Кодирующие фактор viii варианты с пониженным содержанием cpg, композиции и способы и применение в лечении нарушений гемостаза - RU2745506C2

Чертежи

Показать все 16 чертежа(ей)

Описание

Родственные заявки

Данная патентная заявка испрашивает приоритет патентной заявки США № 62/249001, поданной 30 октября 2015 года, заявки № 62/331872, поданной 4 мая 2016 года, заявки № 62/349532, поданной 13 июня 2016 года, и заявки № 62/357874, поданной 1 июля 2016 года, все эти заявки явным образом включены в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте.

Область техники, к которой относится Настоящее Изобретение

Настоящее изобретение относится к областям получения рекомбинантного фактора свертывания крови и лечения медицинских расстройств, связанных с нарушенным гемостазом. Более конкретно, настоящее изобретение относится к вариантам (последовательностям) нуклеиновых кислот, кодирующим белок Фактор VIII (FVIII), при этом варианты необязательно обеспечивают повышенную транскрипцию и/или экспрессию, и/или активность, чем у белков FVIII дикого типа.

Введение

По всему описанию цитируются несколько публикаций и патентных документов, чтобы описать состояние уровня техники, к которому относится настоящее изобретение. Каждая из этих ссылок включена в настоящее описание посредством ссылки, как если бы она была изложена полностью.

Гемофилия представляет собой Х-сцепленное нарушение свертываемости крови, имеющееся у 1 из 5000 мужчин по всему миру. Терапия, направленная на повышение уровней факторов свертывания крови чуть более 1% от нормы, связана с существенным улучшением фенотипа тяжелого заболевания. Недавние клинические испытания AAV-опосредованного переноса гена для гемофилии B (HB) продемонстрировали стойкую долгосрочную экспрессию терапевтических уровней фактора IX (FIX), но установили, что доза AAV-вектора может быть ограничена вследствие анти-AAV иммунных ответов на капсид AAV. Хотя эти данные относятся к гемофилии В, 80% всей гемофилии обусловлены дефицитом FVIII, гемофилией A (HA).

Современное лечение этого заболевания состоит в заместительной белковой терапии, которая требует частых инфузий белка Фактора VIII. Имеется насущная потребность в обеспечении устойчивых терапевтических уровней экспрессии фактора VIII, чтобы пациенты больше не нуждались в такой частой терапии белками. Действительно, непрерывная экспрессия фактора VIII могла бы предотвратить эпизоды кровотечения и может обеспечить возникновение иммунной толерантности к белку.

В кратком изложении, генная терапия HA представляет 3 отдельные проблемы: (1) внутренние свойства человеческого FVIII (hFVIII) затрудняют экспрессию по сравнению с другими белками аналогичного размера (2) большие размеры кДНК FVIII и сиквенс-специфическое действие коррелируют с реаранжировками, которые препятствуют выработке AAV, и (3) высокие показатели образования антител против FVIII (ингибиторов) в ответ на терапию белками, что происходит у 25-30% пациентов с тяжелой (<1% FVIII) HA.

Краткое изложение

Согласно настоящему изобретению, предоставлены варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием динуклеотида цитозин-гуанин (CpG), кодирующие белок Фактор VIII (FVIII). Такие варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG отличаются от нуклеиновых кислот дикого типа, кодирующих FVIII, и могут кодировать, например, человеческий белок FVIII, необязательно отсутствующий полностью или частично в B-домене FVIII. Такие варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG включают варианты, которые при переносе в клетки демонстрируют повышенную экспрессию (напр., 1-5-кратно повышенную экспрессию) по сравнению с кодон-оптимизированными нуклеиновыми кислотами FVIII, такими как FVIII-CO3 (SEQ ID NO:21), приводя к увеличенной секреции белка FVIII и вследствие этого повышенной активности.

В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, которые кодируют FVIII, с делецией или без делеции, целиком или частично, B-домена FVIII, могут предусматривать повышенную экспрессию FVIII, повышенную выработку белка FVIII у млекопитающих, а также обеспечивают повышенную эффективность в контексте переноса генов посредством повышения уровней циркулирующего белка FVIII, и достижения гемостаза для благоприятных терапевтических эффектов.

В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты, кодирующей FVIII, имеет пониженное содержание CpG по сравнению с нуклеиновыми кислотами дикого типа, кодирующими FVIII. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты имеет по меньшей мере на 10 CpG меньше, чем нуклеиновые кислоты дикого типа, кодирующие FVIII (SEQ ID NO:19). В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты имеет не более 4 CpG; имеет не более 3 CpG; имеет не более 2 CpG; или имеет не более 1 CpG. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты имеет не более 4 CpG; 3 CpG; 2 CpG; или 1 CpG. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты не имеет CpG.

В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты, кодирующей FVIII, имеет пониженное содержание CpG по сравнению с нуклеиновыми кислотами дикого типа, кодирующими FVIII, и такие варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG имеют идентичность последовательностей с любой из SEQ ID NOs:1-18 90% или более. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG имеют идентичность последовательностей с любой из SEQ ID NO:1-18 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или более. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG имеют 90-95% идентичность последовательностей с любой из SEQ ID NO:1-18. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG имеют 95%-100% идентичность последовательностей с любой из SEQ ID NO:1-18. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, изложены в любой из SEQ ID NO:1-18.

В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG отличаются от варианта V3 FVIII (SEQ ID NO:20) и/или отличаются от варианта CO3 FVIII (SEQ ID NO:21).

В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, обеспечивают более высокую экспрессию и/или демонстрируют превосходную биологическую активность по сравнению с FVIII дикого типа или по сравнению с FVIII дикого типа, содержащего делецию B-домена (напр., что определено по уровням в плазме или по анализу свертывания крови или по уменьшению кровотечения в анализе FVIII или модели дефицита FVIII).

В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, по меньшей мере на 75% идентичны нуклеиновым кислотам FVIII человека дикого типа или нуклеиновым кислотам FVIII человека дикого типа, содержащих делецию B-домена. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, приблизительно на 75-95% идентичны (напр., приблизительно на 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% идентичны) нуклеиновым кислотам FVIII человека дикого типа или нуклеиновым кислотам FVIII человека дикого типа, содержащим делецию B-домена.

В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, принадлежат млекопитающему, такому как человек. Такие варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG млекопитающего, кодирующих белок FVIII, включают человеческие формы, которые могут быть основаны на человеческом FVIII дикого типа или человеческом FVIII дикого типа, содержащем делецию B-домена.

Согласно настоящему изобретению, также предоставлены векторы и экспрессионные векторы, которые содержат варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, согласно настоящему описанию. В конкретных вариантах осуществления вектор или экспрессионный вектор представляет собой аденовирус-ассоциированный вирусный (AAV) вектор, пертовирусный вектор, аденовирусный вектор, плазмиду или лентивирусный вектор. В некоторых вариантах осуществления вектор AAV содержит серотип AAV или псевдотип AAV, такие как AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 AAV. В некоторых вариантах осуществления экспрессионный вектор включает любую из любой SEQ ID No:1-18, или содержит SEQ ID NO: 23 или 24.

В некоторых вариантах осуществления контролирующий экспрессию элемент, представляет собой конститутивный или регулируемый контролирующий элемент, или тканеспецифический контролирующий экспрессию элемент, или промотор. В некоторых вариантах осуществления контролирующий экспрессию элемент, представляет собой элемент, который обеспечивает экспрессию в печени. В некоторых вариантах осуществления контролирующий экспрессию элемент содержит промотор TTR или мутантный промотор TTR, такой как SEQ ID NO:22. В дополнительных конкретных аспектах контролирующий экспрессию элемент содержит промотор, приведенный в PCT публикации WO 2016/168728 (USSN 62/148696; 62/202133 и 62/212634), которые включены в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте.

Согласно настоящему изобретению, дополнительно предоставлены вирусные векторы, которые содержат вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, или векторы или экспрессионные векторы, содержащие вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII. В конкретных вариантах осуществления вирусный вектор представляет собой вектор AAV, пертовирусный вектор, аденовирусный вектор, плазмиду или лентивирусный вектор.

В некоторых вариантах осуществления вектор AAV представляет собой серотип AAV или псевдотип AAV, включая серотип капсида AAV, отличающийся от серотипа ITR. В дополнительных конкретных аспектах вектор AAV содержит последовательность капсида VP1, VP2 и/или VP3, имеющую идентичность последовательностей 75% или более (напр., 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% и т.д.) с любым из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 серотипов AAV.

Экспрессионные векторы могут включать дополнительные компоненты или элементы. В конкретных вариантах осуществления экспрессионный вектор, такой как вектор AAV, дополнительно содержит интрон, контролирующий экспрессию элемент, один или более инвертированных концевых повторов AAV (ITR) (напр., любой из: серотипов AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 AAV или их комбинацию), полинуклеотидную последовательность-филлер и/или поли-А-сигнал. В некоторых вариантах осуществления интрон находится внутри или фланкирует вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, и/или контролирующий экспрессию элемент, функционально связан с вариантом нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, и/или ITR AAV фланкирует 5'- или 3'-конец варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, и/или наполняющая полинуклеотидная последовательность фланкирует 5'- или 3'-конец варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII.

В конкретных вариантах осуществления контролирующий экспрессию элемент представляет собой конститутивный или регулируемый контролирующий элемент, или тканеспецифический контролирующий экспрессию элемент или промотор. В некоторых вариантах осуществления контролирующий экспрессию элемент представляет собой элемент, который обеспечивает экспрессию в печени (напр., промотор TTR или мутантный промотор TTR).

Согласно настоящему изобретению, дополнительно предоставлены клетки-хозяева, которые содержат варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, согласно настоящему описанию. В конкретных вариантах осуществления клетка-хозяин содержит вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, или экспрессионный вектор, содержащий вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII. В некоторых вариантах осуществления такие клетки-хозяева продуцируют белок FVIII, кодируемый вариантами нуклеиновых кислот, при этом полученный белок FVIII извлекают. Такой белок FVIII, продуцируемый клетками, необязательно выделенный и/или очищенный, можно вводить субъекту.

Согласно настоящему изобретению, дополнительно предоставлены композиции, содержащие вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, векторы и экспрессионные векторы, приведенные в настоящем описании. В конкретных вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат вектор, экспрессионный вектор или вирусный вектор или вектор AAV, в биологически совместимом носителе или эксципиенте. Такие фармацевтические композиции необязательно включают пустой капсид AAV (напр., не содержащий геном вектора, содержащий вариант нуклеиновой кислоты, кодирующей FVIII). В дополнительных конкретных вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, векторы, экспрессионные векторы или вирусные векторы или векторы AAV заключены в липосому или смешаны с фосфолипидами или мицеллами.

Согласно настоящему изобретению, дополнительно предоставлены способы доставки или переноса варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, в клетку млекопитающего. В одном варианте осуществления способ включает введение или контакт варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, экспрессионного вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, или вирусного вектора или вектора AAV, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, в клетку млекопитающего, тем самым доставляя или перенося в клетку млекопитающего последовательность нуклеиновых кислот. С помощью таких способов вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, вводят в клетку млекопитающего в культуре или у субъекта (напр., больного).

Способы согласно настоящему изобретению также включают лечение субъектов-млекопитающих (напр., больных), таких как люди, нуждающихся в FVIII (у человека вырабатывается недостаточное количество белка FVIII или дефектный или аберрантный белок FVIII). В одном варианте осуществления способ лечения млекопитающего, нуждающихся в FVIII, включает: предоставление варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII; или экспрессионного вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вирусного вектора или вектора AAV, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII; и введение некоторого количества варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или экспрессионного вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вирусного вектора или вектора AAV, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, субъекту-млекопитающему таким образом, чтобы экспрессировать у субъекта-млекопитающего FVIII, кодируемый вариантом нуклеиновой кислоты.

В другом варианте осуществления способ лечения нарушения гемостаза у нуждающегося в этом больного (напр., у больного вырабатывается недостаточное количество белка FVIII или дефектный или аберрантный белок FVIII) включает введение больному терапевтически эффективного количества варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или экспрессионного вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вирусного вектора или вектора AAV, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, в биологически совместимых носителе.

В некоторых вариантах осуществления способов согласно настоящему изобретению FVIII экспрессируется на уровнях, оказывающих благотворное или терапевтическое действие на млекопитающее; и/или FVIII экспрессируется в клетке, ткани или органе млекопитающего. Такие варианты осуществления включают введение варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, в ткань или орган, такой как печень. Такие варианты осуществления также включают введение варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, в секреторную клетку. Такие варианты осуществления дополнительно включают введение варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, в эндокринную клетку или эндотелиальную клетку. Такие варианты осуществления дополнительно включают введение варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, в гепатоцит, синусоидальную эндотелиальную клетку, мегакариоцит, тромбоцит или гемопоэтическую стволовую клетку.

Субъекты (напр., больной) и млекопитающие (напр., люди), подходящие для введения (напр., доставки) варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или экспрессионного вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вирусного вектора или вектора AAV, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, включают субъекты, имеющие такое расстройство, как: гемофилия A, болезнь фон Виллебранда и кровотечения, связанные с травмой, повреждением, тромбозом, тромбоцитопенией, инсультом, коагулопатией, диссеминированным внутрисосудистым свертыванием (ДВС) или заболевание с чрезмерной антикоагулянтной терапией, или субъекты с риском его наличия.

Субъекты (напр., больной) и млекопитающие (напр., люди), подходящие для введения (напр., доставки) варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или экспрессионного вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вирусного вектора или вектора AAV, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, включают субъекты серонегативные на AAV антитела, а также субъекты, у которых вырабатываются антитела к AAV, или субъекты с таким риском. Такие субъекты (напр., больной) и млекопитающие (напр., люди) могут быть серонегативными или серопозитивными на серотип AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV-Rh10 или AAV-Rh74.

Вследствие этого, композиции и способы согласно настоящему изобретению дополнительно включают введение указанному млекопитающему или указанному больному пустого капсида AAV. В конкретных вариантах осуществления млекопитающему или больному дополнительно вводят пустой капсид серотипа AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV-12, AAV-Rh10 и/или AAV-Rh74.

Способы введения (напр., доставки) согласно настоящему изобретению включают любой режим контакта или доставки, ex vivo или in vivo. В конкретных вариантах осуществления введение (напр., доставка) происходит: внутривенно, внутриартериально, внутримышечно, подкожно, внутрь полости, интубационно или через катетер.

Изобретение также относится к способам тестирования вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, в моделях небольших и крупных животных, которые толерантны к человеческому FVIII, с целью оценки вводимых доз и мониторинга иммуногенности вариантов. Использование животных моделей обеспечивает параметр, который делает возможным оценку людей, получающих на текущий момент заместительную белковую терапию hFVIII-BDD без доказанного иммунного ответа анти-hFVIII, у которых, вероятно, разовьется иммунный ответ на такие варианты.

Описание фигур

На фигуре 1 показаны уровни человеческого FVIII (hFVIII) через 24 ч после гидродинамической инъекции в хвостовую вену (HTV) 50 мкг плазмиды для 18 различных клонов (X01-X18, соответствующих SEQ ID No:1-18, соответственно) и FVIII-CO3 (SEQ ID NO:21).

На фигурах 2A-2C показаны уровни FVIII у мышей с гемофилией A/CD4^-/-после введения вектора AAV FVIII (A) CO3 (SEQ ID NO:21), X09 (SEQ ID NO:9), X12 (SEQ ID NO:12) и X16 (SEQ ID NO:16); (B) CO3 (SEQ ID NO:21), X01 (SEQ ID NO:1) и X11 (SEQ ID NO:11); или (C) CO3 (SEQ ID NO:21), X07 (SEQ ID NO:7) и X10 (SEQ ID NO:10).

На фигурах 3A-3B показаны уровни антигена hFVIII в нг/мл (B) или % общего антигена (C) в плазме мышей NOD/SCID после внутривенного введения носителя (круг), либо 4×10¹⁰ (квадрат), 8×10¹⁰ (треугольник), либо 1,6×10¹¹ вг/мышь (перевернутый треугольник) AAV-SPK-8005-hFVIII на протяжении курса 87 дней. Линии представляют средние значения hFVIII±СО в каждой когорте. Уровни человеческого FVIII в плазме оценивали посредством ELISA, и нг/мл FVIII переводили в нормальные уровни FVIII в %, предполагая, что 150 нг/мл эквивалентно 100% активности.

На фигуре 3C показаны уровни D-димеров в плазме мышей NOD/SCID после внутривенного введения носителя, либо 4×10¹⁰, 8×10¹⁰, либо 1,6×10¹¹ вг/мышь AAV-SPK-8005-hFVIII, как проиллюстрировано, слева направо в каждый момент времени, ось x. Столбцы представляют средние значения±СО мышей в каждой когорте. Уровни D-димера оценивали посредством ELISA.

На фигуре 4 показан дизайн исследования NHP.

На фигурах 5A-5D показаны уровни антигена hFVIII у NHP после внутривенного введения либо 2×10¹² (A), 5×10¹² (B), либо 1×10¹³ вг/кг (C) AAV-SPK-8005. Линии представляют отдельных животных. Уровни человеческого FVIII в плазме оценивали посредством ELISA и представляли собой повторные измерения, полученные при серии кровотечений, у одной и той же группы животных в ходе исследования (n=2-3 животных на когорту). Уровни человеческого FVIII, измеренные у обработанных носителем животных, показаны в открытых квадратах на всех трех графиках.

ε=Разработка ингибиторов против FVIII.

На фигурах 6A-6C показаны уровни ALT у NHP при 2×10¹² (A), 5×10¹² (B) или 1×10¹³ вг/кг (C) AAV-SPK-8005.

На фигурах 7A-7C показаны уровни D-димера у NHP. Концентрация антигена D-димера в плазме NHP после внутривенного введения либо 2×10¹² (A), 5×10¹² (B), либо 1×10¹³ вг/кг (C) AAV-SPK-8005. Пунктирная линия показывает 500 нг/мл, верхний предел нормы D-димеров у людей.

На фигуре 8 показаны сводные данные уровней FVIII при трех дозах AAV-SPK-8005.

На фигурах 9A-9D показаны уровни hFVIII в плазме яванских макак после внутривенного введения либо 2×10¹²(A), 6×10¹²(B), либо 2×10¹³ (вг/кг) (C) AAV-SPK-8011(капсид LK03)-hFVIII. Линии представляют отдельных животных. Уровни hFVIII в плазме оценивали посредством ELISA и представляли собой повторные измерения, полученные при серии кровотечений, у той же группы животных в ходе исследования (n=3 животных на когорту). Уровни человеческого FVIII, измеренные у обработанных носителем животных, показаны в открытых квадратах (n=2). ε=Время, когда выработка ингибиторов против FVIII было обнаружено у каждого отдельного животного.

На фигуре 10 показано сравнение уровней FVIII, достигнутых с AAV-SPK-8011 (капсид LK03)-hFVIII для описанных уровней FVIII, доставленных с помощью векторов AAV с капсидами AAV5 и AAV8. AAV5:http://www.biomarin.com/pdf/BioMarin_R&D_Day_4_20_2016.pdf, slide 16. AAV8: McIntosh J et al. Blood 2013; 121(17):3335-44.

На фигуре 11 показано биораспределение в тканях AAV-SPK (SEQ ID NO:28) и AAV-LK03 (SEQ ID NO:27) у приматов, не являющихся человеком, преимущественно в почках, селезенке и печени (3^ий столбец для каждой ткани).

На фигуре 12 показана экспрессия FVIII в печени и селезенке после системного введения мышам AAV-SPK-8005.

На фигуре 13 показана эффективность трансдукции AAV-капсида LK03, проанализированная in vitro. Ось х, яванский макак (левый вертикальный столбец), человек (правый вертикальный столбец).

На фигурах 14A-14B показана концентрация hFIX в плазме у кроликов после введения AAV. Кролики получили внутривенную инъекцию векторов hFIX AAV-SPK или AAV-LK03 в дозах, составивших (A) 1×10¹² вг/кг (малая доза, n=4) или (B) 1×10¹³ вг/кг (высокая доза, n=3-5). Уровни человеческого FIX между группами сравнивали с применением двухвыборочного критерия Манна-Уитни. Никаких существенных различий не наблюдалось. Животные 5 и 15 в когортах малых доз были исключены из анализа вследствие неправильной инъекции. Животные 9 и 10 также были исключены из графика вследствие выработки у них нейтрализующих антител против человеческого FIX.

На фигурах 15A-15B представлена динамика образования антител к человеческому FIX (анти-FIX). Кролики получили внутривенную инъекцию векторов hFIX AAV-SPK или AAV-LK03 в дозах, составивших (A) 1×10¹² вг/кг (малая доза, n=4) или (B) 1×10¹³ вг/кг (высокая доза, n=3-5). Данные показаны для каждого отдельного животного.

Подробное описание настоящего раскрытия

В настоящем описании раскрыты варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, отличающиеся от нуклеиновых кислот дикого типа, которые кодируют FVIII. Такие варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, могут демонстрировать в клетках и/или у животных повышенные уровни экспрессии, которые, в свою очередь, могут обеспечивать повышенные уровни белка FVIII in vivo. Также раскрыты варианты нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующее FVIII, которые могут обеспечивать большую биологическую активность in vitro и/или in vivo. Иллюстративный вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, может демонстрировать одно или более из следующего: 1) повышенную экспрессию в клетках и/или у животных; 2) повышенную активность; и 3) терапевтическое действие при более низких дозах AAV, чем hFVIII дикого типа.

Термины «полинуклеотид» и «нуклеиновая кислота» используются в настоящем описании взаимозаменяемо для ссылки на все формы нуклеиновой кислоты, олигонуклеотидов, включая дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) и рибонуклеиновую кислоту (РНК). Полинуклеотиды включают геномную ДНК, кДНК и антисмысловую ДНК, и сплайсированную или несплайсированную мРНК, рНК, тРНК и ингибирующую ДНК или РНК (RNAi, напр., малую или короткую шпилечную (кш)РНК, микроРНК (миРНК), малую или короткую интерферирующую (si)RNA, РНК транс-спллайсинга или антисмысловую РНК). Полинуклеотиды включают природные, синтетические и целенаправленно модифицированные или измененные полинуклеотиды (напр., вариантную нуклеиновую кислоту). Полинуклеотиды могут быть одиночными, двойными или тройными, линейными или кольцевыми и могут иметь любую длину. В обсуждаемых полинуклеотидах последовательность или структура конкретного полинуклеотида может быть описана в настоящем описании в соответствии с соглашением о предоставлении последовательности в направлении от 5' к 3'.

В рамках изобретения, термины «модифицировать» или «вариант» и их грамматические варианты означают, что нуклеиновая кислота, полипептид или их субпоследовательность отличается от эталонной последовательности. Модифицированные и вариантные последовательности вследствие этого могут иметь по существу такую же, большую или меньшую экспрессию, активность или функцию, чем эталонная последовательность, но по меньшей мере сохраняют активность или функцию эталонной последовательности. Конкретным примером модификации или варианта является вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII.

Вариант «нуклеиновой кислоты» или «полинуклеотида» относится к модифицированной последовательности, которая была генетически изменена по сравнению с диким типом. Последовательность может быть генетически модифицирована без изменения последовательности кодируемого белка. В качестве альтернативы, последовательность может быть генетически модифицирована, чтобы кодировать вариантный белок. Вариант нуклеиновой кислоты или полинуклеотида может также относиться к комбинированной последовательности, которая была кодон-модифицирована, чтобы кодировать белок, который по-прежнему сохраняет по меньшей мере частичную идентичность последовательности с эталонной последовательностью, такой как последовательность белка дикого типа, а также была кодон-модифицирована для кодирования вариантного белка. Например, некоторые кодоны такого варианта нуклеиновой кислоты будут изменены без изменения аминокислот кодируемого ими белка (FVIII), и некоторые кодоны варианта нуклеиновой кислоты будут изменены, что, в свою очередь, изменит аминокислоты кодируемого ими белка (FVIII).

Термин «вариантный Фактор VIII (FVIII)» относится к модифицированному FVIII, который был генетически изменен по сравнению с немодифицированным FVIII дикого типа (напр., SEQ ID NO:19) или FVIII-BDD. Такой вариант может называться «вариант нуклеиновой кислоты, кодирующей Фактор VIII (FVIII)». Конкретным примером варианта является нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII или белок FVIII-BDD. Термин «вариант» не должен появляться в каждом примере ссылки, на нуклеиновую кислоту с пониженным содержанием CpG, кодирующую FVIII. Подобным образом, термин «нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG» или т.п. может не включать термин «вариант», но предполагается, что ссылка на «нуклеиновую кислоту с пониженным содержанием CpG» включает варианты на генетическом уровне.

Конструкты FVIII, имеющие пониженное содержание CpG, могут демонстрировать улучшения по сравнению с FVIII дикого типа или FVIII-BDD, в которых содержание CpG не было понижено, и делают это без модификаций нуклеиновой кислоты, которые приводят к изменениям аминокислот в кодированном FVIII или белке FVIII-BDD. При сравнении экспрессии, если нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG кодирует белок FVIII, который сохраняет B-домен, целесообразно сравнить ее с экспрессией FVIII дикого типа; и если нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG кодирует белок FVIII без В-домена, ее сравнивают с экспрессией FVIII дикого типа, который также имеет делецию B-домена.

«Вариантный Фактор VIII (FVIII)» может также означать модифицированный белок FVIII, так что модифицированный белок имеет изменение аминокислотного состава по сравнению с FVIII дикого типа. Опять же, при сравнении активности и/или стабильности, если кодируемый вариантный белок FVIII сохраняет B-домен, целесообразно сравнить его с FVIII дикого типа; и если кодированный вариантный белок FVIII имеет делецию B-домена, его сравнивают с FVIII дикого типа, который также имеет делецию B-домена.

Вариантный FVIII может содержать участок B-домена. Таким образом, FVIII-BDD содержит участок B-домена. Как правило, в FVIII-BDD наибольшая часть B-домена удалена.

Вариантный FVIII может содержать «SQ» последовательность, изложенную как SFSQNPPVLKRHQR (SEQ ID NO:29). Как правило, такой вариантный FVIII с SQ (FVIII/SQ) имеет BDD, причем, напр., по меньшей мере весь или часть BD удалена. Вариантный FVIII, такой как FVIII-BDD, может иметь всю или часть «SQ» последовательности, т.е. всю или часть SEQ ID NO:29. Таким образом, например, вариантный FVIII-BDD с SQ последовательностью (SFSQNPPVLKRHQR, SEQ ID NO:29) может иметь всю или только участок аминокислотной последовательности SFSQNPPVLKRHQR. Например, FVIII-BDD может иметь 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13 аминокислотных остатков содержащейся SFSQNPPVLKRHQR. Таким образом, SFSQNPPVLKRHQR с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13 внутренними делециями, а также 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13 делециями на амино- или карбоксильном конце включены в вариантные FVIII белки, приведенные в настоящем описании.

«Полипептиды», «белки» и «пептиды», кодируемые «последовательностями нуклеиновых кислот» или «полинуклеотидами», включают полноразмерные нативные (FVIII) последовательности, как и в случае природных белков дикого типа, а также функциональные субпоследовательности, модифицированные формы или варианты последовательности, при условии, что субпоследовательность, модифицированная форма или вариант сохраняют некоторую степень функциональности природного полноразмерного белка. Например, нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая белок FVIII, может иметь делецию B-домена, согласно настоящему описанию, и сохраняет функцию свертывания крови. В способах и применении согласно настоящему изобретению такие полипептиды, белки и пептиды, кодируемые последовательностями нуклеиновых кислот, могут быть, но не обязательно идентичны эндогенному белку, который является дефектным или экспрессия которого недостаточна или дефицитная у получающего лечение млекопитающего.

Неограничивающие примеры модификации включают замещение одного или более нуклеотида или аминокислоты (напр., 1-3, 3-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-25, 25-30, 30-40, 40-50, 50-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-500, 500-750, 750-850 или более нуклеотидов или остатков). Примером модификации нуклеиновой кислоты является уменьшение CpG. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII, такой как человеческий белок FVIII, имеет 10 или меньше CpG по сравнению с последовательностью дикого типа, кодирующей человеческий фактор FVIII; или имеет 5 или меньше CpG по сравнению с последовательностью дикого типа, кодирующей человеческий фактор FVIII; или имеет не более 5 CpG в нуклеиновой кислоте с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII.

Примером модификации аминокислот является консервативное замещение или делеция аминокислот (напр., субпоследовательностей или фрагментов) эталонной последовательности, напр. FVIII, такого как FVIII с делецией B-домена. В конкретных вариантах осуществления модифицированная или вариантная последовательность сохраняет по меньшей мере часть функции или активности немодифицированной последовательности.

Все известные или неизвестные формы нуклеиновой кислоты млекопитающих и немлекопитающих, кодирующей белки, включая другие формы нуклеиновой кислоты млекопитающих с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII и белки FVIII, раскрытые в настоящем описании, включены явным образом. Таким образом, изобретение включает гены и белки от немлекопитающих, млекопитающих, не являющихся людьми, и людей, гены и белки которых функционируют по существу таким же образом, что и гены и белки FVIII (напр., человеческого), описанные в настоящем описании.

Термин «вектор» относится к небольшой молекуле нуклеиновой кислоты-носителю, плазмиде, вирусу (напр., вектору AAV) или другому носителю, которым можно манипулировать посредством вставки или встраивания нуклеиновой кислоты. Такие векторы можно использовать для манипуляции с генами (т.е. «клонирующие векторы»), для введения/переноса в клетки полинуклеотидов и для транскрипции или трансляции в клетках вставленного полинуклеотида. «Экспрессионный вектор» представляет собой специальный вектор, который содержит ген или последовательность нуклеиновых кислот с необходимыми регуляторными областями, необходимыми для экспрессии в клетке-хозяине. Последовательность нуклеиновой кислоты вектора обычно содержит по меньшей мере точку начала репликации для размножения в клетке и необязательно дополнительные элементы, такие как гетерологичная полинуклеотидная последовательность, контролирующий экспрессию элемент (напр., промотор, энхансер), интрон, ITR(s), селектируемый маркер (напр., антибиотикорезистентность), сигнал полиаденилирования.

Вирусный вектор получают из или на основе одного или нескольких элементов нуклеиновой кислоты, которые содержат вирусный геном. Конкретные вирусные векторы включают лентивирусные, псевдотипированные лентивирусные и парвовирусные векторы, такие как аденоассоциированные вирусные (AAV) векторы. Также предоставлены векторы, содержащие нуклеиновую кислоту с пониженным содержанием CpG, кодирующую FVIII.

Термин «рекомбинантный», в качестве модификатора вектора, такого как рекомбинантный вирусный, напр., ленти- или парвовирусный (напр., AAV) векторы, а также модификатор последовательностей, таких как рекомбинантные полинуклеотиды и полипептиды, означает, что композициями манипулировали (т.е., конструировали) таким способом, который обычно не встречается в природе. Конкретным примером рекомбинантного вектора, такого как вектор AAV, может быть пример, когда полинуклеотид, который обычно не присутствует в геноме вируса дикого типа (например, AAV), вводят в вирусный геном. Примером рекомбинантного полинуклеотида может быть пример, когда нуклеиновую кислоту с пониженным содержанием CpG, кодирующую белок FVIII, клонируют в вектор, с или без 5', 3' и/или интронных областей, где ген обычно ассоциирован в вирусном (например, AAV) геноме. Хотя термин «рекомбинантный» не всегда используется в настоящем описании со ссылкой на векторы, такие как вирусный и AAV векторы, а также последовательности, такие как полинуклеотиды, рекомбинантные формы, включая полинуклеотиды, они включены явным образом, несмотря на любое такое упущение.

Рекомбинантный вирусный «вектор» или «AAV вектор» получен из генома дикого типа вируса, такого как AAV, посредством применения молекулярных методов для удаления генома дикого типа из вируса (напр., AAV), и замены ненативной нуклеиновой кислотой, такой как нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII. Как правило, для AAV последовательности одного или обоих инвертированных концевых повторов (ITR) генома AAV сохранены в AAV векторе. «Рекомбинантный» вирусный вектор (напр., AAV) отличается от вирусного (напр., AAV) генома, поскольку весь или часть вирусного генома были заменены ненативной последовательностью по отношению к вирусной (напр., AAV) геномной нуклеиновой кислоте, такой как нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII. Вот почему встраивание ненативной последовательности определяет вирусный вектор (напр., AAV) как «рекомбинантный» вектор, который в случае AAV может называться «rAAV вектор».

Последовательность рекомбинантного вектора (напр., ленти-, парво-, AAV) может быть упакованной - в настоящем документе называется «частица» для последующего инфицирования (трансдукции) клетки, ex vivo, in vitro или in vivo. Когда рекомбинантную векторную последовательность инкапсулируют или упаковывают в AAV частицу, частица также может называться «rAAV». Такие частицы содержат белки, которые инкапсулируют или упаковывают векторный геном. Конкретные примеры включают белки оболочки вируса, а в случае AAV, белки капсида.

Векторный «геном» относится к участку последовательности рекомбинантной плазмиды, которая в конечном счете упакована или инкапсидирована с образованием вирусной (напр., AAV) частицы. В случаях, когда для конструирования или получения рекомбинантных векторов используют рекомбинантные плазмиды, векторный геном не содержит участок «плазмиды», который не соответствует векторной геномной последовательности рекомбинантной плазмиды. Эта невекторная часть генома рекомбинантной плазмиды называется «остов плазмиды», который является важным для клонирования и амплификации плазмиды, процесса, который необходим для размножения и получения рекомбинантного вируса, но сам не упакован или инкапсулирован в вирусные (напр., AAV) частицы. Таким образом, векторный «геном» относится к нуклеиновой кислоте, которую упаковывают или инкапсулируют с помощью вируса (напр., AAV).

В настоящем описании «трансген» используется для удобного обращения к нуклеиновой кислоте, которая предназначена или была введена в клетку или организм. Трансгены содержат любую нуклеиновую кислоту, такую как ген, которая кодирует полипептид или белок (напр., нуклеиновую кислоту с пониженным содержанием CpG, кодирующую Фактор VIII).

В клетке, имеющей трансген, трансген был введен/перенесен с помощью вектора, такого как AAV, «трансдукции» или «трансфекции» клетки. Термины «трансдукция» и «трансфекция» относиться к введению в клетку или организм-хозяин молекулы, такой как нуклеиновая кислота. Трансген может быть интегрирован или не интегрирован в геномную нуклеиновую кислоту клетки-реципиента. Если введенная нуклеиновая кислота становится интегрированной в нуклеиновую кислоту (геномную ДНК) клетки или организма-реципиента, она может стабильно сохраняться в этой клетке или организме и далее передаваться или унаследоваться дочерними клетками или организмами клетки или организма-реципиента. В итоге, введенная нуклеиновая кислота может существовать в клетке-реципиенте или организме-хозяине внехромосомно, или только временно.

«Трансдуцированная клетка» представляет собой клетку, в которую был введен трансген. Соответственно, «трансдуцированная» клетка (напр., у млекопитающих, такая как клетка или клетка ткани или органа), означает генетическое изменение в клетке после встраивания экзогенной молекулы, например, нуклеиновой кислоты (напр., трансгена) в клетку. Таким образом, «трансдуцированная» клетка представляет собой клетку или ее дочернюю клетку, в которую была введена экзогенная нуклеиновая кислота. Клетка (клетки) могут воспроизводиться, а введенный белок экспрессироваться, или нуклеиновая кислота транскрибироваться. Для применения и способов генной терапии трансдуцированная клетка должна быть в субъекте.

«Контролирующий экспрессию элемент» относится к последовательности (последовательностям) нуклеиновых кислот, которые влияют на экспрессию функционально связанной нуклеиновой кислоты. Контролирующие элементы, включая контролирующие экспрессию элементы, согласно настоящему описанию, такие как промоторы и энхансеры, векторные последовательности, включая векторы AAV, могут включать один или более «контролирующих экспрессию элементов». Как правило, такие элементы включают для содействия надлежащей транскрипции гетерологичных полинуклеотидов и, при необходимости, трансляции (напр., промотора, энхансера, сигнала сплайсинга для интронов, сохранения правильной рамки считывания гена для обеспечения трансляции внутри рамки мРНК и стоп-кодонов и т.д.). Такие элементы, как правило, действуют в cis, называются «действующий в цис-положении» элемент, но также могут действовать в транс-положении.

Контроль экспрессии может быть на уровне транскрипции, трансляции, сплайсинга, стабильности транскрипта и т.д. Как правило, контролирующий экспрессию элемент, который модулирует транскрипцию, расположен рядом с 5'-концом (т.е., «перед 5'-концом») транскрибированной нуклеиновой кислоты. Контролирующие экспрессию элементы могут также располагаться на 3'-конце (т.е., «после 3'-конца») транскрибированной последовательности или внутри транскрипта (напр., в интроне). Контролирующие экспрессию элементы могут располагаться рядом или на расстоянии от транскрибированной последовательности (напр., 1-10, 10-25, 25-50, 50-100, 100-500 или более нуклеотидов от полинуклеотида), даже на значительном удалении. Тем не менее, вследствие ограничений длины некоторых векторов, таких как векторы AAV, Контролирующие экспрессию элементы будут, как правило, находиться в пределах 1-1000 нуклеотидов от транскрибированной нуклеиновой кислоты.

Функционально, элемент (напр., промотор) по меньшей мере частично контролирует экспрессию функционально связанной нуклеиновой кислоты таким образом, что элемент модулирует транскрипцию нуклеиновой кислоты и, при необходимости, трансляцию транскрипта. Конкретным примером контролирующего экспрессию элемента, является промотор, который обычно расположен на 5'-конце транскрибированной последовательности, напр., нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII. Как правило, промотор увеличивает количество, экспрессируемое из функционально связанной нуклеиновой кислоты по сравнению с количеством, экспрессируемым в отсутствие промотора.

В рамках изобретения, «энхансер» может относиться к последовательности, которая расположена рядом с гетерологичным полинуклеотидом. Как правило, энхансерные элементы, располагаются перед 5'-концом элемента промотора, но также функционируют и могут располагаться после 3'-конца или в пределах последовательности (напр., нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII). Следовательно, энхансерный элемент может располагаться на 100 пар оснований, 200 пар оснований или 300 или более пар оснований перед 5'-концом или после 3'-конца нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII. Как правило, энхансерные элементы увеличивают экспрессию функционально связанной нуклеиновой кислоты выше экспрессии, обеспеченной промоторным элементом.

Экспрессионный конструкт может содержать регуляторные элементы, которые служат для управления экспрессией в конкретном типе клеток или тканей. Контролирующие экспрессию элементы (напр., промоторы) включают элементы, активные в конкретном типе клеток или тканей, именуемые в настоящем документе «тканеспецифические контролирующие экспрессию элементы/промоторы». Тканеспецифические Контролирующие экспрессию элементы как правило, активны в конкретной клетке или ткани (напр., печени). Контролирующие экспрессию элементы как правило, активны в конкретных клетках, тканях или органах, поскольку они распознаются белками-активаторами транскрипции, или другими регуляторами транскрипции, которые уникальны для конкретного типа клетки, ткани или органа. Такие регуляторные элементы известны специалистам в данной области (см., напр., Sambrook et al. (1989) и Ausubel et al. (1992)).

Встраивание тканеспецифических регуляторных элементов в экспрессионные конструкты согласно настоящему изобретению обеспечивает по меньшей мере частичный тропизм к ткани для экспрессии нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII. Примерами промоторов, которые активны в печени, наряду с другими являются промотор TTR, промотор человеческий альфа 1-антитрипсин (hAAT); альбумин, Miyatake, et al. J. Virol., 71:5124-32 (1997); основной промотор вируса гепатита В, Sandig, et al., Gene Ther. 3:1002-9 (1996); альфа-фетопротеин (AFP), Arbuthnot, et al., Hum. Gene. Ther., 7:1503-14 (1996)]. Примером энхансера, активного в печени, является аполипопротеин E (apoE) HCR-1 и HCR-2 (Allan et al., J. Biol. Chem., 272:29113-19 (1997)).

Контролирующие экспрессию элементы также включают общераспространенные или неизбирательные промоторы/энхансеры, которые способны управлять экспрессией полинуклеотидов во многих различных типах клеток. Такие элементы включают, без ограничения, последовательности немедленно-раннего промотора/энхансера цитомегаловируса (CMV), последовательности промотора/энхансера вируса саркомы Рауса (RSV) и промоторы/энхансеры других вирусов, активные во многих типах клеток млекопитающих, или синтетические элементы, которые не представлены в природе (см., напр., Boshart et al, Cell, 41:521-530 (1985)), промотор SV40, промотор дигидрофолатредуктазы, промотор цитоплазматического β-актина и промотор фосфоглицеринкиназы (PGK).

Контролирующие экспрессию элементы также могут обеспечивать экспрессию способом, который является регулируемым, то есть сигнал или стимулы увеличивает или уменьшает экспрессию функционально связанного гетерологичного полинуклеотида. Регулируемый элемент, который увеличивает экспрессию функционально связанного полинуклеотида в ответ на сигнал или стимулы, также называется «индуцибельный элемент» (т.е., индуцируемый сигналом). Конкретные примеры включают, без ограничения, индуцируемый гормоном (напр., стероидом) промотор. Как правило, величина увеличения или уменьшения, получаемая с помощью таких элементов, пропорциональна количеству присутствующих сигналов или стимулов; чем больше количество сигналов или стимулов, тем больше увеличение или уменьшение экспрессии. Конкретные неограничивающие примеры включают промотор индуцируемого цинком металлотионина овец (MT); промотор индуцируемого стероидными гормонами вируса рака молочных желез мышей (MMTV); систему промоторов T7 полимеразы (WO 98/10088); репрессируемую тетрациклином систему (Gossen, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:5547-5551 (1992)); индуцируемую тетрациклином систему (Gossen, et al., Science. 268:1766-1769 (1995); см. также Harvey, et al., Curr. Opin. Chem. Biol. 2:512-518 (1998)); индуцируемую RU486 систему (Wang, et al., Nat. Biotech. 15:239-243 (1997) и Wang, et al., Gene Ther. 4:432-441 (1997)]; и индуцируемую рапамицином систему (Magari, et al., J. Clin. Invest. 100:2865-2872 (1997); Rivera, et al., Nat. Medicine. 2:1028-1032 (1996)). Другими регулируемыми контролирующими элементами, которые можно использовать в этом контексте, являются элементы, которые регулируются конкретным физиологическим состоянием, напр., температурой, острой фазой, развитием.

Контролирующие экспрессию элементы также включают нативный элемент (элементы) для гетерологичного полинуклеотида. Нативный контролирующий элемент (напр., промотор) при необходимости можно использовать, чтобы экспрессия гетерологичного полинуклеотида имитировала бы нативную экспрессию. Нативный элемент можно использовать, когда экспрессию гетерологичного полинуклеотида нужно регулировать временно или в процессе развития, тканеспецифическим образом, или в ответ на специфические транскрипционные стимулы. Также можно использовать другие нативные контролирующие экспрессию элементы, такие как интроны, сайты полиаденилирования или консенсусные последовательности Козак.

Термин «функционально связанная» означает, что регуляторные последовательности, необходимые для экспрессии кодирующей последовательности, помещены в соответствующие положения относительно кодирующей последовательности, чтобы влиять на экспрессию кодирующей последовательности. Это же определение иногда применяется для расположения кодирующих последовательностей и контролирующих транскрипцию элементов, (например, промоторов, усилителей и терминальных элементов) в экспрессионном векторе. Это определение также иногда применяется к расположению последовательностей нуклеиновых кислот первой и второй молекулы нуклеиновой кислоты, при этом генерируется молекула гибридной нуклеиновой кислоты.

В примере контролирующего экспрессию элемента в функциональной связи с нуклеиновой кислотой эта взаимное расположение такое, что контрольный элемент модулирует экспрессию нуклеиновой кислоты. Более конкретно, например, две функционально связанные последовательности ДНК означают, что две ДНК расположены (цис или транс) с таким взаимным расположением, что по меньшей мере одна из последовательностей ДНК способна оказывать физиологическое воздействие на другую последовательность.

Соответственно, дополнительные элементы для векторов включают, без ограничений, контролирующий экспрессию элемент (напр., промотор/энхансер), сигнал терминации транскрипции или стоп-кодон, 5' или 3' нетранслируемые области (напр., последовательности полиаденилирования (полиA)), которые фланкируют последовательность, например, одну или более копий AAV последовательности ITR, или интрон.

Кроме того, элементы включают, например, филлерную или спейсерную полинуклеотидные последовательности, например, для улучшения упаковки и уменьшения присутствия загрязняющей нуклеиновой кислоты. Как правило, принимают вставки ДНК, имеющей диапазон размеров, который обычно составляет от примерно 4 до примерно 5,2 т.п.о. или немного более. Таким образом, для упаковки AAV вектора в вирусную частицу для более коротких последовательностей приемлемо включение спейсера или филлера для корректировки длины до почти или нормального размера последовательности вирусного генома. В различных вариантах осуществления филлерная/спейсерная последовательность нуклеиновых кислот представляет собой нетранслируемый (не кодирующий белок) сегмент нуклеиновой кислоты. Для последовательности нуклеиновых кислот менее чем 4.7 т.п.о. филлерная или спейсерная полинуклеотидная последовательность имеет длину, которая при объединении с последовательностью (напр., вставке в вектор) имеет общую длину между приблизительно 3,0 и 5,5 т.п.о., или между приблизительно 4,0-5,0 т.п.о., или между приблизительно 4,3-4,8 т.п.о.

Интрон также может функционировать в качестве филлерной или спейсерной полинуклеотидной последовательности с целью достижения длины для упаковки AAV вектора в вирусную частицу. Интроны и фрагменты интронов, которые функционируют в качестве филлерной или спейсерной полинуклеотидной последовательности, также могут усиливать экспрессию.

Фраза «нарушение гемостаза» относится к кровоточащим расстройствам, таким как гемофилия A, гемофилия А у больных с ингибиторными антителами, дефицит факторов свертывания крови, VII, VIII, IX и X, XI, V, XII, II, фактора фон Виллебрандта, сочетанный дефицит FV/FVIII, дефицит витамин К-эпоксид-редуктазы C1, дефицит гамма-карбоксилазы; кровотечения, связанные с травмой, повреждением, тромбозом, тромбоцитопенией, инсультом, коагулопатией, диссеминированным внутрисосудистым свертыванием (ДВС); чрезмерное угнетение свертывания, связанное с гепарином, низкомолекулярным гепарином, пентасахаридом, варфарином, низкомолекулярными антитромботическими средствами (т.е. ингибиторами FXa); и тромбоцитарным расстройствам, таким как синдром Бернара-Сулье, тромбастения Гланцмана и дефицит пула тромбоцитов.

Термин «выделенный» при использовании в качестве модификатора композиции означает, что человек получает композиции вручную или отделяет их полностью или по меньшей мере частично от их естественной среды in vivo. Обычно выделенные композиции по существу не содержат один или более материал, с которыми они обычно связаны в природе, например, один или более белок, нуклеиновую кислоту, липид, углевод, клеточную мембрану.

Со ссылкой на нуклеиновые кислоты согласно настоящему изобретению, термин «выделенный» относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая отделена от одной или более последовательности, к которой она непосредственно прилежит (в 5'- и 3'-направлениях) в подходящем геноме (геномная ДНК) организма, из которого она происходит. Например, «выделенная нуклеиновая кислота» может содержать молекулу ДНК или кДНК, вставленную в вектор, такой как плазмида или вирусный вектор, или интегрированную в ДНК прокариот или эукариот.

В отношении молекул РНК согласно настоящему изобретению, термин «выделенный» прежде всего относится к молекуле РНК, кодируемой выделенной молекулой ДНК по определению выше. В качестве альтернативы, термин может относиться к молекуле РНК, которая была в достаточной степени отделена от молекул РНК, с которыми она была бы связана в ее естественном состоянии (т.е., в клетках или тканях), так что она существует в «по существу чистой» форме (термин «по существу чистая» определен ниже).

В отношении белка в настоящем описании иногда используют термин «выделенный белок» или «выделенный и очищенный белок». Этот термин в первую очередь относится к белку, полученному посредством экспрессии молекулы выделенной нуклеиновой кислоты. В качестве альтернативы, этот термин может относиться к белку, который в достаточной степени отделен от других белков, с которыми он был бы естественно связан, так чтобы существовать в «по существу чистой» форме.

Термин «выделенный» не исключает комбинаций, полученных человеком вручную, например, последовательность рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или вирусную частицу, которая упаковывает или инкапсулирует векторный геном и фармацевтическую готовую форму. Термин «выделенный» также не исключает альтернативные физические формы композиции, такие как гибриды/химеры, мультимеры/олигомеры, модификации (напр., фосфорилирование, гликозилирование, липидизацию) или производные формы, или формы, экспрессируемые в клетках-хозяевах, полученных вручную человеком.

Термин «по существу чистый» относится к препарату, содержащему по меньшей мере 50-60% по массе исследуемого соединения (напр., нуклеиновой кислоты, олигонуклеотида, белка и т.д.). Препарат может содержать по меньшей мере 75% по массе, или приблизительно 90-99% по массе исследуемого соединения. Чистота измеряется способами, подходящими для исследуемого соединения (напр. хроматографическими способами, электрофорезом на геле агарозы или на полиакриламидном геле, анализом методом ВЭЖХ и т.п.).

Фраза «по существу состоящая из» при ссылке на конкретную нуклеотидную последовательность или аминокислотную последовательность означает последовательность, имеющую свойства данной SEQ ID NO. Например, при использовании в отношении аминокислотной последовательности фраза включает в себя последовательность как таковую и молекулярные модификации, которые не влияют на основные и новые характеристики последовательности.

Термин «олигонуклеотид» в рамках изобретения относится к праймерам и зондам, и определяется как молекула нуклеиновой кислоты, содержащая два или более рибо- или дезоксирибонуклеотидов, например, более трех. Точный размер олигонуклеотида будет зависеть от различных факторов и от конкретного применения, для которого используется олигонуклеотид.

Термин «зонд» в рамках изобретения относится к олигонуклеотиду, полинуклеотиду или нуклеиновой кислоте, РНК или ДНК, независимо от того, являются ли они природными в виде очищенного посредством расщепления рестрикционным ферментом или получены синтетически, которые способны к ренатурации или специфической гибридизации с нуклеиновой кислотой с последовательностями, комплементарными зонду. Зонд может быть одноцепочечным или двухцепочечным. Точная длина зонда будет зависеть от многих факторов, включая температуру, источник зонда и способ применения. Например, для применения в диагностике, в зависимости от сложности целевой последовательности, олигонуклеотидный зонд, как правило, содержит 15-25 или более нуклеотидов, хотя он может содержать меньше нуклеотидов.

Зонды в настоящем изобретении выбирают так, чтобы они были «по существу» комплементарны различным цепям конкретной последовательности целевой нуклеиновой кислоты. Это означает, что зонды должны быть достаточно комплементарными, чтобы допускать «специфичную гибридизацию» или ренатурацию с их соответствующими целевыми нитями в соответствии с набором заранее определенных условий. Вследствие этого, последовательность зонда не должна отражать точную комплементарную последовательность мишени. Например, фрагмент некомплементарного нуклеотида может быть прикреплен к 5'- или 3'-концу зонда, причем остальная часть последовательности зонда является комплементарной целевой цепи. В качестве альтернативы, некомплементарные основания или более длинные последовательности могут быть вставлены в зонд, при условии, что последовательность зонда имеет достаточную комплементарность с последовательностью нуклеиновой кислоты-мишени для ренатурации конкретно с ней.

