Способ инактивации ксеноантигенов в биологических тканях - RU2754197C2

Чертежи

Описание

Настоящее изобретение относится к способу инактивации ксеноантигенов в биологических тканях, в частности, инактивации ксеноантигенов в тканях, которые могут быть использованы для изготовления биопротезных заменителей, предназначенных для использования в клинической практике лечения человека и животных.

В частности, изобретение относится к способу обеспечения инактивации ксеноантигенов в соединительных тканях, являющихся родными и/или зафиксированными, чужеродными или гомологичными, в частности, эпитопа Gal-alpha, в тканях сердечно-сосудистой системы посредством использования биологической активности, обнаруженной в фенольных соединениях, полифенольных соединениях и их производных.

В настоящее время рынок изготовления биопротезных заменителей значительно расширяется. Клиническое усовершенствование хирургических процедур, снижение количества осложнений, возникающих после проведения хирургической операции, разработка и управление новыми иммуномодулирующими препаратами в сочетании с более глубоким знанием механизмов взаимодействия между трансплантатом и хозяином способствуют, при наличии возможности, использованию биологических протезов, образованных тканью животных или гомологичными тканями. В этом смысле одной из областей хирургии, являющейся образцовой, но не единственной, является сердечно-сосудистая хирургия, особенно с точки зрения влияния на общество и здоровье, которое может вызвать установленная практика замены клапана сердца.

Биомедицинскую технологию можно разрабатывать и применять при хирургическом лечении в целях замены протезов клапанов, которые могут имитировать функцию открытия и закрытия нефункционирующих родных клапанов.

Идеальные протезы клапанов должны обеспечивать возможность течения жидкости через клапан, который может перекрывать аналогичный оригинальный здоровый клапан, обеспечивать длительный срок службы и не должны оказывать гемолитического или тромбогенного воздействия.

Наиболее часто используемыми заменителями клапанов являются биологические протезы, получаемые из ксеногенных тканей, в частности, из клапанов свиней или клапанов, изготовляемых с использованием перикарда крупного рогатого скота или лошадей.

Такие протезы и заменители клапанов имеют следующий недостаток: они сталкиваются с дегенеративными процессами дистрофии, связанной с отложением кальциевых солей, и/или ухудшением створок, сопровождаемым разрушением, демонстрируя большую чувствительность к возникновению инфекций эндокарда. С целью улучшения их механических характеристик, понижения их собственной антигенности и обеспечения их сохранения, их обычно обрабатывают перекрестно-сшивающими агентами/стерилизующими химическими веществами, такими как, в целях приведения примера: глутаровый альдегид, хотя им перечень не исчерпывается. Кроме того, они могут подвергаться обработке согласно протоколам о декальцинации или детоксикации.

Термин «ксеногенная ткань» означает ткань, принадлежащую организму другого вида, за исключением человека; такие материалы имеют специфические поверхностные антигены, переносимые внутри исходных видов, но несовместимые при имплантировании людям, у которых, если их не лечить надлежащим образом, они способны инициировать активацию каскада реакций комплемента и агрегацию тромбоцитов, создавая ситуацию, аналогичную ситуации, происходящей в случае несовместимости групп крови.

Такое явление известно под термином «сверхострое отторжение». Основной причиной возникновения такого механизма является наличие ксеноантигена альфа- Gal. Данный эпитоп представляет собой дигалактозид (галактоза-альфа-1,3-галактоза), присутствующий на гликопротеинах и гликолипидах мембран (в основном состоящих из эндотелиальных клеток), а также на разных типах клеток, таких как: моноциты, гранулоциты и эритроциты и в важных участках тканей таких как: области миокарда и кости. Такой крестообразный антиген конститутивно экспрессируется у всех млекопитающих, за исключением высших приматов и людей.

В организме человека с рождения экспрессируются антитела, направленные против такого эпитопа, в результате непрерывной стимуляции бактериальной флорой кишечника.

В наше время биологическую совместимость ксеногенных тканей, предназначенных для использования при изготовлении биопротезов, получают посредством обработки вышеупомянутым глутаровым альдегидом.

Несмотря на такую процедуру, было показано, что эпитоп Gal-alpha остается чувствительным в продаваемых в настоящее время заменителях клапанов сердца, вызывая после проведения имплантации повышение количества анти- α-Gal-антител, циркулирующих как у пациентов детского возраста, так и у взрослых.

