Фармацевтическая композиция и способ лечения избыточного веса или ожирения, способ улучшения качества туши домашнего животного - RU2109511C1

Чертежи

Показать все 9 чертежа(ей)

Описание

Изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей прямой или косвенный β-адренэргический агонист, например эфедрин, и ксантин, например кофеин, к применению ее для лечения от избыточного веса или ожирения, а также для улучшения качества мяса домашних животных при избыточном содержании в нем жира.

Ожирение является болезнью, распространенной, в частности, в промышленных развитых странах. Ожирение может быть охарактеризовано как избыточное накопление жира в теле. Такое чрезмерное накопление жира может явиться следствием превышения поглощения энергии над ее расходом, причиной которого является или избыточное поглощение энергии, а именно избыточное потребление пищи или пониженный расход ее.

Для практических целей избыточным весом принято считать тот случай, когда вес тела превышает "желательный вес", а ожирением - тот случай, когда он превышает этот "желательный вес" на 20 или более процентов [1]. Желательный вес для человека может быть определен по Metropolitan таблицам веса и роста [1] как средняя точка интервала для лиц среднего телосложения.

По своей степени ожирение может быть разделено на большое (избыточный вес 20 - 30 %), умеренное (избыточный вес 30 - 60 %) и сильное (избыточный вес > 60 %). Ожирение сопровождается рядом болезней. Оно может явиться причиной нарушений работы сердца и легких, нарушать эндокринную деятельность и оказывать влияние на эмоции человека. Гипертензия, ухудшение толерантности к глюкозе, неинсулиновый зависимый сахарный диабет и холестеринемия чаще встречаются у индивидуумов с избыточным, чем с нормальным весом. Поэтому ожирение может способствовать заболеваемости и смертности людей, страдающих, например, гипертензией, склонным к приступам, сахарным диабетом типа II, некоторыми разновидностями рака, заболеваниями желчного пузыря и ишемической болезнью сердца. Известно, что умеренное и сильное ожирение снижает продолжительность жизни. Рак прямой и толстой кишки являются болезнями, которые часто встречаются у тучных мужчин, а тучные женщины часто страдают раком эндометрия и желчного пузыря. Кроме того, установлено, что рост избыточного веса почти всегда приводит к возникновению психических и социальных проблем.

Методы лечения.

Причины ожирения являются сложными и не до конца изучены. Ожирение может быть результатом стиля жизни, а именно особенностей физической активности и режима питания, или следствием генетической предрасположенности. Кроме того, отрицательные реакции с точки зрения развития ожирения могут наблюдаться после терапевтического лечения различными лекарствами.

Основной принцип лечения ожирения или от избыточного веса заключается в создании отрицательного энергетического баланса. Отрицательный энергетический баланс можно создать с помощью трех основных методов лечения или их комбинаций.

Прежде всего, эффективным методом лечения является снижение потребления энергии, т.е. пищи. Это в основном возможно исключительно за счет диеты, так как надежной абсорции пищи нельзя добиться ни с помощью медикаментозного лечения, ни с помощью хирургии. Диетотерапия должна включать в себя диету, снижающую вес, и дальнейшее соблюдение диеты. После удовлетворительной потери веса необходимо постепенно увеличивать количество потребляемой энергии до тех пор, пока вес не перестанет изменяться при потребляемой пище, которая должна быть питательной и приемлемой для пациента. Важность длительного соблюдения диеты вытекает из того факта, что только 10 - 20 % пациентов оказываются в состоянии сохранять достигнутый после похудания вес.

Во-вторых, увеличение физической активности приводит к возрастанию расхода энергии, а следовательно способствует возникновению отрицательного баланса. Однако для того чтобы добиться существенного уменьшения веса, необходима физическая активность в течение нескольких часов в день. Поэтому одна только физическая активность играет меньшую роль при лечении ожирения, хотя и является очень важным дополнением к другим методам лечения. Физическая активность может, кроме того, способствовать уменьшению снижения расхода энергии после диетотерапии, включающей ограничение энергии.

