Средство "абисил-1", обладающее противовоспалительной, антибактериальной и ранозаживляющей активностью - RU2054945C1

Чертежи

Описание

Изобретение относится к медицине, а именно, к созданию средств, обладающих противовоспалительной, антибактериальной и ранозаживляющей активностью на растительной основе.

Среди известных средств, обладающих противовоспалительным, антибактериальным и ранозаживляющим действием, следует считать гель "Фузидин".

Однако известный препарат является низкоактивным, вырабатывается из синтетических дорогостоящих продуктов. При этом компоненты, входящие в его состав, взятые в отдельности, являются токсичными соединениями и могут способствовать снижению иммунной реактивности организма.

Среди фармакологических средств, обладающих этой активностью, наиболее близким является препарат подорожника (Машковский М. Д. Лекарственные средства. М. Медицина, 1993).

Однако активность данного препарата низка.

Целью изобретения является создание средства, обладающего противовоспалительной, антибактериальной и ранозаживляющей активностью и содержащего капсульный экстракт из пихты сибирской, монотерпеновые соединения и растительное масло.

Природный капсульный экстракт, а также монотерпеновые соединения эфирных масел можно получать известными способами.

В качестве третьего компонента можно использовать масла подсолнечное, соевое и оливковое.

Температурный режим 18-20^оС является оптимальным, т.к. повышение температуры вызывает ускорение растворения фракции монотерпеновых соединений в капсульном экстракте, но увеличивает возможные потери испарением летучих компонентов.

Смешивание полученной субстанции с растительными маслами осуществляется при комнатной температуре во избежание испарения летучих фракций и инактивации целевого продукта.

Выбор в качестве растворителя растительных масел способствует лучшей проницаемости конечного продукта через липидный слой клеточных мембран. Также доказано, что спирт не является идеальным растворителем для капсульного экстракта (см. данные первичного физико-химического анализа капсульного экстракта в примере 1).

Поиск средств среди известных решений показал, что отличительные признаки не были использованы в известных средствах. Не найдено сообщений об использовании капсульного экстракта из пихты сибирской, обогащенного монотерпеновыми соединениями фракции эфирного масла, аналогичных капсул в качестве субстанции для получения средства при растворении в растительных маслах. Не выявлено также решений, где бы в качестве противовоспалительного и ранозаживляющего средства предлагали использовать капсульный экстракт из пихты сибирской, обогащенной монотерпеновыми соединениями.

Предложенное средство получают следующим образом.

П р и м е р 1. Капсульный экстракт пихты сибирской (Abies Sibiricus Ledebur), представляющий собой сложную многокомпонентную смесь биологически активных эфирных масел, нейтральных дитерпенов, смоляных кислот и их эфиров, получают путем прямого прокола капсулы, расположенной между корой и лубом. Полученный экстракт фильтруют при комнатной температуре. Он представляет собой вязкую жидкость янтарно-желтого цвета. Физико-химический анализ показал:
П 1,5112;
d 1,0328 г/см³,
ИКС 3400, 2900, 1740, 1690 1700, 1450, 1390, 1270
1250, 1040, 900 сл. 800 сл. см^-1.

ПМР: 0,82; 1,67; 4,71; 5,77 м.д. (С₆D₆).

Данные элементного анализа:
С 77,82; Н 10,19; S нет; N нет.

Растворимость приведена в табл. 1.

Берут 1000 мл очищенного капсульного экстракта, помещают в колбу на водяной бане с присоединенным аппаратом Клевенжера, пальчиковым холодильником и градуированной разделительной пипеткой со сливным краном. Отгонку продолжают 12 ч. Легколетучая фракция, собранная таким путем, представляет собой эфирное масло, состоящее из монотерпеновых соединений: трициклена, лимонена α-пинена, сантена, камфена и др.

1,0 мл монотерпеновых соединений смешивают с 195 мл капсульного экстракта при температурном режиме 18-20^оС при постоянном перемешивании с последующим растворением полученной субстанции в 804 мл подсолнечного масла. Полученное средство янтарного цвета с характерным запахом эфирных масел испытывают на противовоспалительную, антибактериальную и ранозаживляющую активность.

