Прямая экспрессия пептидов в культуральные среды - RU2218407C2

Код документа: RU2218407C2

Чертежи

Показать все 90 чертежа(ей)

Описание

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть).

Реферат

Изобретение относится к генетической инженерии. Экспрессирующий плазмидный вектор содержит нуклеиновые кислоты (НК), кодирующие пептидный продукт. Указанные НК присоединены в рамке считывания справа (3') от нуклеиновых кислот, кодирующих сигнальный пептид. Регуляторный район оперативно соединен с кодирующим районом. Регуляторный район содержит множество промоторов и хотя бы один сайт связывания рибосом. По меньшей мере один из промоторов представляет собой tac. Вектор может содержать НК, кодирующие, по меньшей мере, один усиливающий секрецию пептид. Культивируют Е.соli, трансформированную или трансфецированную заявленным экспрессирующим плазмидным вектором. Пептид извлекают из среды. Культивирование проводят в присутствии в среде источника углерода и при регулировании роста клеток-хозяев при скорости роста 0,05 и 0,20 удвоений в час. Изобретение позволяет осуществлять прямую экспрессию пептида в культуральную среду за пределами клетки. 4 с. и 9 з.п.ф-лы, 17 ил., 5 табл.

Формула

1. Экспрессирующий плазмидный вектор, содержащий (a) кодирующий район с нуклеиновыми кислотами, кодирующими пептидный продукт и присоединенными в рамке считывания справа (3') от нуклеиновых кислот, кодирующих сигнальный пептид; (b) регуляторный район, оперативно соединенный с кодирующим районом, причем указанный регуляторный район содержит множество промоторов и по меньшей мере один сайт связывания рибосом, причем по меньшей мере один из упомянутых промоторов представляет собой tac.

2. Вектор по п.1, отличающийся тем, что содержит множество транскрипционных кассет, причем каждая кассета имеет упомянутый регуляторный район и указанный кодирующий район.

3. Вектор по п.1, отличающийся тем, что указанный регуляторный район имеет точно два промотора.

4. Вектор по п.1, отличающийся тем, что указанный промотор tac находится слева (5') от другого промотора в указанном регуляторном районе.

5. Вектор по п.1, отличающийся тем, что С-концевая аминокислота указанного пептидного продукта представляет собой глицин.

6. Вектор по п.1, отличающийся тем, что дополнительно содержит нуклеиновые кислоты, кодирующие по меньшей мере один усиливающий секрецию пептид.

7. Вектор по п.6, отличающийся тем, что усиливающий секрецию пептид выбран из группы, состоящей из secY и pr1A-4.

8. Вектор по п.1, отличающийся тем, что является введенным в клетку-хозяина.

9. Способ получения пептидного продукта, предусматривающий культивирование Е.соli, трансформированной или трансфецированной вектором по п.1, в культуральной среде и извлечение этого пептидного продукта из среды.

10. Способ получения пептидного продукта, предусматривающий культивирование E.coli, трансформированной или трансфецированной вектором по п.6, в культуральной среде и извлечение этого пептидного продукта из среды.

11. Способ получения пептидного продукта, предусматривающий стадии

(a) культивирования E.coli, трансформированной или трансфецированной вектором по п.1, в культуральной среде в присутствии источника углерода и индукции экспрессии пептидного продукта при регулировании роста этих клеток-хозяев при скорости роста между 0,05 и 0,20 удвоений в час; (b) извлечения после этого упомянутого пептидного продукта из этой среды.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что в среде присутствует увеличивающее проницаемость мембраны количество глицина во время по меньшей мере части периода упомянутого регулируемого роста.

13. Способ по п.11, отличающийся тем, что извлечение упомянутого продукта предусматривает (a) отделение клеток-хозяев от культуральной среды; (b) проведение жидкостной хроматографии с обращенной фазой этой среды и извлечение фракций, содержащих пептидный продукт; (c) проведение катионообменной хроматографии фракций стадии (b) и

(d) извлечение после этого фракций, содержащих пептидный продукт.

Патенты аналоги

Авторы

МЕХТА Нозар М. (US)

РЭЙ Марта В. Л. (US)

МИНАН Кристофер П. (US)

КОНСАЛВО Анджело П. (US)

MEKHTA NOZAR M

REHJ MARTA V L

MINAN KRISTOFER P

KONSALVO ANDZHELO P

MEKHTA NOZAR M.

REHJ MARTA V. L.

MINAN KRISTOFER P.

KONSALVO ANDZHELO P.

Патентообладатели

JUNIDZHEN LEHBORATORIZ INK

JUNIDZHEN LEHBORATORIZ INK.

Заявители

ЮНИДЖЕН ЛЭБОРАТОРИЗ ИНК. (US)

JUNIDZHEN LEHBORATORIZ INK

JUNIDZHEN LEHBORATORIZ INK.

СПК: A61K38/23 C07K2319/02 C07K14/585 C07K14/635 C07K14/461 C12N15/70 C12N15/71 C12N15/72 C12P21/02

МПК: A61K38/23

Публикация: 2003-12-10

Дата подачи заявки: 1998-04-15

РОССТИП

Поиск по товарам

Добавить свой товар

Сообщества

Товары

Участники

Патенты

Запросов

Поставщикам

О сервисе

Блогерам

Помощь