Композиции и способы для улучшения сексуальной функции - RU2739916C1

Описание

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА ПРЕДЫДУЩИЕ ЗАЯВКИ

[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно заявке на патент США № 15/446406, поданной 1 марта 2017 г., которая явным образом включена в данный документ посредством ссылки.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

[0002] Настоящая заявка содержит перечень последовательностей, который был представлен в электронном виде в формате ASCII и включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Указанная копия ASCII, созданная 14 апреля 2017 года, названа 063307–0450163_SL.text и имеет размер, составляющий 33 198 байт.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

1. Область техники изобретения

[0003] Варианты осуществления включают способы улучшения сексуальной функции у мужчины с применением композиций, содержащих соединения на основе небольших пептидов и фармацевтически приемлемый носитель. Способы предусматривают без ограничения введение композиций внутримышечно, перорально, внутривенно, интрапростатически, внутрибрюшинно, интрацеребрально (интрапаренхимально), интрацеребровентрикулярно, внутриочагово, интраокулярно, интраартериально, интратекально, внутрь опухоли, интраназально, местно, трансдермально, подкожно или внутрикожно нуждающимся в этом пациентам, при этом введение этим пациентам обеспечивает улучшение сексуальной функции. В особенно предпочтительных вариантах осуществления способы применимы для улучшения сексуальной функции у мужчин с доброкачественной гиперплазией предстательной железы (BPH).

2. Описание предшествующего уровня техники

[0004] Доброкачественная гиперплазия предстательной железы (BPH) – это обычное состояние увеличения предстательной железы у людей среднего возраста и пожилых людей, связанное с трудностями в функционировании нижних отделов мочевыводящих путей. Эти симптомы включают проблемы, такие как ощущение неполного опорожнения мочевого пузыря после мочеиспускания; необходимость мочиться часто; прерывание и возобновление несколько раз во время мочеиспускания; затруднение в сдерживании мочеиспускания; слабый поток мочи; необходимость прилагать усилия и проталкивать мочу во время мочеиспускания и необходимость мочиться в течение ночи после отхода ко сну. Хотя точный(точные) механизм(ы) не ясен(ясны), у мужчин с симптомами в отношении нижних мочевыводящих путей и BPH повышен риск развития сексуальной дисфункции, что обычно наблюдается у пациентов с BPH. Большинство традиционных медицинских и хирургических средств лечения BPH имеют побочные эффекты сексуального характера, которые осложняют данную проблему.

[0005] Доброкачественная гиперплазия предстательной железы (BPH) часто встречается у пожилых мужчин с симптомами, которые влияют на качество жизни, включая нарушение видов деятельности и восприятия благополучия. BPH может быть прогрессирующей, с риском задержки мочи, инфекций, камней в мочевом пузыре и почечной недостаточности. Хотя многие мужчины с легкими или умеренными симптомами чувствуют себя хорошо без вмешательства, неприятные симптомы и осложнения могут прогрессировать у других, что приводит к применению лекарственной терапии или хирургического вмешательства.

[0006] Некоторые средства, которые, как известно, обладают способностью разрушать и, следовательно, либо способствовать удалению, либо подавлять дальнейший рост вредных или нежелательных клеток и тканей, раскрыты в заявке на патент США № 14/808731, поданной 24 июля 2015 года, под названием СПОСОБЫ СНИЖЕНИЯ ПОТРЕБНОСТИ В ХИРУРГИЧЕСКОМ ВМЕШАТЕЛЬСТВЕ У ПАЦИЕНТОВ, СТРАДАЮЩИХ ДОБРОКАЧЕСТВЕННОЙ ГИПЕРПЛАЗИЕЙ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ; заявке на патент США № 14/606683, поданной 27 января 2015 года, под названием СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ НАРУШЕНИЙ, ТРЕБУЮЩИХ РАЗРУШЕНИЯ ИЛИ УДАЛЕНИЯ КЛЕТОК, заявке на патент США № 14/738551, поданной 12 июня 2015 года, под названием КОМБИНИРОВАННЫЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НАРУШЕНИЙ, ТРЕБУЮЩИХ УДАЛЕНИЯ ИЛИ РАЗРУШЕНИЯ НЕЖЕЛАТЕЛЬНЫХ КЛЕТОЧНЫХ ПРОЛИФЕРАЦИЙ, публикациях заявок на патент США №№ 2007/0237780 (в настоящее время приостановлена); 2003/0054990 (в настоящее время приостановлена); 2003/0096350 (теперь патент США № 6924266); 2003/0096756 (теперь патент США № 7192929); 2003/0109437 (теперь патент США № 7241738); 2003/0166569 (теперь патент США № 7317077); 2005/0032704 (теперь патент США № 7408021) и 2015/0148303 (теперь патент США № 9243035), раскрытие каждой из которых включено в данном документе посредством ссылки во всей своей полноте.

[0007] Доброкачественный избыточный рост тканей представляет собой нарушения, при которых желательно удалять клетки из организма. Доброкачественные опухоли представляют собой клеточные пролиферации, которые не метастазируют по всему организму, но вызывают симптомы заболевания. Такие опухоли могут быть смертельными, если они расположены в недоступных областях в органах, таких как головной мозг. Существуют доброкачественные опухоли органов, в том числе опухоли легкого, головного мозга, кожи, гипофиза, щитовидной железы, коры надпочечников и мозгового вещества, яичника, матки, яичка, соединительной ткани, мышц, кишечника, уха, носа, горла, миндалин, рта, печени, желчного пузыря, поджелудочной железы, предстательной железы, сердца и других органов.

[0008] Доброкачественные опухоли и мальформации можно лечить различными способами, включая хирургическое вмешательство, лучевую терапию, терапию лекарственными средствами, термическую или электрическую абляцию, криотерапию и другие. Хотя доброкачественные опухоли не метастазируют, они могут стать большими и рецидивировать. Удаление хирургическим путем доброкачественных опухолей сопряжено со всеми трудностями и побочными эффектами хирургического вмешательства в целом и часто должно проводиться повторно для некоторых доброкачественных опухолей, таких как аденомы гипофиза, менингиомы головного мозга, гиперплазия предстательной железы и другие. Кроме того, некоторым пациентам, которые получают нехирургическое лечение для облегчения симптомов, вызванных доброкачественными опухолями, все еще необходимо последующее инвазивное хирургическое вмешательство. В Lepor, «Medical Treatment of Benign Prostatic Hyperplasia», Reviews in Urology, Vol. 13, No. 1, pp. 20–33 (2011) раскрыты различные исследования эффективности терапии лекарственным средством в лечении BPH и необходимости последующего инвазивного хирургического лечения из–за прогрессирования или ухудшения симптомов BPH.

[0009] Роль андрогенов в развитии доброкачественной гиперплазии предстательной железы у мужчин хорошо задокументирована (Wilson, N. Engl. J. Med. 317: 628–629, 1987). Фактически, доброкачественная гиперплазия предстательной железы не развивается при отсутствии яичек (упоминается в Wendel et al., J. Urol. 108: 116–119, 1972).

[0010] Известно, что блокада секреции андрогенов яичка с помощью хирургической или медикаментозной (агонистом LHRH) кастрации уменьшает размер предстательной железы (Auclair et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 76: 855–862, 1977; Auclair et al., Endocrinology 101: 1890–1893, 1977; Labrie et al., Int. J. Andrology, suppl. 2 (V. Hansson, ed.), Scriptor Publisher APR, pp. 303–318, 1978; Labrie et al., J. Andrology 1: 209–228, 1980; Tremblay and Belanger, Contraception 30: 483–497, 1984; Tremblay et al., Contraception 30: 585–598, 1984; Dube et al., Acta Endocrinol. (Copenh) 116: 413–417, 1987; Lacoste et al., Mol. Cell. Endocrinol. 56: 141–147, 1988; White, Ann. Surg. 22: 1–80, 1895; Faure et al., Fertil. Steril. 37: 416–424, 1982; Labrie et al., Endocrine Reviews 7: 67–74, 1986; Huggins and Stevens, J. Urol. 43: 705–714, 1940; Wendel et al., J. Urol. 108: 116–119, 1972; Peters and Walsh, N. Engl. J. Med. 317: 599–604, 1987; Gabrilove et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 64: 1331–1333, 1987).

[0011] Несколько исследований показали, что лечение посредством антиандрогена также уменьшает размер предстательной железы (Neri et al., Endocrinology, 82: 311–317, 1968; Neri et al., Investigative Urology, 10: 123–130, 1972; Tunn et al., Acta Endocrinol. (Copenh.) 91: 373–384, 1979; Seguin et al., Mol. Cell. Endocrinol., 21: 37–41, 1981; Lefebvre et al., The Prostate 3: 569–578, 1982; Marchetti and Labrie, J. Steroid Biochem, 29: 691–698, 1988; Lacoste et al., Mol. Cell. Endocrinol. 56: 141–147, 1988; Tunn et al., Invest. Urol. 18: 289–292, 1980; Scott and Wade, J. Urol. 101: 81–85, 1969; Caine et al., J. Urol. 114: 564–568, 1975; Stone et al., J. Urol. 141: 240A, 1989; Clejan et al., J. Urol. 141: 534A, 1989).

[0012] В патенте США № 3423507 раскрыто применение антиандрогена ципротеронацетата (1α,2ß–метилен–6–хлор–17α–ацетокси–6–дегидропрогестерона) для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы. Чистые антиандрогены (патент США № 4329364) вызывают увеличение секреции тестостерона, что может привести к более высокой степени ароматизации в эстрогены, что, как предполагается исходя из современных знаний, отрицательно влияет на гиперплазию предстательной железы (Jacobi et al., Endocrinology 102: 1748–1755, 1978). Несколько исследований показало, что лечение посредством комбинации химической кастрации (агониста LHRH) и антиандрогена вызывает большее подавление размера предстательной железы, чем любое лечение, применяемое отдельно (Seguin et al., Mol. Cell. Endocrinol. 21: 37–41, 1981; Lefebvre et al., The Prostate 3: 569–578, 1982; Marchetti and Labrie, J. Steroid Biochem. 29: 691–698, 1988.

[0013] В предстательной железе, а также во многих других тканях тестостерон необратимо превращается с помощью 5α–редуктазы в более активный андроген дигидротестостерон (Bruchovsky and Wilson, J. Biol. Chem. 243: 2012–2021, 1968; Wilson, Handbook of Physiology 5 (section 7), pp. 491–508, 1975). Установлено, что ингибиторы 5α–редуктазы подавляют рост предстательной железы (Brooks et al., Endocrinology 109: 830, 1981; Brooks et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 169: 67, 1982; Brooks et al., Prostate 3: 35, 1982; Wenderoth et al., Endocrinology 113,569–573, 1983; McConnell et al., J. Urol. 141: 239A, 1989); Stoner, E., Lecture on the role of 5.alpha.–reductase inhibitor in benign prostatic hypertropy, 84th AUA Annual Meeting, Dallas, May 8, 1989.

[0014] Ингибирующий эффект ингибитора 5 α–редуктазы Merck L 652931 в отношении развития предстательной и семенной желез у препубертатных крыс был описан в Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc. abst. #1165, p. 314, 1989. Ингибирующий эффект МК–906 в отношении образования дигидротестостерона у мужчин был описан у мужчин Gormley et al. в Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. #1225, p. 329, 1989; Imperato–McGinley et al. в Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. #1639, p. 432, 1989; Geller и Franson в Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. #1640, p. 432, 1989 и Tenover et al. в Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. #583, p. 169, 1989. Активность ингибиторов 5 α–редуктазы N, N–диэтил–4–метил–3–оксо–4–аза–5.альфа–андростан–17.бета.–карбоксамида (4–МА) и 6–метилен–4–прегнен–3,20–диона (LY 207320) была описана Toomey et al., Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. #1226, p. 329, 1989.

[0015] В дополнение к хорошо известному эффекту андрогенов в отношении роста предстательной железы, существует множество исследований, которые показывают, что эстрогены также играют роль в пролиферации предстательной железы (Walsh and Wilson, J. Clin. Invest. 57: 1093–1097, 1976; Robinette et al., Invest. Urol. 15: 425–432, 1978; Moore et al., J. Clin. Invest. 63: 351–257, 1979). Кроме того, было показано, что эстрогены усиливают андроген–индуцированный рост предстательной железы у собаки (Walsh and Wilson, J. Clin. Invest. 57: 1093–1097, 1976; Jacobi et al., Endocrinology 102: 1748–1755, 1978; Tunn et al., Urol. Int. 35: 125–140, 1980). Возможным объяснением этого усиливающего эффекта эстрогена в отношении андроген–индуцированного роста предстательной железы является наблюдение того, что, как было показано, 17ß–эстрадиол увеличивает связывание андрогена в предстательной железе собаки (Moore et al., J. Clin. Invest. 63: 351–357, 1979).

[0016] Показано, что антиэстроген тамоксифен облегчает стероид–индуцированную доброкачественную гиперплазию предстательной железы у собаки (Funke et al., Acta Endocrinol. 100: 462–472, 1982). Введение антиэстрогена тамоксифена в сочетании со стероидным антиандрогеном ципротеронацетатом у пациентов, страдающих доброкачественной гиперплазией предстательной железы, показало положительный эффект в отношении симптомов заболевания (Di Silverio et al. в Ipertrofia Prostatica Benigna (F. Di Silverio, F. Neumann and M. Tannenbaum, eds), Excerpta Medica, pp. 117–125, 1986). В патенте США № 4310523 предлагается, что комбинация антиандрогена и антиэстрогена является эффективной для профилактики и/или терапии доброкачественной гиперплазии предстательной железы. Однако тамоксифен обладает внутренней эстрогенной активностью, которая ограничивает его эффективность.

[0017] Образование эстрогена в результате ароматизации андрогенов происходит в нескольких участках. У мужчин ароматизация андрогенов была продемонстрирована в яичке, жировой и мышечной тканях, коже, печени, мозге и предстательной железе (Schweikert et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 40: 413–417, 1975; Folker and James, J. Steroid Biochem. 49: 687–690, 1983; Longcope et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 46: 146–152, 1978; Lacoste and Labrie, неопубликованные данные; Stone et al., The Prostate 9: 311–318, 1986; Stone et al., Urol. Res. 15: 165–167, 1987). Существуют данные об увеличении продуцирования эстрогенов в предстательной железе у пациентов с доброкачественной гиперплазией предстательной железы (Stone et al., The Prostate 9: 311–318, 1986). Такие данные указывают на то, что местное образование эстрогенов может играть решающую роль в стимулировании роста предстательной железы сверх действия, спрогнозированного для циркулирующих эстрогенов.

[0018] В патенте США № 4472382 раскрыто лечение BPH антиандрогеном и некоторыми пептидами, которые действуют как агонисты LH–RH. В патенте США № 4596797 раскрыты ингибиторы ароматазы в качестве способа профилактики и/или лечения гиперплазии предстательной железы. В патенте США № 4760053 описано лечение некоторых видов рака, в котором комбинируют агонист LHRH с антиандрогеном и/или антиэстрогеном и/или по меньшей мере одним ингибитором биосинтеза половых стероидов. В патенте США № 4775660 раскрыт способ лечения рака молочной железы посредством комбинированной терапии, которая может включать хирургическое или химическое предотвращение секреции яичников и введение антиандрогена и антиэстрогена.

[0019] В патенте США № 4659695 раскрыт способ лечения рака предстательной железы у восприимчивых особей мужского пола животных, включая людей, у которых гормональная секреция яичка блокируется хирургическим или химическим путем, например, с помощью агониста LHRH, который включает введение антиандрогена, например флутамида, в сочетании с по меньшей мере одним ингибитором биосинтеза половых стероидов, например аминоглутетимидом и/или кетоконазолом. Раскрытия каждого из вышеуказанных патентов (США 4472382, 4596797, 4760053, 4775660 и 4659695) включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

[0020] BPH вызвана повышенной активностью как андрогенов, так и эстрогенов. Из–за такой двойной этиологии BPH предлагаемая гормональная терапия была менее чем удовлетворительной и была непредсказуемой, часто вызывая неприемлемые побочные эффекты. Более того, способы лечения согласно предшествующему уровню техники редко приводили к уменьшению объема предстательной железы на более чем приблизительно 20–30% с неустойчивым эффектом в отношении симптоматики (Scott and Wade, J. Urol. 101: 81–85, 1969; Caine et al., J. Urol. 114: 564–568, 1975; Peters and Walsh, New Engl. J. Med. 317: 599–604, 1987; Gabrilove et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 64: 1331–1333, 1987; Stone et al., J. Urol. 141: 240A, 1989; Clejan et al., J. Urol. 141: 534A, 1989; Stoner, E., Lecture on the role of 5 α–reductase inhibitor in benign prostatic hypertrophy, 84th AUA Annual Meeting, Dallas, May 8, 1989.

[0021] Объяснение механизма, кратко изложенного выше, привело в результате к недавней разработке эффективных средств для контроля, а во многих случаях и наоборот, прогрессирования BPH. На переднем плане среди этих средств находится продукт PROSCAR® (финастерид) от Merck & Co., Inc. Эффект этого соединения заключается в подавлении фермента тестостерона 5α–редуктазы, который превращает тестостерон в 5α–дигидротестерон, что приводит в результате к снижению скорости увеличения предстательной железы и часто к уменьшению массы предстательной железы.

[0022] NX–1207 (Fexapotide; Nomox Pharmaceutical Corporation – выделенный пептид, содержащий аминокислотную последовательность в SEQ ID NO. 66), как было показано, способствует гибели клеток в предстательной железе и демонстрирует благоприятное воздействие у мужчин с доброкачественным увеличением предстательной железы (BPH) и у мужчин с раком предстательной железы. При введении NX–1207 непосредственно в локализованные разновидности рака предстательной железы было показано, что оно ассоциировано с меньшим прогрессированием рака по сравнению с прогрессированием, наблюдаемым у контрольных пациентов, не подвергшихся лечению. При введении лекарственного средства непосредственно в увеличенную переходную зону предстательной железы у пациентов с BPH было показано, что оно ассоциировано с длительным улучшением в отношении симптомов нижних мочевыводящих путей при BPH. Также было показано, что NX–1207 характеризуется отличным профилем безопасности.

[0023] Во всем данном описании, включая вышеизложенное описание предшествующего уровня техники, любые и все общедоступные документы, описанные в данном документе, включая любые и все опубликованные заявки на патент США, специально включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Вышеприведенное описание предшествующего уровня техники никоим образом не предназначено для признания того, что любой из документов, описанных в нем, включая находящиеся на рассмотрении заявки на патент США, является предшествующим уровнем техники для настоящего изобретения. Более того, описание в данном документе любых недостатков, связанных с описанными продуктами, способами и/или устройством, не предназначено для ограничения вариантов осуществления. Действительно, аспекты вариантов осуществления могут включать определенные признаки описанных продуктов, способов и/или устройств, не претерпевая от их описанных недостатков.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

[0024] В данной области техники остается потребность в новых и эффективных средствах лечения для улучшения сексуальной функции у мужчин с доброкачественной гиперплазией предстательной железы (BPH). Варианты осуществления, описанные в данном документе, удовлетворяют эти потребности.

[0025] Автором настоящего изобретения было обнаружено, что NX–1207 имеет профиль побочных эффектов, который является предпочтительным для многих или большинства одобренных в настоящее время фармакологических и хирургических средств для лечения BPH. В качестве одного примера многие или большинство утвержденных способов лечения BPH часто связаны с нежелательными побочными эффектами сексуального характера, такими как ретроградная эякуляция и болезненная эякуляция; потеря либидо (полового влечения); эректильная дисфункция и другие сексуальные проблемы.

[0026] Эти побочные эффекты, являющиеся результатом утвержденных общепринятых медицинских и хирургических средств лечения BPH, часто связаны с предсказуемыми эффектами. Например, то, что лекарственные средства, представляющие собой ингибиторы 5–альфа–редуктазы, такие как финастерид или дутастерид, подавляют пути, связанные с тестостероном (мужским половым гормоном), и, таким образом, половое влечение, и другие проблемы не являются неожиданными. Альфа–блокаторы, такие как альфузоцин, теразоцин, доксазоцин, тамсулозин, силодозин и другие, влияют на альфа–адренергические рецепторы во многих тканях, что может привести к головокружению, слабости и проблемам сексуального характера, таким как потеря либидо и импотенция, и другим проблемам. Хирургические и другие методики инвазивной абляции, осуществляемые в отношении предстательной железы, вызывают разрушение прилегающих тканей, таких как уретра, и, таким образом, в общем невозможно избежать частых случаев ретроградной эякуляции и болезненной эякуляции и других проблем сексуального характера.