Противовоспалительную и ранозаживляющую активность изучали на 36 беспородных кроликах массой 2,5-3,0 кг при оценке Абисила 1, полученного по примеру 1, 2, 3, в сравнении с гелем "Фузидин" и др. аналогичными средствами.

Для получения модели экспериментальной гнойной раны у кроликов в межлопаточной области иссекали полностью кожный лоскут диаметром 3-4 см с последующим разрушением апоневроза и подлежащих мышц лезвием. Рану инфицировали ассоциацией 2х10⁹ микробных тел/мл золотистого стафилококка (штамм Гуре) и 5 х 10⁹ микробных тел/мл клебсиелы (штамм Klebsiella pneumoniac 12 АС).

Препарат применяли с момента формирования гнойной раны (2-43 сут после заражения) путем нанесения на обработанную рану (после удаления некротических масс в пределах здоровых тканей) 2 раза в сутки в течение 19 дней, нанося по 1 мл Абисила-1 (полученного в трех соотношениях), облепихового масла и 1 г геля "Фузидин". Эффективность лечения оценивали путем сравнения течения раневого процесса по комплексу клинических и бактериологических данных.

При микроскопической оценке учитывали динамику местных гнойно-воспалительных явлений (отек, гиперемия, инфильтрация окружающих тканей); степень и состав раневого отделяющего; сроки очищения; характер грануляции.

Динамику элиминаций возбудителя из раны оценивали бактериологически, учитывая степень обсемененности раны в КОЕ/г ткани. Количество микробов в 1 г ткани вычисляли по формуле: H nx10x10 (или 100, или 1000 в зависимости от разведения х К, где
Н количество микробов на 1 г ткани
n количество микробов, выросших в чашке
10 пересчет на грамм суспензии
10 (100 или 1000) разведение материала, засеянного на чашку, с которой ведется подсчет колонии
К коэффициент пересчета навески на 1 г биоптата.

Исследования проводили на 2, 4, 6, 8, 10 сут лечения препаратами.

Время заживания ран определяли по формуле:
(t₁ t₂)/t₁ · 100% где t₁ время окончательного заживания ран в контрольной группе, сут;
t₂ время окончательного заживания ран в опытной группе, сут.

Площадь участка заживания ран определяли в процентах по формуле:
100 А/S, где S начальная площадь раны, см²;
А разница между начальной площадью раны и площадью раны в данный момент.

Цитологическое исследование проводили методом отпечатков, которые брали с поверхности гнойной раны и в те же сроки, что и при бактериологическом исследовании. Обезжиренное предметное стекло прикладывали к разным участкам раневой поверхности.

При микроскопическом исследовании оценивали количественную характеристику клеточного состава раневого экссудата, подсчитывая 500 клеток различной морфологии с вычислением средних величин.

Гнойная рана перед началом лечения во всех группах имела площадь около 110 см² с отечными инфильтрованными краями и гиперемией окружающей кожи. Дно ее было покрыто налетом фибрина с участками некроза и гнойным отделяемым.

На 2 сутки лечения Абисилом-1, полученным по примеру 1, у животных уменьшался отек и инфильтрация раны, снижалась гиперемия. В группе животных, леченых гелем "Фузидин", признаки воспаления были отчетливо выражены. На дне раны наблюдалось значительное количество фибринозного налета, густого гноя и некротических тканей. В контрольной группе (нелеченой) наблюдались обильные гнойные выделения, кровоточивость, сильная отечность и гиперемия дна и краев раны.

На 8 сутки у животных, леченых Абисилом-1, наблюдается значительное очищение раны от гнойно-некротических масс, а к 9 суткам появились участки краевой эпителизации. Аналогичная картина с использованием геля "Фузидин" и облепихового масла отмечается к 10-12 суткам, а в контрольной группе (нелеченой) к 14 суткам лечения.

Дно раны заполняется полностью грануляционной тканью к 13-14 суткам, против 28 суток контроля.

Исследования противовоспалительной и ранозаживляющей активности предлагаемого средства (см. табл. 2 и 3) показали, что процент заживления поверхности ран к 17 суткам соответствует 90,5 ± 5,4 против 53,3 ± 5,1 в контроле и 78,7 ± 6,1 с использованием геля "Фузидин" соответственно.

