерно 1×10⁴ до примерно 1×10¹⁴ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар; от примерно 1×10⁵ до примерно 1×10¹³ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар; от примерно 1×10⁶ до примерно 1×10¹² колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар; от примерно 1×10⁹ до примерно 1×10¹¹ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар; или от примерно 1×10⁹ до примерно 1×10¹¹ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар. В других вариантах осуществления при инокуляции в поле норма расхода бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта равна по меньшей мере примерно 1×10⁴, примерно 1×10⁵, примерно 1×10⁶, примерно 1×10⁷, примерно 1×10⁸, примерно 1×10⁹, примерно 1×10¹⁰, примерно 1×10¹¹, примерно 1×10¹²1×10¹³, примерно 1×10¹⁴, 1×10¹⁵, примерно 1×10¹⁶ или примерно 1×10¹⁷ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар. В других вариантах осуществления при инокуляции в поле норма расхода бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта равна от по меньшей мере 1×10⁷до по меньшей мере примерно 1×10¹² КОЕ/га. В предпочтительных вариантах осуществления наносимый бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант включает штамм, депонированный как AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активное производное любого из них, или спору или предспору, или комбинацию клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного производного любого из них.

Любое подходящее для сельского хозяйства количество биоцида можно наносить в комбинации с бактериальным штаммом, предлагаемым в настоящем изобретении, или его активным вариантом, раскрытым в настоящем изобретении. Способы определения эффективного количества бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта включают, например, установление любого статистически значимого усиления борьбы с патогеном или вредителем, обеспечиваемого биоцидом. Способы оценки такой борьбы известны. Кроме того, рассматривается статистически значимое улучшение жизнеспособности растения, урожайности и/или роста, который происходит после нанесения эффективного количества бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта, по сравнению с жизнеспособностью растения, урожайностью и/или ростом, который наблюдается, когда не наносят бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант.

Настоящее изобретение также относится к способу борьбы с патогеном или подавления роста патогена растения, который вызывает болезнь растения, путем нанесения композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант, предлагаемый в настоящем изобретении (т. е. AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них). "Нанесение" означает взаимодействие эффективного количества бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта с растением, частью растения, участком выращивания, семенами и/или сорняком вместе с одним или большим количеством бактериальных штаммов, предлагаемых в настоящем изобретении, или его активным вариантом, так чтобы проявлялся желательный результат. Кроме того, нанесение бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта можно проводить до высевания культурного растения (например, высевания в почву семян или растений). В предпочтительном варианте осуществления нанесение бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта представляет собой некорневое нанесение. Поэтому в другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу борьбы с патогеном или подавления роста патогена растения путем нанесения популяции бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта на среду, в которой может расти патоген растения. Нанесение можно проводить на растение, части растения, на семена защищаемых растений или на почву, в которой растет или будет расти защищаемой растение. Нанесение на растение или части растения можно проводить до или после сбора урожая. Нанесение на семена следует проводить до высевания семян.

В некоторых вариантах осуществления эффективное количество по меньшей мере одного бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта, предлагаемого в настоящем изобретении, используют для некорневого нанесения с целью борьбы с патогенами или подавления роста одного или большего количества патогенов, выбранных из группы, включающей Alternaria spp., Alternariasolani, Colletotrichum spp., Mycosphaerella spp., Phomopsis spp., Cercospora spp., Botrytis spp. и Botrytiscinerea.

В других вариантах осуществления эффективное количество по меньшей мере одного бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта, предлагаемого в настоящем изобретении, наносят на почву, в которой растет или будет расти защищаемой растение, для борьбы с патогенами или подавления роста одного или большего количества патогенов, выбранных из группы, включающей Rhizoctonia spp., Rhizoctonia solani, Fusarium spp., Sclerotium spp., Sclerotinia spp., Sclerotinia sclerotiorum, Phytopthora spp. и Pythium spp.

В некоторых вариантах осуществления эффективное количество по меньшей мере одного бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта, предлагаемого в настоящем изобретении, наносят на растение после сбора урожая для борьбы с патогенами или подавления роста одного или большего количества патогенов, выбранных из группы, включающей Monolinia spp., Penicillium spp., Botrytis ssp. и Botrytiscinerea.

При использовании в настоящем изобретении термин растение включает клетки растения, протопласты растения, культуры клеток растения, из которых можно восстановить растения, каллюсы растения, куски растения и клетки растения, которые являются неповрежденными в растениях или частях растений, такие как эмбрионы, пыльца, семяпочки, семена, листья, цветки, ветви, плоды, зерна, колосья, сердцевины початков, мякина, стебли, корни, кончики корней, пыльники и т.п. Зерно означает зрелое зерно, выращенное фермерами не для выращивания растения или воспроизводства вида.

В предпочтительных вариантах осуществления нанесение бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта (т.е. AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или споры или предспоры, или комбинации клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или его активного варианта) проводят на листья растения сои. Режим времени нанесения может меняться в зависимости от условий и географического положения. В предпочтительных вариантах осуществления бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант наносят на стадии R1 (стадия начала цветения) развития сои или можно наносить ранее в зависимости от времени начала ASR и тяжести болезни.

В других вариантах осуществления нанесение биоцида на культурное растение, участок выращивания или поле следует понимать так, что одно или большее количество из следующих: конкретное поле, культурное растение, семена и/или сорняк обрабатывают одним или большим количеством бактериальных штаммов, предлагаемых в настоящем изобретении, или его активным вариантом и одним или большим количеством биоцидов, так чтобы обеспечивался желательный результат.

Настоящее изобретение относится к различным способам борьбы с патогеном растения, который вызывает болезнь растения, на участке выращивания, содержащем растение, восприимчивое к болезни растения. Способ включает посадку на участке выращивания семян или растений, восприимчивых к болезни растения; и нанесение на растение, восприимчивое к болезни, семена или участок выращивания растения, восприимчивого к болезни растения, эффективного количества по меньшей мере одного бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта (т.е. AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного производного любого из них, или споры или предспоры, или комбинации клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или его активного варианта), где эффективное количество бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта обеспечивает борьбу с болезнью растения без значительного влияния на культурное растение. В предпочтительных вариантах осуществления эффективное количество включает равное по меньшей мере примерно от 10¹² до 10¹⁶ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар.

Настоящее изобретение также относится к способу выращивания растения, восприимчивого к болезни растения. Способ включает нанесение на растение, восприимчивое к болезни, семена или участок выращивания растения, восприимчивого к болезни, эффективного количества композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант. В некоторых вариантах осуществления бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант может включать по меньшей мере один из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них; или спору или предспору, или комбинацию клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них. Различные эффективные количества бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта раскрыты в другом разделе настоящего изобретения и в одном неограничивающем примере эффективное количество бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта включает равное по меньшей мере примерно от 10¹² до 10¹⁶ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар.

Настоящее изобретение относится к способам повышения урожайности растения. "Урожайность" растения означает качество и/или количество биомассы, образованной растением. "Биомасса" означает любой измеримый растительный продукт. Увеличение образованной биомассы означает любое повышение урожайности измеримого растительного продукта. Повышение урожайности может включать любое статистически значимое увеличение, включая, но не ограничиваясь только ими, составляющее не менее 1% увеличение, не менее 3% увеличение, не менее 5% увеличение, не менее 10% увеличение, не менее 20% увеличение, не менее 30%, не менее 50%, не менее 70%, не менее 100% или большее повышение урожайности по сравнению с растением, не обработанным бактериальным штаммом, предлагаемым в настоящем изобретении, или его активным вариантом. Настоящее изобретение также относится к способу повышения урожайности растения и включает нанесение на сельскохозяйственную культуру или участок выращивания эффективного количества композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный штамм, включающий AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 и AIP36895, или активный вариант любого из них, спору или предспору, или комбинацию клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них, где указанное эффективное количество включает равное по меньшей мере примерно от 10¹² до 10¹⁶ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар и где указанная композиция обеспечивает борьбу с патогеном растения и тем самым повышает урожайность.

При использовании в настоящем изобретении "участок выращивания" включает любой участок, на котором желательно выращивать растение. Такие участки выращивания включают, но не ограничиваются только ими, поле, на котором выращивают растение (такое как поле для культурного растения, залежь, лесной участок, управляемые леса, поле для выращивания плодов и овощей и т.п.), теплицу, климатическую камеру и т.п.

Настоящее изобретение также относится к семени с покрытием, которое включает семя и покрытие на семени, где покрытие включает по меньшей мере один бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант. В некоторых вариантах осуществления бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант может включать по меньшей мере один из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них; или спору или предспору, или комбинацию клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них. В некоторых вариантах осуществления указанный бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант содержится на семени в количестве, равном от примерно 10⁵ КОЕ/семя до примерно 10⁷КОЕ/семя, от примерно 10⁴ КОЕ/семя до примерно 10⁸КОЕ/семя, от примерно 10⁴ КОЕ/семя до примерно 10⁵ КОЕ/семя, от примерно 10⁵ КОЕ/семя до примерно 10⁶ КОЕ/семя, от примерно 10⁶ КОЕ/семя до примерно 10⁷ КОЕ/семя или от примерно 10⁷ КОЕ/семя до примерно 10⁸ КОЕ/семя. Покрытие для семени можно наносить на любое представляющее интерес семя (т.е. однодольное или двудольное). Различные представляющие интерес растения раскрыты в другом разделе настоящего изобретения.