[0027] Отсутствие долгосрочных побочных эффектов сексуального характера или их минимальная частота в результате лечения BPH с помощью NX–1207 контрастирует с утвержденными традиционными средствами лечения, указанными выше, при этом в последнем случае побочные эффекты приводят к повышению трудностей сексуального характера. Данные трудности не возникают в какой–либо значительной степени при лечении BPH с помощью NX–1207. В отношении NX–1207 это представляет отсутствие негативных ситуаций, которые приводят к частому ухудшению при введении традиционных средств лечения.

[0028] Следовательно, известно, что побочные эффекты часто усугубляют проблемы сексуального характера с применением стандартных средств медицинского и хирургического лечения BPH вследствие известных путей. Также известно, что по причине отсутствия таких негативных сценариев лечение BPH с помощью NX–1207 не характеризуется в значительной степени теми же побочными эффектами и не приводит к соответствующему повышению проблем сексуального характера и ухудшению вследствие побочных эффектов.

[0029] Однако варианты осуществления, описанные в данном документе, относятся к новому применению NX–1207, которое значительно отличается от отсутствия ухудшения сексуальной функции по причине нежелательных побочных эффектов. Новый путь применения, наоборот: 1) не основывается на нежелательных и вредных побочных эффектах, являющихся результатом лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы, и 2) он не основывается на ухудшении сексуальной функции. Вместо этого он относится к получению положительной и улучшенный сексуальной функции, обусловленной применением NX–1207. Отсутствие прогрессирования и ухудшения проблемы вследствие отсутствия вредных побочных эффектов полностью отличается от фактического положительного улучшения, что представляет собой другое понятие и другой опыт для мужчин, которые страдают от этих проблем.

[0030] В ходе клинических испытаний NX–1207 у мужчин с BPH недавно и неожиданно было обнаружено, что введение NX–1207 не только связано с отсутствием нежелательных долгосрочных побочных эффектов сексуального характера или их редкой частотой встречаемости, но неожиданно NX–1207 в определенных группах мужчин характеризовался применением в качестве средства для улучшения у них сексуальной функции. Кроме того, неожиданно было обнаружено улучшение, в частности, у мужчин, получающих NX–1207 в качестве своего первоначального клинического средства лечения у них состояния BPH.

[0031] Данное изобретение отчасти основано на открытии того, что некоторые NTP–пептиды, в том числе конкретный пептид, описанный с помощью аминокислотной последовательности Ile–Asp–Gln–Gln–Val–Leu–Ser–Arg–lle–Lys–Leu–Glu–lle–Lys–Arg–Cys–Leu (SEQ ID NO: 66), способны обеспечивать улучшение в отношении сексуальной функции у мужчин с BPH.

[0032] Данное изобретение также отчасти основано на применении некоторых NTP–пептидов, в том числе конкретного пептида, описанного с помощью аминокислотной последовательности lle–Asp–Gln–Gln–Val–Leu–Ser–Arg–lle–Lys–Leu–Glu–lle–Lys–Arg–Cys–Leu (SEQ ID NO: 66), в комбинации с дополнительным активным средством, способных обеспечивать лечение сексуальной дисфункции с получением неожиданного улучшения сексуальной функции у мужчин с BPH.

[0033] Некоторые варианты осуществления направлены на способы улучшения сексуальной функции у мужчины с BPH, предусматривающие введение нуждающемуся в этом мужчине терапевтически эффективного количества композиции, содержащей NTP–пептид, либо отдельно, либо в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным активным средством, способным обеспечивать лечение сексуальной дисфункции. Композиции можно вводить внутримышечно, перорально, внутривенно, внутрибрюшинно, интрацеребрально (интрапаренхимально), интрацеребровентрикулярно, внутрь опухоли, внутриочагово, внутрикожно, интратекально, интраназально, интраокулярно, интраартериально, местно, трансдермально, с помощью аэрозоля, ифузии, болюсной инъекции, имплантационного устройства, устройства замедленного высвобождения и т. д. В качестве альтернативы, NTP–пептиды можно экспрессировать in vivo путем введения гена, который экспрессирует NTP–пептиды, путем введения вакцины, которая индуцирует такую продукцию, или путем введения клеток, бактерий или вирусов, которые экспрессируют пептид in vivo, вследствие генетической модификации или иным образом.

[0034] В другом варианте осуществления введение композиции, содержащей NTP–пептид, либо отдельно, либо в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным активным средством, способно обеспечивать лечение сексуальной дисфункции, улучшение сексуальной функции, как измерено с помощью оценки опросника для оценки сексуальной функции (SFQ), на более чем 10% по сравнению с введением контрольной композиции, которая не содержит NTP–пептид.

[0035] Как вышеприведенное общее описание, так и последующее подробное описание являются иллюстративными и пояснительными и предназначены для обеспечения дополнительного объяснения вариантов осуществления, как заявлено. Другие объекты, преимущества и особенности будут очевидны для специалистов в данной области техники из следующего подробного описания вариантов осуществления.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

[0036] Прежде чем описать белки, нуклеотидные последовательности, пептиды, композиции, активные средства и т.д. и способы по настоящему изобретению, следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными описанными методологией, протоколами, линиями клеток, векторами и реагентами, так как они могут различаться. Также необходимо понимать, что терминология, используемая в данном документе, предназначена лишь с целью описания конкретных вариантов осуществления, и не предназначена для ограничения объема вариантов осуществления настоящего изобретения, которые будут ограничиваться лишь прилагаемой формулой изобретения.

[0037] Термины и фразы, используемые в данном документе, определены ниже, если не указано иное. Во всем данном описании формы существительного единственного числа включают ссылку на формы множественного числа, если контекст четко не определяет иное. Таким образом, например, ссылка на «клетку–хозяина» включает множество таких клеток–хозяев, а ссылка на «антитело» представляет собой ссылку на одно или более антител и их эквивалентов, известных специалистам в данной области техники, и т. д.

[0038] Аминокислоты и аминокислотные остатки, описанные в данном документе, могут упоминаться в соответствии с принятым одно– или трехбуквенным кодом, приведенным в таблице ниже.

Таблица 1

[0039] Выражение «NTP–пептид» относится к пептидам, содержащим аминокислотные последовательности, соответствующие по меньшей мере части аминокислотной последовательности белков нервных нитей или фрагментам белков нервных нитей, и включает гомологи, производные, варианты, слитые белки, стереоизомеры и пептидомиметики таких пептидов, если в контексте не указано иное. Выражение «NTP–пептид» также относится к пептиду или другому химическому соединению, заявленным в одной или более из следующего: заявке на патент США № 14/808713, поданной 24 июля 2015 года, под названием СПОСОБЫ СНИЖЕНИЯ ПОТРЕБНОСТИ В ХИРУРГИЧЕСКОМ ВМЕШАТЕЛЬСТВЕ У ПАЦИЕНТОВ, СТРАДАЮЩИХ ДОБРОКАЧЕСТВЕННОЙ ГИПЕРПЛАЗИЕЙ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ; заявке на патент США № 14/606683, поданной 27 января 2015 года, под названием СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ НАРУШЕНИЙ, ТРЕБУЮЩИХ РАЗРУШЕНИЯ ИЛИ УДАЛЕНИЯ КЛЕТОК, заявке на патент США № 14/738551, поданной 12 июня 2015 года, под названием КОМБИНИРОВАННЫЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НАРУШЕНИЙ, ТРЕБУЮЩИХ УДАЛЕНИЯ ИЛИ РАЗРУШЕНИЯ НЕЖЕЛАТЕЛЬНЫХ КЛЕТОЧНЫХ ПРОЛИФЕРАЦИЙ; публикациях заявок на патент США №№ 2007/0237780 (в настоящее время приостановлена); 2003/0054990 (теперь патент США № 7172893); 2003/0096350 (теперь патент США № 6924266); 2003/0096756 (теперь патент США № 7192929); 2003/0109437 (теперь патент США № 7241738); 2003/0166569 (теперь патент США № 7317077) и 2005/0032704 (теперь патент США № 7408021); и 2015/0148303 (теперь патент США № 9243035). Раскрытия каждая из данных заявок включены посредством ссылки в данный документ во всей своей полноте. Конкретные пептиды перечислены ниже.

1) SEQ ID NO. 1: MEFSLLLPRLECNGA или Met–Glu–Phe–Ser–Leu–Leu–Leu–Pro–Arg–Leu–Glu–Cys–Asn–Gly–Ala

2) SEQ ID NO. 2: GAISAHRNLRLPGSS или Gly–Ala–Ile–Ser–Ala–His–Arg–Asn–Leu–Arg–Leu–Pro–Gly–Ser–Ser

3) SEQ ID NO. 3: DSPASASPVAGITGMCT или Asp–Ser–Pro–Ala–Ser–Ala–Ser–Pro–Val–Ala–Gly–Ile–Thr–Gly–Met–Cys–Thr

4) SEQ ID NO. 4: MCTHARLILYFFLVEM или Met–Cys–Thr–His–Ala–Arg–Leu–Ile–Leu–Tyr–Phe–Phe–Leu–Val–Glu–Met

5) SEQ ID NO. 5: YFFLVEMEFLH или Tyr–Phe–Phe–Leu–Val–Glu–Met–Glu–Phe–Leu–His

6) SEQ ID NO. 6: VGQAGLELPTS или Val–Gly–Gln–Ala–Gly–Leu–Glu–Leu–Pro–Thr–Ser

7) SEQ ID NO. 7: DDPSVSASQSARYRTGH или Asp–Asp–Pro–Ser–Val–Ser–Ala–Ser–Gln–Ser–Ala–Arg–Tyr–Arg–Thr–Gly–His

8) SEQ ID NO. 8: TGHHARLCLANFCG или Thr–Gly–His–His–Ala–Arg–Leu–Cys–Leu–Ala–Asn–Phe–Cys–Gly

9) SEQ ID NO. 9: ANFCGRNRVSLMCPSWS или Ala–Asn–Phe–Cys–Gly–Arg–Asn–Arg–Val–Ser–Leu–Met–Cys–Pro–Ser–Trp–Ser

10) SEQ ID NO. 10: PELKQSTCLSLPKCWDYRR или Pro–Glu–Leu–Lys–Gln–Ser–Thr–Cys–Leu–Ser–Leu–Pro–Lys–Cys–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

11) SEQ ID NO. 11: LKQSTCLSLPKCWDYRR или Leu–Lys–Gln–Ser–Thr–Cys–Leu–Ser–Leu–Pro–Lys–Cys–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

12) SEQ ID NO. 12: STCLSLPKCWDYRR или Ser–Thr–Cys–Leu–Ser–Leu–Pro–Lys–Cys–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

13) SEQ ID NO. 13: LSLPKCWDYRR или Leu–Ser–Leu–Pro–Lys–Cys–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

14) SEQ ID NO. 14: KCWDYRRAAVPGL или Lys–Cys–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg–Ala–Ala–Val–Pro–Gly–Leu

15) SEQ ID NO. 15: KCWDYRRAAVPGLFILFFL или Lys–Cys–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg–Ala–Ala–Val–Pro–Gly–Leu–Phe–Ile–Leu–Phe–Phe–Leu

16) SEQ ID NO. 16: KCWDYRRAAVPGLFILFFLRHRCP или Lys–Cys–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg–Ala–Ala–Val–Pro–Gly–Leu–Phe–Ile–Leu–Phe–Phe–Leu–Arg–His–Arg–Cys–Pro

17) SEQ ID NO. 17: KCWDYRRAAVPGLFILFFLRHRCPTLTQDEVQWCDHSS или Lys–Cys–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg–Ala–Ala–Val–Pro–Gly–Leu–Phe–Ile–Leu–Phe–Phe–Leu–Arg–His–Arg–Cys–Pro–Thr–Leu–Thr–Gln–Asp–Glu–Val–Gln–Trp–Cys–Asp–His–Ser–Ser

18) SEQ ID NO. 18: WDYRR или Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

19) SEQ ID NO. 19: FILFFLRHRCPTL или Phe–Ile–Leu–Phe–Phe–Leu–Arg–His–Arg–Cys–Pro–Thr–Leu

20) SEQ ID NO. 20: FILFFLRHRCPTLTQDEVQWCDHSS или Phe–Ile–Leu–Phe–Phe–Leu–Arg–His–Arg–Cys–Pro–Thr–Leu–Thr–Gln–Asp–Glu–Val–Gln–Trp–Cys–Asp–His–Ser–Ser

21) SEQ ID NO. 21: HRCPTLTQDEVQWCDHSSLQPSTPEIKHP или His–Arg–Cys–Pro–Thr–Leu–Thr–Gln–Asp–Glu–Val–Gln–Trp–Cys–Asp–His–Ser–Ser–Leu–Gln–Pro–Ser–Thr–Pro–Glu–Ile–Lys–His–Pro

22) SEQ ID NO. 22: PASASQVAGTKDMH или Pro–Ala–Ser–Ala–Ser–Gln–Val–Ala–Gly–Thr–Lys–Asp–Met–His

23) SEQ ID NO. 23: DMHHYTWLIFIFIFNFLR или Asp–Met–His–His–Tyr–Thr–Trp–Leu–Ile–Phe–Ile–Phe–Ile–Phe–Asn–Phe–Leu–Arg

24) SEQ ID NO. 24: HYTWLIFIFIFNFLRQSLN или His–Tyr–Thr–Trp–Leu–Ile–Phe–Ile–Phe–Ile–Phe–Asn–Phe–Leu–Arg–Gln–Ser–Leu–Asn

25) SEQ ID NO. 25: SVTQAGVQWRNLGSLQPLPPGFKLFSCPSLLSSWDYRRPPRLANF или Ser–Val–Thr–Gln–Ala–Gly–Val–Gln–Trp–Arg–Asn–Leu–Gly–Ser–Leu–Gln–Pro–Leu–Pro–Pro–Gly–Phe–Lys–Leu–Phe–Ser–Cys–Pro–Ser–Leu–Leu–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg–Pro–Pro–Arg–Leu–Ala–Asn–Phe

26) SEQ ID NO. 26: PGFKLFSCPSLLSSWDYRR или Pro–Gly–Phe–Lys–Leu–Phe–Ser–Cys–Pro–Ser–Leu–Leu–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

27) SEQ ID NO. 27: FKLFSCPSLLSSWDYRRPPRLANF или Phe–Lys–Leu–Phe–Ser–Cys–Pro–Ser–Leu–Leu–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg–Pro–Pro–Arg–Leu–Ala–Asn–Phe

28) SEQ ID NO. 28: FSCPSLLSSWDYRR или Phe–Ser–Cys–Pro–Ser–Leu–Leu–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

29) SEQ ID NO. 29: SLLSSWDYRR или Ser–Leu–Leu–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

30) SEQ ID NO. 30: SSWDY или Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr

31) SEQ ID NO. 31: SSWDYRR или Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

32) SEQ ID NO. 32: SSWDYRRPPRLANFFVFLVEMGFTM или Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg–Pro–Pro–Arg–Leu–Ala–Asn–Phe–Phe–Val–Phe–Leu–Val–Glu–Met–Gly–Phe–Thr–Met

33) SEQ ID NO. 33: FVFLVEMGFTM или Phe–Val–Phe–Leu–Val–Glu–Met–Gly–Phe–Thr–Met

34) SEQ ID NO. 34: MGFTMFARLILISGPCDLPASAS или Met–Gly–Phe–Thr–Met–Phe–Ala–Arg–Leu–Ile–Leu–Ile–Ser–Gly–Pro–Cys–Asp–Leu–Pro–Ala–Ser–Ala–Ser

35) SEQ ID NO. 35: ISGPC или Ile–Ser–Gly–Pro–Cys

36) SEQ ID NO. 36: DLPASASQSAGITGVSH или Asp–Leu–Pro–Ala–Ser–Ala–Ser–Gln–Ser–Ala–Gly–Ile–Thr–Gly–Val–Ser–His

37) SEQ ID NO. 37: GVSHHARLIFNFCLFEM или Gly–Val–Ser–His–His–Ala–Arg–Leu–Ile–Phe–Asn–Phe–Cys–Leu–Phe–Glu–Met

38) SEQ ID NO. 38: NFCLFEMESH или Asn–Phe–Cys–Leu–Phe–Glu–Met–Glu–Ser–His

39) SEQ ID NO. 39: SVTQAGVQWPNLGSLQPLPPGLKRFSCLSLPSSWDYGHLPPHPANF или Ser–Val–Thr–Gln–Ala–Gly–Val–Gln–Trp–Pro–Asn–Leu–Gly–Ser–Leu–Gln–Pro–Leu–Pro–Pro–Gly–Leu–Lys–Arg–Phe–Ser–Cys–Leu–Ser–Leu–Pro–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Gly–His–Leu–Pro–Pro–His–Pro–Ala–Asn–Phe

40) SEQ ID NO. 40: PPGLKRFSCLSLPSSWDYG или Pro–Pro–Gly–Leu–Lys–Arg–Phe–Ser–Cys–Leu–Ser–Leu–Pro–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Gly

41) SEQ ID NO. 41: FSCLSLPSSWDYGH или Phe–Ser–Cys–Leu–Ser–Leu–Pro–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Gly–His

42) SEQ ID NO. 42: LSLPSSWDY или Leu–Ser–Leu–Pro–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr

43) SEQ ID NO. 43: SSWDYGHLPPHPANFCIFIRGGVSPYLSGWSQTPDLR или Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Gly–His–Leu–Pro–Pro–His–Pro–Ala–Asn–Phe–Cys–Ile–Phe–Ile–Arg–Gly–Gly–Val–Ser–Pro–Tyr–Leu–Ser–Gly–Trp–Ser–Gln–Thr–Pro–Asp–Leu–Arg

44) SEQ ID NO. 44: PGFFKLFSCPSLLSSWDYRR или Pro–Gly–Phe–Phe–Lys–Leu–Phe–Ser–Cys–Pro–Ser–Leu–Leu–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

45) SEQ ID NO. 45: PELKQSTCLSLPKCWDYRR или Pro–Glu–Leu–Lys–Gln–Ser–Thr–Cys–Leu–Ser–Leu–Pro–Lys–Cys–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

46) SEQ ID NO. 46: PPGLKRFSCLSLPSSWDYG или Pro–Pro–Gly–Leu–Lys–Arg–Phe–Ser–Cys–Leu–Ser–Leu–Pro–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Gly

47) SEQ ID NO. 47: FSCLSLPSSWDYGH или Phe–Ser–Cys–Leu–Ser–Leu–Pro–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Gly–His

48) SEQ ID NO. 48: STCLSLPKCWDYRR или Ser–Thr–Cys–Leu–Ser–Leu–Pro–Lys–Cys–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

49) SEQ ID NO. 49: FSCPSLLSSWDYRR или Phe–Ser–Cys–Pro–Ser–Leu–Leu–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

50) SEQ ID NO. 50: LSLPSSWDY или Leu–Ser–Leu–Pro–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr

51) SEQ ID NO. 51: LSLPKCWDYRR или Leu–Ser–Leu–Pro–Lys–Cys–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

52) SEQ ID NO. 52: SLLSSWDYRR или Ser–Leu–Leu–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

53) SEQ ID NO. 53: LPSSWDYRR или Leu–Pro–Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

54) SEQ ID NO. 54: SSWDYRR или Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg

55) SEQ ID NO. 55: SSWDY или Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr

56) SEQ ID NO. 56: SSWDYRRFILFFL или Ser–Ser–Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg–Phe–Ile–Leu–Phe–Phe–Leu

57) SEQ ID NO. 57: WDYRRFIFNFL или Trp–Asp–Tyr–Arg–Arg–Phe–Ile–Phe–Asn–Phe–Leu

58) SEQ ID NO. 58: FNFCLF или Phe–Asn–Phe–Cys–Leu–Phe

59) SEQ ID NO. 59: FIFNFL или Phe–Ile–Phe–Asn–Phe–Leu

60) SEQ ID NO. 60: PASASPVAGITGM или Pro–Ala–Ser–Ala–Ser–Pro–Val–Ala–Gly–Ile–Thr–Gly–Met

61) SEQ ID NO. 61: PASASQVAGTKDM или Pro–Ala–Ser–Ala–Ser–Gln–Val–Ala–Gly–Thr–Lys–Asp–Met

62) SEQ ID NO. 62: PASASQSAGITGV или Pro–Ala–Ser–Ala–Ser–Gln–Ser–Ala–Gly–Ile–Thr–Gly–Val