И, наконец, третий метод лечения ожирения заключается в использовании лекарств, или самих по себе, или в комбинации с диетотерапией и/или увеличчением физической активности. Лекарствами, использующимися для лечения ожирения, могут быть лекарства, снижающие аппетит, и/или термогенные лекарства. Часто однако имеет место перекрывание механизма действия этих двух типов лекарств. Эффект лекарств, снижающих аппетит, проявляется в первую очередь в уменьшении поглощения энергии. Снижение потребления пищи является следствием действия лекарства на передающие системы мозга, задействованные при регуляции аппетита. Действие этих лекарств, по-видимому, передается через гипоталамус к различным центрам. Оно может оказываться через адренэргические, допаминэргические или серотонэргический механизмы или их комбинации. В любом случае однако конечным результатом является стимуляция центра насыщения и, возможно, одновременное уменьшение активности центра, контролирующего питание, что приводит к уменьшению аппетита. Примерами известных агентов, снижающих аппетит, являются, в частности, эфедрин, фенилпропаноламин, амфетамины и фенфлурамин.

Общепризнано, что термогенные лекарства для лечения ожирения обладают высокой терапевтической эффективностью, и в последние годы все возрастает количество работ, направленных на поиск новых термогенных соединений. Такой интерес к этим лекарствам основан на той общепринятой идее, что ожирение может быть определено генетически. Генетический дефект, ответственный за возможное развитие ожирения, является термогенным дефектом (а именно дефектом метаболической системы) индивидуума, страдающего ожирением [2]. Хотя природа термогенного дефекта и не выяснена до конца, существуют серьезные доводы в пользу того, что суть его состоит в дефективной реактивности симпатоадренальной системы [3] . Dulloo и Miller [2] считают, что термогенный дефект у лиц, страдающих ожирением, связан не с нечувствительностью к нейротрансмиттеру, а скорее с пониженным выделением норадреналина. Поэтому лекарства, имитирующие активность симпатической нервной системы и повышающие скорость метаболизма, могут оказаться терапевтически эффективными при лечении ожирения.

Термогенные лекарства можно охарактеризовать как лекарства, способные увеличить скорость метаболизма, т.е. повысить расход энергии. К известным термогенным лекарствам относятся, например, эфедрин, адреналин, норадреналин [4], изопротеренол, фенилпропаноламин и кофеин [5].

Проводились исследования по изучению возможности лечения ожирения у животных и людей термогенными лекарствами как индивидуальными, так и их комбинациями. Показано, что основной тканью термогенезиса у грызунов является бурая жировая ткань (БЖТ) [4]. Подтверждением этого является тот факт, что, как было установлено, устойчивость к ожирению у крыс и мышей при уменьшенном задании им избытка пищи обусловлена повышенным термогенезисом в БЖТ. Высказано предположение, что БЖТ ответственна за расход энергии и у человека, и что нарушение термогенезиса в БЖТ способствует развитию ожирения у человека. БЖТ получает симпатическую иннервацию, однако содержание БЖТ незначительно. Было показано, что термогенный потенциал БЖТ играет менее значительную роль по сравнению с общей термогенной реакцией тела [4]. Остальные скелетные мышцы могут давать вклад как минимум 50 % в общий термогенезис тела, вызываемый эфедрином [6], и, по-видимому, именно они являются главным фактором остаточного уровня метаболизма и термического эффекта пищи у человека [7]. Главный фактор термогенезиса у человека и грызунов, таким образом, различен, что поэтому делает бессмысленным сравнение результатов, полученных при исследованиях, проведенных на животных и на людях. Поэтому ниже приводятся только результаты, полученные в опытах на людях.

Dullo и Miller [8] недавно показали, что сверхаддитивные таблетки, содержащие эфедрин и метилксантины (22 мг эфедрина, 30 мг кофеина и 50 мг теофилина) (Do-Do pill, Ciba-Ceigy, Великобритания), вдвое эффективнее по сравнению с одним только эфедрином в отношении увеличения уровня метаболизма как у тучных, так и у худых добровольцев. Как отмечается в обзоре Dullo и Miller [2], по-видимому, метилксантины оказывают влияние на действие эфедрина, однако подробные исследования на людях не проводились.