Так же образующийся комплекс антиген-антитело, по-видимому, принимает непосредственное участие в содействии отложению солей кальция, благоприятствуя образованию эпизодов дистрофии клапана, связанной с отложением кальциевых солей.

Целью настоящего изобретения является создание способа инактивации ксеноантигенов в биологических тканях, который способен преодолеть ограничения традиционных способов лечения.

В рамках данной цели задачей изобретения является создание способа, который может быть применен к соединительным тканям, которые являются родными и/или зафиксированными, чужеродными или гомологичными, которые могут быть использованы для изготовления биопротезных заменителей для использования в клинической практике лечения человека и животных.

Еще одной задачей изобретения является создание способа инактивации ксеноантигенов в биологических тканях, адаптированного под обеспечение инактивации эпитопа Gal-alpha в тканях сердечно-сосудистой системы.

Дополнительной задачей изобретения является создание способа инактивации ксеноантигенов в биологических тканях, с помощью которого можно инактивировать эпитопы, упомянутые выше, обеспечивая тем самым эффективное лечение, а также способа, который может быть применен ко всевозможным различным типам биопротезных заменителей, присутствующих в настоящее время на рынке.

Еще одной задачей изобретения является создание способа, не способствующего увеличению количества циркулирующих анти- α-Gal-антител после проведения имплантации.

Дополнительной задачей изобретения является создание способа, не содействующего отложению солей кальция, таким образом ограничивающего образование эпизодов дистрофии клапана, связанной с отложением кальциевых солей.

Еще одной задачей изобретения является создание способа, который может быть реализован с использованием обычных устройств и машин. Эта цель, а также эти и другие задачи, которые станут более очевидными в дальнейшем, достигаются с помощью способа инактивации ксеноантигенов в биологических тканях, особенно в тканях, которые могут быть использованы для изготовления биопротезных заменителей и/или в биопротезных заменителях, которые уже изготовлены и предназначены для использования в клинической практике лечения человека и животных, отличающегося тем, что он включает в себя следующие этапы:

- создание раствора на основе фенольных соединений, полифенольных соединений или их производных для инактивации по меньшей мере части ксеногенных эпитопов из упомянутых тканей;

- инкубирование образцов, подлежащих обработке в различных растворах на основе фенолов/полифенолов, в контролируемых условиях;

- подвергание обработанных тканей ряду промываний.

Изобретение также относится к соединительной ткани, полученной с помощью способа инактивации ксеноантигенов в биологических тканях согласно изобретению, как описано выше, отличающемуся тем, что в ткани содержится по меньшей мере некоторая часть компонента антигена в неактивной форме.

Изобретение также относится к применению соединительной ткани, полученной с помощью способа инактации ксеноантигенов в биологических тканях согласно изобретению, как описано выше, для изготовления биопротезных заменителей и/или частей биопротезных заменителей, которые уже приготовлены, для использования в клинической практике лечения человека и животных.

Изобретение также относится к набору для реализации способа инактивации ксеноантигенов в биологических тканях согласно изобретению, как описано выше, отличающемуся тем, что в нем содержится по меньшей мере:

- один или несколько контейнеров, содержащих буфер, в котором должна быть растворена наиболее подходящая доза фенольных соединений, полифенольных соединений или их производных;

- один или несколько контейнеров, содержащих дозу фенольных соединений, полифенольных соединений или их производных в виде порошка, подлежащего добавлению в буфер;

- один или несколько контейнеров, содержащих промывочные буферные растворы;

- брошюра-инструкция, в которой содержится описание сроков и способов применения процедуры.

Дополнительные характеристики и преимущества изобретения станут более очевидными из подробного описания, которое следует из предпочтительного, но не исчерпывающего, варианта осуществления способа инактивации ксеноантигенов в биологических тканях в соответствии с изобретением.