Термин «специфически гибридизированный» относится к ассоциации между двумя молекулами одноцепочечной нуклеиновой кислоты достаточно комплементарной последовательности, чтобы сделать возможной такую гибридизацию в заранее определенных условиях, обычно используемых в данной области (иногда именуемый «по существу комплементарной»). В частности, термин относится к гибридизации олигонуклеотида с по существу комплементарной последовательностью, содержащейся в одноцепочечной молекуле ДНК или РНК согласно настоящему изобретению, для существенного исключения гибридизации олигонуклеотида с одноцепочечными нуклеиновыми кислотами не комплементарной последовательности.

Термин «праймер» в рамках изобретения относится к олигонуклеотиду, РНК или ДНК, одноцепочечному или двухцепочечному, либо полученному из биологической системы, полученному посредством расщепления рестрикционным ферментом или полученному синтетически, который при помещении в надлежащую среду способен действовать функционально в качестве инициатора зависимого от матрицы синтеза нуклеиновой кислоты. При презентировании с подходящей матрицей нуклеиновой кислоты, подходящими предшественниками нуклеозидтрифосфата нуклеиновых кислот, ферментом полимеразы, подходящими кофакторами и такими условиями, как подходящая температура и рН, праймер может быть продлен на своем 3'-конце путем добавления нуклеотидов посредством действия полимеразы или подобной активности с получением продукта удлинения праймера.

Праймер может варьировать по длине в зависимости от конкретных условий и требований варианта применения. Например, при применении в диагностике олигонуклеотидный праймер имеет в длину, как правило, 15-25 или более нуклеотидов. Праймер должен иметь достаточную комплементарность с требуемой матрицей, чтобы запускать синтез требуемого продукта удлинения, то есть допускать ренатурацию с требуемой матричной нитью таким образом, чтобы обеспечить 3'-гидроксильный фрагмент праймера в подходящем смежном расположении для использования при инициировании синтеза полимеразой или аналогичным ферментом. Не обязательно, чтобы праймерная последовательность являлась точно комплементарной требуемому шаблону. Например, не комплементарная нуклеотидная последовательность может быть присоединена к 5'-концу иного комплементарного праймера. В качестве альтернативы, в олигонуклеотидную праймерную последовательность можно вставить некомплементарные основания, обеспечивая, чтобы праймерная последовательность была достаточно комплементарной последовательности требуемой матричной цепи для функционального обеспечения комплекса матрица-праймер для синтеза продукта удлинения.

Термин «идентичность», «гомологичность» и их грамматические варианты означают, что два или более эталонных фрагмента являются одинаковыми, когда они представляют собой «выравненные» последовательности. Таким образом, с помощью примера, когда две полипептидные последовательности идентичны, они имеют одинаковую аминокислотную последовательность, по меньшей мере в эталонной области или участке. Когда две полинуклеотидные последовательности идентичны, они имеют одинаковую полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере в эталонной области или участке. Идентичность может быть на протяжении определенной зоны (области или домена) последовательности. «Зона» или «область» идентичности относится к участку двух или более эталонных фрагмента, которые являются одинаковыми. Таким образом, когда последовательности белков или нуклеиновых кислот идентичны на протяжении одной или более зон или областей последовательности, они имеют общую идентичность в пределах этой области. «Выравненная» последовательность относится к последовательности множественных полинуклеотидов или белков (аминокислот), часто содержащих коррекции для недостающих или дополнительных оснований или аминокислот (пробелов) по сравнению с эталонной последовательностью.

Идентичность может распространяться на всю длину или часть последовательности. В некоторых вариантах осуществления длина последовательности, имеющей одинаковый процент идентичности, составляет 2, 3, 4, 5 или более смежных нуклеиновых кислот или аминокислот, напр., 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, и т.д. Смежных нуклеиновых кислот или аминокислот. В дополнительных вариантах осуществления длина последовательности, имеющей одинаковую идентичность, составляет 21 или более смежных нуклеиновых кислот или аминокислот, напр., 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, и т.д. Смежных нуклеиновых кислот или аминокислот. В дополнительных вариантах осуществления длина последовательности имеющей одинаковую идентичность, составляет 41 или более смежных нуклеиновых кислот или аминокислот, напр.42, 43, 44, 45, 45, 47, 48, 49, 50, и т.д., смежных нуклеиновых кислот или аминокислот. В дополнительных вариантах осуществления длина последовательности, имеющей одинаковую идентичность, составляет 50 или более смежных нуклеиновых кислот или аминокислот, напр., 50-55, 55-60, 60-65, 65-70, 70-75, 75-80, 80-85, 85-90, 90-95, 95-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-500, 500-1000 и т.д. Смежных нуклеиновых кислот или аминокислот.

Согласно настоящему описанию, варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, будут отличаться от дикого типа, но могут демонстрировать идентичность последовательностей с белком FVIII дикого типа с B-доменом или без него. В вариантах нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, на уровне нуклеотидной последовательности, нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII, как правило, будет по меньшей мере приблизительно на 70% идентична, более типично, приблизительно на 75% идентична, еще более типично, приблизительно на 80%-85% идентична кодирующей FVIII нуклеиновой кислоте дикого типа. Таким образом, например, нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII, может иметь 75%-85% идентичность с кодирующим FVIII геном дикого типа, или друг другу, т.е., X01 и X02, X03 и X04 и т.д., согласно настоящему описанию.

На уровне аминокислотной последовательности, вариант, такой как вариантный белок FVIII, будет по меньшей мере приблизительно на 70% идентичен, более типично приблизительно на 75% идентичен, или на 80% идентичен, еще более типично приблизительно на 85% идентичен или идентичен на 90% или более. В других вариантах осуществления вариант, такой как вариантный белок FVIII, имеет идентичность по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с эталонной последовательностью, напр., белок FVIII дикого типа с В-доменом или без него.

Для определения идентичности, если FVIII (нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII) сохраняет B-домен, целесообразно сравнить идентичность с FVIII дикого типа. Если FVIII (нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII) имеет делецию B-домена, целесообразно сравнивать идентичность с FVIII дикого типа, который также имеет делецию B-домена.

Термины «гомологичный» или «гомологичность» означают, что два или более эталонных фрагмента имеют общую по меньшей мере частичную идентичность на протяжении заданной области или участка. «Зоны, области или домены» гомологичности или идентичности означают, что участок двух или более эталонных фрагментов имеют общую гомологичность или являются одинаковыми. Таким образом, когда две последовательности идентичны на протяжении одной или более областей последовательности, они имеют общую идентичность в данных областях. «По существу гомологичность» означает, что молекула структурно или функционально консервативна, так что она имеет или, как предполагается, имеет по меньшей мере частичную структуру или функцию одной или нескольких структур или функций (например, биологической функции или активности) эталонной молекулы или релевантной/соответствующей области или части эталонной молекулы, с которой она имеет гомологию.

Степень идентичности (гомологичности) или «процент идентичности» между двумя последовательностями может быть установлена с применением компьютерной программы и/или математического алгоритма. Для целей настоящего изобретения сравнение последовательностей нуклеиновых кислот осуществляется с использованием пакета GCG Wisconsin Package версии 9.1, доступного в Genetics Computer Group в Madison, Wisconsin. Для удобства параметры по умолчанию (штраф за создание гэпа=12, штраф за сокращение гэпа=4), указанные в этой программе, предназначены для использования в данной заявке для сравнения идентичности последовательностей. В качестве альтернативы, программа Blastn 2.0, предоставленная Национальным центром биотехнологической информации (найденная в мировой сети по адресу ncbi.nlm.nih.gov/blast/; Altschul et al., 1990, J Mol Biol 215:403-410), использующая выравнивание с гэпами с параметрами по умолчанию, может использоваться для определения уровня идентичности и схожести между последовательностями нуклеиновых кислот и аминокислотными последовательностями. Для сравнения полипептидных последовательностей алгоритм BLASTP, как правило, используют в комбинации с матрицей замен, такой как PAM100, PAM 250, BLOSUM 62 или BLOSUM 50. Программы сравнения последовательностей FASTA (напр., FASTA2 и FASTA3) и SSEARCH также используют для количественной оценки степени идентичности (Pearson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988); Pearson, Methods Mol Biol. 132:185 (2000); и Smith et al., J. Mol. Biol. 147:195 (1981)). Были также разработаны программы для количественного определения структурного сходства белков с использованием топологического картирования Делоне. (Bostick et al., Biochem Biophys Res Commun. 304:320 (2003)).

Молекулы нуклеиновой кислоты, экспрессионные векторы (напр., векторные геномы), плазмиды, включая варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, согласно настоящему изобретению могут быть получены посредством применения методов технологии рекомбинантной ДНК. Доступность информации о нуклеотидной последовательности позволяет получать выделенные молекулы нуклеиновой кислоты изобретения различными способами. Например, варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, могут быть получены с использованием разнообразного стандартного клонирования, технологии рекомбинантной ДНК, посредством экспрессии клеток или методик трансляции in vitro и химического синтеза. Чистота полинуклеотидов может быть определена посредством секвенирования, гель-электрофореза и т.п. Например, нуклеиновые кислоты могут быть выделены с использованием методик гибридизации или скрининга компьютерной базы данных. Такие методики включают, без ограничения: (1) гибридизацию библиотек геномной ДНК или кДНК с зондами для обнаружения гомологичных нуклеотидных последовательностей; (2) скрининг антител для обнаружения полипептидов, имеющих общие структурные свойства, например, с применением экспрессионной библиотеки; (3) полимеразную цепную реакцию (ПЦР) на геномной ДНК или кДНК с применением праймеров, способных к ренатурации с исследуемой последовательностью нуклеиновых кислот; (4) компьютерный поиск баз данных последовательностей для соответствующих последовательностей; и (5) дифференциальный скрининг библиотеки вычитаемых нуклеиновых кислот.

Нуклеиновые кислоты согласно изобретению можно сохранять в виде ДНК в любом удобном клонирующем векторе. В одном варианте осуществления клоны сохраняют в плазмиде клонирования/экспрессионном векторе, таком как pBluescript (Stratagene, La Jolla, CA), который размножается в подходящей клетке-хозяине E. coli. В качестве альтернативы, нуклеиновые кислоты можно сохранять в векторе, подходящем для экспрессии в клетках млекопитающих. В случаях, когда на функцию свертывания влияет посттрансляционная модификация, молекула нуклеиновой кислоты может быть экспрессирована в клетках млекопитающих.

Варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, согласно настоящему изобретению, включают кДНК, геномную ДНК, РНК и их фрагменты, которые могут быть одно- или двухцепочечными. Таким образом, это изобретение относится к олигонуклеотидам (смысловым или антисмысловым цепям ДНК или РНК), имеющим последовательности, допускающие гибридизацию по меньшей мере с одной последовательностью нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению. Такие олигонуклеотиды пригодны в качестве зондов для определения экспрессии FVIII.

С удаленным B-доменом, вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, согласно настоящему изобретению, необязательно имеющий замещения, делеции или добавления аминокислот, может быть получен с помощью множества путей в соответствии с известными способами. Белок может быть выделен из соответствующих источников, например, трансформированных бактериальных или животных культивируемых клеток или тканей, которые экспрессируют FVIII, с помощью иммуноаффинной очистки.

Доступность вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, делает возможным получение FVIII с применением способов экспрессии in vitro, известных в данной области. Например, кДНК или ген может быть клонирован в подходящий in vitro транскрипционный вектор, такой как pSP64 или pSP65 для транскрипции in vitro, с последующей трансляцией в бесклеточной системе в подходящей системе трансляции в бесклеточной системе, такой как зародыши пшеницы или лизат ретикулоцитов кролика. Транскрипционные и трансляционные системы in vitro поставляются, напр., Promega Biotech, Madison, Wisconsin или BRL, Rockville, Maryland.

В качестве альтернативы, более крупные количества FVIII могут быть получены путем экспрессии в подходящей прокариотической или эукариотической экспрессирующей системе. Например, вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, например, может быть вставлен в плазмидный вектор, приспособленный для экспрессии в бактериальной клетке, такой как E. Coli, или в клеточной линии млекопитающих, таких как почка новорожденного хомяка (BHK), CHO или клетки Hela. В качестве альтернативы, могут быть получены маркированные белки слияния, содержащие FVIII. Такие FVIII-маркированные белки слияния кодируются частью или всей молекулой ДНК, лигированной в корректной рамке считывания кодонов с нуклеотидной последовательностью, кодирующей участок или всю требуемую полипептидную метку, которая вставляется в плазмидный вектор, приспособленный для экспрессии в бактериальной клетке, такой как E. coli, или эукариотической клетке, такой как, без ограничения, дрожжевые клетки и клетки млекопитающих.

Векторы, такие как векторы, описанные в настоящем описании, необязательно содержат регуляторные элементы, необходимые для экспрессии ДНК в клетке-хозяине, расположенные таким образом, чтобы обеспечить экспрессию кодируемого белка в клетке-хозяине. Такие регуляторные элементы, необходимые для экспрессии, включают, без ограничения, промоторные последовательности, энхансерные последовательности и инициирующие транскрипцию последовательности, согласно настоящему описанию, и известные специалисту в данной области.

FVIII, кодируемый вариантом нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, полученный посредством экспрессии генов в рекомбинантной прокариотической или эукариотической системе, может быть очищен согласно способам, известным в данной области. В варианте осуществления можно использовать коммерчески доступную систему экспрессии/секреции, посредством которой рекомбинантный белок экспрессируют и затем секретируют из клетки-хозяина для легкой очистки от окружающей среды. Если векторы экспрессии/секреции не используются, альтернативный подход включает очищение рекомбинантного белка путем аффинной сепарации, например, посредством иммунологического взаимодействия с антителами, которые специфично связываются с рекомбинантным белком, или с помощью колонки для никель-хелатной хроматографии для выделения рекомбинантных белков, меченных 6-8 гистидиновыми остатками на их N-конце или C-конце. Альтернативные метки могут включать FLAG эпитоп, GST или эпитоп гемагглютинина. Такие способы наиболее часто применяются квалифицированными практиками.

Белки FVIII, полученные вышеуказанными способами, можно анализировать в соответствии со стандартными процедурами. Например, такие белки можно оценить на измененные свойства свертывания в соответствии с известными способами.

Соответственно, изобретение также предоставляет способы получения полипептида (как раскрыто), при этом способ включает экспрессию из нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид (обычно нуклеиновой кислоты). Этого можно удобно добиться путем культивирования клетки-хозяина, содержащей такой вектор, в соответствующих условиях, которые вызывают или делают возможной выработку полипептида. Полипептиды также могут быть получены в системах in vitro.

Способы и применение согласно настоящему изобретению включают доставку (трансдукцию) нуклеиновой кислоты (трансгена) в клетки-хозяева, включая делящиеся и/или неделящиеся клетки. Кроме того, в способе доставки, введения или предоставления белка нуждающемуся в этом субъекту, в качестве способа лечения, используются нуклеиновые кислоты, рекомбинантный вектор (напр., rAAV), способы, применение и фармацевтические готовые формы согласно настоящему изобретению. Таким образом, транскрибируют нуклеиновую кислоту, и у субъекта можно получить белок in vivo. В качестве способа лечения или с другой целью, субъекту может быть полезен или необходим белок, поскольку субъект имеет дефицит белка, или поскольку выработка белка у субъекта может вызывать некоторое терапевтическое действие.

Векторы, включая последовательности ленти- или парвовирусного вектора (напр., AAV), рекомбинантные вирусные частицы, способы и применение можно использовать для доставки варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, с биологическим действием для лечения или улучшения одного или более симптомов, связанных с дефицитом или патологией FVIII. Последовательности рекомбинантных ленти- или парвовирусного вектора (напр., AAV), плазмиды, рекомбинантные вирусные частицы, способы и применение можно использовать для предоставления терапии для различных патологических состояний, охватывающих или возникающих вследствие дефицита или патологии FVIII.

Нуклеиновые кислоты, векторы, экспрессионные векторы (напр., rAAV) и рекомбинантные вирусные частицы, способы и применение изобретения делают возможным лечение генетических заболеваний, напр., дефицит FVIII. Для заболеваний с дефицитными состояниями перенос гена можно использовать для введения нормального гена в пораженные ткани для заместительной терапии, а также для создания животных моделей с использованием антисмысловых мутаций. Для несбалансированных патологических состояний перенос гена можно использовать для создания патологического состояния в модельной системе, которую затем можно было бы использовать для борьбы с патологическим состоянием. Также возможно использование сайт-специфической интеграции последовательностей нуклеиновых кислот для коррекции дефектов.

В конкретных вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, можно использовать, например, в качестве терапевтических и/или профилактических агентов (белок или нуклеиновая кислота), которые модулируют каскад свертывания крови или в качестве трансгена в гене. Например, варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, могут иметь свертывающую активность, сходную с FVIII дикого типа, или измененную свертывающую активность по сравнению с FVIII дикого типа. Клеточные стратегии позволяют проводить у пациентов с гемофилией A непрерывную экспрессию вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII. Как раскрыто в настоящем описании, некоторые модификации молекул FVIII (нуклеиновая кислота и белок) приводят к повышенной экспрессии на уровне нуклеиновой кислоты, повышенной свертывающей активности, тем самым эффективно улучшая гемостаз.

Варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, можно использовать для ряда целей согласно настоящему изобретению. В одном варианте осуществления предоставлено средство доставки нуклеиновой кислоты (т.е., экспрессионный вектор) для модулирования свертывания крови, при этом экспрессионный вектор содержит варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, согласно описанию. Введение кодирующих FVIII экспрессионных векторов больному приводит к экспрессии белка FVIII, который служит для изменения каскада свертывания. Согласно настоящему изобретению, экспрессия вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, согласно описанию, или функционального фрагмента увеличивает гемостаз.

В дополнительных вариантах осуществления согласно настоящему изобретению предоставлены композиции и способы введения вирусного вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII. В одном варианте осуществления экспрессионный вектор, содержащий вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, представляет собой вирусный вектор.

Экспрессионные векторы, содержащие варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, можно вводить отдельно или в комбинации с другими молекулами, подходящими для модулирования гемостаза. Согласно настоящему изобретению, векторы, экспрессионные векторы или комбинации терапевтических агентов можно вводить больному отдельно или в фармацевтически приемлемых или биологически совместимых композициях.

Вирусные векторы, такие как ленти- и парвовирусные векторы, включая AAV серотипы и их варианты, предоставляют средство доставки в клетки ex vivo, in vitro и in vivo нуклеиновой кислоты, которая кодирует белки, так что клетки экспрессируют кодируемый белок. AAV представляют собой вирусы, подходящие в качестве геннотерапевтических векторов, поскольку они могут проникать внутрь клеток и вводить нуклеиновую кислоту/генетический материал, так чтобы нуклеиновая кислота/генетический материал могли стабильно сохраняться в клетках. Кроме того, эти вирусы могут вводить нуклеиновую кислота/генетический материал, например, в конкретные сайты. Поскольку AAV не связаны с патогенными заболеваниями у людей, AAV векторы делают возможной доставку гетерологичных полинуклеотидных последовательностей (напр., терапевтических белков и агентов) пациентам-людям, не вызывая по существу AAV патогенеза или заболевания.

Вирусные векторы, которые можно использовать в изобретении включают, без ограничения, векторы на основе аденоассоциированных вирусов (AAV) множественных серотипов (напр., от AAV-1 до AAV-12, и другие) и гибридные/химерные AAV векторы, лентивирусные векторы и псевдотипированные лентивирусные векторы (напр., вирус Эбола, вирус везикулярного стоматита (VSV) и вирус иммунодефицита кошек (FIV)), векторы на основе вируса простого герпеса, аденовирусные векторы (с тканеспецифическими промоторами/энхансерами или без них), векторы на основе вируса коровьей оспы, пертовирусные векторы, лентивирусные векторы, невирусные векторы и другие.

AAV и лентивирусные частицы можно использовать для преимущества в качестве носителей для эффективной доставки гена. Такие вирионы обладают рядом желательных особенностей для такого применения, включая тропизм для делящихся и неделящихся клеток. Ранний клинический опыт с этими векторами также не показал устойчивой токсичности, и иммунные ответы были минимальными или неопределяемыми. Известно, что AAV инфицирует большое разнообразие типов клеток in vivo и in vitro посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза или трансцитоза. Эти векторные системы были протестированы у людей с выделенными в качестве мишени эпителием сетчатки, печенью, скелетными мышцами, дыхательными путями, головным мозгом, суставами и гемопоэтическими стволовыми клетками. Невирусные векторы, например, на основе плазмидной ДНК или миниколец, также являются подходящими векторами для переноса генов для крупных генов, таких как гены, кодирующие FVIII.

Может потребоваться ввести вектор, который может обеспечить, например, множественные копии требуемого гена и, следовательно, большее количество продукта этого гена. Улучшенные AAV и лентивирусный векторы и способы получения этих векторов подробно описаны в ряде ссылок, патентов и патентных заявок, включая: Wright J.F. (Hum Gene Ther 20:698-706, 2009), методику, используемую для получения вектора для клинического применения в детской больнице в Филадельфии. В CHOP также можно получать лентивирусный вектор, а другие векторы доступны через ведущую лабораторию по производству векторов посредством NHLBI Gene Therapy Resource Program (GTRP) - Lentivirus Vector Production Core Laboratory.

Соответственно, в различных вариантах осуществления согласно настоящему изобретению вектор включает ленти- или парвовирусный вектор, такой как аденовирусный вектор. В конкретных вариантах осуществления рекомбинантный вектор представляет собой парвовирусный вектор. Парвовирусы представляют собой мелкие вирусы с геном в виде одноцепочечной ДНК. «Аденоассоциированные вирусы» (AAV) входят в семейство парвовирусов.

Соответственно, в изобретении представлены вирусные векторы, которые содержат варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII. Например, рекомбинантный вектор AAV может содержать варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, при этом кодируемый белок FVIII необязательно имеет делецию B-домена. Векторная доставка или введение субъекту (напр., млекопитающему) вследствие этого предоставляет FVIII субъекту, такому как млекопитающее (напр., человек).

Прямая доставка векторов или трансдукция ex-vivo клеток человека с последующей инфузией в организм приведет к экспрессии FVIII, тем самым оказывая благотворное терапевтическое действие на гемостаз. В контексте фактора VIII изобретения согласно настоящему описанию такое введение усиливает способствующую свертыванию активность.

Как правило, AAV векторы и лентивирусные векторы не содержат вирусные гены, связанные с патогенезом. Такие векторы, как правило, имеют один или более AAV генов дикого типа, удаленных целиком или частично, например, гены rep и/или cap, но сохраняют по меньшей мере одну функциональную фланкирующую ITR последовательность, что необходимо для спасения, репликации и упаковки рекомбинантного вектора в AAV векторную частицу. Например, включены только необходимые части вектора, напр., элементы ITR и LTR, соответственно. Геном AAV вектора вследствие этого может содержать последовательности, требуемые в cis для репликации и упаковки (напр., функциональные последовательности ITR)

Рекомбинантный AAV вектор, а также способы и виды его применение, включают любой вирусный штамм или серотип. В качестве неограничивающего примера, рекомбинантный AAV вектор может быть на основе любого генома AAV, например, такого как AAV-1, -2, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -9, -10, -11, -12, -rh74, -rh10 или AAV-2i8. Такие векторы могут быть на основе одинакового штамма или серотипа (или подгруппы или варианта), или отличаться друг от друга. В качестве неограничивающего примера, рекомбинантный вектор AAV на основе генома одного серотипа может быть идентичен одному или более капсидным белкам, которые упаковывают вектор. Кроме того, геном рекомбинантного AAV вектора может быть на основе генома AAV (напр., AAV2) серотипа, отличающегося от одного или более AAV капсидных белков, которые упаковывают вектор. Например, геном AAV вектора может быть на основе AAV2, тогда как по меньшей мере один из трех капсидных белков может представлять собой, например, AAV1, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 или их вариант.

В конкретных вариантах осуществления векторы на основе аденоассоциированного вируса (AAV) включают AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 и AAV-2i8, а также его варианты (напр., капсидные варианты, такие как вставки, добавления, замещения и делеции аминокислот), например, как изложено в WO 2013/158879 (международная заявка PCT/US2013/037170), WO 2015/013313 (международная заявка PCT/US2014/047670) и US 2013/0059732 (Патент США № 9169299 раскрывает LK01, LK02, LK03 и т.д.).

Варианты AAV включают варианты и химеры AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 и AAV-2i8 капсида. Соответственно, предоставлены AAV векторы и AAV варианты (напр., варианты капсида), которые включают (инкапсулируют или упаковывают) варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII.

Серотипы вариантов AAV и AAV (напр., вариантов капсид) (напр., VP1, VP2, и/или VP3 последовательности) могут отличаться или не отличаться от других AAV серотипов, включая, например, AAV1-AAV12, Rh74 или Rh10 (напр., отличающиеся от VP1, VP2, и/или VP3 последовательностей любого из AAV1-AAV12, Rh74 или Rh10 серотипов).

В рамках изобретения, термин «серотип» представляет собой отличительную особенность, используемую для обозначения AAV, имеющего капсид, который серологически отличается от других серотипов AAV. Серологическое своеобразие определяется на основании отсутствия перекрестной реактивности между антителами к одному AAV по сравнению с другим AAV. Такие различия в перекрестной реактивности обычно обусловлены различиями в последовательностях капсидных белков/антигенных детерминантах (напр., вследствие разницы в последовательности VP1, VP2 и/или VP3 серотипов AAV). Несмотря на возможность, что варианты AAV, включая варианты капсидов, не могут серологически отличаться от эталонного AAV или другого серотипа AAV, они отличаются по меньшей мере одним нуклеотидным или аминокислотным остатком по сравнению с эталонным или другим серотипом AAV.

Согласно традиционному определению, серотип означает, что исследуемый вирус был протестирован против сыворотки, специфичной для всех существующих и охарактеризованных серотипов для нейтрализующей активности, и не было обнаружено антител, которые нейтрализуют исследуемый вирус. Поскольку больше открыто встречающихся в природе вирусных изолятов и/или получено капсидных мутантов, с любым из существующих в настоящее время серотипов могут быть или могут не быть серологические различия. Таким образом, в случаях, когда новый вирус (напр., AAV) не имеет серологических отличий, этот новый вирус (напр., AAV) может представлять собой подгруппу или вариант соответствующего серотипа. Во многих случаях серологическое тестирование на нейтрализующую активность также следует провести на мутантных вирусах с модификациями последовательности капсидов, чтобы определить, являются ли они другим серотипом в соответствии с традиционным определением серотипа. Соответственно, для удобства и во избежание повторения термин «серотип» в целом относится к обоим серологически различным вирусам (напр., AAV), а также к вирусам (напр., AAV), которые не являются серологически различными, которые могут находиться в подгруппе или варианте данного серотипа.

Вследствие этого AAV векторы включают генные/белковые последовательности, идентичные генным/белковым последовательностям, характерным для конкретного серотипа. В рамках изобретения, «AAV вектор, относящийся к AAV1» относится к одному или более AAV белкам (напр., VP1, VP2 и/или VP3 последовательностям), которые имеют последовательность, по существу идентичную с одним или более полинуклеотидами или полипептидными последовательностями, которые содержат AAV1. Аналогично, «AAV вектор, относящийся к AAV8» относится к одному или более AAV белкам (напр., VP1, VP2 и/или VP3 последовательностям), которые имеют последовательность, по существу идентичную с одним или более полинуклеотидами или полипептидными последовательностями, которые содержат AAV8. «AAV вектор, относящийся к AAV-Rh74» относится к одному или более AAV белкам (напр., VP1, VP2 и/или VP3 последовательностям), которые имеют последовательность, по существу идентичную с одним или более полинуклеотидами или полипептидными последовательностями, которые содержат AAV-Rh74. Такие AAV векторы, относящиеся к другому серотипу, напр., AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8, вследствие этого могут иметь одну или более последовательностей, отличающихся от AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 и AAV-2i8, но могут демонстрировать по существу идентичность последовательности с одним или более генами и/или белками, и/или имеют одну или более функциональных характеристик AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 (напр., таких как клеточный/тканевой тропизм). Иллюстративные неограничивающие AAV варианты включают капсидные варианты любого из VP1, VP2, и/или VP3.

В различных иллюстративных вариантах осуществления AAV вектор, относящийся к эталонному серотипу, имеет полинуклеотид, полипептид или их субпоследовательность, которая включает или состоит из последовательности, по меньшей мере на 80% или более (напр., 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5% и т.д.) идентичной одному или более AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 (напр., например, последовательностям ITR или VP1, VP2 и/или VP3).

Композиции, способы и применение согласно настоящему изобретению включают AAV последовательности (полипептиды и нуклеотиды) и их субпоследовательности, которые демонстрируют менее чем 100% идентичность последовательности с эталонным AAV серотипом, таким как AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10 или AAV-2i8, но отличаются и не идентичны известным AAV генам или белкам, таким как гены или белки AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 и т.д. В одном варианте осуществления AAV полипептид или его субпоследовательность включает или состоит из последовательности, по меньшей мере на 75% или более идентичной, напр., на 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5% и т.д., вплоть до 100% идентичной любой эталонной AAV последовательности или ее субпоследовательности, такой как AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 (напр., VP1, VP2 и/или VP3 капсид или ITR). В некоторых вариантах осуществления AAV вариант имеет 1, 2, 3, 4, 5, 5-10, 10-15, 15-20 или более замещений аминокислот.

Чтобы включить одну или более последовательностей нуклеиновых кислот (трансгенов), фланкированных одной или более функциональными AAV ITR последовательностями, с применением рекомбинантных методик, известных специалисту в данной области, можно сконструировать рекомбинантные векторы AAV, включая AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 и вариантные, родственные, гибридные и химерные последовательности.

В одном варианте осуществления согласно настоящему изобретению, варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, вектор или экспрессионный вектор, можно вводить больному посредством инфузии в биологически совместимом носителе, например, посредством внутривенной инъекции. Варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, векторы и экспрессионные векторы согласно настоящему изобретению для повышения стабильности молекулы можно необязательно инкапсулировать в липосомы или смешать с другими фосфолипидами или мицеллами. Варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, векторы и экспрессионные векторы согласно настоящему изобретению можно вводить отдельно или в комбинации с другими агентами, о которых известно, что они модулируют гемостаз (напр., фактор V, фактор Va или их производные).

Подходящую композицию для доставки FVIII может определять практикующий врач после рассмотрения множества физиологических переменных, включая, без ограничения, состояние больного и состояние гемодинамики. Ряд композиций, хорошо подходящих для различных видов применения и путей введения, известны в данной области и описаны в настоящем документе ниже.

Препарат, содержащий очищенный белок FVIII, полученный посредством экспрессии вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, векторов и экспрессионных векторов согласно настоящему изобретению, содержит физиологически приемлемую матрицу и может быть получен в виде фармацевтического препарата. Препарат может быть получен с использованием по существу известных способов предшествующего уровня техники, его можно смешать с буфером, содержащим соли, такие как NaCl, CaCl₂, и аминокислотами, такими как глицин и/или лизин, и в диапазоне рН от 6 до 8. При необходимости очищенный препарат, содержащий FVIII, можно хранить в форме готового раствора или в лиофилизированной или замороженной при низкой температуре форме.

Препарат можно хранить в лиофилизированной форме и растворять в визуально прозрачном растворе с использованием подходящего раствора для восстановления. В качестве альтернативы, препарат согласно настоящему изобретению может быть также доступен в виде жидкого препарата или в виде замороженной при низкой температуре жидкости. Препарат согласно настоящему изобретению необязательно может быть особенно стабильным, т. е. ему можно позволить отстаиваться в растворенной форме в течение длительного времени до введения или доставки.

Препарат согласно настоящему изобретению может быть доступен в виде фармацевтического препарата с активностью FVIII в форме однокомпонентного препарата или в комбинации с другими факторами в форме многокомпонентного препарата. Перед переработкой очищенного белка в фармацевтический препарат очищенный белок подвергают обычному контролю качества и придают вид выпускаемой терапевтической формы. В частности, во время рекомбинантного получения очищенный препарат тестируют на отсутствие клеточных нуклеиновых кислот, а также нуклеиновых кислот, которые получены из вектора экспрессии, как описано в EP 0 714 987.

Препарат фармацевтического белка можно использовать в дозах от 30 до 100 МЕ/кг (одна МЕ составляет 100 нг/мл) в виде однократной ежедневной инъекции или до 3 раз/сутки в течение нескольких дней. Пациентов можно лечить сразу после проявления клинической картины кровотечения. В качестве альтернативы, пациенты могут получать болюсную инфузию каждые восемь-двенадцать часов или если наблюдается достаточное улучшение, однократную ежедневную инфузию FVIII.

Соответственно, в фармацевтические композиции можно включать нуклеиновые кислоты изобретения, векторы, рекомбинантные векторы (например, rAAV) и рекомбинантные вирусные частицы и другие композиции, агенты, лекарственные средства, биологические вещества (белки). Такие фармацевтические композиции полезны, среди прочего, для введения и доставки субъекту in vivo или ex vivo.

В конкретных вариантах осуществления фармацевтические композиции также содержат фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. Такие эксципиенты включают любой фармацевтический агент, который сам не индуцирует иммунный ответ, вредный для индивида, получающего композицию, и который можно вводить без неспецифической токсичности.

В рамках изобретения, термин «фармацевтически приемлемый» и «физиологически приемлемый» означает биологически приемлемую готовую форму, газообразную, жидкую или твердую, или их смесь, которая подходит для одного или нескольких путей введения, доставки in vivo или контакта. «Фармацевтически приемлемая» или «физиологически приемлемая» композиция представляет собой материал, который не является биологически или иным образом нежелательным, напр., материал можно вводить субъекту, не вызывая существенных нежелательных биологических эффектов. Таким образом, такая фармацевтическая композиция может использоваться, например, при введении субъекту нуклеиновой кислоты, вектора, вирусной частицы или белка.

Фармацевтически приемлемые эксципиенты включают, без ограничения, такие жидкости, как вода, физиологический раствор, глицерин, сахара и этанол. В них также можно включать фармацевтически приемлемые соли, например, соли минеральных кислот, такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты, сульфаты и тому подобное; и соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты, бензоаты и т.п. Дополнительно в таких наполнителях могут присутствовать вспомогательные материалы, такие как смачивающие или эмульгирующие агенты, регулирующие рН буферные вещества и тому подобное.

Фармацевтическая композиция может быть представлена в виде соли и может быть образована со многими кислотами, включая, без ограничения, соляную, серную, уксусную, молочную, винную, яблочную, янтарную и т.д. Соли, как правило, более растворимы в водных или других протонных растворителях, чем соответствующие свободные формы оснований. В других случаях препарат может представлять собой лиофилизированный порошок, который может содержать любое или все из следующего: 1-50 мМ гистидина, 0,1%-2% сахарозы и 2-7% маннита с диапазоном рН от 4,5 до 5,5, которое перед использованием объединяют с буфером.

Фармацевтические композиции включают растворители (водные или неводные), растворы (водные или неводные), эмульсии (например, масло-в-воде или вода-в-масле), суспензии, сиропы, эликсиры, дисперсионные и суспензионные среды, покрытия, изотонические и способствующие или замедляющие всасывание агенты, совместимые с фармацевтическим введением или контактом или доставкой in vivo. Водные и неводные растворители, растворы и суспензии могут включать суспендирующие агенты и загустители. Такие фармацевтически приемлемые носители включают таблетки (с покрытием или без покрытия), капсулы (твердые или мягкие), микрошарики, порошок, гранулы и кристаллы. В композиции также можно включать дополнительные активные соединения (например, консерванты, антибактериальные, противовирусные и противогрибковые средства).

Фармацевтические композиции можно составлять так, чтобы они были совместимым с конкретным способом введения или доставки, который изложен в данном документе или известен специалисту в данной области. Таким образом, фармацевтические композиции содержат носители, разбавители или эксципиенты, подходящие для введения различными путями.

Композиции, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные растворы, суспензии или эмульсии активного соединения, причем эти препараты обычно являются стерильными и могут быть изотоническими по отношению к крови предполагаемого реципиента. Неограничивающие иллюстративные примеры включают воду, забуференный физиологический раствор, раствор Хэнкса, раствор Рингера, декстрозу, фруктозу, этанол, животные, растительные или синтетические масла. Водные инъекционные суспензии могут содержать вещества, которые увеличивают вязкость суспензии, такой как натрийкарбоксиметилцеллюлоза, сорбит или декстран.

Кроме того, суспензии активных соединений могут быть получены в виде подходящих масляных суспензий для инъекций. Подходящие липофильные растворители или наполнители включают жирные масла, такие как кунжутное масло, или сложные эфиры синтетических жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, или липосомы. Необязательно, суспензия также может содержать подходящие стабилизаторы или агенты, которые повышают растворимость соединений, чтобы обеспечить получение высококонцентрированных растворов.

К композиции могут быть добавлены сорастворители и адъюванты. Неограничивающие примеры сорастворителей включают гидроксильные группы или другие полярные группы, например спирты, такие как изопропиловый спирт; гликоли, такие как пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, гликолевый эфир; глицерин; полиоксиэтиленовые спирты и полиоксиэтиленовые сложные эфиры жирных кислот. Адъюванты включают, например, поверхностно-активные вещества, такие как соевый лецитин и олеиновая кислота; сорбитановые сложные эфиры, такие как сорбитан атриолеат; и поливинилпирролидон.

После получения фармацевтических композиций их можно помещать в соответствующий контейнер и маркировать для лечения. Для введения содержащих FVIII векторов или полипептидов такая маркировка будет включать количество, частоту и способ введения.

В данной области известны фармацевтические композиции и системы доставки, подходящие для композиции, способы и применение согласно настоящему изобретению (см., напр., Remington: The Science и Practice of Pharmacy (2003) 20^th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA; Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) 18^th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA; The Merck Index (1996) 12^th ed., Merck Publishing Группа, Whitehouse, NJ; Pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms (1993), Technonic Publishing Co., Inc., Lancaster, Pa.; Ansel и Stoklosa, Pharmaceutical Calculations (2001) 11^th ed., Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD; и Poznansky et al., Drug Delivery Systems (1980), R. L. Juliano, ed., Oxford, N.Y., pp. 253-315).

Изобретение также предоставляет способы введения в клетку или животному вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII. В конкретном варианте осуществления изобретение относится к способам модулирования гемостаза. В одном варианте осуществления способ включает контакт или введение индивиду (больному или субъекту, такому как млекопитающее) средства доставки нуклеиновой кислоты (напр., AAV вектора), содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, в условиях, в которых у индивида экспрессируется полипептид FVIII. В другом варианте осуществления способ включает предоставление в клети индивида (больного или субъекта, такого как млекопитающее) средства доставки нуклеиновой кислоты (напр., AAV вектора), содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, в условиях, в которых у индивида экспрессируется полипептид FVIII.

Из вышеуказанного можно видеть, что варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, можно использовать при лечении расстройств, связанных с дефицитной, недостаточной или нарушенной свертываемостью крови.

Композиции вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, включая векторы, рекомбинантные векторы (напр., rAAV), и рекомбинантные вирусные частицы можно вводить, а способы и применение изобретения могут быть предоставлены нуждающемуся в этом субъекту в достаточном или эффективном количестве. «Эффективное количество» или «достаточное количество» относится к количеству, которое обеспечивает в виде разовой или множественной дозы, отдельно или в сочетании, одну или более других композиций (терапевтических или иммуносупрессивных средств, таких как лекарственное средство), виды лечения, протоколы или средства лечебной схемы, определяемый ответ любой продолжительности времени (длительный или кратковременный), ожидаемый или требуемый результат или полезность для субъекта любой измеряемой или определяемой степени или на любой продолжительности (например, в течение минут, часов, дней, месяцев, лет или до излечения).

Дозы могут варьировать и зависят от типа, начала, прогрессирования, тяжести, частоты, продолжительности или вероятности заболевания, на которое направлено лечение, требуемой клинической конечной точки, предшествующего или одновременно проводимого лечения, общего состояния здоровья, возраста, пола, расы или иммунологической компетентности субъекта и других факторов, которые будут оценены квалифицированным специалистом. Величина дозы, число, частота или продолжительность могут быть пропорционально увеличены или уменьшены, что показано при любых неблагоприятных побочных эффектах, осложнениях или других факторах риска лечения или терапии и состояние субъекта. Специалист в данной области оценит факторы, которые могут влиять на дозировку и сроки, необходимые для обеспечения количества, достаточного для предоставления терапевтической или профилактической пользы.

Доза для достижения терапевтического эффекта, напр., доза в векторных геномах/на килограмм массы тела (мкг/кг), будет варьировать в зависимости от нескольких факторов, включая, без ограничения: путь введения, уровень экспрессии гетерологичного полинуклеотида, необходимый для достижения терапевтического эффекта, конкретного заболевания, подлежащего лечению, любого иммунного ответа хозяина на вирусный вектор, иммунного ответа хозяина на гетерологичный полинуклеотид или продукт экспрессии (белок) и стабильности экспрессированного белка. Специалист в данной области может определить диапазон дозы генома rAAV/вектора для лечения пациента, имеющего конкретное заболевание или расстройство, на основе вышеупомянутых факторов, а также других факторов. Обычно дозы будут варьировать от по меньшей мере 1×10⁸ или более, например, 1×10⁹, 1×10¹⁰, 1×10¹¹, 1×10¹², 1×10¹³ или 1×10¹⁴ или более векторных геномов на килограмм (вг/кг) массы субъекта, чтобы достичь терапевтического эффекта. Эффективной была доза AAV в диапазоне 1×10¹⁰-1×10¹¹у мышей и 1×10¹²-1×10¹³ у собак.

Вообще говоря, при использовании в качестве примера гемофилии B, считается, что с целью достижения терапевтического эффекта для изменения тяжелого фенотипа болезни на умеренный, необходима концентрация фактора свертывания в крови, которая составляет более 1% от концентрации фактора, имеющейся у нормального индивида. Тяжелый фенотип характеризуется поражением суставов и угрожающими жизни кровотечениями. Считается, что для перевода умеренного фенотипа болезни в мягкий необходима концентрация фактора свертывания крови выше 5% от нормального. Уровни FVIII у нормальных людей составляют приблизительно 150-200 нг/мл плазмы, но могут быть меньше (напр., диапазон, составляющий приблизительно 100-150 нг/мл) или выше (например, диапазон, составляющий приблизительно 200-300 нг/мл) и все еще считаются нормальными вследствие функционирования свертывания, что определяется, например, методом одностадийного анализа свертываемости активированного частичного тромбопластинового времени (aPTT). Таким образом, терапевтический эффект может быть достигнут посредством экспрессии FVIII, так чтобы общее количество FVIII у субъекта/человека превышало 1% FVIII, присутствующего у нормальных субъектов/людей, например 1% от 100-300 нг/мл.

В отношении лечения такого субъекта с гемофилией, для достижения требуемого терапевтического эффекта типичная доза составляет по меньшей мере 1×10¹⁰ векторных геномов (вг) на килограмм (вг/кг) массы субъекта, или между приблизительно 1×10¹⁰ и 1×10¹¹вг/кг массы субъекта, или между приблизительно 1×10¹¹и 1×10¹²вг/кг массы субъекта, или между приблизительно 1×10¹²и 1×10¹³вг/кг массы субъекта. Дозы AAV вектора могут быть на уровне, обычно в нижнем конце спектра доз, так что против FVIII или AAV вектора не возникает существенного иммунного ответа.

Дозы «эффективного количества» или «достаточного количества» для лечения (напр., для улучшения или обеспечения терапевтического эффекта или улучшения) обычно эффективны для ответа на один, множество или все неблагоприятные симптомы, последствия или осложнения болезни, один или несколько неблагоприятных симптомов, расстройств, заболеваний, патологий или осложнений, например, вызванных или ассоциированных с заболеванием, в измеримой степени, хотя и уменьшение, снижение, ингибирование, подавление, ограничение или контроль прогрессирования или ухудшения болезни является удовлетворительным результатом.

Эффективное количество или достаточное количество можно, но не обязательно, вводить за одно введение, может потребоваться многократное введение, и можно, но не обязательно, вводить отдельно или в сочетании с другой композицией (например, средством), видом лечения, протоколом или схемой лечения. Например, количество можно пропорционально увеличить, что диктуется потребностью субъекта, типом, состоянием и степенью тяжести заболевания или побочными эффектами лечения (при наличии). Кроме того, нет необходимости, чтобы эффективное количество или достаточное количество было эффективным или достаточным, если его вводят в виде одной или множества доз без второй композиции (напр., другого лекарственного средства или агента), вида лечения, протокола или схемы лечения, поскольку для того, чтобы считаться эффективными или достаточными для данного субъекта, можно включать дополнительные дозы, количества или продолжительность выше и за пределами таких доз или дополнительные композиции (напр., лекарственные средства или агенты), виды лечения, протоколы или схемы лечения. Эффективные количества также включают количества, которые приводят к уменьшению использования другого вида лечения, схемы лечения или протокола, такого как введение рекомбинантного белка фактора свертывания (например, FVIII) для лечения расстройства свертывания крови (напр., гемофилии A).

Соответственно, способы и виды применения изобретения также включают, среди прочего, способы и виды применения, которые приводят к уменьшению потребности или использования другого соединения, агента, лекарственного препарата, схемы лечения, протокола лечения, процесса или лечебного средства. Например, для лечения болезней свертывания крови способ или использование изобретения имеет терапевтическое преимущество, если у данного субъекта менее частая или уменьшенная доза или элиминация введения рекомбинантного белка фактора свертывания для восполнения дефицитного или дефектного (аномального или мутантного) эндогенного фактора свертывания крови у субъекта. Таким образом, согласно настоящему изобретению предоставлены способы и виды снижения потребности или использования другого лечения или терапии.

Эффективное количество или достаточное количество не должно быть эффективным ни для каждого повергающегося лечению субъекта, ни для большинства пролеченных субъектов в данной группе или популяции. Эффективное количество или достаточное количество означает эффективность или достаточность у конкретного субъекта, а не группы или общей популяции. Как это типично для таких методов, у некоторых субъектов будет наблюдаться больший или меньший ответ или отсутствие ответа на данный метод лечения или его использование.

Термин «улучшение» означает обнаруживаемое или измеряемое улучшение болезни субъекта или ее симптома или лежащий в основе клеточный ответ. Обнаруженное или измеримое улучшение включает в себя субъективное или субъективное уменьшение, снижение, ингибирование, подавление, ограничение или контроль возникновения, частоты, тяжести, прогрессирования или продолжительности заболевания или осложнений, вызванных или ассоциированных с этим заболеванием, или улучшение симптома или основной причины или последствий заболевания, или обратное развитие болезни. Для HemA эффективное количество будет представлять собой количество, которое, например, уменьшает частоту или тяжесть эпизодов острого кровотечения у субъекта, или количество, которое уменьшает время свертывания, которое измеряют, например, с помощью анализа свертывания крови.

Соответственно, фармацевтические композиции изобретения включают композиции, в которых активные ингредиенты содержатся в эффективном количестве для достижения намеченной терапевтической цели. Определение терапевтически эффективной дозы находится в пределах возможностей квалифицированного врача-практика, использующего методики и рекомендации, предоставленные в изобретении.

Терапевтические дозы будут зависеть, помимо прочего, от возраста и общего состояния субъекта, от тяжести аберрантного фенотипа свертывания крови и от силы контрольных последовательностей, регулирующих уровни экспрессии вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII. Таким образом, терапевтически эффективное количество у людей будет уменьшаться в относительно широком диапазоне, который может быть определен врачом-практиком на основе ответа отдельного пациента на лечение FVIII на основе вектора. Такие дозы могут быть отдельными или в сочетании с иммунодепрессантом или лекарственным средством.

Композиции, такие как фармацевтические композиции, можно доставлять субъекту, чтобы обеспечить выработку биологически активного белка (например, фактора VIII (FVIII), кодируемого вариантом нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG) или путем индуцирования непрерывной экспрессии трансгена FVIII in vivo методами генной или клеточной терапии или посредством модификации клеток пациента или донора ex-vivo. В конкретном варианте осуществления фармацевтические композиции, содержащие достаточный генетический материал, чтобы реципиент мог получить терапевтически эффективное количество полипептида FVIII, могут влиять на гемостаз у субъекта.

Композиции можно вводить отдельно. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектор, экспрессионный вектор/рекомбинантный вектор (напр., rAAV) или рекомбинантная вирусная частица обеспечивает терапевтическое действие без иммуносупрессивного средства. Терапевтическое действие FVIII необязательно пролонгируется в течение некоторого периода времени, напр., 2-4, 4-6, 6-8, 8-10, 10-14, 14-20, 20-25, 25-30 или 30-50 дней или более, например, 50-75, 75-100, 100-150, 150-200 дней или более без введения иммуносупрессивного средства. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектор, экспрессионный вектор/рекомбинантный вектор (напр., rAAV), или рекомбинантная вирусная частица обеспечивают терапевтическое действие без введения иммуносупрессивного средства на протяжении некоторого периода времени.

Композиции можно вводить в комбинации по меньшей мере с одним другим средством. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектор, экспрессионный вектор/рекомбинантный вектор (напр., rAAV) или рекомбинантную вирусную частицу вводят в сочетании с одним или более иммуносупрессивными средствами перед, по существу в одно время или после введения варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектора, экспрессионного вектора/рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектор, экспрессионный вектор/рекомбинантный вектор (напр., rAAV) или рекомбинантную вирусную частицу вводят в сочетании с одним или более иммуносупрессивными средствами спустя некоторый период времени после введения варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектора, экспрессионного вектора/рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы, напр., спустя 1-12, 12-24 или 24-48 часов или спустя 2-4, 4-6, 6-8, 8-10, 10-14, 14-20, 20-25, 25-30, 30-50 или более 50 дней после введения варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектора, экспрессионного вектора/рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы. Такое введение иммуносупрессивных средств спустя некоторый период времени после введения варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектора, экспрессионного вектора/рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы, если имеется снижение FVIII после первоначальных уровней экспрессии в течение некоторого периода времени, напр., 20-25, 25-30, 30-50, 50-75, 75-100, 100-150, 150-200 или более 200 дней после введения варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектора, экспрессионного вектора/рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы.

В некоторых вариантах осуществления иммуносупрессивным средством является противовоспалительное средство. В некоторых вариантах осуществления иммуносупрессивным средством является стероид. В некоторых вариантах осуществления иммуносупрессивным средством является циклоспорин (напр., циклоспорин A), микофенолат, Ритуксимаб или его производное. Дополнительные конкретные средства включают стабилизирующее соединение.

Композиции можно вводить в любом стерильном биосовместимом фармацевтическом носителе, включая, без ограничения, физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, декстрозу и воду. Композиции можно вводить пациенту отдельно или в комбинации с другими средствами (например, кофакторами), которые влияют на гемостаз.

Фактор VIII, отдельно или в комбинации с другими агентами, можно вводить или приводить в контакт или непосредственно вводить пациенту в виде инфузии в надлежащем биологическом носителе согласно описанию. Векторы и экспрессионные векторы изобретения, содержащие вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, можно вводить больному с помощью ряда средств для достижения и необязательно поддержания в течение некоторого периода времени профилактически и/или терапевтически эффективного уровня полипептида FVIII. Специалист в данной области может легко определить конкретные протоколы для использования векторов экспрессии, кодирующих FVIII, изобретения для терапевтического воздействия на конкретного больного.

Протоколы для выработки аденовирусных векторов и введения пациентам описаны в патентах США №№ 5998205; 6228646; 6093699; 6100242; и международных патентных заявках №№ WO 94/17810 и WO 94/23744, которые включены в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте. В частности, например, AAV векторы используются для доставки нуждающемуся в этом пациенту фактора VIII (FVIII), кодируемого вариантами нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG.

Фактор VIII (FVIII), кодируемый вариантами нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, доставляемый посредством AAV векторов изобретения, можно вводить пациенту любыми известными способами.