Cesarii и др. [9] сообщают о проводившихся в течение 4 мес рандомизированных исследованиях, осуществлявшихся двойным слепым методом, объектом которых являлись страдающие ожирением женщины. Женщинам давали эфедрин (50 мг), эфедрин с кофеином (50 мг + 100 мг) или плацебо без активного лекарства или лекарств. Лекарства вводились орально. В результате исследований не было обнаружено существенного различия в потере веса у пациенток, входящих в каждую из указанных трех групп, что свидетельствует об отсутствии взаимодействия между эфедрином и кофеином.

Таблетки "Elsinore" [10], состоящие из 20 мг эфедрина, 55 мг кофеина и 1 мг бисакодила, вначале использовали для лечения астмы, однако было отмечено, что они вызывают потерю веса. В клинических условиях двойным слепым методом был проведен опыт на 64 пациентах, страдающих ожирением, в котором действие этих таблеток сравнивалось с таблетками эфедрина 20 мг (2 + 2 + 1 таблетка) [41] . Через 18 недель средняя потеря веса составляла 7,9 и 9,4 кг после введения таблеток эфедрина и таблеток "Elsinore" соответственно. Однако различие не было статистически значимым (P > 0,10).

В литературе описаны также композиции с комбинацией фенилпропаноламин гидрохлорида и кофеина [11]. Кофеин, по-видимому, вводился в эту композицию для снятия усталости [12], поскольку он оказывает стимулирующее действие.

Было предложено множество других комбинаций псевдоэфедрина и метилксантинов в качестве сверхаддитивных фармацевтических композиций для лечения бронхиального кашля, стридора, одышки и для очистки грудной клетки. Известно, что в терапевтических показаниях по использованию таких комбинаций ничего не говорится о возможности использования таких сверхаддитивных продуктов в качестве термогенных композиций (за исключением вышеупомянутых таблеток Do-Do, описанных в опытах Dulloo и Miller [8]).

В GB 2004 183 описаны фармацевтические композиции, включающие эфедрин и кофеин. Эти композиции применимы для снижения веса у отдельных больных людей.

Описано весовое отношение кофеина и эфедрина от 100 : 1 до 1 : 100, более предпочтительно от 10 : 1 до 1 : 10, и главным образом, от 5 : 1 до 1 : 5 или более предпочтительно от 2 : 1 до 1 : 2, однако единственными соотношениями эфедрин/кофеин, раскрытыми на самом деле, являются приведенные в примерах.

Соотношения, упомянутые выше, являются только теоретическими и, по-видимому, документально не подтверждены. Таким образом, единственными соотношениями, включенными в патентную заявку GB, которые значимы для использования при суждении о новизне настоящего изобретения, являются те соотношения, которые приведены в примерах 1 - 3.

Весовое соотношение эфедрина и кофеина, раскрытое в примере 1, находится в интервале 16,4 : 19 - 16,4 : 21, т.е. в пределах 1 : 1,2 - 1 : 1,3.

Соотношение, использованное в примере 2, находится соответственно в пределах 1 : 1,2 - 1 : 1,3, и в примере 3 соотношение, как можно рассчитать, находится в пределах 1 : 1,3 - 1 : 1,4. Эти соотношения также не заявлены в настоящем изобретении.

Композиция, соответствующая GB 2004183, известна так же, как "таблетки Эльсинор" и при клиническом испытании двойным слепым методом у 64 пациентов с ожирением, при котором "таблетки Эльсинор" сравнивали с таблетками эфедрина по 20 мг, не обнаружено никаких статистически значимых различий между двумя разными способами лечения.

Качество туш домашних животных.

Повышение качества туш, а именно уменьшение отношения масс жировой ткани и нежирной части мяса является одной из задач животноводства, поскольку производство избытка жира является одной из причин неэффективности пищевой и мясоперерабатывающей промышленности. Кроме того, избыточное потребление человеком пищевых липидов связано с ростом сердечно-сосудистых заболеваний.

На состав мяса животных можно влиять, изменяя стратегию кормления, использованием некастрированных мужских особей или за счет убоя взрослых животных меньшего веса, а также путем селекции.