В прилагаемых чертежах:

- Фигура 1 представляет собой обзор результатов применения способа в процентном соотношении в соответствии с первым вариантом осуществления изобретения;

- Фигура 2 представляет собой обзор результатов применения способа в процентном соотношении в соответствии со вторым вариантом осуществления изобретения;

- Фигура 3 представляет собой обзор результатов применения способа в процентном соотношении в соответствии с третьим вариантом осуществления изобретения;

- Фигура 4 представляет собой обзор результатов применения способа в процентном соотношении в соответствии с четвертым вариантом осуществления изобретения.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Термин «фенольные соединения» относится к молекулам, характеризующимся, по меньшей мере в их части, присутствием ароматического ядра (бензольного кольца), связанного с одной или несколькими гидроксильными функциональными группами. Вышеупомянутые соединения включают в себя в качестве неисключающего примера: простые фенолы (молекулы с одним бензольным кольцом и содержащие только гидроксильные группы в качестве заместителей, например: фенол и гидрохинон), фенолоальдегиды (содержащие как фенольную группу, так и альдегидную группу, например, ванильный альдегид), фенольные кислоты (например, коричные кислоты), фениламины (амфотерные молекулы, содержащие слабокислотную группу и сильнокислотную группу, например фенилаланин), фенольные соединения (фенольное кольцо, связанное с другим бензольным кольцом или с другими гетероциклическими соединениями, имеющими гидроксильные/лактоновые/кетоновые функциональные группы, например: кумарины и ксантоны), флавоноиды (состоящие из двух бензольных колец, соединенных цепью с тремя атомами углерода, которая представляет собой оксигенированное гетероциклическое кольцо, например катехины, флавононы, флавоны, хальконы, флаванонолы, флаванолы, лейкоантоцианидин, антоцианидин), фенилпропаноиды (характеризующиеся наличием ароматического кольца с алифатической боковой цепью с тремя атомами углерода, например: гидроксикоричные кислоты) и таннины. В настоящем изобретении термины «фенолы» и «полифенолы» могут иметь одинаковое значение и могут использоваться вместе или заменять друг друга для реализации поставленных целей.

Термин «ксеноантиген» относится к молекулам животного происхождения, которые могут быть распознаны иммунитетом и могут вызывать антитело-опосредованную/иммуно-опосредованную воспалительную реакцию в организме человека-хозяина. В настоящем изобретении термины «ксеноантиген», «антиген», «ксеногенный антиген», «эпитоп» и «крестообразный антиген» могут иметь одинаковое значение и могут использоваться вместе или заменять друг друга.

Термин «соединительная ткань» включает в себя, среди прочего: сосуды, сердечные клапаны, сухожилия, связки, перикард, мышечную фасцию, твердую мозговую оболочку, барабанную перепонку, подслизистую оболочку кишечника, хрящ, жировую ткань и костную ткань.

Термин «зафиксированные» ткани включает в себя ткани, подверженные действию химических или биологических веществ, таких как, в целях приведения неограничивающего примера: глутаровый альдегид, формальдегид и кверцетин.

Термин «зафиксированные» ткани включает в себя ткани, подверженные действию химических или биологических веществ, развивающие перекрестные связи внутри ткани с функцией стабилизации белковых, липидных и клеточных структур, а также снижающие потенциальное антигенное действие хозяина. В описании настоящего изобретения термины «зафиксированный» и «перекрестно-сшитый» могут описывать один и тот же тип лечения и/или иметь одинаковое значение, а также могут использоваться вместе или заменять друг друга.

Термин «чужеродные» ткани означает ткани нечеловеческого происхождения. Такие ткани могут быть представлены для применения в клинической практике как родные или необработанные, вместо того, чтобы быть подвергнутыми обработке, повышающей их регенерирующие свойства (такие как, в целях приведения примера в качестве иллюстрации: процедуры децеллюляции или процедуры покрытия/всасывания веществ с прорегенеративным/сохраняющим действием для компонента клетки). В описании изобретения термин «чужеродный» может иметь такое же значение, что и «ксеногенный», и их можно использовать вместе или заменять друг другом.

Термин «гомологичные» ткани означает ткани человеческого происхождения. Такие ткани могут быть представлены для применения в клинической практике как родные или необработанные, вместо того, чтобы быть подвергнутыми защитной обработке (такой как: в целях приведения примера в качестве иллюстрации: криоконсервирование) или обработке, повышающей их регенерирующие свойства (такие как, в целях приведения примера в качестве иллюстрации: процедуры децеллюляции или процедуры покрытия/всасывания веществ с прорегенеративным/сохраняющим действием для компонента клетки).

Термин «процедуры децеллюляции» означает все индивидуальные или комплексные способы лечения, в которых используются, в качестве неограничивающих примеров, солевые растворы (гипер-, изо- или гипотонические), растворы детергента (ионные, неионные или цвиттер-ионные) и ферменты и целью которых является частичное, селективное или полное удаление компонента клетки, присутствующего в исходной ткани.