Покрытие для семени может дополнительно включать по меньшей мере одно питательное вещество, по меньшей мере один гербицид или по меньшей мере один пестицид, или по меньшей мере один биоцид. См., например, US App Pub. 20040336049, 20140173979 и 20150033811.

В других вариантах осуществления представляющее интерес растение (т.е. растение, восприимчивое к болезни растения) и/или участок выращивания, включающий растение, можно обработать комбинацией эффективного количества бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта и эффективного количества биоцида. "Обработка комбинацией" или "нанесение комбинации" бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта и биоцида на растение, участок выращивания или поле следует понимать, что одно или большее количество из следующих: конкретное поле, растение и/или сорняки обрабатывают эффективным количеством одного или большего количества бактериальных штаммов, предлагаемых в настоящем изобретении, или его активного варианта и одним или большим количеством биоцидов, так чтобы обеспечивался желательный результат. Кроме того, нанесение одного или большего количества бактериальных штаммов, предлагаемых в настоящем изобретении, или его активного варианта и биоцида можно проводить до высевания культурного растения (например, высевания в почву семян или растений). Кроме того, нанесение бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта и биоцида может быть одновременным или нанесение можно проводить в разные моменты времени (последовательно), так чтобы обеспечивался желательный результат.

В одном неограничивающем варианте осуществления активный вариант включает бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, который устойчив к одному или большему количеству биоцидов. В предпочтительных вариантах осуществления бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант (т.е. AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, или спору или предспору, или комбинацию клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них) устойчив к глифосату. В таких способах растение, культурное растение или участок выращивания обрабатывают комбинацией эффективного количества бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта, который устойчив к глифосату, и эффективного количества глифосата, где эффективное количество глифосата является таким, что обеспечивает селективную борьбу с сорняками при отсутствии значительного повреждения культурного растения.

В другом неограничивающем варианте осуществления активный вариант включает бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, который устойчив к глуфосинату. В таких способах растение, культурное растение или участок выращивания обрабатывают комбинацией эффективного количества бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта, который устойчив к глуфосинату, и эффективного количества глуфосината, где эффективное количество глуфосината является таким, что обеспечивает селективную борьбу с сорняками при отсутствии значительного повреждения культурного растения. В таких вариантах осуществления эффективное количество бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта достаточно для обеспечения статистически значимого увеличения жизнеспособности растения, урожайности и/или роста по сравнению с жизнеспособностью растения, урожайностью, и/или ростом, который наблюдается, когда бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант, который не был модифицирован для придания устойчивости к глуфосинату, в такой же концентрации наносят в комбинации с эффективным количеством глуфосината или его активного производного. В другом варианте осуществления бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант включает эффективное количество AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них, или споры или предспоры, или комбинации клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них.

V. Биоциды для использования в комбинации с бактериальными штаммами, предлагаемыми в настоящем изобретении, или их активными вариантами

Как показано в другом разделе настоящего изобретения, бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант можно использовать в комбинации с биоцидом (т.е. гербицидом, фунгицидом, пестицидом или другим химикатом для защиты растений). В таких случаях бактериальный штамм, предлагаемый в настоящем изобретении, или его активный вариант совместим с представляющим интерес биоцидом.

"Устойчивость к гербициду, фунгициду, пестициду или другому химикату для защиты растений или устойчивость к гербициду, фунгициду, пестициду или другому химикату для защиты растений" означает способность организма (т.е. растения и/или бактериального штамма, предлагаемого в настоящем изобретении, или его активного варианта и т.п.) выживать и размножаться после воздействия дозы гербицида, фунгицида, пестицида или другого химиката для защиты растений, которая обычно летальна для организма дикого типа.

Гербициды, которые можно использовать в различных способах и композициях, раскрытых в настоящем изобретении, включают глифосат, ингибиторы ACCase (арилоксифеноксипропионат (FOPS)); ингибиторы ALS (сульфонилмочевина (SU)), имидазолинон (IMI), пиримидины (PM)); ингибитор белка микротрубочки (динитроанилин (DNA)); синтетические ауксины (феноксильные (P)), бензойную кислоту (BA), карбоновую кислоту (CA)); ингибитор фотосистемы II (триазин (TZ)), триазинон (TN), нитрилы (NT), бензотиадиазиноны (BZ), мочевины (US)); ингибитор EPSP синтазы (глицины (GC)); ингибитор синтеза глутамина (фосфиновую кислоту (PA)); ингибитор DOXP синтазы (изоксазолидинон (IA)); ингибитор HPPD (пиразол (PA)), трикетон (TE)); ингибиторы PPO (дифениловый эфир (DE), N-фенилфталимид (NP) (арилтриазинон (AT)); ингибиторы VLFA (хлорацетамид (CA)), оксиацетамид (OA)); ингибитор фотосистемы I (бипиридилии (BP)); и т.п.

Пестициды, которые можно использовать в различных способах и композициях, раскрытых в настоящем изобретении, включают имидаклоприд клотианидин, арилпиразолы (WO2007103076); фосфорорганические соединения, фенилпиразол, пиретроидные карбамоилоксимы, пиразолы, амидины, галогенированные углеводороды, карбаматы и их производные, тербуфос, хлорпирифос, фипронил, хлорэтоксифос, телфутрин, карбофуран, имидаклоприд, тебупиримфос (патент U.S. № 5849320).