63) SEQ ID NO. 63: PASASPVAG или Pro–Ala–Ser–Ala–Ser–Pro–Val–Ala–Gly

64) SEQ ID NO. 64: FFLVEM или Phe–Phe–Leu–Val–Glu–Met

65) SEQ ID NO. 65: SVTQAGVQW или Ser–Val–Thr–Gln–Ala–Gly–Val–Gln–Trp

66) SEQ ID NO. 66: IDQQVLSRIKLEIKRCL или Ile–Asp–Gln–Gln–Val–Leu–Ser–Arg–Ile–Lys–Leu–Glu–Ile–Lys–Arg–Cys–Leu

67) SEQ ID NO. 67: LSRIKLEIK или Leu–Ser–Arg–Ile–Lys–Leu–Glu–Ile–Lys

68) SEQ ID NO. 68: GDHGRPNLSRLKLAIKYEVKKM или Gly–Asp–His–Gly–Arg–Pro–Asn–Leu–Ser–Arg–Leu–Lys–Leu–Ala–Ile–Lys–Tyr–Glu–Val–Lys–Lys–Met

69) SEQ ID NO. 69: QQSIAVKFLAVFGVSI или Gln–Gln–Ser–Ile–Ala–Val–Lys–Phe–Leu–Ala–Val–Phe–Gly–Val–Ser–Ile

70) SEQ ID NO. 70: GLLFPVFSVCYLIAPKSPLGL или Gly–Leu–Leu–Phe–Pro–Val–Phe–Ser–Val–Cys–Tyr–Leu–Ile–Ala–Pro–Lys–Ser–Pro–Leu–Gly–Leu

71) SEQ ID NO. 71: MMVCWNRFGKWVYFI или Met–Met–Val–Cys–Trp–Asn–Arg–Phe–Gly–Lys–Trp–Val–Tyr–Phe–Ile

72) SEQ ID NO. 72: SAIFNFGPRYLYHGV или Ser–Ala–Ile–Phe–Asn–Phe–Gly–Pro–Arg–Tyr–Leu–Tyr–His–Gly–Val

73) SEQ ID NO. 73: PFYFLILVRIISFLI или Pro–Phe–Tyr–Phe–Leu–Ile–Leu–Val–Arg–Ile–Ile–Ser–Phe–Leu–Ile

74) SEQ ID NO. 74: GDMEDVLLNCTLLKR или Gly–Asp–Met–Glu–Asp–Val–Leu–Leu–Asn–Cys–Thr–Leu–Leu–Lys–Arg

75) SEQ ID NO. 75: SSRFRFWGALVCSMD или Ser–Ser–Arg–Phe–Arg–Phe–Trp–Gly–Ala–Leu–Val–Cys–Ser–Met–Asp

76) SEQ ID NO. 76: SCRFSRVAVTYRFIT или Ser–Cys–Arg–Phe–Ser–Arg–Val–Ala–Val–Thr–Tyr–Arg–Phe–Ile–Thr

77) SEQ ID NO. 77: LLNIPSPAVWMARNT или Leu–Leu–Asn–Ile–Pro–Ser–Pro–Ala–Val–Trp–Met–Ala–Arg–Asn–Thr

78) SEQ ID NO. 78: MAQSRLTATSASRVQ или Met–Ala–Gln–Ser–Arg–Leu–Thr–Ala–Thr–Ser–Ala–Ser–Arg–Val–Gln

79) SEQ ID NO. 79: AILLSQPPKQLGLRA или Ala–Ile–Leu–Leu–Ser–Gln–Pro–Pro–Lys–Gln–Leu–Gly–Leu–Arg–Ala

80) SEQ ID NO. 80: PANTPLIFVFSLEAG или Pro–Ala–Asn–Thr–Pro–Leu–Ile–Phe–Val–Phe–Ser–Leu–Glu–Ala–Gly

81) SEQ ID NO. 81: FHHICQAGLKLLTSG или Phe–His–His–Ile–Cys–Gln–Ala–Gly–Leu–Lys–Leu–Leu–Thr–Ser–Gly

82) SEQ ID NO. 82: DPPASAFQSAGITGV или Asp–Pro–Pro–Ala–Ser–Ala–Phe–Gln–Ser–Ala–Gly–Ile–Thr–Gly–Val

83) SEQ ID NO. 83: SHLTQPANLDKKICS или Ser–His–Leu–Thr–Gln–Pro–Ala–Asn–Leu–Asp–Lys–Lys–Ile–Cys–Ser

84) SEQ ID NO. 84: NGGSCYVAQAGLKLLASCNPSK или Asn–Gly–Gly–Ser–Cys–Tyr–Val–Ala–Gln–Ala–Gly–Leu–Lys–Leu–Leu–Ala–Ser–Cys–Asn–Pro–Ser–Lys

85) SEQ ID NO. 85: MWTLKSSLVLLLCLT или Met–Trp–Thr–Leu–Lys–Ser–Ser–Leu–Val–Leu–Leu–Leu–Cys–Leu–Thr

86) SEQ ID NO. 86: CSYAFMFSSLRQKTS или Cys–Ser–Tyr–Ala–Phe–Met–Phe–Ser–Ser–Leu–Arg–Gln–Lys–Thr–Ser

87) SEQ ID NO. 87: EPQGKVPCGEHFRIR или Glu–Pro–Gln–Gly–Lys–Val–Pro–Cys–Gly–Glu–His–Phe–Arg–Ile–Arg

88) SEQ ID NO. 88: QNLPEHTQGWLGSKW или Gln–Asn–Leu–Pro–Glu–His–Thr–Gln–Gly–Trp–Leu–Gly–Ser–Lys–Trp

89) SEQ ID NO. 89: LWLLFAVVPFVILKC или Leu–Trp–Leu–Leu–Phe–Ala–Val–Val–Pro–Phe–Val–Ile–Leu–Lys–Cys

90) SEQ ID NO. 90: QRDSEKNKVRMAPFF или Gln–Arg–Asp–Ser–Glu–Lys–Asn–Lys–Val–Arg–Met–Ala–Pro–Phe–Phe

91) SEQ ID NO. 91: LHHIDSISGVSGKRMF или Leu–His–His–Ile–Asp–Ser–Ile–Ser–Gly–Val–Ser–Gly–Lys–Arg–Met–Phe

92) SEQ ID NO. 92: EAYYTMLHLPTTNRP или Glu–Ala–Tyr–Tyr–Thr–Met–Leu–His–Leu–Pro–Thr–Thr–Asn–Arg–Pro

93) SEQ ID NO. 93: KIAHCILFNQPHSPR или Lys–Ile–Ala–His–Cys–Ile–Leu–Phe–Asn–Gln–Pro–His–Ser–Pro–Arg

94) SEQ ID NO. 94: SNSHSHPNPLKLHRR или Ser–Asn–Ser–His–Ser–His–Pro–Asn–Pro–Leu–Lys–Leu–His–Arg–Arg

95) SEQ ID NO. 95: SHSHNRPRAYILITI или Ser–His–Ser–His–Asn–Arg–Pro–Arg–Ala–Tyr–Ile–Leu–Ile–Thr–Ile

96) SEQ ID NO. 96: LPSKLKLRTHSQSHH или Leu–Pro–Ser–Lys–Leu–Lys–Leu–Arg–Thr–His–Ser–Gln–Ser–His–His

97) SEQ ID NO. 97: NPLSRTSNSTPTNSFLMTSSKPR или Asn–Pro–Leu–Ser–Arg–Thr–Ser–Asn–Ser–Thr–Pro–Thr–Asn–Ser–Phe–Leu–Met–Thr–Ser–Ser–Lys–Pro–Arg

98) SEQ ID NO. 98: SSSLGLPKCWDYRHE или Ser–Ser–Ser–Leu–Gly–Leu–Pro–Lys–Cys–Trp–Asp–Tyr–Arg–His–Glu

99) SEQ ID NO. 99: LLSLALMINFRVMAC или Leu–Leu–Ser–Leu–Ala–Leu–Met–Ile–Asn–Phe–Arg–Val–Met–Ala–Cys

100) SEQ ID NO. 100: TFKQHIELRQKISIV или Thr–Phe–Lys–Gln–His–Ile–Glu–Leu–Arg–Gln–Lys–Ile–Ser–Ile–Val

101) SEQ ID NO. 101: PRKLCCMGPVCPVKI или Pro–Arg–Lys–Leu–Cys–Cys–Met–Gly–Pro–Val–Cys–Pro–Val–Lys–Ile

102) SEQ ID NO. 102: ALLTINGHCTWLPAS или Ala–Leu–Leu–Thr–Ile–Asn–Gly–His–Cys–Thr–Trp–Leu–Pro–Ala–Ser

103) SEQ ID NO. 103: MFVFCLILNREKIKG или Met–Phe–Val–Phe–Cys–Leu–Ile–Leu–Asn–Arg–Glu–Lys–Ile–Lys–Gly

104) SEQ ID NO. 104: GNSSFFLLSFFFSFQ или Gly–Asn–Ser–Ser–Phe–Phe–Leu–Leu–Ser–Phe–Phe–Phe–Ser–Phe–Gln

105) SEQ ID NO. 105: NCCQCFQCRTTEGYA или Asn–Cys–Cys–Gln–Cys–Phe–Gln–Cys–Arg–Thr–Thr–Glu–Gly–Tyr–Ala

106) SEQ ID NO. 106: VECFYCLVDKAAFECWWFYSFDT или Val–Glu–Cys–Phe–Tyr–Cys–Leu–Val–Asp–Lys–Ala–Ala–Phe–Glu–Cys–Trp–Trp–Phe–Tyr–Ser–Phe–Asp–Thr

107) SEQ ID NO. 107: MEPHTVAQAGVPQHD или Met–Glu–Pro–His–Thr–Val–Ala–Gln–Ala–Gly–Val–Pro–Gln–His–Asp

108) SEQ ID NO. 108: LGSLQSLLPRFKRFS или Leu–Gly–Ser–Leu–Gln–Ser–Leu–Leu–Pro–Arg–Phe–Lys–Arg–Phe–Ser

109) SEQ ID NO. 109: CLILPKIWDYRNMNT или Cys–Leu–Ile–Leu–Pro–Lys–Ile–Trp–Asp–Tyr–Arg–Asn–Met–Asn–Thr

110) SEQ ID NO. 110: ALIKRNRYTPETGRKS или Ala–Leu–Ile–Lys–Arg–Asn–Arg–Tyr–Thr–Pro–Glu–Thr–Gly–Arg–Lys–Ser

111) SEQ ID NO. 111: IDQQVLSRI или Ile–Asp–Gln–Gln–Val–Leu–Ser–Arg–Ile

112) SEQ ID NO. 112: KLEIKRCL или Lys–Leu–Glu–Ile–Lys–Arg–Cys–Leu

113) SEQ ID NO. 113: VLSRIK или Val–Leu–Ser–Arg–Ile–Lys

114) SEQ ID NO. 114: RIKLEIK или Arg–Ile–Lys–Leu–Glu–Ile–Lys

115) SEQ ID NO. 115: VLSRIKLEIKRCL или Val–Leu–Ser–Arg–Ile–Lys–Leu–Glu–Ile–Lys–Arg–Cys–Leu и

116) SEQ ID NO. 116: IDQQVLSRIKLEI или Ile–Asp–Gln–Gln–Val–Leu–Ser–Arg–Ile–Lys–Leu–Glu–Ile.

Выражение «NTP–пептид» также предпочтительно включает (без ограничения) аминокислотные последовательности под SEQ ID NO. 1–116.

[0040] Термин «фрагмент» относится к белку или полипептиду, которые состоят из непрерывной подпоследовательности аминокислотной последовательности белка или пептида, и включает встречающиеся в природе фрагменты, такие как сплайс–варианты и фрагменты, полученные в результате естественной активности протеазы in vivo. Такой фрагмент может быть усечен на аминоконце, карбоксиконце и/или внутри (например, путем естественного сплайсинга). Такие фрагменты могут быть получены с аминоконцевым метионином или без него. Термин «фрагмент» включает фрагменты, одинаковые или отличные от одного и того же белка или пептида, с общей непрерывной аминокислотной последовательностью или без нее, соединенные вместе, либо непосредственно, либо через линкер. Специалист в данной области техники сможет выбрать подходящий фрагмент для применения в вариантах осуществления без излишних экспериментов с использованием руководств и процедур, изложенных в данном документе.

[0041] Термин «вариант» относится к белку или полипептиду, в которых присутствуют одна или более аминокислотных замен, делеций и/или вставок по сравнению с аминокислотной последовательностью белка или пептида, и включает встречающиеся в природе аллельные варианты или альтернативные сплайс–варианты белка или пептида. Термин «вариант» включает замену одной или более аминокислот в пептидной последовательности подобной или гомологичной аминокислотой(аминокислотами) или отличной аминокислотой(аминокислотами). Существует много шкал, по которым аминокислоты можно отнести к подобным или гомологичным. (Gunnar von Heijne, Sequence Analysis in Molecular Biology, p. 123–39 (Academic Press, New York, N.Y. 1987). Предпочтительные варианты включают замены аланина в одном или более положениях аминокислот. Другие предпочтительные замены включают консервативные замены, которые оказывают незначительное влияние или не влияют на общий суммарный заряд, полярность или гидрофобность белка. Консервативные замены изложены в таблице 2 ниже.

Таблица 2

Консервативные аминокислотные замены

В таблице 3 представлена другая схема аминокислотных замен.

Таблица 3

[0042] Другие варианты могут состоять из менее консервативных аминокислотных замен, таких как выбор остатков, которые более значительно различаются по своему эффекту в отношении сохранения (a) структуры полипептидного остова в участке замены, например, такой как лист или спиральная конформация, (b) заряда или гидрофобности молекулы в сайте–мишени, или (c) величины боковой цепи. Замены, которые, как правило, должны иметь более существенный эффект в отношении функции, представляют собой замены, в которых (а) глицин и/или пролин замещены другой аминокислотой, или удалены, или вставлены; (б) гидрофильный остаток, например, серил или треонил, замещен (или заменен) гидрофобным остатком, например, лейцилом, изолейцилом, фенилаланилом, валилом или аланилом; (c) остаток цистеина замещен (или заменен) любым другим остатком; (d) остаток, имеющий электроположительную боковую цепь, например, лизил, аргинил или гистидил, замещен (или заменен) остатком, имеющим электроотрицательный заряд, например, глутамилом или аспартилом; или (е) остаток, имеющий объемную боковую цепь, например фенилаланин, замещен (или заменен) остатком, не имеющим такой боковой цепи, например, глицином. Другие варианты включают варианты, предназначенные либо для создания нового сайта(сайтов) гликозилирования и/или фосфорилирования, либо варианты, предназначенные для удаления существующего сайта(сайтов) гликозилирования и/или фосфорилирования. Варианты включают по меньшей мере одну аминокислотную замену в сайте гликозилирования, сайте протеолитического расщепления и/или остатке цистеина. Варианты также включают белки и пептиды с дополнительными аминокислотными остатками до или после аминокислотной последовательности белка или пептида на линкерных пептидах. Например, остаток цистеина может быть добавлен как к амино–, так и к карбоксиконцам пептида NTP, чтобы обеспечить циклизацию пептида посредством образования дисульфидной связи. Термин «вариант» также охватывает полипептиды, которые имеют аминокислотную последовательность NTP–пептида с по меньшей мере одной и не более 25 или больше дополнительными аминокислотами, фланкирующими либо 3'–, либо 5'–конец пептида.

[0043] Термин «производное» относится к химически модифицированным белку или полипептиду, которые были химически модифицированы либо естественными процессами, такими как процессинг и другие посттрансляционные модификации, но также посредством методик химической модификации, например, путем добавления одной или более молекул полиэтиленгликоля, сахаров, фосфатов и/или других таких молекул, где молекула или молекулы не связаны естественным образом с белками дикого типа или NTP–пептидами. Производные включают соли. Такие химические модификации хорошо описаны в основных текстах и в более подробных монографиях, а также в многочисленной исследовательской литературе, и они хорошо известны специалистам в данной области техники. Понятно, что один и тот же тип модификации может присутствовать в одинаковой или различной степени в нескольких сайтах данных белка или полипептида. Также данные белок или полипептид могут содержать множество типов модификаций. Модификации могут происходить в любом месте белка или полипептида, включая пептидный остов, аминокислотные боковые цепи и амино– или карбоксиконцы.

[0044] Модификации включают, например, ацетилирование, ацилирование, ADP–рибозилирование, амидирование, ковалентное присоединение флавина, ковалентное присоединение гемового фрагмента, ковалентное присоединение нуклеотида или производного нуклеотида, ковалентное присоединение липида или производного липида, ковалентное присоединение фосфотидилинозитола, перекрестное сшивание, циклизацию, образование дисульфидной связи, деметилирование, образование ковалентных перекрестных сшивок, образование цистеина, образование пироглутамата, формилирование, гамма–карбоксилирование, гликозилирование, образование GPI–якоря, гидроксилирование, йодирование, метилирование, миристоилирование, окисление, протеолитический процессинг, фосфорилирование, пренилирование, рацемизацию, гликозилирование, липидное присоединение, сульфатирование, гамма–карбоксилирование остатков глутаминовой кислоты, гидроксилирование и ADP–рибозилирование, селеноилирование, сульфатирование, добавление аминокислот, опосредованное транспортной РНК, к белкам, такое как аргинилирование и убиквитинирование. См., например, Proteins––Structure And Molecular Properties, 2nd Ed., T. E. Creighton, W. H. Freeman and Company, New York (1993) и Wold, F., «Posttranslational Protein Modifications: Perspectives and Prospects», pp. 1–12 в Posttranslational Covalent Modification Of Proteins, B. C. Johnson, Ed., Academic Press, New York (1983); Seifter et al., Meth. Enzymol. 182:626–646 (1990) и Rattan et al., «Protein Synthesis: Posttranslational Modifications and Aging», Ann. N.Y. Acad. Sci. 663: 48–62 (1992). Термин «производные» включает химические модификации, в результате которых белок или полипептид становятся разветвленными или циклическими, с разветвлением или без него. Циклические, разветвленные и разветвленные кольцевые белки или полипептиды могут быть получены в результате посттрансляционных природных процессов и могут быть получены также посредством полностью синтетических способов.

[0045] Термин «гомолог» относится к белку, который на по меньшей мере 60 процентов идентичен по своей аминокислотной последовательности NTP–пептиду, что определяется стандартными способами, которые обычно используются для сравнения сходства в положении аминокислот двух полипептидов. Степень сходства или идентичности между двумя белками можно легко рассчитать известными способами, включая без ограничения способы, описанные в Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; и Carillo H. and Lipman, D., SIAM, J. Applied Math., 48:1073 (1988). Предпочтительные способы определения идентичности предназначены для обеспечения наибольшего соответствия между протестированными последовательностями. Способы определения идентичности и сходства кодифицированы в общедоступных компьютерных программах.

[0046] Предпочтительные способы с использованием компьютерных программ, пригодные для определения идентичности и сходства между двумя последовательностями, включают, без ограничения программный пакет GCG (Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research, 12(1): 387 (1984)), BLASTP, BLASTN и FASTA, Atschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215: 403–410 (1990). Программа BLAST X общедоступна в NCBI и других источниках (BLAST Manual, Altschul, S., et al., NCBI NLM NIH Bethesda, Md. 20894; Altschul, S., et al., J. Mol. Biol., 215: 403–410 (1990). Например, используя компьютерный алгоритм, такой как GAP (Genetic Computer Group, Университет Висконсина, Мэдисон, Висконсин), два белка или полипептида, для которых должна быть определена процентная идентичность последовательности, выравнивают для оптимального соответствия их соответствующих аминокислот («длина совпадения», как определено алгоритмом).

[0047] Штраф за открытие гэпа (который рассчитывается как 3–кратная средняя диагональ; «средняя диагональ» представляет собой среднее значение диагонали используемой матрицы сравнения; «диагональ» представляет собой оценку или число, присвоенные каждому идеальному совпадению аминокислот по конкретной матрице сравнения) и штраф за продолжение гэпа (который обычно равен {доле (1/10)} умножения на штраф за открытие гэпа), а также матрица сравнения, такая как PAM 250 или BLOSUM 62, используются в сочетании с алгоритмом. Стандартная матрица сравнения (см. Dayhoff et al. в Atlas of Protein Sequence and Structure, vol. 5, supp.3 для матрицы сравнения PAM250; см. Henikoff et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 89:10915 –10919 для матрицы сравнения BLOSUM 62) также может использоваться алгоритмом. Процент идентичности затем рассчитывается по алгоритму. Гомологи обычно имеют одну или более аминокислотных замен, делеций и/или вставок по сравнению с белком или пептидом сравнения, в зависимости от обстоятельств.