Термин «биопротезные заменители» означает биологические устройства, приспособленные для замены недостающей части организма (конечности, органа или ткани) или для присоединения к поврежденной части, предназначенные для использования в клинической практике лечения человека и животных. В описании настоящего изобретения термины «биопротезные заменители», «биопротезы», «биологические протезы» или «устройства» могут иметь одинаковое значение, а также могут использоваться вместе или заменять друг друга.

Термин «животное с выключенным геном к антигену альфа-Gal» означает животное, в котором ген, кодирующий фермент альфа-галактозилтрансферазы, был выключен. Такой фермент отвечает за атаку эпитопа Gal-alpha гликопротеинами и липопротеинами мембран. Его отсутствие приводит к изготовлению тканей, в которых полностью отсутствует рассматриваемый эпитоп и которые, в связи с этим, полностью сопоставимы с тканями организма человека. В настоящем изобретении ткани кровеносных сосудов животных с выключенным геном к антигену альфа-Gal использовали в качестве абсолютного отрицательного контроля.

Ниже представлены несколько неограничивающих примеров применения способа в соответствии с изобретением.

Способ инактивации ксеноантигенов в биологических тканях в соответствии с изобретением, особенно для тканей, которые могут быть использованы для изготовления биопротезных заменителей и/или биопротезных заменителей, которые уже приготовлены и предназначены для использования в клинической практике лечения человека и животных, включает в себя следующие этапы:

- создание раствора на основе фенольных соединений, полифенольных соединений или их производных для инактивации по меньшей мере части ксеногенных эпитопов из таких тканей;

- инкубирование образцов, подлежащих обработке в различных растворах на основе фенолов/полифенолов, в контролируемых условиях;

- подвергание обработанных тканей ряду промываний.

В способе также содержится следующая процедура оценки эффективной инактивации эпитопа Gal-alpha посредством сравнения обработанных/необработанных тканей и тканей свиней с выключенным геном фермента альфа-галактозилтрансферазы.

Такая процедура может быть предоставлена, например, как описано в итальянском патенте №0001409783 и в ЕР2626701.

Биологические ткани представляют собой соединительные ткани, которые могут быть родными, родными и зафиксированными или зафиксированными.

Биологические ткани могут быть чужеродными или гомологичными.

Эпитоп антигена образован антигеном альфа-Gal.

Контролируемые условия этапа инкубации включают в себя по меньшей мере одну обработку при температуре 40±2°С. Фенольные соединения, полифенольные соединения или их производные для инактивации по меньшей мере части ксеногенных эпитопов из таких тканей образованы из производных коричной кислоты, таннина и олеуропеина.

В частности, и в качестве примера, производные коричной кислоты образованы из кофейной кислоты.

В частности, и в качестве примера, производные таннина образованы из дубильной кислоты.

В частности, и в качестве примера, производные олеуропеина образованы из гидрокситирозола.

В частности, и в качестве примера, по меньшей мере одно фенильное производное коричной кислоты образовано из кофейной кислоты.

В частности, и в качестве примера, по меньшей мере одно фенильное производное таннина образовано из дубильной кислоты.

В частности, и в качестве примера, по меньшей мере одно фенильное производное олеуропеина образовано из гидрокситирозола.

Способ инактивации ксеноантигенов в биологических тканях в соответствии с изобретением, то есть в тканях, которые могут быть использованы для изготовления биопротезных заменителей, применяется, в качестве неограничивающего примера изобретения, к инактивации эпитопа Gal-alpha в тканях, составляющих следующие модели биопротезных заменителей:

- Сердечный клапан свиньи Хэнкок II™ (модель Т510, компания «Медтроник Инк.», Миннеаполис, США) указанный в фигурах как «ХЭНК»;

- Корень аорты сердечного клапана Фристайл^® (модель 995, компания «Медтроник Инк.», Миннеаполис, США) указанный в фигурах как «ФРИ»;

- Карпентьер-Эдвардс С.А.В. (модель 6650, Компания «Эдварде Лайфсайенсиз ЛЛС, Калифорния, США) указанная в фигурах как «САВ»;

- Карпентьер-Эдвардс Перимаунт Плас (модель 6900Р, Компания «Эдварде Лайфсайенсиз ЛЛС, Калифорния, США) указанная в фигурах как «ПЕРИ»;

- Заплатка из сердечной ткани и сосудов КардиоСел (модель С0404, компания «Адмедус Реген Пти Лтд», Perth, Australia) указана в фигурах как «KC».