Соответственно падала степень обсемененности (КОЕ/г). Исходная степень обсемененности раны составляла 10⁶ 10⁷ КОЕ/г. Элиминация возбудителя из раны начиналась с использованием всех средств с 4-х суток, в то время как у прототипов она продолжалась до 10 суток и выше, а с использованием Абисила-1, полученного по примеру 1, уже с 6 суток отмечались низкие титры 1,8x10⁴ КОЕ/г против 4,8x10⁶ в контроле и 3,5x10⁴ с использованием геля "Фузидин".

При цитологическом изучении течения раневого процесса установлена практически полная однородность клеточного состава экссудата животных перед началом лечения, который в 96, 6% определялся полиморфно-ядерными нейтрофилами, в большей части дегенеративно измененными, с патологической зернистостью цитоплазмы. Во всех отпечатках определялось большое количество микробных тел, расположенных как внутриклеточно, так и внеклеточно в состоянии извращенного и незавершенного фагоцитоза.

На вторые сутки лечения Абисилом-1 и прототипом при цитологических исследованиях существенных различий не установлено. Цитограммы во всех случаях характеризуются как воспалительные.

На 12-е сутки лечения в группе животных, леченых Абисилом-1 (соотношение 19,5: 0,02: ост-е), в цитограмме содержание нейтрофилов снизилось до 55 60% количество макрофагов увеличивалось. Микробные клетки содержались в небольшом количестве в состоянии фагоцитоза. У животных, леченых гелем "Фузидин", в мазке нейтрофилов содержалось 75-80% 5 10% клеточного состава приходится на долю лимфоцитов, моноцитов и фибробластов.

В контрольной группе большое количество микроорганизмов расположены внеклеточно, а нейтрофилы и макрофаги в дегенерированной и фагоцитирующей форме.

На 17-е сутки в отпечатках группы животных, леченых Абисилом-1 (соотн. 19,5: 0,02:ост-е), начинали преобладать молодые клетки грануляционной ткани: профибробласты, фибробласты, полибласты, макрофаги. Микробные клетки отсутствуют, единичные нейтрофилы.

Аналогичная картина при использовании геля "Фузидин" отмечалась к 21-му дню исследований, а в контроле к 26 27 суткам.

П р и м е р 2. Способ осуществляется по примеру 1, с той разницей, что выделенную из капсульного экстракта фракцию эфирных масел, содержащую монотерпеноиды, смешивают с капсульным экстрактом пихты сибирской при температуре 18-20^оС в соотношении 0,5 ± 0,3 99,5 ± 0,1 (0,5%), с последующим растворением в растительном (соевом) масле в соотношении 1:4 (20%).

Уже на вторые сутки лечения у животных при использовании Абисила-1, полученного по примеру 2, наблюдалась положительная динамика раневого процесса: уменьшались отек и инфильтрация раны, исчезала гиперемия.

На 4-6 сутки лечения с использованием средства, полученного по примеру 2, отмечалось очищение дна раны от фибрина, некротические ткани в ране практически отсутствуют. В группе (гель "Фузидин") наблюдалось умеренное выделение гноя, небольшая отечность сохраняется, присутствуют некротические массы в ране.

На 8 сутки у животных, леченых Абисилом-1, наблюдали полное очищение раны от гнойно-некротических масс; рана выполнялась сочными грануляциями с появлением участков краевой эпителизации. При использовании геля "Фузидин" в эти сроки на дне раны еще сохранялись остатки некротических масс и фибринозного налета, которые удаляли механически при обработке раны.

К 10-12 суткам наблюдения у животных с использованием Абисила-1 дно раны было полностью выполнено грануляционной тканью с большими участками фиброза, краевой эпителизацией. Аналогичная картина в группе животных с использованием геля "Фузидин" отмечается к 14 16 суткам, а в контроле к 17 суткам.

Начиная с 17 19 суток в группе леченых Абисилом-1 отмечается полное заживление раны с формированием рубца. Вся рана покрывается шерстным покровом.

Идентичная картина у геля "Фузидин" отмечается спустя 5 6 суток, а в контроле 8 10.