[0048] Термин «слитый белок» относится к белку, в котором один или более пептидов рекомбинантно слиты или химически конъюгированы (в том числе ковалентно и нековалентно) с белком, таким как (без ограничения) антитело или фрагмент антитела, такой как Fab–фрагмент или Fv короткой цепи. Термин «слитый белок» также относится к мультимерам (т. е. димерам, тримерам, тетрамерам и высшим мультимерам) пептидов. Такие мультимеры включают гомомерные мультимеры, содержащие один пептид, гетеромерные мультимеры, содержащие более одного пептида, и гетеромерные мультимеры, содержащие по меньшей мере один пептид и по меньшей мере один другой белок. Такие мультимеры могут быть результатом гидрофобных, гидрофильных, ионных и/или ковалентных соединений, связей или сшивок, могут образовываться поперечными сшивками с использованием линкерных молекул или могут быть связаны опосредованно путем, например, образования липосом.

[0049] Термин «пептидомиметик» или «миметик» относится к биологически активным соединениям, которые имитируют биологическую активность пептида или белка, но уже не являются пептидными по химической природе, то есть они уже не содержат пептидных связей (то есть амидных связей между аминокислотами). В данном случае термин пептидомиметик используется в более широком смысле для включения молекул, которые уже не являются полностью пептидными по своей природе, таких как псевдопептиды, частичные пептиды и пептоиды. Примеры пептидомиметиков в этом более широком смысле (где часть пептида заменена структурой, в которой отсутствуют пептидные связи) описаны ниже. Независимо от того, являются ли они полностью или частично непептидными, пептидомиметики в соответствии с вариантами осуществления обеспечивают пространственное расположение реакционноспособных химических фрагментов, которые очень похожи на трехмерное расположение активных групп в пептиде, на котором основан пептидомиметик. В результате такой подобной геометрии активного сайта пептидомиметик обладает эффектом в отношении биологических систем, которые схожи с биологической активностью пептида.

[0050] Пептидомиметики согласно вариантам осуществления предпочтительно практически сходны как по трехмерной форме, так и по биологической активности с пептидами, описанными в данном документе. Примеры способов структурной модификации пептида, известных из уровня техники для создания пептидомиметика, включают инверсию хиральных центров остова, приводящих к структурированию остатка D–аминокислоты, что может, особенно на N–конце, приводить к повышенной стабильности для протеолитического разрушения без неблагоприятного влияния на активность. Пример приведен в статье «Tritriated D–ala¹–Peptide T Binding», Smith C. S. et al., Drug Development Res., 15, pp. 371–379 (1988). Второй способ заключается в изменении циклической структуры в отношении стабильности, такой как межцепочечные имиды и лактамы от N до C (Ede et al. в Smith and Rivier (Eds.) «Peptides: Chemistry and Biology», Escom, Leiden (1991), pp. 268–270). Пример этого приведен в конформационно ограниченных тимопентин–подобных соединениях, таких как раскрытые в патенте США № 4457489 (1985), Goldstein, G. et al., раскрытие которого включено посредством ссылки в данный документ во всей своей полноте. Третий способ заключается в замене пептидных связей в пептиде псевдопептидными связями, что придает устойчивость к протеолизу.

[0051] Был описан ряд псевдопептидных связей, которые в целом не влияют на структуру и биологическую активность пептида. Одним из примеров такого подхода является замена ретроинверсо–псевдопептидных связей («Biologically active retroinverso analogues of thymopentin», Sisto A. et al в Rivier, J. E. и Marshall, G. R. (eds) «Peptides, Chemistry, Structure and Biology», Escom, Leiden (1990), pp. 722–773) и Dalpozzo, et al. (1993), Int. J. Peptide Protein Res., 41:561–566, включенные в данный документ посредством ссылки). В соответствии с этой модификацией аминокислотные последовательности пептидов могут быть идентичны последовательностям пептида, описанным выше, за исключением того, что одна или более пептидных связей заменены ретроинверсо–псевдопептидной связью. Предпочтительно большая часть N–концевой пептидной связи является замещенной, поскольку такая замена придает устойчивость к протеолизу экзопептидазами, действующими на N–конец. Дополнительные модификации также можно осуществлять путем замещения химических групп аминокислот другими химическими группами с подобной структурой. Другой подходящей псевдопептидной связью, которая, как известно, повышает устойчивость к ферментативному расщеплению без потери или с незначительной потерей биологической активности, является уменьшенная изостерная псевдопептидная связь (Couder, et al. (1993), Int. J. Peptide Protein Res., 41:181–184, включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).

[0052] Таким образом, аминокислотные последовательности этих пептидов могут быть идентичны последовательностям пептида, за исключением того, что одна или более пептидных связей заменены изостерной псевдопептидной связью. Предпочтительно большая часть N–концевой пептидной связи является замещенной, поскольку такая замена придает устойчивость к протеолизу экзопептидазами, действующими на N–конец. Синтез пептидов с одной или более восстановленными изостерными псевдопептидными связями известен из уровня техники (Couder et al. (1993), упомянуто выше). Другие примеры включают введение кетометиленовых или метилсульфидных связей для замены пептидных связей.

[0053] Пептоидные производные пептидов представляют собой другой класс пептидомиметиков, которые сохраняют важные структурные детерминанты для биологической активности, но устраняют пептидные связи, за счет чего обеспечивается придание устойчивости к протеолизу (Simon, et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:9367–9371, включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Пептоиды являются олигомерами N–замещенных глицинов. Был описан ряд N–алкильных групп, каждая из которых соответствует боковой цепи природной аминокислоты (Simon, et al. (1992), упомянуто выше). Некоторые или все аминокислоты пептидов могут быть заменены N–замещенным глицином, соответствующим замещенной аминокислоте.

[0054] Термин «пептидомиметик» или «миметик» также включает обратные D–пептиды и энантиомеры, определенные ниже.

[0055] Термин «обратный D–пептид» относится к биологически активным белку или пептиду, состоящим из D–аминокислот, расположенных в обратном порядке по сравнению с L–аминокислотной последовательностью пептида. Таким образом, карбоксиконцевой остаток пептида из L–аминокислот становится аминоконцевым для пептида из D–аминокислот и так далее. Например, пептид ETESH (SEQ ID NO: 117) становится H_dS_dE_dT_dE_d, где E_d, H_d, S_d и T_d являются D–аминокислотами, соответствующими L–аминокислотам E, H, S и T соответственно.

[0056] Термин «стереоизомер» относится к биологически активному белку или пептиду, где один или более остатков L–аминокислоты в аминокислотной последовательности пептида заменены соответствующим остатком(остатками) D–аминокислоты.

[0057] «Композиция», как используется в данном документе, в широком смысле относится к любой композиции, содержащей указанный пептид или аминокислотную последовательность и необязательно дополнительное активное средство. Композиция может содержать сухой состав, водный раствор или стерильную композицию. Композиции, содержащие пептиды, могут быть использованы в качестве гибридизационных зондов. Зонды могут храниться в лиофилизированной форме и могут быть связаны со стабилизирующим средством, таким как углевод. При гибридизации зонд может быть размещен в водном растворе, содержащем соли, например, NaCl, детергенты, например, додецилсульфат натрия (SDS), и другие компоненты, например, раствор Денхардта, сухое молоко, ДНК из молок лососевых и т. д.

[0058] Термин «терапевтически эффективное количество», используемый в данном документе, относится в общем к количеству, эффективному для выполнения функций, признаков и преимуществ, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество может составлять от приблизительно 0,1 мг до приблизительно 100 мг, или от приблизительно 0,5 мг до приблизительно 50 мг, или от приблизительно 1 мг до приблизительно 25 мг, или от приблизительно 1,5 мг до приблизительно 15 мг, или от приблизительно 2,0 до приблизительно 5 мг, или приблизительно 2,5 мг, или любой диапазон или значение между ними.

[0059] Выражение «сексуальная дисфункция», используемое в данном документе, в общем относится к проблеме во время любой фазы цикла сексуальной реакции, которая предотвращает получение мужчиной удовлетворения в результате активности. Цикл сексуальной реакции имеет четыре фазы: возбуждение, плато, оргазм и разрешение. Сексуальная дисфункция включает без ограничения уменьшение сексуального влечения (низкое либидо), эректильные нарушения, преждевременную эякуляцию, задержку или подавление эякуляции, задержку оргазма и аноргазмию.

[0060] В альтернативном варианте осуществления, в котором дополнительное активное средство применяется вместе с пептидом NTP, выражение «активное средство» используется для обозначения любого средства, направленного на лечение пониженного сексуального влечения (потери либидо), эректильных нарушений, преждевременной эякуляции, задержки или подавления эякуляции, задержки оргазма или аноргазмии.

[0061] Подходящие активные средства могут включать без ограничения: (i) ингибиторы фосфодиэстеразы типа 5 (PDE5), в том числе без ограничения силденафила цитрат (VIAGRA; Pfizer), варденафила гидрохлорид (LEVITRA, GlaxoSmithKline) и тадалафил (CIALIS, Eli Lilly); (ii) экзогенный тестостерон (например, в форме сублингвальной или буккальной таблетки, подкожного имплантата, трансдермального кожного пластыря или геля или внутримышечной инъекции); (iii) селективные модуляторы эстрогенового рецептора (SERM), включая без ограничения кломифена цитрат (CLOMID, Sanofi Aventis), энкломифена цитрат (ANDROXAL, Repros Therapeutics), тамоксифена цитрат (NOLVADEX; AstraZeneca) и ралоксифена гидрохлорид (EVISTA).

[0062] Варианты осуществления направлены на способы улучшения сексуальной функции у мужчины с BPH, предусматривающие введение нуждающемуся в этом мужчине терапевтически эффективного количества композиции, содержащей NTP–пептид, либо отдельно, либо в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным активным средством.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что мужчина с ухудшением или прогрессированием в отношении симптомов BPH является млекопитающим, характеризующимся увеличением оценки IPSS с течением времени или не демонстрирующим улучшения (т. е. снижения) IPSS с течением времени. Специалист в данной области техники знает и понимает как определить оценку IPSS, применяя хорошо известные и принятые в отрасли стандарты.

[0063] Международная шкала оценки простатических симптомов (I–PSS) основывается на ответах на семь вопросов, касающихся симптомов мочевыводящих путей, и на один вопрос, касающийся качества жизни. Каждый вопрос, касающийся симптомов мочевыводящих путей, дает возможность пациенту выбрать один из шести ответов, указывающих на увеличение тяжести конкретного симптома. Ответам присваиваются баллы от 0 до 5. Таким образом, общая оценка может находиться в диапазоне от 0 до 35 (от бессимптомной до симптоматической в значительной мере). Вопросы относятся к следующим симптомам мочевыводящих путей:

Вопросы относительно симптомов

1. Неполное опорожнение

2. Частота

3. Перебои

4. Неотложный позыв к мочеиспусканию

5. Слабый поток

6. Натуживание

7. Ноктурия

Восьмой вопрос относится к воспринимаемому пациентом качеству жизни.

[0064] Первые семь вопросов IPSS являются идентичными вопросам, включенным в индекс симптомов Американской урологической ассоциации (AUA), которая в настоящее время классифицирует симптомы следующим образом:

легкие (оценка симптомов равна 7 или меньше);

умеренные (оценка симптомов находится в диапазоне 8–19);

тяжелые (оценка симптомов находится в диапазоне 20–35).

Международный научный комитет (SCI) под патронажем Всемирной организации здравоохранения (WHO) и Международного союза по борьбе против рака (UICC) рекомендует применять только один вопрос для оценки качества жизни. Ответы на этот вопрос находятся в диапазоне от «довольный» до «ужасный» или от 0 до 6. Хотя этот один вопрос может охватывать или может не охватывать общее влияние симптомов доброкачественной гиперплазии предстательной железы (BPH) или качества жизни, – это может служить в качестве значимой отправной точки для беседы между доктором и пациентом.

[0065] Не все мужчины, страдающие BPH, характеризуются ухудшением или прогрессированием в отношении симптомов, ассоциированных с BPH. Другими словами, у некоторых мужчин, страдающих BPH, может не наблюдаться увеличение их оценки IPSS с течением времени, несмотря на то, что они продолжают страдать от нарушения. Аналогично, у некоторых мужчин, страдающих BPH, может наблюдаться значительное увеличение оценки IPSS с течением времени. Описанные в данном документе варианты осуществления могут включать лечение млекопитающих, страдающих BPH, которые подвержены ухудшению или прогрессированию в отношении симптомов BPH, как показано с помощью повышения IPSS с течением времени или с помощью отсутствия существенного снижения IPSS с течением времени. В другом варианте осуществления мужчинами, лечение которых осуществляют, являются те, которые страдают BPH или подвержены ее развитию.

[0066] Автором настоящего изобретения неожиданно было обнаружено при проведении клинических испытаний для лечения BPH, что введение NTP–пептидов, отдельно или в комбинации с другим активным средством, значительно улучшало сексуальную функцию, как измерено с помощью опросника для оценки сексуальной функции (SFQ). Автором настоящего изобретения было обнаружено, что процентная доля мужчин, демонстрирующих улучшение сексуальной функции, увеличивалась при введении NTP–пептидов, отдельно или в комбинации с другим активным средством, по сравнению с теми мужчинами, которым вводили контроль. Автором настоящего изобретения во время клинических испытаний было обнаружено, что процентная доля мужчин, демонстрирующих улучшение сексуальной функции и которым вводили пептид(пептиды) NTP, отдельно или в комбинации с другим активным средством, увеличивалась на количество, составляющее более чем приблизительно 10%, по сравнению с процентной долей мужчин, демонстрирующих улучшение сексуальной функции, которым вводили контроль. Например, если процентная доля мужчин, демонстрирующих улучшение сексуальной функции, которым вводили контроль, составляла приблизительно 50%, то процентная доля мужчин, демонстрирующих улучшение сексуальной функции и которым вводили пептид(пептиды) NTP, отдельно или в комбинации с другим активным средством, будет составлять более 55%, что приводит к по меньшей мере приблизительно 10% улучшению сексуальной функции. В некоторых вариантах осуществления введение пептида(пептидов) NTP, отдельно или в комбинации с другим активным средством, обеспечивает по меньшей мере приблизительно 15% улучшение сексуальной функции, или по меньшей мере приблизительно 18%, или по меньшей мере приблизительно 23%, или по меньшей мере приблизительно 27%, или по меньшей мере приблизительно 35%, или по меньшей мере приблизительно 45%, или по меньшей мере приблизительно 50%, или по меньшей мере приблизительно 60%, или по меньшей мере приблизительно 65%, или более 100%.

[0067] Кроме того, автором настоящего изобретения неожиданно было обнаружено, что введение пептида(пептидов) NTP не подвергавшимся лечению BPH пациентам, отдельно или в комбинации с другим активным средством, обеспечивает сильное повышение сексуальной функции по сравнению с введением пептида(пептидов) NTP пациентам, у которых ранее лечили BPH с помощью традиционных средств терапии (например, медикаментозного лечения, хирургического вмешательства или и того и другого). Введение пептида(пептидов) NTP не подвергавшимся лечению пациентам обеспечивало по меньшей мере приблизительно 10% улучшение по сравнению с введением пептида(пептидов) NTP пациентам, которые ранее получали лечение, или по меньшей мере приблизительно 25% улучшение, или по меньшей мере приблизительно 50% улучшение, или по меньшей мере приблизительно 75% улучшение, или по меньшей мере приблизительно 100% улучшение (например, введение пептида(пептидов) NTP пациентам, не подвергавшимся лечению, обеспечивало улучшение сексуальной функции, при этом введение пептида(пептидов) NTP пациентам, которые ранее получали лечение, обеспечивало снижение сексуальной функции).

[0068] Варианты осуществления включают способ улучшения сексуальной функции у мужчины с BCI, предусматривающий введение один раз или более одного раза пептида NTP мужчине, либо отдельно, либо в комбинации с введением дополнительного активного средства. Способ предусматривает без ограничения введение пептидов NTP внутримышечно, перорально, внутривенно, внутрибрюшинно, интрацеребрально (интрапаренхимально), интрацеребровентрикулярно, внутриочагово, интраокулярно, интраартериально, интратекально, внутрь опухоли, интраназально, местно, трансдермально, подкожно или внутрикожно, либо отдельно, либо в конъюгированной с носителем форме. Предпочтительные NTP–пептиды включают один или более из следующих:

SEQ ID NO. 66 IDQQVLSRIKLEIKRCL Ile–Asp–Gln–Gln–Val–Leu–Ser–Arg–Ile–Lys–Leu–Glu–Ile–Lys–Arg–Cys–Leu

SEQ ID NO. 111 IDQQVLSRI Ile–Asp–Gln–Gln–Val–Leu–Ser–Arg–Ile

SEQ ID NO. 115 VLSRIKLEIKRCL Val–Leu–Ser–Arg–Ile–Lys–Leu–Glu–Ile–Lys–Arg–Cys–Leu

SEQ ID NO. 116 IDQQVLSRIKLEI Ile–Asp–Gln–Gln–Val–Leu–Ser–Arg–Ile–Lys–Leu–Glu–Ile

[0069] Специалисту в данной области техники будет очевидно, что другие меньшие фрагменты вышеуказанных пептидов NTP могут быть выбраны таким образом, что эти пептиды будут обладать одинаковой или схожей биологической активностью. Специалист в данной области техники может выбрать другие фрагменты таким образом, чтобы эти пептиды обладали одинаковой или схожей биологической активностью. Пептиды согласно вариантам осуществления охватывают эти другие фрагменты. В общем, пептиды согласно вариантам осуществления имеют по меньшей мере 4 аминокислоты, предпочтительно по меньшей мере 5 аминокислот и более предпочтительно по меньшей мере 6 аминокислот.

[0070] Варианты осуществления также охватывают способы улучшения сексуальной функции у мужчины с BPH, предусматривающие введение композиции, содержащей NTP–пептиды, которая содержит два или более соединенных вместе NTP–пептидов совместно с дополнительным активным средством. Поскольку NTP–пептид обладает желаемой биологической активностью, из этого следует, что два таких пептида также будут обладать желаемой биологической активностью.

[0071] NTP–пептиды и фрагменты, варианты, производные, гомологи, слитые белки и их миметики, охватываемые этим вариантом осуществления, могут быть получены с использованием способов, известных специалистам в данной области техники, таких как технология рекомбинантной ДНК, синтез белка и выделение встречающихся в природе пептидов, белков, AD7c–белка и его фрагментов, вариантов, производных и гомологов.

[0072] NTP–пептиды и фрагменты, варианты, производные, гомологи, слитые белки и их миметики могут быть получены из других пептидов, белков и их фрагментов, вариантов, производных и гомологов с использованием способов, известных специалистам в данной области техники. Такие способы включают (без ограничения) использование протеаз для расщепления пептида или белка до желаемых NTP–пептидов.

[0073] NTP–пептид может быть получен с использованием хорошо известных способов технологии рекомбинантной ДНК, таких как те, которые изложены в Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. and/or Ausubel et al., eds., Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishers Inc. and Wiley and Sons, N.Y.

[0074] Ген или cDNA, кодирующие NTP–пептид, можно получить, например, путем скрининга геномной библиотеки или библиотеки cDNA– или путем ПЦР–амплификации. Зонды или праймеры, пригодные для скрининга библиотеки, могут быть образованы на основе информации о последовательности для других известных генов или фрагментов генов из того же или родственного семейства генов, таких как, например, консервативные мотивы, обнаруженные в других пептидах или белках. Кроме того, если был идентифицирован ген, кодирующий NTP–пептид, весь этот ген или его часть можно использовать в качестве зонда для идентификации гомологичных генов. Зонды или праймеры могут быть использованы для скрининга библиотек cDNA из различных источников тканей, которые, как считается, экспрессируют ген NTP–пептида. Обычно для скрининга используются условия высокой строгости, чтобы свести к минимуму количество ложноположительных результатов, полученных при скрининге.