Кроме того, при разведении крупного рогатого скота для стимулирования привеса и депонирования белков широко использовались анаболические стероиды. Однако в странах Европейского экономического сообщества применение анаболических стероидов недавно было запрещено, что явилось причиной повышенного интереса к поиску новых классов соединений, таких как β₂ -адренэргические агонисты (кленбутерол, циматерол, рактопрамин и сальбутамол (42 - 42)) и гормоны роста.

Выше была показана необходимость введения в терапевтическую практику соединений, способных оказывать влияние на энергетический баланс в организме за счет увеличения расхода энергии и приведены примеры таких термогенных соединений.

Обнаружено, что введение в организм определенных комбинаций термогенных лекарств, эфедрина и кофеина не только дает термогенный эффект, присущий этим двум активным компонентам, но и оказывает термогенное действие, значительно более сильное, чем можно было бы ожидать, исходя из индивидуальных термогенных эффектов отдельных соединений. Благодаря этому, используя соответствующие комбинации адренэргенного агониста и ксантина, можно добиться высокого терапевтического эффекта при лечении различных заболеваний, вызываемых нарушениями энергетического баланса системы, например ожирения или осложнений, связанных с избыточным весом или ожирением. Кроме того, за счет использования комбинации двух таких активных компонентов можно добиться улучшения качества туш домашних животных.

В основе настоящего изобретения лежит вышеуказанное открытие и одним из его аспектов является фармацевтическая композиция, включающая в качестве основного активного компонента комбинацию эфедрина или другого оказывающего прямое или косвенное термогенное действие и/или снижающего аппетит адренэргического агониста, например β-агониста (в частности β₁-,β₂- и/или β₃-агониста), и кофеина или другого обладающего термогенной активностью ксантина в весовом соотношении от примерно 1:8 до примерно 1:24 в расчете на изотермогенное количество L-эфедрина (в том случае, если β-агонистом является не L-эфедрин) и на изотермогенное количество кофеина (если в качестве ксантина используется не кофеин).

В отличие от традиционных методов лечения от избыточного веса или ожирения использование таблеток на основе фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением, включающей вышеуказанную комбинацию эфедрина и кофеина, дало прекрасные клинические результаты. Эти результаты, полученные в ходе клинических исследований, свидетельствуют о том, что действие, вызываемое комбинацией эфедрина и кофеина, обусловлено неожиданным синергетическим эффектом этих двух лекарств.

Предлагаемое изобретение относится к новым композициям, включающим комбинацию двух хорошо известных лекарственных веществ в определенных соотношениях, таких, чтобы обеспечить достижение желаемого эффекта. Композиция предназначена для использования при лечении чрезмерного веса или ожирения, или для лечения определенных осложнений избыточного веса или ожирения, и, кроме того, композиция может использоваться для повышения содержания мяса в теле домашних животных при расходе (снижении) содержания жира.

Используя вполне определенное соотношение между двумя лекарственными веществами (т. е. между β-адренэргическим агонистом и ксантином), неожиданно обнаружено, что получается непредсказуемо высокий термогенный эффект. Этот синергический эффект фактически выше, чем простая сумма эффектов, проявляющихся в результате введения двух лекарственных веществ отдельно, и соответственно наблюдаемый эффект после введения комбинации двух рассматриваемых лекарственных веществ в соответствующем соотношении везде назывался сверхаддитивным эффектом.

Хотя лекарственные вещества, содержащиеся в композиции, являются термогенными, так что опытный специалист мог бы ожидать термогенный эффект, но он не мог бы предположить, что использование композиции, соответствующей настоящему изобретению, т.е. композиции, включающей β -адренэргический агонист в комбинации с ксантином в особом четко определенном соотношении, даст повышение эффекта до супераддитивного.

Разнообразные клинические испытания (результаты которых описаны в примерах) показали, что при использовании композиций из этого изобретения наблюдается неожиданный супераддитивный эффект. Получаемый эффект превышает сумму эффектов, проявляющихся при применении каждого лекарственного вещества отдельно.

Супераддитивный эффект особенно очевиден для комбинации, включающей 20 мг гидрохлорида эфедрина и 200 мг кофеина, соответствующей соотношению между β -адренэргическим агонистом (т.е. эфедрином, рассчитанным по основанию) и ксантином (т.е. кофеином) 1:12.