Способы и виды применения изобретения включают доставку и введение системно, регионально или локально или любым путем, например, посредством инъекции или инфузии. Доставку фармацевтических композиций in vivo обычно можно осуществлять посредством инъекции с использованием обычного шприца, хотя предусмотрены другие способы доставки, такие как конвекционная доставка (см. напр., патент США № 5720720). Например, композиции можно доставлять подкожно, эпидермально, внутрикожно, интратекально, интраорбитально, интрамукозально, внутрибрюшинно, внутривенно, внутриплеврально, внутриартериально, перорально, внутрипеченочно, через воротную вену или внутримышечно. Другие способы введения включают пероральное и пульмональное введение, суппозитории и трансдермальное применение. Клиницист, специализирующийся на лечении пациентов с нарушениями свертывания крови, может определить оптимальный путь для введения аденовирус-ассоциированных векторов, содержащих варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, на основе ряда критериев, включая, без ограничения: состояние пациента и цели лечения (например, повышение или снижение свертываемости крови).

Способы и виды применения изобретения можно комбинировать с любым соединением, средством, лекарственным препаратом, видом лечения или другой схемой лечения или протоколом, имеющим требуемую терапевтическую, благотворную, аддитивную, синергическую или комплементарную активность или эффект. Примеры комбинированных композиций и видов лечения включают вторичные активные вещества, такие как биологические вещества (белки), средства (например, иммунодепрессанты) и лекарственные средства. Такие биологические вещества (белки), агенты, лекарственные средства, методы лечения и терапии можно вводить или проводить перед, по существу одновременно или после любого другого способа или вида использования изобретения, например, терапевтического способа лечения субъекта при патологии свертывания крови, такой как HemA.

Соединение, агент, лекарственное средство, вид лечения или другую схему лечения или протокол можно применять в виде комбинированной композиции или вводить отдельно, например, одновременно или по очереди или последовательно (до или после) доставки или введения нуклеиновой кислоты, вектора, рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы. Таким образом, изобретение предоставляет комбинации, в которых способ или вид применения изобретения находится в сочетании с любым соединением, агентом, лекарственным средством, схемой лечения, протоколом лечения, процессом, лекарством или композицией, изложенным в данном описании или известным специалисту в данной области. Соединение, агент, лекарственное средство, схема лечения, протокол лечения, способ, лечебное средство или композицию можно вводить субъекту или проводить перед, по существу одновременно или после введения нуклеиновой кислоты, вектора, рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы согласно настоящему изобретению.

Изобретение полезно для животных, включая человека и медицинские и ветеринарные способы применения. Таким образом, подходящие субъекты включают млекопитающих, таких как люди, а также млекопитающих, не являющихся человеком. Термин «объект» относится к животному, как правило млекопитающему, такому как люди, не являющиеся человеком приматы (человекообразные обезьяны, гиббоны, гориллы, шимпанзе, орангутаны, макаки), домашние животные (собаки и кошки), сельскохозяйственные животные (домашняя птица, такая как куры и утки, лошади, коровы, козы, овцы, свиньи) и экспериментальные животные (мышь, крыса, кролик, морская свинка). Субъекты-люди включают эмбриональных, новорожденных, грудных, несовершеннолетних и взрослых субъектов. Субъекты включают животные модели заболеваний, например, мышиные и другие животные модели заболеваний свертывания крови, такие как HemA и другие, известные специалистам в данной области.

Субъекты, подходящие для лечения согласно настоящему изобретению, включают субъектов с выработкой недостаточного количества или с дефицитом продукта функционирующего гена (напр., белка FVIII) или с выработкой продукта (напр., белка FVIII) аберантного, частично функционирующего или нефункционирующего гена, что может привести к заболеванию, или субъектов с таким риском. Субъекты, подходящие для лечения согласно настоящему изобретению, также включают субъектов с выработкой продукта (белка) аберантного или дефектного (мутантного) гена, которая приводит к заболеванию, так что снижение количества, экспрессии или функции продукта (белка) аберантного или дефектного (мутантного) гена могло бы привести к лечению заболевания или к уменьшению одного или более симптомов или к ослаблению заболевания, или субъектов с таким риском. Таким образом, целевые субъекты включают субъектов, имеющих нарушенную, недостаточную или отсутствующую выработку факторов свертывания крови, таких как гемофилии (напр., гемофилия A).

Субъектов можно протестировать на иммунный ответ, например, на антитела против AAV. Таким образом, субъектов-кандидатов с гемофилией перед лечением согласно способу изобретения можно подвергнуть скринингу. Субъектов также можно протестировать на антитела против AAV после лечения и необязательно контролировать в течение некоторого периода времени после лечения. Субъектов, у которых вырабатываются антитела, можно лечить иммунодепрессантом, или им можно вводить одно или несколько дополнительных количеств AAV вектора.

Субъекты, подходящие для лечения согласно настоящему изобретению, также включают субъектов с выработкой антител против AAV или с таким риском. Векторы AAV можно вводить или доставлять таким субъектам, используя нескольких методик. Например, пустой капсид AAV (т.е., AAV с отсутствующей нуклеиновой кислотой FVIII) можно доставить для связывания у субъекта AAV антител, тем самым позволяя AAV вектору, несущему вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, трансформировать клетки субъекта. Количества пустого капсида AAV для введения можно регулировать, исходя из количества AAV-антител, выработанных у конкретного субъекта. Пустой капсид может быть любого серотипа AAV, например, AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8.

В качестве альтернативы или в дополнение AAV вектор можно доставлять путем прямой внутримышечной инъекции (напр., в одно или более медленносокращающихся мышечных волокон). В другом альтернативном варианте катетер, вводимый в бедренную артерию, можно использовать для доставки AAV векторов в печень через печеночную артерию. Также для доставки AAV векторов непосредственно в печень можно использовать нехирургические средства, такие как эндоскопическая ретроградная холангиопанкреатография (ЭРХПГ), тем самым минуя кровь и AAV-антитела. В качестве ворот для доставки AAV векторов субъекту, у которого вырабатываются или имеются существующие ранее антитела против AAV, также можно использовать другие протоковые системы, такие как протоки подчелюстной железы.

Введение или доставку in vivo субъекту можно выполнять до развития неблагоприятного симптома, состояния, осложнения и т. д., вызванных или ассоциированным с этим заболеванием. Например, для идентификации таких субъектов в качестве кандидатов на композиции, способы и виды применения изобретения можно использовать скрининг (например, генетический). Таким образом, такие субъекты включают субъектов с положительным результатом при скрининге на недостаточное количество или дефицит продукта функционирующего гена (напр., белка FVIII), или у которых вырабатывается продукт (напр., белок FVIII) аберрантного, частично функционирующего или нефункционирующего гена.

Введение или доставку субъекту in vivo в соответствии со способами и видами применения изобретения, как раскрыто в настоящем описании, можно осуществлять в течение 1-2, 2-4, 4-12, 12-24 или 24-72 часов после того, как было идентифицировано, что субъект имеет заболевание, намеченное для лечения, имеет один или более симптомов заболевания или был подвергнут скринингу и идентифицирован как положительный согласно настоящему описанию, даже если субъект не имеет одного или более симптомов заболевания. Конечно, способы и виды применения изобретения могут быть осуществлены в течение 1-7, 7-14, 14-21, 21-48 или более дней, месяцев или лет после того, как было идентифицировано, что субъект имеет заболевание, намеченное для лечения, имеет один или более симптомов заболевания или был подвергнут скринингу и идентифицирован как положительный, согласно настоящему описанию.

В рамках изобретения, «стандартная лекарственная форма» относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве разовых доз для субъекта, подлежащего лечению; причем каждая единица содержит заданное количество, необязательно в сочетании с фармацевтическим носителем (эксципиентом, разбавителем, наполнителем или наполняющей средой), которое при введении в одной или нескольких дозах рассчитывают для достижения требуемого эффекта (напр., профилактического или терапевтического эффекта). Стандартные лекарственные формы могут находиться внутри, например, ампул и флаконов, которые могут содержать жидкую композицию или композицию в состоянии после сублимационной сушки или в лиофилизированном состоянии; например, перед введением или доставкой in vivo можно добавить стерильный жидкий носитель. В многодозовые наборы или контейнеры можно включать отдельные стандартные лекарственные формы. Для удобства введения и единообразия дозировки рекомбинантные векторы (напр., rAAV), рекомбинантные вирусные частицы и их фармацевтические композиции могут быть упакованы в виде одной или нескольких стандартных лекарственных форм.

[0191] Субъектов можно тестировать на количество FVIII или активность FVIII, чтобы определить, подходят ли такие субъекты для лечения согласно способу изобретения. Претендующих на лечение субъектов с гемофилией, таким образом, можно подвергнуть скринингу на количество или активность FVIII до лечения согласно способу изобретения. Субъектов также можно тестировать на количество FVIII или активность FVIII после лечения согласно способу изобретения. После лечения таких пролеченных субъектов можно периодически подвергать мониторингу на количество FVIII или активность FVIII, напр., каждые 1-4 недели или 1-6 месяцев.

Субъектов можно тестировать на один или несколько ферментов печени в рамках неблагоприятного ответа или для определения того, подходят ли такие субъекты для лечения согласно способу изобретения. Таким образом, претендующих на лечение субъектов с гемофилией можно подвергать скринингу на количество одного или более печеночных ферментов до лечения согласно способу изобретения. Субъектов также можно тестировать на количество одного или более печеночных ферментов после лечения согласно способу изобретения. Таких пролеченных субъектов можно периодически подвергать мониторингу после лечения на повышение печеночных ферментов, напр., каждые 1-4 недели или 1-6 месяцев.

Иллюстративные печеночные ферменты включают аланинаминотрансферазу (АЛТ), аспартатаминотрансферазу (АСТ) и лактатдегидрогеназу (ЛДГ), но также можно проводить мониторинг на другие ферменты, указывающие на поражение печени. Нормальный уровень данных ферментов в кровотоке, как правило, определяется в виде диапазона, который имеет верхний уровень, выше которого уровень ферментов считается повышенным и вследствие этого указывает на поражение печени. Нормальный диапазон частично зависит от стандартов, используемых клинической лабораторией, проводящей анализ.

Можно проводить мониторинг субъектов на эпизоды кровотечения, чтобы определить, подходят ли такие субъекты для лечения или отвечают ли на лечение, и/или величину или продолжительность ответной реакции. Можно проводить мониторинг субъектов на эпизоды кровотечения, чтобы определить, нуждаются ли такие субъекты в дополнительном лечении, напр., в последующем введении AAV вектора или введении иммуносупрессивного средства, или в более частом мониторинге. Вследствие этого можно проводить мониторинг субъектов с гемофилией на эпизоды кровотечения перед лечением и после лечения согласно способу изобретения. Субъектов также можно тестировать на частоту и тяжесть эпизодов кровотечения во время или после лечения согласно способу изобретения.

В изобретении предоставлены наборы с упаковочным материалом и одним или несколькими компонентами в них. Набор обычно включает этикетку или упаковочный вкладыш, содержащий описание компонентов или инструкции для использования его компонентов in vitro, in vivo или ex vivo. Набор может содержать набор таких компонентов, как, напр., нуклеиновая кислота, рекомбинантный вектор, вирусный (например, AAV) вектор или вирусная частица и необязательно второе активное вещество, такое как соединение, агент, лекарственное средство или композиция.

Набор относится к физической структуре, содержащей один или несколько компонентов набора. Упаковочный материал может сохранять компоненты стерильными и может быть изготовлен из материала, обычно используемого для таких целей (например, из бумаги, гофрированного волокна, стекла, пластика, фольги, ампул, флаконов, пробирок и т. д.).

Этикетки или вкладыши могут содержать идентифицирующую информацию об одном или нескольких его компонентов, количестве доз, клинической фармакологии активного ингредиента (ингредиентов), включая механизм действия, фармакокинетику и фармакодинамику. Этикетки или вкладыши могут содержать информацию, идентифицирующую производителя, номера партий, местоположение и дату производства, даты истечения срока годности. Этикетки или вкладыши могут содержать информацию о заболевании, для которого может быть использован компонент набора. Этикетки или вкладыши могут содержать инструкции для врача или субъекта по использованию одного или нескольких компонентов набора в способе, использовании или протоколе лечения или схеме лечения. Инструкции могут включать количество доз, частоту или продолжительность, и инструкции по практическому применению любого из методов, видам применения, протоколам лечения или профилактических или терапевтических режимов, описанных в настоящем описании.

Этикетки или вкладыши могут содержать информацию о любом преимуществе, предоставляемом компонентом, таком как профилактическая или терапевтическая польза. Этикетки или вкладыши могут содержать информацию о потенциальных неблагоприятных побочных эффектах, осложнениях или реакциях, такую как предупреждения для субъекта или клинициста относительно ситуаций, когда было бы нецелесообразно использовать конкретную композицию. Неблагоприятные побочные эффекты или осложнения могут также возникать, когда субъект принимал, будет принимать или принимает в настоящее время одно или несколько других лекарств, которые могут быть несовместимы с композицией, или субъекта подвергали, будут подвергать или в настоящее время подвергают другому протоколу лечения или схеме лечения, которая может быть несовместима с композицией, и, таким образом, инструкции могут содержать информацию о такой несовместимости.

Этикетки или вкладыши содержат «печатный материал», например, бумагу или картон, отдельные или прикрепленные к компоненту, набору или упаковочному материалу (например, коробке) или прикрепленные к ампуле, пробирке или флакону, содержащему компонент набора. Этикетки или вкладыши могут дополнительно содержать машиночитаемый носитель, такой как печатная этикетка со штрих-кодом, диск, оптический диск, такой как CD- или DVD-ROM/RAM, DVD, MP3, магнитная лента или электрический носитель хранения, такой как RAM и ROM или их гибриды, такие как магнитные/оптические носители данных, FLASH-носители или карты памяти.

Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют такое же значение, которое обычно понятно специалисту в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Хотя в настоящем документе описаны подходящие способы и материалы, при практической реализации или тестировании настоящего изобретения можно использовать способы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным в настоящем документе.

Все патенты, патентные заявки, публикации и другие ссылки, цитаты GenBank и цитаты ATCC, приведенные в настоящем описании, включены посредством ссылки во всей своей полноте. В случае конфликта приоритет будет иметь настоящее описание, включающее определения.

Различные термины, относящиеся к биологическим молекулам изобретения, используются в настоящем описании выше, а также по всему описанию и формуле изобретения.

Все признаки, раскрытые в настоящем описании, можно комбинировать в любом сочетании. Каждый признак, раскрытый в описании, может быть заменен альтернативным признаком, служащим той же, эквивалентной или аналогичной цели. Таким образом, если явно не указано иное, раскрытые признаки (напр., варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующие FVIII, вектор, плазмида, экспрессионная/рекомбинантная векторная (напр., rAAV) последовательность или рекомбинантная вирусная частица) являются примером семейства эквивалентных или сходных признаков.

В рамках изобретения, единственные формы включают ссылки на множественные формы, если в контексте явно не указано иное. Так, например, ссылка на «нуклеиновую кислоту» включает в себя множество таких нуклеиновых кислот, ссылка на «вектор» включает в себя множество таких векторов, а ссылка на «вирус» или «частицу» включает в себя множество таких вирусов/частиц.

В рамках изобретения, все числовые значения или числовые диапазоны включают целые числа в пределах таких диапазонов и доли значений или целых чисел в пределах диапазонов, если в контексте явно не указано иное. Таким образом, для иллюстрации, ссылка на 80% или большую идентичность включает 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% и т.д., а также 81,1%, 81,2%, 81,3%, 81,4%, 81,5% и т.д., 82,1%, 82,2%, 82,3%, 82,4%, 82,5% и т. д. и т. п.

Ссылка на целое число с больше (более) или менее включает любое число больше или меньше чем ссылочное число, соответственно. Так, например, ссылка на менее 100 включает 99, 98, 97 и т. д. вплоть до числа один (1); а менее 10 включает 9, 8, 7 и т. д. вплоть до числа один (1).

В рамках изобретения все числовые значения или диапазоны включают в себя доли значений и целых чисел в пределах таких диапазонов и доли целых чисел в пределах таких диапазонов, если в контексте явно не указано иное. Таким образом, для иллюстрации, ссылка на числовой диапазон, такой как 1-10, включает в себя 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, а также 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5 и т.д. и т.п. Ссылка на диапазон, такой как 1-50, таким образом, включает 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 и т.д., вплоть до и включая 50, а также 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5 и т.д., 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, и т.д. и т.п.

Ссылка на множество диапазонов включает диапазоны, которые объединяют значения границ разных диапазонов внутри множества. Таким образом, для иллюстрации, ссылка на множество диапазонов, например, 1-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-75, 75-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-400, 400-500, 500-750, 750-850, включает диапазоны, составляющие 1-20, 1-30, 1-40, 1-50, 1-60, 10-30, 10-40, 10-50, 10-60, 10-70, 10-80, 20-40, 20-50, 20-60, 20-70, 20-80, 20-90, 50-75, 50-100, 50-150, 50-200, 50-250, 100-200, 100-250, 100-300, 100-350, 100-400, 100-500, 150-250, 150-300, 150-350, 150-400, 150-450, 150-500 и т.д.

Как правило, изобретение раскрыто в настоящем описании с применением утвердительного языка для описания многочисленных вариантов осуществления и аспектов. Изобретение также конкретно включает варианты осуществления, в которых конкретный объект исключен полностью или частично, например, вещества или материалы, этапы и условия способа, протоколы или процедуры. Например, в некоторых вариантах осуществления или аспектах изобретения исключены материалы и/или этапы способа. Таким образом, хотя изобретение в целом выражено в настоящем описании не в терминах, которые изобретение не включает, тем не менее в настоящем описании раскрыты аспекты, которые явно не исключены в изобретении.

Описан ряд вариантов осуществления изобретения. Тем не менее, специалист в данной области, не отступая от сущности и объема изобретения, может вносить различные изменения и модификации изобретения, чтобы адаптировать его к различным вариантам использования и условиям. Соответственно, следующие примеры предназначены для иллюстрации, но никоим образом не ограничивают объем заявленного изобретения.

ПРИМЕР 1

В настоящем описании раскрыты генные конструкты для использования в методах генной терапии для лечения гемофилии. Кроме того, эти генные конструкты, кодирующие фактор VIII (FVIII), могут быть полезны in vitro при наладке систем экспрессии белка для получения рекомбинантного белка FVIII для введения. Каждый генный конструкт необязательно может содержать один или более контролирующих экспрессию элементов (напр., промотор), ген фактора VIII и другие регуляторные признаки, необходимые для экспрессии гена, такие как интроны, ITR, стоп-кодоны, поли-А-сигналы и т.д.

ПРИМЕР 2

Последовательности ДНК с пониженным содержанием CpG, кодирующие фактор VIII, и некоторые векторные конструкты, плазмидные конструкты и клеточные линии, продуцирующие AAV вектор.

18 различных вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII (SEQ ID NO:1-18), получали и оценивали в анализах экспрессии. Конструкты кДНК с пониженным содержанием CpG, кодирующие человеческий FVIII, получали с помощью промотора мутантного транстиретина (TTRmut) (SEQ ID NO:22).

Экспрессионная кассета AAV-SPK-8011 имеет последовательность нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG FVIII-X07 и капсид LK03 для упаковки. Капсид LK03 по существу гомологичен AAV3, непатогенному, одноцепочечному ДНК-вирусу с дефицитом естественной репликации.

Упаковывающая плазмида pLK03 представляет собой плазмидный конструкт из 7484 пар нуклеотидных оснований, который переносит гены AAV2 Rep и AAV-LK03 Cap под контролем промотора AAV2 p5, репликации бактериального происхождения, и ген устойчивости к канамицину в бактериальных клетках. В этом конструкте промотор p5 rep был перемещен на 3'-конец гена cap, чтобы уменьшить возможность образования видов AAV дикого типа или псевдодикого типа и увеличить выход вектора.

Клонированная ДНК для переноса гена представляет собой кассету генной экспрессии, упакованную в капсид AAV-LK03 в виде одноцепочечного гена, кодирующего человеческий фактор свертывания крови VIII (hFVIII) под контролем печень-специфичного промотора. Экспрессионная плазмида называется pAAV-TTRmut-hFVIII-X07. Она была модифицирована путем введения 4 точечных мутаций в промотор TTR, и кодирующей области, оптимизированной для увеличения экспрессии человеческого FVIII. Экспрессионная AAV кассета содержит следующие элементы:

ITR AAV2

Промотор транстиретина (TTR): Печень-специфичный промотор транстиретина (TTR) с 4 точечными мутациями, которые повышают экспрессию гена по сравнению с промотором дикого типа (Costa et al. 1991)

Синтетический интрон: полученный из гена человеческого фактора элонгации EF-1 альфа

Последовательность, кодирующая FVIII: с удаленным B-доменом, кодон-оптимизированная последовательность, кодирующая человеческий FVIII.

Поли-А-сигнальная последовательность бета-глобина кролика (Levitt et al. 1989).

ITR AAV2

Три конструкта из ДНК плазмид используют для трансфекции клеток 293 почки эмбриона человека для выработки вектора SPK-8011 посредством процесса без участия вирусов-хелперов(Matsushitaetal.1998):

Генная кассета (последовательность, кодирующая hFVIII, и ассоциированные регуляторные элементы) клонируют в плазмиду, чтобы получить векторную плазмиду, pAAV-TTRmut-hFVIII-X07.

Геном AAV вируса(rep и cap) с отсутствующими вирусными ITR клонируют в плазмиду, чтобы получить плазмиду для упаковки AAV, pLK03, предоставляющую требуемые гены AAV2 rep и AAV-LK03 cap in trans для упаковки AAV вектора. Вирусный промотор (p5) для гена rep был перемещен в плазмиде, чтобы предотвратить образование репликационно-компетентного AAV путем негомологичной рекомбинации.

Три гена из аденовируса-2 клонировали в третью плазмиду (pCCVC-AD2HP), обеспечивая необходимые гены вируса-хелпера для получения вектора. Плазмида pCCVC-AD2HPv2 представляет собой плазмидный конструкт из 11832 пар нуклеотидных оснований, который переносит три аденовирусных гена, РНК E2A, E4 и VA, для предоставления «хелперных» функций, необходимых для репликации и инкапсидации AAV вектора. Плазмида pCCVC-AD2HPv2 является производным pCCVC-AD2HP, в которой рестрикционный фрагмент DrdI-DrdI из 1882 пар нуклеотидных оснований, содержащий ген Amp^R и часть последовательности pUC ori, был удален и заменен на фрагмент DrdI- DrdI из плазмиды pAAV2-hRPE65v2, содержащий целый ген Kan^R и часть последовательности pUC ori.

Клеточный субстрат, используемый для получения AAV вектора, является производным клеток первичных почек эмбриона человека (HEK) 293. Клеточная линия HEK293 представляет собой постоянную линию, трансформированную отрезанной ДНК аденовируса человека типа 5 (Ad5)(Grahametal.1977). Рабочий банк клеток происходит из главного банка клеток с охарактеризованными HEK293 из Центра клеточной и молекулярной терапии (CCMT) в Детской больнице Филадельфии (CHOP).

ПРИМЕР 3

Оценка AAV-hFVIII векторов на мышах.

Трансгенные конструкты FVIII (hFVIII) упаковали в аденоассоциированные вирусные (AAV) векторы и доставлены мышам. Кратко, в группах из 4 мышей с гемофилией A/CD4^-/-в возрасте 8-10 недель выполняли инъекции 4×10¹² вг/кг AAV-hFVIII векторов. Для количественного определения уровней FVIII в плазме использовали иммунодефицитных мышей, поскольку ингибирующие антитела к FVIII, которые вырабатываются у нормальных мышей, препятствуют долгосрочному анализу экспрессии FVIII.

Определяли уровни экспрессии FVIII, и в нескольких случаях они были выше, чем экспрессия, обеспечиваемая последовательностью CO3 (SEQ ID NO:21), кодирующей hFVIII. Как показано на Фигуре 2, векторы, содержащие AAV-SPK-8005, экспрессировали более высокие уровни hFVIII по сравнению с эталонным AAV-CO3-вектором. Неожиданно данные показали, что некоторые последовательности ДНК экспрессировали более высокие уровни FVIII, чем кодон-оптимизированная последовательность (CO3, SEQ ID NO:21), кодирующая FVIII.

В этом исследовании для обеспечения эффективной трансдукции (т.е. экспрессии трансгена hFVIII) гепатоцитов мыши использовали AAV-Spark8005 (также обозначенный SPK-8005), а не AAV-LK03-hFVIII (также обозначенный AAV-LK03-hFVIII и SPK-8011). Таким образом, это исследование предназначалось для оценки безопасности устойчивой экспрессии hFVIII, а не безопасности капсида AAV-LK03.

Выбрали три дозы используемой AAV-SPK-8005-hFVIII (4×10¹⁰, 8×10¹⁰, 1,6×10¹¹ вг/мышь; приблизительно 1,6×10¹², 3,2×10¹², 6,4×10¹² вг/кг, исходя из того, что масса мыши составляет 25 г) для получения уровней антигена hFVIII приблизительно 5-25, 25-75 и 50-150%, соответственно. Исследование задействовало 350 самцов мышей NOD/SCID (таблица 1) и было разделено на два субисследования: основное исследование (n=270) и биоаналитическое исследование (n=80). В основном исследовании 60 мышей обрабатывали либо наполнителем, либо одной из трех доз вектора (4×10¹⁰, 8×10¹⁰, 1,6×10¹¹ вг/мышь). Десять мышей использовали для оценки клинических химических веществ на день 29/30, 10 - для гематологии, и оставшимся 10 животным была проведена оценка свертываемости. Эти 30 мышей были умерщвлены на 29 или 30 день. Другую группу из 30 мышей, которые были обработаны либо наполнителем, либо одной из трех доз вектора, аналогично обрабатывали в момент времени 87 день, и их умерщвляли на 87 день. По завершении в основном исследовании проводили наблюдение за всеми животными на предмет грубой патологии, а 10 животным/когорта в момент времени выполнялась комплексное гистопатологическое исследование (гематологическое подмножество). Еще одну когорту из 30 ранее не подвергавшихся экспериментам мышей использовали для проведения контрольных клинико-патологических исследований на исходном уровне.

В биоаналитическом исследовании 20 мышам инъекционно вводили наполнитель или одну из трех доз вектора. Этих животных подвергали кровотечению перед инъекцией испытуемого продукта и серийно в дни 15, 30, 60 и 87. Предполагаемый объем плазмы, собранный для каждого образца, должен был быть достаточным для определения как уровня антигена hFVIII, так и уровня D-димера. Однако, вследствие недостаточного объема собранной плазмы, во все моменты времени, за исключением конечного момента времени, проводили только один анализ плазмы отдельных мышей. Таким образом, некоторых мышей оценивали на уровни циркулирующего антигена hFVIII, а других на уровни D-димера. Поскольку для выполнения ELISA hFVIII требуется больше плазмы (минимум 50 мкл), чем для ELISA D-димера (минимум 20 мкл), выбор анализа определялся объемом собранной плазмы.

Таблица 1: Дизайн исследования на мышах

Уровни антигена FVIII в плазме: Как показано на Фигурах 3A-3B, дозозависимый эффект наблюдался в циркулирующих уровнях антигена hFVIII в течение 87 дней. При малой дозе вектора (4×10¹⁰ вг/мышь) средние уровни hFVIII, составляющие 64+/-49 нг/мл, наблюдались на 60 день после инъекции, а при средних и высоких дозах наблюдались 115+/-60 нг/мл и 273+/58 нг/мл, соответственно. Эти уровни антигена представляют 43, 77 и 182% нормального антигена hFVIII (150 нг/мл эквивалентны 100%). Вследствие этого, у гемостатически нормальных мышей NOD/SCID при трех уровнях дозы можно было бы ожидать общие (мышиные+человеческие) уровни FVIII, составляющие 143%, 177% и 282%, соответственно. Таким образом, при использовании AAV-SPK-8005-hFVIII в плазме иммунодефицитных мышей наблюдались устойчивые и супрафизиологические уровни hFVIII, что сделало это исследование подходящим для оценки безопасности долговременной экспрессии hFVIII.

Уровни D-димера: Чтобы оценить возможности тромбообразования вследствие длительной экспрессии hFVIII у гемостатически нормальных, но иммунодефицитных мышей, измеряли уровни антигена D-димера. Средний уровень D-димеров до введения препарата среди 50 ранее не подвергавшихся экспериментам мышей составил 8,8+/-2,9 нг/мл. Данные на Фигуре 3C представляют средние уровни D-димера в четырех дозовых когортах. Не было статистического различия в уровнях D-димера между когортами во все пять моментов времени (однофакторный дисперсионный анализ p=0,46). Был сделан вывод, что уровень устойчивой экспрессии hFVIII составляет 194% от нормального (30 день) и в течение по меньшей мере 87 дней не связана с повышенным уровнем D-димеров в этом штамме мышей.

Клиническая и анатомическая патология: девять животных (6 основного исследования и 3 биоаналитического исследования) либо рано умертвили, либо обнаружили мертвыми во время хода исследования.

Провели гистопатологический анализ шести животных основного исследования, и у четырех из этих шести мышей обнаружили злокачественные лимфомы, включая одну мышь с инъецированным контролем в виде наполнителя. (Группа 1 животное 7729, Группа 3 животное 7871, Группа 3 животное 7880 и Группа 3 животное 7874). Биологическое значение неопластических находок считалось сомнительным. Статистическая значимость отдельных групповых сравнений с контрольной группой считалась маловероятной. Известно, что в этом штамме происходят высокая спонтанная частота лимфом тимуса, а также неопластическое увеличение селезенки и лимфатических узлов (Prochazka, Gaskins, Shultz, & Leiter, 1992).

У этих шести мышей не было находок, не являющихся неопластическими, связанных с тестируемым препаратом. Наблюдаемые микроскопические данные считались случайными и по своей природе обычно наблюдались в этом штамме и возрасте мышей и/или имели сходную частоту и тяжесть у контрольных и обработанных животных и поэтому считались не связанными с введением AAV-SPK-8005-hFVIII.

Оставшиеся 234 мыши, включенные в основное исследование, выжили до запланированных моментов времени. На протяжении всего исследования неблагоприятных или связанных с AAV-SPK-8005-hFVIII клинических наблюдений у мышей не возникло. Все клинические наблюдения в виде образования струпа, потери меха или тонкого покрова и изогнутого хвоста считались не связанными с введением AAV-SPK-8005-hFVIII, поскольку эти наблюдения являются общими для этого вида мышей и/или возникают во всех группах. Масса тела и увеличение массы тела были сопоставимы между группами доз и не зависели от введения AAV-SPK-8005-hFVIII. Очевидное значительное (p <0,05 или p <0,01) снижение в группе 4 средней массы тела с 32 дня до завершения исследования было связано с перераспределением массы в группе (некоторые более тяжелые животные были подвергнуты эвтаназии в группе 4 по сравнению с группой 1) после 29/30 дня и не было связано с введением AAV-SPK-8005-hFVIII. Мыши группы 4 набрали массу сопоставимым образом с другими группами на протяжении всего исследования. Все другие значимые (p <0,05 или p <0,01) различия в средних массах тела или прироста массы тела не считались связанными с AAV-SPK-8005-hFVIII, поскольку увеличение и уменьшение были единичными независимо от дозы и считались связанными с нормальными колебаниям массы тела мыши.

Клиническую патологию исследовали на животных основного исследования. Клинические химические параметры проанализировали у 10 мышей/когорта на момент времени (29/30 день и 87 день). Оценку свертываемости проводили в другой группе из 10 мышей/когорта, а гематологические измерения проводились в другой группе из 10 мышей/когорта. За всеми животными проводили наблюдение на предмет грубой патологии, а в группе из 10 мышей выполнялось патогистологическое исследование для гематологической оценки. В моменты времени либо на 29/30 день, либо на 87 день эвтаназии в гематологических или клинических химических параметрах у мышей не было изменений, связанных с AAV-SPK-8005-hFVIII. В целом, когда существовала значительная (p <0,05 или p <0,01) разница в гематологических или клинических химических параметрах по сравнению с контрольными значениями, различия не были связаны с AAV-SPK-8005-hFVIII, поскольку не были затронуты соответствующие параметры, и наблюдения не были дозозависимыми. Все изменения гематологических или клинических химических параметров были единичными, относились к одному животному, были такой величины изменений, которая обычно наблюдается у лабораторных животных и/или в пределах параметров клинической патологии, оцененных для ранее не участвовавших в экспериментах животных.

Изменения в параметрах свертываемости наблюдались у мышей, которым вводили AAV-SPK-8005-hFVIII. Дозозависимое снижение среднего aPTT наблюдалось в момент времени 29/30 дня, причем значения группы 3 и 4 значительно (p <0,05 или p <0,01) отличались от контрольных значений. Значительное (p <0,01) снижение средних значений aPTT наблюдалось также во всех группах AAV-SPK-8005-hFVIII по сравнению с контрольной группой в момент времени 87 дня. Уменьшение среднего протромбинового времени также наблюдалось в группах AAV-SPK-8005-hFVIII по сравнению с контрольной группой в 29/30 и 87 дни, однако снижение было статистически значимым (p <0,05 или p <0,01) для групп 2 и 3 на 29/30 день и 4 группы на 87 день. Средние значения фибриногена были сопоставимы между группами различных доза на всем протяжении исследования. Эти эффекты считаются связанными с фармакологическим эффектом AAV-SPK-8005-hFVIII и не считаются неблагоприятными. Как показано на Фигурах 3A-3C и обсуждалось выше, все мыши, которым инъецировали AAV-SPK-8005-hFVIII, экспрессировали антиген hFVIII и, таким образом, прогнозируют, что супрафизиологические уровни общего FVIII циркулируют в плазме этих гемостатически нормальных мышей. Ожидается, что эти уровни будут влиять на параметры свертываемости, такие как снижение aPTT и протромбиновое время.

Группу из 120 мышей основного исследования (30/когорта) умертвили на 29 или 30 день исследования. У этих мышей не наблюдалось грубой патологии, связанной с AAV-SPK-8005-hFVIII. Анализ массы органов показал, что абсолютные массы сердца и почек различались между 10 животными и контрольными и животными, инъецированными вектором, умерщвленными на 29 день; однако этого не наблюдалось между 10 контрольными животными и животными, инъецированными вектором, умерщвленными на 30 день, поэтому значение этого открытия неясно. Не было микроскопических сопоставлений со статистически значимым увеличением абсолютной массы сердца и почек (и этой массы в процентах от массы мозга), наблюдавшихся на 29 день. Кроме того, масса сердца и почек в процентах от массы тела существенно не отличалась от контрольных. Наблюдалось значительное увеличение средней абсолютной массы легкого у животных группы 2, но это считалось случайным и не связанным с AAV-SPK-8005-hFVIII, поскольку не было зависимости от дозы. Никаких других изменений массы тела в 29/30 день отмечено не было.

При патогистологическом анализе на 29/30 день было пять животных с неопластическими находками. Бронхиолоальвеолярная аденома наблюдалась у одного животного группы 2 (7824). Злокачественную лимфому наблюдали у одного животного группы 2 (7838), у одного животного из группы 3 (7885) и у одного животного из группы 4 (7941). Аденому наблюдали в желудке у одного животного группы 4 (7942). В первой группе неопластических находок не наблюдалось. Биологическая значимость неопластических находок считается сомнительной. Статистическая значимость отдельных групповых сравнений с контрольной группой маловероятна. Однако следует отметить, что неопластические находки наблюдались только у обработанных животных на 29/30 день. В отсутствие данных ретроспективного контроля для мышей NOD SCID в сопоставимом возрасте эти неопластические находки неубедительны.

Микроскопических находок, связанных с продуктом, не отмечено. Наблюдаемые микроскопические находки считались случайными, по своей природе обычно наблюдались в этом штамме и возрасте мышей, и/или имели сходную частоту и тяжесть у контрольных и обработанных животных и поэтому считались не связанными с введением AAV-SPK-8005 -hFVIII.

Другую группу из 120 мышей основного исследования (30/когорта) умертвили через 87 дней после инъекции и подвергли анализу аналогичным образом. Несмотря на то, что не наблюдалось грубой патологии, считающейся связанной с AAV-SPK-8005-hFVIII, поражения наблюдали у четырех мышей (один увеличенный тимус, не исследованный гистологически, один увеличенный тимус коррелировавший со злокачественной лимфомой, одна увеличенная селезенка, не исследованная гистологически, одно обесцвеченное яичко). В отличие от того, что наблюдалось на 29/30 день, наблюдалось уменьшение массы сердца, увеличение массы не наблюдалось. Кроме того, наблюдалось снижение массы печени. Статистически значимые изменения в массе сердца были небольшими и явно не связаными с дозой. Статистически значимое изменение абсолютной массы печени было небольшим, а соотношение массы печени к массе тела была сопоставима между группами. Поэтому небольшие изменения были интерпретированы как случайные и не связанные с введением AAV-SPK-8005-hFVIII. Никакие другие изменения веса тела на 87 день отмечены не были.

Патогистологический анализ, проведенный на мышах на 87 день после инъекции, выявил четырех животных с неопластическими находками. Злокачественную лимфому наблюдали у одного животного группы 2 (7808) и трех животных группы 3 (7868, 7869 и 7870). В 1 группе неопластических находок не наблюдалось. Статистическую значимость сравнений отдельных групп с контрольной группой считали сомнительной. Однако следует отметить, что неопластические находки наблюдались только у обработанных животных на 87 день. В отсутствие данных ретроспективного контроля для мышей NOD SCID в сопоставимом возрасте эти неопластические находки неубедительны.

В отношении изменений, не являющихся неопластическими, не было отмечено никаких микроскопических данных, связанных с тестируемым продуктом. Наблюдаемые микроскопические находки считались случайными, обычно наблюдаемыми в этом штамме и возрасте мышей, и/или имели сходную частоту и тяжесть у контрольных и обработанных животных и поэтому считались не связанными с введением AAV-SPK-8005 -hFVIII.

Заключение: Однократное введение AAV-SPK-8005-hFVIII в дозах, составивших 4×10¹⁰, 8×10¹⁰ или 1,6×10¹¹вг/мышь или контрольного изделия путем внутривенной инъекции самцам мышей NOD/SCID переносилось хорошо. AAV-SPK-8005-hFVIII не приводил к связанной с тестируемым продуктом смертности, неблагоприятным клиническим наблюдениям или изменениям в массе тела. Не было токсикологически важных различий в массе органов, гематологических параметрах или параметрах свертываемости, а также связанной с обработкой грубой патологии или патогистологических находок у самцов мышей на 29/30 дни или на 87 день. Уменьшение среднего aPTT и протромбинового времени, которое наблюдалось в оба момента времени эвтаназии, считались связанными с супрафизиологическими уровнями FVIII, которые экспрессировались у этих гемостатически нормальных мышей и не были неблагоприятными. В рамках основного исследования (окончательные оценки) злокачественные новообразования наблюдались у девяти из 60 мышей, инъецированных вектором, или у 15% животных. У семи из этих девяти мышей были лимфомы, которые чаще всего обнаруживались в лимфатических узлах. Известно, что этот иммунодефицитный штамм мышей обладает высокой спонтанной частотой лимфом (Prochazka et al., 1992) и продолжительностью жизни всего 8,5 месяцев. Таким образом, частота опухолей, наблюдаемых в этом исследовании, вряд ли связана с введением AAV-SPK-8005-hFVIII. Целью этого исследования было оценить безопасность устойчивой экспрессии hFVIII в течение приблизительно трех месяцев. Оно не был предназначено для оценки капсида AAV-SPK. Для обеспечения высокого уровня экспрессии hFVIII использовали AAV-SPK и штамм иммунодефицитных мышей. Введение AAV-SPK-8005-hFVIII мышам NOD/SCID привело к стойким и высоким уровням hFVIII. Таким образом, это исследование было подходящим для оценки безопасности долгосрочной экспрессии hFVIII.

ПРИМЕР 4

Оценка AAV-SPK-8005 и AAV-SPK-8011 (капсида LK03, FVIII-X07 (SEQ ID NO:7)) векторов у приматов, не являющихся людьми (NHP).

На основании результатов, полученных на мышах, трансгенные конструкты FVIII, упакованные в аденоассоциированные вирусные (AAV) векторы, доставляли приматам, не являющимся людьми (NHP).

Кратко, при исследовании с целью определения оптимальной дозы у самцов яванских макак проводили однократную внутривенную инфузию AAV-SPK-8005 или AAV-SPK-8011 (капсида LK03). Экспрессию hFVIII оценивали в течение 8 недель. Группы животных и уровни дозы для каждой из них показаны на Фигуре 4.

NHP получали внутривенную инфузию в подкожную вену с применением градуированного инфузионного насоса на протяжении приблизительно 30 минут. Предварительно макак подвергали скринингу на нейтрализующие антитела против капсида AAV. Первоначально у всех обработанных животных определяли наличие титра <1:3 перед введением вектора. Это было сделано для обеспечения успешной трансдукции печени, поскольку даже низкие титры ингибируют поглощение вектора клетками печени после системной доставки (Jiang et al., 2006). Все животные также были отрицательными на наличие нейтрализующих антител против FVIII до переноса гена.

Уровни hFVIII в плазме измеряли посредством специфического для человека ELISA, который не обнаруживает эндогенный FVIII макак. Все животные в исследовании, за исключением одной макаки в когорте средней дозы, экспрессировали hFVIII после доставки вектора. Уровень антигена человеческого фактора VIII достиг пика примерно через 1-2 недели после введения вектора. Через одну неделю после переноса гена NHP, трансдуцированные 2×10¹² вг/кг AAV-SPK-8005, экспрессировали уровни антигена hFVIII, составляющие 13,2±3% (средняя ± стандартная ошибка среднего). Через неделю после переноса гена средние уровни hFVIII у двух из трех животных в следующей когорте лечения (5×10¹² вг/кг) составили 27±0,2%. Человеческий FVIII не смогли обнаружить у третьей макаки в этой когорте в любой момент времени. При повторном тестировании образцов плазмы исходного уровня было установлено, что это животное было фактически положительным на наличие антител против AAV, и что изначально определенный титр <1:3 был неверным. Наконец, при самой высокой тестируемой дозе, составившей 1×10¹³ вг/кг, пиковые уровни антигена hFVIII, составившие 54,1±15,6%, наблюдали после инфузии AAV.

Как и ожидалось в исследованиях на NHP, экспрессирующих человеческий FIX, экспрессия человеческого FVIII снижалась примерно у одной трети животных в течение 4 недели, что сопровождалось появлением ингибирующих антител к hFVIII у этих 3 макак (помеченных символом ε на Фигуре 5). Развитие видоспецифичных антител к hFVIII ранее было зарегистрировано у приматов, не являющихся людьми и, вероятно, связано с различиями в нескольких аминокислотных остатках между человеческим трансгенным продуктом и эндогенным FVIII яванских макак (McIntosh, J. et al., Blood 121:3335-44 (2013)).

Для оценки возможного тромбообразования вследствие продолжительной экспрессии человеческого FVIII в этом исследовании были измерены уровни антигена D-димера. Следует отметить, что отчеты о клинической значимости или даже нормальных значениях уровней антигена D-димера у яванских макак скудны; в качестве эталонного нормальный диапазон для D-димеров у людей составляет ниже 500 нг/мл. Поскольку животные экспрессируют эндогенный FVIII яванских макак, выработка hFVIII в результате переноса печеночного гена приведет к супрафизиологическим уровням активности FVIII.

Животное, которому вводили дозу 5×10¹² вг/кг, но которое не экспрессировало человеческий FVIII, имело пик 863 нг/мл через две недели после инфузии AAV. Остальные животные не показали значительного увеличения уровней антигена D-димера по сравнению с исходными значениями. В совокупности эти результаты показывают, что экспрессия человеческого FVIII на уровнях, нацеленных в этом исследовании, не связана с повышенным риском тромбоза.

Через четыре недели после введения вектора не было очевидных изменений, связанных с векторами. Функциональные печеноченые тесты показали нормальные значения с незначительными колебаниями, которые, по-видимому, не были связаны с дозой вектора, поскольку в большинстве случаев они присутствовали до введения дозы (Фигура 6).

Уровни D-димера вплоть до 5 недели показаны на Фигуре 7. У одного животного в когорте с высокой дозой было небольшое (577 нг/мл) преходящее повышение уровня D-димера через одну неделю после введения вектора, когда циркулирующий человеческий FVIII достиг пика около 100%; после этого единственного измерения подъема уровни D-димера быстро возвратились к норме. Примечательно, что не было корреляции между уровнями D-димера и уровнями антигена hFVIII (Фигура 7, нижние панели).

Для вектора AAV-SPK-8011 (капсид LK03) три когорты яванских макак (n=3) обрабатывали повышающимися дозами AAV-SPK-8011 (капсида LK03) (2×10¹², 6×10¹² и 2×10¹³(вг/кг); Фигура 4). Животным проводили мониторинг на предмет клинических наблюдений, клинической патологии массы тела (клинический химический, гематологический, коагулографический анализ, анализ мочи). Кроме того, на протяжении всего исследования оценивали уровни антигена hFVIII, ингибирующих FVIII антител и уровни D-димера.

Данные антигена hFVIII показаны на Фигуре 9. Средние уровни антигена hFVIII достигли пика приблизительно через 2-3 недели с 22,3±6,2% hFVIII, наблюдаемых в когорте с малой дозой, и 61,6±15,7% и 153±58,1% наблюдаемых в когортах со средней и высокой дозой, соответственно, с применением 150 нг/мл в качестве 100% нормального уровня антигена hFVIII (Фигуры 9A-9D). Таким образом, серотип LK03 AAV капсида эффективно трансдуцирует гепатоциты NHP in vivo в отличие от мышиной печени.

Уровни экспрессии FVIII, достигнутые с использованием AAV-SPK-8011 (капсид LK03), сравнивали с описанными уровнями FVIII, полученными с помощью капсидов AAV5 и AAV8 на основе AAV векторов для доставки FVIII. Сравнительный анализ показал, что уровни FVIII, достигнутые с использованием AAV-SPK-8011 (капсид LK03), были выше, чем описанные уровни FVIII, доставленные с помощью AAV векторов с капсидами AAV5 и AAV8 (Фигура 10).

Гуморальный ответ на hFVIII в плазме яванских макак измеряли после введения либо 2×10¹², 6×10¹², либо 2×10¹³ вг/кг AAV-SPK-8011 (капсида LK03). Животных оценивали на антитела IgG против hFVIII с помощью ELISA в начале и в указанные моменты времени.

Несмотря на терапевтические уровни hFVIII, наблюдаемые вскоре после переноса генов, у большинства животных уровни начали снижаться примерно на 4 неделе. Это согласуется с предыдущими исследованиями с использованием другого вектора AAV-hFVIII и коррелирует с увеличением антител против hFVIII. Выработка антител против FVIII также наблюдалась другими после переноса печеночного гена AAV-hFVIII у NHP (McIntosh, J. et al., Blood 121:3335-44 (2013)).

ПРИМЕР 5

Биораспределение капсида AAV-LK03 у приматов, не являющихся людьми (NHP).

Биораспределение капсида AAV-LK03 у приматов, не являющихся людьми, оценивали в исследовании, не являющемся GLP. Внутривенное введение AAP-LK03-инкапсидированного вектора, кодирующего человеческий фактор IX свертывания крови (AAV-LK03-hFIX), показало, что двумя основными тканями-мишенями являются печень и селезенка (Фигура 11). Тропизм к селезенке не является уникальной характеристикой AAV-LK03. Например, капсид AAV5, который использовали в нескольких испытаниях генной терапии, направленной на печень (напр. NCT02396342, NCT02082860, NCT02576795) с показателями высокой безопасности, нацеливает селезенку с такой же, если не более высокой, эффективностью, чем он нацеливает печень приматов, не являющихся людьми (Paneda et al. 2013). Экспрессионная кассета SPK-8011 использует мышиный транстиретин или промотор TTR, который считается печень-специфичным (Costa, 1991). Для дополнительной поддержки печень-специфичной природы промотора анализ экспрессии на основе ПЦР измерял экспрессию полученного из вектора FVIII в печени и селезенке мышей после введения другого AAV вектора, упакованного в такую же экспрессионную кассету, как и SPK-8011 (т.е. AAV-SPK-8005). Как показано на Фигуре 12, экспрессия человеческого FVIII в селезенке на несколько порядков ниже, чем в гепатоцитах.

Это первое клиническое исследование для использования AAV-LK03, хотя и проводили исследования с использованием других AAV векторов, включая некоторые для гемофилии B (NCT02396342, NCT01620801 NCT00076557, NCT02484092, NCT02618915, NCT00979238, NCT01687608) и один для гемофилии A (NCT02576795). В исследовании, проведенном Детской исследовательской больницей Св. Иуды в сотрудничестве с университетским колледжем Лондона, использовался вектор AAV8, несущий самокомплементарный геном, кодирующий кодон-оптимизированную кДНК человеческого фактора IX, scAAV2/8-LP1-hFIXco. Десять субъектов, получивших вектор, имели стабильные уровни IX фактора, составившие 1-6% через медианную 3,2 года, и все участники либо прекратили, либо уменьшили использование профилактического заместительного фактора(Nathwanietal.2014). В клиническом исследовании при гемофилии A использовался вектор AAV5, кодирующий человеческий FVIII (NCT02576795). Предварительные данные, представленные в 2016 году, демонстрируют увеличение активности FVIII после переноса гена у нескольких субъектов, варьирующей от 2 до 60% с последующим наблюдением вплоть до 16 недель (BioMarin, April 2016).

ПРИМЕР 6

Эффективность трансдукции капсида AAV-LK03, проанализированная в условиях in vitro.

Первичные гепатоциты происхождения от яванских макак и от человека трансдуцировали вектором AAV-LK03, экспрессирующим люциферазу, с четырьмя различными множественностями заражения (MOI), варьирующими от 500 до 62500 векторных геномов на клетку. Через семьдесят два часа после трансдукции анализировали экспрессию люциферазы.

Капсид AAV-LK03 однозначно продемонстрировал значительно более высокую эффективность трансдукции человеческих гепатоцитов в культуре. В типичном примере, показанном на Фигуре 13, LK03 продемонстрировал примерно в 5 раз более высокую эффективность трансдукции гепатоцитов человека по сравнению с гепатоцитами приматов, не являющихся людьми, in vitro. Важно отметить, что эти результаты согласуются между несколькими MOI и исследованиями с повторяющимся дизайном.

ПРИМЕР 7

Оценка трансмиссии зародышевой линии кодируемых вектором последовательностей.

Оценка возможности трансмиссии зародышевой линии кодируемых вектором последовательностей является крайне важной для перехода к клиническому применению стратегий переноса генов. Это исследование было разработано со следующими целями: (1) оценить попадание AAV-SPK и AAV-LK03 в сперму и определить кинетику векторного клиренса; и (2) обеспечить, чтобы введение AAV кроликам было успешным, что было бы подтверждено анализом антигена человеческого фактора IX и антител против FIX в плазме.

В этом исследовании использовали кроличью модель для анализа попадания в сперму вектора из двух векторных капсидов, а именно AAV-SPK и AAV-LK03 (Таблица 2). Попадание AAV-SPK в сперму показало как зависимую от дозы, так и зависимую от времени кинетику, причем более высокая доза показала повышенные уровни векторных последовательностей в сперме в течение более длительного времени. Кинетика была очень похожа на кинетику, которую наблюдали ранее с векторами AAV8 (Favaro P, et al., Molecular Therapy 17:1022-1030 (2009)). Напротив, ограниченное попадание в сперму происходило с вектором AAV-LK03. Это маловероятно вследствие более низкого общего воздействия вектора на мышей, инъецированных AAV-LK03, так как уровни hFIX, экспрессируемые из AAV-LK03, были сходны или выше, чем наблюдаемые с AAV-SPK-вектором, и способность опосредовать экспрессию полученного из печени hFIX может использоваться как суррогат для переноса генов.