[0075] Другим способом получения гена, кодирующего NTP–пептид, является применение химического синтеза с использованием способов, хорошо известных специалисту в данной области техники, таких как способы, описанные Engels et al., Angew. Chem. Intl. Ed., 1989, 28: 716–734. Эти способы включают, среди прочего, фосфотриэфирный, фосфорамидитный и H–фосфонатный способы синтеза нуклеиновых кислот. Предпочтительным способом такого химического синтеза является синтез на полимерной подложке с использованием стандартной фосфорамидитной химии. Как правило, ДНК, кодирующая пептид или белок, будет иметь длину несколько сотен нуклеотидов. Нуклеиновые кислоты размером более 100 нуклеотидов могут быть синтезированы в виде нескольких фрагментов с использованием этих способов. Затем фрагменты могут быть лигированы вместе для образования полноразмерных пептида или белка. Обычно фрагмент ДНК, кодирующий аминоконец белка, имеет ATG, который кодирует остаток метионина. Этот метионин может присутствовать или не присутствовать в зрелой форме белка или пептида, в зависимости от того, предназначен ли белок, продуцируемый в клетке–хозяине, для секретирования из этой клетки.

[0076] Ген, cDNA или их фрагмент, кодирующие NTP–пептид, могут быть вставлены в соответствующий вектор экспрессии или амплификации с использованием стандартных методик лигирования. Вектор обычно выбирают так, чтобы он был функциональным в конкретной используемой клетке–хозяине (т. е. вектор совместим с механизмом клетки–хозяина, таким образом, что может происходить амплификация гена и/или экспрессия гена). Ген, cDNA или их фрагмент, кодирующие NTP–пептид, могут быть амплифицированы/экспрессированы в прокариотических клетках, дрожжевых клетках, клетках насекомых (бакуловирусных системах) и/или эукариотических клетках–хозяевах. Выбор клетки–хозяина будет частично зависеть от того, должен ли NTP–пептид быть гликозилированым и/или фосфорилированым. Если это так, предпочтительными являются клетки–хозяева дрожжей, насекомых или млекопитающих.

[0077] ] Как правило, векторы, используемые в любой из клеток–хозяев, будут содержать по меньшей мере 5'–фланкирующую последовательность (также называемую промотором), а также другие регуляторные элементы, такие как энхансер(энхансеры), элемент начала репликации, элемент терминации транскрипции, полная последовательность интрона, содержащая донорный и акцепторный сайт сплайсинга, сигнальная пептидная последовательность, элемент сайта связывания рибосомы, последовательность полиаденилирования, область полилинкера для вставки нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, подлежащий экспрессии, и селектируемый маркерный элемент. Каждый из этих элементов обсуждается ниже. Необязательновектор может содержать последовательность метки, т. е. молекулу олигонуклеотида, расположенную на 5'– или 3'–конце кодирующей последовательности белка или пептида; при этом молекула олигонуклеотида кодирует polyHis (такой как hexaHis_(SEQ ID NO: 118)) или другую метку, такую как FLAG, HA (гемагглютинин) или Myc, для которой существуют коммерчески доступные антитела. Эта метка обычно сливается с полипептидом при экспрессии полипептида и может служить средством для аффинной очистки белка или пептида из клетки–хозяина. Аффинная очистка может быть выполнена, например, посредством колоночной хроматографии с использованием антител к метке в качестве аффинной матрицы. Необязательно метка может быть впоследствии удалена из очищенного белка или пептида различными способами, такими как использование определенных пептидаз.

[0078] Специалист в данной области техники может осуществить слияние шарнирной области иммуноглобулина человека и Fc–области на N–конце или С–конце NTP–пептида. Последующий Fc–слитый белок может быть очищен с использованием аффинной колонки с белком А. Известно, что Fc проявляет длительный фармакокинетический период полужизни in vivo, и было обнаружено, что слитые с Fc белки проявляют существенно больший период полужизни in vivo, чем неслитый аналог. Кроме того, слияние с Fc–областью обеспечивает димеризацию/мультимеризацию молекулы, что может быть пригодно для биологической активности некоторых молекул.

[0079] 5'–фланкирующая последовательность может быть гомологичной (т. е. из того же вида и/или штамма, что и клетка–хозяин), гетерологичной (т. е. из вида, отличного от вида или штамма клетки–хозяина), гибридной (т. е. комбинация из 5'–фланкирующих последовательностей из более чем одного источника), синтетической, или она может представлять собой 5'–фланкирующую последовательность гена нативного белка или пептида. Таким образом, источником 5'–фланкирующей последовательности может быть любой одноклеточный прокариотический или эукариотический организм, любой организм из позвоночных или беспозвоночных или любое растение при условии, что 5'–фланкирующая последовательность функционирует и может быть активирована аппаратом клетки–хозяина.

[0080] 5'–фланкирующие последовательности, пригодные в векторах этого варианта осуществления, могут быть получены любым из нескольких способов, хорошо известных из уровня техники. Как правило, 5'–фланкирующие последовательности, пригодные в настоящем документе, отличные от фланкирующей последовательности гена белка или пептида, будут предварительно идентифицированы путем картирования и/или расщепления рестрикционной эндонуклеазой и, таким образом, могут быть выделены из подходящего источника ткани с использованием соответствующих рестрикционных эндонуклеаз. В некоторых случаях может быть известна полная нуклеотидная последовательность 5'–фланкирующей последовательности. В данном случае 5'–фланкирующая последовательность может быть синтезирована с использованием способов, описанных выше для синтеза или клонирования нуклеиновой кислоты. Если известна вся или только часть 5'–фланкирующей последовательности, ее можно получить с использованием ПЦР и/или скрининга геномной библиотеки с подходящими олигонуклеотидами и/или фрагментами 5'–фланкирующей последовательности того же или другого вида.

[0081] Если 5'–фланкирующая последовательность не известна, фрагмент ДНК, содержащий 5'–фланкирующую последовательность, может быть выделен из большего фрагмента ДНК, который может содержать, например, кодирующую последовательность или даже другой ген или гены. Выделение можно осуществлять путем расщепления рестрикционной эндонуклеазой с использованием одного или более тщательно выбранных ферментов для выделения подходящего фрагмента ДНК. После расщепления необходимый фрагмент можно выделить с помощью очистки в агарозном геле, колонки Qiagen® или других способов, известных специалисту в данной области техники. Выбор подходящих ферментов для достижения этой цели будет очевиден для специалиста в данной области техники.

[0082] Элемент начала репликации обычно является частью прокариотических векторов экспрессии, приобретаемых коммерчески, и способствует амплификации вектора в клетке–хозяине. Амплификация вектора до определенного числа копий может в некоторых случаях быть важной для оптимальной экспрессии белка или пептида. Если выбранный вектор не содержит сайта начала репликации, он может быть химически синтезирован на основе известной последовательности и лигирован в вектор. Элемент терминации транскрипции обычно расположен на 3'–конце кодирующей последовательности белка или пептида и служит для завершения транскрипции белка или пептида. Обычно элементом терминации транскрипции в прокариотических клетках является GC–богатый фрагмент, за которым следует поли–T–последовательность. Хотя элемент может быть клонирован из библиотеки или приобретен коммерчески как часть вектора, он также может быть легко синтезирован с использованием способов синтеза нуклеиновой кислоты, таких как описанные выше.

[0083] Селектируемый маркерный генный элемент кодирует белок, необходимый для выживания и роста клетки–хозяина, выращенной в селективной культуральной среде. Типичные маркерные гены селекции кодируют белки, которые (а) придают прокариотическим клеткам–хозяевам устойчивость к антибиотикам или другим токсинам, например, ампициллину, тетрациклину или канамицину, (б) дополняют ауксотрофный дефицит клетки или (c) поставляют существенно важные питательные вещества, недоступные в сложных средах. Предпочтительными селектируемыми маркерами являются ген устойчивости к канамицину, ген устойчивости к ампициллину и ген устойчивости к тетрациклину.

[0084] Элемент связывания рибосомы, обычно называемый последовательностью Шайна–Дальгарно (прокариоты) или последовательностью Козака (эукариоты), обычно необходим для инициации трансляции мРНК. Элемент обычно расположен на 3' от промотора и на 5' от кодирующей последовательности белка или пептида, подлежащих синтезу. Последовательность Шайна–Дальгарно варьирует, но, как правило, представляет собой полипурин (т. е. имеет высокое содержание AG). Было идентифицировано много последовательностей Шайна–Дальгарно, каждая из которых может быть легко синтезирована с использованием способов, изложенных выше, и использована в прокариотическом векторе.

[0085] В тех случаях, когда необходимо, чтобы NTP–пептид секретировался из клетки–хозяина, сигнальная последовательность может быть использована для направления пептида из клетки–хозяина, где он синтезируется, и карбокси–концевая часть белка может быть удалена для предотвращения закрепления мембраны. Как правило, сигнальная последовательность расположена в кодирующей области гена NTP–пептида или cDNA или непосредственно на 5'–конце кодирующей области гена пептида. Многие сигнальные последовательности были идентифицированы, и любая из них, которые являются функциональными в выбранной клетке–хозяине, может использоваться в сочетании с геном пептида или cDNA. Следовательно, сигнальная последовательность может быть гомологичной или гетерологичной по отношению к гену пептида или cDNA и может быть гомологичной или гетерологичной по отношению к гену пептида или cDNA. Кроме того, сигнальная последовательность может быть химически синтезирована с использованием способов, изложенных выше. В большинстве случаев секреция полипептида из клетки–хозяина посредством присутствия сигнального пептида приведет к удалению аминоконцевого метионина из полипептида.

[0086] Во многих случаях транскрипция гена NTP–пептида или cDNA увеличивается благодаря наличию одного или более интронов в векторе; это особенно верно, если пептид продуцируется в эукариотических клетках–хозяевах, особенно в клетках–хозяевах млекопитающих. Используемые интроны могут встречаться в природе внутри гена пептида, особенно если используемый ген представляет собой полноразмерную геномную последовательность или ее фрагмент. Если интрон не встречается в природе в гене (как для большинства cDNA), интрон(интроны) можно получить из другого источника. Положение интрона относительно фланкирующей последовательности и гена пептида, как правило, является важным, так как интрон должен быть транскрибирован, чтобы быть эффективным. В связи с этим, если ген пептида, вставленный в вектор экспрессии, представляет собой молекулу cDNA, предпочтительным для интрона положением является 3' от сайта инициации транскрипции и 5' от последовательности терминации транскрипции поли–А. Предпочтительно для cDNA пептида интрон или интроны будут располагаться на одной или другой стороне (т. е. 5' или 3') cDNA так, чтобы он не прерывал эту кодирующую последовательность. Любой интрон из любого источника, включая любые вирусные, прокариотические и эукариотические (растительные или животные) организмы, может быть использован для осуществления на практике этого варианта осуществления при условии, что он совместим с клеткой(клетками)–хозяином(хозяинами), в которую он вставлен. Также сюда включены синтетические интроны. Необязательно в векторе может использоваться более одного интрона.

[0087] Если один или более из вышеперечисленных элементов еще не присутствуют в векторе, подлежащем использованию, они могут быть получены отдельно и лигированы в этот вектор. Способы, используемые для получения каждого из элементов, хорошо известны специалисту в данной области техники и сопоставимы со способами, изложенными выше (т. е. синтез ДНК, скрининг библиотеки и тому подобное).

[0088] Конечные векторы, используемые для осуществления на практике этого варианта осуществления, могут быть сконструированы из начальных векторов, таких как коммерчески доступный вектор. Такие векторы могут содержать или не содержать некоторые элементы, которые должны быть включены в завершенный вектор. Если ни один из необходимых элементов не присутствует в исходном векторе, каждый элемент может быть отдельно лигирован в вектор путем разрезания вектора с помощью соответствующей рестрикционной(рестрикционных) эндонуклеазы(эндонуклеаз) так, чтобы концы элемента, подлежащего лигированию, и концы вектора были совместимы для лигирования. В некоторых случаях может быть необходимо затупить концы, подлежащие совместному лигированию, чтобы получить удовлетворительное лигирование. Затупление достигается путем первого заполнения «липких концов» с использованием ДНК–полимеразы Кленова или ДНК–полимеразы Т4 в присутствии всех четырех нуклеотидов. Эта процедура хорошо известна из уровня техники и описана, например, в Sambrook et al. выше. В качестве альтернативы, два или более элементов, подлежащие вставке в вектор, могут сначала быть лигированы вместе (если они должны быть расположены рядом друг с другом), а затем лигированы в вектор.

[0089] Дополнительный способ конструирования вектора состоит в том, чтобы проводить все лигирования различных элементов одновременно в одной реакционной смеси. В данном случае будет создаваться множество бессмысленных или нефункциональных векторов из–за неправильного лигирования или вставки элементов, однако функциональный вектор может быть идентифицирован и выбран путем расщепления рестрикционной эндонуклеазой.

[0090] Предпочтительными векторами для осуществления на практике этого варианта осуществления являются векторы, которые совместимы с клетками–хозяевами бактерий, насекомых и млекопитающих. Такие векторы включают, среди прочего, pCRII, pCR3 и pcDNA3.1 (Invitrogen Company, Сан Диего, Калифорния), pBSII (Stratagene Company, Ла–Хойя, Калифорния), pET15b (Novagen, Мэдисон, Висконсин), PGEX (Pharmacia Biotech, Пискатауэй, Нью–Джерси), pEGFP–N2 (Clontech, Пало–Альто, Калифорния), pETL (BlueBachl; Invitrogen) и pFastBacDual (Gibco/BRL, Гранд–Айленд, Нью Йорк).

[0091] После того, как вектор был сконструирован и молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полноразмерные или процессированные белок или пептид, была вставлена в соответствующий сайт вектора, завершенный вектор может быть помещен в подходящую клетку–хозяина для амплификации и/или экспрессии полипептида. Клетки–хозяева могут быть прокариотическими клетками–хозяевами (такими как E.coli) или эукариотическими клетками–хозяевами (такими как дрожжевые клетки, клетки насекомых или клетки позвоночных). Клетка–хозяин, при культивировании в соответствующих условиях, может синтезировать белок или пептид, которые впоследствии могут быть выделены из культуральной среды (если клетка–хозяин секретирует их в среду) или непосредственно из клетки–хозяина, продуцирующей их (если они не секретируются).

[0092] После выделения NTP–пептид может быть очищен с использованием таких способов, как хроматография на молекулярных ситах, аффинная хроматография и тому подобное. Выбор клетки–хозяина для продуцирования белка или пептида будет частично зависеть от того, должен ли пептид быть гликозилированным или фосфорилированным (в этом случае предпочтительными являются эукариотические клетки–хозяева), и от того, каким образом клетка–хозяин способна сворачивать пептид в его нативную третичную структуру (например, правильная ориентация дисульфидных мостиков и т. д.), таким образом, что биологически активный белок получают с помощью пептида, который обладает биологической активностью, пептид может сворачиваться после синтеза с использованием соответствующих химических условий, как обсуждается ниже. Подходящими клетками или линиями клеток могут быть клетки млекопитающих, такие как клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки эмбриональной почки человека (НЕК) 293, клетки 293Т или клетки 3Т3. Выбор подходящих клеток–хозяев млекопитающих и способы трансформации, культивирования, амплификации, скрининга, а также продуцирования и очистки продукта известны из уровня техники. Другими подходящими линиями клеток млекопитающих являются линии клеток обезьян COS–1 и COS–7 и линия клеток CV–1. Другие иллюстративные клетки–хозяева млекопитающих включают линии клеток приматов и линии клеток грызунов, в том числе трансформированные линии клеток. Нормальные диплоидные клетки, штаммы клеток, полученные из культуры первичной ткани in vitro, а также первичные экспланты, также являются подходящими. Клетки–кандидаты могут быть генотипически дефицитными по селекционному гену или могут содержать доминантно действующий селекционный ген. Другие подходящие линии клеток млекопитающих включают без ограничения клетки нейробластомы мыши N2A, HeLa, клетки мыши L–929, линии 3T3, полученные от мышей Swiss, Balb–c или NIH, линии клеток хомячка BHK или HaK.

[0093] Такими же пригодными в качестве клеток–хозяев, подходящих для вариантов осуществления настоящего изобретения, являются бактериальные клетки. Например, различные штаммы E. coli (например, HB101, DH5–альфа, DH10 и MC1061) являются хорошо известными в качестве клеток–хозяев в области биотехнологии. В этом способе также могут использоваться различные штаммы B. subtilis, Pseudomonas spp., другие Bacillus spp., Streptomyces spp. и т. п. Многие штаммы дрожжевых клеток, известные специалистам в данной области техники, также доступны в качестве клеток–хозяев для экспрессии полипептидов согласно вариантам осуществления настоящего изобретения.

[0094] Кроме того, при необходимости, системы клеток насекомых могут быть использованы в способах согласно вариантам осуществления настоящего изобретения. Такие системы описаны, например, в Kitts et al. (Biotechniques, 1993, 14(5): 810–817), Lucklow (Curr. Opin. Biotechnol., 1993, 4: 564–572) и Lucklow et al. (J. Virol., 1993, 67(8): 4566–4579). Предпочтительными клетками насекомых являются Sf–9 и Hi5 (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния).

[0095] Введение (также называемое трансформацией или трансфекцией) вектора в выбранную клетку–хозяина может быть выполнено с использованием таких способов, как хлорид кальция, электропорация, микроинъекция, липофекция или способ DEAE–декстран. Выбранный способ будет частично зависеть от типа используемой клетки–хозяина. Эти способы и другие подходящие способы хорошо известны специалисту в данной области техники и изложены, например, в Sambrook et al. выше.

[0096] Клетки–хозяева, содержащие вектор (т. е. трансформированные или трансфицированные), можно культивировать с использованием стандартных сред, хорошо известных специалисту в данной области техники. Среда обычно содержит все питательные вещества, необходимые для роста и выживания клеток. Подходящими средами для культивирования клеток E.coli являются, например, бульон Лурия (LB) и/или бульон для взбалтывания (TB). Подходящими средами для культивирования эукариотических клеток являются RPMI 1640, MEM и DMEM, все из которых могут быть дополнены сывороткой и/или факторами роста, необходимыми для конкретной культивируемой линии клеток. Подходящей средой для культур насекомых является среда Грейса, дополненная дрожжевым экстрактом, гидролизатом лактальбумина и/или фетальной сывороткой теленка, если необходимо. Как правило, антибиотик или другое соединение, пригодное для селективного роста только трансформированных клеток, добавляют в качестве дополнения к среде. Соединение, подлежащее применению, будет обусловлено селектируемым маркерным элементом, присутствующим на плазмиде, с помощью которой трансформировали клетку–хозяина. Например, если селектируемый маркерный элемент обуславливает устойчивость к канамицину, соединение, добавляемое в культуральную среду, будет представлять собой канамицин.

[0097] Количество NTP–пептида, продуцируемого в клетке–хозяине, можно оценить с использованием стандартных способов, известных из уровня техники. Такие способы включают без ограничения вестерн–блот–анализ, электрофорез в SDS–полиакриламидном геле, электрофорез в неденатурирующем геле, разделение посредством HPLC, масс–спектроскопию, иммунопреципитацию и/или анализы активности, такие как анализы связывания ДНК по сдвигу в геле.

[0098] Если белок или пептид предназначен для секретирования из клеток–хозяев, большая часть белка или пептида может быть обнаружена в среде для культивирования клеток. Белки, полученные таким способом, обычно не содержат аминоконцевого метионина, поскольку он удаляется во время секреции из клетки. Однако если белок или пептид не секретируются из клеток–хозяев, они будут присутствовать в цитоплазме и/или ядре (для эукариотических клеток–хозяев) или в цитозоле (для клеток–хозяев грамотрицательных бактерий) и могут иметь аминоконцевой метионин.

[0099] Для NTP–пептида, расположенного в цитоплазме и/или ядре клетки–хозяина, клетки–хозяева обычно сначала разрушают механически или с помощью детергента для высвобождения внутриклеточного содержимого в буферный раствор. Затем пептид можно выделять из этого раствора.

[0100] Очистку NTP–пептидов из раствора можно осуществлять с использованием различных методик. Если NTP–пептид был синтезирован таким образом, что он содержит метку, такую как гексагистидин (SEQ ID NO: 118)(например, пептид/hexaHis (SEQ ID NO: 118)), или другой небольшой пептид, такой как FLAG (Sigma–Aldritch, Сент–Луис, Миссури) или кальмодулин–связывающий пептид (Stratagene, Ла–Холья, Калифорния), на своем либо карбоксильном, либо аминоконце, то он может быть практически очищен посредством одностадийного способа путем пропускания раствора через аффинную колонку, где матрица колонки характеризуется высокой аффинностью к метке или непосредственно к белку (т. е. моноклональному антителу, специфически распознающему пептид). Например, полигистидин связывается с большой аффинностью и специфичностью с никелем, цинком и кобальтом; таким образом, аффинную хроматографию с иммобилизованными ионами металлов, в которой используется аффинная смола на основе никеля (как используется в системе QlAexpress от Qiagen или системе Xpress от Invitrogen), или аффинная смола на основе кобальта (как используется в системе Talon от BD Biosciences–CLONTECH), можно использовать для очистки пептида/поли–His. (См., например, Ausubel et al., eds., Current Protocols in Molecular Biology, Section 10.11.8, John Wiley & Sons, New York ).