Исследования противовоспалительной и ранозаживляющей активности выявили (см. табл. 2 и 3), что процент заживления поверхностных ран к 17 суткам составил 95,5 ± 4,4 против 53,3 ± 5,1 в контроле и 89,4 ± 5,3 с использованием геля "Фузидин". В дальнейшем срок полного заживания ран с использованием Абисила-1 заканчивался к 18,1 ± 0,4 суткам, в то время как с использованием геля "Фузидин" он составил 21,8 ± 0,6 против 26,1 ± 1,5 в контроле.

Высеваемость микроорганизмов из гнойных ран к 6-8 суткам заканчивалась 1,1x10² КОЕ/г с использованием полученного средства, гель "Фузидин" и контроль показали довольно высокие титры: к 8-10 суткам 2,5x10² и 3,9x10² соответственно.

Цитологический анализ гнойной раны показал, что на 4-6 сутки лечения Абисилом-1, полученным по примеру 2, присутствует значительное количество нейтрофилов (до 70% ); в спектре клеток отмечается появление макрофагов и лимфоцитов, фибробла- стов, часть микробов располагается внутриклеточно. В случае применения геля "Фузидин" в цитограммах наблюдается большое количество разрушенных нейтрофилов. Значительное количество микробных клеток располагается внеклеточно и внутриклеточно.

На 8 сутки лечения Абисил-1 в цитограмме содержание нейтрофилов снизилось до 50-60% количество макрофагов увеличилось. Микробных клеток мало, и они в состоянии фагоцитоза. В контрольной группе (нелеченой) к этому времени наблюдается большое количество нейтрофилов и макрофагов в дегенерированной и фагоцитирующей формах, единичные фибробласты; большое количество микроорганизмов расположены внеклеточно. С использованием геля "Фузидин" отмечается в мазках большое количество нейтрофилов до 75% 5-10% клеточного состава приходится на долю лимфоцитов, моноцитов, макрофагов и фибробластов.

К 12 дню лечения в отпечатках группы животных, леченых Абисилом-1, отмечается дальнейшее снижение уровня нейтрофилов (до 70%). Микробные клетки практически отсутствуют. Аналогичная картина в группах животных с использованием геля отмечается к 17 суткам (гель "Фузидин") и 22-24 суткам в контрольной (нелеченой) группе животных.

П р и м е р 3. Способ осуществляется по примеру 1 с той разницей, что выделенную из капсульного экстракта пихты сибирской фракцию эфирных масел, содержащую монотерпеновые соединения, смешивают с капсульным экстрактом при температуре 20^оС в соотношении 1: 99 (1%), с последующим растворением в растительном (подсолнечном) масле в соотношении 1:4 (20%). На 2 сутки лечения животных Абисилом-1, полученным по указанному способу, клиническая картина соответствовала той, которая отмечалась с использованием средства по примеру 2.

Значительное различие проявилось с 12-17 суток наблюдения. К 12 суткам дно раны еще не было полностью выполнено грануляционной тканью. По периферии раны появились более слабые участки краевой эпителизации.

Грануляционная ткань полностью фиброзированной становится к 16-17 суткам. Рана полностью эпителизированной становится к 18-19 суткам. К этому же времени образуется рубец, а по краям раны разрастание шерстного покрова.

Противовоспалительная и ранозаживляющая активность, отраженная в табл. 2 и 3, показывает, что к 17 суткам процент заживления поверхности ран составляет 94,3 ± 0,1 против 53,3 ± 5,1 в контроле и 78,7 ± 6,1 геля "Фузидин".

Изучение динамики высеваемости выявило низкий титр микробных тел уже к 6 суткам: 1,4 х 10⁴ против 4,8x10⁶ контроля и 3,5x10⁴ геля "Фузидин".

Цитологический анализ ран на 12-е сутки лечения животных Абисилом-1, полученным по примеру 13, показал, что в отпечатках преобладают профибробласты, полибласты и макрофаги. Количество нейтрофилов снизилось до 44% Микробные клетки отсутствуют.

П р и м е р 4. Больная С. 33 года. Диагноз основного заболевания рожистое воспаление правого бедра; булезно-некротическая форма эпифасциальная флегмона правой нижней конечности.

До начала лечения препаратом "Абисил-1" применяли мазь "Левомиколь" и операция: вскрытие, санация, дренирование флегмоны. Улучшения не наступало. Температура тела из субфебрильной повысилась до 37,8^оС.