Таблица 2: Дизайн исследования

* В когортах AAV-SPK использовали две различные последовательности, кодирующие hFIX, т. е. три животных получали AAV-SPK-hFIX.C16, и два животных были обработаны AAV-SPK-hFIX.C19-Padua (PD). Поскольку основная цель этого исследования заключалась в оценке передачи зародышевой линии двух новых AAV капсидов, это считалось приемлемым. Основными отличиями между трансгенами hFIX.C16 и hFIX.C19-Padua являются то, что последний является кодон-оптимизированным и вариант hFIX с высокой специфической активностью.

Способы

Животные и векторы: Новозеландских белых кроликов получили из Covance Research Products (Денвер, штат Пенсильвания) и обрабатывали в возрасте 6 месяцев AAV векторами, произведенными в Детской больнице Philadelphia Vector Core. Тестируемые и контрольные продукты вводили через краевую ушную вену.

Сбор спермы: для сбора спермы использовалось искусственное влагалище (AV), разработанное исследователями Argus Research Lab, Inc. (Horsham, PA). В AV поместили презерватив, у которого удалили наконечник, и присоединили пробирку для сбора образцов, а AV заполнили теплой водой (55°C). Образцы спермы получали от матерого кролика-самца, стимулированного самкой животного-раздражителя. Образцы собирали перед инъекцией и через 1, 2, 4, 6, 8 и 10 недель и 3-8 месяцев после инъекции. Образцы спермы отправляли в Charles River Laboratories (Reno, NV) для анализа количества копий вектора с использованием проверенного количественного ПЦР-анализа в реальном времени.

Сбор образцов крови: Кровь собирали посредством пункции медиальной ушной артерии или краевой ушной вены перед введением AAV и в несколько моментов времени (до, через 1 неделю и 1-6 месяцев после инъекции). После сбора каждый образец помещали на лед, обрабатывали с получением плазмы и хранили в морозильнике при -80°C до момента отправки спонсору клинического исследования, где он также содержался в морозильнике при -80°C до тех пор, пока не будет проведен анализ.

Уровни человеческого фактора IX: Уровни белка человеческого FIX (hFIXв плазме кроликов измеряли количественно с использованием сэндвич-анализа FIX ELISA kit (Affinity Biologicals, FIX:EIA) определяли следующим образом: во-первых, лунки микротитровального планшета покрыли захватывающим антителом, которое распознает hFIX и которое не реагирует перекрестно с эндогенным кроличьим FIX (разведение 1:1000). Эталонную плазму с известной концентрацией человеческого hFIX разбавляли для получения стандартной кривой (самый высокий стандарт [500 нг/мл] серийно разводили до 7,8 нг/мл). Образцы плазмы разводили в зависимости от ожидаемой концентрации, чтобы значения поглощения попали в пределы стандартной кривой. После добавления образцов в лунки планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 90 минут и затем промывали три раза. В планшет добавляли конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) вторичное антитело к hFIX для связывания с захватывающим FIX (разведение 1:100). После промывания планшета для удаления несвязанного конъюгированного антитела активность пероксидазы измеряли после инкубации с 1-Step Ultra TMB Substrate (Thermo Scientific, номер по каталогу 34028). Реакцию останавливали 1 М серной кислотой и считывали на считывателе микропланшетов SpectraMax M2e при значении оптической плотности 450 нм. Полученное значение поглощения пропорционально концентрации hFIX, присутствующей в образце.

Уровни антител против hFIX: Анализ анти-hFIX концептуально и методологически подобен описанному выше ELISA hFIX. Кратко, планшеты покрывали 1 мкг/мл рекомбинантного hFIX (Benefix, Wyeth). После инкубации образцов плазмы для обнаружения использовали козьи противокроличьи антитела IgG против HRP-конъюгированного антитела (SIGMA, A4914). Образцы с уровнем IgG в два раза выше, чем исходные показатели, считались положительными.

Результаты

Попадание вектора в сперму

Новозеландским кроликам инъецировали векторы AAV-SPK или AAV-LK03 (n=5 на группу), экспрессирующие hFIX под контролем печень-специфического промотора ApoE/hAAT в двух дозах: 1×10¹² вг/кг (малая доза) или 1×10¹³ вг/кг (высокая доза). Образцы спермы от всех кроликов были получены до инъекции и через 1, 2, 4, 6, 8 и 10 недель и 3-8 месяцев после инъекции. Из образцов спермы выделили геномную ДНК и анализировали на наличие последовательностей hFIX с применением анализа количественной полимеразной цепной реакции (кПЦР). Валидированный анализ был разработан Charles River Laboratories (Reno, NV). Образцы спермы считали позитивными, если в них определяли уровни hFIX выше нижнего предела количественного определения (LLOQ) (10 копий/реакция или 50 копий/мкг при приблизительно 200 нг/реакция). Образцы спермы от кроликов, которые были негативными по последовательностям вектора hFIX по меньшей мере в течение трех последовательных моментов времени, в дальнейшем не анализировали.

ДНК предварительно обработанной спермы от всех животных, инъецированных вектором и наполнителем, была отрицательной на последовательности hFIX. Сперма от кроликов, инъецированных малой дозой AAV-SPK-hFIX (1×10¹² вг/кг) в целом была негативной на последовательности hFIX, за исключением трех животных, у которых были низкие уровни на 1-4 неделях (максимально 3151 копий/мкг ДНК или ~ 1×10^-2 копий/гаплоидный геном). Ни один из образцов, собранных не на 4 неделе, не был положительным на векторные последовательности (Таблица 3). При высокой дозе AAV-SPK-hFIX (1×10¹³ вг/кг) присутствовали более высокие уровни вектора (максимум 178 352 копий/мкг ДНК или 0,59 копий/гаплоидный геном), и потребовалось больше времени для очистки вплоть до 5 месяца у пяти животных (Таблица 3). За исключением одного животного (1 неделя), кролики, обработанные малой дозой AAV-LK03-hFIX, не показали попадания последовательностей hFIX в сперму (Таблица 3). Кроме того, очень небольшое попапдание вектора в сперму наблюдалось при десятикратно более высокой дозе, причем у трех животных не было никаких последовательностей hFIX во все моменты времени, а у двух животных были низкие уровни на 2 неделе (максимально: 392 копий/мкг ДНК или 1,3×10^-3 копий/гаплоидный геном), но не в более поздние моменты времени (Таблица 3). Среди двух животных, инъецированных наполнителем, у одного был ложный результат на 1 неделе (56 копий/мкг ДНК) и на 5 месяц (96 копий/мкг ДНК). Эти значения близки к LLOQ и, скорее всего, представляют собой контаминацию на стадии сбора спермы или стадии получения ДНК.

Таблица 3: Выявление последовательностей ДНК hFIX в сперме кроликов после введения AAV-SPK и AAV-LK03 в виде функции времени.

Количество животных из 5 с положительными образцами спермы.

W=неделя; M=месяц; Ndt=не определяли

Уровни человеческого FIX антигена в плазме

Циркулирующие уровни hFIX измеряли в образцах плазмы у животных, описанных выше в указанные моменты времени (Фигуры 14A-14B и Таблица 4).

Таблица 4: уровни экспрессии человеческого FIX (нг/мл) после введения вектора

ND=Не определено

В когортах малых доз AAV-LK03 вектор оказался более мощным вектором по сравнению с AAV-SPK, как измерено уровнями циркулирующего hFIX. Через шесть месяцев после обработки AAV-LK03 или AAV-SPK средние уровни hFIX составляли 552±217 нг/мл против 164±45 нг/мл, соответственно (Фигура 14A). Однако эта разница не достигла статистической значимости, вероятно, из-за ограниченного числа животных. Интересно, что через семь дней после введения вектора AAV-SPK экспрессия hFIX не была обнаружена, тогда как в тот же момент времени наблюдали стойкую экспрессию, полученную из AAV-LK03. Низкие уровни hFIX у двух животных (кролики #5 и #15), едва определяемые выше исходного, могут быть связаны с неудачно выполненными инъекциями. Устранение этих животных из анализа не изменило отсутствие статистической значимости.

Эти два капсида оказались одинаково мощными при тестировании в высоких дозах. В частности, через шесть месяцев после обработки 1×10¹³ вг/кг AAV-LK03 или AAV-SPK средние уровни hFIX составили 2226±868 нг/мл против 2052±909 нг/мл, соответственно (Фигура 14B). Примечательно, что две последовательности, кодирующие hFIX, использовались в группе AAV-SPK, т. е. трое животных получали AAV-SPK-hFIX.C16, а двух животных обрабатывали AAV-SPK-hFIX.C19-Padua (PD). Основные различия между трансгенами hFIX.C16 и hFIX.C19-PD заключаются в том, что последний является кодон-оптимизированным и кодирует вариант hFIX с высокой специфической активностью, который влияет на биологическую активность белка, но не на уровни антигена, как измерено с помощью ELISA.

Антитела против FIX

Исходя из сообщений других авторов, предполагалось, что примерно у 20-40% животных будут вырабатываться антитела против человеческих векторов FIX. (Favaro P, et al., Molecular Therapy 17:1022-1030 (2009)). Фигуры 15A-15B и Таблицы 5A и 5B обобщили уровни IgG против AAV в этом исследовании. Интересно, что три из пяти животных, получавших низкую дозу AAV-LK03, были положительными на антитела к человеческому FIX через один месяц после введения вектора, но уровни IgG со временем снижались, и только у одного животного были почти в два раза выше исходных уровней в конце исследования (Таблица 5B). Кинетика появления анти-FIX IgG и невыраженного клиренса в этой группе кроликов хорошо коррелирует с резким снижением уровней hFIX, наблюдаемых на 28 день, после чего последовал «рикошет» циркулирующего hFIX (Фигура 14A). Кроме того, высокие титры антител против hFIX у двух животных, получавших AAV-SPK-hFIX.C19-Padua, могут объяснить низкие уровни экспрессии у этих двух кроликов.

Таблица 5A: Краткий обзор образования антител (IgG, нг/мл) к человеческому FIX у отдельных кроликов, инъецированных AAV

N/A, не установлено

Таблица 5B: количество кроликов на группу, положительных на анти-hFIX антитела с течением времени

Заключение

Попадание векторов AAV-SPK и AAV-LK03 в сперму количественно определяли с использованием валидированного анализа в течение курса до восьми месяцев. Последовательность векторов AAV-SPK была обнаружена в сперме всех пяти кроликов через неделю после введения высокой дозы вектора. Большинство животных очистились от последовательностей на 10 неделе, а последний обнаруженный положительный образец имел место на 5 месяце. Это аналогично динамике во времени вектора AAV8, вводимого кроликам в тех же дозах вектора (Favaro P, et al., Molecular Therapy 17:1022-1030 (2009)). Напротив, очень ограниченное попадание AAV-LK03 наблюдалось после высокой дозы этого вектора, причем три из пяти животных продемонстрировали отсутствие векторных последовательностей в сперме в любой момент времени. Более низкое попадание вектора в сперму было маловероятным вследствие меньшего общего воздействия AAV-LK03 на кроликов. Подтверждение того, что кроликов успешно инъецировали каждым AAV вектором, было продемонстрировано путем измерения уровней hFIX в плазме, суррогата для переноса генов. При высокой дозе в этом исследовании (1×10¹³ вг/кг) аналогичные уровни циркулирующего hFIX наблюдались у животных, инъецированных AAV-LK03 и AAV-SPK, демонстрируя, что векторы одинаково эффективны при опосредовании переноса печеночного гена.

В соответствии с исследованиями, оценивающими передачу зародышевой линии векторов AAV2 и AAV8, экспрессирующих трансген hFIX, у некоторых из животных вырабатывались антитела против hFIX, вероятно, вследствие различий в аминокислотах между кроличьим и человеческим фактором IX.

Эти результаты добавляются к имеющемуся на настоящий момент объему данных о возможности передачи зародышевой линии AAV векторов. AAV-SPK имеет структуру, аналогичную ранее исследованным серотипам, векторов AAV2 и AAV8 (Favaro P, et al., Molecular Therapy 17:1022-1030 (2009)). То есть существует дозозависимое попадание AAV векторных последовательностей в сперму с полным клиренсом с течением времени. Однако AAV-LK03 отличается от AAV2, AAV8 и AAV-SPK тем, что очень маленький вектор попадает в сперму, что потенциально делает этот векторный капсид более безопасным, чем другие, с точки зрения генотоксичности.

ПРИМЕР 8

Клиническое исследование необходимо провести для определения безопасности и кинетики однократной в/в инфузии AAV-FVIII. В доклинических исследованиях будет показано, что AAV капсид, который будет использоваться для AAV вектора, имеет хорошую безопасность и эффективность, способность достигать клинически значимых уровней активности FVIII в дозе, составляющей приблизительно 1×10¹² вг/кг или более, необязательно после 1-3 месяцев после инфузии вектора; и что перекрестно реагирующие нейтрализующие антитела (Ab) на капсид AAV приблизительно на 10% менее распространены, чем AAV8. Дизайн репрезентативного клинического исследования может быть таким, как показано в Таблице 6.

Таблица 6: Дизайн клинического исследования AAV-FVIII

ПРИМЕР 9

Промотор TTR

Характеристика промотора транстиретина (ТТР) была первоначально описана у Costa и Grayson 1991, Nucleic Acids Research 19 (15):4139-4145. Последовательность промотора TTR представляла собой модифицированную последовательность, от TATTTGTGTAG до TATTGACTTAG.

Промотор TTR с 4 нуклеотидными мутациями (TTRmut), SEQ ID NO:22

GTCTGTCTGCACATTTCGTAGAGCGAGTGTTCCGATACTCTAATCTCCCTAGGCAAGGTTCATATTGACTTAGGTTACTTATTCTCCTTTTGTTGACTAAGTCAATAATCAGAATCAGCAGGTTTGGAGTCAGCTTGGCAGGGATCAGCAGCCTGGGTTGGAAGGAGGGGGTATAAAAGCCCCTTCACCAGGAGAAGCCGTCACACAGATCCACAAGCTCCT

ПРИМЕР 10

Трансгенные конструкты с пониженным содержанием CpG, кодирующие FVIII, и иллюстративные AAV капсиды.

Вариант X01 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII (SEQ ID NO:1)

atgcagattg agctgtctac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttccc cccagggtgc ccaagagctt ccccttcaat

acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgatcatct gttcaacatt

gctaaaccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccta ccatccaggc tgaggtgtat

gacactgtgg tgatcactct gaagaacatg gctagccatc ctgtgtctct gcatgctgtg

ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgatcagac tagccagagg

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggctctcaca cctatgtctg gcaggtgctg

aaggagaatg gccccatggc ctctgatcct ctgtgtctga cctatagcta cctgagccat

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgtagggag

gggagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcattctgct gtttgctgtg

tttgatgagg gcaagagctg gcattctgaa accaagaaca gcctgatgca ggacagggat

gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt caataggtct

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc

accacccctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca ccttcctggt gaggaatcac

agacaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg

gacctgggcc agtttctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag

gcctatgtga aggtggactc ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaataatgag

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gagatttgat

gatgacaatt ctcccagctt cattcagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc

cctgatgaca ggagctataa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg

aagtataaga aggtgaggtt catggcctat actgatgaaa ccttcaagac cagagaggcc

atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccctca tggcatcact

gatgtgaggc ctctgtacag cagaaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggacttc

cccattctgc ctggggagat tttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggccca

accaagtctg accctaggtg cctgactagg tactacagca gctttgtgaa tatggagagg

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag

aacaggagct ggtacctgac tgagaacatt cagaggtttc tgcccaaccc tgctggggtg

cagctggagg accctgaatt ccaggcctct aacatcatgc acagcattaa tggctatgtg

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta cattctgagc

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt taagcacaag

atggtgtatg aggataccct gaccctgttt cctttctctg gggagactgt gttcatgagc

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggg

atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac

agctatgagg acatctctgc ctatctgctg agcaagaata atgctattga gcccaggagc

ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag aactactctg

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag

gattttgata tttatgatga ggatgaaaac cagagcccca ggagctttca gaagaagact

aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc ttctagcccc

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc

caggagttca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac

ctggggctgc tgggccctta tatcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc

aggaaccagg ccagcaggcc ctacagcttc tactctagcc tgatcagcta tgaggaggac

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacttat

ttctggaagg tgcagcacca tatggccccc accaaggatg agtttgattg caaagcctgg

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg

ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg

gagaggaact gcagggcccc ctgcaatatc cagatggagg accccacctt taaggaaaat

tataggtttc atgccattaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggca gcaatgagaa cattcacagc

atccacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg

tataatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg

gtgtattcta acaagtgtca gacccccctg ggcatggcct ctggccatat cagggacttc

cagatcactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcattac

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagccattca gctggattaa ggtggacctg

ctggctccaa tgattatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gtttagcagc

ctgtacatct ctcagtttat catcatgtac tctctggatg gcaaaaagtg gcagacctac

aggggcaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc

aagcacaaca tctttaaccc ccctatcatt gccaggtaca ttaggctgca ccccacccat

tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgcagc

atgcccctgg gcatggagag caaggctatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac

ttcaccaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gactagcatg

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc atcagtggac cctgttcttc

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac

agcctggacc cccccctgct gaccagatac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggg tgtgaggccc aggacctgta ctga

Вариант X02 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:2)

atgcagattg agctgtctac ctgctttttc ctgtgtctgc tgaggttctg cttctctgcc

actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgatctg

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ccaagtcttt ccccttcaat

acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttta ctgatcacct gttcaacatt

gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat

gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gcctctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg

gagaaggagg atgataaggt gttccctggg gggagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg

aaggagaatg gcccaatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctattctta cctgagccat

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag

ggctctctgg ctaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg

tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat

gctgcctctg ccagggcctg gcccaaaatg cacactgtga atggctatgt gaataggagc

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tggcatgggc

accacccctg aggtgcactc tatcttcctg gagggccata ctttcctggt gaggaatcat

aggcaggcca gcctggagat tagccccatt acctttctga ctgcccagac cctgctgatg

gacctgggcc agttcctgct gttttgccac atcagctctc accagcatga tggcatggag

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaaa tggatgtggt gaggtttgat

gatgacaata gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcctaagacc

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgctcccct ggtgctggcc

cctgatgaca ggtcttacaa gagccagtac ctgaacaatg gcccccagag aattgggagg

aagtataaga aggtgagatt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc

atccagcatg agtctggcat tctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg

ctgatcatct tcaagaacca ggcctctagg ccctacaata tttaccccca tgggatcact

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcatct gaaggacttc

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga agatggcccc

accaagtctg accctaggtg cctgaccagg tactactctt cttttgtgaa catggagagg

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag

agggggaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag

aacaggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg

cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg

tttgattctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc

attggggctc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt taagcataag

atggtgtatg aggacactct gaccctgttt cccttctctg gggagactgt gtttatgagc

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaacaggggc

atgactgctc tgctgaaggt gtcttcttgt gacaagaaca ctggggacta ttatgaggac

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccagatct

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gaccaccctg

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag

gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagtctccca ggagcttcca gaaaaagacc

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc ttctagcccc

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc

caggagttca ctgatgggag cttcacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgagcac

ctggggctgc tgggccctta tattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgactttc

aggaatcagg cctctaggcc ctatagcttc tacagctctc tgatcagcta tgaggaggat

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac

ttctggaagg tgcagcacca catggctcct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg

gcctactttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg

ctggtgtgtc ataccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtactttac tgagaacatg

gagaggaatt gcagagcccc ttgcaacatc cagatggagg acccaacctt caaagagaac

tacaggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct

caggaccaga ggatcaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa tatccatagc

attcacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg

tataacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgccaagcaa ggctgggatt

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg

gtgtactcca ataagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc

cagatcactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccaa agctggccag gctgcactat

tctgggagca tcaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggattaa ggtggatctg

ctggccccca tgatcattca tggcatcaaa acccaggggg ctagacagaa gttttctagc

ctgtacatca gccagttcat catcatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacttac

aggggcaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggca atgtggacag ctctggcatc

aagcacaaca tctttaaccc ccccattatt gccaggtata tcaggctgca tcccacccac

tattctatta ggtctactct gagaatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgtagc

atgcccctgg ggatggagag caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttat

ttcaccaata tgtttgccac ctggtctccc tctaaggcca ggctgcacct gcagggcagg

agcaatgctt ggaggcccca ggtgaataac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag

aagaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gactagcatg

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatgggc atcagtggac tctgttcttc

cagaatggca aggtgaaggt cttccagggg aaccaggata gcttcactcc tgtggtgaac

tctctggacc cccccctgct gactaggtat ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga

Вариант X03 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:3)

atgcagattg aactgtctac ttgtttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgct

actaggaggt actatctggg ggctgtggag ctgtcttggg actatatgca gtctgacctg

ggggagctgc ctgtggatgc taggtttccc cccagggtgc ccaagagctt cccctttaac

acctctgtgg tgtataagaa gactctgttt gtggagttca ctgaccatct gttcaacatt

gccaagccaa ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat

gacactgtgg tgattactct gaagaacatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg

ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac ctctcagagg

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggctctcata cctatgtgtg gcaggtcctg

aaggagaatg ggcccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctactctta tctgtctcat

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag

ggcagcctgg ctaaggagaa gacccagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat

gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacaggagc

ctgccaggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tgggatgggg

actacccctg aggtccacag cattttcctg gaggggcata cctttctggt gaggaaccac

aggcaggcct ctctggagat ctctcccatt actttcctga ctgcccagac cctgctgatg

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa aaacaatgag

gaggctgagg attatgatga tgacctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat

gatgataaca gccccagctt catccagatt aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgctcctct ggtgctggcc

cctgatgaca ggagctacaa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattggcagg

aagtataaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc

atccagcatg aatctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg

ctgattatct ttaagaacca ggctagcagg ccctacaaca tttaccccca tggcattact

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggatttc

cccattctgc ctggggagat ctttaagtac aaatggactg tgactgtgga ggatggccct

actaagtctg atcccaggtg tctgaccaga tactacagca gctttgtgaa tatggagagg

gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag

aggggcaatc agattatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag

aacagaagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg

cagctggagg accctgagtt ccaggctagc aatatcatgc acagcattaa tggctatgtg

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta cattctgagc

attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt caagcacaag

atggtgtatg aggatactct gaccctgttt cccttctctg gggagactgt gttcatgagc

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgtcacaact ctgacttcag gaacaggggc

atgactgccc tgctgaaggt gagctcttgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac

tcttatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccaggagc

ttctctcaga atccccctgt gctgaagagg catcagaggg agatcactag gactaccctg

cagtctgacc aggaagagat tgactatgat gacaccatct ctgtggaaat gaagaaggag

gactttgata tctatgatga ggatgaaaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc

aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgag ctcttctccc

catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtcccac agttcaagaa ggtggtgttt

caggagttca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcat

ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataacattat ggtgactttc

aggaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacctat

ttctggaagg tgcagcatca catggctccc actaaagatg agtttgactg caaggcctgg

gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccctctg

ctggtctgcc atactaacac cctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt tctttaccat ctttgatgag accaagtctt ggtacttcac tgagaacatg

gagaggaact gcagggcccc ctgtaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac

tacaggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggct ctaatgagaa cattcattct

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg

tacaatctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa ggctggcatc

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg

gtctatagca ataagtgcca gacccccctg gggatggcct ctgggcatat cagagacttc

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac

tctggcagca ttaatgcctg gagcaccaag gagcccttct cttggatcaa ggtggacctg

ctggctccca tgatcatcca tgggatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc

ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac

aggggcaata gcactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctggcatc

aagcacaata tcttcaaccc ccccatcatt gccaggtaca tcagactgca ccccactcat

tacagcatca ggagcactct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa tagctgctct

atgcccctgg gcatggagag caaggccatt tctgatgccc agattactgc ctcttcttac

ttcactaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcatct gcaggggagg

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag

aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatgggc accagtggac cctgtttttc

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggaca gctttactcc tgtggtgaac

agcctggacc cccccctgct gactaggtac ctgaggattc acccccagag ctgggtgcac

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga

Вариант X04 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII (SEQ ID NO:4)

atgcagattg agctgtctac ctgcttcttt ctgtgcctgc tgaggttctg tttctctgcc

actaggaggt attatctggg ggctgtggag ctgtcctggg actacatgca gtctgatctg

ggggagctgc ctgtggatgc caggttccct cccagggtgc ccaagtcttt ccctttcaat

acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgatcacct gtttaacatt

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat

gacactgtgg tgattactct gaagaatatg gcttctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg

aaggagaatg gcccaatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta tctgagccat

gtggatctgg tgaaggatct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag

ggctctctgg ccaaggagaa gactcagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat

gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaataggagc

ctgcctgggc tgattgggtg tcacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc

accactcctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca cttttctggt gaggaatcac

aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg

gatctgggcc agttcctgct gttttgccat atcagcagcc atcagcatga tgggatggag

gcttatgtga aggtggactc ttgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaataatgaa

gaggctgagg actatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat

gatgacaaca gccccagctt tatccagatt aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc

tgggtgcatt acattgctgc tgaggaagag gattgggact atgcccccct ggtgctggcc

cctgatgaca ggagctacaa gtctcagtac ctgaacaatg gccctcagag gattggcagg

aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc

attcagcatg aatctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg

ctgattattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tttatcctca tggcattact

gatgtgagac ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc

actaagtctg accccaggtg cctgactagg tactactcca gctttgtgaa catggagagg

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagaga aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag

aataggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcctaatcc tgctggggtg

cagctggagg atcctgagtt ccaggcctct aacattatgc acagcatcaa tgggtatgtg

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc

attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt taagcataag

atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc

atggagaacc caggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaataggggc

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaaca ctggggacta ttatgaggat

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc

ttcagccaga atcctcctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag

gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagagcccca ggagcttcca gaagaagact

agacactact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctcttctccc

catgtgctga gaaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtcttc

caggagttca ctgatggctc tttcacccag cctctgtata gaggggagct gaatgagcac

ctgggcctgc tgggccctta catcagggct gaggtggagg acaatatcat ggtgaccttc

aggaaccagg ctagcaggcc ctactctttc tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaat tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac

ttctggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgactg caaggcctgg

gcctactttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctggcctgat tggccccctg

ctggtctgcc acaccaatac tctgaaccct gctcatggga gacaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagtcct ggtactttac tgagaacatg

gagaggaatt gcagggcccc ttgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggaaaat

tataggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc

caggaccaga ggatcaggtg gtatctgctg tctatgggct ctaatgagaa catccacagc

atccatttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggctctg

tacaacctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatt

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg

gtgtactcta acaagtgcca gaccccactg ggcatggctt ctggccacat cagggatttc

cagattactg cctctggcca gtatggccag tgggctccca agctggctag gctgcactac

tctgggagca tcaatgcctg gtctactaag gagcctttct cttggatcaa agtggacctg

ctggccccta tgatcatcca tgggatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttcagcagc

ctgtacatct ctcagttcat cattatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac

aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctgggatt

aagcacaaca tctttaaccc ccccatcatt gccaggtata tcaggctgca ccctacccac

tacagcatta ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgcagc

atgcccctgg ggatggagag caaggccatt tctgatgctc agatcactgc ttctagctac

ttcactaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcta gactgcacct gcaggggagg

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaataat cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag

aaaaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatgggc atcagtggac cctgttcttt

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac

agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga

Вариант X05 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII (SEQ ID NO:5)

atgcagattg agctgtctac ttgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc

actaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaac

acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgatcatct gttcaacatt

gccaagccca ggcctccttg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat

gacactgtgg tgattaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg

ggggtgagct attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac tagccagagg

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg gggagccata cctatgtgtg gcaggtgctg

aaggagaatg gccccatggc ctctgaccct ctgtgcctga cttatagcta cctgagccat

gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag

ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg

tttgatgagg ggaagtcctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggatagggat

gctgcttctg ccagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaataggagc

ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc

accacccctg aggtgcactc tattttcctg gagggccata ctttcctggt gaggaaccat

aggcaggcca gcctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac tctgctgatg

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tggcatggag

gcttatgtga aggtggacag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaataatgag

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat

gatgacaact ctccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgcccccct ggtgctggcc

ccagatgaca ggagctacaa gtcccagtac ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg

aagtacaaga aggtgaggtt catggcttat actgatgaga ctttcaagac cagggaggcc

atccagcatg agtctggcat cctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg

ctgattatct tcaagaacca ggcttctagg ccctacaata tctaccctca tggcatcact

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggatttc

cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc

actaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa catggagagg

gatctggctt ctgggctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag

aataggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg

cagctggagg atcctgagtt tcaggcctct aatatcatgc acagcatcaa tggctatgtg

tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta catcctgagc

attggggccc agactgactt tctgtctgtg tttttttctg gctacacctt caagcacaag

atggtgtatg aggatactct gactctgttc cctttttctg gggagactgt gttcatgtct

atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaacagaggc

atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac

tcttatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccagaagc

ttttctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gatactattt ctgtggagat gaagaaggag

gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggtctttcca gaagaagact

aggcactact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgtc tagctctcct

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agtttaaaaa ggtggtgttc

caggaattca ctgatggcag ctttacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgagcac

ctggggctgc tggggcctta cattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc

aggaatcagg ccagcaggcc ctactctttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggac

cagaggcagg gggctgaacc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac

ttctggaagg tgcagcacca catggctccc accaaggatg agtttgattg caaggcctgg

gcttacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg

ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca gacaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg

gagaggaatt gcagggcccc ttgcaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac

tacaggtttc atgccattaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggga gcaatgagaa catccacagc

attcacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg

tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg

gtgtatagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagagacttt

cagattactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcactat

tctggctcta ttaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggattaa ggtggacctg

ctggctccca tgatcatcca tggcatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttctcttct

ctgtacatca gccagttcat tatcatgtac tccctggatg gcaagaagtg gcagacctat

aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctggcatc

aagcataata tcttcaatcc ccccatcatt gctaggtaca tcaggctgca ccccacccac

tactctatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgcagc

atgcctctgg gcatggagag caaagccatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac

tttaccaaca tgtttgctac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcaggggagg

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag

aagactatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gacctctatg

tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgtttttc

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggg aaccaggaca gcttcactcc tgtggtgaac

tctctggacc cccccctgct gaccaggtat ctgaggatcc accctcagag ctgggtgcac

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga

Вариант X06 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII (SEQ ID NO:6)

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgcc

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg

ggggagctgc ctgtggatgc caggttccct cccagggtgc ccaagtcttt ccccttcaac

acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaacatt

gccaagccca ggcctccctg gatgggcctg ctgggcccca ccattcaggc tgaggtgtat

gacactgtgg tcatcaccct gaaaaatatg gctagccacc ctgtgtctct gcatgctgtg

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg

aaagagaatg gccccatggc ttctgatccc ctgtgtctga cctatagcta cctgagccat

gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag

ggcagcctgg ctaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggatagggat

gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacaggagc

ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtctatt ggcatgtgat tggcatgggc

actactcctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca ccttcctggt gaggaaccac

aggcaggcca gcctggagat ctctcccatc actttcctga ctgctcagac cctgctgatg

gacctgggcc agttcctgct gttctgtcac atctctagcc accagcatga tggcatggag

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gaaccccagc tgaggatgaa gaacaatgag

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat

gatgacaatt ctcctagctt cattcagatc agatctgtgg ccaaaaagca tcctaagact

tgggtgcatt atattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggct

cctgatgata ggagctacaa gtctcagtac ctgaataatg ggccccagag gattggcagg

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc

attcagcatg agtctgggat tctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg

ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tgggattact

gatgtgaggc ccctgtactc taggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggatttt

cctatcctgc ctggggaaat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc

actaagtctg atcccaggtg tctgaccagg tattatagct cttttgtgaa catggagagg

gatctggcct ctgggctgat tggccctctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag

aacaggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg

cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgtctg catgaggtgg cctactggta tatcctgtct

attggggccc agactgactt cctgtctgtg tttttttctg ggtatacttt taagcacaag

atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cccttctctg gggagactgt gtttatgagc

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaataggggg

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaata ctggggacta ctatgaggac

tcttatgagg acatttctgc ctatctgctg tctaagaaca atgccattga acccaggagc

ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg aaatcaccag aactactctg

cagtctgatc aggaggaaat tgactatgat gacactattt ctgtggagat gaagaaggag

gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccaa ggagcttcca gaagaagact

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagcagcccc

catgtgctga gaaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc

caggagttca ctgatgggag cttcacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac

ctgggcctgc tgggccccta tattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc

aggaatcagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgattagcta tgaggaggat

cagaggcagg gggctgaacc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat

ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg caaggcctgg

gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gctcatggca ggcaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaatatg

gagaggaatt gcagggcccc ctgcaatatt cagatggaag accccacctt caaggagaat

tacaggttcc atgccattaa tggctacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggcc

caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggca gcaatgagaa catccactct

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggccctg

tacaacctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgccttctaa ggctggcatt

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg

gtgtacagca ataagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctgggcatat cagggatttc

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccaa agctggctag gctgcactac

tctgggagca tcaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg

ctggccccca tgattatcca tgggattaag actcaggggg ccaggcagaa gttcagcagc

ctgtacatca gccagttcat tatcatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacctat

aggggcaact ctactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc

aagcacaata tcttcaaccc ccccatcatt gccaggtata tcaggctgca ccccacccac

tacagcatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgtagc

atgcctctgg gcatggagtc taaggccatt tctgatgccc agattactgc tagcagctac

ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcca ggctgcatct gcagggcagg

tctaatgctt ggaggcccca ggtgaacaac ccaaaggagt ggctgcaggt ggatttccag

aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agtctctgct gacctctatg

tatgtgaagg agttcctgat ctctagcagc caggatggcc atcagtggac cctgttcttc

cagaatggca aggtgaaagt gttccagggc aatcaggata gcttcactcc agtggtgaac

agcctggatc cccctctgct gactaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga

Вариант X07 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:7)

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgtctgc tgaggttctg cttctctgcc

accaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg

ggggagctgc ctgtggatgc taggttcccc cccagggtgc ccaagagctt cccctttaac

acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat

gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg

ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg

gagaaggagg atgacaaggt gtttcctggg ggcagccata cctatgtgtg gcaggtgctg

aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta cctgtctcat

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgtagggag

ggcagcctgg ctaaggaaaa gacccagacc ctgcataagt ttatcctgct gtttgctgtg

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggatagggat

gctgcctctg ccagggcttg gcctaagatg cacactgtga atgggtatgt gaataggagc

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc

accacccctg aggtccatag catcttcctg gagggccaca ctttcctggt gaggaaccac

agacaggcct ctctggagat ctctcccatc accttcctga ctgctcagac tctgctgatg

gacctgggcc agttcctgct gttttgccat attagcagcc accagcatga tgggatggag

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaacaatgag

gaggctgaag actatgatga tgacctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat

gatgacaata gccccagctt cattcagatc aggtctgtgg ccaagaaaca ccccaagacc

tgggtgcact acattgctgc tgaggaagag gactgggact atgctcccct ggtgctggcc

cctgatgata ggtcttataa gagccagtac ctgaacaatg ggccccagag gattggcagg

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaaa ccttcaaaac cagggaggcc

attcagcatg agtctggcat cctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctatcctca tggcatcact

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaagacttc

cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggccct

accaagtctg accccaggtg tctgaccagg tactattcta gctttgtgaa catggagagg

gacctggcct ctggcctgat tgggcccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag

aataggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg

cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aatatcatgc atagcatcaa tggctatgtg

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc

attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttttctg gctatacctt caagcacaag

atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc

atggagaatc ctgggctgtg gatcctgggg tgccacaact ctgattttag gaacaggggg

atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac

agctatgagg acatttctgc ttatctgctg tctaagaata atgccattga gcccagaagc

ttcagccaga atccccctgt gctgaagaga catcagaggg agatcaccag aactaccctg

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag

gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagctttca gaagaagacc

agacattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc

caggaattca ctgatggcag cttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac

ctgggcctgc tggggcctta tatcagggct gaggtggagg ataatattat ggtgactttc

aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tatagcagcc tgatctctta tgaggaggat

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacctac

ttctggaagg tccagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg

gcctatttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtccatt ctgggctgat tggccccctg

ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtccaggag

tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag accaagagct ggtactttac tgagaacatg

gagaggaact gcagagctcc ttgcaatatt cagatggagg accccacctt caaggagaat

tacaggttcc atgccattaa tgggtacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa tatccacagc

atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg

tataatctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa ggctggcatc

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg

gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactat

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg

ctggccccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagctct

ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg ggaagaagtg gcagacctac

aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggactc ttctggcatc

aagcacaaca tcttcaatcc ccccatcatt gctaggtata ttaggctgca tcccacccac

tacagcatca ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc

atgcccctgg gcatggagtc taaggccatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac

ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc tctaaggcca ggctgcatct gcaggggagg

agcaatgcct ggaggcctca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtca agagcctgct gaccagcatg

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac tctgttcttt

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggact ctttcacccc tgtggtgaac

agcctggacc cccccctgct gaccagatac ctgaggatcc acccccagtc ttgggtgcat

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggctc aggatctgta ctga

Вариант X08 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:8)

atgcagattg agctgagcac ttgctttttt ctgtgcctgc tgaggttttg tttttctgcc

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgatctg

ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt tcccttcaac

acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt

gctaagccta ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccta ccattcaggc tgaggtgtat

gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg

ggggtctctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagaga

gagaaggagg atgacaaggt cttccctggg ggctctcaca cctatgtgtg gcaggtgctg

aaggaaaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta tctgagccat

gtggatctgg tgaaggacct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag

ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttatcctgct gtttgctgtg

tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggacagggat

gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc

ctgcctgggc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc

accacccctg aggtgcacag catcttcctg gaaggccaca ctttcctggt gaggaaccat

aggcaggcca gcctggagat cagccctatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg

gatctggggc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tgggatggag

gcctatgtga aggtggacag ctgcccagag gagcctcagc tgaggatgaa aaacaatgaa

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gagatttgat

gatgacaata gccctagctt tattcagatc aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagacc

tgggtgcatt acattgctgc tgaggaggag gactgggatt atgctcctct ggtgctggcc

cctgatgata ggagctacaa gagccagtac ctgaataatg gccctcagag gattggcagg

aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc

atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg

ctgatcatct tcaagaacca ggctagcagg ccttacaaca tctatcccca tgggatcact

gatgtgagac ctctgtacag caggaggctg cccaaggggg tcaagcatct gaaagacttc

cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc

accaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa catggagagg

gatctggcct ctgggctgat tggccccctg ctgatctgtt acaaggaatc tgtggatcag

aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag

aataggtctt ggtacctgac tgaaaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtc

cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg

tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgtct

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt caagcacaag

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt ctttatgagc

atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaataggggc

atgactgctc tgctgaaggt gagctcttgt gacaagaaca ctggggatta ctatgaggac

agctatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc

tttagccaga atcctcctgt cctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gataccatct ctgtggagat gaagaaggag

gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagacc

aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagctctcct

catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa agtggtgttt

caggagttca ctgatggctc tttcacccag cctctgtata ggggggagct gaatgagcac

ctggggctgc tgggccccta tatcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc

aggaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tatagcagcc tgatcagcta tgaggaggac

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacttac

ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg taaggcctgg

gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg

ctggtgtgcc ataccaatac tctgaaccct gctcatggca ggcaggtgac tgtgcaggag

tttgctctgt tcttcactat ctttgatgag accaagtctt ggtatttcac tgagaatatg

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac

tataggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc

caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ctaatgagaa catccacagc

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg agaaagaagg aggagtacaa gatggctctg

tacaatctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctgggatc

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacat ctgcatgctg ggatgtctac tctgttcctg

gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggctt ctggccatat cagggacttt

cagattactg cctctgggca gtatggccag tgggccccca agctggctag gctgcattat

tctggcagca tcaatgcctg gtctactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggatctg

ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gtttagctct

ctgtacatta gccagttcat catcatgtac agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac

aggggcaatt ctactggcac cctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctggcatc

aagcacaaca tctttaaccc ccctatcatt gctaggtaca tcaggctgca tcccacccat

tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc

atgcccctgg gcatggagag caaggccatt tctgatgccc agattactgc cagcagctac

ttcactaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gactagcatg

tatgtgaagg agttcctgat cagctctagc caggatggcc accagtggac tctgtttttc

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcactcc tgtggtgaac

agcctggacc cccccctgct gaccaggtat ctgaggattc acccccagtc ttgggtgcat

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga

Вариант X09 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:9)

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgtctgc tgagattttg cttttctgcc

actaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgtcttggg actacatgca gtctgatctg

ggggagctgc ctgtggatgc caggttccca cctagggtgc ctaagagctt tcccttcaat

acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt

gccaagccta ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccta ccatccaggc tgaagtgtat

gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg

ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg

gagaaggaag atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtctg gcaggtgctg

aaggagaatg gccccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctactctta cctgagccat

gtggacctgg tgaaggatct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag

ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg

tttgatgaag ggaagagctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggacagggat

gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaatagaagc

ctgcctggcc tgattgggtg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc

actacccctg aggtgcatag catcttcctg gaaggccata ccttcctggt gaggaatcat

aggcaggctt ctctggaaat ttctcccatc actttcctga ctgctcagac cctgctgatg

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagctctc accagcatga tgggatggag

gcctatgtga aggtggacag ctgtcctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt caggtttgat

gatgacaata gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagact

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccctct ggtgctggcc

cctgatgaca ggagctataa gtctcagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg

aagtataaga aggtgaggtt tatggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc

atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg

ctgatcatct tcaagaacca ggcctctagg ccctacaata tctaccctca tggcatcact

gatgtgagac ccctgtatag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc

accaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagct cttttgtgaa catggagagg

gatctggcct ctgggctgat tggcccactg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag

aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgaa

aataggtctt ggtatctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg

cagctggagg atcctgagtt tcaggcctct aatatcatgc attctatcaa tggctatgtg

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc

attggggctc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctatacttt caagcacaag

atggtgtatg aggacactct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct

atggaaaatc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaataggggg

atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggatta ctatgaggac

tcttatgaag atatctctgc ctatctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccactctg

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag

gattttgaca tttatgatga ggatgagaac cagtctccca ggagcttcca gaagaagacc

aggcattact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgag cagctctcct

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc

caggagttca ctgatgggag cttcacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac

ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttc

aggaaccagg ctagcaggcc ttacagcttt tacagcagcc tgatctctta tgaagaagac

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaat tttgtgaagc ctaatgagac caagacttat

ttttggaagg tgcagcatca catggctcct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg

gcctactttt ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccctctg

ctggtgtgcc atactaacac tctgaaccct gcccatggga ggcaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt tcttcactat ttttgatgag accaagtctt ggtatttcac tgagaacatg

gagaggaact gcagggctcc ctgcaacatc cagatggaag accccacctt caaggagaac

tataggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggcc

caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccacagc

atccatttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg

tacaacctgt atcctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc

tggagggtgg aatgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgttcctg

gtgtatagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccatat cagggatttc

cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactat

tctggcagca tcaatgcctg gagcactaag gagccttttt cttggatcaa ggtggacctg

ctggccccta tgattattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttctctagc

ctgtacatct ctcagttcat cattatgtat agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac

aggggcaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggga atgtggactc ttctgggatc

aagcacaaca tctttaaccc ccccatcatt gccaggtata ttaggctgca ccccacccac

tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa ttcttgctct

atgcccctgg gcatggagag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttac

ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctcct agcaaggcca ggctgcatct gcagggcagg

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gacctctatg

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac tctgttcttc

cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aaccaggata gctttacccc tgtggtgaac

agcctggacc ctcctctgct gaccagatac ctgaggatcc atcctcagag ctgggtgcac

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga

Вариант X10 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:10)

atgcagattg agctgagcac ttgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttttctgct

actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg

ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt tcctttcaac

acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat

gacactgtgg tgattaccct gaagaacatg gctagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg

ggggtgagct attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg

gaaaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccata cttatgtgtg gcaggtgctg

aaggagaatg ggcccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttacagcta tctgagccat

gtggacctgg tgaaggatct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag

ggcagcctgg ctaaggagaa gactcagact ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg

tttgatgaag gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat

gctgcctctg ccagggcttg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc

ctgcctggcc tgattgggtg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc

accacccctg aggtgcacag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt gaggaatcac

aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg

gacctggggc agtttctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tggcatggag

gcctatgtga aggtggactc ttgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag

gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat

gatgacaata gccccagctt catccagatt aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggct

cctgatgaca ggtcttataa gagccagtac ctgaacaatg ggccccagag gattggcagg

aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc

atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tttaccctca tggcatcact

gatgtgaggc ccctgtacag caggagactg cccaaggggg tgaagcacct gaaggatttt

cccattctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc

accaagtctg atcccaggtg cctgactagg tactactctt cttttgtgaa tatggagagg

gatctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag

aataggagct ggtacctgac tgagaatatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtc

cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacattatgc acagcatcaa tggctatgtg

tttgattctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta catcctgtct

attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caagcataag

atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgtcataact ctgacttcag aaacaggggc

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac

agctatgagg atatctctgc ttatctgctg agcaagaata atgccattga gcccaggagc

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gactaccctg

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag

gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagtccccca ggtctttcca gaagaagacc

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagcccc

catgtgctga ggaacagggc tcagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtcttc

caggagttca ctgatggctc ttttacccag cctctgtaca gaggggagct gaatgagcac

ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttc

agaaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggat

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac

ttctggaagg tgcagcacca tatggcccct actaaggatg agtttgactg caaggcctgg

gcttattttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg

gagagaaatt gtagggctcc ctgcaatatc cagatggagg accccacctt caaagaaaat

tacagattcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctgggct ggtgatggct

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ctaatgagaa catccactct

atccatttct ctggccatgt gttcactgtg agaaagaagg aggagtataa gatggctctg

tacaacctgt acccaggggt gtttgagact gtggaaatgc tgcccagcaa agctgggatc

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg

gtgtacagca acaagtgcca gactcccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggatttt

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac

tctggcagca ttaatgcttg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggatctg

ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttctctagc

ctgtacattt ctcagttcat catcatgtac agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac

agggggaaca gcactgggac cctgatggtg ttctttggca atgtggatag ctctggcatc

aagcacaata tcttcaatcc ccccattatt gccaggtaca ttaggctgca tcctactcac

tactctatta ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgttct

atgcccctgg gcatggagtc taaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac

ttcactaata tgtttgccac ctggagccct agcaaggcca gactgcacct gcagggcagg

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc

cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcacccc tgtggtgaac

agcctggatc ctcccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac

cagattgctc tgaggatgga agtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga

Вариант X11 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:11)

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgct

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg

ggggagctgc ctgtggatgc taggttccct cccagggtgc ccaagagctt cccctttaat

acctctgtgg tgtacaagaa aaccctgttt gtggagttca ctgaccatct gttcaacatt

gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctgggcccca ccattcaggc tgaggtgtat

gacactgtgg tcattaccct gaagaacatg gcttctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg

gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg

aaggagaatg gccccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctactctta tctgtctcat

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag

ggctctctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttattctgct gtttgctgtc

tttgatgagg gcaagagctg gcattctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat

gctgcctctg ccagggcctg gcccaaaatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc

accacccctg aggtgcacag catcttcctg gagggccaca cctttctggt gaggaatcac

aggcaggcca gcctggagat tagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa aaacaatgag

gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat

gatgacaata gccccagctt tattcagatt aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagact

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgcccctct ggtcctggcc

cctgatgata ggtcttacaa gagccagtat ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc

attcagcatg agtctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacactctg

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccttataaca tctaccctca tgggatcact

gatgtgaggc ccctgtactc tagaaggctg cccaaggggg tcaagcacct gaaggatttt

cccatcctgc ctggggagat tttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc

accaagtctg accctaggtg cctgaccagg tactacagct cttttgtgaa catggagagg

gacctggcct ctggcctgat tggccctctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggaccag

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag

aacaggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcctaaccc agctggggtg

cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aatattatgc atagcattaa tggctatgtg

tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc

attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcataag

atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cctttttctg gggagactgt gtttatgagc

atggagaatc ctggcctgtg gatcctgggc tgccataatt ctgacttcag gaacaggggc

atgactgccc tgctgaaagt gagcagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaagac

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc

ttcagccaga accccccagt gctgaagagg caccagagag agatcaccag gactaccctg

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacaccattt ctgtggagat gaagaaggag

gactttgaca tttatgatga ggatgagaat cagagcccca ggagcttcca gaagaagact

aggcactatt ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagctctccc

catgtgctga ggaatagggc ccagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc

caggagttca ctgatggcag ctttacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac

ctgggcctgc tgggccccta tatcagggct gaggtggagg acaatattat ggtgaccttt

aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tatagcagcc tgatcagcta tgaggaggac

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaat tttgtgaagc ctaatgagac caagacctac

ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg caaggcttgg

gcctatttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg

ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg atcccacctt caaggagaac

tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc

caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa tatccatagc

atccacttct ctggccatgt gttcactgtc aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg

tataatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgtttctg

gtgtactcta acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggatttc

cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac

tctggcagca tcaatgcctg gtctaccaag gagccctttt cttggattaa ggtggacctg

ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc

ctgtacatca gccagttcat catcatgtac agcctggatg gcaaaaagtg gcagacctac

aggggcaata gcactgggac tctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc

aagcacaata tcttcaaccc tcccatcatt gctaggtaca tcaggctgca ccccacccac

tatagcatca ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc

atgcccctgg gcatggagtc caaagctatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac

ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctccc tctaaggcca ggctgcacct gcagggcagg

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag

aaaactatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac tctgttcttc

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggaca gcttcacccc tgtggtgaac

tctctggatc cccccctgct gaccaggtac ctgaggattc atccccagag ctgggtgcac

cagattgctc tgagaatgga ggtgctgggg tgtgaggctc aggacctgta ttga

Вариант X12 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:12)

atgcagattg agctgtctac ttgttttttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc

accaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgatctg

ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagagctt ccccttcaac

acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgatcatct gtttaacatt

gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccaa ctatccaggc tgaggtgtat

gacactgtgg tcatcaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg

aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttatagcta cctgtctcat

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt ctgtagggaa

ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttattctgct gtttgctgtg

tttgatgaag gcaagagctg gcactctgag accaagaatt ctctgatgca ggatagggat

gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg catactgtga atggctatgt gaacagaagc

ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tgggatgggc

actacccctg aagtgcacag cattttcctg gagggccaca ctttcctggt gaggaaccac

aggcaggcct ctctggagat cagccccatt actttcctga ctgcccagac cctgctgatg

gatctgggcc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag

gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaataatgag

gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat

gatgataata gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc

tgggtgcact atattgctgc tgaagaggag gactgggact atgcccctct ggtgctggct

cctgatgaca ggagctataa gagccagtat ctgaacaatg ggccccagag gattgggagg

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc

atccagcatg agtctggcat tctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacactctg

ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaata tttaccccca tggcatcact

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggacttc

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggccct

accaagtctg accctaggtg tctgactagg tactacagca gctttgtgaa catggagaga

gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag

aggggcaacc agattatgtc tgataagagg aatgtcatcc tgttctctgt gtttgatgag

aacaggagct ggtatctgac tgagaacatt cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg

cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc attctattaa tggctatgtg

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc

attggggccc agactgactt tctgtctgtg tttttctctg ggtacacctt caagcacaag

atggtctatg aggacaccct gaccctgttc cccttttctg gggaaactgt gtttatgagc

atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgactttag gaataggggc

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaata ctggggatta ctatgaggac

agctatgagg atatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag

gactttgata tttatgatga ggatgagaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc

aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagcccc

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc

caggaattta ctgatggcag ctttacccag cccctgtaca gaggggagct gaatgagcac

ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttt

aggaaccagg cctctaggcc ctattctttt tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac

ttttggaaag tgcagcacca catggccccc actaaggatg agtttgattg caaggcctgg

gcctatttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg

ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt tctttaccat ctttgatgag actaagagct ggtatttcac tgagaacatg

gagaggaact gcagagcccc ttgcaacatc cagatggagg accctacctt caaggagaac

tataggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggct

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggga gcaatgagaa cattcatagc

atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggccctg

tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgttcctg

gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc

cagattactg cctctgggca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcactac

tctgggtcta tcaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggatctg

ctggccccca tgatcattca tgggatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc

ctgtatattt ctcagttcat catcatgtat tctctggatg gcaaaaagtg gcagacctat

agagggaaca gcactgggac cctgatggtg ttttttggca atgtggatag ctctggcatc

aagcacaata tcttcaaccc ccccattatt gccaggtaca tcaggctgca ccccacccac

tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgctct

atgcctctgg ggatggaaag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctat

ttcaccaata tgtttgccac ttggagccct agcaaggcta ggctgcatct gcagggcagg

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag

aagactatga aagtgactgg ggtgaccacc cagggggtga aaagcctgct gaccagcatg

tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggata gcttcacccc agtggtgaac

agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga

Вариант X13 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:13)

atgcagattg agctgagcac ctgctttttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgacctg

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttccc cccagggtgc ccaagtcttt cccctttaac

acctctgtgg tgtataagaa gactctgttt gtggagttca ctgatcacct gttcaatatt

gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctgggcccca ctatccaggc tgaggtgtat

gacactgtgg tcatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg

gagaaggagg atgacaaggt gttcccaggg gggtctcaca cttatgtgtg gcaggtgctg

aaggagaatg ggcccatggc ctctgaccct ctgtgcctga cttatagcta cctgtctcat

gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag

gggagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg

tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaata gcctgatgca ggacagggat

gctgcttctg ctagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc

ctgcctggcc tgattgggtg tcacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggg

actactccag aagtgcacag catcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gaggaatcac

aggcaggcca gcctggagat ttctcccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg

gatctggggc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tgggatggag

gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaacaatgag

gaggctgagg actatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat

gatgacaact ctcccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgctcccct ggtgctggct

cctgatgata ggagctacaa gagccagtat ctgaataatg ggccccagag gattggcagg

aagtataaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggct

attcagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg

ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctataaca tctatcccca tgggatcact

gatgtgaggc ccctgtactc taggaggctg cccaaggggg tcaagcacct gaaggacttc

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc

actaagtctg accccaggtg cctgactagg tactacagca gctttgtgaa catggagaga

gatctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaagagtc tgtggatcag

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag

aacagaagct ggtacctgac tgagaacatt cagaggtttc tgcccaaccc tgctggggtc

cagctggagg accctgagtt tcaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta tatcctgagc

attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caagcacaag

atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cctttctctg gggaaactgt gttcatgagc

atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggg tgccacaatt ctgatttcag gaacagaggc

atgactgctc tgctgaaggt gtctagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga acccaggtct

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gaccaccctg

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag

gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagact

aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttt

caggagttca ctgatggcag cttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcat

ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc

agaaatcagg ctagcaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggac

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat

ttctggaagg tgcagcacca catggccccc accaaggatg agtttgattg caaggcctgg

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccctctg

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt tctttactat ctttgatgag accaagtctt ggtattttac tgagaacatg

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaac

tacagattcc atgccatcaa tggctacatt atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggca gcaatgagaa cattcactct

atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg

tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctgggatc

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg

gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagagatttt

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggctccta agctggccag gctgcactac

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttta gctggatcaa ggtggacctg

ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttctctagc

ctgtacatta gccagttcat catcatgtat agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac

aggggcaaca gcactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctgggatc

aagcacaata tcttcaaccc ccccattatt gccaggtata ttaggctgca ccccactcac

tacagcatta ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgcagc

atgcccctgg gcatggagtc taaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttac

ttcaccaaca tgtttgccac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag

aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gactagcatg

tatgtgaagg agttcctgat cagctctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttt

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcacccc tgtggtgaat

tctctggacc ctcccctgct gactaggtat ctgaggattc atccccagag ctgggtgcat

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga

Вариант X14 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:14)

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttttctgcc

actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgacctg

ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc ccaagggtgc ccaagtcttt tcccttcaat

acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgatcatct gtttaacatt

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat

gatactgtgg tgattaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgtctct gcatgctgtg

ggggtgtctt attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg

gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggctctcaca cctatgtgtg gcaggtgctg

aaggagaatg ggcctatggc ctctgaccca ctgtgcctga cttacagcta tctgagccat

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggg ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag

ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg

tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggatagggat

gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggtct

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc

accacccctg aggtgcatag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt gaggaaccac

aggcaggcta gcctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag

gcctatgtga aggtggactc ttgtcctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat

gatgacaaca gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggcc

cctgatgaca ggagctataa gtctcagtac ctgaacaatg gcccccagag aattggcagg

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctat actgatgaga ccttcaaaac cagggaggcc

attcagcatg agtctggcat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg

ctgatcatct tcaagaacca ggctagcagg ccttacaaca tctaccccca tgggatcact

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttt

cccattctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc

accaagtctg accccaggtg cctgactagg tactactcta gctttgtgaa catggagagg

gacctggcct ctgggctgat tggccccctg ctgatctgtt acaaggagtc tgtggaccag

aggggcaacc agatcatgtc tgataagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag

aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagagattcc tgcccaaccc tgctggggtg

cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aacatcatgc attctatcaa tgggtatgtg

tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgtctg catgaggtgg cctactggta cattctgagc

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caaacacaag

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gtttatgagc

atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaact ctgacttcag aaacaggggc

atgactgccc tgctgaaggt gtcttcttgt gataagaaca ctggggacta ttatgaagac

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaata atgctattga gcccaggtct

ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactattt ctgtggagat gaagaaggaa

gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagagcccta ggagcttcca gaagaagact

aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagcagcccc

catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc

caggaattca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac

ctggggctgc tgggccctta catcagggct gaggtggagg acaatatcat ggtgaccttt

aggaaccagg cctctaggcc ttacagcttc tactctagcc tgatctctta tgaagaggac

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacttac

ttctggaagg tgcagcacca catggctccc accaaggatg agtttgactg caaggcttgg

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tgggcccctg

ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca gacaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt tttttaccat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaacatg

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg atcccacctt caaggagaac

tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct

caggaccaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa tatccactct

atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg

tataacctgt atcctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc

tggagagtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgtttctg

gtgtatagca acaagtgtca gacccctctg ggcatggcct ctgggcacat tagggacttt

cagatcactg cttctggcca gtatgggcag tgggctccca agctggccag gctgcactat

tctggcagca ttaatgcctg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggacctg

ctggccccca tgatcatcca tgggatcaag acccaggggg ctaggcagaa gttcagcagc

ctgtacatca gccagtttat catcatgtat tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac

aggggcaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc

aagcataata tcttcaatcc ccccattatt gctaggtata tcaggctgca ccccacccac

tatagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgcagc

atgcccctgg gcatggagag caaggctatt tctgatgccc agatcactgc cagcagctac

tttactaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca gactgcacct gcagggcagg

tctaatgcct ggaggcctca ggtgaataac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag

aaaaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttt

cagaatggga aggtgaaggt cttccagggc aaccaggata gcttcacccc tgtggtgaat

agcctggatc ctcctctgct gaccaggtat ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggctc aggacctgta ctga

Вариант X15 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:15)

atgcagattg agctgagcac ctgtttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg tttctctgcc

actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg

ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaat

acttctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaacatt

gctaagccca ggcctccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat

gatactgtgg tgattaccct gaagaacatg gcctctcatc cagtgagcct gcatgctgtg

ggggtgagct actggaaggc ctctgaaggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg

aaggagaatg gcccaatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttatagcta cctgagccat

gtggatctgg tgaaggacct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagagag

ggctctctgg ctaaggagaa gacccagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag actaagaata gcctgatgca ggacagggat

gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg catactgtga atggctatgt gaacaggagc

ctgcctggcc tgattggctg tcacaggaaa tctgtctact ggcatgtgat tgggatgggc

actacccctg aggtgcactc tatcttcctg gagggccata ccttcctggt gaggaaccac

aggcaggcca gcctggagat ctctcccatt accttcctga ctgcccagac cctgctgatg

gatctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tgggatggag

gcttatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat

gatgacaact ctcccagctt tattcagatc aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagact

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccctct ggtgctggct

cctgatgaca ggtcttacaa gtctcagtac ctgaataatg gccctcagag gattggcagg

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc

atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg

ctgatcatct tcaagaatca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tggcatcact

gatgtgaggc cactgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggacttc

cccattctgc ctggggagat cttcaagtac aaatggactg tgactgtgga ggatggccct

accaagtctg accccaggtg tctgaccagg tactacagca gctttgtgaa tatggagagg

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag

aggggcaatc agatcatgtc tgataagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag

aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg

cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aatatcatgc acagcatcaa tggctatgtc

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta tattctgagc

attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctatacctt taagcacaag

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct

atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggg

atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggacta ttatgaggac

agctatgagg acatctctgc ttacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggtct

ttcagccaga atccccctgt gctgaagagg catcagaggg agatcaccag gaccaccctg

cagtctgatc aggaggagat tgattatgat gacactatct ctgtggaaat gaagaaggag

gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggatt atggcatgag cagctctccc

catgtgctga ggaacagagc ccagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtcttc

caggagttca ctgatggctc tttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac

ctgggcctgc tggggcccta cattagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgactttc

agaaaccagg ccagcaggcc ttacagcttt tactcttctc tgattagcta tgaggaggat

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat

ttctggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgactg caaggcttgg

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tgggcccctg

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaat

tacaggttcc atgccatcaa tggctacatt atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc

caggatcaga ggatcaggtg gtatctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccacagc

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggaatacaa gatggctctg

tataacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg

gtgtatagca ataagtgcca gacccccctg ggcatggctt ctggccacat cagggatttc

cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggctccca agctggctag gctgcattac

tctgggtcta tcaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg

ctggccccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ctaggcagaa gttcagcagc

ctgtacatca gccagttcat cattatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacttac

aggggcaata gcactgggac tctgatggtg ttctttggca atgtggactc ttctggcatc

aagcacaaca tcttcaaccc tcccatcatt gccaggtaca ttaggctgca ccctacccac

tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgatctgaa ctcttgcagc

atgcctctgg gcatggaaag caaagccatc tctgatgccc agatcactgc ctctagctat

ttcaccaata tgtttgccac ctggagccct agcaaggcca ggctgcacct gcagggcaga

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gactagcatg

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc

cagaatggca aggtgaaagt gttccagggc aaccaggata gcttcactcc tgtggtgaac

tctctggacc ctcccctgct gactaggtac ctgaggattc atccccagag ctgggtgcac

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga

Вариант X16 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:16)

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg actatatgca gtctgacctg

ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagagctt tcctttcaac

acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaatatt

gctaagccca ggccaccctg gatgggcctg ctgggcccta ccattcaggc tgaggtgtat

gacactgtgg tgattactct gaagaatatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg

ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac ttctcagagg

gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggctctcaca cttatgtgtg gcaggtgctg

aaggagaatg gccccatggc ttctgatcca ctgtgcctga cctactctta cctgagccat

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag

ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg

tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaatt ctctgatgca ggacagggat

gctgcctctg ccagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggtct

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc

actacccctg aggtgcacag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt caggaaccat

aggcaggcct ctctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac attagcagcc accagcatga tggcatggag

gcctatgtga aggtggactc ttgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag

gaagctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat

gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgctcccct ggtgctggct

cctgatgata ggagctacaa gtctcagtac ctgaataatg gcccccagag gattggcagg

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagagaggct

atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcaga ccctacaaca tctaccccca tgggatcact

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc

accaagtctg accctaggtg cctgactagg tactactcta gctttgtgaa catggagagg

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggatcag

aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag

aataggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtg

cagctggagg accctgagtt tcaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtg

tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta tatcctgagc

attggggctc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacttt taagcacaag

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttttctg gggagactgt gttcatgtct

atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgtcacaact ctgacttcag aaacaggggc

atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaggac

agctatgagg acatttctgc ctatctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc

ttttctcaga atccccctgt gctgaagagg caccagagag agatcaccag gaccactctg

cagtctgatc aggaggagat tgattatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaagag

gactttgata tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagact

agacactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc

caggagttca ctgatggcag ctttacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcat

ctgggcctgc tgggccccta tattagggct gaagtggagg acaacatcat ggtgaccttt

aggaaccagg ccagcaggcc ctacagcttt tacagcagcc tgattagcta tgaggaggat

cagagacagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac

ttctggaagg tgcagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg

gcttacttct ctgatgtgga cctggagaaa gatgtgcact ctggcctgat tgggcccctg

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggga ggcaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt ttttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg

gagaggaact gcagggcccc ctgtaacatc cagatggagg atcctacttt caaggagaac

tacaggttcc atgccattaa tgggtacatc atggacaccc tgcctgggct ggtgatggcc

caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg tctatgggct ctaatgagaa catccactct

atccacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg

tacaacctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa agctgggatc

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg

gtgtacagca ataagtgcca gactcccctg ggcatggctt ctgggcacat cagggatttc

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggctag gctgcactac

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttct cttggattaa ggtggacctg

ctggctccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttttctagc

ctgtatatta gccagttcat catcatgtat agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac

agggggaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggca atgtggattc ttctggcatc

aagcataaca tcttcaatcc ccctatcatt gccaggtaca ttaggctgca tcccacccat

tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgatctgaa cagctgtagc

atgcccctgg gcatggagtc caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac

ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag

aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatgggc atcagtggac cctgtttttt

cagaatggca aagtgaaggt gtttcagggg aatcaggaca gctttacccc tgtggtgaac

agcctggatc ctcctctgct gactagatac ctgaggatcc acccccagag ctgggtccac

cagattgctc tgaggatgga ggtgctgggg tgtgaggctc aggacctgta ctga

Вариант X17 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:17)

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc

accaggaggt actacctggg ggctgtggaa ctgagctggg actatatgca gtctgacctg

ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt cccctttaac

acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaatatt

gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccaa ccatccaggc tgaggtgtat

gatactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg

ggggtgagct attggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg gggtctcata cctatgtgtg gcaggtgctg

aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctattctta cctgagccat

gtggacctgg tcaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag

ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagact ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat

gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaataggtct

ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc

actacccctg aggtgcactc tatcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gaggaaccac

aggcaggcca gcctggagat ctctcccatc accttcctga ctgcccagac tctgctgatg

gacctgggcc agttcctgct gttctgccat atcagcagcc accagcatga tggcatggag

gcctatgtga aggtggacag ctgcccagag gaaccccagc tgaggatgaa gaacaatgag

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat

gatgacaaca gccccagctt tattcagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggatt atgcccccct ggtgctggcc

cctgatgaca ggtcttacaa gtctcagtac ctgaacaatg gcccccagag gattgggagg

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc

atccagcatg agtctggcat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg

ctgattatct tcaagaacca ggctagcagg ccctataaca tctaccccca tggcattact

gatgtgaggc ccctgtactc taggagactg cccaaggggg tgaagcacct gaaagacttc

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc

actaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa tatggagagg

gatctggctt ctggcctgat tgggcctctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggatcag

agggggaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag

aacaggagct ggtacctgac tgagaatatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtg

cagctggagg accctgagtt ccaggctagc aacattatgc acagcatcaa tggctatgtg

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta cattctgtct

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag

atggtgtatg aggacactct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc

atggagaatc ctgggctgtg gattctgggg tgccacaact ctgatttcag gaacaggggc

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggatta ttatgaggac

agctatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc

ttcagccaga atccccctgt gctgaagaga caccagaggg agatcactag gaccactctg

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccattt ctgtggagat gaagaaggag

gactttgata tttatgatga ggatgagaac cagagcccca gaagcttcca gaagaagacc

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggatt atggcatgtc ttctagcccc

catgtgctga ggaacagggc tcagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc

caggagttca ctgatgggag cttcacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgaacat

ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgactttc

aggaatcagg cctctaggcc ctacagcttc tactctagcc tgatcagcta tgaggaggac

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaat tttgtgaaac ccaatgagac caagacctac

ttttggaagg tgcagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg taaggcctgg

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccccctg

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtatttcac tgagaacatg

gagaggaact gtagggctcc ctgcaacatc cagatggagg atccaacttt caaggagaac

tacaggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc

caggaccaga ggattaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccactct

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg

tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctggcatt

tggagagtgg agtgtctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgtctac cctgttcctg

gtgtactcta acaagtgcca gacccccctg gggatggctt ctgggcacat cagagatttt

cagattactg cttctgggca gtatggccag tgggctccca agctggccag actgcattac

tctggctcta ttaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggacctg

ctggctccca tgatcatcca tggcattaag actcaggggg ctaggcagaa gttcagcagc

ctgtatattt ctcagtttat tatcatgtat tctctggatg gcaagaagtg gcagacttac

aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc

aagcataaca tcttcaaccc ccccattatt gccaggtaca tcaggctgca ccccacccac

tattctatca ggagcactct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgctct

atgcccctgg gcatggagag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttat

ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcaga

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cctaaggagt ggctgcaggt ggacttccag

aagactatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agagcctgct gaccagcatg

tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatgggc atcagtggac cctgttcttc

cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac

agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc atccccagag ctgggtgcac

cagattgctc tgagaatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga

Вариант X18 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:18)

atgcagattg agctgtctac ctgttttttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct

accaggaggt attatctggg ggctgtggag ctgagctggg actacatgca gtctgacctg

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaac

acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ctatccaggc tgaggtgtat

gatactgtgg tgattaccct gaagaacatg gcctctcacc ctgtgtctct gcatgctgtg

ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgaatatg atgatcagac ctctcagagg

gagaaggagg atgacaaggt gtttcctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg

aaggagaatg ggcccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctacagcta cctgagccat

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag

ggcagcctgg ccaaggaaaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg

tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat

gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacagatct

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggg

accacccctg aggtgcatag catcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gagaaatcat

aggcaggcca gcctggagat tagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atttctagcc accagcatga tggcatggag

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgaa gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat

gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc

tgggtgcact acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc

ccagatgaca ggtcttacaa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg

aagtataaga aagtgaggtt catggcttac actgatgaga cctttaagac tagggaggcc

attcagcatg agtctgggat tctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg

ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctataata tttatcccca tgggattact

gatgtcaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc

cccattctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc

accaagtctg atcctaggtg cctgaccagg tactatagca gctttgtgaa catggagagg

gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggaatc tgtggaccag

aggggcaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag

aataggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg

cagctggagg accctgagtt ccaggcttct aacatcatgc atagcatcaa tgggtatgtg

tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta catcctgagc

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cctttctctg gggagactgt gttcatgagc

atggagaacc ctggcctgtg gattctgggc tgccataatt ctgacttcag aaacaggggc

atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaggac

tcttatgagg atatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccaggagc

ttcagccaga acccccctgt cctgaagagg catcagaggg agatcactag gaccaccctg

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggaaat gaagaaggag

gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggtctttcca gaagaagacc

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc tagcagcccc

catgtgctga ggaacagagc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttt

caggagttca ctgatgggag cttcactcag cccctgtata ggggggagct gaatgagcat

ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc

aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tactcttctc tgatcagcta tgaggaggat

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtcaagc ctaatgagac taagacctac

ttttggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgattg caaggcctgg

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg

ctggtgtgtc acaccaatac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtcac tgtgcaggag

tttgccctgt ttttcactat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaacatg

gaaaggaatt gcagggctcc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaac

tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct

caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa catccacagc

atccactttt ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg

tacaatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg

gtgtactcta acaagtgcca gactcccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggacttc

cagatcactg cctctgggca gtatggccag tgggccccta agctggctag gctgcattac

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg

ctggccccta tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccagacagaa gttctcttct

ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac

agggggaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc

aagcataata ttttcaaccc ccccattatt gctaggtaca tcaggctgca cccaacccac

tactctatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgtagc

atgcccctgg gcatggagag caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac

tttaccaaca tgtttgctac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggattttcag

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga aaagcctgct gactagcatg

tatgtgaagg agtttctgat cagcagctct caggatggcc atcagtggac cctgttcttc

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggata gcttcacccc tgtggtgaat

agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc atccccagag ctgggtgcac

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaagccc aggacctgta ctga

кДНК дикого типа фактора VIII-BDD (SEQ ID NO:19)

ATGCAAATAG AGCTCTCCAC CTGCTTCTTT CTGTGCCTTT TGCGATTCTG CTTTAGTGCC

ACCAGAAGAT ACTACCTGGG TGCAGTGGAA CTGTCATGGG ACTATATGCA AAGTGATCTC

GGTGAGCTGC CTGTGGACGC AAGATTTCCT CCTAGAGTGC CAAAATCTTT TCCATTCAAC

ACCTCAGTCG TGTACAAAAA GACTCTGTTT GTAGAATTCA CGGATCACCT TTTCAACATC

GCTAAGCCAA GGCCACCCTG GATGGGTCTG CTAGGTCCTA CCATCCAGGC TGAGGTTTAT

GATACAGTGG TCATTACACT TAAGAACATG GCTTCCCATC CTGTCAGTCT TCATGCTGTT

GGTGTATCCT ACTGGAAAGC TTCTGAGGGA GCTGAATATG ATGATCAGAC CAGTCAAAGG

GAGAAAGAAG ATGATAAAGT CTTCCCTGGT GGAAGCCATA CATATGTCTG GCAGGTCCTG

AAAGAGAATG GTCCAATGGC CTCTGACCCA CTGTGCCTTA CCTACTCATA TCTTTCTCAT

GTGGACCTGG TAAAAGACTT GAATTCAGGC CTCATTGGAG CCCTACTAGT ATGTAGAGAA

GGGAGTCTGG CCAAGGAAAA GACACAGACC TTGCACAAAT TTATACTACT TTTTGCTGTA

TTTGATGAAG GGAAAAGTTG GCACTCAGAA ACAAAGAACT CCTTGATGCA GGATAGGGAT

GCTGCATCTG CTCGGGCCTG GCCTAAAATG CACACAGTCA ATGGTTATGT AAACAGGTCT

CTGCCAGGTC TGATTGGATG CCACAGGAAA TCAGTCTATT GGCATGTGAT TGGAATGGGC

ACCACTCCTG AAGTGCACTC AATATTCCTC GAAGGTCACA CATTTCTTGT GAGGAACCAT

CGCCAGGCGT CCTTGGAAAT CTCGCCAATA ACTTTCCTTA CTGCTCAAAC ACTCTTGATG

GACCTTGGAC AGTTTCTACT GTTTTGTCAT ATCTCTTCCC ACCAACATGA TGGCATGGAA

GCTTATGTCA AAGTAGACAG CTGTCCAGAG GAACCCCAAC TACGAATGAA AAATAATGAA

GAAGCGGAAG ACTATGATGA TGATCTTACT GATTCTGAAA TGGATGTGGT CAGGTTTGAT

GATGACAACT CTCCTTCCTT TATCCAAATT CGCTCAGTTG CCAAGAAGCA TCCTAAAACT

TGGGTACATT ACATTGCTGC TGAAGAGGAG GACTGGGACT ATGCTCCCTT AGTCCTCGCC

CCCGATGACA GAAGTTATAA AAGTCAATAT TTGAACAATG GCCCTCAGCG GATTGGTAGG

AAGTACAAAA AAGTCCGATT TATGGCATAC ACAGATGAAA CCTTTAAGAC TCGTGAAGCT

ATTCAGCATG AATCAGGAAT CTTGGGACCT TTACTTTATG GGGAAGTTGG AGACACACTG

TTGATTATAT TTAAGAATCA AGCAAGCAGA CCATATAACA TCTACCCTCA CGGAATCACT

GATGTCCGTC CTTTGTATTC AAGGAGATTA CCAAAAGGTG TAAAACATTT GAAGGATTTT

CCAATTCTGC CAGGAGAAAT ATTCAAATAT AAATGGACAG TGACTGTAGA AGATGGGCCA

ACTAAATCAG ATCCTCGGTG CCTGACCCGC TATTACTCTA GTTTCGTTAA TATGGAGAGA

GATCTAGCTT CAGGACTCAT TGGCCCTCTC CTCATCTGCT ACAAAGAATC TGTAGATCAA

AGAGGAAACC AGATAATGTC AGACAAGAGG AATGTCATCC TGTTTTCTGT ATTTGATGAG

AACCGAAGCT GGTACCTCAC AGAGAATATA CAACGCTTTC TCCCCAATCC AGCTGGAGTG

CAGCTTGAGG ATCCAGAGTT CCAAGCCTCC AACATCATGC ACAGCATCAA TGGCTATGTT

TTTGATAGTT TGCAGTTGTC AGTTTGTTTG CATGAGGTGG CATACTGGTA CATTCTAAGC

ATTGGAGCAC AGACTGACTT CCTTTCTGTC TTCTTCTCTG GATATACCTT CAAACACAAA

ATGGTCTATG AAGACACACT CACCCTATTC CCATTCTCAG GAGAAACTGT CTTCATGTCG

ATGGAAAACC CAGGTCTATG GATTCTGGGG TGCCACAACT CAGACTTTCG GAACAGAGGC

ATGACCGCCT TACTGAAGGT TTCTAGTTGT GACAAGAACA CTGGTGATTA TTACGAGGAC

AGTTATGAAG ATATTTCAGC ATACTTGCTG AGTAAAAACA ATGCCATTGA ACCAAGAAGC

TTCTCCCAAA ACCCACCAGT CTTGAAACGC CATCAACGGG AAATAACTCG TACTACTCTT

CAGTCAGATC AAGAGGAAAT TGACTATGAT GATACCATAT CAGTTGAAAT GAAGAAGGAA

GATTTTGACA TTTATGATGA GGATGAAAAT CAGAGCCCCC GCAGCTTTCA AAAGAAAACA

CGACACTATT TTATTGCTGC AGTGGAGAGG CTCTGGGATT ATGGGATGAG TAGCTCCCCA

CATGTTCTAA GAAACAGGGC TCAGAGTGGC AGTGTCCCTC AGTTCAAGAA AGTTGTTTTC

CAGGAATTTA CTGATGGCTC CTTTACTCAG CCCTTATACC GTGGAGAACT AAATGAACAT

TTGGGACTCC TGGGGCCATA TATAAGAGCA GAAGTTGAAG ATAATATCAT GGTAACTTTC

AGAAATCAGG CCTCTCGTCC CTATTCCTTC TATTCTAGCC TTATTTCTTA TGAGGAAGAT

CAGAGGCAAG GAGCAGAACC TAGAAAAAAC TTTGTCAAGC CTAATGAAAC CAAAACTTAC

TTTTGGAAAG TGCAACATCA TATGGCACCC ACTAAAGATG AGTTTGACTG CAAAGCCTGG

GCTTATTTCT CTGATGTTGA CCTGGAAAAA GATGTGCACT CAGGCCTGAT TGGACCCCTT

CTGGTCTGCC ACACTAACAC ACTGAACCCT GCTCATGGGA GACAAGTGAC AGTACAGGAA

TTTGCTCTGT TTTTCACCAT CTTTGATGAG ACCAAAAGCT GGTACTTCAC TGAAAATATG

GAAAGAAACT GCAGGGCTCC CTGCAATATC CAGATGGAAG ATCCCACTTT TAAAGAGAAT

TATCGCTTCC ATGCAATCAA TGGCTACATA ATGGATACAC TACCTGGCTT AGTAATGGCT

CAGGATCAAA GGATTCGATG GTATCTGCTC AGCATGGGCA GCAATGAAAA CATCCATTCT

ATTCATTTCA GTGGACATGT GTTCACCGTA CGAAAAAAAG AGGAGTATAA AATGGCACTG

TACAATCTCT ATCCAGGTGT TTTTGAGACA GTGGAAATGT TACCATCCAA AGCTGGAATT

TGGCGGGTGG AATGCCTTAT TGGCGAGCAT CTACATGCTG GGATGAGCAC ACTTTTTCTG

GTGTACAGCA ATAAGTGTCA GACTCCCCTG GGAATGGCTT CTGGACACAT TAGAGATTTT

CAGATTACAG CTTCAGGACA ATATGGACAG TGGGCCCCAA AGCTGGCCAG ACTTCATTAT

TCCGGATCAA TCAATGCCTG GAGCACCAAG GAGCCCTTTT CTTGGATCAA GGTGGATCTG

TTGGCACCAA TGATTATTCA CGGCATCAAG ACCCAGGGTG CCCGTCAGAA GTTCTCCAGC

CTCTACATCT CTCAGTTTAT CATCATGTAT AGTCTTGATG GGAAGAAGTG GCAGACTTAT

CGAGGAAATT CCACTGGAAC CTTAATGGTC TTCTTTGGCA ATGTGGATTC ATCTGGGATA

AAACACAATA TTTTTAACCC TCCAATTATT GCTCGATACA TCCGTTTGCA CCCAACTCAT

TATAGCATTC GCAGCACTCT TCGCATGGAG TTGATGGGCT GTGATTTAAA TAGTTGCAGC

ATGCCATTGG GAATGGAGAG TAAAGCAATA TCAGATGCAC AGATTACTGC TTCATCCTAC

TTTACCAATA TGTTTGCCAC CTGGTCTCCT TCAAAAGCTC GACTTCACCT CCAAGGGAGG

AGTAATGCCT GGAGACCTCA GGTGAATAAT CCAAAAGAGT GGCTGCAAGT GGACTTCCAG

AAGACAATGA AAGTCACAGG AGTAACTACT CAGGGAGTAA AATCTCTGCT TACCAGCATG

TATGTGAAGG AGTTCCTCAT CTCCAGCAGT CAAGATGGCC ATCAGTGGAC TCTCTTTTTT

CAGAATGGCA AAGTAAAGGT TTTTCAGGGA AATCAAGACT CCTTCACACC TGTGGTGAAC

TCTCTAGACC CACCGTTACT GACTCGCTAC CTTCGAATTC ACCCCCAGAG TTGGGTGCAC

CAGATTGCCC TGAGGATGGA GGTTCTGGGC TGCGAGGCAC AGGACCTCTA CTGA

кДНК V3 фактора VIII (SEQ ID NO:20)

ATGCAGATTGAGCTGAGCACCTGCTTCTTCCTGTGCCTGCTGAGGTTCTGCTTCTCTGCCACCAGGAGATACTACCTGGGGGCTGTGGAGCTGAGCTGGGACTACATGCAGTCTGACCTGGGGGAGCTGCCTGTGGATGCCAGGTTCCCCCCCAGAGTGCCCAAGAGCTTCCCCTTCAACACCTCTGTGGTGTACAAGAAGACCCTGTTTGTGGAGTTCACTGACCACCTGTTCAACATTGCCAAGCCCAGGCCCCCCTGGATGGGCCTGCTGGGCCCCACCATCCAGGCTGAGGTGTATGACACTGTGGTGATCACCCTGAAGAACATGGCCAGCCACCCTGTGAGCCTGCATGCTGTGGGGGTGAGCTACTGGAAGGCCTCTGAGGGGGCTGAGTATGATGACCAGACCAGCCAGAGGGAGAAGGAGGATGACAAGGTGTTCCCTGGGGGCAGCCACACCTATGTGTGGCAGGTGCTGAAGGAGAATGGCCCCATGGCCTCTGACCCCCTGTGCCTGACCTACAGCTACCTGAGCCATGTGGACCTGGTGAAGGACCTGAACTCTGGCCTGATTGGGGCCCTGCTGGTGTGCAGGGAGGGCAGCCTGGCCAAGGAGAAGACCCAGACCCTGCACAAGTTCATCCTGCTGTTTGCTGTGTTTGATGAGGGCAAGAGCTGGCACTCTGAAACCAAGAACAGCCTGATGCAGGACAGGGATGCTGCCTCTGCCAGGGCCTGGCCCAAGATGCACACTGTGAATGGCTATGTGAACAGGAGCCTGCCTGGCCTGATTGGCTGCCACAGGAAGTCTGTGTACTGGCATGTGATTGGCATGGGCACCACCCCTGAGGTGCACAGCATCTTCCTGGAGGGCCACACCTTCCTGGTCAGGAACCACAGGCAGGCCAGCCTGGAGATCAGCCCCATCACCTTCCTGACTGCCCAGACCCTGCTGATGGACCTGGGCCAGTTCCTGCTGTTCTGCCACATCAGCAGCCACCAGCATGATGGCATGGAGGCCTATGTGAAGGTGGACAGCTGCCCTGAGGAGCCCCAGCTGAGGATGAAGAACAATGAGGAGGCTGAGGACTATGATGATGACCTGACTGACTCTGAGATGGATGTGGTGAGGTTTGATGATGACAACAGCCCCAGCTTCATCCAGATCAGGTCTGTGGCCAAGAAGCACCCCAAGACCTGGGTGCACTACATTGCTGCTGAGGAGGAGGACTGGGACTATGCCCCCCTGGTGCTGGCCCCTGATGACAGGAGCTACAAGAGCCAGTACCTGAACAATGGCCCCCAGAGGATTGGCAGGAAGTACAAGAAGGTCAGGTTCATGGCCTACACTGATGAAACCTTCAAGACCAGGGAGGCCATCCAGCATGAGTCTGGCATCCTGGGCCCCCTGCTGTATGGGGAGGTGGGGGACACCCTGCTGATCATCTTCAAGAACCAGGCCAGCAGGCCCTACAACATCTACCCCCATGGCATCACTGATGTGAGGCCCCTGTACAGCAGGAGGCTGCCCAAGGGGGTGAAGCACCTGAAGGACTTCCCCATCCTGCCTGGGGAGATCTTCAAGTACAAGTGGACTGTGACTGTGGAGGATGGCCCCACCAAGTCTGACCCCAGGTGCCTGACCAGATACTACAGCAGCTTTGTGAACATGGAGAGGGACCTGGCCTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGATCTGCTACAAGGAGTCTGTGGACCAGAGGGGCAACCAGATCATGTCTGACAAGAGGAATGTGATCCTGTTCTCTGTGTTTGATGAGAACAGGAGCTGGTACCTGACTGAGAACATCCAGAGGTTCCTGCCCAACCCTGCTGGGGTGCAGCTGGAGGACCCTGAGTTCCAGGCCAGCAACATCATGCACAGCATCAATGGCTATGTGTTTGACAGCCTGCAGCTGTCTGTGTGCCTGCATGAGGTGGCCTACTGGTACATCCTGAGCATTGGGGCCCAGACTGACTTCCTGTCTGTGTTCTTCTCTGGCTACACCTTCAAGCACAAGATGGTGTATGAGGACACCCTGACCCTGTTCCCCTTCTCTGGGGAGACTGTGTTCATGAGCATGGAGAACCCTGGCCTGTGGATTCTGGGCTGCCACAACTCTGACTTCAGGAACAGGGGCATGACTGCCCTGCTGAAAGTCTCCAGCTGTGACAAGAACACTGGGGACTACTATGAGGACAGCTATGAGGACATCTCTGCCTACCTGCTGAGCAAGAACAATGCCATTGAGCCCAGGAGCTTCAGCCAGAACAGCAGGCACCCCAGCACCAGGCAGAAGCAGTTCAATGCCACCACCATCCCTGAGAATGACATAGAGAAGACAGACCCATGGTTTGCCCACCGGACCCCCATGCCCAAGATCCAGAATGTGAGCAGCTCTGACCTGCTGATGCTGCTGAGGCAGAGCCCCACCCCCCATGGCCTGAGCCTGTCTGACCTGCAGGAGGCCAAGTATGAAACCTTCTCTGATGACCCCAGCCCTGGGGCCATTGACAGCAACAACAGCCTGTCTGAGATGACCCACTTCAGGCCCCAGCTGCACCACTCTGGGGACATGGTGTTCACCCCTGAGTCTGGCCTGCAGCTGAGGCTGAATGAGAAGCTGGGCACCACTGCTGCCACTGAGCTGAAGAAGCTGGACTTCAAAGTCTCCAGCACCAGCAACAACCTGATCAGCACCATCCCCTCTGACAACCTGGCTGCTGGCACTGACAACACCAGCAGCCTGGGCCCCCCCAGCATGCCTGTGCACTATGACAGCCAGCTGGACACCACCCTGTTTGGCAAGAAGAGCAGCCCCCTGACTGAGTCTGGGGGCCCCCTGAGCCTGTCTGAGGAGAACAATGACAGCAAGCTGCTGGAGTCTGGCCTGATGAACAGCCAGGAGAGCAGCTGGGGCAAGAATGTGAGCACCAGGAGCTTCCAGAAGAAGACCAGGCACTACTTCATTGCTGCTGTGGAGAGGCTGTGGGACTATGGCATGAGCAGCAGCCCCCATGTGCTGAGGAACAGGGCCCAGTCTGGCTCTGTGCCCCAGTTCAAGAAGGTGGTGTTCCAGGAGTTCACTGATGGCAGCTTCACCCAGCCCCTGTACAGAGGGGAGCTGAATGAGCACCTGGGCCTGCTGGGCCCCTACATCAGGGCTGAGGTGGAGGACAACATCATGGTGACCTTCAGGAACCAGGCCAGCAGGCCCTACAGCTTCTACAGCAGCCTGATCAGCTATGAGGAGGACCAGAGGCAGGGGGCTGAGCCCAGGAAGAACTTTGTGAAGCCCAATGAAACCAAGACCTACTTCTGGAAGGTGCAGCACCACATGGCCCCCACCAAGGATGAGTTTGACTGCAAGGCCTGGGCCTACTTCTCTGATGTGGACCTGGAGAAGGATGTGCACTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGGTGTGCCACACCAACACCCTGAACCCTGCCCATGGCAGGCAGGTGACTGTGCAGGAGTTTGCCCTGTTCTTCACCATCTTTGATGAAACCAAGAGCTGGTACTTCACTGAGAACATGGAGAGGAACTGCAGGGCCCCCTGCAACATCCAGATGGAGGACCCCACCTTCAAGGAGAACTACAGGTTCCATGCCATCAATGGCTACATCATGGACACCCTGCCTGGCCTGGTGATGGCCCAGGACCAGAGGATCAGGTGGTACCTGCTGAGCATGGGCAGCAATGAGAACATCCACAGCATCCACTTCTCTGGCCATGTGTTCACTGTGAGGAAGAAGGAGGAGTACAAGATGGCCCTGTACAACCTGTACCCTGGGGTGTTTGAGACTGTGGAGATGCTGCCCAGCAAGGCTGGCATCTGGAGGGTGGAGTGCCTGATTGGGGAGCACCTGCATGCTGGCATGAGCACCCTGTTCCTGGTGTACAGCAACAAGTGCCAGACCCCCCTGGGCATGGCCTCTGGCCACATCAGGGACTTCCAGATCACTGCCTCTGGCCAGTATGGCCAGTGGGCCCCCAAGCTGGCCAGGCTGCACTACTCTGGCAGCATCAATGCCTGGAGCACCAAGGAGCCCTTCAGCTGGATCAAGGTGGACCTGCTGGCCCCCATGATCATCCATGGCATCAAGACCCAGGGGGCCAGGCAGAAGTTCAGCAGCCTGTACATCAGCCAGTTCATCATCATGTACAGCCTGGATGGCAAGAAGTGGCAGACCTACAGGGGCAACAGCACTGGCACCCTGATGGTGTTCTTTGGCAATGTGGACAGCTCTGGCATCAAGCACAACATCTTCAACCCCCCCATCATTGCCAGATACATCAGGCTGCACCCCACCCACTACAGCATCAGGAGCACCCTGAGGATGGAGCTGATGGGCTGTGACCTGAACAGCTGCAGCATGCCCCTGGGCATGGAGAGCAAGGCCATCTCTGATGCCCAGATCACTGCCAGCAGCTACTTCACCAACATGTTTGCCACCTGGAGCCCCAGCAAGGCCAGGCTGCACCTGCAGGGCAGGAGCAATGCCTGGAGGCCCCAGGTCAACAACCCCAAGGAGTGGCTGCAGGTGGACTTCCAGAAGACCATGAAGGTGACTGGGGTGACCACCCAGGGGGTGAAGAGCCTGCTGACCAGCATGTATGTGAAGGAGTTCCTGATCAGCAGCAGCCAGGATGGCCACCAGTGGACCCTGTTCTTCCAGAATGGCAAGGTGAAGGTGTTCCAGGGCAACCAGGACAGCTTCACCCCTGTGGTGAACAGCCTGGACCCCCCCCTGCTGACCAGATACCTGAGGATTCACCCCCAGAGCTGGGTGCACCAGATTGCCCTGAGGATGGAGGTGCTGGGCTGTGAGGCCCAGGACCTGTACTGA

кДНК CO3 фактора VIII (SEQ ID NO:21)

atgcagattg agctgtcaac ttgctttttc ctgtgcctgc tgagattttg tttttccgct

actagaagat actacctggg ggctgtggaa ctgtcttggg attacatgca gagtgacctg

ggagagctgc cagtggacgc acgatttcca cctagagtcc ctaaatcatt ccccttcaac

accagcgtgg tctataagaa aacactgttc gtggagttta ctgatcacct gttcaacatc

gctaagcctc ggccaccctg gatgggactg ctgggaccaa caatccaggc agaggtgtac

gacaccgtgg tcattacact gaaaaacatg gcctcacacc ccgtgagcct gcatgctgtg

ggcgtcagct actggaaggc ttccgaaggg gcagagtatg acgatcagac ttcccagaga

gaaaaagagg acgataaggt gtttcctggc gggtctcata cctatgtgtg gcaggtcctg

aaagagaatg gccccatggc ttccgaccct ctgtgcctga cctactctta tctgagtcac

gtggacctgg tcaaggatct gaacagcgga ctgatcggag cactgctggt gtgtagggaa

gggagcctgg ctaaggagaa aacccagaca ctgcataagt tcattctgct gttcgccgtg

tttgacgaag gaaaatcatg gcacagcgag acaaagaata gtctgatgca ggaccgggat

gccgcttcag ccagagcttg gcccaaaatg cacactgtga acggctacgt caatcgctca

ctgcctggac tgatcggctg ccaccgaaag agcgtgtatt ggcatgtcat cggaatgggc

accacacctg aagtgcactc cattttcctg gaggggcata cctttctggt ccgcaaccac

cgacaggcct ccctggagat ctctccaatt accttcctga cagctcagac tctgctgatg

gatctgggac agttcctgct gttttgccac atcagctccc accagcatga tggcatggag

gcctacgtga aagtggacag ctgtcccgag gaacctcagc tgaggatgaa gaacaatgag

gaagctgaag actatgacga tgacctgacc gactccgaga tggatgtggt ccgattcgat

gacgataaca gcccctcctt tatccagatt agatctgtgg ccaagaaaca ccctaagaca

tgggtccatt acatcgcagc cgaggaagag gactgggatt atgcaccact ggtgctggca

ccagacgatc gatcctacaa atctcagtat ctgaacaatg gaccacagcg gattggcaga

aagtacaaga aagtgaggtt catggcttat accgatgaaa ccttcaagac tcgcgaagca

atccagcacg agagcgggat tctgggacca ctgctgtacg gagaagtggg ggacaccctg

ctgatcattt ttaagaacca ggccagcagg ccttacaata tctatccaca tggaattaca

gatgtgcgcc ctctgtacag ccggagactg ccaaagggcg tcaaacacct gaaggacttc

ccaatcctgc ccggggaaat ttttaagtat aaatggactg tcaccgtcga ggatggcccc

actaagagcg accctaggtg cctgacccgc tactattcta gtttcgtgaa tatggaaagg

gatctggcca gcggactgat cggcccactg ctgatttgtt acaaagagag cgtggatcag

agaggcaacc agatcatgtc cgacaagagg aatgtgattc tgttcagtgt ctttgacgaa

aaccggtcat ggtatctgac cgagaacatc cagagattcc tgcctaatcc agccggagtg

cagctggaag atcctgagtt tcaggcttct aacatcatgc atagtattaa tggctacgtg

ttcgacagtc tgcagctgtc agtgtgtctg cacgaggtcg cttactggta tatcctgagc

attggagcac agacagattt cctgagcgtg ttcttttccg gctacacttt taagcataaa

atggtgtatg aggacacact gactctgttc cccttcagcg gcgaaaccgt gtttatgtcc

atggagaatc ccgggctgtg gatcctggga tgccacaaca gcgatttcag gaatcgcggg

atgactgccc tgctgaaagt gtcaagctgt gacaagaaca ccggagacta ctatgaagat

tcatacgagg acatcagcgc atatctgctg tccaaaaaca atgccattga acccaggtct

tttagtcaga atcctccagt gctgaagagg caccagcgcg agatcacccg cactaccctg

cagagtgatc aggaagagat cgactacgac gatacaattt ctgtggaaat gaagaaagag

gacttcgata tctatgacga agatgagaac cagagtcctc gatcattcca gaagaaaacc

cggcattact ttattgctgc agtggagcgc ctgtgggatt atggcatgtc ctctagtcct

cacgtgctgc gaaatcgggc ccagtcaggg agcgtcccac agttcaagaa agtggtcttc

caggagttta cagacggatc ctttactcag ccactgtacc ggggcgaact gaacgagcac

ctggggctgc tgggacccta tatcagagct gaagtggagg ataacattat ggtcaccttc

agaaatcagg catctaggcc ttacagtttt tattcaagcc tgatctctta cgaagaggac

cagaggcagg gagcagaacc acgaaaaaac ttcgtgaagc ctaatgagac caaaacatac

ttttggaagg tgcagcacca tatggcccca acaaaagacg aattcgattg caaggcatgg

gcctattttt ctgacgtgga tctggagaag gacgtccaca gtggcctgat cgggccactg

ctggtgtgtc atactaacac cctgaatccc gcacacggca ggcaggtcac tgtccaggaa

ttcgccctgt tctttaccat ctttgatgag acaaaaagct ggtacttcac cgaaaacatg

gagcgaaatt gccgggctcc atgtaatatt cagatggaag accccacatt caaggagaac

taccgctttc atgccatcaa tgggtatatt atggatactc tgcccggact ggtcatggct

caggaccaga gaatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ccaacgagaa tatccactca

attcatttca gcggacacgt gtttactgtc cggaagaaag aagagtataa aatggccctg

tacaacctgt atcccggcgt gttcgaaacc gtcgagatgc tgcctagcaa ggcagggatc

tggagagtgg aatgcctgat tggggagcac ctgcatgccg gaatgtctac cctgtttctg

gtgtacagta ataagtgtca gacacccctg gggatggctt ccggacatat ccgggatttc

cagattaccg catctggaca gtacggccag tgggccccta agctggctag actgcactat

tccgggtcta tcaacgcttg gtccacaaaa gagcctttct cttggattaa ggtggacctg

ctggcaccaa tgatcattca tggcatcaaa actcaggggg ccaggcagaa gttctcctct

ctgtacatct cacagtttat catcatgtac agcctggatg gcaagaaatg gcagacatac

cgcggcaata gcacagggac tctgatggtg ttctttggca acgtggacag ttcagggatc

aagcacaaca ttttcaatcc ccctatcatt gctagataca tcaggctgca cccaacccat

tattctattc gaagtacact gcggatggaa ctgatggggt gcgatctgaa cagttgttca

atgcccctgg gaatggagtc caaggcaatc tctgacgccc agattaccgc tagctcctac

ttcactaata tgtttgctac ctggagcccc tccaaagcac gactgcatct gcagggacga

agcaacgcat ggcgaccaca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt cgattttcag

aaaactatga aggtgaccgg agtcacaact cagggcgtga aaagtctgct gacctcaatg

tacgtcaagg agttcctgat ctctagttca caggacggcc accagtggac actgttcttt

cagaacggaa aggtgaaagt cttccagggc aatcaggatt cctttacacc tgtggtcaac

tctctggacc cacccctgct gactcgctac ctgcgaatcc acccacagtc ctgggtgcat

cagattgcac tgagaatgga agtcctgggc tgcgaggccc aggacctgta ttga

Полноразмерная кассета, содержащая мутированный промотор TTR (TTRmut), синтетический интрон, кДНК фактора VIII с пониженным содержанием CpG, поли-A и ITR (SEQ ID NO:23)