Фунгициды, которые можно использовать в различных способах и композициях, раскрытых в настоящем изобретении, включают алифатические азотсодержащие фунгициды (бутиламин, цимоксанил, додицин, додин, гуазатин, иминоктадин); амидные фунгициды (бензовиндифлупир, карпропамид, хлораниформетан, цифлуфенамид, диклоцимет, диклоцимет, димоксистробин, фенаминстробин, феноксанил, флуметовер, фураметпир, изофетамид, изопиразам, мандестробин, мандипропамид, метоминостробин, орисастробин, пентиопирад, прохлораз, хиназамид, силтиофам, трифорин); ациламинокислотные фунгициды (беналаксил, беналаксил-M, фуралаксил, металаксил, металаксил-M, перфуразоат, валифеналат); анилидные фунгициды (беналаксил, беналаксил-M, биксафен, боскалид, карбоксин, фенгексамид, флуксапироксад, изотианил, металаксил, металаксил-M, метсульфовакс, офурац, оксадиксил, оксикарбоксин, пенфлуфен, пиракарболид, седаксан, тифлузамид, тиадинил, вангард); бензанилидные фунгициды (беноданил, флутоланил, мебенил, мепронил, салициланилид, теклофталам); фуранилидные фунгициды (фенфурам, фуралаксил, фуркарбанил, метфуроксам); сульфонанилидные фунгициды (флусульфамид); бензамидные фунгициды (бензогидроксамовая кислота, флуопиколид, флуопирам, тиоксимид, трихламид, зариламид, зоксамид); фурамидные фунгициды (циклафурамид, фурмециклокс); фенилсульфамидные фунгициды (дихлофлуанид, толилфлуанид); сульфонамидные фунгициды (амисулбром, циазофамид); валинамидные фунгициды (бентиаваликарб, ипроваликарб); фунгициды - антибиотики (ауреофунгин, бластицидин-S, циклогексимид, гризеофульвин, касугамицин, мороксидин, натамицин, полиоксины, полиоксорим, стрептомицин, валидамицин); стробилуриновые фунгициды (флуоксастробин, мандестробин); метоксиакрилат стробилуриновые фунгициды (азоксистробин, бифуджундзи, кумоксистробин, эноксастробин, флуфеноксистробин, джиаксиангджунджи, пикоксистробин, пираоксистробин); метоксикарбанилатные стробилуриновые фунгициды (пираклостробин, пираметостробин, триклопирикарб); метоксииминоацетамидные стробилуриновые фунгициды (димоксистробин, фенаминстробин, метоминостробин, орисастробин); метоксииминоацетатные стробилуриновые фунгициды (крезоксим-метил, трифлоксистробин); ароматические фунгициды (бифенил, хлординитронафталины, хлоронеб, хлороталонил, крезол, диклоран, фенджунтонг, гексахлорбензол, пентахлорфенол, квинтоцен, пентахлорфеноксид натрия, текназен, трихлортринитробензолы); мышьяксодержащие (асомат, урбацид); арилфенил кетонные фунгициды (метрафенон, пириофенон); бензимидазольные фунгициды (албендазол, беномил, карбендазим, хлорфеназол, ципендазол, дебакарб, фуберидазол, мекарбинзид, рабензазол, тиабендазол); фунгициды - предшественники бензимидазола (фурофанат, тиофанат, тиофанат-метил); бензотиазольные фунгициды (бенталурон, бентиаваликарб, бентиазол, хлобентиазон, пробеназол); растительные фунгициды (аллицин, берберин, карвакрол, карвон, остол, сангвинарин, сантонин); мостиковые дифениловые фунгициды (битионол, дихлорофен, дифениламин, гексахлорофен, паринол); карбаматные фунгициды (бентиаваликарб, фурофанат, йодокарб, ипроваликарб, пикарбутразокс, пропамокарб, пирибенкарб, тиофанат, тиофанат-метил, толпрокарб); бензимидазолилкарбаматные фунгициды (албендазол, беномил, карбендазим, ципендазол, дебакарб, мекарбинзид); карбанилатные фунгициды (диэтофенкарб, пираклостробин, пираметостробин, триклопирикарб); коназольные фунгициды, коназольные фунгициды (имидазолы) (климбазол, клотримазол, имазалил, окспоконазол, прохлораз, трифлумизол); коназольные фунгициды (триазолы) (азаконазол, бромуконазол, ципроконазол, диклобутразол, дифеноконазол, диниконазол, диниконазол-M, эпоксиконазол, этаконазол, фенбуконазол, флухинконазол, флусилазол, флутриафол, фурконазол, фурконазол-цис, гексаконазол, имибенконазол, ипконазол, метконазол, миклобутанил, пенконазол, пропиконазол, протиоконазол, хинконазол, симеконазол, тебуконазол, тетраконазол, триадимефон, триадименол, тритиконазол, униконазол, униконазол-P); содержащие медь фунгициды (аципетакс-медь, бордосская жидкость, бургундская жидкость, cмесь Cheshunt, ацетат меди, основной карбонат меди, гидроксид меди, нафтенат меди, олеат меди, оксихлорид меди, силикат меди, сульфат меди, основной сульфат меди, хромат меди-цинка, куфранеб, купробам, оксид меди(I), манкоппер, оксин-коппер, сайсентонг, тиодиазол-медь); цианакрилатные фунгициды (бензамакрил, фенамакрил); дикарбоксимидные фунгициды (фамоксадон, фторимид); дихлорфенил дикарбоксимидные фунгициды (хлозолинат, дихлозолин, ипродион, изоваледион, миклозолин, процимидон, винклозолин); фталимидные фунгициды (каптафол, каптан, диталимфос, фолпет, тиохлорфенфим); динитрофенольные фунгициды (бинапакрил, динобутон, динокап, динокап-4, динокап-6, мептилдинокап, диноктон, динопентон, диносульфон, динотербон, DNOC); дитиокарбаматные фунгициды (амобам, асомат, азитирам, карбаморф, куфранеб, купробам, дисульфирам, фербам, метам, набам, текорам, тирам, урбацид, зирам); циклические дитиокарбаматные фунгициды (дазомет, этем, мильнеб); полимерные дитиокарбаматные фунгициды (манкоппер, манкозеб, манеб, метирам, поликарбамат, пропинеб, зинеб); дитиолановые фунгициды (изопротиолан, сайджунмао); фумигантные фунгициды (дисульфид углерода, дициан, простой дитиоэфир, метилбромид, метилйодид, тетратиокарбонат натрия); гидразидные фунгициды (бенхинокс, сайджунмао); имидазольные фунгициды (циазофамид, фенамидон, фенапанил, глиодин, ипродион, изоваледион, перфуразоат, триазоксид); коназольные фунгициды (имидазолы) (климбазол, клотримазол, имазалил, окспоконазол, прохлораз, трифлумизол); неорганические фунгициды (азид калия, тиоцианат калия, азид натрия, сера, см. также содержащие медь фунгициды, см. также неорганические ртутьсодержащие фунгициды); ртутьсодержащие фунгициды; неорганические ртутьсодержащие фунгициды (хлорид ртути(II), оксид ртути(II), хлорид ртути(I)); ртутьорганические фунгициды ((3-этоксипропил)меркурбромид, этилмеркурацетат, этилмеркурбромид, этилмеркурхлорид, этилмеркур-2,3-дигидроксипропилмеркаптид, этилмеркурфосфат, N-(этилмеркур)-п-толуолсульфонанилид, гидраргафен, 2-метоксиэтилмеркурхлорид, метилмеркурбензоат, метилмеркурдициандиамид, метилмеркурпентахлорфеноксид, 8-фенилмеркуроксихинолин, фенилмеркурмочевина, фенилмеркурацетат, фенилмеркурхлорид, фенилмеркурпроизводное пирокатехина, фенилмеркурнитрат, фенилмеркурсалицилат, тиомерсал, толилмеркурацетат); морфолиновые фунгициды (альдиморф, бензаморф, карбаморф, диметоморф, додеморф, фенпропиморф, флуморф, тридеморф); фосфорорганические фунгициды (ампропилфос, диталимфос, EBP, эдифенфос, фосетил, гексилтиофос, инезин, ипробенфос, изопамфос, кеджунлин, фосдифен, пиразофос, толклофос-метил, триамифос); оловоорганические фунгициды (декафентин, фентин, трибутилоловооксид); оксатииновые фунгициды (карбоксин, оксикарбоксин); оксазольные фунгициды (хлозолинат, дихлозолин, дразоксолон, фамоксадон, гимексазол, метазоксолон, миклозолин, оксадиксил, оксатиопипролин, пиризоксазол, винклозолин); полисульфидные фунгициды (полисульфид бария, полисульфид кальция, полисульфид калия, полисульфид натрия); пиразольные фунгициды (бензовиндифлупир, биксафен, фенпиразамин, флуксапироксад, фураметпир, изопиразам, оксатиопипролин, пенфлуфен, пентиопирад, пираклостробин, пираметостробин, пираоксистробин, рабензазол, седаксан); пиридиновые фунгициды (боскалид, бутиобат, дипиритион, флуазинам, флуопиколид, флуопирам, паринол, пикарбутразокс, пирибенкарб, пиридинитрил, пирифенокс, пиризоксазол, пироксихлор, пироксифур, триклопирикарб); пиримидиновые фунгициды (бупиримат, дифлуметорим, диметиримол, этиримол, фенаримол, феримзон, нуаримол, триаримол); анилинопиримидиновые фунгициды (ципродинил, мепанипирим, пириметанил); пиррольные фунгициды (диметахлон, фенпиклонил, флудиоксонил, фторимид); четвертичные аммониевые фунгициды (берберин, сангвинарин); хинолиновые фунгициды (этоксихин, галакринат, 8-гидроксихинолинсульфат, хинацетол, хиноксифен, тебуфлохин); хиноновые фунгициды (хлоранил, дихлон, дитианон); хиноксалиновые фунгициды (хинометионат, хлорхинокс, тиохинокс); тиадиазольные фунгициды (этридиазол, сайсентонг, тиодиазол-медь, тиазолат цинка); тиазольные фунгициды (этабоксам, изотианил, метсульфовакс, октилинон, оксатиопипролин, тиабендазол, тифлузамид); тиазолидиновые фунгициды (флутанил, тиадифтор); тиокарбаматные фунгициды (метасульфокарб, протиокарб); тиофеновые фунгициды (этабоксам, изофетамид, силтиофам); триазиновые фунгициды (анилазин); триазольные фунгициды (амисулбром, битертанол, флуотримазол, триазбутил); коназольные фунгициды (триазолы) (азаконазол, бромуконазол, ципроконазол, диклобутразол, дифеноконазол, диниконазол, диниконазол-M, эпоксиконазол, этаконазол, фенбуконазол, флухинконазол, флусилазол, флутриафол, фурконазол, фурконазол-цис, гексаконазол, хуанджунджуо, имибенконазол, ипконазол, метконазол, миклобутанил, пенконазол, пропиконазол, протиоконазол, хинконазол, симеконазол, тебуконазол, тетраконазол, триадимефон, триадименол, тритиконазол, униконазол, униконазол-P); триазолопиримидиновые фунгициды (аметоктрадин); мочевинные фунгициды (бенталурон, пенцикурон, хиназамид); цинксодержащие фунгициды (аципетакс-цинк, хромат меди-цинка, куфранеб, манкозеб, метирам, поликарбамат, полиоксорим-цинк, пропинеб, нафтенат цинка, тиазолат цинка, трихлорфеноксид цинка, зинеб, зирам); неклассифицированные фунгициды (ацибензолар, аципетакс, аллиловый спирт, бензалконийхлорид, бетоксазин, бромталонил, хитозан, хлорпикрин, DBCP, дегидроуксусная кислота, дикломезин, диэтилпирокарбонат, этилицин, фенаминосульф, фенитропан, фенпропидин, формальдегид, фурфураль, гексахлорбутадиен, метилизотиоцианат, нитростирол, нитротал-изопропил, OCH, пентахлорфениллаурат, 2-фенилфенол, фталид, пипералин, пропамидин, проквиназид, пирохилон, ортофенилфеноксид натрия, спироксамин, сультропен, тициофен, трициклазол) или мефеноксам.

Неограничивающие варианты осуществления настоящего изобретения включают следующие:

1. Композиция, включающая:

(a) по меньшей мере один из бактериальных штаммов AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015; и/или

(b) по меньшей мере одну из следующих: спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015;

где указанный бактериальный штамм, спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор или активный вариант любой из них содержится в концентрации, равной от примерно 10⁵ КОЕ/г до примерно 10¹²КОЕ/г или от примерно 10⁵ КОЕ/мл до примерно 10¹²КОЕ/мл, и где эффективное количество указанной композиции бактериального штамма улучшает представляющий интерес агротехнический признак растения или обеспечивает борьбу с патогеном растения, который вызывает болезнь растения.

2. Композиция по варианту осуществления 1, где болезнью растения является микоз растения.

3. Композиция по варианту осуществления 1 или 2, где болезнью растения является азиатская ржавчина сои (ASR).

4. Композиция по любому из вариантов осуществления 1-3, где указанный бактериальный штамм или его активный вариант содержится в концентрации, равной от примерно 10⁵КОЕ/г до примерно 10¹⁰ КОЕ/г или от примерно 10⁵КОЕ/мл до примерно 10¹⁰ КОЕ/мл.

5. Композиция по любому из вариантов осуществления 1-4, где указанная композиция представляет собой клеточную массу.

6. Композиция по любому из вариантов осуществления 1-5, где указанная композиция представляет собой смачивающийся порошок.

7. Композиция по любому из вариантов осуществления 1-6, где указанный патоген растения включает по меньшей мере один патогенный гриб.