[0101] Если NTP–пептид получают без прикрепленной метки, и антитела не доступны, то могут применяться другие хорошо известные процедуры очистки. Такие процедуры включают без ограничения ионообменную хроматографию, гидроксиапатитовую хроматографию, хроматографию гидрофобного взаимодействия, хроматографию на молекулярном сите, HPLC, электрофорез в нативном геле в сочетании с элюированием гелем и препаративную изоэлектрическую фокусировку (Isoprime machine/technique, Hoefer Scientific). В некоторых случаях две или более из этих методик могут быть объединены для достижения повышенной чистоты.

[0102] Если ожидается, что NTP–пептид будет обнаружен главным образом внутриклеточно, то внутриклеточный материал (включая тельца включения для грамотрицательных бактерий) может быть извлечен из клетки–хозяина с использованием любой стандартной методики, известной специалисту в данной области техники. Например, клетки–хозяева можно лизировать для высвобождения содержимого периплазмы/цитоплазмы с помощью пресса Френча, гомогенизации и/или обработки ультразвуком с последующим центрифугированием. Если пептид образовал тельца включения в цитозоле, тельца включения могут часто связываться с внутренней и/или внешней клеточной мембраной и, таким образом, после центрифугирования будут обнаруживаться главным образом в осадочном материале. Материал осадка затем может быть обработан при крайних значениях pH или хаотропным средством, таким как детергент, гуанидин, производные гуанидина, мочевина или производные мочевины, в присутствии восстанавливающего средства, такого как дитиотреитол при щелочном pH или трис–карбоксиэтилфосфин при кислотном pH до высвобождения, разъединения и растворения телец включений. Затем пептид в его уже растворимой форме можно анализировать с помощью гель–электрофореза, иммунопреципитации или тому подобного. Если необходимо выделить пептид, выделение можно осуществить с использованием стандартных способов, таких как изложенные ниже и в Marston et al. Meth. Enz., 1990, 182: 264–275.

[0103] В некоторых случаях NTP–пептид может не быть биологически активным после выделения. Различные способы рефолдинга или преобразования полипептида в его третичную структуру и образования дисульфидных связей могут быть использованы для восстановления биологической активности. Такие способы включают воздействие на солюбилизированный полипептид pH, обычно выше 7, и в присутствии определенной концентрации хаотропа. Выбор хаотропа очень подобен выбору, используемому для солюбилизации тельца включения, но обычно при более низкой концентрации и не обязательно тот же хаотроп, что и для солюбилизации. В большинстве случаев раствор для рефолдинга/окисления также будет содержать восстанавливающее средство или восстанавливающее средство плюс его окисленную форму в определенном соотношении, чтобы образовать определенный окислительно–восстановительный потенциал, обеспечивающие осуществление дисульфидной перетасовки при образовании цистеинового мостика(мостиков) белка. Некоторые из обычно используемых окислительно–восстановительных пар включают цистеин/цистамин, глутатион (GSH)/дитиобис GSH, хлорид меди, дитиотреитол (DTT)/дитиан DTT, 2–меркаптоэтанол (BME)/дитиогликоль (BME–BME). Во многих случаях для повышения эффективности рефолдинга необходим сорастворитель, и более распространенные реагенты, используемые для этой цели, включают глицерин, полиэтиленгликоль различной молекулярной массы и аргинин.

[0104] Если тельца включения NTP–пептидов не образуются в значительной степени в клетке–хозяине, NTP–пептид будет обнаруживаться главным образом в супернатанте после центрифугирования гомогената клетки, и NTP–пептид может быть выделен из супернатанта с использованием способов, таких как те, которые приведены ниже.

[0105] В тех ситуациях, когда предпочтительно частично или полностью выделить NTP–пептид, очистка может быть выполнена с использованием стандартных способов, хорошо известных специалисту в данной области техники. Такие способы включают без ограничения разделение посредством электрофореза с последующим электроэлюированием, различные типы хроматографии (иммуноаффинная, на молекулярном сите и/или ионообменная) и/или жидкостной хроматографии высокого давления. В некоторых случаях может быть предпочтительным использовать более одного из этих способов для полной очистки.

[0106] В дополнение к получению и очистке NTP–пептидов с применением методик рекомбинантной ДНК NTP–пептиды и их фрагменты, варианты, гомологи, слитые белки, пептидомиметики и производные могут быть получены посредством способов химического синтеза (таких как твердофазный синтез пептидов) с применением методик, известных из уровня техники, таких как изложенные в Merrifield et al., 1963, J. Am. Chem. Soc., 85(14): 2149–2154, Houghten et al. Proc Natl Acad. Sci. USA, 1985, 82(15): 5131–5135, и Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, Ill. . Такие пептиды могут быть синтезированы с метионином или без него на аминоконце. Химически синтезированные NTP–пептиды могут быть окислены с использованием способов, изложенных в этих ссылочных материалах, с образованием дисульфидных мостиков. Предполагается, что NTP–пептиды обладают биологической активностью, сопоставимой с пептидами, полученными рекомбинантно или очищенными из природных источников, и, таким образом, могут использоваться взаимозаменяемо с рекомбинантным или природным пептидом.

[0107] Композиции на основе химически модифицированного NTP–пептида, в которых пептид связан с полимером, включены в объем вариантов осуществления настоящего изобретения. Выбранный полимер обычно является водорастворимым, так что белок, к которому он присоединен, не осаждается в водной среде, такой как физиологическая среда. Выбранный полимер обычно модифицируют так, чтобы он имел одну реакционноспособную группу, такую как активный сложный эфир для ацилирования или альдегид для алкилирования, так что степень полимеризации можно контролировать, как предусмотрено в способах по настоящему изобретению. Полимер может иметь любую молекулярную массу и может быть разветвленным или неразветвленным. В объем пептидных полимеров входит смесь полимеров.

[0108] В некоторых случаях может быть необходимо получить варианты нуклеиновой кислоты и/или аминокислоты встречающихся в природе NTP–пептидов. Варианты нуклеиновой кислоты могут быть получены с использованием сайт–направленного мутагенеза, ПЦР–амплификации или других подходящих способов, где праймер(праймеры) имеют необходимые точечные мутации (см. Sambrook et al. выше и Ausubel et al. выше для описания методик мутагенеза). Химический синтез с использованием способов, описанных Engels et al. выше, также может быть использован для получения таких вариантов. Также могут быть использованы другие способы, известные специалисту в данной области техники.

[0109] Предпочтительными вариантами нуклеиновых кислот являются варианты, содержащие нуклеотидные замены, учитывающие предпочтение кодонов в клетке–хозяине, которая подлежит использованию для получения NTP–пептидов. Такая оптимизация кодонов может быть определена с помощью компьютерных алгоритмов, которые включают таблицы частоты кодонов, такие как Ecohigh. Код для предпочтения кодонов высокоэпрессированных бактериальных генов предусмотрен пакетом Университета Висконсина версии 9.0, Genetics Computer Group, Мэдисон, Висконсин. Другие используемые таблицы частоты кодонов включают Celegans_high.cod, Celegans_low.cod, Drosophila_high.cod, Human_high.cod, Maize_high.cod и Yeast_high.cod. Другими предпочтительными вариантами являются те, которые кодируют консервативные аминокислотные замены, как описано выше (например, в которых заряд или полярность встречающейся в природе аминокислотной боковой цепи существенно не изменяется путем замены другой аминокислотой) по сравнению с диким типом, и/или те, которые предназначены для создания нового сайта(сайтов) гликозилирования и/или фосфорилирования, или те, которые предназначены для делеции существующего сайта(сайтов) гликозилирования и/или фосфорилирования.

[0110] NTP–пептиды и фрагменты, гомологи, варианты, слитые белки, пептидомиметики, их производные и соли также могут быть получены с использованием общепринятых методик синтеза пептидов, известных специалисту в данной области техники. Эти методики включают способы химического сочетания (см. Wunsch, E: «Methoden der organischen Chemie», Volume 15, Band 1+2, Synthese von Peptiden, thime Verlag, Stuttgart (1974) и Barrany, G.; Marrifield, R. B.: «The Peptides», eds. E. Gross, J. Meienhofer, Volume 2, Chapter 1, pp. 1–284, Academic Press (1980)), способы ферментативного сочетания (см. Widmer, F. Johansen, J. T., Carlsberg Res. Commun., Vol. 44, pp. 37–46 (1979); Kullmann, W.: «Enzymatic Peptide Synthesis», CRC Press Inc. Boca Raton, Fla. (1987) и Widmer, F., Johansen, J. T. в «Synthetic Peptides in Biology and Medicines», eds. Alitalo, K., Partanen, P., Vatieri, A., pp.79–86, Elsevier, Amsterdam (1985)), или комбинацию химического и ферментативного способов, если это обеспечивает преимущество для постановки процесса и экономии. Используя приведенные в данном документе руководства, специалисты в данной области техники способны варьировать пептидную последовательность NTP–пептида для получения гомолога, обладающего такой же или сходной биологической активностью (биоактивностью), что и исходный или нативный NTP–пептид.

[0111] Существуют преимущества использования миметика данного NTP–пептида, а не самого пептида. В целом, пептидомиметики являются более биодоступными, имеют более длительную продолжительность действия и могут быть дешевле в производстве, чем нативные белки и пептиды.

[0112] Пептидомиметики NTP–пептидов могут быть разработаны с использованием методик комбинаторной химии и других методик, известных из уровня техники (см., например, Proceedings of the 20th European Peptide Symposium, ed. G. Jung, E. Bayer, pp. 289–336 и ссылки на них), Примеры способов, известных из уровня техники, структурной модификации пептида для создания пептидомиметика включают инверсию хиральных центров остова, приводящих к структурированию остатка D–аминокислоты, что может, особенно на N–конце, приводить к повышенной стабильности в отношении протеолитического разрушения без неблагоприятного влияния на активность. Пример приведен в статье «Tritriated D–ala¹–Peptide T Binding», Smith C. S. et al., Drug Development Res. 15, pp. 371–379 (1988).

[0113] Второй способ заключается в изменении циклической структуры для стабильности, такой как межцепочечные имиды и лактамы от N до C (Ede et al. в Smith and Rivier (Eds.) «Peptides: Chemistry and Biology», Escom, Leiden (1991), pp. 268–270). Пример этого приведен в конформационно ограниченных тимопентин–подобных соединениях, таких как раскрытые в патенте США № 4457489 (1985), Goldstein, G. et al., раскрытие которого включено посредством ссылки в данный документ во всей своей полноте.

[0114] Третий способ заключается в замене пептидных связей в NTP–пептиде псевдопептидными связями, что придает устойчивость к протеолизу. Был описан ряд псевдопептидных связей, которые в целом не влияют на структуру и биологическую активность пептида. Одним из примеров такого подхода является замена ретроинверсо–псевдопептидных связей («Biologically active retroinverso analogues of thymopentin», Sisto A. et al в Rivier, J. E. и Marshall, G. R. (eds) «Peptides, Chemistry, Structure and Biology», Escom, Leiden (1990), pp. 722–773) и Dalpozzo, et al. (1993), Int. J. Peptide Protein Res., 41:561–566, включенные в данный документ посредством ссылки). В соответствии с этой модификацией аминокислотные последовательности пептидов могут быть идентичны последовательностям пептидов, описанным выше, за исключением того, что одна или более пептидных связей заменены ретроинверсо–псевдопептидной связью. Предпочтительно большая часть N–концевой пептидной связи является замещенной, поскольку такая замена придает устойчивость к протеолизу экзопептидазами, действующими на N–конец.

[0115] Синтез пептидов с одной или более восстановленными ретроинверсо–псевдопептидными связями известен из уровня техники (Sisto (1990) и Dalpozzo, et al. (1993), упомянутые выше). Таким образом, пептидные связи можно заместить непептидными связями, что позволит пептидомиметику принимать структуру, сходную со структурой исходного пептида, и, следовательно, обеспечит ему подобную биологическую активность. Дополнительные модификации также можно осуществлять путем замещения химических групп аминокислот другими химическими группами с подобной структурой. Другой подходящей псевдопептидной связью, которая, как известно, повышает устойчивость к ферментативному расщеплению без потери или с незначительной потерей биологической активности, является уменьшенная изостерная псевдопептидная связь (Couder, et al. (1993), Int. J. Peptide Protein Res., 41:181–184, включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Таким образом, аминокислотные последовательности этих пептидов могут быть идентичны последовательностям пептида, за исключением того, что одна или более пептидных связей заменены изостерной псевдопептидной связью. Предпочтительно большая часть N–концевой пептидной связи является замещенной, поскольку такая замена придает устойчивость к протеолизу экзопептидазами, действующими на N–конец. Синтез пептидов с одной или более восстановленными изостерными псевдопептидными связями известен из уровня техники (Couder et al. (1993), упомянуто выше). Другие примеры включают введение кетометиленовых или метилсульфидных связей для замены пептидных связей.

[0116] Пептоидные производные NTP–пептидов представляют собой другой класс пептидомиметиков, которые сохраняют важные структурные детерминанты для биологической активности, но устраняют пептидные связи, за счет чего обеспечивается придание устойчивости к протеолизу (Simon, et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:9367–9371 и включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Пептоиды являются олигомерами N–замещенных глицинов. Был описан ряд N–алкильных групп, каждая из которых соответствует боковой цепи природной аминокислоты (Simon, et al. (1992), упомянуто выше и включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Некоторые или все аминокислоты пептида заменены N–замещенным глицином, соответствующим замещенной аминокислоте.

[0117] Разработке пептидомиметиков может способствовать определение третичной структуры исходного пептида с помощью ЯМР–спектроскопии, кристаллографии и/или компьютерного молекулярного моделирования. Эти методики способствуют разработке новых композиций с более высокой эффективностью и/или большей биодоступностью и/или большей стабильностью, чем у исходного пептида (Dean (1994), BioEssays, 16: 683–687; Cohen and Shatzmiller (1993), J. Mol. Graph., 11: 166–173; Wiley and Rich (1993), Med. Res. Rev., 13: 327–384; Moore (1994), Trends Pharmacol. Sci., 15: 124–129; Hruby (1993), Biopolymers, 33: 1073–1082; Bugg et al. (1993), Sci. Am., 269: 92–98, все включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).

[0118] Как только идентифицировано соединение, представляющее собой потенциальный пептидомиметик, оно может быть синтезировано и проанализировано с использованием способов, описанных в примерах ниже, для оценки его активности. Соединения, представляющие собой пептидомиметики, полученные посредством указанных выше способов, имеющие биологическую активность пептидов и схожую трехмерную структуру, охватываются данным вариантом осуществления. Специалисту в данной области техники будет очевидно, что пептидомиметик может быть получен из любого из пептидов, несущих одну или более модификаций, описанных выше. Кроме того, будет очевидно, что пептидомиметики согласно данному варианту осуществления могут быть дополнительно использованы для разработки еще более активных непептидных соединений в дополнение к их применению в качестве терапевтических соединений.

[0119] В настоящее время существует ряд организаций, способных синтезировать пептиды, описанные в данном документе. Например, учитывая последовательность NTP–пептида, организация может синтезировать пептид и направить синтезированный пептид с сопроводительной документацией и доказательством идентичности пептида.

[0120] Настоящее изобретение направлено на способы улучшения сексуальной функции у мужчины с доброкачественной гипертрофией предстательной железы (BPH). Такие способы предусматривают введение мужчине, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества NTP–пептида, либо отдельно, либо в комбинации с дополнительным активным средством. Нуждающимися мужчинами могут являться мужчины, страдающие доброкачественной гиперплазией предстательной железы, которые могут иметь повышенный риск развития рака предстательной железы или могут не иметь его, или мужчины с риском развития рака предстательной железы. Нуждающимися млекопитающими также могут являться любые млекопитающие, которые получат преимущество от уменьшения тяжести или предупреждения ухудшения или прогрессирования симптомов, ассоциированных с BPH.

[0121] Дополнительное активное средство, если используется, может представлять собой одно или более активных средств, выбранных из (i) ингибиторов фосфодиэстеразы типа 5 (PDE5), включая без ограничения силденафила цитрат (VIAGRA; Pfizer), варденафила гидрохлорид (LEVITRA, GlaxoSmithKline) и тадалафил (CIALIS, Eli Lilly); (ii) экзогенного тестостерона (например, в форме сублингвальной или буккальной таблетки, субдермального имплантата, трансдермального кожного пластыря или геля или внутримышечной инъекции); (iii) селективных модуляторов эстрогенового рецептора (SERM), включая без ограничения кломифена цитрат (CLOMID, Sanofi Aventis), энкломифена цитрат (ANDROXAL, Repros Therapeutics), тамоксифена цитрат (NOLVADEX; AstraZeneca) и ралоксифена гидрохлорид (EVISTA).

[0122] Терапевтические композиции на основе NTP–пептидов могут содержать терапевтически эффективное количество NTP–пептида в смеси с фармацевтически приемлемым носителем. В некоторых альтернативных вариантах осуществления дополнительное активное средство можно вводить в той же композиции на основе NTP–пептида, и в других вариантах осуществления при этом композицию, содержащую NTP–пептид, вводят в виде инъекции, тогда как дополнительное активное средство составляют в лекарственный препарат для перорального введения (гель, капсула, таблетка, жидкость и т. д.). Материалом носителя может быть вода для инъекций, предпочтительно дополненная другими материалами, общепринятыми в растворах для введения млекопитающим. Обычно NTP–пептид для терапевтического применения будет вводиться в форме композиции, содержащей очищенный пептид в сочетании с одним или более физиологически приемлемыми носителями, наполнителями или растворителями. Нейтральный буферный солевой раствор или солевой раствор, смешанный с сывороточным альбумином, представляют собой иллюстративные соответствующие носители. Предпочтительно продукт составляют в виде лиофилизата с использованием соответствующих наполнителей (например, сахарозы). Другие стандартные носители, растворители и наполнители могут быть включены по желанию. Композиции согласно вариантам осуществления также могут содержать буферы, известные специалистам в данной области техники, с подходящим диапазоном значений pH, включая трис–буфер с pH приблизительно 7,0–8,5 или ацетатный буфер с pH приблизительно 4,0–5,5, который может дополнительно включать сорбитол или подходящую его замену.

[0123] Варианты осуществления также охватывают применение NTP–пептидов, конъюгированных или соединенных или связанных с белком или другой молекулой, для образования композиции, которая после расщепления в или вблизи сайта(сайтов) опухоли или других нежелательных клеток опухоль– или сайт–специфическим ферментом, или протеазой, или конъюгатом антитела, которые целенаправленно воздействуют на опухоль или другие нежелательные клетки, высвобождают пептид в или вблизи сайта(сайтов) опухоли или других нежелательных клеток.

[0124] Варианты осуществления также охватывают использование NTP–пептидов, конъюгированных или соединенных или связанных с белком или другой молекулой, для образования композиции, которая высвобождает пептид или некоторый биологически активный фрагмент пептида при воздействии на ткань, подлежащую лечению, света (как при способах лазерной терапии или другой фотодинамической или фотоактивированной терапии), других форм электромагнитного излучения, таких как инфракрасное излучение, ультрафиолетового излучения, рентгеновского или гамма–излучения, локализованного тепла, альфа– или бета–излучения, ультразвуковых излучений или других источников локализованной энергии.

[0125] Варианты осуществления также охватывают терапевтические композиции на основе NTP–пептидов, в которых используются дендримеры, фуллерены и другие синтетические молекулы, полимеры и макромолекулы, где пептид и/или его соответствующая молекула ДНК конъюгированы, присоединены или заключены в молекуле, полимере или макромолекуле, либо сами по себе, либо в сочетании с другими видами молекул, такими как опухолеспецифический маркер. Например, в патенте США № 5714166, Биологически активные и/или нацеленные дендримерные конъюгаты, представлен способ получения и применения, среди прочего, конъюгатов дендритных полимеров, состоящих из по меньшей мере одного дендримера с целевым основным компонентом(компонентами) и по меньшей мере одним биоактивным средством, конъюгированным с ним. Раскрытие патента США № 5714166 включено посредством ссылки в данный документ во всей своей полноте.