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca

actccatcac taggggttcc tacgcgtgtc tgtctgcaca tttcgtagag cgagtgttcc

gatactctaa tctccctagg caaggttcat attgacttag gttacttatt ctccttttgt

tgactaagtc aataatcaga atcagcaggt ttggagtcag cttggcaggg atcagcagcc

tgggttggaa ggagggggta taaaagcccc ttcaccagga gaagccgtca cacagatcca

caagctcctg ctagcaggta agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg

gttatggccc ttgcgtgcct tgaattactg acactgacat ccactttttc tttttctcca

caggtttaaa cgccaccatg cagattgagc tgagcacctg cttcttcctg tgtctgctga

ggttctgctt ctctgccacc aggaggtatt acctgggggc tgtggagctg agctgggact

atatgcagtc tgacctgggg gagctgcctg tggatgctag gttccccccc agggtgccca

agagcttccc ctttaacact tctgtggtgt acaagaagac cctgtttgtg gagttcactg

accacctgtt caacattgcc aagcccaggc ccccctggat ggggctgctg gggcccacca

tccaggctga ggtgtatgac actgtggtga tcaccctgaa gaacatggcc agccaccctg

tgagcctgca tgctgtgggg gtgagctact ggaaggcttc tgagggggct gagtatgatg

accagactag ccagagggag aaggaggatg acaaggtgtt tcctgggggc agccatacct

atgtgtggca ggtgctgaag gagaatggcc ccatggcctc tgaccccctg tgcctgacct

acagctacct gtctcatgtg gacctggtga aggacctgaa ctctggcctg attggggctc

tgctggtgtg tagggagggc agcctggcta aggaaaagac ccagaccctg cataagttta

tcctgctgtt tgctgtgttt gatgagggca agagctggca ctctgagacc aagaacagcc

tgatgcagga tagggatgct gcctctgcca gggcttggcc taagatgcac actgtgaatg

ggtatgtgaa taggagcctg cctggcctga ttggctgcca caggaagtct gtgtactggc

atgtgattgg gatgggcacc acccctgagg tccatagcat cttcctggag ggccacactt

tcctggtgag gaaccacaga caggcctctc tggagatctc tcccatcacc ttcctgactg

ctcagactct gctgatggac ctgggccagt tcctgctgtt ttgccatatt agcagccacc

agcatgatgg gatggaggcc tatgtgaagg tggatagctg ccctgaggag cctcagctga

ggatgaagaa caatgaggag gctgaagact atgatgatga cctgactgat tctgagatgg

atgtggtgag gtttgatgat gacaatagcc ccagcttcat tcagatcagg tctgtggcca

agaaacaccc caagacctgg gtgcactaca ttgctgctga ggaagaggac tgggactatg

ctcccctggt gctggcccct gatgataggt cttataagag ccagtacctg aacaatgggc

cccagaggat tggcaggaag tacaagaagg tgaggttcat ggcctacact gatgaaacct

tcaaaaccag ggaggccatt cagcatgagt ctggcatcct gggccctctg ctgtatgggg

aggtggggga caccctgctg atcatcttca agaaccaggc cagcaggccc tacaacatct

atcctcatgg catcactgat gtgaggcccc tgtacagcag gaggctgccc aagggggtga

agcacctgaa agacttcccc atcctgcctg gggagatctt taagtataag tggactgtga

ctgtggagga tggccctacc aagtctgacc ccaggtgtct gaccaggtac tattctagct

ttgtgaacat ggagagggac ctggcctctg gcctgattgg gcccctgctg atctgctaca

aggagtctgt ggaccagagg ggcaaccaga tcatgtctga caagaggaat gtgatcctgt

tttctgtgtt tgatgagaat aggagctggt acctgactga gaacatccag aggtttctgc

ccaatcctgc tggggtgcag ctggaggatc ctgagttcca ggccagcaat atcatgcata

gcatcaatgg ctatgtgttt gacagcctgc agctgtctgt gtgcctgcat gaggtggcct

actggtacat cctgagcatt ggggcccaga ctgactttct gtctgtgttc ttttctggct

ataccttcaa gcacaagatg gtgtatgagg ataccctgac cctgttcccc ttctctgggg

agactgtgtt catgagcatg gagaatcctg ggctgtggat cctggggtgc cacaactctg

attttaggaa cagggggatg actgccctgc tgaaggtgtc tagctgtgat aagaacactg

gggactacta tgaggacagc tatgaggaca tttctgctta tctgctgtct aagaataatg

ccattgagcc cagaagcttc agccagaatc cccctgtgct gaagagacat cagagggaga

tcaccagaac taccctgcag tctgatcagg aggagattga ctatgatgac actatctctg

tggagatgaa gaaggaggac tttgacatct atgatgagga tgagaatcag tctcccagga

gctttcagaa gaagaccaga cattacttca ttgctgctgt ggagaggctg tgggactatg

gcatgagctc tagccctcat gtgctgagga acagggccca gtctggctct gtgccccagt

tcaagaaggt ggtgttccag gaattcactg atggcagctt cacccagccc ctgtacaggg

gggagctgaa tgagcacctg ggcctgctgg ggccttatat cagggctgag gtggaggata

atattatggt gactttcagg aaccaggcca gcaggcccta ctctttctat agcagcctga

tctcttatga ggaggatcag aggcaggggg ctgagcctag gaagaacttt gtgaagccca

atgagactaa gacctacttc tggaaggtcc agcaccacat ggcccctacc aaggatgagt

ttgactgcaa ggcctgggcc tatttctctg atgtggatct ggagaaggat gtccattctg

ggctgattgg ccccctgctg gtgtgccaca ctaacactct gaatcctgcc catggcaggc

aggtgactgt ccaggagttt gccctgttct tcactatctt tgatgagacc aagagctggt

actttactga gaacatggag aggaactgca gagctccttg caatattcag atggaggacc

ccaccttcaa ggagaattac aggttccatg ccattaatgg gtacatcatg gacaccctgc

ctggcctggt gatggctcag gaccagagga tcaggtggta cctgctgagc atgggctcta

atgagaatat ccacagcatc cacttctctg ggcatgtgtt cactgtgagg aagaaggagg

agtacaagat ggctctgtat aatctgtacc ctggggtgtt tgaaactgtg gagatgctgc

cctctaaggc tggcatctgg agggtggagt gcctgattgg ggagcacctg catgctggca

tgagcaccct gttcctggtg tacagcaaca agtgccagac ccccctgggc atggcctctg

gccacatcag ggacttccag atcactgcct ctggccagta tggccagtgg gcccccaagc

tggccaggct gcactattct ggcagcatca atgcctggag caccaaggag cccttcagct

ggatcaaggt ggacctgctg gcccccatga tcattcatgg catcaagacc cagggggcca

ggcagaagtt cagctctctg tacatctctc agttcatcat catgtactct ctggatggga

agaagtggca gacctacagg ggcaacagca ctggcaccct gatggtgttc tttgggaatg

tggactcttc tggcatcaag cacaacatct tcaatccccc catcattgct aggtatatta

ggctgcatcc cacccactac agcatcaggt ctaccctgag gatggagctg atgggctgtg

acctgaactc ttgcagcatg cccctgggca tggagtctaa ggccatctct gatgcccaga

ttactgccag cagctacttc accaacatgt ttgccacctg gagcccctct aaggccaggc

tgcatctgca ggggaggagc aatgcctgga ggcctcaggt gaacaacccc aaggagtggc

tgcaggtgga tttccagaag accatgaagg tgactggggt gaccacccag ggggtcaaga

gcctgctgac cagcatgtat gtgaaggagt tcctgatcag cagcagccag gatggccacc

agtggactct gttctttcag aatgggaagg tgaaggtgtt tcagggcaat caggactctt

tcacccctgt ggtgaacagc ctggaccccc ccctgctgac cagatacctg aggatccacc

cccagtcttg ggtgcatcag attgccctga ggatggaggt gctgggctgt gaggctcagg

atctgtactg agcggccgca ataaaagatc agagctctag agatctgtgt gttggttttt

tgtgtaggaa cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac

tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag

cgagcgagcg cgcagctgcc tgcagg

Полноразмерная плазмида, содержащая мутированный промотор TTR (TTRmut), синтетический интрон, кДНК с пониженным содержанием CpG, кодирующая фактор VIII, поли-A и ITR (SEQ ID NO:24)

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca

actccatcac taggggttcc tacgcgtgtc tgtctgcaca tttcgtagag cgagtgttcc

gatactctaa tctccctagg caaggttcat attgacttag gttacttatt ctccttttgt

tgactaagtc aataatcaga atcagcaggt ttggagtcag cttggcaggg atcagcagcc

tgggttggaa ggagggggta taaaagcccc ttcaccagga gaagccgtca cacagatcca

caagctcctg ctagcaggta agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg

gttatggccc ttgcgtgcct tgaattactg acactgacat ccactttttc tttttctcca

caggtttaaa cgccaccatg cagattgagc tgagcacctg cttcttcctg tgtctgctga

ggttctgctt ctctgccacc aggaggtatt acctgggggc tgtggagctg agctgggact

atatgcagtc tgacctgggg gagctgcctg tggatgctag gttccccccc agggtgccca

agagcttccc ctttaacact tctgtggtgt acaagaagac cctgtttgtg gagttcactg

accacctgtt caacattgcc aagcccaggc ccccctggat ggggctgctg gggcccacca

tccaggctga ggtgtatgac actgtggtga tcaccctgaa gaacatggcc agccaccctg

tgagcctgca tgctgtgggg gtgagctact ggaaggcttc tgagggggct gagtatgatg

accagactag ccagagggag aaggaggatg acaaggtgtt tcctgggggc agccatacct

atgtgtggca ggtgctgaag gagaatggcc ccatggcctc tgaccccctg tgcctgacct

acagctacct gtctcatgtg gacctggtga aggacctgaa ctctggcctg attggggctc

tgctggtgtg tagggagggc agcctggcta aggaaaagac ccagaccctg cataagttta

tcctgctgtt tgctgtgttt gatgagggca agagctggca ctctgagacc aagaacagcc

tgatgcagga tagggatgct gcctctgcca gggcttggcc taagatgcac actgtgaatg

ggtatgtgaa taggagcctg cctggcctga ttggctgcca caggaagtct gtgtactggc

atgtgattgg gatgggcacc acccctgagg tccatagcat cttcctggag ggccacactt

tcctggtgag gaaccacaga caggcctctc tggagatctc tcccatcacc ttcctgactg

ctcagactct gctgatggac ctgggccagt tcctgctgtt ttgccatatt agcagccacc

agcatgatgg gatggaggcc tatgtgaagg tggatagctg ccctgaggag cctcagctga

ggatgaagaa caatgaggag gctgaagact atgatgatga cctgactgat tctgagatgg

atgtggtgag gtttgatgat gacaatagcc ccagcttcat tcagatcagg tctgtggcca

agaaacaccc caagacctgg gtgcactaca ttgctgctga ggaagaggac tgggactatg

ctcccctggt gctggcccct gatgataggt cttataagag ccagtacctg aacaatgggc

cccagaggat tggcaggaag tacaagaagg tgaggttcat ggcctacact gatgaaacct

tcaaaaccag ggaggccatt cagcatgagt ctggcatcct gggccctctg ctgtatgggg

aggtggggga caccctgctg atcatcttca agaaccaggc cagcaggccc tacaacatct

atcctcatgg catcactgat gtgaggcccc tgtacagcag gaggctgccc aagggggtga

agcacctgaa agacttcccc atcctgcctg gggagatctt taagtataag tggactgtga

ctgtggagga tggccctacc aagtctgacc ccaggtgtct gaccaggtac tattctagct

ttgtgaacat ggagagggac ctggcctctg gcctgattgg gcccctgctg atctgctaca

aggagtctgt ggaccagagg ggcaaccaga tcatgtctga caagaggaat gtgatcctgt

tttctgtgtt tgatgagaat aggagctggt acctgactga gaacatccag aggtttctgc

ccaatcctgc tggggtgcag ctggaggatc ctgagttcca ggccagcaat atcatgcata

gcatcaatgg ctatgtgttt gacagcctgc agctgtctgt gtgcctgcat gaggtggcct

actggtacat cctgagcatt ggggcccaga ctgactttct gtctgtgttc ttttctggct

ataccttcaa gcacaagatg gtgtatgagg ataccctgac cctgttcccc ttctctgggg

agactgtgtt catgagcatg gagaatcctg ggctgtggat cctggggtgc cacaactctg

attttaggaa cagggggatg actgccctgc tgaaggtgtc tagctgtgat aagaacactg

gggactacta tgaggacagc tatgaggaca tttctgctta tctgctgtct aagaataatg

ccattgagcc cagaagcttc agccagaatc cccctgtgct gaagagacat cagagggaga

tcaccagaac taccctgcag tctgatcagg aggagattga ctatgatgac actatctctg

tggagatgaa gaaggaggac tttgacatct atgatgagga tgagaatcag tctcccagga

gctttcagaa gaagaccaga cattacttca ttgctgctgt ggagaggctg tgggactatg

gcatgagctc tagccctcat gtgctgagga acagggccca gtctggctct gtgccccagt

tcaagaaggt ggtgttccag gaattcactg atggcagctt cacccagccc ctgtacaggg

gggagctgaa tgagcacctg ggcctgctgg ggccttatat cagggctgag gtggaggata

atattatggt gactttcagg aaccaggcca gcaggcccta ctctttctat agcagcctga

tctcttatga ggaggatcag aggcaggggg ctgagcctag gaagaacttt gtgaagccca

atgagactaa gacctacttc tggaaggtcc agcaccacat ggcccctacc aaggatgagt

ttgactgcaa ggcctgggcc tatttctctg atgtggatct ggagaaggat gtccattctg

ggctgattgg ccccctgctg gtgtgccaca ctaacactct gaatcctgcc catggcaggc

aggtgactgt ccaggagttt gccctgttct tcactatctt tgatgagacc aagagctggt

actttactga gaacatggag aggaactgca gagctccttg caatattcag atggaggacc

ccaccttcaa ggagaattac aggttccatg ccattaatgg gtacatcatg gacaccctgc

ctggcctggt gatggctcag gaccagagga tcaggtggta cctgctgagc atgggctcta

atgagaatat ccacagcatc cacttctctg ggcatgtgtt cactgtgagg aagaaggagg

agtacaagat ggctctgtat aatctgtacc ctggggtgtt tgaaactgtg gagatgctgc

cctctaaggc tggcatctgg agggtggagt gcctgattgg ggagcacctg catgctggca

tgagcaccct gttcctggtg tacagcaaca agtgccagac ccccctgggc atggcctctg

gccacatcag ggacttccag atcactgcct ctggccagta tggccagtgg gcccccaagc

tggccaggct gcactattct ggcagcatca atgcctggag caccaaggag cccttcagct

ggatcaaggt ggacctgctg gcccccatga tcattcatgg catcaagacc cagggggcca

ggcagaagtt cagctctctg tacatctctc agttcatcat catgtactct ctggatggga

agaagtggca gacctacagg ggcaacagca ctggcaccct gatggtgttc tttgggaatg

tggactcttc tggcatcaag cacaacatct tcaatccccc catcattgct aggtatatta

ggctgcatcc cacccactac agcatcaggt ctaccctgag gatggagctg atgggctgtg

acctgaactc ttgcagcatg cccctgggca tggagtctaa ggccatctct gatgcccaga

ttactgccag cagctacttc accaacatgt ttgccacctg gagcccctct aaggccaggc

tgcatctgca ggggaggagc aatgcctgga ggcctcaggt gaacaacccc aaggagtggc

tgcaggtgga tttccagaag accatgaagg tgactggggt gaccacccag ggggtcaaga

gcctgctgac cagcatgtat gtgaaggagt tcctgatcag cagcagccag gatggccacc

agtggactct gttctttcag aatgggaagg tgaaggtgtt tcagggcaat caggactctt

tcacccctgt ggtgaacagc ctggaccccc ccctgctgac cagatacctg aggatccacc

cccagtcttg ggtgcatcag attgccctga ggatggaggt gctgggctgt gaggctcagg

atctgtactg agcggccgca ataaaagatc agagctctag agatctgtgt gttggttttt

tgtgtaggaa cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac

tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag

cgagcgagcg cgcagctgcc tgcaggggca gcttgaagga aatactaagg caaaggtact

gcaagtgctc gcaacattcg cttatgcgga ttattgccgt agtgccgcga cgccgggggc

aagatgcaga gattgccatg gtacaggccg tgcggttgat attgccaaaa cagagctgtg

ggggagagtt gtcgagaaag agtgcggaag atgcaaaggc gtcggctatt caaggatgcc

agcaagcgca gcatatcgcg ctgtgacgat gctaatccca aaccttaccc aacccacctg

gtcacgcact gttaagccgc tgtatgacgc tctggtggtg caatgccaca aagaagagtc

aatcgcagac aacattttga atgcggtcac acgttagcag catgattgcc acggatggca

acatattaac ggcatgatat tgacttattg aataaaattg ggtaaatttg actcaacgat

gggttaattc gctcgttgtg gtagtgagat gaaaagaggc ggcgcttact accgattccg

cctagttggt cacttcgacg tatcgtctgg aactccaacc atcgcaggca gagaggtctg

caaaatgcaa tcccgaaaca gttcgcaggt aatagttaga gcctgcataa cggtttcggg

attttttata tctgcacaac aggtaagagc attgagtcga taatcgtgaa gagtcggcga

gcctggttag ccagtgctct ttccgttgtg ctgaattaag cgaataccgg aagcagaacc

ggatcaccaa atgcgtacag gcgtcatcgc cgcccagcaa cagcacaacc caaactgagc

cgtagccact gtctgtcctg aattcattag taatagttac gctgcggcct tttacacatg

accttcgtga aagcgggtgg caggaggtcg cgctaacaac ctcctgccgt tttgcccgtg

catatcggtc acgaacaaat ctgattacta aacacagtag cctggatttg ttctatcagt

aatcgacctt attcctaatt aaatagagca aatcccctta ttgggggtaa gacatgaaga

tgccagaaaa acatgacctg ttggccgcca ttctcgcggc aaaggaacaa ggcatcgggg

caatccttgc gtttgcaatg gcgtaccttc gcggcagata taatggcggt gcgtttacaa

aaacagtaat cgacgcaacg atgtgcgcca ttatcgccta gttcattcgt gaccttctcg

acttcgccgg actaagtagc aatctcgctt atataacgag cgtgtttatc ggctacatcg

gtactgactc gattggttcg cttatcaaac gcttcgctgc taaaaaagcc ggagtagaag

atggtagaaa tcaataatca acgtaaggcg ttcctcgata tgctggcgtg gtcggaggga

actgataacg gacgtcagaa aaccagaaat catggttatg acgtcattgt aggcggagag

ctatttactg attactccga tcaccctcgc aaacttgtca cgctaaaccc aaaactcaaa

tcaacaggcg ccggacgcta ccagcttctt tcccgttggt gggatgccta ccgcaagcag

cttggcctga aagacttctc tccgaaaagt caggacgctg tggcattgca gcagattaag

gagcgtggcg ctttacctat gattgatcgt ggtgatatcc gtcaggcaat cgaccgttgc

agcaatatct gggcttcact gccgggcgct ggttatggtc agttcgagca taaggctgac

agcctgattg caaaattcaa agaagcgggc ggaacggtca gagagattga tgtatgagca

gagtcaccgc gattatctcc gctctggtta tctgcatcat cgtctgcctg tcatgggctg

ttaatcatta ccgtgataac gccattacct acaaagccca gcgcgacaaa aatgccagag

aactgaagct ggcgaacgcg gcaattactg acatgcagat gcgtcagcgt gatgttgctg

cgctcgatgc aaaatacacg aaggagttag ctgatgctaa agctgaaaat gatgctctgc

gtgatgatgt tgccgctggt cgtcgtcggt tgcacatcaa agcagtctgt cagtcagtgc

gtgaagccac caccgcctcc ggcgtggata atgcagcctc cccccgactg gcagacaccg

ctgaacggga ttatttcacc ctcagagaga ggctgatcac tatgcaaaaa caactggaag

gaacccagaa gtatattaat gagcagtgca gatagagttg cccatatcga tgggcaactc

atgcaattat tgtgagcaat acacacgcgc ttccagcgga gtataaatgc ctaaagtaat

aaaaccgagc aatccattta cgaatgtttg ctgggtttct gttttaacaa cattttctgc

gccgccacaa attttggctg catcgacagt tttcttctgc ccaattccag aaacgaagaa

atgatgggtg atggtttcct ttggtgctac tgctgccggt ttgttttgaa cagtaaacgt

ctgttgagca catcctgtaa taagcagggc cagcgcagta gcgagtagca tttttttcat

ggtgttattc ccgatgcttt ttgaagttcg cagaatcgta tgtgtagaaa attaaacaaa

ccctaaacaa tgagttgaaa tttcatattg ttaatattta ttaatgtatg tcaggtgcga

tgaatcgtca ttgtattccc ggattaacta tgtccacagc cctgacgggg aacttctctg

cgggagtgtc cgggaataat taaaacgatg cacacagggt ttagcgcgta cacgtattgc

attatgccaa cgccccggtg ctgacacgga agaaaccgga cgttatgatt tagcgtggaa

agatttgtgt agtgttctga atgctctcag taaatagtaa tgaattatca aaggtatagt

aatatctttt atgttcatgg atatttgtaa cccatcggaa aactcctgct ttagcaagat

tttccctgta ttgctgaaat gtgatttctc ttgatttcaa cctatcatag gacgtttcta

taagatgcgt gtttcttgag aatttaacat ttacaacctt tttaagtcct tttattaaca

cggtgttatc gttttctaac acgatgtgaa tattatctgt ggctagatag taaatataat

gtgagacgtt gtgacgtttt agttcagaat aaaacaattc acagtctaaa tcttttcgca

cttgatcgaa tatttcttta aaaatggcaa cctgagccat tggtaaaacc ttccatgtga

tacgagggcg cgtagtttgc attatcgttt ttatcgtttc aatctggtct gacctccttg

tgttttgttg atgatttatg tcaaatatta ggaatgtttt cacttaatag tattggttgc

gtaacaaagt gcggtcctgc tggcattctg gagggaaata caaccgacag atgtatgtaa

ggccaacgtg ctcaaatctt catacagaaa gatttgaagt aatattttaa ccgctagatg

aagagcaagc gcatggagcg acaaaatgaa taaagaacaa tctgctgatg atccctccgt

ggatctgatt cgtgtaaaaa atatgcttaa tagcaccatt tctatgagtt accctgatgt

tgtaattgca tgtatagaac ataaggtgtc tctggaagca ttcagagcaa ttgaggcagc

gttggtgaag cacgataata atatgaagga ttattccctg gtggttgact gatcaccata

actgctaatc attcaaacta tttagtctgt gacagagcca acacgcagtc tgtcactgtc

aggaaagtgg taaaactgca actcaattac tgcaatgccc tcgtaattaa gtgaatttac

aatatcgtcc tgttcggagg gaagaacgcg ggatgttcat tcttcatcac ttttaattga

tgtatatgct ctcttttctg acgttagtct ccgacggcag gcttcaatga cccaggctga

gaaattcccg gacccttttt gctcaagagc gatgttaatt tgttcaatca tttggttagg

aaagcggatg ttgcgggttg ttgttctgcg ggttctgttc ttcgttgaca tgaggttgcc

ccgtattcag tgtcgctgat ttgtattgtc tgaagttgtt tttacgttaa gttgatgcag

atcaattaat acgatacctg cgtcataatt gattatttga cgtggtttga tggcctccac

gcacgttgtg atatgtagat gataatcatt atcactttac gggtcctttc cggtgatccg

acaggttacg gggcggcgac ctgcctgatg cggtattttc tccttacgca tctgtgcggt

atttcacacc gcatacgtca aagcaaccat agtacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg

cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc ttagcgcccg

ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc

taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc gaccccaaaa

aacttgattt gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc

ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact ggaacaacac

tcaactctat ctcgggctat tcttttgatt tagacctgca ggcatgcaag cttggcactg

gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt

gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct

tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tgcgatttat tcaacaaagc cgccgtcccg

tcaagtcagc gtaatgctct gccagtgtta caaccaatta accaattctg attagaaaaa

ctcatcgagc atcaaatgaa actgcaattt attcatatca ggattatcaa taccatattt

ttgaaaaagc cgtttctgta atgaaggaga aaactcaccg aggcagttcc ataggatggc

aagatcctgg tatcggtctg cgattccgac tcgtccaaca tcaatacaac ctattaattt

cccctcgtca aaaataaggt tatcaagtga gaaatcacca tgagtgacga ctgaatccgg

tgagaatggc aaaagcttat gcatttcttt ccagacttgt tcaacaggcc agccattacg

ctcgtcatca aaatcactcg catcaaccaa accgttattc attcgtgatt gcgcctgagc

gagacgaaat acgcgatcgc tgttaaaagg acaattacaa acaggaatcg aatgcaaccg

gcgcaggaac actgccagcg catcaacaat attttcacct gaatcaggat attcttctaa

tacctggaat gctgttttcc cggggatcgc agtggtgagt aaccatgcat catcaggagt

acggataaaa tgcttgatgg tcggaagagg cataaattcc gtcagccagt ttagtctgac

catctcatct gtaacatcat tggcaacgct acctttgcca tgtttcagaa acaactctgg

cgcatcgggc ttcccataca atcgatagat tgtcgcacct gattgcccga cattatcgcg

agcccattta tacccatata aatcagcatc catgttggaa tttaatcgcg gcttcgagca

agacgtttcc cgttgaatat ggctcataac accccttgta ttactgttta tgtaagcaga

cagttttatt gttcatgatg atatattttt atcttgtgca atgtaacatc agagattttg

agacacaacg tggctttgtt gaataaatcg aacttttgct gagttgaagg atcagatcac

gcatcttccc gacaacgcag accgttccgt ggcaaagcaa aagttcaaaa tcaccaactg

gtccacctac aacaaagctc tcatcaaccg tggctccctc actttctggc tggatgatgg

ggcgattcag gcctggtatg agtcagcaac accttcttca cgaggcagac ctctcgacgg

agttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt

ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt

tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga

taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag

caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata

agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg

gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga

gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca

ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa

acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt

tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac

ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgt

FVIII-BDD, кодируемый X01-X18 последовательностями нуклеиновых кислот. SQ последовательность выделена жирным/подчеркнута (SEQ ID NO:25)

MQIELSTCFFLCLLRFCFSATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKSFPFNTSVVYKKTLFVEFTDHLFNIAKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTVVITLKNMASHPVSLHAVGVSYWKASEGAEYDDQTSQREKEDDKVFPGGSHTYVWQVLKENGPMASDPLCLTYSYLSHVDLVKDLNSGLIGALLVCREGSLAKEKTQTLHKFILLFAVFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSLPGLIGCHRKSVYWHVIGMGTTPEVHSIFLEGHTFLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLFCHISSHQHDGMEAYVKVDSCPEEPQLRMKNNEEAEDYDDDLTDSEMDVVRFDDDNSPSFIQIRSVAKKHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLAPDDRSYKSQYLNNGPQRIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILGPLLYGEVGDTLLIIFKNQASRPYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTVEDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMERDLASGLIGPLLICYKESVDQRGNQIMSDKRNVILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDPEFQASNIMHSINGYVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHKMVYEDTLTLFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALLKVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQNPPVLKRHQREITRTTLQSDQEEIDYDDTISVEMKKEDFDIYDEDENQSPRSFQKKTRHYFIAAVERLWDYGMSSSPHVLRNRAQSGSVPQFKKVVFQEFTDGSFTQPLYRGELNEHLGLLGPYIRAEVEDNIMVTFRNQASRPYSFYSSLISYEEDQRQGAEPRKNFVKPNETKTYFWKVQHHMAPTKDEFDCKAWAYFSDVDLEKDVHSGLIGPLLVCHTNTLNPAHGRQVTVQEFALFFTIFDETKSWYFTENMERNCRAPCNIQMEDPTFKENYRFHAINGYIMDTLPGLVMAQDQRIRWYLLSMGSNENIHSIHFSGHVFTVRKKEEYKMALYNLYPGVFETVEMLPSKAGIWRVECLIGEHLHAGMSTLFLVYSNKCQTPLGMASGHIRDFQITASGQYGQWAPKLARLHYSGSINAWSTKEPFSWIKVDLLAPMIIHGIKTQGARQKFSSLYISQFIIMYSLDGKKWQTYRGNSTGTLMVFFGNVDSSGIKHNIFNPPIIARYIRLHPTHYSIRSTLRMELMGCDLNSCSMPLGMESKAISDAQITASSYFTNMFATWSPSKARLHLQGRSNAWRPQVNNPKEWLQVDFQKTMKVTGVTTQGVKSLLTSMYVKEFLISSSQDGHQWTLFFQNGKVKVFQGNQDSFTPVVNSLDPPLLTRYLRIHPQSWVHQIALRMEVLGCEAQDLY

FVIII дикого типа с BDD (SEQ ID NO:26)

MQIELSTCFFLCLLRFCFSATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKSFPFNTSVVYKKTLFVEFTDHLFNIAKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTVVITLKNMASHPVSLHAVGVSYWKASEGAEYDDQTSQREKEDDKVFPGGSHTYVWQVLKENGPMASDPLCLTYSYLSHVDLVKDLNSGLIGALLVCREGSLAKEKTQTLHKFILLFAVFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSLPGLIGCHRKSVYWHVIGMGTTPEVHSIFLEGHTFLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLFCHISSHQHDGMEAYVKVDSCPEEPQLRMKNNEEAEDYDDDLTDSEMDVVRFDDDNSPSFIQIRSVAKKHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLAPDDRSYKSQYLNNGPQRIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILGPLLYGEVGDTLLIIFKNQASRPYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTVEDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMERDLASGLIGPLLICYKESVDQRGNQIMSDKRNVILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDPEFQASNIMHSINGYVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHKMVYEDTLTLFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALLKVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQNSRHPSTRQKQFNATTIPENDIEKTDPWFAHRTPMPKIQNVSSSDLLMLLRQSPTPHGLSLSDLQEAKYETFSDDPSPGAIDSNNSLSEMTHFRPQLHHSGDMVFTPESGLQLRLNEKLGTTAATELKKLDFKVSSTSNNLISTIPSDNLAAGTDNTSSLGPPSMPVHYDSQLDTTLFGKKSSPLTESGGPLSLSEENNDSKLLESGLMNSQESSWGKNVSSTESGRLFKGKRAHGPALLTKDNALFKVSISLLKTNKTSNNSATNRKTHIDGPSLLIENSPSVWQNILESDTEFKKVTPLIHDRMLMDKNATALRLNHMSNKTTSSKNMEMVQQKKEGPIPPDAQNPDMSFFKMLFLPESARWIQRTHGKNSLNSGQGPSPKQLVSLGPEKSVEGQNFLSEKNKVVVGKGEFTKDVGLKEMVFPSSRNLFLTNLDNLHENNTHNQEKKIQEEIEKKETLIQENVVLPQIHTVTGTKNFMKNLFLLSTRQNVEGSYDGAYAPVLQDFRSLNDSTNRTKKHTAHFSKKGEEENLEGLGNQTKQIVEKYACTTRISPNTSQQNFVTQRSKRALKQFRLPLEETELEKRIIVDDTSTQWSKNMKHLTPSTLTQIDYNEKEKGAITQSPLSDCLTRSHSIPQANRSPLPIAKVSSFPSIRPIYLTRVLFQDNSSHLPAASYRKKDSGVQESSHFLQGAKKNNLSLAILTLEMTGDQREVGSLGTSATNSVTYKKVENTVLPKPDLPKTSGKVELLPKVHIYQKDLFPTETSNGSPGHLDLVEGSLLQGTEGAIKWNEANRPGKVPFLRVATESSAKTPSKLLDPLAWDNHYGTQIPKEEWKSQEKSPEKTAFKKKDTILSLNACESNHAIAAINEGQNKPEIEVTWAKQGRTERLCSQNPPVLKRHQREITRTTLQSDQEEIDYDDTISVEMKKEDFDIYDEDENQSPRSFQKKTRHYFIAAVERLWDYGMSSSPHVLRNRAQSGSVPQFKKVVFQEFTDGSFTQPLYRGELNEHLGLLGPYIRAEVEDNIMVTFRNQASRPYSFYSSLISYEEDQRQGAEPRKNFVKPNETKTYFWKVQHHMAPTKDEFDCKAWAYFSDVDLEKDVHSGLIGPLLVCHTNTLNPAHGRQVTVQEFALFFTIFDETKSWYFTENMERNCRAPCNIQMEDPTFKENYRFHAINGYIMDTLPGLVMAQDQRIRWYLLSMGSNENIHSIHFSGHVFTVRKKEEYKMALYNLYPGVFETVEMLPSKAGIWRVECLIGEHLHAGMSTLFLVYSNKCQTPLGMASGHIRDFQITASGQYGQWAPKLARLHYSGSINAWSTKEPFSWIKVDLLAPMIIHGIKTQGARQKFSSLYISQFIIMYSLDGKKWQTYRGNSTGTLMVFFGNVDSSGIKHNIFNPPIIARYIRLHPTHYSIRSTLRMELMGCDLNSCSMPLGMESKAISDAQITASSYFTNMFATWSPSKARLHLQGRSNAWRPQVNNPKEWLQVDFQKTMKVTGVTTQGVKSLLTSMYVKEFLISSSQDGHQWTLFFQNGKVKVFQGNQDSFTPVVNSLDPPLLTRYLRIHPQSWVHQIALRMEVLGCEAQDLY

Капсид AAV-LK03 VP1 (SEQ ID NO:27)

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALQPGAPKPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVDQSPQEPDSSSGVGKSGKQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPTSLGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLSFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQGTTSGTTNQSRLLFSQAGPQSMSLQARNWLPGPCYRQQRLSKTANDNNNSNFPWTAASKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPMHGNLIFGKEGTTASNAELDNVMITDEEEIRTTNPVATEQYGTVANNLQSSNTAPTTRTVNDQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQIMIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRPL

Капсид AAV-SPK VP1 (SEQ ID NO:28), используемый в AAV-SPK-8005 и AAV-SPK-hFIX

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDNGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLQAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVESPVKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPIGEPPAAPSGVGPNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAV GRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYNFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTEGTYSEPRPIGTRYLTRNL

Процентная идентификационная матрица векторов hFVIII (WT, CO3, x09, X02, X06, X08, X15, X05, X18, X14, X01, X12, X04, X11, X07, X03, X16, X13, X17 и X10)

Некоторые используемые определения/сокращения:

BDD: весь или по меньшей мере часть удаленного B-домена (BD)

FVIII-BDD: FVIII с делецией B-домена

SQ: SFSQNPPVLKRHQR (SEQ ID NO:29)

FVIII/SQ: FVIII с SQ

FVIIIX01-X18: варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, изложенные в виде SEQ ID Nos:1-18, соответственно.

TTRmut: промотор TTR с 4 мутациями, от TAmGTGTAG до TATTGACTTAG

CO3: кодон-оптимизированный вариант нуклеиновой кислоты FVIII, изложенный в виде SEQ ID NO:21

NHP: примат, не являющийся человеком

ALT: Аланинаминотрансфераза

D-димер: фрагмент белка от разрушения кровяного сгустка

SPK-8005: AAV капсид (SEQ ID NO:28)+TTRmut-hFVIII-X07; также называемый АAV-SPK-8005

SPK-8011: AAV LK03 капсид (SEQ ID NO:27)+TTRmut-hFVIII-X07; также называемый АAV-SPK-8011

Хотя некоторые из вариантов осуществления изобретения были описаны и конкретно проиллюстрированы выше, не предполагается, что изобретение ограничивается такими вариантами осуществления. Могут быть сделаны различные модификации без отхода от объема и сущности изобретения, как изложено в следующей формуле изобретения.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> SPARK THERAPEUTICS, INC.

ANGUELA, Xavier

<120> КОДИРУЮЩИЕ ФАКТОР VIII ВАРИАНТЫ С ПОНИЖЕННЫМ СОДЕРЖАНИЕМ CPG,

КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ И ПРИМЕНЕНИЕ В ЛЕЧЕНИИ НАРУШЕНИЙ ГЕМОСТАЗ

<130> 23637-449036

<140> PCT/US2016/59793

<141> 2016-10-31

<150> 62/249,001

<151> 2016-10-30

<150> 62/331,872

<151> 2016-05-04

<150> 62/349,532

<151> 2016-06-13

<150> 62/357,874

<151> 2016-07-01

<160> 29

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 1

atgcagattg agctgtctac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct 60

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttccc cccagggtgc ccaagagctt ccccttcaat 180

acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgatcatct gttcaacatt 240

gctaaaccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccta ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgatcactct gaagaacatg gctagccatc ctgtgtctct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgatcagac tagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggctctcaca cctatgtctg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgatcct ctgtgtctga cctatagcta cctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgtagggag 600

gggagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcattctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcattctgaa accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt caataggtct 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc 840

accacccctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca ccttcctggt gaggaatcac 900

agacaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agtttctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggactc ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaataatgag 1080

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gagatttgat 1140

gatgacaatt ctcccagctt cattcagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggagctataa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg 1320

aagtataaga aggtgaggtt catggcctat actgatgaaa ccttcaagac cagagaggcc 1380

atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccctca tggcatcact 1500

gatgtgaggc ctctgtacag cagaaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggacttc 1560

cccattctgc ctggggagat tttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggccca 1620

accaagtctg accctaggtg cctgactagg tactacagca gctttgtgaa tatggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtacctgac tgagaacatt cagaggtttc tgcccaaccc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgaatt ccaggcctct aacatcatgc acagcattaa tggctatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta cattctgagc 1980

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt taagcacaag 2040

atggtgtatg aggataccct gaccctgttt cctttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggg 2160

atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220

agctatgagg acatctctgc ctatctgctg agcaagaata atgctattga gcccaggagc 2280

ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag aactactctg 2340

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gattttgata tttatgatga ggatgaaaac cagagcccca ggagctttca gaagaagact 2460

aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc ttctagcccc 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggagttca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640

ctggggctgc tgggccctta tatcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc 2700

aggaaccagg ccagcaggcc ctacagcttc tactctagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacttat 2820

ttctggaagg tgcagcacca tatggccccc accaaggatg agtttgattg caaagcctgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgcaatatc cagatggagg accccacctt taaggaaaat 3120

tataggtttc atgccattaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggca gcaatgagaa cattcacagc 3240

atccacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300

tataatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg 3420

gtgtattcta acaagtgtca gacccccctg ggcatggcct ctggccatat cagggacttc 3480

cagatcactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcattac 3540

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagccattca gctggattaa ggtggacctg 3600

ctggctccaa tgattatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gtttagcagc 3660

ctgtacatct ctcagtttat catcatgtac tctctggatg gcaaaaagtg gcagacctac 3720

aggggcaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc 3780

aagcacaaca tctttaaccc ccctatcatt gccaggtaca ttaggctgca ccccacccat 3840

tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgcagc 3900

atgcccctgg gcatggagag caaggctatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac 3960

ttcaccaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gactagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc atcagtggac cctgttcttc 4200

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac 4260

agcctggacc cccccctgct gaccagatac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggg tgtgaggccc aggacctgta ctga 4374

<210> 2

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 2

atgcagattg agctgtctac ctgctttttc ctgtgtctgc tgaggttctg cttctctgcc 60

actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgatctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ccaagtcttt ccccttcaat 180

acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttta ctgatcacct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gcctctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgataaggt gttccctggg gggagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gcccaatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctattctta cctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggctctctgg ctaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcccaaaatg cacactgtga atggctatgt gaataggagc 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tggcatgggc 840

accacccctg aggtgcactc tatcttcctg gagggccata ctttcctggt gaggaatcat 900

aggcaggcca gcctggagat tagccccatt acctttctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttttgccac atcagctctc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaaa tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaata gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcctaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgctcccct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggtcttacaa gagccagtac ctgaacaatg gcccccagag aattgggagg 1320

aagtataaga aggtgagatt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat tctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggcctctagg ccctacaata tttaccccca tgggatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcatct gaaggacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga agatggcccc 1620

accaagtctg accctaggtg cctgaccagg tactactctt cttttgtgaa catggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

agggggaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920

tttgattctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980

attggggctc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt taagcataag 2040

atggtgtatg aggacactct gaccctgttt cccttctctg gggagactgt gtttatgagc 2100

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaacaggggc 2160

atgactgctc tgctgaaggt gtcttcttgt gacaagaaca ctggggacta ttatgaggac 2220

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccagatct 2280

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gaccaccctg 2340

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagtctccca ggagcttcca gaaaaagacc 2460

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc ttctagcccc 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggagttca ctgatgggag cttcacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640

ctggggctgc tgggccctta tattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgactttc 2700

aggaatcagg cctctaggcc ctatagcttc tacagctctc tgatcagcta tgaggaggat 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820

ttctggaagg tgcagcacca catggctcct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcctactttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgtc ataccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtactttac tgagaacatg 3060

gagaggaatt gcagagcccc ttgcaacatc cagatggagg acccaacctt caaagagaac 3120

tacaggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa tatccatagc 3240

attcacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300

tataacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgccaagcaa ggctgggatt 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420

gtgtactcca ataagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc 3480

cagatcactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccaa agctggccag gctgcactat 3540

tctgggagca tcaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggattaa ggtggatctg 3600

ctggccccca tgatcattca tggcatcaaa acccaggggg ctagacagaa gttttctagc 3660

ctgtacatca gccagttcat catcatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacttac 3720

aggggcaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggca atgtggacag ctctggcatc 3780

aagcacaaca tctttaaccc ccccattatt gccaggtata tcaggctgca tcccacccac 3840

tattctatta ggtctactct gagaatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgtagc 3900

atgcccctgg ggatggagag caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttat 3960

ttcaccaata tgtttgccac ctggtctccc tctaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020

agcaatgctt ggaggcccca ggtgaataac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gactagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatgggc atcagtggac tctgttcttc 4200

cagaatggca aggtgaaggt cttccagggg aaccaggata gcttcactcc tgtggtgaac 4260

tctctggacc cccccctgct gactaggtat ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga 4374

<210> 3

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 3

atgcagattg aactgtctac ttgtttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgct 60

actaggaggt actatctggg ggctgtggag ctgtcttggg actatatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc taggtttccc cccagggtgc ccaagagctt cccctttaac 180

acctctgtgg tgtataagaa gactctgttt gtggagttca ctgaccatct gttcaacatt 240

gccaagccaa ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgattactct gaagaacatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac ctctcagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggctctcata cctatgtgtg gcaggtcctg 480

aaggagaatg ggcccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctactctta tctgtctcat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ctaaggagaa gacccagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacaggagc 780

ctgccaggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tgggatgggg 840

actacccctg aggtccacag cattttcctg gaggggcata cctttctggt gaggaaccac 900

aggcaggcct ctctggagat ctctcccatt actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa aaacaatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgacctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgataaca gccccagctt catccagatt aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgctcctct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggagctacaa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattggcagg 1320

aagtataaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc 1380

atccagcatg aatctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgattatct ttaagaacca ggctagcagg ccctacaaca tttaccccca tggcattact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggatttc 1560

cccattctgc ctggggagat ctttaagtac aaatggactg tgactgtgga ggatggccct 1620

actaagtctg atcccaggtg tctgaccaga tactacagca gctttgtgaa tatggagagg 1680

gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaatc agattatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacagaagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt ccaggctagc aatatcatgc acagcattaa tggctatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta cattctgagc 1980

attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggatactct gaccctgttt cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgtcacaact ctgacttcag gaacaggggc 2160

atgactgccc tgctgaaggt gagctcttgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220

tcttatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccaggagc 2280

ttctctcaga atccccctgt gctgaagagg catcagaggg agatcactag gactaccctg 2340

cagtctgacc aggaagagat tgactatgat gacaccatct ctgtggaaat gaagaaggag 2400

gactttgata tctatgatga ggatgaaaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc 2460

aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgag ctcttctccc 2520

catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtcccac agttcaagaa ggtggtgttt 2580

caggagttca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcat 2640

ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataacattat ggtgactttc 2700

aggaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacctat 2820

ttctggaagg tgcagcatca catggctccc actaaagatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccctctg 2940

ctggtctgcc atactaacac cctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tctttaccat ctttgatgag accaagtctt ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgtaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac 3120

tacaggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggct ctaatgagaa cattcattct 3240

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300

tacaatctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa ggctggcatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg 3420

gtctatagca ataagtgcca gacccccctg gggatggcct ctgggcatat cagagacttc 3480

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac 3540

tctggcagca ttaatgcctg gagcaccaag gagcccttct cttggatcaa ggtggacctg 3600

ctggctccca tgatcatcca tgggatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720

aggggcaata gcactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctggcatc 3780

aagcacaata tcttcaaccc ccccatcatt gccaggtaca tcagactgca ccccactcat 3840

tacagcatca ggagcactct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa tagctgctct 3900

atgcccctgg gcatggagag caaggccatt tctgatgccc agattactgc ctcttcttac 3960

ttcactaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcatct gcaggggagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatgggc accagtggac cctgtttttc 4200

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggaca gctttactcc tgtggtgaac 4260

agcctggacc cccccctgct gactaggtac ctgaggattc acccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374

<210> 4

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 4

atgcagattg agctgtctac ctgcttcttt ctgtgcctgc tgaggttctg tttctctgcc 60

actaggaggt attatctggg ggctgtggag ctgtcctggg actacatgca gtctgatctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttccct cccagggtgc ccaagtcttt ccctttcaat 180

acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgatcacct gtttaacatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgattactct gaagaatatg gcttctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gcccaatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta tctgagccat 540

gtggatctgg tgaaggatct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggctctctgg ccaaggagaa gactcagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat 720

gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaataggagc 780

ctgcctgggc tgattgggtg tcacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

accactcctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca cttttctggt gaggaatcac 900

aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gatctgggcc agttcctgct gttttgccat atcagcagcc atcagcatga tgggatggag 1020

gcttatgtga aggtggactc ttgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaataatgaa 1080

gaggctgagg actatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaaca gccccagctt tatccagatt aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200

tgggtgcatt acattgctgc tgaggaagag gattgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggagctacaa gtctcagtac ctgaacaatg gccctcagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380

attcagcatg aatctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgattattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tttatcctca tggcattact 1500

gatgtgagac ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

actaagtctg accccaggtg cctgactagg tactactcca gctttgtgaa catggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagaga aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aataggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcctaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg atcctgagtt ccaggcctct aacattatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980

attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt taagcataag 2040

atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100

atggagaacc caggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaataggggc 2160

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaaca ctggggacta ttatgaggat 2220

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280

ttcagccaga atcctcctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagagcccca ggagcttcca gaagaagact 2460

agacactact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctcttctccc 2520

catgtgctga gaaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtcttc 2580

caggagttca ctgatggctc tttcacccag cctctgtata gaggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tgggccctta catcagggct gaggtggagg acaatatcat ggtgaccttc 2700

aggaaccagg ctagcaggcc ctactctttc tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaat tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820

ttctggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcctactttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctggcctgat tggccccctg 2940

ctggtctgcc acaccaatac tctgaaccct gctcatggga gacaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagtcct ggtactttac tgagaacatg 3060

gagaggaatt gcagggcccc ttgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggaaaat 3120

tataggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtatctgctg tctatgggct ctaatgagaa catccacagc 3240

atccatttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggctctg 3300

tacaacctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatt 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg 3420

gtgtactcta acaagtgcca gaccccactg ggcatggctt ctggccacat cagggatttc 3480

cagattactg cctctggcca gtatggccag tgggctccca agctggctag gctgcactac 3540

tctgggagca tcaatgcctg gtctactaag gagcctttct cttggatcaa agtggacctg 3600

ctggccccta tgatcatcca tgggatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtacatct ctcagttcat cattatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720

aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctgggatt 3780

aagcacaaca tctttaaccc ccccatcatt gccaggtata tcaggctgca ccctacccac 3840

tacagcatta ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgcagc 3900

atgcccctgg ggatggagag caaggccatt tctgatgctc agatcactgc ttctagctac 3960

ttcactaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcta gactgcacct gcaggggagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaataat cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080

aaaaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatgggc atcagtggac cctgttcttt 4200

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac 4260

agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga 4374

<210> 5

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 5

atgcagattg agctgtctac ttgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60

actaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaac 180

acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgatcatct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcctccttg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgattaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac tagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg gggagccata cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgaccct ctgtgcctga cttatagcta cctgagccat 540

gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg ggaagtcctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggatagggat 720

gctgcttctg ccagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaataggagc 780

ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc 840

accacccctg aggtgcactc tattttcctg gagggccata ctttcctggt gaggaaccat 900

aggcaggcca gcctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac tctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tggcatggag 1020

gcttatgtga aggtggacag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaataatgag 1080

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaact ctccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260

ccagatgaca ggagctacaa gtcccagtac ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcttat actgatgaga ctttcaagac cagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat cctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgattatct tcaagaacca ggcttctagg ccctacaata tctaccctca tggcatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggatttc 1560

cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

actaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa catggagagg 1680

gatctggctt ctgggctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aataggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg atcctgagtt tcaggcctct aatatcatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920

tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta catcctgagc 1980

attggggccc agactgactt tctgtctgtg tttttttctg gctacacctt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggatactct gactctgttc cctttttctg gggagactgt gttcatgtct 2100

atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaacagaggc 2160

atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220

tcttatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccagaagc 2280

ttttctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gatactattt ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggtctttcca gaagaagact 2460

aggcactact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgtc tagctctcct 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agtttaaaaa ggtggtgttc 2580

caggaattca ctgatggcag ctttacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640

ctggggctgc tggggcctta cattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc 2700

aggaatcagg ccagcaggcc ctactctttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgaacc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820

ttctggaagg tgcagcacca catggctccc accaaggatg agtttgattg caaggcctgg 2880

gcttacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca gacaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagaggaatt gcagggcccc ttgcaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac 3120

tacaggtttc atgccattaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggga gcaatgagaa catccacagc 3240

attcacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300

tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg 3420

gtgtatagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagagacttt 3480

cagattactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcactat 3540

tctggctcta ttaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggattaa ggtggacctg 3600

ctggctccca tgatcatcca tggcatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttctcttct 3660

ctgtacatca gccagttcat tatcatgtac tccctggatg gcaagaagtg gcagacctat 3720

aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctggcatc 3780

aagcataata tcttcaatcc ccccatcatt gctaggtaca tcaggctgca ccccacccac 3840

tactctatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgcagc 3900

atgcctctgg gcatggagag caaagccatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960

tttaccaaca tgtttgctac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcaggggagg 4020

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagactatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gacctctatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgtttttc 4200

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggg aaccaggaca gcttcactcc tgtggtgaac 4260

tctctggacc cccccctgct gaccaggtat ctgaggatcc accctcagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga 4374

<210> 6

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 6

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgcc 60

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttccct cccagggtgc ccaagtcttt ccccttcaac 180

acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcctccctg gatgggcctg ctgggcccca ccattcaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tcatcaccct gaaaaatatg gctagccacc ctgtgtctct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480

aaagagaatg gccccatggc ttctgatccc ctgtgtctga cctatagcta cctgagccat 540

gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ctaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggatagggat 720

gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacaggagc 780

ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtctatt ggcatgtgat tggcatgggc 840

actactcctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca ccttcctggt gaggaaccac 900

aggcaggcca gcctggagat ctctcccatc actttcctga ctgctcagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgtcac atctctagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gaaccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaatt ctcctagctt cattcagatc agatctgtgg ccaaaaagca tcctaagact 1200

tgggtgcatt atattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggct 1260

cctgatgata ggagctacaa gtctcagtac ctgaataatg ggccccagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380

attcagcatg agtctgggat tctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440

ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tgggattact 1500

gatgtgaggc ccctgtactc taggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggatttt 1560

cctatcctgc ctggggaaat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

actaagtctg atcccaggtg tctgaccagg tattatagct cttttgtgaa catggagagg 1680

gatctggcct ctgggctgat tggccctctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgtctg catgaggtgg cctactggta tatcctgtct 1980

attggggccc agactgactt cctgtctgtg tttttttctg ggtatacttt taagcacaag 2040

atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cccttctctg gggagactgt gtttatgagc 2100

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaataggggg 2160

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaata ctggggacta ctatgaggac 2220

tcttatgagg acatttctgc ctatctgctg tctaagaaca atgccattga acccaggagc 2280

ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg aaatcaccag aactactctg 2340

cagtctgatc aggaggaaat tgactatgat gacactattt ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccaa ggagcttcca gaagaagact 2460

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagcagcccc 2520

catgtgctga gaaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggagttca ctgatgggag cttcacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tgggccccta tattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc 2700

aggaatcagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgattagcta tgaggaggat 2760

cagaggcagg gggctgaacc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat 2820

ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gctcatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaatatg 3060

gagaggaatt gcagggcccc ctgcaatatt cagatggaag accccacctt caaggagaat 3120

tacaggttcc atgccattaa tggctacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggca gcaatgagaa catccactct 3240

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggccctg 3300

tacaacctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgccttctaa ggctggcatt 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420

gtgtacagca ataagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctgggcatat cagggatttc 3480

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccaa agctggctag gctgcactac 3540

tctgggagca tcaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg 3600

ctggccccca tgattatcca tgggattaag actcaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtacatca gccagttcat tatcatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacctat 3720

aggggcaact ctactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc 3780

aagcacaata tcttcaaccc ccccatcatt gccaggtata tcaggctgca ccccacccac 3840

tacagcatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgtagc 3900

atgcctctgg gcatggagtc taaggccatt tctgatgccc agattactgc tagcagctac 3960

ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcca ggctgcatct gcagggcagg 4020

tctaatgctt ggaggcccca ggtgaacaac ccaaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080

aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agtctctgct gacctctatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat ctctagcagc caggatggcc atcagtggac cctgttcttc 4200

cagaatggca aggtgaaagt gttccagggc aatcaggata gcttcactcc agtggtgaac 4260

agcctggatc cccctctgct gactaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga 4374

<210> 7

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 7

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgtctgc tgaggttctg cttctctgcc 60

accaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc taggttcccc cccagggtgc ccaagagctt cccctttaac 180

acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gtttcctggg ggcagccata cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta cctgtctcat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgtagggag 600

ggcagcctgg ctaaggaaaa gacccagacc ctgcataagt ttatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggatagggat 720

gctgcctctg ccagggcttg gcctaagatg cacactgtga atgggtatgt gaataggagc 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc 840

accacccctg aggtccatag catcttcctg gagggccaca ctttcctggt gaggaaccac 900

agacaggcct ctctggagat ctctcccatc accttcctga ctgctcagac tctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttttgccat attagcagcc accagcatga tgggatggag 1020