8. Композиция по варианту осуществления 7, где указанный патоген растения включает один или большее количество патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cersospora spp, Cercospora sojina, Cercospora beticola, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Blumeria graminis f. sp. Tritici, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Golovinomyces cichoracearum, Erysiphe lagerstroemiae, Sphaerotheca pannosa, Colletotrichum cereale, Apiognomonia errabunda, Apiognomonia veneta, Colletotrichum gloeosporiodes, Discula fraxinea, Plasmopara viticola, Pseudoperonospora cubensis, Peronospora belbahrii, Bremia lactucae, Peronospora lamii, Plasmopara obduscens, Pythium cryptoirregulare, Pythium aphanidermatum, Pythium irregulare, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora capsici, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium graminicola, Gibberella zeae, Colletotrichum graminicola, Phakopsora sp., Phakopsora meibomiae, Phakopsora pachyrizi, Puccinia triticina, Puccinia recondita, Puccinia striiformis, Puccinia graminis, Puccinia spp.,Venturia inaequalis, Verticillium spp, Erwinia amylovora, Monilinia fructicola, Monilinia lax и Monilinia fructigena.

9. Композиция по варианту осуществления 8, где указанный патоген растения включает один или большее количество патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cercospora sojina, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Colletotrichum cereal, Plasmopara viticola, Peronospora belbahrii, Pythium aphanidermatum, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Phakopsora pachyrizi и Venturia inaequalisa.

10. Композиция по варианту осуществления 8, где указанный патоген растения представляет собой Phakopsora pachyrhizi или Phakopsora meibomiae.

11. Композиция по варианту осуществления 10, где указанный патоген представляет собой Phakopsora pachyrhizi.

12. Композиция, включающая клеточную массу, включающую:

(a) по меньшей мере один из бактериальных штаммов AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015; и/или,

(b) по меньшей мере одну из следующих: спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015;

где эффективное количество указанной композиции бактериального штамма улучшает представляющий интерес агротехнический признак растения или обеспечивает борьбу с патогеном растения, который вызывает болезнь растения.

13. Композиция по варианту осуществления 12, где болезнью растения является микоз растения.

14. Композиция по любому из вариантов осуществления 12-13, где болезнью растения является азиатская ржавчина сои.

15. Композиция по любому из вариантов осуществления 12-14, где патоген растения включает по меньшей мере один патогенный гриб.

16. Композиция по варианту осуществления 15, где указанный патоген растения включает один или большее количество патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cersospora spp, Cercospora sojina, Cercospora beticola, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Blumeria graminis f. sp. Tritici, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Golovinomyces cichoracearum, Erysiphe lagerstroemiae, Sphaerotheca pannosa, Colletotrichum cereale, Apiognomonia errabunda, Apiognomonia veneta, Colletotrichum gloeosporiodes, Discula fraxinea, Plasmopara viticola, Pseudoperonospora cubensis, Peronospora belbahrii, Bremia lactucae, Peronospora lamii, Plasmopara obduscens, Pythium cryptoirregulare, Pythium aphanidermatum, Pythium irregulare, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora capsici, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium graminicola, Gibberella zeae, Colletotrichum graminicola, Phakopsora sp., Phakopsora meibomiae, Phakopsora pachyrizi, Puccinia triticina, Puccinia recondita, Puccinia striiformis, Puccinia graminis, Puccinia spp.,Venturia inaequalis, Verticillium spp, Erwinia amylovora, Monilinia fructicola, Monilinia lax и Monilinia fructigena.

17. Композиция по варианту осуществления 16, где указанный патоген растения включает один или большее количество патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cercospora sojina, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Colletotrichum cereal, Plasmopara viticola, Peronospora belbahrii, Pythium aphanidermatum, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Phakopsora pachyrizi и Venturia inaequalisa.

18. Композиция по варианту осуществления 16, где указанный патоген растения представляет собой Phakopsora pachyrhizi или Phakopsora meibomiae.

19. Композиция по варианту осуществления 18, где указанный патоген растения представляет собой Phakopsora pachyrhizi.

20. Композиция, включающая смачивающийся порошок, включающий

(a) по меньшей мере один из бактериальных штаммов AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015; и/или,

(b) по меньшей мере одну из следующих: спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015;

где эффективное количество указанной композиции бактериального штамма улучшает представляющий интерес агротехнический признак растения или обеспечивает борьбу с патогеном растения, который вызывает болезнь растения.

21. Композиция по варианту осуществления 20, где болезнью растения является микоз растения.

22. Композиция по варианту осуществления 20 или 21, где патоген растения включает по меньшей мере один патогенный гриб.

23. Композиция по варианту осуществления 22, где указанный патоген растения включает один или большее количество патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cersospora spp, Cercospora sojina, Cercospora beticola, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Blumeria graminis f. sp. Tritici, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Golovinomyces cichoracearum, Erysiphe lagerstroemiae, Sphaerotheca pannosa, Colletotrichum cereale, Apiognomonia errabunda, Apiognomonia veneta, Colletotrichum gloeosporiodes, Discula fraxinea, Plasmopara viticola, Pseudoperonospora cubensis, Peronospora belbahrii, Bremia lactucae, Peronospora lamii, Plasmopara obduscens, Pythium cryptoirregulare, Pythium aphanidermatum, Pythium irregulare, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora capsici, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium graminicola, Gibberella zeae, Colletotrichum graminicola, Phakopsora sp., Phakopsora meibomiae, Phakopsora pachyrizi, Puccinia triticina, Puccinia recondita, Puccinia striiformis, Puccinia graminis, Puccinia spp.,Venturia inaequalis, Verticillium spp, Erwinia amylovora, Monilinia fructicola, Monilinia lax и Monilinia fructigena.

24. Композиция по варианту осуществления 23, где указанный патоген растения включает один или большее количество патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cercospora sojina, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Colletotrichum cereal, Plasmopara viticola, Peronospora belbahrii, Pythium aphanidermatum, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Phakopsora pachyrizi и Venturia inaequalisa.

25. Композиция по варианту осуществления 23, где указанный патоген растения представляет собой Phakopsora pachyrhizi или Phakopsora meibomiae.

26. Композиция по варианту осуществления 25, где указанный патоген растения представляет собой Phakopsora pachyrhizi.

27. Композиция по любому из вариантов осуществления 20-26, где указанный активный вариант устойчив по отношению по меньшей мере к одному гербициду, фунгициду, пестициду или другому химикату для защиты растений.

28. Композиция по варианту осуществления 27, где указанный активный вариант выбран при воздействии гербицида, фунгицида, пестицида или другого химиката для защиты растений и устойчив к указанному гербициду, фунгициду, пестициду или другому химикату для защиты растений.

29. Композиция по любому из вариантов осуществления 27-29, где указанный активный вариант трансформирован обеспечивающим устойчивость к гербициду геном, придающим бактериальному штамму, предлагаемому в настоящем изобретении, или его активному варианту, устойчивость к гербициду, и где указанный бактериальный штамм обеспечивает борьбу с патогеном растения, который вызывает болезнь растения.

30. Композиция по варианту осуществления 29, где патоген растения вызывает ASR.

31. Композиция по любому из вариантов осуществления 27-30, где указанный гербицид выбран из группы, включающей глифосат, глуфосинат (ингибитор глутаминсинтазы), сульфонилмочевину и имидазолиноновые гербициды (ингибиторы синтеза аминокислот с разветвленной цепью).

32. Изолированная биологически чистая культура бактериального штамма, включающая:

(a) AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015; или,

(b) спору или предспору, или комбинацию клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015.

33. Изолированная биологически чистая культура по варианту осуществления 33, где указанный бактериальный штамм устойчив к биоциду, выбранному из группы, включающей гербицид, фунгицид, пестицид или химикату для защиты растений, где указанная культура получена выращиванием в присутствии указанного биоцида и где указанный бактериальный штамм обеспечивает борьбу с патогеном, который вызывает болезнь растения.

34. Изолированная биологически чистая культура по варианту осуществления 33, где указанная биологически чистая культура способна расти в присутствии глифосата.

35. Изолированная биологически чистая культура по любому из вариантов осуществления 33-34, где болезнью растения является микоз растения.

36. Изолированная биологически чистая культура по варианту осуществления 35, где болезнью растения является ASR.

37. Изолированная биологически чистая культура по любому из вариантов осуществления 33-36, где патоген растения включает по меньшей мере один патогенный гриб.

38. Изолированная биологически чистая культура по варианту осуществления 37, где указанный патоген растения включает один или большее количество патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cersospora spp, Cercospora sojina, Cercospora beticola, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Blumeria graminis f. sp. Tritici, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Golovinomyces cichoracearum, Erysiphe lagerstroemiae, Sphaerotheca pannosa, Colletotrichum cereale, Apiognomonia errabunda, Apiognomonia veneta, Colletotrichum gloeosporiodes, Discula fraxinea, Plasmopara viticola, Pseudoperonospora cubensis, Peronospora belbahrii, Bremia lactucae, Peronospora lamii, Plasmopara obduscens, Pythium cryptoirregulare, Pythium aphanidermatum, Pythium irregulare, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora capsici, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium graminicola, Gibberella zeae, Colletotrichum graminicola, Phakopsora sp., Phakopsora meibomiae, Phakopsora pachyrizi, Puccinia triticina, Puccinia recondita, Puccinia striiformis, Puccinia graminis, Puccinia spp.,Venturia inaequalis, Verticillium spp, Erwinia amylovora, Monilinia fructicola, Monilinia lax и Monilinia fructigena.