Способ инактивации ксеноантигенов в биологических тканях и, в частности, инактивации эпитопов Gal-alpha в образцах биопротезных заменителей описан ниже в подробной информации о варианте осуществления изобретения.

Образцы ткани берут из биопротезных заменителей в соответствии с вышеупомянутыми моделями, доступными на рынке в настоящее время. Такие образцы взвешивают влажными после легкого промокания фильтровальной бумагой (30-50 мг) и разрезают на мелкие кусочки для увеличения их поверхности.

Для каждого биопротезного заменителя готовят 4 разных набора образцов (n=8 для каждого набора). Каждый набор будут подвергать разному способу.

4 разных раствора готовят на основании производных фенола, соответствующим 4 разным применимым вариантам осуществления способа в соответствии с изобретением, которыми образцы будут обрабатываться в конечном объеме 5 мл, в частности:

- способ Т1: кофейная кислота с концентрацией, составляющей 5 мМ и 50 мМ (в изобретении была принята концентрация 20 мМ)/буфер фосфата натрия с 600±50 Ед/мл тирозиназы в соотношении [1:20];

- способ Т2: кофейная кислота с концентрацией, составляющей 5 мМ - 50 мМ (в изобретении была принята концентрация 20 мМ) в 0,2±0,1 М NaOH;

- способ Т3: дубильная кислота с концентрацией, составляющей 0,1 М - 1,5 М (в изобретении была принята концентрация 1 М) в натрий-фосфатном буфере;

- способ Т4: гидрокситирозол с концентрацией, составляющей 0,3 мМ - 10 мМ (в изобретении была принята концентрация 6 мМ) в0,2±0,1 М NaOH.

Данные растворы оставляют действовать при умеренном, но постоянном перемешивании в течение 12±2 часов при температуре 40±2°С.

В конце инкубации образцы подвергают двум промываниям изотоническим раствором продолжительностью 15 минут каждое, и третьему промыванию в строго стационарном буфере (трис-фосфатном) продолжительностью 15 минут.

Оценка присутствия каких-либо эпитопов, все еще активных на поверхности обработанных образцов, основана на модификации иллюстрированного способа изобретателями и описана в итальянском патенте №0001409783 и в ЕР2626701.

Вкратце, обработанные и промытые образцы тканей помещают в пробирки, к которым прибавляют трис-фосфатный буфер до конечного объема, составляющего 1000 мкл - 1500 мкл.

Затем прибавляют моноклональное мышиное антитело, направленное против эпитопа Gal-alpha (в данном примере это клон IgM, называемый М86), с предпочтительной концентрацией [1:50] о/о и все инкубируют в течение 120±10 минут при температуре 37±2°С при постоянном, но умеренном перемешивании.

В конце образцы подвергают центрифугированию при 14 750 × г в течение 30±5 минут при температуре окружающей среды.

Во время инкубации с антителом М86 готовят 96-луночный планшет, в котором нижнюю часть лунок наполняют в линию 100 мкл alpha-Gal/ сывороточного альбумина с концентрацией 5 мкг/мл в фосфатном буфере на ячейку. Планшет, подготовленный таким образом, инкубируют в течение 60±10 минут при температуре, составляющей 30°С - 40°С, хотя предпочтительнее стабилизировать все при температуре 37°С. Затем проводят 3 промывания с 300 мкл/лунку фосфатного буфера при температуре окружающей среды.

После первого промывания оставляют действовать в течении 5 минут, после двух последующих промываний - в течение 3 минут.

Блокирование проводят с помощью 300 мкл/на лунку сывороточного альбумина с последующей инкубацией в течение 60±10 минут при температуре окружающей среды в темноте. Далее промывают 3 раза как указано выше.

В каждую отдельную лунку прибавляют 100 мкл надосадочной жидкости, взятой после центрифугирования от каждого обработанного образца.

Образцы погружают в планшет, каждый тип образца занимает лунки всей колонки. Далее следует инкубация планшета в течение 120±10 минут при температуре 30°С - 40°С, хотя предпочтительно стабилизировать все при температуре 37°С.