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgaag actatgatga tgacctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaata gccccagctt cattcagatc aggtctgtgg ccaagaaaca ccccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaagag gactgggact atgctcccct ggtgctggcc 1260

cctgatgata ggtcttataa gagccagtac ctgaacaatg ggccccagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaaa ccttcaaaac cagggaggcc 1380

attcagcatg agtctggcat cctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctatcctca tggcatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaagacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggccct 1620

accaagtctg accccaggtg tctgaccagg tactattcta gctttgtgaa catggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tgggcccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag 1800

aataggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aatatcatgc atagcatcaa tggctatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980

attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttttctg gctatacctt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100

atggagaatc ctgggctgtg gatcctgggg tgccacaact ctgattttag gaacaggggg 2160

atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220

agctatgagg acatttctgc ttatctgctg tctaagaata atgccattga gcccagaagc 2280

ttcagccaga atccccctgt gctgaagaga catcagaggg agatcaccag aactaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagctttca gaagaagacc 2460

agacattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggaattca ctgatggcag cttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tggggcctta tatcagggct gaggtggagg ataatattat ggtgactttc 2700

aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tatagcagcc tgatctctta tgaggaggat 2760

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacctac 2820

ttctggaagg tccagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcctatttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtccatt ctgggctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtccaggag 3000

tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag accaagagct ggtactttac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagagctcc ttgcaatatt cagatggagg accccacctt caaggagaat 3120

tacaggttcc atgccattaa tgggtacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa tatccacagc 3240

atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300

tataatctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa ggctggcatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg 3420

gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc 3480

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactat 3540

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg 3600

ctggccccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagctct 3660

ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg ggaagaagtg gcagacctac 3720

aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggactc ttctggcatc 3780

aagcacaaca tcttcaatcc ccccatcatt gctaggtata ttaggctgca tcccacccac 3840

tacagcatca ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc 3900

atgcccctgg gcatggagtc taaggccatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac 3960

ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc tctaaggcca ggctgcatct gcaggggagg 4020

agcaatgcct ggaggcctca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtca agagcctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac tctgttcttt 4200

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggact ctttcacccc tgtggtgaac 4260

agcctggacc cccccctgct gaccagatac ctgaggatcc acccccagtc ttgggtgcat 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggctc aggatctgta ctga 4374

<210> 8

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 8

atgcagattg agctgagcac ttgctttttt ctgtgcctgc tgaggttttg tttttctgcc 60

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgatctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt tcccttcaac 180

acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240

gctaagccta ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccta ccattcaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtctctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagaga 420

gagaaggagg atgacaaggt cttccctggg ggctctcaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggaaaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta tctgagccat 540

gtggatctgg tgaaggacct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780

ctgcctgggc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

accacccctg aggtgcacag catcttcctg gaaggccaca ctttcctggt gaggaaccat 900

aggcaggcca gcctggagat cagccctatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gatctggggc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tgggatggag 1020

gcctatgtga aggtggacag ctgcccagag gagcctcagc tgaggatgaa aaacaatgaa 1080

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gagatttgat 1140

gatgacaata gccctagctt tattcagatc aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagacc 1200

tgggtgcatt acattgctgc tgaggaggag gactgggatt atgctcctct ggtgctggcc 1260

cctgatgata ggagctacaa gagccagtac ctgaataatg gccctcagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc 1380

atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggctagcagg ccttacaaca tctatcccca tgggatcact 1500

gatgtgagac ctctgtacag caggaggctg cccaaggggg tcaagcatct gaaagacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc 1620

accaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa catggagagg 1680

gatctggcct ctgggctgat tggccccctg ctgatctgtt acaaggaatc tgtggatcag 1740

aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aataggtctt ggtacctgac tgaaaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtc 1860

cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920

tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgtct 1980

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt ctttatgagc 2100

atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaataggggc 2160

atgactgctc tgctgaaggt gagctcttgt gacaagaaca ctggggatta ctatgaggac 2220

agctatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc 2280

tttagccaga atcctcctgt cctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gataccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagacc 2460

aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagctctcct 2520

catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa agtggtgttt 2580

caggagttca ctgatggctc tttcacccag cctctgtata ggggggagct gaatgagcac 2640

ctggggctgc tgggccccta tatcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc 2700

aggaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tatagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacttac 2820

ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg taaggcctgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc ataccaatac tctgaaccct gctcatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgctctgt tcttcactat ctttgatgag accaagtctt ggtatttcac tgagaatatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac 3120

tataggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ctaatgagaa catccacagc 3240

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg agaaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300

tacaatctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctgggatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacat ctgcatgctg ggatgtctac tctgttcctg 3420

gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggctt ctggccatat cagggacttt 3480

cagattactg cctctgggca gtatggccag tgggccccca agctggctag gctgcattat 3540

tctggcagca tcaatgcctg gtctactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggatctg 3600

ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gtttagctct 3660

ctgtacatta gccagttcat catcatgtac agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac 3720

aggggcaatt ctactggcac cctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctggcatc 3780

aagcacaaca tctttaaccc ccctatcatt gctaggtaca tcaggctgca tcccacccat 3840

tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc 3900

atgcccctgg gcatggagag caaggccatt tctgatgccc agattactgc cagcagctac 3960

ttcactaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gactagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagctctagc caggatggcc accagtggac tctgtttttc 4200

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcactcc tgtggtgaac 4260

agcctggacc cccccctgct gaccaggtat ctgaggattc acccccagtc ttgggtgcat 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374

<210> 9

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 9

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgtctgc tgagattttg cttttctgcc 60

actaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgtcttggg actacatgca gtctgatctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttccca cctagggtgc ctaagagctt tcccttcaat 180

acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240

gccaagccta ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccta ccatccaggc tgaagtgtat 300

gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg 420

gagaaggaag atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtctg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctactctta cctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggatct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgaag ggaagagctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaatagaagc 780

ctgcctggcc tgattgggtg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc 840

actacccctg aggtgcatag catcttcctg gaaggccata ccttcctggt gaggaatcat 900

aggcaggctt ctctggaaat ttctcccatc actttcctga ctgctcagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagctctc accagcatga tgggatggag 1020

gcctatgtga aggtggacag ctgtcctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt caggtttgat 1140

gatgacaata gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagact 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccctct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggagctataa gtctcagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg 1320

aagtataaga aggtgaggtt tatggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggcctctagg ccctacaata tctaccctca tggcatcact 1500

gatgtgagac ccctgtatag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

accaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagct cttttgtgaa catggagagg 1680

gatctggcct ctgggctgat tggcccactg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag 1740

aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgaa 1800

aataggtctt ggtatctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg atcctgagtt tcaggcctct aatatcatgc attctatcaa tggctatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980

attggggctc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctatacttt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggacactct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct 2100

atggaaaatc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaataggggg 2160

atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggatta ctatgaggac 2220

tcttatgaag atatctctgc ctatctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccactctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gattttgaca tttatgatga ggatgagaac cagtctccca ggagcttcca gaagaagacc 2460

aggcattact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgag cagctctcct 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggagttca ctgatgggag cttcacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttc 2700

aggaaccagg ctagcaggcc ttacagcttt tacagcagcc tgatctctta tgaagaagac 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaat tttgtgaagc ctaatgagac caagacttat 2820

ttttggaagg tgcagcatca catggctcct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcctactttt ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccctctg 2940

ctggtgtgcc atactaacac tctgaaccct gcccatggga ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcactat ttttgatgag accaagtctt ggtatttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggctcc ctgcaacatc cagatggaag accccacctt caaggagaac 3120

tataggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccacagc 3240

atccatttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300

tacaacctgt atcctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360

tggagggtgg aatgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgttcctg 3420

gtgtatagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccatat cagggatttc 3480

cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactat 3540

tctggcagca tcaatgcctg gagcactaag gagccttttt cttggatcaa ggtggacctg 3600

ctggccccta tgattattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttctctagc 3660

ctgtacatct ctcagttcat cattatgtat agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720

aggggcaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggga atgtggactc ttctgggatc 3780

aagcacaaca tctttaaccc ccccatcatt gccaggtata ttaggctgca ccccacccac 3840

tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa ttcttgctct 3900

atgcccctgg gcatggagag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttac 3960

ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctcct agcaaggcca ggctgcatct gcagggcagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gacctctatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac tctgttcttc 4200

cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aaccaggata gctttacccc tgtggtgaac 4260

agcctggacc ctcctctgct gaccagatac ctgaggatcc atcctcagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374

<210> 10

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 10

atgcagattg agctgagcac ttgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttttctgct 60

actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt tcctttcaac 180

acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgattaccct gaagaacatg gctagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg 420

gaaaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccata cttatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg ggcccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttacagcta tctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggatct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ctaaggagaa gactcagact ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgaag gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat 720

gctgcctctg ccagggcttg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780

ctgcctggcc tgattgggtg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

accacccctg aggtgcacag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt gaggaatcac 900

aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctggggc agtttctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggactc ttgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaata gccccagctt catccagatt aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggct 1260

cctgatgaca ggtcttataa gagccagtac ctgaacaatg ggccccagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tttaccctca tggcatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggagactg cccaaggggg tgaagcacct gaaggatttt 1560

cccattctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

accaagtctg atcccaggtg cctgactagg tactactctt cttttgtgaa tatggagagg 1680

gatctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aataggagct ggtacctgac tgagaatatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtc 1860

cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacattatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920

tttgattctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta catcctgtct 1980

attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caagcataag 2040

atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct 2100

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgtcataact ctgacttcag aaacaggggc 2160

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220

agctatgagg atatctctgc ttatctgctg agcaagaata atgccattga gcccaggagc 2280

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gactaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagtccccca ggtctttcca gaagaagacc 2460

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagcccc 2520

catgtgctga ggaacagggc tcagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtcttc 2580

caggagttca ctgatggctc ttttacccag cctctgtaca gaggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttc 2700

agaaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggat 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820

ttctggaagg tgcagcacca tatggcccct actaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcttattttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagagaaatt gtagggctcc ctgcaatatc cagatggagg accccacctt caaagaaaat 3120

tacagattcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctgggct ggtgatggct 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ctaatgagaa catccactct 3240

atccatttct ctggccatgt gttcactgtg agaaagaagg aggagtataa gatggctctg 3300

tacaacctgt acccaggggt gtttgagact gtggaaatgc tgcccagcaa agctgggatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420

gtgtacagca acaagtgcca gactcccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggatttt 3480

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac 3540

tctggcagca ttaatgcttg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggatctg 3600

ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttctctagc 3660

ctgtacattt ctcagttcat catcatgtac agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac 3720

agggggaaca gcactgggac cctgatggtg ttctttggca atgtggatag ctctggcatc 3780

aagcacaata tcttcaatcc ccccattatt gccaggtaca ttaggctgca tcctactcac 3840

tactctatta ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgttct 3900

atgcccctgg gcatggagtc taaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960

ttcactaata tgtttgccac ctggagccct agcaaggcca gactgcacct gcagggcagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc 4200

cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcacccc tgtggtgaac 4260

agcctggatc ctcccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgctc tgaggatgga agtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374

<210> 11

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 11

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgct 60

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc taggttccct cccagggtgc ccaagagctt cccctttaat 180

acctctgtgg tgtacaagaa aaccctgttt gtggagttca ctgaccatct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctgggcccca ccattcaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tcattaccct gaagaacatg gcttctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctactctta tctgtctcat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag 600

ggctctctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttattctgct gtttgctgtc 660

tttgatgagg gcaagagctg gcattctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcccaaaatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

accacccctg aggtgcacag catcttcctg gagggccaca cctttctggt gaggaatcac 900

aggcaggcca gcctggagat tagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa aaacaatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaata gccccagctt tattcagatt aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagact 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgcccctct ggtcctggcc 1260

cctgatgata ggtcttacaa gagccagtat ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc 1380

attcagcatg agtctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacactctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccttataaca tctaccctca tgggatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtactc tagaaggctg cccaaggggg tcaagcacct gaaggatttt 1560

cccatcctgc ctggggagat tttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

accaagtctg accctaggtg cctgaccagg tactacagct cttttgtgaa catggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tggccctctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag 1800

aacaggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcctaaccc agctggggtg 1860

cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aatattatgc atagcattaa tggctatgtg 1920

tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980

attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcataag 2040

atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cctttttctg gggagactgt gtttatgagc 2100

atggagaatc ctggcctgtg gatcctgggc tgccataatt ctgacttcag gaacaggggc 2160

atgactgccc tgctgaaagt gagcagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaagac 2220

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280

ttcagccaga accccccagt gctgaagagg caccagagag agatcaccag gactaccctg 2340

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacaccattt ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tttatgatga ggatgagaat cagagcccca ggagcttcca gaagaagact 2460

aggcactatt ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagctctccc 2520

catgtgctga ggaatagggc ccagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggagttca ctgatggcag ctttacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tgggccccta tatcagggct gaggtggagg acaatattat ggtgaccttt 2700

aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tatagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaat tttgtgaagc ctaatgagac caagacctac 2820

ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg caaggcttgg 2880

gcctatttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg atcccacctt caaggagaac 3120

tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa tatccatagc 3240

atccacttct ctggccatgt gttcactgtc aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300

tataatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgtttctg 3420

gtgtactcta acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggatttc 3480

cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac 3540

tctggcagca tcaatgcctg gtctaccaag gagccctttt cttggattaa ggtggacctg 3600

ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtacatca gccagttcat catcatgtac agcctggatg gcaaaaagtg gcagacctac 3720

aggggcaata gcactgggac tctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc 3780

aagcacaata tcttcaaccc tcccatcatt gctaggtaca tcaggctgca ccccacccac 3840

tatagcatca ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc 3900

atgcccctgg gcatggagtc caaagctatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac 3960

ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctccc tctaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080

aaaactatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac tctgttcttc 4200

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggaca gcttcacccc tgtggtgaac 4260

tctctggatc cccccctgct gaccaggtac ctgaggattc atccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgctc tgagaatgga ggtgctgggg tgtgaggctc aggacctgta ttga 4374

<210> 12

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 12

atgcagattg agctgtctac ttgttttttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60

accaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgatctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagagctt ccccttcaac 180

acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgatcatct gtttaacatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccaa ctatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tcatcaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttatagcta cctgtctcat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt ctgtagggaa 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttattctgct gtttgctgtg 660

tttgatgaag gcaagagctg gcactctgag accaagaatt ctctgatgca ggatagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg catactgtga atggctatgt gaacagaagc 780

ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tgggatgggc 840

actacccctg aagtgcacag cattttcctg gagggccaca ctttcctggt gaggaaccac 900

aggcaggcct ctctggagat cagccccatt actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gatctgggcc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaataatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgataata gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc 1200

tgggtgcact atattgctgc tgaagaggag gactgggact atgcccctct ggtgctggct 1260

cctgatgaca ggagctataa gagccagtat ctgaacaatg ggccccagag gattgggagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat tctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacactctg 1440

ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaata tttaccccca tggcatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggccct 1620

accaagtctg accctaggtg tctgactagg tactacagca gctttgtgaa catggagaga 1680

gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag 1740

aggggcaacc agattatgtc tgataagagg aatgtcatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtatctgac tgagaacatt cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc attctattaa tggctatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980

attggggccc agactgactt tctgtctgtg tttttctctg ggtacacctt caagcacaag 2040

atggtctatg aggacaccct gaccctgttc cccttttctg gggaaactgt gtttatgagc 2100

atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgactttag gaataggggc 2160

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaata ctggggatta ctatgaggac 2220

agctatgagg atatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc 2280

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgata tttatgatga ggatgagaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc 2460

aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagcccc 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggaattta ctgatggcag ctttacccag cccctgtaca gaggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttt 2700

aggaaccagg cctctaggcc ctattctttt tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820

ttttggaaag tgcagcacca catggccccc actaaggatg agtttgattg caaggcctgg 2880

gcctatttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tctttaccat ctttgatgag actaagagct ggtatttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagagcccc ttgcaacatc cagatggagg accctacctt caaggagaac 3120

tataggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggct 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggga gcaatgagaa cattcatagc 3240

atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggccctg 3300

tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgttcctg 3420

gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc 3480

cagattactg cctctgggca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcactac 3540

tctgggtcta tcaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggatctg 3600

ctggccccca tgatcattca tgggatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtatattt ctcagttcat catcatgtat tctctggatg gcaaaaagtg gcagacctat 3720

agagggaaca gcactgggac cctgatggtg ttttttggca atgtggatag ctctggcatc 3780

aagcacaata tcttcaaccc ccccattatt gccaggtaca tcaggctgca ccccacccac 3840

tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgctct 3900

atgcctctgg ggatggaaag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctat 3960

ttcaccaata tgtttgccac ttggagccct agcaaggcta ggctgcatct gcagggcagg 4020

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagactatga aagtgactgg ggtgaccacc cagggggtga aaagcctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc 4200

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggata gcttcacccc agtggtgaac 4260

agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374

<210> 13

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 13

atgcagattg agctgagcac ctgctttttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct 60

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttccc cccagggtgc ccaagtcttt cccctttaac 180

acctctgtgg tgtataagaa gactctgttt gtggagttca ctgatcacct gttcaatatt 240

gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctgggcccca ctatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tcatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttcccaggg gggtctcaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg ggcccatggc ctctgaccct ctgtgcctga cttatagcta cctgtctcat 540

gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

gggagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaata gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcttctg ctagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780

ctgcctggcc tgattgggtg tcacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggg 840

actactccag aagtgcacag catcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gaggaatcac 900

aggcaggcca gcctggagat ttctcccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gatctggggc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tgggatggag 1020

gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg actatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaact ctcccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgctcccct ggtgctggct 1260

cctgatgata ggagctacaa gagccagtat ctgaataatg ggccccagag gattggcagg 1320

aagtataaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggct 1380

attcagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctataaca tctatcccca tgggatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtactc taggaggctg cccaaggggg tcaagcacct gaaggacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

actaagtctg accccaggtg cctgactagg tactacagca gctttgtgaa catggagaga 1680

gatctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaagagtc tgtggatcag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacagaagct ggtacctgac tgagaacatt cagaggtttc tgcccaaccc tgctggggtc 1860

cagctggagg accctgagtt tcaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta tatcctgagc 1980

attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cctttctctg gggaaactgt gttcatgagc 2100

atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggg tgccacaatt ctgatttcag gaacagaggc 2160

atgactgctc tgctgaaggt gtctagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga acccaggtct 2280

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gaccaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagact 2460

aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttt 2580

caggagttca ctgatggcag cttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcat 2640

ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc 2700

agaaatcagg ctagcaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat 2820

ttctggaagg tgcagcacca catggccccc accaaggatg agtttgattg caaggcctgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccctctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tctttactat ctttgatgag accaagtctt ggtattttac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaac 3120

tacagattcc atgccatcaa tggctacatt atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggca gcaatgagaa cattcactct 3240

atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300

tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctgggatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420

gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagagatttt 3480

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggctccta agctggccag gctgcactac 3540

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttta gctggatcaa ggtggacctg 3600

ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttctctagc 3660

ctgtacatta gccagttcat catcatgtat agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720

aggggcaaca gcactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctgggatc 3780

aagcacaata tcttcaaccc ccccattatt gccaggtata ttaggctgca ccccactcac 3840

tacagcatta ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgcagc 3900

atgcccctgg gcatggagtc taaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttac 3960

ttcaccaaca tgtttgccac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080

aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gactagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagctctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttt 4200

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcacccc tgtggtgaat 4260

tctctggacc ctcccctgct gactaggtat ctgaggattc atccccagag ctgggtgcat 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga 4374

<210> 14

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 14

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttttctgcc 60

actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc ccaagggtgc ccaagtcttt tcccttcaat 180

acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgatcatct gtttaacatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gatactgtgg tgattaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgtctct gcatgctgtg 360

ggggtgtctt attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggctctcaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg ggcctatggc ctctgaccca ctgtgcctga cttacagcta tctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggg ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggatagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggtct 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

accacccctg aggtgcatag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt gaggaaccac 900

aggcaggcta gcctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggactc ttgtcctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaaca gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggagctataa gtctcagtac ctgaacaatg gcccccagag aattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctat actgatgaga ccttcaaaac cagggaggcc 1380

attcagcatg agtctggcat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggctagcagg ccttacaaca tctaccccca tgggatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttt 1560

cccattctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc 1620

accaagtctg accccaggtg cctgactagg tactactcta gctttgtgaa catggagagg 1680

gacctggcct ctgggctgat tggccccctg ctgatctgtt acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgataagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagagattcc tgcccaaccc tgctggggtg 1860

cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aacatcatgc attctatcaa tgggtatgtg 1920

tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgtctg catgaggtgg cctactggta cattctgagc 1980

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caaacacaag 2040

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gtttatgagc 2100

atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaact ctgacttcag aaacaggggc 2160

atgactgccc tgctgaaggt gtcttcttgt gataagaaca ctggggacta ttatgaagac 2220

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaata atgctattga gcccaggtct 2280

ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactattt ctgtggagat gaagaaggaa 2400

gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagagcccta ggagcttcca gaagaagact 2460

aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagcagcccc 2520

catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggaattca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640

ctggggctgc tgggccctta catcagggct gaggtggagg acaatatcat ggtgaccttt 2700

aggaaccagg cctctaggcc ttacagcttc tactctagcc tgatctctta tgaagaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacttac 2820

ttctggaagg tgcagcacca catggctccc accaaggatg agtttgactg caaggcttgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tgggcccctg 2940

ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca gacaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tttttaccat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg atcccacctt caaggagaac 3120

tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct 3180

caggaccaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa tatccactct 3240

atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300

tataacctgt atcctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360

tggagagtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgtttctg 3420

gtgtatagca acaagtgtca gacccctctg ggcatggcct ctgggcacat tagggacttt 3480

cagatcactg cttctggcca gtatgggcag tgggctccca agctggccag gctgcactat 3540

tctggcagca ttaatgcctg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggacctg 3600

ctggccccca tgatcatcca tgggatcaag acccaggggg ctaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtacatca gccagtttat catcatgtat tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720

aggggcaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc 3780

aagcataata tcttcaatcc ccccattatt gctaggtata tcaggctgca ccccacccac 3840

tatagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgcagc 3900

atgcccctgg gcatggagag caaggctatt tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960

tttactaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca gactgcacct gcagggcagg 4020

tctaatgcct ggaggcctca ggtgaataac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aaaaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttt 4200

cagaatggga aggtgaaggt cttccagggc aaccaggata gcttcacccc tgtggtgaat 4260

agcctggatc ctcctctgct gaccaggtat ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggctc aggacctgta ctga 4374

<210> 15

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 15

atgcagattg agctgagcac ctgtttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg tttctctgcc 60

actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaat 180

acttctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaacatt 240

gctaagccca ggcctccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gatactgtgg tgattaccct gaagaacatg gcctctcatc cagtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgaaggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gcccaatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttatagcta cctgagccat 540

gtggatctgg tgaaggacct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagagag 600

ggctctctgg ctaaggagaa gacccagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag actaagaata gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg catactgtga atggctatgt gaacaggagc 780

ctgcctggcc tgattggctg tcacaggaaa tctgtctact ggcatgtgat tgggatgggc 840

actacccctg aggtgcactc tatcttcctg gagggccata ccttcctggt gaggaaccac 900

aggcaggcca gcctggagat ctctcccatt accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gatctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tgggatggag 1020

gcttatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaact ctcccagctt tattcagatc aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagact 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccctct ggtgctggct 1260

cctgatgaca ggtcttacaa gtctcagtac ctgaataatg gccctcagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440

ctgatcatct tcaagaatca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tggcatcact 1500

gatgtgaggc cactgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggacttc 1560

cccattctgc ctggggagat cttcaagtac aaatggactg tgactgtgga ggatggccct 1620

accaagtctg accccaggtg tctgaccagg tactacagca gctttgtgaa tatggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaatc agatcatgtc tgataagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aatatcatgc acagcatcaa tggctatgtc 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta tattctgagc 1980

attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctatacctt taagcacaag 2040

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct 2100

atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggg 2160

atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggacta ttatgaggac 2220

agctatgagg acatctctgc ttacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggtct 2280

ttcagccaga atccccctgt gctgaagagg catcagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgattatgat gacactatct ctgtggaaat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc 2460

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggatt atggcatgag cagctctccc 2520

catgtgctga ggaacagagc ccagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtcttc 2580

caggagttca ctgatggctc tttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tggggcccta cattagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgactttc 2700

agaaaccagg ccagcaggcc ttacagcttt tactcttctc tgattagcta tgaggaggat 2760

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat 2820

ttctggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgactg caaggcttgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tgggcccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaat 3120

tacaggttcc atgccatcaa tggctacatt atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggatcaga ggatcaggtg gtatctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccacagc 3240

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggaatacaa gatggctctg 3300

tataacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg 3420

gtgtatagca ataagtgcca gacccccctg ggcatggctt ctggccacat cagggatttc 3480

cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggctccca agctggctag gctgcattac 3540

tctgggtcta tcaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg 3600

ctggccccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ctaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtacatca gccagttcat cattatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacttac 3720

aggggcaata gcactgggac tctgatggtg ttctttggca atgtggactc ttctggcatc 3780

aagcacaaca tcttcaaccc tcccatcatt gccaggtaca ttaggctgca ccctacccac 3840

tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgatctgaa ctcttgcagc 3900

atgcctctgg gcatggaaag caaagccatc tctgatgccc agatcactgc ctctagctat 3960

ttcaccaata tgtttgccac ctggagccct agcaaggcca ggctgcacct gcagggcaga 4020

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gactagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc 4200

cagaatggca aggtgaaagt gttccagggc aaccaggata gcttcactcc tgtggtgaac 4260

tctctggacc ctcccctgct gactaggtac ctgaggattc atccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374

<210> 16

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 16

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg actatatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagagctt tcctttcaac 180

acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaatatt 240

gctaagccca ggccaccctg gatgggcctg ctgggcccta ccattcaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgattactct gaagaatatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac ttctcagagg 420

gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggctctcaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ttctgatcca ctgtgcctga cctactctta cctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaatt ctctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggtct 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

actacccctg aggtgcacag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt caggaaccat 900

aggcaggcct ctctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac attagcagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggactc ttgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaagctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgctcccct ggtgctggct 1260

cctgatgata ggagctacaa gtctcagtac ctgaataatg gcccccagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagagaggct 1380

atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcaga ccctacaaca tctaccccca tgggatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc 1620

accaagtctg accctaggtg cctgactagg tactactcta gctttgtgaa catggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggatcag 1740

aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aataggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt tcaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920

tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta tatcctgagc 1980

attggggctc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacttt taagcacaag 2040

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttttctg gggagactgt gttcatgtct 2100

atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgtcacaact ctgacttcag aaacaggggc 2160

atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaggac 2220

agctatgagg acatttctgc ctatctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280

ttttctcaga atccccctgt gctgaagagg caccagagag agatcaccag gaccactctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgattatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaagag 2400

gactttgata tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagact 2460

agacactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggagttca ctgatggcag ctttacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcat 2640

ctgggcctgc tgggccccta tattagggct gaagtggagg acaacatcat ggtgaccttt 2700

aggaaccagg ccagcaggcc ctacagcttt tacagcagcc tgattagcta tgaggaggat 2760

cagagacagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820

ttctggaagg tgcagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcttacttct ctgatgtgga cctggagaaa gatgtgcact ctggcctgat tgggcccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggga ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt ttttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgtaacatc cagatggagg atcctacttt caaggagaac 3120

tacaggttcc atgccattaa tgggtacatc atggacaccc tgcctgggct ggtgatggcc 3180

caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg tctatgggct ctaatgagaa catccactct 3240

atccacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300

tacaacctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa agctgggatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg 3420

gtgtacagca ataagtgcca gactcccctg ggcatggctt ctgggcacat cagggatttc 3480

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggctag gctgcactac 3540

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttct cttggattaa ggtggacctg 3600

ctggctccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttttctagc 3660

ctgtatatta gccagttcat catcatgtat agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac 3720

agggggaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggca atgtggattc ttctggcatc 3780

aagcataaca tcttcaatcc ccctatcatt gccaggtaca ttaggctgca tcccacccat 3840

tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgatctgaa cagctgtagc 3900

atgcccctgg gcatggagtc caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960

ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatgggc atcagtggac cctgtttttt 4200

cagaatggca aagtgaaggt gtttcagggg aatcaggaca gctttacccc tgtggtgaac 4260

agcctggatc ctcctctgct gactagatac ctgaggatcc acccccagag ctgggtccac 4320

cagattgctc tgaggatgga ggtgctgggg tgtgaggctc aggacctgta ctga 4374

<210> 17

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 17

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60

accaggaggt actacctggg ggctgtggaa ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt cccctttaac 180

acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaatatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccaa ccatccaggc tgaggtgtat 300

gatactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct attggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg gggtctcata cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctattctta cctgagccat 540

gtggacctgg tcaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagact ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaataggtct 780

ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

actacccctg aggtgcactc tatcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gaggaaccac 900

aggcaggcca gcctggagat ctctcccatc accttcctga ctgcccagac tctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccat atcagcagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggacag ctgcccagag gaaccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaaca gccccagctt tattcagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggatt atgcccccct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggtcttacaa gtctcagtac ctgaacaatg gcccccagag gattgggagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440

ctgattatct tcaagaacca ggctagcagg ccctataaca tctaccccca tggcattact 1500

gatgtgaggc ccctgtactc taggagactg cccaaggggg tgaagcacct gaaagacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

actaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa tatggagagg 1680

gatctggctt ctggcctgat tgggcctctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggatcag 1740

agggggaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtacctgac tgagaatatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt ccaggctagc aacattatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta cattctgtct 1980

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggacactct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100

atggagaatc ctgggctgtg gattctgggg tgccacaact ctgatttcag gaacaggggc 2160

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggatta ttatgaggac 2220

agctatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc 2280

ttcagccaga atccccctgt gctgaagaga caccagaggg agatcactag gaccactctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccattt ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgata tttatgatga ggatgagaac cagagcccca gaagcttcca gaagaagacc 2460

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggatt atggcatgtc ttctagcccc 2520

catgtgctga ggaacagggc tcagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggagttca ctgatgggag cttcacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgaacat 2640

ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgactttc 2700

aggaatcagg cctctaggcc ctacagcttc tactctagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaat tttgtgaaac ccaatgagac caagacctac 2820

ttttggaagg tgcagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg taaggcctgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtatttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gtagggctcc ctgcaacatc cagatggagg atccaacttt caaggagaac 3120

tacaggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggaccaga ggattaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccactct 3240

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300

tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctggcatt 3360

tggagagtgg agtgtctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgtctac cctgttcctg 3420

gtgtactcta acaagtgcca gacccccctg gggatggctt ctgggcacat cagagatttt 3480

cagattactg cttctgggca gtatggccag tgggctccca agctggccag actgcattac 3540

tctggctcta ttaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggacctg 3600

ctggctccca tgatcatcca tggcattaag actcaggggg ctaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtatattt ctcagtttat tatcatgtat tctctggatg gcaagaagtg gcagacttac 3720

aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc 3780

aagcataaca tcttcaaccc ccccattatt gccaggtaca tcaggctgca ccccacccac 3840

tattctatca ggagcactct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgctct 3900

atgcccctgg gcatggagag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttat 3960

ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcaga 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cctaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagactatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agagcctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatgggc atcagtggac cctgttcttc 4200

cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac 4260

agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc atccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgctc tgagaatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga 4374

<210> 18

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 18

atgcagattg agctgtctac ctgttttttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct 60

accaggaggt attatctggg ggctgtggag ctgagctggg actacatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaac 180

acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ctatccaggc tgaggtgtat 300

gatactgtgg tgattaccct gaagaacatg gcctctcacc ctgtgtctct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgaatatg atgatcagac ctctcagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gtttcctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg ggcccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctacagcta cctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggaaaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacagatct 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggg 840

accacccctg aggtgcatag catcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gagaaatcat 900

aggcaggcca gcctggagat tagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atttctagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgaa gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260

ccagatgaca ggtcttacaa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg 1320

aagtataaga aagtgaggtt catggcttac actgatgaga cctttaagac tagggaggcc 1380

attcagcatg agtctgggat tctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctataata tttatcccca tgggattact 1500

gatgtcaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560

cccattctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

accaagtctg atcctaggtg cctgaccagg tactatagca gctttgtgaa catggagagg 1680

gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggaatc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag 1800

aataggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt ccaggcttct aacatcatgc atagcatcaa tgggtatgtg 1920

tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta catcctgagc 1980

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cctttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100

atggagaacc ctggcctgtg gattctgggc tgccataatt ctgacttcag aaacaggggc 2160

atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaggac 2220

tcttatgagg atatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccaggagc 2280

ttcagccaga acccccctgt cctgaagagg catcagaggg agatcactag gaccaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggaaat gaagaaggag 2400

gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggtctttcca gaagaagacc 2460

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc tagcagcccc 2520

catgtgctga ggaacagagc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttt 2580

caggagttca ctgatgggag cttcactcag cccctgtata ggggggagct gaatgagcat 2640

ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc 2700

aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tactcttctc tgatcagcta tgaggaggat 2760

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtcaagc ctaatgagac taagacctac 2820

ttttggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgattg caaggcctgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgtc acaccaatac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtcac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt ttttcactat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaacatg 3060

gaaaggaatt gcagggctcc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaac 3120

tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct 3180

caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa catccacagc 3240

atccactttt ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300

tacaatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420

gtgtactcta acaagtgcca gactcccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggacttc 3480

cagatcactg cctctgggca gtatggccag tgggccccta agctggctag gctgcattac 3540

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg 3600

ctggccccta tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccagacagaa gttctcttct 3660

ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720

agggggaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc 3780

aagcataata ttttcaaccc ccccattatt gctaggtaca tcaggctgca cccaacccac 3840

tactctatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgtagc 3900

atgcccctgg gcatggagag caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960

tttaccaaca tgtttgctac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggattttcag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga aaagcctgct gactagcatg 4140

tatgtgaagg agtttctgat cagcagctct caggatggcc atcagtggac cctgttcttc 4200

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggata gcttcacccc tgtggtgaat 4260

agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc atccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaagccc aggacctgta ctga 4374

<210> 19

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 19

atgcaaatag agctctccac ctgcttcttt ctgtgccttt tgcgattctg ctttagtgcc 60

accagaagat actacctggg tgcagtggaa ctgtcatggg actatatgca aagtgatctc 120

ggtgagctgc ctgtggacgc aagatttcct cctagagtgc caaaatcttt tccattcaac 180

acctcagtcg tgtacaaaaa gactctgttt gtagaattca cggatcacct tttcaacatc 240

gctaagccaa ggccaccctg gatgggtctg ctaggtccta ccatccaggc tgaggtttat 300

gatacagtgg tcattacact taagaacatg gcttcccatc ctgtcagtct tcatgctgtt 360

ggtgtatcct actggaaagc ttctgaggga gctgaatatg atgatcagac cagtcaaagg 420

gagaaagaag atgataaagt cttccctggt ggaagccata catatgtctg gcaggtcctg 480

aaagagaatg gtccaatggc ctctgaccca ctgtgcctta cctactcata tctttctcat 540

gtggacctgg taaaagactt gaattcaggc ctcattggag ccctactagt atgtagagaa 600

gggagtctgg ccaaggaaaa gacacagacc ttgcacaaat ttatactact ttttgctgta 660

tttgatgaag ggaaaagttg gcactcagaa acaaagaact ccttgatgca ggatagggat 720

gctgcatctg ctcgggcctg gcctaaaatg cacacagtca atggttatgt aaacaggtct 780

ctgccaggtc tgattggatg ccacaggaaa tcagtctatt ggcatgtgat tggaatgggc 840

accactcctg aagtgcactc aatattcctc gaaggtcaca catttcttgt gaggaaccat 900

cgccaggcgt ccttggaaat ctcgccaata actttcctta ctgctcaaac actcttgatg 960

gaccttggac agtttctact gttttgtcat atctcttccc accaacatga tggcatggaa 1020

gcttatgtca aagtagacag ctgtccagag gaaccccaac tacgaatgaa aaataatgaa 1080

gaagcggaag actatgatga tgatcttact gattctgaaa tggatgtggt caggtttgat 1140

gatgacaact ctccttcctt tatccaaatt cgctcagttg ccaagaagca tcctaaaact 1200

tgggtacatt acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgctccctt agtcctcgcc 1260

cccgatgaca gaagttataa aagtcaatat ttgaacaatg gccctcagcg gattggtagg 1320

aagtacaaaa aagtccgatt tatggcatac acagatgaaa cctttaagac tcgtgaagct 1380

attcagcatg aatcaggaat cttgggacct ttactttatg gggaagttgg agacacactg 1440

ttgattatat ttaagaatca agcaagcaga ccatataaca tctaccctca cggaatcact 1500

gatgtccgtc ctttgtattc aaggagatta ccaaaaggtg taaaacattt gaaggatttt 1560

ccaattctgc caggagaaat attcaaatat aaatggacag tgactgtaga agatgggcca 1620

actaaatcag atcctcggtg cctgacccgc tattactcta gtttcgttaa tatggagaga 1680

gatctagctt caggactcat tggccctctc ctcatctgct acaaagaatc tgtagatcaa 1740

agaggaaacc agataatgtc agacaagagg aatgtcatcc tgttttctgt atttgatgag 1800

aaccgaagct ggtacctcac agagaatata caacgctttc tccccaatcc agctggagtg 1860

cagcttgagg atccagagtt ccaagcctcc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtt 1920

tttgatagtt tgcagttgtc agtttgtttg catgaggtgg catactggta cattctaagc 1980

attggagcac agactgactt cctttctgtc ttcttctctg gatatacctt caaacacaaa 2040

atggtctatg aagacacact caccctattc ccattctcag gagaaactgt cttcatgtcg 2100

atggaaaacc caggtctatg gattctgggg tgccacaact cagactttcg gaacagaggc 2160

atgaccgcct tactgaaggt ttctagttgt gacaagaaca ctggtgatta ttacgaggac 2220

agttatgaag atatttcagc atacttgctg agtaaaaaca atgccattga accaagaagc 2280

ttctcccaaa acccaccagt cttgaaacgc catcaacggg aaataactcg tactactctt 2340

cagtcagatc aagaggaaat tgactatgat gataccatat cagttgaaat gaagaaggaa 2400

gattttgaca tttatgatga ggatgaaaat cagagccccc gcagctttca aaagaaaaca 2460

cgacactatt ttattgctgc agtggagagg ctctgggatt atgggatgag tagctcccca 2520

catgttctaa gaaacagggc tcagagtggc agtgtccctc agttcaagaa agttgttttc 2580

caggaattta ctgatggctc ctttactcag cccttatacc gtggagaact aaatgaacat 2640

ttgggactcc tggggccata tataagagca gaagttgaag ataatatcat ggtaactttc 2700

agaaatcagg cctctcgtcc ctattccttc tattctagcc ttatttctta tgaggaagat 2760

cagaggcaag gagcagaacc tagaaaaaac tttgtcaagc ctaatgaaac caaaacttac 2820

ttttggaaag tgcaacatca tatggcaccc actaaagatg agtttgactg caaagcctgg 2880

gcttatttct ctgatgttga cctggaaaaa gatgtgcact caggcctgat tggacccctt 2940

ctggtctgcc acactaacac actgaaccct gctcatggga gacaagtgac agtacaggaa 3000

tttgctctgt ttttcaccat ctttgatgag accaaaagct ggtacttcac tgaaaatatg 3060

gaaagaaact gcagggctcc ctgcaatatc cagatggaag atcccacttt taaagagaat 3120

tatcgcttcc atgcaatcaa tggctacata atggatacac tacctggctt agtaatggct 3180

caggatcaaa ggattcgatg gtatctgctc agcatgggca gcaatgaaaa catccattct 3240

attcatttca gtggacatgt gttcaccgta cgaaaaaaag aggagtataa aatggcactg 3300

tacaatctct atccaggtgt ttttgagaca gtggaaatgt taccatccaa agctggaatt 3360

tggcgggtgg aatgccttat tggcgagcat ctacatgctg ggatgagcac actttttctg 3420

gtgtacagca ataagtgtca gactcccctg ggaatggctt ctggacacat tagagatttt 3480

cagattacag cttcaggaca atatggacag tgggccccaa agctggccag acttcattat 3540

tccggatcaa tcaatgcctg gagcaccaag gagccctttt cttggatcaa ggtggatctg 3600

ttggcaccaa tgattattca cggcatcaag acccagggtg cccgtcagaa gttctccagc 3660

ctctacatct ctcagtttat catcatgtat agtcttgatg ggaagaagtg gcagacttat 3720

cgaggaaatt ccactggaac cttaatggtc ttctttggca atgtggattc atctgggata 3780

aaacacaata tttttaaccc tccaattatt gctcgataca tccgtttgca cccaactcat 3840

tatagcattc gcagcactct tcgcatggag ttgatgggct gtgatttaaa tagttgcagc 3900

atgccattgg gaatggagag taaagcaata tcagatgcac agattactgc ttcatcctac 3960

tttaccaata tgtttgccac ctggtctcct tcaaaagctc gacttcacct ccaagggagg 4020

agtaatgcct ggagacctca ggtgaataat ccaaaagagt ggctgcaagt ggacttccag 4080

aagacaatga aagtcacagg agtaactact cagggagtaa aatctctgct taccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctcat ctccagcagt caagatggcc atcagtggac tctctttttt 4200

cagaatggca aagtaaaggt ttttcaggga aatcaagact ccttcacacc tgtggtgaac 4260

tctctagacc caccgttact gactcgctac cttcgaattc acccccagag ttgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggttctgggc tgcgaggcac aggacctcta ctga 4374

<210> 20

<211> 4890

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 20

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60

accaggagat actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actacatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagagtgc ccaagagctt ccccttcaac 180

acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta cctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgaa accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

accacccctg aggtgcacag catcttcctg gagggccaca ccttcctggt caggaaccac 900

aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggagctacaa gagccagtac ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtcaggtt catggcctac actgatgaaa ccttcaagac cagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tggcatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

accaagtctg accccaggtg cctgaccaga tactacagca gctttgtgaa catggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100

atggagaacc ctggcctgtg gattctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggc 2160

atgactgccc tgctgaaagt ctccagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280

ttcagccaga acagcaggca ccccagcacc aggcagaagc agttcaatgc caccaccatc 2340

cctgagaatg acatagagaa gacagaccca tggtttgccc accggacccc catgcccaag 2400

atccagaatg tgagcagctc tgacctgctg atgctgctga ggcagagccc caccccccat 2460

ggcctgagcc tgtctgacct gcaggaggcc aagtatgaaa ccttctctga tgaccccagc 2520

cctggggcca ttgacagcaa caacagcctg tctgagatga cccacttcag gccccagctg 2580

caccactctg gggacatggt gttcacccct gagtctggcc tgcagctgag gctgaatgag 2640

aagctgggca ccactgctgc cactgagctg aagaagctgg acttcaaagt ctccagcacc 2700

agcaacaacc tgatcagcac catcccctct gacaacctgg ctgctggcac tgacaacacc 2760

agcagcctgg gcccccccag catgcctgtg cactatgaca gccagctgga caccaccctg 2820

tttggcaaga agagcagccc cctgactgag tctgggggcc ccctgagcct gtctgaggag 2880

aacaatgaca gcaagctgct ggagtctggc ctgatgaaca gccaggagag cagctggggc 2940

aagaatgtga gcaccaggag cttccagaag aagaccaggc actacttcat tgctgctgtg 3000

gagaggctgt gggactatgg catgagcagc agcccccatg tgctgaggaa cagggcccag 3060

tctggctctg tgccccagtt caagaaggtg gtgttccagg agttcactga tggcagcttc 3120

acccagcccc tgtacagagg ggagctgaat gagcacctgg gcctgctggg cccctacatc 3180

agggctgagg tggaggacaa catcatggtg accttcagga accaggccag caggccctac 3240

agcttctaca gcagcctgat cagctatgag gaggaccaga ggcagggggc tgagcccagg 3300

aagaactttg tgaagcccaa tgaaaccaag acctacttct ggaaggtgca gcaccacatg 3360

gcccccacca aggatgagtt tgactgcaag gcctgggcct acttctctga tgtggacctg 3420

gagaaggatg tgcactctgg cctgattggc cccctgctgg tgtgccacac caacaccctg 3480

aaccctgccc atggcaggca ggtgactgtg caggagtttg ccctgttctt caccatcttt 3540

gatgaaacca agagctggta cttcactgag aacatggaga ggaactgcag ggccccctgc 3600

aacatccaga tggaggaccc caccttcaag gagaactaca ggttccatgc catcaatggc 3660

tacatcatgg acaccctgcc tggcctggtg atggcccagg accagaggat caggtggtac 3720

ctgctgagca tgggcagcaa tgagaacatc cacagcatcc acttctctgg ccatgtgttc 3780

actgtgagga agaaggagga gtacaagatg gccctgtaca acctgtaccc tggggtgttt 3840

gagactgtgg agatgctgcc cagcaaggct ggcatctgga gggtggagtg cctgattggg 3900

gagcacctgc atgctggcat gagcaccctg ttcctggtgt acagcaacaa gtgccagacc 3960

cccctgggca tggcctctgg ccacatcagg gacttccaga tcactgcctc tggccagtat 4020

ggccagtggg cccccaagct ggccaggctg cactactctg gcagcatcaa tgcctggagc 4080

accaaggagc ccttcagctg gatcaaggtg gacctgctgg cccccatgat catccatggc 4140

atcaagaccc agggggccag gcagaagttc agcagcctgt acatcagcca gttcatcatc 4200

atgtacagcc tggatggcaa gaagtggcag acctacaggg gcaacagcac tggcaccctg 4260

atggtgttct ttggcaatgt ggacagctct ggcatcaagc acaacatctt caaccccccc 4320

atcattgcca gatacatcag gctgcacccc acccactaca gcatcaggag caccctgagg 4380

atggagctga tgggctgtga cctgaacagc tgcagcatgc ccctgggcat ggagagcaag 4440

gccatctctg atgcccagat cactgccagc agctacttca ccaacatgtt tgccacctgg 4500

agccccagca aggccaggct gcacctgcag ggcaggagca atgcctggag gccccaggtc 4560

aacaacccca aggagtggct gcaggtggac ttccagaaga ccatgaaggt gactggggtg 4620

accacccagg gggtgaagag cctgctgacc agcatgtatg tgaaggagtt cctgatcagc 4680

agcagccagg atggccacca gtggaccctg ttcttccaga atggcaaggt gaaggtgttc 4740

cagggcaacc aggacagctt cacccctgtg gtgaacagcc tggacccccc cctgctgacc 4800

agatacctga ggattcaccc ccagagctgg gtgcaccaga ttgccctgag gatggaggtg 4860

ctgggctgtg aggcccagga cctgtactga 4890

<210> 21

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII

<400> 21

atgcagattg agctgtcaac ttgctttttc ctgtgcctgc tgagattttg tttttccgct 60

actagaagat actacctggg ggctgtggaa ctgtcttggg attacatgca gagtgacctg 120

ggagagctgc cagtggacgc acgatttcca cctagagtcc ctaaatcatt ccccttcaac 180

accagcgtgg tctataagaa aacactgttc gtggagttta ctgatcacct gttcaacatc 240

gctaagcctc ggccaccctg gatgggactg ctgggaccaa caatccaggc agaggtgtac 300

gacaccgtgg tcattacact gaaaaacatg gcctcacacc ccgtgagcct gcatgctgtg 360

ggcgtcagct actggaaggc ttccgaaggg gcagagtatg acgatcagac ttcccagaga 420

gaaaaagagg acgataaggt gtttcctggc gggtctcata cctatgtgtg gcaggtcctg 480

aaagagaatg gccccatggc ttccgaccct ctgtgcctga cctactctta tctgagtcac 540

gtggacctgg tcaaggatct gaacagcgga ctgatcggag cactgctggt gtgtagggaa 600

gggagcctgg ctaaggagaa aacccagaca ctgcataagt tcattctgct gttcgccgtg 660

tttgacgaag gaaaatcatg gcacagcgag acaaagaata gtctgatgca ggaccgggat 720

gccgcttcag ccagagcttg gcccaaaatg cacactgtga acggctacgt caatcgctca 780

ctgcctggac tgatcggctg ccaccgaaag agcgtgtatt ggcatgtcat cggaatgggc 840

accacacctg aagtgcactc cattttcctg gaggggcata cctttctggt ccgcaaccac 900

cgacaggcct ccctggagat ctctccaatt accttcctga cagctcagac tctgctgatg 960

gatctgggac agttcctgct gttttgccac atcagctccc accagcatga tggcatggag 1020

gcctacgtga aagtggacag ctgtcccgag gaacctcagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaagctgaag actatgacga tgacctgacc gactccgaga tggatgtggt ccgattcgat 1140

gacgataaca gcccctcctt tatccagatt agatctgtgg ccaagaaaca ccctaagaca 1200

tgggtccatt acatcgcagc cgaggaagag gactgggatt atgcaccact ggtgctggca 1260

ccagacgatc gatcctacaa atctcagtat ctgaacaatg gaccacagcg gattggcaga 1320

aagtacaaga aagtgaggtt catggcttat accgatgaaa ccttcaagac tcgcgaagca 1380

atccagcacg agagcgggat tctgggacca ctgctgtacg gagaagtggg ggacaccctg 1440

ctgatcattt ttaagaacca ggccagcagg ccttacaata tctatccaca tggaattaca 1500

gatgtgcgcc ctctgtacag ccggagactg ccaaagggcg tcaaacacct gaaggacttc 1560

ccaatcctgc ccggggaaat ttttaagtat aaatggactg tcaccgtcga ggatggcccc 1620

actaagagcg accctaggtg cctgacccgc tactattcta gtttcgtgaa tatggaaagg 1680

gatctggcca gcggactgat cggcccactg ctgatttgtt acaaagagag cgtggatcag 1740

agaggcaacc agatcatgtc cgacaagagg aatgtgattc tgttcagtgt ctttgacgaa 1800

aaccggtcat ggtatctgac cgagaacatc cagagattcc tgcctaatcc agccggagtg 1860

cagctggaag atcctgagtt tcaggcttct aacatcatgc atagtattaa tggctacgtg 1920

ttcgacagtc tgcagctgtc agtgtgtctg cacgaggtcg cttactggta tatcctgagc 1980

attggagcac agacagattt cctgagcgtg ttcttttccg gctacacttt taagcataaa 2040

atggtgtatg aggacacact gactctgttc cccttcagcg gcgaaaccgt gtttatgtcc 2100

atggagaatc ccgggctgtg gatcctggga tgccacaaca gcgatttcag gaatcgcggg 2160

atgactgccc tgctgaaagt gtcaagctgt gacaagaaca ccggagacta ctatgaagat 2220

tcatacgagg acatcagcgc atatctgctg tccaaaaaca atgccattga acccaggtct 2280

tttagtcaga atcctccagt gctgaagagg caccagcgcg agatcacccg cactaccctg 2340

cagagtgatc aggaagagat cgactacgac gatacaattt ctgtggaaat gaagaaagag 2400

gacttcgata tctatgacga agatgagaac cagagtcctc gatcattcca gaagaaaacc 2460

cggcattact ttattgctgc agtggagcgc ctgtgggatt atggcatgtc ctctagtcct 2520

cacgtgctgc gaaatcgggc ccagtcaggg agcgtcccac agttcaagaa agtggtcttc 2580

caggagttta cagacggatc ctttactcag ccactgtacc ggggcgaact gaacgagcac 2640

ctggggctgc tgggacccta tatcagagct gaagtggagg ataacattat ggtcaccttc 2700

agaaatcagg catctaggcc ttacagtttt tattcaagcc tgatctctta cgaagaggac 2760

cagaggcagg gagcagaacc acgaaaaaac ttcgtgaagc ctaatgagac caaaacatac 2820

ttttggaagg tgcagcacca tatggcccca acaaaagacg aattcgattg caaggcatgg 2880

gcctattttt ctgacgtgga tctggagaag gacgtccaca gtggcctgat cgggccactg 2940

ctggtgtgtc atactaacac cctgaatccc gcacacggca ggcaggtcac tgtccaggaa 3000

ttcgccctgt tctttaccat ctttgatgag acaaaaagct ggtacttcac cgaaaacatg 3060

gagcgaaatt gccgggctcc atgtaatatt cagatggaag accccacatt caaggagaac 3120

taccgctttc atgccatcaa tgggtatatt atggatactc tgcccggact ggtcatggct 3180

caggaccaga gaatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ccaacgagaa tatccactca 3240