39. Изолированная биологически чистая культура по варианту осуществления 38, где указанный патоген растения включает один или большее количество патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cercospora sojina, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Colletotrichum cereal, Plasmopara viticola, Peronospora belbahrii, Pythium aphanidermatum, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Phakopsora pachyrizi и Venturia inaequalisa.

40. Изолированная биологически чистая культура по варианту осуществления 38, где указанный патоген растения представляет собой Phakopsora pachyrhizi или Phakopsora meibomiae.

41. Изолированная биологически чистая культура по варианту осуществления 40, где указанный патоген растения представляет собой Phakopsora pachyrhizi.

42. Бактериальная культура, выращенная из

(a) AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015; или,

(b) споры или предспоры, или комбинации клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015;

где указанная бактериальная культура обладает антипатогенной активностью к патогену растения, который вызывает болезнь растения, и способна расти в присутствии глуфосината или эффективное количество указанной бактериальной культуры улучшает представляющий интерес агротехнический признак растения.

43. Бактериальная культура по варианту осуществления 42, где болезнью растения является микоз растения.

44. Бактериальная культура по варианту осуществления 43, где болезнью растения является ASR.

45. Бактериальная культура по любому из вариантов осуществления 42-44, где патоген растения включает по меньшей мере один патогенный гриб.

46. Бактериальная культура по варианту осуществления 45, где указанный патоген растения включает один или большее количество патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cersospora spp, Cercospora sojina, Cercospora beticola, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Blumeria graminis f. sp. Tritici, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Golovinomyces cichoracearum, Erysiphe lagerstroemiae, Sphaerotheca pannosa, Colletotrichum cereale, Apiognomonia errabunda, Apiognomonia veneta, Colletotrichum gloeosporiodes, Discula fraxinea, Plasmopara viticola, Pseudoperonospora cubensis, Peronospora belbahrii, Bremia lactucae, Peronospora lamii, Plasmopara obduscens, Pythium cryptoirregulare, Pythium aphanidermatum, Pythium irregulare, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora capsici, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium graminicola, Gibberella zeae, Colletotrichum graminicola, Phakopsora sp., Phakopsora meibomiae, Phakopsora pachyrizi, Puccinia triticina, Puccinia recondita, Puccinia striiformis, Puccinia graminis, Puccinia spp.,Venturia inaequalis, Verticillium spp, Erwinia amylovora, Monilinia fructicola, Monilinia lax и Monilinia fructigena.

47. Бактериальная культура по варианту осуществления 46, где указанный патоген растения включает один или большее количество патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cercospora sojina, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Colletotrichum cereal, Plasmopara viticola, Peronospora belbahrii, Pythium aphanidermatum, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Phakopsora pachyrizi и Venturia inaequalisa.

48. Бактериальная культура по варианту осуществления 46, где указанный патоген растения представляет собой Phakopsora pachyrhizi или Phakopsora meibomiae.

49. Бактериальная культура по варианту осуществления 48, где указанный патоген растения представляет собой Phakopsora pachyrhizi.

50. Способ выращивания растения, восприимчивого к болезни растения, или улучшения представляющего интерес агротехнического признака растения, включающий нанесение на растение

(a) эффективного количества по меньшей мере одного из бактериальных штаммов AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015; и/или,

(b) эффективного количества по меньшей мере одной из следующих: споры или предспоры, или комбинации клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895 или активного варианта любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015; где указанное эффективное количество равно по меньшей мере примерно от 10¹² до 10¹⁶ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар и где указанное эффективное количество обеспечивает борьбу с патогеном растения, который вызывает болезнь растения, или улучшает представляющий интерес агротехнический признак.

51. Способ по варианту осуществления 50, где указанный способ повышает урожайность растения, восприимчивого к болезни растения.

52. Способ по варианту осуществления 50 или 51, где болезнью растения является болезнь растения, вызванная патогенным грибом.

53. Способ по варианту осуществления 52, где болезнью растения является азиатская ржавчина сои (ASR).

54. Способ по любому из вариантов осуществления 50-53, где патоген растения включает по меньшей мере один патогенный гриб.

55. Способ по варианту осуществления 54, где указанный патоген растения включает один или большее количество патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cersospora spp, Cercospora sojina, Cercospora beticola, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Blumeria graminis f. sp. Tritici, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Golovinomyces cichoracearum, Erysiphe lagerstroemiae, Sphaerotheca pannosa, Colletotrichum cereale, Apiognomonia errabunda, Apiognomonia veneta, Colletotrichum gloeosporiodes, Discula fraxinea, Plasmopara viticola, Pseudoperonospora cubensis, Peronospora belbahrii, Bremia lactucae, Peronospora lamii, Plasmopara obduscens, Pythium cryptoirregulare, Pythium aphanidermatum, Pythium irregulare, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora capsici, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium graminicola, Gibberella zeae, Colletotrichum graminicola, Phakopsora sp., Phakopsora meibomiae, Phakopsora pachyrizi, Puccinia triticina, Puccinia recondita, Puccinia striiformis, Puccinia graminis, Puccinia spp.,Venturia inaequalis, Verticillium spp, Erwinia amylovora, Monilinia fructicola, Monilinia lax и Monilinia fructigena.

56. Способ по варианту осуществления 55, где указанный патоген растения включает один или большее количество патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cercospora sojina, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Colletotrichum cereal, Plasmopara viticola, Peronospora belbahrii, Pythium aphanidermatum, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Phakopsora pachyrizi и Venturia inaequalisa.

57. Способ по варианту осуществления 55, где указанный патоген растения представляет собой Phakopsora pachyrhizi или Phakopsora meibomiae.

58. Способ по варианту осуществления 57, где указанный патоген растения представляет собой Phakopsora pachyrhizi.

59. Способ борьбы с патогеном растения, который вызывает болезнь растения, на участке выращивания, включающий:

(a) посадку на участке выращивания семян или растений, восприимчивых к болезни растения; и

(b) нанесение на растение, восприимчивое к болезни растения эффективного количества по меньшей мере одного бактериального штамма, включающего

(i) AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активный вариант любого из них; или,

(ii) спору или предспору, или комбинацию клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015; и где указанное эффективное количество равно по меньшей мере примерно от 10¹² до 10¹⁶ колониеобразующих единиц (КОЕ) на гектар.

60. Способ по варианту осуществления 59, где указанное растение восприимчиво к микозу растения.

61. Способ по варианту осуществления 60, где указанное растение восприимчиво к азиатской ржавчине сои (ASR).

62. Способ по варианту осуществления 61, где указанным растением, восприимчивым к ASR, является соя.

63. Способ по любому из вариантов осуществления 59-62, где указанная композиция обеспечивает борьбу с одним или большим количеством патогенных грибов.

64. Способ по варианту осуществления 63, где один или большее количество патогенных грибов выбраны из группы, включающей Botrytis cinerea, Cersospora spp, Cercospora sojina, Cercospora beticola, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Blumeria graminis f. sp. Tritici, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Golovinomyces cichoracearum, Erysiphe lagerstroemiae, Sphaerotheca pannosa, Colletotrichum cereale, Apiognomonia errabunda, Apiognomonia veneta, Colletotrichum gloeosporiodes, Discula fraxinea, Plasmopara viticola, Pseudoperonospora cubensis, Peronospora belbahrii, Bremia lactucae, Peronospora lamii, Plasmopara obduscens, Pythium cryptoirregulare, Pythium aphanidermatum, Pythium irregulare, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora capsici, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium graminicola, Gibberella zeae, Colletotrichum graminicola, Phakopsora sp., Phakopsora meibomiae, Phakopsora pachyrizi, Puccinia triticina, Puccinia recondita, Puccinia striiformis, Puccinia graminis, Puccinia spp.,Venturia inaequalis, Verticillium spp, Erwinia amylovora, Monilinia fructicola, Monilinia lax и Monilinia fructigena.

65. Способ по варианту осуществления 64, где указанная композиция обеспечивает борьбу с одним или большим количеством патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cercospora sojina, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Colletotrichum cereal, Plasmopara viticola, Peronospora belbahrii, Pythium aphanidermatum, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Phakopsora pachyrizi и Venturia inaequalisa.

66. Способ по варианту осуществления 64, где один или большее количество патогенных грибов представляют собой Phakopsora pachyrhizi или Phakopsora meibomiae.

67. Способ по варианту осуществления 66, где один или большее количество патогенных грибов представляют собой Phakopsora pachyrhizi.

68. Способ по любому из вариантов осуществления 59-67, где указанный способ дополнительно включает нанесение эффективного количества биоцида, где указанное эффективное количество биоцида обеспечивает селективную борьбу с представляющим интерес организмом при отсутствии значительного повреждения сельскохозяйственной культуры.

69. Способ по варианту осуществления 68, где бактериальный штамм или его активный вариант и биоцид наносят одновременно.

70. Способ по варианту осуществления 68, где бактериальный штамм или его активный вариант и биоцид наносят последовательно.

71. Способ по любому из вариантов осуществления 68-70, где биоцидом является фунгицид.

72. Способ получения модифицированного бактериального штамма, включающий:

(a) получение популяции по меньшей мере одного бактериального штамма, включающей AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895, или активного варианта любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015, где указанный бактериальный штамм восприимчив к представляющему интерес биоциду;

(b) выращивание указанного бактериального штамма в присутствии представляющего интерес биоцида; и,

(c) выбор модифицированного бактериального штамма, обладающего повышенной устойчивостью к указанному представляющему интерес биоциду.