Затем промывают 3 раза, как указано выше, и прибавляют 100 мкл/на лунку раствора вторичного антитела (кроличьего поликлонального антимышиного), конъюгированного с ферментом пероксидазы (идеальные растворы такого антитела [1:1000], [1:500] и [1:100], в предпочтительном варианте осуществления изобретения был принят промежуточный раствор (1:500).

Затем планшет инкубируют снова в течение 60±10 минут при температуре 30°С - 40°С, хотя предпочтительно стабилизировать все при температуре 37°С.

После этого делают 3 промывания как указано выше. К ферменту пероксидазы прибавляют 100 мкл/на лунку проявляющего раствора и затем планшет инкубируют в течение 5±1 минут в темноте.

Затем в каждую лунку прибавляют 50 мкл останавливающего раствора, состоящего из 2М H2SO4 и затем планшет считывают в планшет-ридере при 450 нм.

Инактивация рассматриваемого эпитопа в процентном соотношении может быть определена посредством сравнения количества полученных эпитопов: в контрольной ткани, образованной тканью кровеносных сосудов животных с выключенным геном к антигену альфа-Gal, в необработанных биопротезных тканях и в тканях, подвергнутых различным видам обработки, как описано выше.

Из фигуры 1 видно, что способ Т1 в своей вариации демонстрирует заметную изменчивость воздействия в зависимости от всевозможных различных обработанных тканей биопротезов.

Способ Т1 показал значительно более низкую эффективность, чем другие исследованные протоколы, продемонстрировав в качестве наилучшего результата инактивацию, ограниченную примерно 43% эпитопов.

На фигуре 2 можно увидеть, что способ применения Т2 в своей вариации с производными коричной кислоты только демонстрирует превосходное инактивирующее действие против антигена, причем процент инактивации составляет от 90 до 98%, аналогично результату, показанному в вариации Т3 (фигура 3, процент инактивации составлял от 80% до 100%) и вариации Т4 (фигура 4, процент инактивации составлял от 89% до 95%).

Изобретение также относится к соединительной ткани, полученной способом, описанным выше.

Такая соединительная ткань характеризуется тем, что в ней содержится по меньшей мере некоторое количество компонента антигена в неактивной форме.

Изобретение также относится к применению соединительной ткани как описано выше, для изготовления биопротезных заменителей и/или частей биопротезных заменителей, которые уже приготовлены, для использования в клинической практике лечения человека и животных.

Изобретение также относится к набору для реализации способа инактивирования ксеноантигенов в биологических тканях, как описано выше.

В таком наборе содержится в себе по меньшей мере следующее:

- один или несколько контейнеров, содержащих буфер, в котором должна быть растворена наиболее подходящая доза фенольных соединений, полифенольных соединений или их производных;

- один или несколько контейнеров, содержащих дозу фенольных соединений, полифенольных соединений или их производных в виде порошка, подлежащего добавлению в буфер;

- один или несколько контейнеров, содержащих промывочные буферные растворы;

- брошюра-инструкция, в которой содержится описание сроков и способов применения процедуры.

Предполагаемое использование набора направлено на автономную обработку биопротезных заменителей, которые уже приготовлены с использованием способа согласно изобретению, как описано выше, полезных для медицинских учреждений, таких как: клиники и больницы.

На практике было обнаружено, что изобретение полностью достигает поставленной цели и задач.

В частности, вместе с изобретением был разработан способ инактивации ксеноантигенов в биологических тканях и, в частности, эпитопа Gal-alpha в тканях, предназначенных для изготовления биопротезных заменителей для применения в клинической и/или ветеринарной практике.

Более того, вместе с изобретением был разработан способ инактивации атигенов, упомянутых выше, таким образом обеспечивая эффективное лечение, которое может быть применено ко всевозможным различным типам биопротезов тканей, присутствующих в настоящее время на рынке.

Таким образом, вместе с изобретением был разработан способ, который потенциально не способен вызывать увеличение количества циркулирующих анти- α-Gal-антител после имплантации ткани, обработанной таким способом.

Кроме того, вместе с изобретением был разработан способ, который способен ограничивать отложение солей кальция, таким образом не способствуя образованию эпизодов дистрофии клапана, связанной с отложением кальциевых солей.

И последнее, но не менее важное: вместе с изобретением разработан способ, который может быть реализован с использованием обычных устройств и машин.