[0126] Варианты осуществления также охватывают способы лечения мужчины с помощью терапевтических композиций на основе NTP–пептидов и/или генов и сред–носителей для доставки лекарственных средств, таких как липидные эмульсии, мицеллярные полимеры, полимерные микросферы, электроактивные полимеры, гидрогели и липосомы, в комбинации с дополнительным активным средством.

[0127] Твердые лекарственные формы для перорального введения включают без ограничения капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых лекарственных формах дополнительное активное средство и/или NTP–пептид могут быть смешаны с по меньшей мере одним из следующего: (а) одним или более инертными наполнителями (или носителем), такими как цитрат натрия или дикальцийфосфат; (b) заполнителями или добавками, таким как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота; (c) связующими, такими как карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и аравийская камедь; (d) увлажнителями, такими как глицерин; (е) разрыхлителями, такими как агар–агар, карбонат кальция, картофельный или тапиоковый крахмал, альгиновая кислота, некоторые сложные силикаты и карбонат натрия; (f) замедлителями растворения, такими как парафин; (g) ускорителями абсорбции, такими как четвертичные аммониевые соединения; (h) смачивающими средствами, такими как ацетиловый спирт и глицеролмоностеарат; (i) адсорбентами, такими как каолин и бентонит; и (j) смазывающими веществами, такими как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия или их смеси. Для капсул, таблеток и пилюль лекарственные формы также могут содержать буферные средства.

[0128] Жидкие лекарственные формы для перорального введения включают фармацевтически приемлемые эмульсии, растворы, суспензии, сиропы и настои. Вдобавок к активным соединениям жидкие лекарственные формы могут содержать инертные разбавители, обычно используемые в данной области, такие как вода или другие растворители, солюбилизирующие средства и эмульгаторы. Примерами эмульгаторов являются этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3–бутиленгликоль, диметилформамид, масла, такие как хлопковое масло, арахисовое масло, масло из зародышей кукурузы, оливковое масло, касторовое масло и кунжутное масло, глицерин, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли, сложные эфиры жирных кислот с сорбитаном или смеси этих веществ и тому подобное.

[0129] Помимо таких инертных разбавителей, композиция может также содержать вспомогательные вещества, такие как смачивающие средства, эмульгирующие и суспендирующие средства, подсластители, ароматизаторы и отдушки.

[0130] Фактические уровни дозировки активных ингредиентов в композициях согласно вариантам осуществления могут варьировать для получения количества NTP–пептида и дополнительного активного средства, которое эффективно для получения необходимого терапевтического ответа для конкретной композиции и способа введения. Следовательно, выбранный уровень дозировки зависит от необходимого терапевтического эффекта, пути введения, необходимой продолжительности лечения и других факторов.

[0131] Для млекопитающих, включая людей, эффективные количества можно вводить, основываясь на площади поверхности тела. Взаимосвязь дозировок для животных различных размеров, видов и людей (в пересчете на мг/м² поверхности тела) описана в EJ Freireich et al., Cancer Chemother. Rep., 50 (4):219 (1966). Площадь поверхности тела может быть примерно определена исходя из роста и веса индивидуума (см., например, Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, NY pp. 537–538 (1970)).

[0132] Общая суточная доза NTP–пептида и необязательного дополнительного активного средства, вводимых в организм, может находиться в единичной или разделенной дозах. Единица дозирования композиции может содержать такое количество таких дольных единиц, которое можно использовать, для составления суточной дозы. Однако следует понимать, что конкретный уровень дозы для любого конкретного пациента будет зависеть от множества факторов, включая вес тела, общее состояние здоровья, пол, рацион, время и путь введения, эффективность вводимого лекарственного средства, скорость абсорбции. и экскреции, комбинацию с другими лекарственными средствами и тяжесть конкретного заболевания, лечение которого осуществляют. Предпочтительно, чтобы композицию вводили только один раз в виде инъекции или инфузии, или в другом предпочтительном варианте осуществления композицию вводят дважды. В этом варианте осуществления период времени между введением композиции может варьироваться в любое время от 2 месяцев до 10 лет, или от 8 месяцев до 4 лет, или от приблизительно 1 года до приблизительно 2 лет.

[0133] Способ введения композиции на основе NTP–пептида в соответствии с вариантами осуществления предусматривает без ограничения введение соединений внутримышечно, перорально, внутривенно, внутрибрюшинно, интрацеребрально (интрапаренхимально), интрацеребровентрикулярно, внутрь опухоли, внутриочагово, внутрикожно, интратекально, интраназально, интраокулярно, интраартериально, местно, трансдермально, с помощью аэрозоля, инфузии, болюсной инъекции, имплантационного устройства, устройство замедленного высвобождения и т. д.

[0134] Другой способ введения NTP–пептида в соответствии с вариантами осуществления представляет собой трансдермальный или чрескожный путь. Дополнительное активное средство можно применять вместе с NTP–пептидом или можно вводить отдельно, как обсуждалось выше, или можно вообще не вводить. Одним примером такого варианта осуществления является использование пластыря. В частности, пластырь можно получать с тонкодисперсной суспензией пептида, например, в диметилсульфоксиде (DMSO),или смеси DMSO с хлопковым маслом и приводить в контакте с кожей млекопитающих, несущих опухоль, далеко от места расположения опухоли в кожаном мешке. Другие среды или их смеси с другими растворителями и твердыми носителями будут работать так же. Пластырь может содержать пептидное соединение в форме раствора или суспензии. Затем пластырь можно наносить на кожу пациента, например, путем введения его в кожный мешок пациента, образованный путем складывания и удерживания кожи вместе с помощью швов, зажимов или других удерживающих устройств. Этот мешок следует использовать таким образом, чтобы обеспечить постоянный контакт с кожей без вмешательства млекопитающего. Помимо использования кожного мешка, можно использовать любое устройство, которое обеспечивает надежное размещение пластыря в контакте с кожей. Например, липкопластырная повязка может быть использована для удержания пластыря на коже.

[0135] NTP–пептиды необязательно в комбинации с дополнительным активным средством, могут вводиться в составе или препарате с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые полимерные матрицы в форме изделий определенной формы, например, пленок или микрокапсул. Матрицы с замедленным высвобождением включают сложные полиэфиры, гидрогели, полилактиды (патент США № 3773919, EP 58481), сополимеры L–глутаминовой кислоты и гамма–этил–L–глутамата (Sidman et al., Biopolymers, 1983, 22(1): 547–556), поли(2–гидроксиэтилметакрилат) (Langer et al., J. Biomed. Mater. Res., 1981, 15: 167–277 and Langer, Chem. Tech., 1982, 12: 98–105), этиленвинилацетат (Langer et al., выше) или поли–D(–)–3–гидроксимасляную кислоту (EP 133988). Композиции с замедленным высвобождением также могут включать липосомы, которые могут быть получены любым из нескольких способов, известных из уровня техники (например, Eppstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985, 82(11): 3688–3692; EP 36676; EP 88046 и EP 143949).

[0136] Другим способом введения NTP–пептида согласно вариантам осуществления является прямая или непрямая инфузия NTP–пептида в ткань, подлежащую лечению. Одним примером такого варианта осуществления является прямая инъекция NTP–пептида в ткань, подлежащую лечению. Лечение может состоять из одной инъекции, нескольких инъекций за один раз или ряда инъекций в течение периода из нескольких часов, дней, или месяцев, или лет с улучшением сексуальной функции, как измерено с помощью сообщаемых пациентом ответов или других способов отслеживания улучшения сексуальной функции. Это можно сделать, например, путем интервью или с помощью опросников, среди которых существует множество стандартизированных опросников, таких как: (1) Краткий опросник для оценки сексуальной функции у мужчин («BMFSI») (O’Leary, et al., Urology, 1995, 46: 697–706); (2) Международный индекс эректильной функции («IIEF») (Rosen, et al., Urology, 1997, 49: 822–830); (3) Опросник для оценки сексуального здоровья мужчин («MSHQ») (Rosen, et al., Urology, 2004, 64: 777–782); (4) Краткая форма опросника Международного общества по проблемам недержания мочи («ICS–male SF») (Donovan, et al., BJUI, 1996, 77: 554–562); и другие. Инъекция в ткань, подлежащую лечению, может осуществляться с помощью устройства, вставленного в отверстие, такое как нос, рот, ухо, влагалище, прямая кишка или уретра, или через разрез, чтобы достичь ткани in vivo, и может выполняться в сочетании с системой визуализации или оптической системой, такой как ультразвуковой или оптоволоконный эндоскоп, чтобы определить подходящее место для инъекции(инъекций). Другим примером такого варианта осуществления является использование устройства, которое может обеспечить постоянную инфузию NTP–пептида в ткань с течением времени.

[0137] Другим способом введения NTP–пептида согласно вариантам осуществления является имплантация устройства в ткань, подлежащую лечению. В данном варианте осуществления дополнительное активное средство, как правило, будут вводить посредством пути введения, отличающегося от NTP–пептида. Одним примером такого варианта осуществления является имплантация капсулы–имплантата, содержащей пептид, в ткань, подлежащую лечению, и введение дополнительного активного средства посредством перорального введения. Капсула–имплантат высвобождает терапевтическую дозу NTP–пептида в ткань с течением времени. В качестве альтернативы или дополнения, композицию можно вводить местно посредством имплантации в пораженный участок мембраны, губки или другого подходящего материала, на котором был абсорбирован NTP–пептид. Если применяют имплантируемое устройство, то устройство можно имплантировать в любую подходящую ткань или орган, и доставка пептида может осуществляться непосредственно с помощью устройства посредством болюса, или посредством непрерывного введения, или посредством катетера с применением непрерывной инфузии.

[0138] Вариант осуществления включает способ улучшения сексуальной функции у мужчины с BPH, который предусматривает введение мужчине (в том числе мужчинам, подверженным ухудшению или прогрессированию симптомов BPH), по меньшей мере однократно, терапевтически эффективного количества NTP–пептида, в частности, выделенного пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO. 66 (Ile–Asp–Gln–Gln–Val–Leu–Ser–Arg–Ile–Lys–Leu–Glu–Ile–Lys–Arg–Cys–Leu). Другой вариант осуществления включает способ улучшения сексуальной функции у мужчины с BPH, который предусматривает введение мужчине (в том числе мужчинам, подверженным ухудшению или прогрессированию симптомов BPH) терапевтически эффективного количества NTP–пептида, в частности, выделенного пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO. 66 (Ile–Asp–Gln–Gln–Val–Leu–Ser–Arg–Ile–Lys–Leu–Glu–Ile–Lys–Arg–Cys–Leu), сопровождающееся последующим введением одного или более активных ингредиентов. Другой вариант осуществления включает способ улучшения сексуальной функции у мужчины с BPH посредством лечения мужчины, не страдающего BPH, но который подвержен BPH, и в других вариантах осуществления мужчина страдает одним или более состояниями, выбранными из группы, состоящей из меатального стеноза, парафимоза, сужения полового члена, фимоза, рака предстательной железы, опухолевидного образования в малом тазу, выбранного из гинекологического злокачественного новообразования, аневризматической дилатации, камней в мочевом пузыре, новообразования в мочевом пузыре, фекаломы, желудочно–кишечных или забрюшинных злокачественных образований, стриктур уретры, камней, отека, баланита, абсцесса предстательной железы, простатита, бильгарциоза, цистита, эхинококкоза, синдрома Гийена–Барре, вируса простого герпеса; болезни Лайма, периуретрального абсцесса, поперечного миелита, туберкулезного цистита, уретрита, вируса ветряной оспы, травмы полового члена, перелома полового члена, разрыва полового члена и синдрома Фаулера.

[0139] В определенных вариантах осуществления выделенный пептид, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO. 66, вводят отдельно или в комбинации с по меньшей мере одним или более активных средств, обсуждаемых выше, дополнительно в комбинации с по меньшей мере одним соединением, выбранным из группы, состоящей из (1) ингибитора 5α–редуктазы и/или антиэстрогена, (2) ингибитора 5α–редуктазы и/или ингибитора ароматазы, (3) ингибитора 5α–редуктазы и/или ингибитора 17β–HSD, (4) ингибитора 5α–редуктазы, антиэстрогена и ингибитора ароматазы, (5) ингибитора 5α–редуктазы, антиэстрогена и ингибитора 17β–HSD, (6) ингибитора 5α–редуктазы, ингибитора ароматазы, антиэстрогена и ингибитора 17β–HSD, (7) ингибитора 5α–редуктазы, антиандрогена и антиэстрогена, (8) ингибитора 5α–редуктазы, антиандрогена и ингибитора ароматазы, (9) ингибитора 5α–редуктазы, антиандрогена и ингибитора 17β–HSD, (10) ингибитора 5α–редуктазы, антиандрогена, антиэстрогена и ингибитора ароматазы, (11) ингибитора 5α–редуктазы, антиандрогена, ингибитора ароматазы и ингибитора 17β–HSD, (12) ингибитора 5α–редуктазы, антиандрогена, ингибитора ароматазы, антиэстрогена и ингибитора 17β–HSD, (13) ингибитора 17β–HSD и антиэстрогена, (14) ингибитора 17β–HSD и ингибитора ароматазы, (15) ингибитора 17β–HSD, ингибитора ароматазы и антиэстрогена, (16) ингибитора 17β–HSD, антиандрогена и антиэстрогена, (17) ингибитора 17β–HSD, антиандрогена и ингибитора ароматазы, (18) ингибитора 17β–HSD, антиандрогена, антиэстрогена и ингибитора ароматазы, (19) антиэстрогена и ингибитора ароматазы и (20) антиэстрогена, ингибитора ароматазы и антиандрогена, (21) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 5α–редуктазы и антиэстрогена, (22) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 5α–редуктазы и ингибитора ароматазы, (23) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 5α–редуктазы и ингибитора 17β–HSD, (24) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 5α–редуктазы, антиэстрогена и ингибитора ароматазы, (25) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 5α–редуктазы, антиэстрогена и ингибитора 17β–HSD, (26) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 5α–редуктазы, ингибитора ароматазы, антиэстрогена и ингибитора 17β–HSD, (27) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 5α–редуктазы, антиандрогена и антиэстрогена, (28) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 5α–редуктазы, антиандрогена и ингибитора ароматазы, (29) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 5α–редуктазы, антиандрогена и ингибитора 17β–HSD, (30) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 5α–редуктазы, антиандрогена, антиэстрогена и ингибитора ароматазы, (31) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 5α–редуктазы, антиандрогена, ингибитора ароматазы и ингибитора 17β–HSD, (32) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 5α–редуктазы, антиандрогена, ингибитора ароматазы, антиэстрогена и ингибитора 17β–HSD, (33) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 17β–HSD и антиэстрогена, (34) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 17β–HSD и ингибитора ароматазы, (35) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 17β–HSD, ингибитора ароматазы и антиэстрогена, (36) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 17β–HSD, антиандрогена и антиэстрогена, (37) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 17β–HSD, антиандрогена и ингибитора ароматазы, (38) агониста или антагониста LHRH, ингибитора 17β–HSD, антиандрогена, антиэстрогена и ингибитора ароматазы, (39) агониста или антагониста LHRH, антиэстрогена и ингибитора ароматазы и (40) агониста или антагониста LHRH, антиэстрогена, ингибитора ароматазы и антиандрогена.

[0140] В других вариантах осуществления выделенный пептид, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO. 66, вводят в комбинации с по меньшей мере одним активным средством, выбранным из группы, состоящей из (i) ингибиторов фосфодиэстеразы типа 5 (PDE5), включая без ограничения силденафила цитрат (VIAGRA; Pfizer), варденафила гидрохлорид (LEVITRA, GlaxoSmithKline) и тадалафил (CIALIS, Eli Lilly); (ii) экзогенного тестостерона (например, в форме сублингвальной или буккальной таблетки, субдермального имплантата, трансдермального кожного пластыря или геля или внутримышечной инъекции); (iii) селективных модуляторов эстрогенового рецептора (SERM), включая без ограничения кломифена цитрат (CLOMID, Sanofi Aventis), энкломифена цитрат (ANDROXAL, Repros Therapeutics), тамоксифена цитрат (NOLVADEX; AstraZeneca) и ралоксифена гидрохлорид (EVISTA).

[0141] Следующие примеры предоставлены для иллюстрации вариантов осуществления настоящего изобретения. Однако следует понимать, что варианты осуществления не должны быть ограничены конкретными условиями или деталями, описанными в этих примерах. Во всем описании любые и все ссылки на общедоступный документ, включая патент США, специально включены посредством ссылки. В частности, варианты осуществления прямо включают посредством ссылки примеры, содержащиеся в находящейся на рассмотрении заявке на патент США № 14/808731, поданной 24 июля 2015 г., под названием СПОСОБЫ СНИЖЕНИЯ ПОТРЕБНОСТИ В ХИРУРГИЧЕСКОМ ВМЕШАТЕЛЬСТВЕ У ПАЦИЕНТОВ, СТРАДАЮЩИХ ДОБРОКАЧЕСТВЕННОЙ ГИПЕРПЛАЗИЕЙ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ; заявке на патент США № 14/606683, поданной 27 января 2015 года, под названием СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ НАРУШЕНИЙ, ТРЕБУЮЩИХ РАЗРУШЕНИЯ ИЛИ УДАЛЕНИЯ КЛЕТОК, заявке на патент США № 14/738551, поданной 12 июня 2015 года, под названием КОМБИНИРОВАННЫЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НАРУШЕНИЙ, ТРЕБУЮЩИХ УДАЛЕНИЯ ИЛИ РАЗРУШЕНИЯ НЕЖЕЛАТЕЛЬНЫХ КЛЕТОЧНЫХ ПРОЛИФЕРАЦИЙ (теперь US 2016/0361380), заявках на патент США №№ 2007/0237780 (в настоящее время приостановлена); 2003/0053990 (теперь патент США № 7172893); 2003/0096350 (теперь патент США № 6924266); 2003/0096756 (теперь патент США № 7192929); 2003/0109437 (теперь патент США № 7241738); 2003/0166569 (теперь патент США № 7317077); 2005/0032704 (теперь патент США № 7408021) и 2015/0148303 (теперь патент США № 9243035), в каждом из которых показано, что определенные пептиды, указанные в них, являются эффективными средствами, вызывающими гибель клеток in vivo в нормальной мышечной ткани грызунов, подкожной соединительной ткани, дерме и других тканях.

Пример 1

[0142] Триста семьдесят (370) пациентов с BPH и без какого–либо предшествующего традиционного одобренного медицинского или хирургического лечения в анамнезе («не подвергавшихся лечению») в отношении BPH получали инъекцию в предстательную железу либо (a) NX–1207 (2,5 мг) в фосфатно–солевом буфере, pH 7,2 («PBS») (n=213), либо (b) только PBS (n=157), в двойных слепых условиях с помощью уролога в кабинете, оборудованном для контроля ультразвуком. За этими пациентами наблюдали в течение 12 месяцев после лечения, и их прогресс контролировали с помощью урологических исследований. Перед осуществлением их лечения сексуальную функцию каждого пациента оценивали по анамнезу, и каждый пациент заполнял Опросник для оценки сексуальной функции («SFQ»), в котором степень, в которой пациент воспринимал какие–либо проблемы, которые у него имелись, оценивалась по шкале от 0 до 12 баллов, причем рассматривалось: 1. отсутствие полового влечения, 2. способность достигать и сохранять эрекцию и 3. проблемы с эякуляцией (шкала оценки проблем из Краткого опросника для оценки сексуальной функции у мужчин). Более высокая оценка в баллах указывает на улучшение с лучшей самооценкой сексуальной функции и меньшей степенью сексуальной проблемы; Более низкая оценка в баллах указывает на ухудшение с большей степенью сексуальной проблемы. Многие одобренные лекарственные препараты и средства лечения BPH связаны с более низкими баллами. Затем SFQ повторно вводили через 12 месяцев после лечения. Разницу относительно исходного балла в SFQ сравнивали у пациентов NX–1207 при сравнении с результатами у пациентов, получавших только PBS. В течение 12 месяцев, относящихся к NX–1207, не наблюдалось значительной частоты встречаемости неблагоприятных явлений сексуального характера. Неожиданно, кроме отсутствия значимых неблагоприятных явлений сексуального характера также наблюдалось значительное улучшение в отношении SFQ при сравнении с исходным уровнем у получавших NX–1207 пациентов, которое не было обнаружено у пациентов, получавших плацебо. Результаты данного исследования показаны в таблице 1 ниже.