73. Способ по варианту осуществления 72, где указанное выращивание включает повышение концентрации биоцида во времени.

74. Способ по варианту осуществления 72 или 73, где указанным биоцидом является глифосат или глуфосинат.

75. Способ лечения или предупреждения болезни растения, включающий нанесение на растение, у которого имеется болезнь растения или опасность возникновения болезни растения эффективного количества:

(a) по меньшей мере одного из бактериальных штаммов AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895 или активный вариант любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015; и/или

(b) по меньшей мере одной из следующих: спора или предспора, или комбинация клеток, предспор и/или спор любого из AIP27511, AIP35174, AIP25773, AIP15251, AIP61892, AIP79428, AIP14931, AIP39589 или AIP36895 или активного варианта любого из них, где активный вариант включает бактериальный штамм, обладающий геномом с расстоянием Mash, равным примерно 0,015; где указанное эффективное количество равно по меньшей мере примерно от 10¹² до 10¹⁶ КОЕ/га и где указанный бактериальный штамм обеспечивает борьбу с патогеном растения, который вызывает болезнь растения.

76. Способ по варианту осуществления 75, где бактериальный штамм или его активный вариант лечит или предупреждает одну или большее количество болезней растений.

77. Способ по варианту осуществления 76, где одна или большее количество болезней растений включают один или большее количество микозов растений.

78. Способ по варианту осуществления 77, где один или большее количество микозов растений представляют собой азиатскую ржавчину сои (ASR).

79. Способ по любому из вариантов осуществления 75-78, где бактериальный штамм или его активный вариант обеспечивает борьбу с одним или большим количеством патогенов.

80. Способ по варианту осуществления 79, где один или большее количество патогенов включают один или большее количество патогенных грибов.

81. Способ по варианту осуществления 80, где один или большее количество патогенных грибов выбраны из группы, включающей Botrytis cinerea, Cersospora spp, Cercospora sojina, Cercospora beticola, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Blumeria graminis f. sp. Tritici, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Golovinomyces cichoracearum, Erysiphe lagerstroemiae, Sphaerotheca pannosa, Colletotrichum cereale, Apiognomonia errabunda, Apiognomonia veneta, Colletotrichum gloeosporiodes, Discula fraxinea, Plasmopara viticola, Pseudoperonospora cubensis, Peronospora belbahrii, Bremia lactucae, Peronospora lamii, Plasmopara obduscens, Pythium cryptoirregulare, Pythium aphanidermatum, Pythium irregulare, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora capsici, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium graminicola, Gibberella zeae, Colletotrichum graminicola, Phakopsora sp., Phakopsora meibomiae, Phakopsora pachyrizi, Puccinia triticina, Puccinia recondita, Puccinia striiformis, Puccinia graminis, Puccinia spp.,Venturia inaequalis, Verticillium spp, Erwinia amylovora, Monilinia fructicola, Monilinia lax и Monilinia fructigena.

82. Способ по варианту осуществления 81, где указанная композиция обеспечивает борьбу с одним или большим количеством патогенных грибов, выбранных из группы, включающей Botrytis cinerea, Cercospora sojina, Alternaria solani, Rhizoctonia solani, Erysiphe necator, Podosphaera xanthii, Colletotrichum cereal, Plasmopara viticola, Peronospora belbahrii, Pythium aphanidermatum, Pythium sylvaticum, Pythium myriotylum, Pythium ultimum, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans, Phytophthora tropicalis, Phytophthora sojae, Fusarium graminearum, Fusarium solani, Phakopsora pachyrizi и Venturia inaequalisa.

83. Способ по варианту осуществления 81, где один или большее количество патогенных грибов представляют собой Phakopsora pachyrhizi или Phakopsora meibomiae.

84. Способ по варианту осуществления 83, где один или большее количество патогенных грибов представляют собой Phakopsora pachyrhizi.

Приведенные ниже примеры представлены для иллюстрации, а не для ограничения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1:

Материалы и методики

Растительный материал: Восприимчивый сорт сои Williams 82 использовали при исследовании штамма по методике отделенных от стебля изолированных листьев (Twizeyimana and Hartman, 2010) и с использованием цельного растения в климатических камерах. Вкратце, методика заключалась в следующем: семена сои высевали в 18-клеточные пластмассовые вставки, которые заполняли не содержащей почву смесью (Sunshine Mix, LC1; Sun Gro Horticulture Inc., Bellevue, WA) и помещали в ящик для рассады. Клетки при высевании удобряли пеллетами медленного высвобождения (Osmocote 19-6-12; 2 пеллеты на см²). Ящики держали в климатической камере (Percival Scientific, Inc., Boone, IA) при относительной влажности (RH), равной 70%, с суточным циклом 14 ч при освещении и 10 ч в темноте при 24 и 20°C соответственно.

Бактериальные штаммы: Бактериальные штаммы высевали в планшеты в среде Luria Bertani или в жидкой культуре, среде CHA, которая в 1 л содержала NaCl (5 г), триптон (10 г), питательный бульон (8 г), CaCl₂ (0,14 мМ), MgCl₂.6H₂O (0,2 мМ) и MnCl₂.4H₂O (0,01 мМ) и очищали и получали отдельные колонии. Отдельные колонии охарактеризовывали морфологически или с помощью молекулярных методик.

Изолят Phakopsora pachyrhizi: Изолят FL07-1 использовали при всех инокуляциях. Изолят представляет собой изолят одинаковых спор, полученных ин инфицированных листьев сои, собранных в Gadseden County, Флорида в 2007 г.

Исследование штамма:

Исследование отделенных от стебля изолированных листьев: Вкратце, методика заключалась в следующем: диски листьев (диаметром 3 см каждый) опрыскивали с помощью 120 мкл бактериального штамма (1×10⁸ спор/мл воды) P. pachyrhizi. Диски листьев инокулировали с помощью 120 мкл суспензии спор (1×10⁴ спор/мл стерильной дистиллированной воды) P. pachyrhizi через сутки после нанесения бактериального штамма. Нанесение инокулятов бактериального штамма и P. pachyrhizi проводили с помощью атомизатора, присоединенного к воздушному компрессору (Twizeyimana and Hartman, 2010). Диски листьев помещали верхней стороной вниз на насыщенную 20×20 см фильтровальную бумагу (Whatman International Ltd., Kent, England) в пластмассовом контейнере (Blister Box 20×20 см, Placon, Madison, WI); в одном контейнере использовали 2 куска фильтровальной бумаги. Контейнеры с дисками листьев инкубировали в темноте в течение 12 ч, затем в цикле 13 ч при освещении (380 мкмоль м^-2с^-1) и 11 ч в темноте внутри камеры с тканями (Percival Scientific, Inc.) при 23°C и 95% RH. До инкубации контейнеры помещали в мешки с застежкой-молнией (Webster Industries, Peabody, MA). Схема эксперимента представляла собой рандомизированный полный блок с 2 репликами и его повторяли один раз.

Исследование цельного растения: Бактериальные штаммы выбирали по данным начального скрининга (проводимого с использованием дисков листьев) на основании количества содержащихся урединиумов и исследовали на цельных растениях в климатических камерах. При этом исследовании, когда растения были на стадии V2 (Fehr et al. 1971), первый полностью раскрывшийся трехлепестковый лист опрыскивали бактериальным штаммом и инокуляцию с помощью P. pachyrhizi проводили на следующий день, как это описано при исследовании отделенных от стебля изолированных листьев. Опрысканные растения держали в климатической камере при 75% RH с суточным циклом 14 ч и 10 ч при освещении и в темноте при 22°C и 24°C соответственно. Схема эксперимента представляла собой рандомизированный полный блок с 3 репликами и его повторяли один раз.

Сбор данных и результаты:

При обоих исследованиях количества урединиумов (число урединиумов) в круге диаметром 1 см регистрировали через 14 дней после инокуляции. 9 бактериальных штаммов, которые содержали <10 урединиумов в круге диаметром 1 см, после исследования цельного растения в климатической камере выбирали для исследования в поле (фиг. 1 и таблица 2).

Таблица 2. 9 бактериальных штаммов, выбранных после исследования цельного растения в климатических камерах

Пример 2. Методики инкубации

Бактериальные штаммы инкубировали в средах CHA, которые в 1 л содержали NaCl (5 г), триптон (10 г), питательный бульон (8 г), CaCl₂ (0,14 мМ), MgCl₂.6H₂O (0,2 мМ) и MnCl₂.4H₂O (0,01 мМ). В таблице 3 указаны время инкубации, полученная концентрация бактерий (КОЕ/мл) и степень спорообразования в %.

Таблица 3

² Образование предспоры, не образуется эндоспора.

Пример 3. Исследования в поле различных бактериальных штаммов или их активных вариантов

Различные бактериальные штаммы, указанные в таблице 2 наносят на сою в поле. Средства для обработки наносят по 16,8 галлон/акр и обработки проводят с обеспечением равномерного покрытия растения в соответствии с общим руководством по обработке ASR. Первую обработку проводят на стадии R1, а последующую обработку проводят через 14 дней и 28 дней после первой обработки. Конкретные виды обработки описаны ниже.