Изобретение, предложенное таким образом, допускает многочисленные изменения и вариации, все из которых подпадают под прилагаемую формулу изобретения. Более того, все элементы могут быть заменены другими технически эквивалентными элементами.

На практике используемые компоненты и материалы, при условии, что они совместимы с конкретным использованием, а также с размерами и формами, зависимыми от других факторов, могут быть любыми в соответствии с требованиями и состоянием техники.

Раскрытия в заявке на патент Италии №102015000078236 (UB 2015A006019), из которой данная заявка испрашивает приоритет, включены в настоящий документ посредством ссылки.

ССЫЛКИ

- В.Т. Нкомо и др. Бремя пороков клапанов сердца: популяционное исследование. Журнал «Ланцет» 2006 г.; выпуск 368: страницы 1005-1011.

- Л.У. Цзэн и др. Быстрый метод количественного анализа альфа-гал на неповрежденной поверхности клеток свиньи. Журнал Сычуаньского университета. Издание о медицинской науке. 2005 г.; выпуск 36(3): страницы 419-421.

- Ю. Галили и др. Чувствительный тест для измерения экспрессии эпитопа Gal-alpha на клетках моноклональным антителом анти-Gal. Журнал «Трансплантация» 1998 г.; выпуск 65: страницы 1129-1132.

- Р.Х. Чен и др. Альфа-Gal и бета-Gal предпочтительно экспрессируются на микрососудистом эндотелии сердца свиньи. Журнал «Материалы о трансплантации» 2000 г.; выпуск 32: страницы 877-878.

- В Фен и др. Распределение эпитопа Gal-alpha на костной ткани взрослых свиней. Журнал «Материалы о трансплантации» 2006 г.; выпуск 38: страницы 2247-2251.

- Ю. Галили Эпитоп Gal-alpha и антитело анти-Gal в ксенотрансплантации и в иммунотерапии рака. Журнал «Иммунология и клеточная биология» 2005 г.; выпуск 83: страницы 674-686.

- К.З. Конакси и др. Альфа-Gal на биопротезах: иммунная реакция на ксенотрансплантат в кардиохирургии. «Европейский журнал о клиническом исследовании» 2005 г.; выпуск 35(1): страницы 17-23.

- К.С. Парк и др. Иммунная реакция на анти альфа-Gal после имплантации биопротеза у детей. «»Журнал о заболевании клапана сердца» 2010 г.; выпуск 19(1): страницы 124-30.

- Н. Лила и др. Перикард свиней с выключенным геном Gal: новый источник материала для биопротезов клапана сердца. «Журнал о трансплантации сердца и легкого» 2010 г.; выпуск 29(5): страницы 538-43.

- Ф. Насо и др. Первый количественный анализ альфа-Gal в мягких тканях: наличие и распределение эпитопа до и после удаления клеток из ксеногенных клапанов сердца. Журнал «Акта Биоматериалиа» 2011 г.; выпуск 7(4): страницы 1728-1734.

- Ф. Насо и др. Первая количественная оценка эпитопа Gal-alpha в современных биопротезах клапана сердца, зафиксированными глутаровым альдегидом. Журнал «Ксенотрансплантация» 2013 г.; выпуск 20(4): страницы 252-261.

Реферат

Группа изобретений относится к инактивации ксеноантигенов в биологических тканях. Способ инактивации антигена альфа-Gal в биологических тканях содержит в себе следующие этапы: создание раствора на основе кофейной кислоты, дубильной кислоты и/или гидрокситирозола для инактивации по меньшей мере части антигена альфа-Gal из упомянутых тканей; инкубирование упомянутых тканей в растворе, созданном на вышеуказанной стадии, при перемешивании и при температуре 40±2°C; подвергание обработанных тканей по меньшей мере одному промыванию. Также раскрывается соединительная ткань, в которой инактивирован антиген альфа-Gal, использование соединительной ткани для изготовления биопротезных заменителей и/или частей биопротезных заменителей, которые уже приготовлены, набор для реализации способа инактивации антигена альфа-Gal в биологических тканях. Группа изобретений обеспечивает способ инактивации ксеноантигенов в биологических тканях, который может быть применен к соединительным тканям, которые являются родными и/или зафиксированными, чужеродными или гомологичными, которые могут быть использованы для изготовления биопротезных заменителей для использования в клинической практике лечения человека и животных. 4 н. и 3 з.п. ф-лы, 4 ил.

Формула