attcatttca gcggacacgt gtttactgtc cggaagaaag aagagtataa aatggccctg 3300

tacaacctgt atcccggcgt gttcgaaacc gtcgagatgc tgcctagcaa ggcagggatc 3360

tggagagtgg aatgcctgat tggggagcac ctgcatgccg gaatgtctac cctgtttctg 3420

gtgtacagta ataagtgtca gacacccctg gggatggctt ccggacatat ccgggatttc 3480

cagattaccg catctggaca gtacggccag tgggccccta agctggctag actgcactat 3540

tccgggtcta tcaacgcttg gtccacaaaa gagcctttct cttggattaa ggtggacctg 3600

ctggcaccaa tgatcattca tggcatcaaa actcaggggg ccaggcagaa gttctcctct 3660

ctgtacatct cacagtttat catcatgtac agcctggatg gcaagaaatg gcagacatac 3720

cgcggcaata gcacagggac tctgatggtg ttctttggca acgtggacag ttcagggatc 3780

aagcacaaca ttttcaatcc ccctatcatt gctagataca tcaggctgca cccaacccat 3840

tattctattc gaagtacact gcggatggaa ctgatggggt gcgatctgaa cagttgttca 3900

atgcccctgg gaatggagtc caaggcaatc tctgacgccc agattaccgc tagctcctac 3960

ttcactaata tgtttgctac ctggagcccc tccaaagcac gactgcatct gcagggacga 4020

agcaacgcat ggcgaccaca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt cgattttcag 4080

aaaactatga aggtgaccgg agtcacaact cagggcgtga aaagtctgct gacctcaatg 4140

tacgtcaagg agttcctgat ctctagttca caggacggcc accagtggac actgttcttt 4200

cagaacggaa aggtgaaagt cttccagggc aatcaggatt cctttacacc tgtggtcaac 4260

tctctggacc cacccctgct gactcgctac ctgcgaatcc acccacagtc ctgggtgcat 4320

cagattgcac tgagaatgga agtcctgggc tgcgaggccc aggacctgta ttga 4374

<210> 22

<211> 222

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Промотор TTR

<400> 22

gtctgtctgc acatttcgta gagcgagtgt tccgatactc taatctccct aggcaaggtt 60

catattgact taggttactt attctccttt tgttgactaa gtcaataatc agaatcagca 120

ggtttggagt cagcttggca gggatcagca gcctgggttg gaaggagggg gtataaaagc 180

cccttcacca ggagaagccg tcacacagat ccacaagctc ct 222

<210> 23

<211> 5066

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: экспрессионная кассета

<400> 23

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tacgcgtgtc tgtctgcaca tttcgtagag cgagtgttcc 180

gatactctaa tctccctagg caaggttcat attgacttag gttacttatt ctccttttgt 240

tgactaagtc aataatcaga atcagcaggt ttggagtcag cttggcaggg atcagcagcc 300

tgggttggaa ggagggggta taaaagcccc ttcaccagga gaagccgtca cacagatcca 360

caagctcctg ctagcaggta agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg 420

gttatggccc ttgcgtgcct tgaattactg acactgacat ccactttttc tttttctcca 480

caggtttaaa cgccaccatg cagattgagc tgagcacctg cttcttcctg tgtctgctga 540

ggttctgctt ctctgccacc aggaggtatt acctgggggc tgtggagctg agctgggact 600

atatgcagtc tgacctgggg gagctgcctg tggatgctag gttccccccc agggtgccca 660

agagcttccc ctttaacact tctgtggtgt acaagaagac cctgtttgtg gagttcactg 720

accacctgtt caacattgcc aagcccaggc ccccctggat ggggctgctg gggcccacca 780

tccaggctga ggtgtatgac actgtggtga tcaccctgaa gaacatggcc agccaccctg 840

tgagcctgca tgctgtgggg gtgagctact ggaaggcttc tgagggggct gagtatgatg 900

accagactag ccagagggag aaggaggatg acaaggtgtt tcctgggggc agccatacct 960

atgtgtggca ggtgctgaag gagaatggcc ccatggcctc tgaccccctg tgcctgacct 1020

acagctacct gtctcatgtg gacctggtga aggacctgaa ctctggcctg attggggctc 1080

tgctggtgtg tagggagggc agcctggcta aggaaaagac ccagaccctg cataagttta 1140

tcctgctgtt tgctgtgttt gatgagggca agagctggca ctctgagacc aagaacagcc 1200

tgatgcagga tagggatgct gcctctgcca gggcttggcc taagatgcac actgtgaatg 1260

ggtatgtgaa taggagcctg cctggcctga ttggctgcca caggaagtct gtgtactggc 1320

atgtgattgg gatgggcacc acccctgagg tccatagcat cttcctggag ggccacactt 1380

tcctggtgag gaaccacaga caggcctctc tggagatctc tcccatcacc ttcctgactg 1440

ctcagactct gctgatggac ctgggccagt tcctgctgtt ttgccatatt agcagccacc 1500

agcatgatgg gatggaggcc tatgtgaagg tggatagctg ccctgaggag cctcagctga 1560

ggatgaagaa caatgaggag gctgaagact atgatgatga cctgactgat tctgagatgg 1620

atgtggtgag gtttgatgat gacaatagcc ccagcttcat tcagatcagg tctgtggcca 1680

agaaacaccc caagacctgg gtgcactaca ttgctgctga ggaagaggac tgggactatg 1740

ctcccctggt gctggcccct gatgataggt cttataagag ccagtacctg aacaatgggc 1800

cccagaggat tggcaggaag tacaagaagg tgaggttcat ggcctacact gatgaaacct 1860

tcaaaaccag ggaggccatt cagcatgagt ctggcatcct gggccctctg ctgtatgggg 1920

aggtggggga caccctgctg atcatcttca agaaccaggc cagcaggccc tacaacatct 1980

atcctcatgg catcactgat gtgaggcccc tgtacagcag gaggctgccc aagggggtga 2040

agcacctgaa agacttcccc atcctgcctg gggagatctt taagtataag tggactgtga 2100

ctgtggagga tggccctacc aagtctgacc ccaggtgtct gaccaggtac tattctagct 2160

ttgtgaacat ggagagggac ctggcctctg gcctgattgg gcccctgctg atctgctaca 2220

aggagtctgt ggaccagagg ggcaaccaga tcatgtctga caagaggaat gtgatcctgt 2280

tttctgtgtt tgatgagaat aggagctggt acctgactga gaacatccag aggtttctgc 2340

ccaatcctgc tggggtgcag ctggaggatc ctgagttcca ggccagcaat atcatgcata 2400

gcatcaatgg ctatgtgttt gacagcctgc agctgtctgt gtgcctgcat gaggtggcct 2460

actggtacat cctgagcatt ggggcccaga ctgactttct gtctgtgttc ttttctggct 2520

ataccttcaa gcacaagatg gtgtatgagg ataccctgac cctgttcccc ttctctgggg 2580

agactgtgtt catgagcatg gagaatcctg ggctgtggat cctggggtgc cacaactctg 2640

attttaggaa cagggggatg actgccctgc tgaaggtgtc tagctgtgat aagaacactg 2700

gggactacta tgaggacagc tatgaggaca tttctgctta tctgctgtct aagaataatg 2760

ccattgagcc cagaagcttc agccagaatc cccctgtgct gaagagacat cagagggaga 2820

tcaccagaac taccctgcag tctgatcagg aggagattga ctatgatgac actatctctg 2880

tggagatgaa gaaggaggac tttgacatct atgatgagga tgagaatcag tctcccagga 2940

gctttcagaa gaagaccaga cattacttca ttgctgctgt ggagaggctg tgggactatg 3000

gcatgagctc tagccctcat gtgctgagga acagggccca gtctggctct gtgccccagt 3060

tcaagaaggt ggtgttccag gaattcactg atggcagctt cacccagccc ctgtacaggg 3120

gggagctgaa tgagcacctg ggcctgctgg ggccttatat cagggctgag gtggaggata 3180

atattatggt gactttcagg aaccaggcca gcaggcccta ctctttctat agcagcctga 3240

tctcttatga ggaggatcag aggcaggggg ctgagcctag gaagaacttt gtgaagccca 3300

atgagactaa gacctacttc tggaaggtcc agcaccacat ggcccctacc aaggatgagt 3360

ttgactgcaa ggcctgggcc tatttctctg atgtggatct ggagaaggat gtccattctg 3420

ggctgattgg ccccctgctg gtgtgccaca ctaacactct gaatcctgcc catggcaggc 3480

aggtgactgt ccaggagttt gccctgttct tcactatctt tgatgagacc aagagctggt 3540

actttactga gaacatggag aggaactgca gagctccttg caatattcag atggaggacc 3600

ccaccttcaa ggagaattac aggttccatg ccattaatgg gtacatcatg gacaccctgc 3660

ctggcctggt gatggctcag gaccagagga tcaggtggta cctgctgagc atgggctcta 3720

atgagaatat ccacagcatc cacttctctg ggcatgtgtt cactgtgagg aagaaggagg 3780

agtacaagat ggctctgtat aatctgtacc ctggggtgtt tgaaactgtg gagatgctgc 3840

cctctaaggc tggcatctgg agggtggagt gcctgattgg ggagcacctg catgctggca 3900

tgagcaccct gttcctggtg tacagcaaca agtgccagac ccccctgggc atggcctctg 3960

gccacatcag ggacttccag atcactgcct ctggccagta tggccagtgg gcccccaagc 4020

tggccaggct gcactattct ggcagcatca atgcctggag caccaaggag cccttcagct 4080

ggatcaaggt ggacctgctg gcccccatga tcattcatgg catcaagacc cagggggcca 4140

ggcagaagtt cagctctctg tacatctctc agttcatcat catgtactct ctggatggga 4200

agaagtggca gacctacagg ggcaacagca ctggcaccct gatggtgttc tttgggaatg 4260

tggactcttc tggcatcaag cacaacatct tcaatccccc catcattgct aggtatatta 4320

ggctgcatcc cacccactac agcatcaggt ctaccctgag gatggagctg atgggctgtg 4380

acctgaactc ttgcagcatg cccctgggca tggagtctaa ggccatctct gatgcccaga 4440

ttactgccag cagctacttc accaacatgt ttgccacctg gagcccctct aaggccaggc 4500

tgcatctgca ggggaggagc aatgcctgga ggcctcaggt gaacaacccc aaggagtggc 4560

tgcaggtgga tttccagaag accatgaagg tgactggggt gaccacccag ggggtcaaga 4620

gcctgctgac cagcatgtat gtgaaggagt tcctgatcag cagcagccag gatggccacc 4680

agtggactct gttctttcag aatgggaagg tgaaggtgtt tcagggcaat caggactctt 4740

tcacccctgt ggtgaacagc ctggaccccc ccctgctgac cagatacctg aggatccacc 4800

cccagtcttg ggtgcatcag attgccctga ggatggaggt gctgggctgt gaggctcagg 4860

atctgtactg agcggccgca ataaaagatc agagctctag agatctgtgt gttggttttt 4920

tgtgtaggaa cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac 4980

tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag 5040

cgagcgagcg cgcagctgcc tgcagg 5066

<210> 24

<211> 11976

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: плазмида

<400> 24

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tacgcgtgtc tgtctgcaca tttcgtagag cgagtgttcc 180

gatactctaa tctccctagg caaggttcat attgacttag gttacttatt ctccttttgt 240

tgactaagtc aataatcaga atcagcaggt ttggagtcag cttggcaggg atcagcagcc 300

tgggttggaa ggagggggta taaaagcccc ttcaccagga gaagccgtca cacagatcca 360

caagctcctg ctagcaggta agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg 420

gttatggccc ttgcgtgcct tgaattactg acactgacat ccactttttc tttttctcca 480

caggtttaaa cgccaccatg cagattgagc tgagcacctg cttcttcctg tgtctgctga 540

ggttctgctt ctctgccacc aggaggtatt acctgggggc tgtggagctg agctgggact 600

atatgcagtc tgacctgggg gagctgcctg tggatgctag gttccccccc agggtgccca 660

agagcttccc ctttaacact tctgtggtgt acaagaagac cctgtttgtg gagttcactg 720

accacctgtt caacattgcc aagcccaggc ccccctggat ggggctgctg gggcccacca 780

tccaggctga ggtgtatgac actgtggtga tcaccctgaa gaacatggcc agccaccctg 840

tgagcctgca tgctgtgggg gtgagctact ggaaggcttc tgagggggct gagtatgatg 900

accagactag ccagagggag aaggaggatg acaaggtgtt tcctgggggc agccatacct 960

atgtgtggca ggtgctgaag gagaatggcc ccatggcctc tgaccccctg tgcctgacct 1020

acagctacct gtctcatgtg gacctggtga aggacctgaa ctctggcctg attggggctc 1080

tgctggtgtg tagggagggc agcctggcta aggaaaagac ccagaccctg cataagttta 1140

tcctgctgtt tgctgtgttt gatgagggca agagctggca ctctgagacc aagaacagcc 1200

tgatgcagga tagggatgct gcctctgcca gggcttggcc taagatgcac actgtgaatg 1260

ggtatgtgaa taggagcctg cctggcctga ttggctgcca caggaagtct gtgtactggc 1320

atgtgattgg gatgggcacc acccctgagg tccatagcat cttcctggag ggccacactt 1380

tcctggtgag gaaccacaga caggcctctc tggagatctc tcccatcacc ttcctgactg 1440

ctcagactct gctgatggac ctgggccagt tcctgctgtt ttgccatatt agcagccacc 1500

agcatgatgg gatggaggcc tatgtgaagg tggatagctg ccctgaggag cctcagctga 1560

ggatgaagaa caatgaggag gctgaagact atgatgatga cctgactgat tctgagatgg 1620

atgtggtgag gtttgatgat gacaatagcc ccagcttcat tcagatcagg tctgtggcca 1680

agaaacaccc caagacctgg gtgcactaca ttgctgctga ggaagaggac tgggactatg 1740

ctcccctggt gctggcccct gatgataggt cttataagag ccagtacctg aacaatgggc 1800

cccagaggat tggcaggaag tacaagaagg tgaggttcat ggcctacact gatgaaacct 1860

tcaaaaccag ggaggccatt cagcatgagt ctggcatcct gggccctctg ctgtatgggg 1920

aggtggggga caccctgctg atcatcttca agaaccaggc cagcaggccc tacaacatct 1980

atcctcatgg catcactgat gtgaggcccc tgtacagcag gaggctgccc aagggggtga 2040

agcacctgaa agacttcccc atcctgcctg gggagatctt taagtataag tggactgtga 2100

ctgtggagga tggccctacc aagtctgacc ccaggtgtct gaccaggtac tattctagct 2160

ttgtgaacat ggagagggac ctggcctctg gcctgattgg gcccctgctg atctgctaca 2220

aggagtctgt ggaccagagg ggcaaccaga tcatgtctga caagaggaat gtgatcctgt 2280

tttctgtgtt tgatgagaat aggagctggt acctgactga gaacatccag aggtttctgc 2340

ccaatcctgc tggggtgcag ctggaggatc ctgagttcca ggccagcaat atcatgcata 2400

gcatcaatgg ctatgtgttt gacagcctgc agctgtctgt gtgcctgcat gaggtggcct 2460

actggtacat cctgagcatt ggggcccaga ctgactttct gtctgtgttc ttttctggct 2520

ataccttcaa gcacaagatg gtgtatgagg ataccctgac cctgttcccc ttctctgggg 2580

agactgtgtt catgagcatg gagaatcctg ggctgtggat cctggggtgc cacaactctg 2640

attttaggaa cagggggatg actgccctgc tgaaggtgtc tagctgtgat aagaacactg 2700

gggactacta tgaggacagc tatgaggaca tttctgctta tctgctgtct aagaataatg 2760

ccattgagcc cagaagcttc agccagaatc cccctgtgct gaagagacat cagagggaga 2820

tcaccagaac taccctgcag tctgatcagg aggagattga ctatgatgac actatctctg 2880

tggagatgaa gaaggaggac tttgacatct atgatgagga tgagaatcag tctcccagga 2940

gctttcagaa gaagaccaga cattacttca ttgctgctgt ggagaggctg tgggactatg 3000

gcatgagctc tagccctcat gtgctgagga acagggccca gtctggctct gtgccccagt 3060

tcaagaaggt ggtgttccag gaattcactg atggcagctt cacccagccc ctgtacaggg 3120

gggagctgaa tgagcacctg ggcctgctgg ggccttatat cagggctgag gtggaggata 3180

atattatggt gactttcagg aaccaggcca gcaggcccta ctctttctat agcagcctga 3240

tctcttatga ggaggatcag aggcaggggg ctgagcctag gaagaacttt gtgaagccca 3300

atgagactaa gacctacttc tggaaggtcc agcaccacat ggcccctacc aaggatgagt 3360

ttgactgcaa ggcctgggcc tatttctctg atgtggatct ggagaaggat gtccattctg 3420

ggctgattgg ccccctgctg gtgtgccaca ctaacactct gaatcctgcc catggcaggc 3480

aggtgactgt ccaggagttt gccctgttct tcactatctt tgatgagacc aagagctggt 3540

actttactga gaacatggag aggaactgca gagctccttg caatattcag atggaggacc 3600

ccaccttcaa ggagaattac aggttccatg ccattaatgg gtacatcatg gacaccctgc 3660

ctggcctggt gatggctcag gaccagagga tcaggtggta cctgctgagc atgggctcta 3720

atgagaatat ccacagcatc cacttctctg ggcatgtgtt cactgtgagg aagaaggagg 3780

agtacaagat ggctctgtat aatctgtacc ctggggtgtt tgaaactgtg gagatgctgc 3840

cctctaaggc tggcatctgg agggtggagt gcctgattgg ggagcacctg catgctggca 3900

tgagcaccct gttcctggtg tacagcaaca agtgccagac ccccctgggc atggcctctg 3960

gccacatcag ggacttccag atcactgcct ctggccagta tggccagtgg gcccccaagc 4020

tggccaggct gcactattct ggcagcatca atgcctggag caccaaggag cccttcagct 4080

ggatcaaggt ggacctgctg gcccccatga tcattcatgg catcaagacc cagggggcca 4140

ggcagaagtt cagctctctg tacatctctc agttcatcat catgtactct ctggatggga 4200

agaagtggca gacctacagg ggcaacagca ctggcaccct gatggtgttc tttgggaatg 4260

tggactcttc tggcatcaag cacaacatct tcaatccccc catcattgct aggtatatta 4320

ggctgcatcc cacccactac agcatcaggt ctaccctgag gatggagctg atgggctgtg 4380

acctgaactc ttgcagcatg cccctgggca tggagtctaa ggccatctct gatgcccaga 4440

ttactgccag cagctacttc accaacatgt ttgccacctg gagcccctct aaggccaggc 4500

tgcatctgca ggggaggagc aatgcctgga ggcctcaggt gaacaacccc aaggagtggc 4560

tgcaggtgga tttccagaag accatgaagg tgactggggt gaccacccag ggggtcaaga 4620

gcctgctgac cagcatgtat gtgaaggagt tcctgatcag cagcagccag gatggccacc 4680

agtggactct gttctttcag aatgggaagg tgaaggtgtt tcagggcaat caggactctt 4740

tcacccctgt ggtgaacagc ctggaccccc ccctgctgac cagatacctg aggatccacc 4800

cccagtcttg ggtgcatcag attgccctga ggatggaggt gctgggctgt gaggctcagg 4860

atctgtactg agcggccgca ataaaagatc agagctctag agatctgtgt gttggttttt 4920

tgtgtaggaa cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac 4980

tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag 5040

cgagcgagcg cgcagctgcc tgcaggggca gcttgaagga aatactaagg caaaggtact 5100

gcaagtgctc gcaacattcg cttatgcgga ttattgccgt agtgccgcga cgccgggggc 5160

aagatgcaga gattgccatg gtacaggccg tgcggttgat attgccaaaa cagagctgtg 5220

ggggagagtt gtcgagaaag agtgcggaag atgcaaaggc gtcggctatt caaggatgcc 5280

agcaagcgca gcatatcgcg ctgtgacgat gctaatccca aaccttaccc aacccacctg 5340

gtcacgcact gttaagccgc tgtatgacgc tctggtggtg caatgccaca aagaagagtc 5400

aatcgcagac aacattttga atgcggtcac acgttagcag catgattgcc acggatggca 5460

acatattaac ggcatgatat tgacttattg aataaaattg ggtaaatttg actcaacgat 5520

gggttaattc gctcgttgtg gtagtgagat gaaaagaggc ggcgcttact accgattccg 5580

cctagttggt cacttcgacg tatcgtctgg aactccaacc atcgcaggca gagaggtctg 5640

caaaatgcaa tcccgaaaca gttcgcaggt aatagttaga gcctgcataa cggtttcggg 5700

attttttata tctgcacaac aggtaagagc attgagtcga taatcgtgaa gagtcggcga 5760

gcctggttag ccagtgctct ttccgttgtg ctgaattaag cgaataccgg aagcagaacc 5820

ggatcaccaa atgcgtacag gcgtcatcgc cgcccagcaa cagcacaacc caaactgagc 5880

cgtagccact gtctgtcctg aattcattag taatagttac gctgcggcct tttacacatg 5940

accttcgtga aagcgggtgg caggaggtcg cgctaacaac ctcctgccgt tttgcccgtg 6000

catatcggtc acgaacaaat ctgattacta aacacagtag cctggatttg ttctatcagt 6060

aatcgacctt attcctaatt aaatagagca aatcccctta ttgggggtaa gacatgaaga 6120

tgccagaaaa acatgacctg ttggccgcca ttctcgcggc aaaggaacaa ggcatcgggg 6180

caatccttgc gtttgcaatg gcgtaccttc gcggcagata taatggcggt gcgtttacaa 6240

aaacagtaat cgacgcaacg atgtgcgcca ttatcgccta gttcattcgt gaccttctcg 6300

acttcgccgg actaagtagc aatctcgctt atataacgag cgtgtttatc ggctacatcg 6360

gtactgactc gattggttcg cttatcaaac gcttcgctgc taaaaaagcc ggagtagaag 6420

atggtagaaa tcaataatca acgtaaggcg ttcctcgata tgctggcgtg gtcggaggga 6480

actgataacg gacgtcagaa aaccagaaat catggttatg acgtcattgt aggcggagag 6540

ctatttactg attactccga tcaccctcgc aaacttgtca cgctaaaccc aaaactcaaa 6600

tcaacaggcg ccggacgcta ccagcttctt tcccgttggt gggatgccta ccgcaagcag 6660

cttggcctga aagacttctc tccgaaaagt caggacgctg tggcattgca gcagattaag 6720

gagcgtggcg ctttacctat gattgatcgt ggtgatatcc gtcaggcaat cgaccgttgc 6780

agcaatatct gggcttcact gccgggcgct ggttatggtc agttcgagca taaggctgac 6840

agcctgattg caaaattcaa agaagcgggc ggaacggtca gagagattga tgtatgagca 6900

gagtcaccgc gattatctcc gctctggtta tctgcatcat cgtctgcctg tcatgggctg 6960

ttaatcatta ccgtgataac gccattacct acaaagccca gcgcgacaaa aatgccagag 7020

aactgaagct ggcgaacgcg gcaattactg acatgcagat gcgtcagcgt gatgttgctg 7080

cgctcgatgc aaaatacacg aaggagttag ctgatgctaa agctgaaaat gatgctctgc 7140

gtgatgatgt tgccgctggt cgtcgtcggt tgcacatcaa agcagtctgt cagtcagtgc 7200

gtgaagccac caccgcctcc ggcgtggata atgcagcctc cccccgactg gcagacaccg 7260

ctgaacggga ttatttcacc ctcagagaga ggctgatcac tatgcaaaaa caactggaag 7320

gaacccagaa gtatattaat gagcagtgca gatagagttg cccatatcga tgggcaactc 7380

atgcaattat tgtgagcaat acacacgcgc ttccagcgga gtataaatgc ctaaagtaat 7440

aaaaccgagc aatccattta cgaatgtttg ctgggtttct gttttaacaa cattttctgc 7500

gccgccacaa attttggctg catcgacagt tttcttctgc ccaattccag aaacgaagaa 7560

atgatgggtg atggtttcct ttggtgctac tgctgccggt ttgttttgaa cagtaaacgt 7620

ctgttgagca catcctgtaa taagcagggc cagcgcagta gcgagtagca tttttttcat 7680

ggtgttattc ccgatgcttt ttgaagttcg cagaatcgta tgtgtagaaa attaaacaaa 7740

ccctaaacaa tgagttgaaa tttcatattg ttaatattta ttaatgtatg tcaggtgcga 7800

tgaatcgtca ttgtattccc ggattaacta tgtccacagc cctgacgggg aacttctctg 7860

cgggagtgtc cgggaataat taaaacgatg cacacagggt ttagcgcgta cacgtattgc 7920

attatgccaa cgccccggtg ctgacacgga agaaaccgga cgttatgatt tagcgtggaa 7980

agatttgtgt agtgttctga atgctctcag taaatagtaa tgaattatca aaggtatagt 8040

aatatctttt atgttcatgg atatttgtaa cccatcggaa aactcctgct ttagcaagat 8100

tttccctgta ttgctgaaat gtgatttctc ttgatttcaa cctatcatag gacgtttcta 8160

taagatgcgt gtttcttgag aatttaacat ttacaacctt tttaagtcct tttattaaca 8220

cggtgttatc gttttctaac acgatgtgaa tattatctgt ggctagatag taaatataat 8280

gtgagacgtt gtgacgtttt agttcagaat aaaacaattc acagtctaaa tcttttcgca 8340

cttgatcgaa tatttcttta aaaatggcaa cctgagccat tggtaaaacc ttccatgtga 8400

tacgagggcg cgtagtttgc attatcgttt ttatcgtttc aatctggtct gacctccttg 8460

tgttttgttg atgatttatg tcaaatatta ggaatgtttt cacttaatag tattggttgc 8520

gtaacaaagt gcggtcctgc tggcattctg gagggaaata caaccgacag atgtatgtaa 8580

ggccaacgtg ctcaaatctt catacagaaa gatttgaagt aatattttaa ccgctagatg 8640

aagagcaagc gcatggagcg acaaaatgaa taaagaacaa tctgctgatg atccctccgt 8700

ggatctgatt cgtgtaaaaa atatgcttaa tagcaccatt tctatgagtt accctgatgt 8760

tgtaattgca tgtatagaac ataaggtgtc tctggaagca ttcagagcaa ttgaggcagc 8820

gttggtgaag cacgataata atatgaagga ttattccctg gtggttgact gatcaccata 8880

actgctaatc attcaaacta tttagtctgt gacagagcca acacgcagtc tgtcactgtc 8940

aggaaagtgg taaaactgca actcaattac tgcaatgccc tcgtaattaa gtgaatttac 9000

aatatcgtcc tgttcggagg gaagaacgcg ggatgttcat tcttcatcac ttttaattga 9060

tgtatatgct ctcttttctg acgttagtct ccgacggcag gcttcaatga cccaggctga 9120

gaaattcccg gacccttttt gctcaagagc gatgttaatt tgttcaatca tttggttagg 9180

aaagcggatg ttgcgggttg ttgttctgcg ggttctgttc ttcgttgaca tgaggttgcc 9240

ccgtattcag tgtcgctgat ttgtattgtc tgaagttgtt tttacgttaa gttgatgcag 9300

atcaattaat acgatacctg cgtcataatt gattatttga cgtggtttga tggcctccac 9360

gcacgttgtg atatgtagat gataatcatt atcactttac gggtcctttc cggtgatccg 9420

acaggttacg gggcggcgac ctgcctgatg cggtattttc tccttacgca tctgtgcggt 9480

atttcacacc gcatacgtca aagcaaccat agtacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg 9540

cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc ttagcgcccg 9600

ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc 9660

taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc gaccccaaaa 9720

aacttgattt gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc 9780

ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact ggaacaacac 9840

tcaactctat ctcgggctat tcttttgatt tagacctgca ggcatgcaag cttggcactg 9900

gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt 9960

gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct 10020

tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tgcgatttat tcaacaaagc cgccgtcccg 10080

tcaagtcagc gtaatgctct gccagtgtta caaccaatta accaattctg attagaaaaa 10140

ctcatcgagc atcaaatgaa actgcaattt attcatatca ggattatcaa taccatattt 10200

ttgaaaaagc cgtttctgta atgaaggaga aaactcaccg aggcagttcc ataggatggc 10260

aagatcctgg tatcggtctg cgattccgac tcgtccaaca tcaatacaac ctattaattt 10320

cccctcgtca aaaataaggt tatcaagtga gaaatcacca tgagtgacga ctgaatccgg 10380

tgagaatggc aaaagcttat gcatttcttt ccagacttgt tcaacaggcc agccattacg 10440

ctcgtcatca aaatcactcg catcaaccaa accgttattc attcgtgatt gcgcctgagc 10500

gagacgaaat acgcgatcgc tgttaaaagg acaattacaa acaggaatcg aatgcaaccg 10560

gcgcaggaac actgccagcg catcaacaat attttcacct gaatcaggat attcttctaa 10620

tacctggaat gctgttttcc cggggatcgc agtggtgagt aaccatgcat catcaggagt 10680

acggataaaa tgcttgatgg tcggaagagg cataaattcc gtcagccagt ttagtctgac 10740

catctcatct gtaacatcat tggcaacgct acctttgcca tgtttcagaa acaactctgg 10800

cgcatcgggc ttcccataca atcgatagat tgtcgcacct gattgcccga cattatcgcg 10860

agcccattta tacccatata aatcagcatc catgttggaa tttaatcgcg gcttcgagca 10920

agacgtttcc cgttgaatat ggctcataac accccttgta ttactgttta tgtaagcaga 10980

cagttttatt gttcatgatg atatattttt atcttgtgca atgtaacatc agagattttg 11040

agacacaacg tggctttgtt gaataaatcg aacttttgct gagttgaagg atcagatcac 11100

gcatcttccc gacaacgcag accgttccgt ggcaaagcaa aagttcaaaa tcaccaactg 11160

gtccacctac aacaaagctc tcatcaaccg tggctccctc actttctggc tggatgatgg 11220

ggcgattcag gcctggtatg agtcagcaac accttcttca cgaggcagac ctctcgacgg 11280

agttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt 11340

ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt 11400

tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga 11460

taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag 11520

caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata 11580

agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg 11640

gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga 11700

gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca 11760

ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa 11820

acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt 11880

tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac 11940

ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgt 11976

<210> 25

<211> 1457

<212> PRT

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Пептид FVIII

<400> 25

Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe

1 5 10 15

Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser

20 25 30

Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg

35 40 45

Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val

50 55 60

Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile

65 70 75 80

Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln

85 90 95

Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser

100 105 110

His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser

115 120 125

Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp

130 135 140

Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu

145 150 155 160

Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser

165 170 175

Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile

180 185 190

Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr

195 200 205

Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly

210 215 220

Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp

225 230 235 240

Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr

245 250 255

Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val

260 265 270

Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile

275 280 285

Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser

290 295 300

Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met

305 310 315 320

Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His

325 330 335

Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro

340 345 350

Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp

355 360 365

Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser

370 375 380

Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr

385 390 395 400

Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro

405 410 415

Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn

420 425 430

Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met

435 440 445

Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu

450 455 460

Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu

465 470 475 480

Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro

485 490 495

His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys

500 505 510

Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe

515 520 525

Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp

530 535 540

Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg

545 550 555 560

Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu

565 570 575

Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val

580 585 590

Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu

595 600 605

Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp

610 615 620

Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val

625 630 635 640

Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp

645 650 655

Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe

660 665 670

Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr

675 680 685

Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro

690 695 700

Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly

705 710 715 720

Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp

725 730 735

Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys

740 745 750

Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Pro Pro Val Leu

755 760 765

Lys Arg His Gln Arg Glu Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gln Ser Asp Gln

770 775 780

Glu Glu Ile Asp Tyr Asp Asp Thr Ile Ser Val Glu Met Lys Lys Glu

785 790 795 800

Asp Phe Asp Ile Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gln Ser Pro Arg Ser Phe

805 810 815

Gln Lys Lys Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp

820 825 830

Asp Tyr Gly Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gln

835 840 845

Ser Gly Ser Val Pro Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr

850 855 860

Asp Gly Ser Phe Thr Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu His

865 870 875 880

Leu Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp Asn Ile

885 890 895

Met Val Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser Phe Tyr Ser

900 905 910

Ser Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly Ala Glu Pro Arg

915 920 925

Lys Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr Tyr Phe Trp Lys Val

930 935 940

Gln His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu Phe Asp Cys Lys Ala Trp

945 950 955 960

Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu Lys Asp Val His Ser Gly Leu

965 970 975

Ile Gly Pro Leu Leu Val Cys His Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His

980 985 990

Gly Arg Gln Val Thr Val Gln Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe

995 1000 1005

Asp Glu Thr Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn

1010 1015 1020

Cys Arg Ala Pro Cys Asn Ile Gln Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys

1025 1030 1035

Glu Asn Tyr Arg Phe His Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr

1040 1045 1050

Leu Pro Gly Leu Val Met Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr

1055 1060 1065

Leu Leu Ser Met Gly Ser Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe

1070 1075 1080

Ser Gly His Val Phe Thr Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met

1085 1090 1095

Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly Val Phe Glu Thr Val Glu Met

1100 1105 1110

Leu Pro Ser Lys Ala Gly Ile Trp Arg Val Glu Cys Leu Ile Gly

1115 1120 1125

Glu His Leu His Ala Gly Met Ser Thr Leu Phe Leu Val Tyr Ser

1130 1135 1140

Asn Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Met Ala Ser Gly His Ile Arg

1145 1150 1155

Asp Phe Gln Ile Thr Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Trp Ala Pro

1160 1165 1170

Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp Ser

1175 1180 1185

Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro

1190 1195 1200

Met Ile Ile His Gly Ile Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln Lys Phe

1205 1210 1215

Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp

1220 1225 1230

Gly Lys Lys Trp Gln Thr Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu

1235 1240 1245

Met Val Phe Phe Gly Asn Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn

1250 1255 1260

Ile Phe Asn Pro Pro Ile Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro

1265 1270 1275

Thr His Tyr Ser Ile Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly

1280 1285 1290

Cys Asp Leu Asn Ser Cys Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys

1295 1300 1305

Ala Ile Ser Asp Ala Gln Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn

1310 1315 1320

Met Phe Ala Thr Trp Ser Pro Ser Lys Ala Arg Leu His Leu Gln

1325 1330 1335

Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg Pro Gln Val Asn Asn Pro Lys Glu

1340 1345 1350

Trp Leu Gln Val Asp Phe Gln Lys Thr Met Lys Val Thr Gly Val

1355 1360 1365

Thr Thr Gln Gly Val Lys Ser Leu Leu Thr Ser Met Tyr Val Lys

1370 1375 1380

Glu Phe Leu Ile Ser Ser Ser Gln Asp Gly His Gln Trp Thr Leu

1385 1390 1395

Phe Phe Gln Asn Gly Lys Val Lys Val Phe Gln Gly Asn Gln Asp

1400 1405 1410

Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu Leu Thr

1415 1420 1425

Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gln Ser Trp Val His Gln Ile Ala

1430 1435 1440

Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala Gln Asp Leu Tyr

1445 1450 1455

<210> 26

<211> 2351

<212> PRT

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Пептид FVIII

<400> 26

Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe

1 5 10 15

Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser

20 25 30

Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg

35 40 45

Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val

50 55 60

Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile

65 70 75 80

Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln

85 90 95

Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser

100 105 110

His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser

115 120 125

Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp

130 135 140

Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu

145 150 155 160

Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser

165 170 175

Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile

180 185 190

Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr

195 200 205

Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly

210 215 220

Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp

225 230 235 240

Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr

245 250 255

Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val

260 265 270

Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile

275 280 285

Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser

290 295 300

Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met

305 310 315 320

Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His

325 330 335

Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro

340 345 350

Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp

355 360 365

Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser

370 375 380

Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr

385 390 395 400

Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro

405 410 415

Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn

420 425 430

Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met

435 440 445

Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu

450 455 460

Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu

465 470 475 480

Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro

485 490 495

His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys

500 505 510

Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe

515 520 525

Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp

530 535 540

Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg

545 550 555 560

Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu

565 570 575

Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val

580 585 590

Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu

595 600 605

Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp

610 615 620

Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val

625 630 635 640

Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp

645 650 655

Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe

660 665 670

Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr

675 680 685

Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro

690 695 700

Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly

705 710 715 720

Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp

725 730 735

Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys

740 745 750

Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Ser Arg His Pro

755 760 765

Ser Thr Arg Gln Lys Gln Phe Asn Ala Thr Thr Ile Pro Glu Asn Asp

770 775 780

Ile Glu Lys Thr Asp Pro Trp Phe Ala His Arg Thr Pro Met Pro Lys

785 790 795 800

Ile Gln Asn Val Ser Ser Ser Asp Leu Leu Met Leu Leu Arg Gln Ser

805 810 815

Pro Thr Pro His Gly Leu Ser Leu Ser Asp Leu Gln Glu Ala Lys Tyr

820 825 830

Glu Thr Phe Ser Asp Asp Pro Ser Pro Gly Ala Ile Asp Ser Asn Asn

835 840 845

Ser Leu Ser Glu Met Thr His Phe Arg Pro Gln Leu His His Ser Gly

850 855 860

Asp Met Val Phe Thr Pro Glu Ser Gly Leu Gln Leu Arg Leu Asn Glu

865 870 875 880

Lys Leu Gly Thr Thr Ala Ala Thr Glu Leu Lys Lys Leu Asp Phe Lys

885 890 895

Val Ser Ser Thr Ser Asn Asn Leu Ile Ser Thr Ile Pro Ser Asp Asn

900 905 910

Leu Ala Ala Gly Thr Asp Asn Thr Ser Ser Leu Gly Pro Pro Ser Met

915 920 925

Pro Val His Tyr Asp Ser Gln Leu Asp Thr Thr Leu Phe Gly Lys Lys

930 935 940

Ser Ser Pro Leu Thr Glu Ser Gly Gly Pro Leu Ser Leu Ser Glu Glu

945 950 955 960

Asn Asn Asp Ser Lys Leu Leu Glu Ser Gly Leu Met Asn Ser Gln Glu

965 970 975

Ser Ser Trp Gly Lys Asn Val Ser Ser Thr Glu Ser Gly Arg Leu Phe

980 985 990

Lys Gly Lys Arg Ala His Gly Pro Ala Leu Leu Thr Lys Asp Asn Ala

995 1000 1005

Leu Phe Lys Val Ser Ile Ser Leu Leu Lys Thr Asn Lys Thr Ser

1010 1015 1020

Asn Asn Ser Ala Thr Asn Arg Lys Thr His Ile Asp Gly Pro Ser

1025 1030 1035

Leu Leu Ile Glu Asn Ser Pro Ser Val Trp Gln Asn Ile Leu Glu

1040 1045 1050

Ser Asp Thr Glu Phe Lys Lys Val Thr Pro Leu Ile His Asp Arg

1055 1060 1065

Met Leu Met Asp Lys Asn Ala Thr Ala Leu Arg Leu Asn His Met

1070 1075 1080

Ser Asn Lys Thr Thr Ser Ser Lys Asn Met Glu Met Val Gln Gln

1085 1090 1095

Lys Lys Glu Gly Pro Ile Pro Pro Asp Ala Gln Asn Pro Asp Met

1100 1105 1110

Ser Phe Phe Lys Met Leu Phe Leu Pro Glu Ser Ala Arg Trp Ile

1115 1120 1125

Gln Arg Thr His Gly Lys Asn Ser Leu Asn Ser Gly Gln Gly Pro

1130 1135 1140

Ser Pro Lys Gln Leu Val Ser Leu Gly Pro Glu Lys Ser Val Glu

1145 1150 1155

Gly Gln Asn Phe Leu Ser Glu Lys Asn Lys Val Val Val Gly Lys

1160 1165 1170

Gly Glu Phe Thr Lys Asp Val Gly Leu Lys Glu Met Val Phe Pro

1175 1180 1185

Ser Ser Arg Asn Leu Phe Leu Thr Asn Leu Asp Asn Leu His Glu

1190 1195 1200

Asn Asn Thr His Asn Gln Glu Lys Lys Ile Gln Glu Glu Ile Glu

1205 1210 1215

Lys Lys Glu Thr Leu Ile Gln Glu Asn Val Val Leu Pro Gln Ile

1220 1225 1230

His Thr Val Thr Gly Thr Lys Asn Phe Met Lys Asn Leu Phe Leu

1235 1240 1245

Leu Ser Thr Arg Gln Asn Val Glu Gly Ser Tyr Asp Gly Ala Tyr

1250 1255 1260

Ala Pro Val Leu Gln Asp Phe Arg Ser Leu Asn Asp Ser Thr Asn

1265 1270 1275

Arg Thr Lys Lys His Thr Ala His Phe Ser Lys Lys Gly Glu Glu

1280 1285 1290

Glu Asn Leu Glu Gly Leu Gly Asn Gln Thr Lys Gln Ile Val Glu

1295 1300 1305

Lys Tyr Ala Cys Thr Thr Arg Ile Ser Pro Asn Thr Ser Gln Gln

1310 1315 1320

Asn Phe Val Thr Gln Arg Ser Lys Arg Ala Leu Lys Gln Phe Arg

1325 1330 1335

Leu Pro Leu Glu Glu Thr Glu Leu Glu Lys Arg Ile Ile Val Asp

1340 1345 1350

Asp Thr Ser Thr Gln Trp Ser Lys Asn Met Lys His Leu Thr Pro

1355 1360 1365

Ser Thr Leu Thr Gln Ile Asp Tyr Asn Glu Lys Glu Lys Gly Ala

1370 1375 1380

Ile Thr Gln Ser Pro Leu Ser Asp Cys Leu Thr Arg Ser His Ser

1385 1390 1395

Ile Pro Gln Ala Asn Arg Ser Pro Leu Pro Ile Ala Lys Val Ser

1400 1405 1410

Ser Phe Pro Ser Ile Arg Pro Ile Tyr Leu Thr Arg Val Leu Phe

1415 1420 1425

Gln Asp Asn Ser Ser His Leu Pro Ala Ala Ser Tyr Arg Lys Lys

1430 1435 1440

Asp Ser Gly Val Gln Glu Ser Ser His Phe Leu Gln Gly Ala Lys

1445 1450 1455

Lys Asn Asn Leu Ser Leu Ala Ile Leu Thr Leu Glu Met Thr Gly

1460 1465 1470

Asp Gln Arg Glu Val Gly Ser Leu Gly Thr Ser Ala Thr Asn Ser

1475 1480 1485

Val Thr Tyr Lys Lys Val Glu Asn Thr Val Leu Pro Lys Pro Asp

1490 1495 1500

Leu Pro Lys Thr Ser Gly Lys Val Glu Leu Leu Pro Lys Val His

1505 1510 1515

Ile Tyr Gln Lys Asp Leu Phe Pro Thr Glu Thr Ser Asn Gly Ser

1520 1525 1530

Pro Gly His Leu Asp Leu Val Glu Gly Ser Leu Leu Gln Gly Thr

1535 1540 1545

Glu Gly Ala Ile Lys Trp Asn Glu Ala Asn Arg Pro Gly Lys Val

1550 1555 1560

Pro Phe Leu Arg Val Ala Thr Glu Ser Ser Ala Lys Thr Pro Ser

1565 1570 1575

Lys Leu Leu Asp Pro Leu Ala Trp Asp Asn His Tyr Gly Thr Gln

1580 1585 1590

Ile Pro Lys Glu Glu Trp Lys Ser Gln Glu Lys Ser Pro Glu Lys

1595 1600 1605

Thr Ala Phe Lys Lys Lys Asp Thr Ile Leu Ser Leu Asn Ala Cys

1610 1615 1620

Glu Ser Asn His Ala Ile Ala Ala Ile Asn Glu Gly Gln Asn Lys

1625 1630 1635

Pro Glu Ile Glu Val Thr Trp Ala Lys Gln Gly Arg Thr Glu Arg

1640 1645 1650

Leu Cys Ser Gln Asn Pro Pro Val Leu Lys Arg His Gln Arg Glu

1655 1660 1665

Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gln Ser Asp Gln Glu Glu Ile Asp Tyr

1670 1675 1680

Asp Asp Thr Ile Ser Val Glu Met Lys Lys Glu Asp Phe Asp Ile

1685 1690 1695

Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gln Ser Pro Arg Ser Phe Gln Lys Lys

1700 1705 1710

Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp Asp Tyr

1715 1720 1725

Gly Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gln Ser

1730 1735 1740

Gly Ser Val Pro Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr

1745 1750 1755

Asp Gly Ser Phe Thr Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu

1760 1765 1770

His Leu Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp

1775 1780 1785

Asn Ile Met Val Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser

1790 1795 1800

Phe Tyr Ser Ser Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly

1805 1810 1815

Ala Glu Pro Arg Lys Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr

1820 1825 1830

Tyr Phe Trp Lys Val Gln His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu

1835 1840 1845

Phe Asp Cys Lys Ala Trp Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu

1850 1855 1860

Lys Asp Val His Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Val Cys His

1865 1870 1875

Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His Gly Arg Gln Val Thr Val Gln

1880 1885 1890

Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe Asp Glu Thr Lys Ser Trp

1895 1900 1905

Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn Cys Arg Ala Pro Cys Asn

1910 1915 1920

Ile Gln Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys Glu Asn Tyr Arg Phe His

1925 1930 1935

Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu Val Met

1940 1945 1950

Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly Ser

1955 1960 1965

Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe Ser Gly His Val Phe Thr

1970 1975 1980

Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr

1985 1990 1995

Pro Gly Val Phe Glu Thr Val Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly

2000 2005 2010

Ile Trp Arg Val Glu Cys Leu Ile Gly Glu His Leu His Ala Gly

2015 2020 2025

Met Ser Thr Leu Phe Leu Val Tyr Ser Asn Lys Cys Gln Thr Pro

2030 2035 2040

Leu Gly Met Ala Ser Gly His Ile Arg Asp Phe Gln Ile Thr Ala

2045 2050 2055

Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Trp Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His

2060 2065 2070

Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser

2075 2080 2085

Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro Met Ile Ile His Gly Ile

2090 2095 2100

Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln Lys Phe Ser Ser Leu Tyr Ile Ser

2105 2110 2115

Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp Gly Lys Lys Trp Gln Thr

2120 2125 2130

Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu Met Val Phe Phe Gly Asn

2135 2140 2145

Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn Ile Phe Asn Pro Pro Ile

2150 2155 2160

Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro Thr His Tyr Ser Ile Arg

2165 2170 2175

Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys

2180 2185 2190

Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys Ala Ile Ser Asp Ala Gln

2195 2200 2205

Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser

2210 2215 2220

Pro Ser Lys Ala Arg Leu His Leu Gln Gly Arg Ser Asn Ala Trp

2225 2230 2235

Arg Pro Gln Val Asn Asn Pro Lys Glu Trp Leu Gln Val Asp Phe

2240 2245 2250

Gln Lys Thr Met Lys Val Thr Gly Val Thr Thr Gln Gly Val Lys

2255 2260 2265

Ser Leu Leu Thr Ser Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu Ile Ser Ser

2270 2275 2280

Ser Gln Asp Gly His Gln Trp Thr Leu Phe Phe Gln Asn Gly Lys

2285 2290 2295

Val Lys Val Phe Gln Gly Asn Gln Asp Ser Phe Thr Pro Val Val

2300 2305 2310

Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu Leu Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His

2315 2320 2325

Pro Gln Ser Trp Val His Gln Ile Ala Leu Arg Met Glu Val Leu

2330 2335 2340

Gly Cys Glu Ala Gln Asp Leu Tyr

2345 2350

<210> 27

<211> 736

<212> PRT

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: AAV Капсид

<400> 27

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Gln Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Asp Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Val Gly

145 150 155 160

Lys Ser Gly Lys Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Ser Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr

260 265 270

Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His

275 280 285

Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp

290 295 300

Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val

305 310 315 320

Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu

325 330 335

Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr

340 345 350

Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp

355 360 365

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser

370 375 380

Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser

385 390 395 400

Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Thr Phe Glu

405 410 415

Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg

420 425 430

Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg Thr

435 440 445

Gln Gly Thr Thr Ser Gly Thr Thr Asn Gln Ser Arg Leu Leu Phe Ser

450 455 460

Gln Ala Gly Pro Gln Ser Met Ser Leu Gln Ala Arg Asn Trp Leu Pro

465 470 475 480

Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Leu Ser Lys Thr Ala Asn Asp Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Asn Phe Pro Trp Thr Ala Ala Ser Lys Tyr His Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Asp Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Met His Gly Asn Leu Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Glu Gly Thr Thr Ala Ser Asn Ala Glu Leu Asp Asn Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln

565 570 575

Tyr Gly Thr Val Ala Asn Asn Leu Gln Ser Ser Asn Thr Ala Pro Thr

580 585 590

Thr Arg Thr Val Asn Asp Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln

595 600 605

Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

610 615 620

Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu

625 630 635 640

Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Met Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala

645 650 655

Asn Pro Pro Thr Thr Phe Ser Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr

660 665 670

Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val

705 710 715 720

Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu

725 730 735

<210> 28

<211> 738

<212> PRT

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: AAV Капсид

<400> 28

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asn Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Gln Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Ser Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln

165 170 175

Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro

180 185 190

Pro Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Pro Asn Thr Met Ala Ala Gly Gly

195 200 205

Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser

210 215 220

Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val

225 230 235 240

Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His

245 250 255

Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp

260 265 270

Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn

275 280 285

Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn

290 295 300

Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn

305 310 315 320

Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala

325 330 335

Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln

340 345 350

Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe

355 360 365

Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn

370 375 380

Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr

385 390 395 400

Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr

405 410 415

Asn Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser

420 425 430

Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu

435 440 445

Ser Arg Thr Gln Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gln Gln Leu Leu

450 455 460

Phe Ser Gln Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gln Ala Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser

485 490 495

Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His

500 505 510

Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr

515 520 525

His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met

530 535 540

Phe Gly Lys Gln Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val

545 550 555 560

Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr

565 570 575

Glu Gln Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Gln Asn Ala Ala

580 585 590

Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val

595 600 605

Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile

610 615 620

Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe

625 630 635 640

Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val

645 650 655

Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Asn Gln Ala Lys Leu Ala Ser Phe

660 665 670

Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu

675 680 685

Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr

690 695 700

Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu

705 710 715 720

Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg

725 730 735

Asn Leu

<210> 29

<211> 14

<212> PRT

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Описание искуственной последовательности: Пептид FVIII

<400> 29

Ser Phe Ser Gln Asn Pro Pro Val Leu Lys Arg His Gln Arg

1 5 10

<---

Реферат

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой вариант нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, и способы их применения. Варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующие FVIII, более эффективно экспрессируются клетками, секретируются на повышенных уровнях клетками по сравнению с белком фактором VIII дикого типа, демонстрируют повышенную экспрессию и/или активность по сравнению с белком фактором VIII дикого типа или более эффективно упаковываются в вирусные векторы. 12 н. и 93 з.п. ф-лы, 15 ил., 6 табл., 10 пр.

Формула