Обработки:

1. Необработанная делянка

2. Инокулированная делянка

3. Квадрис по 6,2 унция/акр

4. Квадрис по 2,1 унция/акр

5. AIP27511 по 7,5 г/л

6. AIP35174 по 7,5 г/л

7. AIP25773 по 7,5 г/л

8. AIP15251 по 7,5 г/л

9. AIP61892 по 7,5 г/л

10. AIP79428 по 7,5 г/л

11. AIP14931 по 7,5 г/л

12. AIP39589 по 7,5 г/л

13. AIP36895 по 7,5 г/л

Пример 4. Исследования в поле различных бактериальных штаммов или их активных вариантов

Различные бактериальные штаммы, указанные в таблице 2, наносят на сою в поле. Бактериальные штаммы для обработки наносят по 20 галлон/акр и обработки проводят с обеспечением равномерного покрытия растения в соответствии с общим руководством по обработке ASR. Первую обработку проводят на стадии R1, а последующую обработку проводят через 14 дней после первой обработки. Конкретные виды обработки описаны ниже.

Обработки:

1. Необработанная делянка

2. Инокулированная делянка

3. Квадрис по 6,2 унция/акр

4. Квадрис по 2,1 унция/акр

5. AIP27511 по 7,5 г/л

6. AIP35174 по 7,5 г/л

7. AIP25773 по 7,5 г/л

8. AIP15251 по 7,5 г/л

9. AIP61892 по 7,5 г/л

10. AIP79428 по 7,5 г/л

11. AIP14931 по 7,5 г/л

12. AIP39589 по 7,5 г/л

13. AIP36895 по 7,5 г/л

Пример 5. Исследование возбудителя черной ножки Rhizoctonia - модельная обработка семян сои в бороздах

Размалывали зерна, зараженные Rhizoctonia solani в возрасте 11-14 дней. Размолотый инокулят просеивали через сито №10 для удаления всех недостаточно размолотых зерен. Размолотые просеянные инфицированные зерна добавляли к средам Fafard Superfine Germination по 1,5 г размолотого инокулята на 1 л почвенной смеси. Смесь инокулята и 1 л воды на 75 л сред для прорастания помещали в бетономешалку и перемешивали до эффективного включения среды. Среду с эффективно включенным инокулятом помещали во второй контейнер для хранения с крышкой и до использования при анализе хранили при 20°C в течение 18 ч.

Лотки для высевания с 606 ячейками заполняли инокулированными средами для прорастания, не уплотняя среды слишком сильно. В каждую из 606 ячеек помещали по 1 семени на глубину от 1,5 до 2 см и при нанесении средств для обработки в виде жидкого препарата отверстия для посадки оставляли открытыми. Отдельные ячейки для выращивания обрабатывали одним из повторно суспендированных штаммов, указанных в таблице 1, по 3 мл ячейка/семя. Средство для обработки наносили прямо сверху на семена. После нанесения средства для обработки ящики немного встряхивали для закрывания отверстий для посадки. Лотки для высевания немного поливали и помещали на ящик во влажную камеру. Через 3-4 дня проверяли влажность в ящиках и при необходимости немного поливали, чтобы ячейки были равномерно увлажнены. После полива влажную камеру заменяли.

Сбор данных и результаты:Через 10-12 дней проводили исследование для определения количества проросших семян. Для каждой обработки данные представляли в виде выраженной в % доли проросших семян за вычетом 6 семян. Для исследования в поле выбирали 8 штаммов со степенями прорастания >50% и сопоставляли с неинокулированным контролем (таблица 4).

Таблица 4. Бактериальные штаммы, обладающие активностью по отношению к R. solani, использованные при исследовании прорастания семян сои.

Пример 6. Методики приготовления различных бактериальных штаммов

Культуру, полученную в примере 2, центрифугировали в течение 20 мин при 10000 об/мин и получали таблетку. Надосадочную жидкость выливали и к предыдущей таблетке добавляли еще один объем жидкости с культурой и повторно центрифугировали (это делали для уменьшения количества пробирок для центрифуги, необходимых для каждой собранной порции).

Конечный материал получали путем добавления 5% (в пересчете на массу таблетки) глицерина к таблетке клеток с последующим перемешиванием шпателем. 20 мас.% Microcel E помещали в кухонный комбайн и к ним добавляли глицерин/таблетку. Это вещество в течение не более 10 с перемешивали с помощью насадки с острой кромкой кухонного комбайна. Продукт сушили в течение ночи при 40°C до a_w, равного примерно 0,3.

Пример 7. Исследование в теплице бактериальных штаммов для борьбы с азиатской ржавчиной сои

Растительный материал и бактериальные штаммы: В этих экспериментах использовали сорт Williams 82. Бактериальные штаммы получали следующим образом. Бульон с ферментированной культурой центрифугировали и таблетку взвешивали. На каждые 100 г материала таблетки добавляли 5 г глицерина (5% от массы таблетки). Таблетку с глицерином перемешивали вручную до получения однородной смеси. Всего 20 г (20 мас.% массы клеток) microcell-E (Imery's Celite) помещали в кухонный комбайн, снабженный ножевой насадкой Sabatier. Клеточную массу глицерин и microcell-E кратковременно гомогенизировали до получения частично высушенной крошкообразной структуры. Этот конечный продукт распределяли по алюминиевым лоткам и сушили при 40°C в течение ночи. После высушивания продукта до обеспечения активности воды, равной 0,3 или менее, его размалывали и просеивали, и хранили при 4°C.

Изолят Phakopsora pachyrhizi: Изолят FL07-1, описанный выше, использовали в экспериментах в Иллинойсе и смеси спор, собранных в 2014 и 2015 гг., использовали в экспериментах во Флориде.

Исследование штамма в теплице: В Иллинойсе проводили 2 исследования в 2 теплицах, в которых было обеспечена биологическая безопасность. В теплицах были установлены следующие условия: температура 22±2°C при 16-часовом периоде освещения с дополнительным освещением лампами высокой интенсивности 1000 Вт (Sylvania, Danvers, MA). Семена Williams 82 высевали в не содержащую почву смесь (Sunshine Mix, LC1; Sun Gro Horticulture Inc.) в 5-дюймовые горшки и при высевании удобряли пеллетами медленного высвобождения (Osmocote 19-6-12; от 1 до 2 пеллет на см²). После всхода растения прореживали до 1 растения в горшке и схема эксперимента представляла собой рандомизированный полный блок с 4 репликами для каждой обработки. Растения в соответствии с методикой опрыскивали штаммами на стадии роста V2 (Fehr et al. 1971) и их инокулировали суспензией спор изолята FL07-1 (1×10⁵ спор/мл стерильной дистиллированной воды) до стока с использованием ручного опрыскивателя на следующий день после нанесения штамма. Инокулированные растения держали во влажной камере в течение ночи и затем переносили в тепличный стеллаж для изучения развития симптомов. Через 14 дней растения повторно обрабатывали в соответствии с методикой. Через 6 дней после второй обработки регистрировали степень развития ржавчины.

Во Флориде семена Williams 82 высевали в пластмассовые горшки диаметром 22,8 см, содержащие Metro Mix 300 (Sun GroHorticultural Distributors Inc., Bellevue, WA). Растения держали в стеклянной теплице, в которой не было ржавчины, на металлических стеллажах при средней температуре, равной 26°C, и средней относительной влажности, равной 61%. После всхода растения прореживали до 1 растения в горшке. Схема эксперимента представляла собой рандомизированный полный блок с 3 репликами для каждой обработки. Растения в соответствии с методикой опрыскивали штаммами на стадии роста R1 (Fehr et al. 1971) и инокулировали на следующий день смесью P. pachyrhizi. Повторно обрабатывали штаммами через 14 дней после первых обработок. Степень развития ржавчины регистрировали, когда растения находились на стадии R4 или 5.

Сбор данных: В Иллинойсе степень развития ржавчины определяли путем подсчета количества спорообразующих урединиумов в произвольно выбранном круге диаметром 1 см каждого листа из инокулированных трехлепестковых листьев. Данные приведены в таблице 5. Во Флориде регистрировали степень развития ржавчины сои для случайным образом выбранного растения. Данные приведены в таблице 6.

Таблица 5. Количество спорообразующих урединиумов в круге ткани, обработанных разными бактериальными штаммами листьев диаметром 1 см в эксперименте в теплице, проведенном в Иллинойсе. (-) Означает "не определяли". Образцы, обозначенные разными буквами (например, a, ab, b, c, cd, d, e), обладали статистически значимо различающимися значениями.

Таблица 6. Выраженная в процентах степень развития ржавчины растений сои, обработанных разными бактериальными штаммами в эксперименте в парнике, проведенном во Флориде. (-) Означает "не определяли". Образцы, обозначенные разными буквами (например, a, ab, b, c, cd, d, e), обладали статистически значимо различающимися значениями.

Пример 8. Исследования борьбы с азиатской ржавчиной сои в поле во Флориде

Исследования в поле проводили во Флориде в 2015 г. в North Florida Research and Education Center in Quincy. Во время исследования средняя месячная температура от июля до сентября равнялась от 24 до 27°C. Растительный материал, бактериальные штаммы и изолят P. pachyrhizi были аналогичны описанным для эксперимента в теплице во Флориде (пример 7). В соответствии с методикой опрыскивали штаммами на стадии роста R1 роста (Fehr et al., 1971) и инокулировали на следующий день смесью P. pachyrhizi, после чего происходило естественное природное заражение. Повторно обрабатывали штаммами через 14 дней после первой обработки.

Выраженную в процентах степень развития ржавчины сои регистрировали для случайным образом выбранного растения на стадии R5-. Данные приведены в таблице 7.

Таблица 7. Степень развития ржавчины сои в процентах для растений, обработанных разными бактериальными штаммами в поле для эксперимента, проведенного во Флориде. (-) Означает "не определяли". Образцы, обозначенные разными буквами (например, a, ab), обладали статистически значимо различающимися значениями.