Через сутки после начала лечения "Абисилом-1" боли перестали беспокоить больную; состояние улучшилось; началась интенсивная грануляция раны; температура нормализовалась. К 5 суткам отмечались яркие грануляции; отек начал спадать. К 10 суткам рана практически была очищена на фоне грануляции и эпителизации.

Эффективность использования "Абисила-1" высокая. Побочных явлений не выявлено.

П р и м е р 5. Больной П. 42 года. Диагноз основного заболевания постинфекционная энцефалопатия.

До начала лечения препаратом "Абисил-1" применялась мазь Вишневского. Состояние больного: средней тяжести.

После начала применения препарата "Абисил-1" у больного улучшился сон, аппетит, общее состояние; происходило быстрое очищение раны, грануляция и эпителизация. Отек к 5 суткам практически отсутствовал; болит в ране не отмечались; отмечалась гипергрануляция раны.

Эффективность использования препарата "Абисил-1" высокая. Побочных явлений не выявлено.

П р и м е р 6. Больной М. 36 лет. Диагноз: тупая травма живота, разрыв тонкой кишки. Разлитой фиброзно-гнойный перитонит. Флегмона передней брюшной стенки. Больному проведена операция: ушивание разрыва тонкой кишки, санация, дренирование брюшной полости. Программированная лапаратомия. Использовались: антибиотики, мазь "Левомиколь". Состояние больного тяжелое. С начала использования препарата "Абисил-1" отмечается снижение температуры, улучшения общего состояния, снижается содержание гноя, длина раны уменьшается. Ко 2 суткам отмечается выраженная грунуляция.

Эффективность использования препарата высокая: наступает быстрое очищение, грануляция и эпителизация тканей. Побочных явлений не выявлено.

Таким образом, изучение сравнительной противовоспалительной и ранозаживляющей активности, проведенное на основе анализа клинической картины воспалительного процесса и репарации ран, динамики высеваемости микробов из гнойных ран, сроком заживления ран и цитологического изучения течения раневого процесса показало, что предлагаемое средство Абисил-1 (масляный раствор экстракта капсулы пихты сибирской, обогащенный фракцией, содержащей монотерпеновые соединения в соотношении 19,5:0,1:ост-е), проявляет большую противовоспалительную и ранозаживляющую активность (97,3 ± 3,4% заживления ран к 17 суткам), чем средства, содержащие соотношения 19,5:0,02:ост-е и 19,5: 0,2: ост-е фракции монотерпеновых соединений (90,5 ± 94,3 ± 0,1), а также гель "Фузидин" (78,7 ± 6,1) или контроль (53,3 ± 5,1). Кроме того, Абисил-1 при сроке применении 7-10 дней вызывает быстрое очищение раны от гнойно-некротических масс, замедляет экссудативный и стимулирует репаративные процессы, т.е. является препаратом, позволяющим его применять в I и II фазах раневого процесса, что не характерно для известных лекарственных средств аналогичного фармакологического действия.

В качестве средств сравнения не использовался натуральный капсульный экстракт пихты сибирской, т.к. снижение обогащения с 0,1% до 0,2% монотерпеновыми соединениями снижало значительно порог активности (см. табл. 2 и 3).

Фракцию монотерпеновых соединений не представлялось целесообразным изучать как таковую по причине ее высокой токсичности, а также потому, что ее увеличение до 0,2% в полученном средстве не вызывало всплеска повышения активности.

Таким образом, введение в капсульный экстракт пихты сибирской групповой фракции, содержащей монотерпеновые соединения, полученной в результате фракционного разделения экстракта капсулы и растворения полученного комплекса в растительном масле, позволяет получить средство, обладающее высокой противовоспалительной, антибактериальной и ранозаживляющей активностью.

Реферат

Изобретение относится к медицине, а именно, к созданию лекарственных средств на растительной основе. Технический результат - повышение противовоспалительной, антибактериальной и ранозаживляющей активности. Средство, обладающее противовоспалительной, антибактериальной и ранозаживляющей активностью, содержит экстракт пихты сибирской, монотерпеновые соединения и растительное масло в соотношении, мас.%: капсульный экстракт пихты сибирской 19,0 - 20,0; монотерпеновые соединения 0,02 - 0, 20; растительное масло остальное. 3 табл.

Формула