Таблица 1

(*) p < 0,0001 относительно исходного уровня

[0143] На основании результатов этих исследований введение NTP–пептидов по настоящему изобретению применимо для улучшения сексуальной функции в популяции пациентов с BPH без какого–либо предшествующего традиционного одобренного медицинского или хирургического лечения в отношении BPH в анамнезе. По сравнению с плацебо одна обработка с помощью NTP–пептида способна обеспечивать значительное улучшение сексуальной функции, как измерено с помощью Опросника для оценки сексуальной функции, на величину приблизительно 65%.

Пример 2

[0144] Сто двадцать три (123) пациента с BPH со значительными проблемами сексуального характера и без какого–либо предшествующего традиционного одобренного медицинского или хирургического лечения в анамнезе («не подвергавшиеся лечению») в отношении BPH получали инъекцию в предстательную железу либо (a) NX–1207 (2,5 мг) в фосфатно–солевом буфере, pH 7,2 («PBS») (n=75), либо (b) только PBS (n=48), в двойных слепых условиях с помощью уролога в кабинете, оборудованном для контроля ультразвуком. За этими пациентами наблюдали в течение 12 месяцев после лечения, и их прогресс контролировали с помощью урологических исследований. Перед осуществлением их лечения сексуальную функцию каждого пациента оценивали по анамнезу, и каждый пациент заполнял Опросник для оценки сексуальной функции («SFQ»), в котором степень, в которой пациент воспринимал какие–либо проблемы, которые у него имелись, оценивалась по шкале от 0 до 12 баллов, причем рассматривалось: 1. отсутствие полового влечения, 2. способность достигать и сохранять эрекцию и 3. проблемы с эякуляцией (шкала оценки проблем из Краткого опросника для оценки сексуальной функции у мужчин). Более высокая оценка в баллах указывает на улучшение с лучшей самооценкой сексуальной функции и меньшей степенью сексуальной проблемы; более низкая оценка в баллах указывает на ухудшение с большей степенью сексуальной проблемы. Многие одобренные лекарственные препараты и методы лечения BPH связаны с более низкими показателями. Все 123 пациента с BPH в этой группе имели исходную оценку в баллах SFQ перед лечением <=3 балла, что указывает на значительные проблемы сексуального характера. Затем SFQ повторно вводили через 12 месяцев после лечения. Доли пациентов с SFQ <=3 балла на исходном уровне перед лечением и через один год после лечения сравнивали у пациентов с NX–1207 относительно результатов у пациентов, получавших только PBS. В течение 12 месяцев, относящихся к NX–1207, не наблюдалось значительной частоты встречаемости неблагоприятных явлений сексуального характера. Неожиданно, кроме отсутствия неблагоприятных явлений сексуального характера, также наблюдалось значительное уменьшение доли пациентов со значительными проблемами сексуального характера относительно исходного уровня у пациентов, получавших NX–1207, тогда как у пациентов, получавших плацебо, не наблюдалось значительного изменения в этой доле относительно исходного уровня. Результаты данного исследования показаны в таблице 2 ниже.

Таблица 2

(1) p < 0,0001 относительно исходного уровня; (2) p < 0,005 относительно плацебо

[0145] На основании результатов этого исследования введение NTP–пептидов по настоящему изобретению применимо для улучшения сексуальной функции в популяции пациентов с BPH со значительными проблемами сексуального характера без какого–либо предшествующего традиционного одобренного медицинского или хирургического лечения в отношении BPH в анамнезе. По сравнению с плацебо одна обработка с помощью NTP–пептида способна обеспечивать значительное улучшение сексуальной функции, как измерено с помощью Опросника для оценки сексуальной функции, у приблизительно 25,3% пациентов по сравнению с 4,1% пациентов, получающих только плацебо, таким образом приводя к увеличению числа пациентов, демонстрирующих улучшение сексуальной функции по сравнению с плацебо, составляющему приблизительно 84%.

Пример 3

[0146] Сто пятьдесят шесть (156) пациентов с BPH без какого–либо предшествующего традиционного одобренного медицинского или хирургического лечения в анамнезе («не подвергавшихся лечению») в отношении BPH получали инъекцию в предстательную железу либо (a) NX–1207 (2,5 мг) в фосфатно–солевом буфере, pH 7,2 («PBS») (n=88), либо (b) только PBS (n=68), в двойных слепых условиях с помощью уролога в кабинете, оборудованном для контроля ультразвуком. За всеми пациентами наблюдали в течение периода 12,6–51,1 месяца, а затем осуществляли лечение с помощью второй инъекции NX–1207 (2,5 мг) в PBS в открытом режиме. Перед осуществлением их лечения сексуальную функцию каждого пациента оценивали по анамнезу, и каждый пациент заполнял Опросник для оценки сексуальной функции («SFQ»), в котором степень, в которой пациент воспринимал какие–либо проблемы, которые у него имелись, оценивалась по шкале от 0 до 12 баллов, причем рассматривалось: 1. отсутствие полового влечения, 2. способность достигать и сохранять эрекцию и 3. проблемы с эякуляцией (шкала оценки проблем из Краткого опросника для оценки сексуальной функции у мужчин). Более высокая оценка в баллах указывает на улучшение с лучшей самооценкой сексуальной функции и меньшей степенью сексуальной проблемы; более низкая оценка в баллах указывает на ухудшение с большей степенью сексуальной проблемы. Многие одобренные лекарственные препараты и средства лечения BPH связаны с более низкими баллами. Затем SFQ повторно вводили через 6 месяцев после второго средства лечения. Разницу относительно исходного уровня в SFQ сравнивали у пациентов NX–1207, получавших 2 инъекции NX–1207, при сравнении с результатами у пациентов, получавших только PBS с последующей 1 инъекцией NX–1207. Значительной частоты встречаемости неблагоприятных явлений сексуального характера, относящихся к NX–1207, не наблюдалось. Неожиданно, кроме отсутствия неблагоприятных явлений сексуального характера, также наблюдалось значительное улучшение в отношении SFQ при сравнении с исходным уровнем у получавших NX1207 пациентов, которые не подвергались предварительному лечению BPH, которое не было обнаружено у пациентов, первоначально получавших плацебо (PBS). Результаты данного исследования показаны в таблице 3 ниже.

Таблица 3

(1) p < 0,0001 относительно исходного уровня; (2) p < 0,02 относительно группы PBS.

[0147] На основании результатов этого исследования введение NTP–пептидов по настоящему изобретению применимо для улучшения сексуальной функции в популяции пациентов с BPH без какого–либо предшествующего традиционного одобренного медицинского или хирургического лечения в отношении BPH в анамнезе. По сравнению с плацебо с последующей одной обработкой с помощью NTP–пептида две обработки с помощью NTP–пептида способны обеспечивать значительное улучшение сексуальной функции, как измерено с помощью Опросника для оценки сексуальной функции, на величину приблизительно 82%.

Пример 4

[0148] Сто пятьдесят (150) пациентов с BPH без какого–либо предшествующего традиционного одобренного медицинского или хирургического лечения в анамнезе («не подвергавшихся лечению») в отношении BPH получали инъекцию в предстательную железу либо (a) NX–1207 (2,5 мг) в фосфатно–солевом буфере, pH 7,2 («PBS») (n=83), либо (b) только PBS (n=67), в двойных слепых условиях с помощью уролога в кабинете, оборудованном для контроля ультразвуком. За всеми пациентами наблюдали в течение периода 12,6–51,1 месяца, а затем осуществляли лечение с помощью второй инъекции NX–1207 (2,5 мг) в PBS в открытом режиме. Перед осуществлением их лечения сексуальную функцию каждого пациента оценивали по анамнезу, и каждый пациент заполнял Опросник для оценки сексуальной функции («SFQ»), в котором степень, в которой пациент воспринимал какие–либо проблемы, которые у него имелись, оценивалась по шкале от 0 до 12 баллов, причем рассматривалось: 1. отсутствие полового влечения, 2. способность достигать и сохранять эрекцию и 3. проблемы с эякуляцией (шкала оценки проблем из Краткого опросника для оценки сексуальной функции у мужчин). Более высокая оценка в баллах указывает на улучшение с лучшей самооценкой сексуальной функции и меньшей степенью сексуальной проблемы; более низкая оценка в баллах указывает на ухудшение с большей степенью сексуальной проблемы. Многие одобренные лекарственные препараты и средства лечения BPH связаны с более низкими баллами. Затем SFQ повторно вводили через 6 месяцев после второго средства лечения. Долю пациентов, отвечающих отсутствием ухудшения или улучшением в SFQ, сравнивали у пациентов NX–1207, которые получали 2 инъекции NX–1207, относительно результатов у пациентов, которые получали только PBS с последующей 1 инъекцией NX–1207. Значительной частоты встречаемости неблагоприятных явлений сексуального характера, относящихся к NX–1207, не наблюдалось. Неожиданно, кроме отсутствия неблагоприятных явлений сексуального характера, также наблюдалась значительная разница в доле пациентов без ухудшения или с улучшением в отношении SFQ при сравнении с исходным уровнем у получавших NX–1207 пациентов, которые не подвергались предварительному лечению BPH, которая не было обнаружена у пациентов, первоначально получавших плацебо (PBS), которые не подвергались предварительному лечению BPH. Результаты данного исследования показаны в таблице 4 ниже.

Таблица 4

(*) p < 0,02 относительно группы PBS

[0149] На основании результатов этого исследования введение NTP–пептидов по настоящему изобретению применимо для улучшения сексуальной функции в популяции пациентов с BPH без какого–либо предшествующего традиционного одобренного медицинского или хирургического лечения в отношении BPH в анамнезе. При сравнении с плацебо с последующей одной обработкой с помощью пептида NTP, две обработки с помощью пептида NTP способны обеспечивать отсутствие ухудшения или улучшение сексуальной функции, как измерено с помощью Опросника для сексуальной функции, у приблизительно 84% пациентов по сравнению с 67% в случае пациентов, получающих только плацебо, таким образом приводя к увеличению числа пациентов, демонстрирующих отсутствие ухудшения или улучшение сексуальной функции по сравнению с плацебо, составляющему приблизительно 20%.

Пример 5

[0150] Сто пятьдесят (150) пациентов с BPH без какого–либо предшествующего традиционного одобренного медицинского или хирургического лечения в анамнезе («не подвергавшихся лечению») в отношении BPH получали инъекцию в предстательную железу либо (a) (2,5 мг) NX–1207 (2,5 мг) в фосфатно–солевом буфере, pH 7,2 («PBS») (n=83), либо (b) только PBS (n=67), в двойных слепых условиях с помощью уролога в кабинете, оборудованном для контроля ультразвуком. За этими пациентами наблюдали в течение 12,6–51,1 месяца после лечения, и их прогресс контролировали с помощью урологических исследований. Перед осуществлением их лечения сексуальную функцию каждого пациента оценивали по анамнезу, и каждый пациент заполнял Опросник для оценки сексуальной функции («SFQ»), в котором степень, в которой пациент воспринимал какие–либо проблемы, которые у него имелись, оценивалась по шкале от 0 до 12 баллов, причем рассматривалось: 1. отсутствие полового влечения, 2. способность достигать и сохранять эрекцию и 3. проблемы с эякуляцией (шкала оценки проблем из Краткого опросника для оценки сексуальной функции у мужчин). Более высокая оценка в баллах указывает на улучшение с лучшей самооценкой сексуальной функции и меньшей степенью сексуальной проблемы; более низкая оценка в баллах указывает на ухудшение с большей степенью сексуальной проблемы. Многие одобренные лекарственные препараты и средства лечения BPH связаны с более низкими баллами. Затем SFQ повторно вводили через 12,6–51,1 месяца после лечения. В течение 12,6–51,1 месяца, относящихся к NX–1207, не наблюдалось значительной частоты встречаемости неблагоприятных явлений сексуального характера. Неожиданно, помимо отсутствия неблагоприятных явлений сексуального характера событий также наблюдалась долгосрочная значимая разница в среднем значении изменения относительно исходного уровня у пациентов, получавших NX–1207, по сравнению с пациентами, получавшими плацебо. Результаты данного исследования показаны в таблице 5 ниже.

Таблица 5

(*) p < 0,004

[0151]На основании результатов этого исследования введение NTP–пептидов по настоящему изобретению применимо для улучшения сексуальной функции в популяции пациентов с BPH без какого–либо предшествующего традиционного одобренного медицинского или хирургического лечения в отношении BPH в анамнезе. По сравнению с плацебо, одна обработка с помощью NTP–пептида способна обеспечивать значительное улучшение сексуальной функции, как измерено с помощью Опросника для оценки сексуальной функции, на величину, составляющую приблизительно 230% (пациенты, получавшие NTP–пептид, демонстрировали существенное улучшение, тогда как пациенты, получавшие контроль, демонстрировали значительное ухудшение).

Пример 6

[0152] Триста двадцать четыре (324) пациента с BPH получали инъекцию в предстательную железу либо (a) NX–1207 (2,5 мг) в фосфатно–солевом буфере, pH 7,2 («PBS») (n=189), либо (b) только PBS (n=135), в двойных слепых условиях с помощью уролога в кабинете, оборудованном для контроля ультразвуком. За этими пациентами наблюдали в течение 12,6–51,1 месяца после лечения, и их прогресс контролировали с помощью урологических исследований. Перед осуществлением их лечения сексуальную функцию каждого пациента оценивали по анамнезу, и каждый пациент заполнял Опросник для оценки сексуальной функции («SFQ»), в котором степень, в которой пациент воспринимал какие–либо проблемы, которые у него имелись, оценивалась по шкале от 0 до 12 баллов, причем рассматривалось: 1. отсутствие полового влечения, 2. способность достигать и сохранять эрекцию и 3. проблемы с эякуляцией (шкала оценки проблем из Краткого опросника для оценки сексуальной функции у мужчин). Более высокая оценка в баллах указывает на улучшение с лучшей самооценкой сексуальной функции и меньшей степенью сексуальной проблемы; более низкая оценка в баллах указывает на ухудшение с большей степенью сексуальной проблемы. Многие одобренные лекарственные препараты и средства лечения BPH связаны с более низкими баллами. Восемьдесят девять (89) пациента с BPH в этой группе имели исходную оценку в баллах SFQ перед лечением <=3 балла, что указывает на значительные проблемы сексуального характера. Затем SFQ повторно вводили через 12,6–51,1 месяца после лечения. Доли пациентов с SFQ <=3 балла на исходном уровне перед лечением и через 12,6–51,1 месяца после лечения сравнивали у пациентов с NX–1207 относительно результатов у пациентов, получавших только PBS. В течение 12,6–51,1 месяца, относящихся к NX–1207, не наблюдалось значительной частоты встречаемости неблагоприятных явлений сексуального характера. Неожиданно, кроме отсутствия неблагоприятных явлений сексуального характера, также наблюдалось значительное уменьшение доли пациентов со значительными проблемами сексуального характера относительно исходного уровня у пациентов, получавших NX–1207, ранее не подвергавшихся лечению BPH, по сравнению с изменением доли у пациентов, получавших плацебо. Результаты данного исследования показаны в таблице 6 ниже.

Таблица 6

(*) p < 0,05 относительно плацебо

[0153]На основании результатов этого исследования введение NTP–пептидов по настоящему изобретению применимо для улучшения сексуальной функции в популяции пациентов с BPH без какого–либо предшествующего традиционного одобренного медицинского или хирургического лечения в отношении BPH в анамнезе. По сравнению с плацебо, одна обработка с помощью NTP–пептида способна обеспечивать улучшение сексуальной функции, как измерено с помощью Опросника для оценки сексуальной функции, у приблизительно 30% пациентов по сравнению с 82% уменьшением у пациентов, получающих только плацебо, таким образом приводя к увеличению процентной доли пациентов, у которых наблюдалось отсутствие ухудшения или улучшение сексуальной функции, по сравнению с плацебо на приблизительно 373% (пациенты, получавшие NTP–пептид, демонстрировали значительное улучшение, в то время как пациенты, получавшие контроль, демонстрировали значительное ухудшение).

Пример 7

[0154] Триста двадцать четыре (324) пациента с BPH получали инъекцию в предстательную железу либо (a) NX–1207 (2,5 мг) в фосфатно–солевом буфере, pH 7,2 («PBS») (n=189), либо (b) только PBS (n=135), в двойных слепых условиях с помощью уролога в кабинете, оборудованном для контроля ультразвуком. За этими пациентами наблюдали в течение 12,6–51,1 месяца после лечения, и их прогресс контролировали с помощью урологических исследований. Перед осуществлением их лечения сексуальную функцию каждого пациента оценивали по анамнезу, и каждый пациент заполнял Опросник для оценки сексуальной функции («SFQ»), в котором степень, в которой пациент воспринимал какие–либо проблемы, которые у него имелись, оценивалась по шкале от 0 до 12 баллов, причем рассматривалось: 1. отсутствие полового влечения, 2. способность достигать и сохранять эрекцию и 3. проблемы с эякуляцией (шкала оценки проблем из Краткого опросника для оценки сексуальной функции у мужчин). Более высокая оценка в баллах указывает на улучшение с лучшей самооценкой сексуальной функции и меньшей степенью сексуальной проблемы; более низкая оценка в баллах указывает на ухудшение с большей степенью сексуальной проблемы. Многие одобренные лекарственные препараты и средства лечения BPH связаны с более низкими баллами. Восемьдесят девять (89) пациента с BPH в этой группе имели исходную оценку в баллах SFQ перед лечением <=3 балла, что указывает на значительные проблемы сексуального характера. Затем SFQ повторно вводили через 12,6–51,1 месяца после лечения. Доли пациентов с SFQ <=3 балла на исходном уровне перед лечением и через 12,6–51,1 месяца после лечения сравнивали у пациентов с NX–1207 относительно результатов у пациентов, получавших только PBS. В течение 12,6–51,1 месяца, относящихся к NX–1207, не наблюдалось значительной частоты встречаемости неблагоприятных явлений сексуального характера. Неожиданно, кроме отсутствия неблагоприятных явлений сексуального характера, также наблюдалось значительное уменьшение доли пациентов со значительными проблемами сексуального характера относительно исходного уровня у пациентов, получавших NX–1207, ранее не подвергавшихся лечению BPH, по сравнению с изменением доли у ранее подвергавшихся лечению пациентов, получавших NX–1207. Результаты данного исследования показаны в таблице 7 ниже.

Таблица 7

*p < 0,001 относительно ранее подвергавшихся лечению BPH пациентов, которым вводили NX–1207

[0155]На основании результатов этого исследования введение NTP–пептидов по настоящему изобретению применимо для улучшения сексуальной функции в популяции пациентов с BPH без какого–либо предшествующего традиционного одобренного медицинского или хирургического лечения в отношении BPH в анамнезе. Одна обработка с помощью NTP–пептида способна обеспечивать значительное улучшение сексуальной функции, как измерено с помощью Опросника для оценки сексуальной функции, у приблизительно 30% пациентов в этой подгруппе по сравнению с 9,1% снижением сексуальной функции, как измерено с помощью SFQ, у числа пациентов, которые ранее подвергались лечению BCT и которые также получали одну обработку с помощью NTP–пептида. Таким образом, эти результаты показывают, что применение NTP–пептидов улучшает сексуальную функцию у ранее не подвергавшихся лечению пациентов намного лучше, чем у пациентов, которых ранее лечили в отношении BPH с применением традиционных средств терапии. Действительно, применение NTP–пептидов у не подвергавшихся лечению пациентов приводило к 30% улучшению, в то время как применение NTP–пептидов у пациентов, которые ранее подвергались лечению в отношении BCI, приводило к 9,1% снижению сексуальной функции, что приводило к улучшению в отношении лечения не подвергавшихся лечению пациентов на величину, составляющую приблизительно 130%, по сравнению с пациентами, которые ранее получили лечение в отношении BPH.

Реферат

Настоящее изобретение относится к области медицины, а именно к способу улучшения сексуальной функции у мужчины с доброкачественной гиперплазией предстательной железы (BPH) и сексуальной дисфункцией, включающему введение мужчине терапевтически эффективного количества пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO. 66 (Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu), где способ обеспечивает улучшение сексуальной функции, как определяется c помощью: сравнения баллов согласно стандартизированной анкете, выбранной из группы, состоящей из Краткого опросника для оценки сексуальной функции у мужчин, Международного индекса эректильной функции, Опросника для оценки сексуального здоровья мужчин и Краткой формы опросника Международного общества по проблемам недержания мочи. Настоящее изобретение обеспечивает создание новых и эффективных средств лечения для улучшения сексуальной функции у мужчин с доброкачественной гиперплазией предстательной железы (BPH). 13 з.п. ф-лы, 10 табл., 7 пр.

Формула