Пример 9. Исследование возбудителя черной ножки Rhizoctonia - модельная обработка семян сои в бороздах

Размалывали зерна, зараженные Rhizoctonia solani в возрасте 11-14 дней. Размолотый инокулят просеивали через сито №10 для удаления всех недостаточно размолотых зерен. Размолотые просеянные инфицированные зерна добавляли к средам Fafard Superfine Germination по 1,5 г размолотого инокулята на 1 л почвенной смеси. Смесь инокулята и 1 л воды на 75 л сред для прорастания помещали в бетономешалку и перемешивали до эффективного включения среды. Среду с эффективно включенным инокулятом помещали во второй контейнер для хранения с крышкой и до использования при анализе хранили при 20°C в течение 18 ч.

Лотки для высевания с 606 ячейками заполняли инокулированными средами для прорастания, не уплотняя среды слишком сильно. В каждую из 606 ячеек помещали по 1 семени на глубину от 1,5 до 2 см и при нанесении средств для обработки в виде жидкого препарата отверстия для посадки оставляли открытыми. Отдельные ячейки для выращивания обрабатывали одним из повторно суспендированных штаммов, указанных в таблице 1, по 3 мл ячейка/семя. Средство для обработки наносили прямо сверху на семена. После нанесения средства для обработки ящики немного встряхивали для закрывания отверстий для посадки. Лотки для высевания немного поливали и помещали на ящик во влажную камеру. Через 3-4 дня проверяли влажность в ящиках и при необходимости немного поливали, чтобы ячейки были равномерно увлажнены. После полива влажную камеру заменяли.

Сбор данных и результаты: Сбор данных и результаты:Через 10-12 дней проводили исследование для определения количества проросших семян. Для каждой обработки данные представляли в виде выраженной в % доли проросших семян за вычетом 6 семян.

Пример 10. Исследования в поле различных бактериальных штаммов для борьбы с различными патогенными грибами

Различные бактериальные штаммы, указанные в таблице 2, наносят на культурные растения, указанные в таблице 8, в поле в соответствии с современной агротехникой, указанной в таблице 8, с обеспечением равномерного покрытия растений и в соответствии с надлежащей агротехникой. Средства наносят для предупреждения и/или лечения по графику, соответствующему болезни.

Таблица 8

Конкретные виды обработки описаны ниже.

Перечень видов некорневой обработки для борьбы с патогеном: бурая пятнистость

6-10 обработок

Объем при обработке: 100 галлон/акр

Перечень видов обработки:

1. Неинокулированная необработанная делянка

2. Инокулированная делянка

3. Химическое средство борьбы, выбранное кооператором, использованное в соответствии с инструкциями на упаковке

4. Химическое средство борьбы Serenade, использованное в соответствии с инструкциями на упаковке

5. Экспериментальное биологическое средство (средства) некорневой обработки по 5 г/л с добавлением Capsil по 3 унций/100 галлонов.

Пример 11. Исследования в поле различных бактериальных штаммов или их активных вариантов для борьбы с различными патогенными грибами с использованием средства для обработки семян

Различные бактериальные штаммы, указанные в таблице 2, наносят на культурные растения, указанные в таблице 9, в качестве средства для обработки семян до высевания в поле. Бактериальные штаммы для обработки наносят с для предупредительной борьбы с болезнями и при нормах расхода, указанных в таблице 10. Конкретные виды обработки описаны ниже.

Таблица 9

Перечень видов экспериментальной обработки семян

1. Неинокулированная делянка

2. Инокулированная делянка

3. Соответствующее болезни средство обработки семян Chemical Check, выбранное и использованное кооператором

4. Экспериментальное биологическое средство (средства) обработки семян

Таблица 10

Пример 12. Исследования в поле различных бактериальных штаммов или их активных вариантов для борьбы с различными патогенными грибами с использованием обработки в бороздах

Различные бактериальные штаммы или их активные варианты, указанные в таблице 1, наносят на культурные растения, указанные в таблице 9, в качестве средства обработки борозд во время высевания для предупредительной борьбы с болезнями и при нормах расхода, указанных в таблице 11. Конкретные виды обработки описаны ниже.

Перечень видов экспериментальной обработки в бороздах:

1. Неинокулированная делянка

2. Инокулированная делянка

3. Биологическое средство (средства) обработки в бороздах 5 г/л+Capsil по 6 унций/100 галлонов по 15 галлон/акр

4. Соответствующее болезни средство обработки в бороздах Chemical Check, выбранное и использованное кооператором.

Таблица 11

Пример 13. Методика биологической борьбы путем обработки семян штаммом

Препарат для обработки семян получали смешиванием 10 г приготовленного штамма с добавлением 30 мл воды и с добавлением 15 мл полимера Unicoat. Взвешенное количество семян помещали в стерилизованный керамический сосуд. Добавляли количество раствора для обработки семян, соответствующее массе семян (0,05 мл/25 г семян), смесь встряхивали в течение 60 с или пока на семенах не образовывалось видимое равномерное покрытие. Семена одним слоем на фольге помещали в жаровню и выдерживали в вытяжном шкафу при ламинарном потоке воздуха в течение 1 ч или до высыхания семян. После высыхания семян их помещали в герметичный контейнер и хранили при КТ.

Пример 14. Препараты смачивающегося порошка

100 г Клеточной массы каждого из штаммов, указанных ниже в таблице 12, смешивали с 5 г глицерина и 20 г синтетического силиката кальция с использованием кухонного комбайна. Это вещество сушили при 40°C до обеспечения активности воды, равной менее 0,30, и затем оно содержало количество КОЕ/г, указанное в таблице 12. Высушенный порошкообразный препарат хранили в вакууме в пакетах из майлара при 22°C. Высушенный порошкообразный препарат сохранял фунгицидную активность.

Таблица 12

Пример 15. Исследования Pythium в поле.

Бактериальные штаммы AIP061892 и AIP079428 наносили в качестве средства для обработки семян на сою сорта W3103. Все бактериальные штаммы готовили в виде смачивающегося порошка, как описано в примере 14, и затем преобразовывали в средства для обработки семян путем объединения 10 г приготовленного бактериального штамма с 30 мл воды и 15 мл полимера для нанесения покрытия на семена (Unicoat) и затем встряхивали до образования однородного раствора. Готовый раствор наносили на 1 кг семян сои и ему давали высыхать в вытяжном шкафу при ламинарном потоке воздуха в течение 12 ч.

Инокулят Pythium выращивали на зернах проса и наносили в борозды по 1,25 г/фут и наносили при высевании обработанных семян сои по 130000 семян на акр в день 1. Полную густоту стояния определяли через 17 дней. Конкретные виды обработки описаны ниже.

Обработки:

1. Необработанная делянка

2. Инокулированная делянка

3. Квадрис по 0,4 жидкая унция/акр

4. Средство обработки семян AIP061892

5. Средство обработки семян AIP079428

На фиг. 2 представлено количество проростков (густота стояния) на акр. На фиг. 2 показано, что AIP061892 и AIP079428 приводят примерно к 2-кратному увеличению прорастания по сравнению с инокулированным контролем.

Пример 16. Исследования Rhizoctoniasolani в поле.

Бактериальные штаммы AIP061892 и AIP079428 наносили в качестве средства для обработки семян на сою сорта W3103. Все бактериальные штаммы готовили в виде смачивающегося порошка, как описано в примере 14 и затем преобразовывали в средства для обработки семян путем объединения 10 г приготовленного бактериального штамма с 30 мл воды и 15 мл полимера для нанесения покрытия на семена (Unicoat) и затем встряхивали до образования однородного раствора. Готовый раствор наносили на 1 кг семян сои и ему давали высыхать в вытяжном шкафу при ламинарном потоке воздуха в течение 12 ч.

Инокулят Rhizoctoniasolani выращивали на зернах проса и наносили в борозды по 1,25 г/фут и наносили при высевании обработанных семян сои по 130000 семян на акр в день 1. Полную густоту стояния определяли через 17 дней. Конкретные виды обработки описаны ниже.

Обработки:

1. Необработанная делянка

2. Инокулированная делянка

3. Квадрис по 0,4 жидкая унция/акр

4. Средство обработки семян AIP061892

5. Средство обработки семян AIP079428

На фиг. 3 представлено количество проростков (густота стояния) на акр. На фиг. 3 показано, что AIP061892 приводит к 50% восстановлению прорастания по сравнению с инокулированным контролем.

Все публикации и заявки на патенты, указанные в описании, характеризуют уровень подготовки специалистов в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Все публикации и заявки на патенты включены в настоящее изобретение в качестве ссылки в такой степени, как если бы каждая отдельная публикация и заявка на патент была специально и по отдельности указана, как включенная в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Хотя выше настоящее изобретение подробно описано в качестве иллюстрации и примера для ясного понимания, очевидно, что в объеме прилагаемой формулы изобретения моно внести некоторые изменения и модификации.

Реферат

Изобретение относится к области биохимии, в частности к препарату для борьбы с грибковым растительным патогеном (Pythiumspp.,Phytophthoraspp.). Также раскрыты применение указанного препарата, способ борьбы с грибковым растительным патогеном с помощью указанного препарата, способ выращивания растения, при обработке указанным препаратом. Раскрыта композиция, содержащая указанный препарат. Изобретение позволяет эффективно бороться с грибковым растительным патогеном. 12 н. и 39 з.п. ф-лы, 12 табл., 15 пр., 3 ил.

Формула