По результатам исследования биодоступности таблеток комбинации эфедрина/кофеина в сравнении с таблетками эфедрина и таблетками кофеина у здоровых добровольцев можно заключить, что эффект, который наблюдается после перорального приема композиции настоящего изобретения, является супераддитивным и что такой эффект не связан с изменением характера фармакокинетики двух рассматриваемых лекарственных веществ (т.е. эфедрина и кофеина соответственно). Кроме того, не наблюдалось никаких клинически важных фармакокинетических взаимодействий между двумя лекарственными веществами.

Другим аспектом предлагаемого изобретения является способ лечения животных (за исключением грызунов) от избыточного веса или ожирения за счет уменьшения веса или отношения масс жировой ткани и нежирной части мяса, включающий введение животному термогенно эффективной дозы эфедрина или другого оказывающего прямое или косвенное термогенное действие и/или снижающего аппетит адренэргического агониста, например β -агониста (в частности β₁-,β₂- и/или β₃-агониста), и кофеина или другого обладающего термогенной активностью ксантина в весовом соотношении от примерно 1:8 до примерно 1:24 в расчете на изотермогенное количество L-эфедрина (в том случае, если в качестве β-агониста используется не L-эфедрин) и на изотермогенное количество кофеина (в том случае, если в качестве ксантина используется не кофеин), причем указанную дозу вводят в виде единичной дозы, включающей комбинацию двух указанных активных компонентов, или в виде отдельных, вводимых, как правило, совместно, доз, каждая из которых содержит один из указанных активных компонентов.

Изобретение относится далее к способу лечения осложнений, вызываемых избыточным весом или ожирением, таких как сахарный диабет, типа II, холестеринемия, гипертриглицеридемия и гипертензия, включающему введение животному термогенно эффективной дозы оказывающего прямое или косвенное термогенное действие и/или снижающего аппетит адренэргического агониста и термогенно активного ксантина в весовом соотношении от примерно 1:8 до примерно 1:24 в расчете на изотермогенное количество L-эфедрина (в том случае, если в качестве β-агониста используется не L-эфедрин) и изотермогенное количество кофеина (в том случае, если в качестве ксантина используется не кофеин), причем указанную дозу вводят или в виде одной дозы, включающей комбинацию двух указанных активных лекарств, или в виде отдельных, вводимых, как правило, совместно, доз, каждая из которых содержит один из указанных активных компонентов.

Предпочтительно наряду с введением комбинации адренэргического агониста и ксантина пациентов или животных содержат на диете.

Изобретение относится также к применению комбинации адренэргического агониста и ксантина, взятых в весовом соотношении от примерно 1:8 до примерно 1: 24 в расчете на изотермогенное количество L-эфедрина (в том случае, если в качестве β-агониста используется не L-эфедрина) и изотермогенное количество кофеина (в том случае, если в качестве ксантина используется не кофеин) для получения фармацевтических композиций для лечения от избыточного веса или ожирения, а также обостряемых ими болезней. Предлагаемые фармацевтические композиции включают или одну дозировочную единицу, содержащую оба указанных компонента, или дозировочные формы, заключенные в различные упаковки, каждая из которых содержит один из указанных активных компонентов, с прилагаемой инструкцией, в соответствии с которой рекомендуется принимать оба лекарства вместе.

Изобретение относится далее к способу уменьшения отношения масс жировой ткани и нежирной части массы домашних животных, включающему введение животным эффективной дозы комбинации β-адренэргиеского агониста (например, эфедрина) и ксантина (например, кофеина).

Изобретение относится также к применению комбинации адренэргического агониста (например, эфедрина) и ксантина (например, кофеина) для получения композиции для повышения качества туш домашних животных за счет уменьшения отношения масс жировой ткани и нежирной части мяса.

Лекарства, непосредственно воздействующие на адренэргические рецепторы или выделяющие посредники, которые затем воздействуют на эти рецепторы, обычно называют симпатомиметическими или адренэргическими лекарствами. Симпатомиметики в зависимости от механизма их действия могут быть разбиты на три группы: прямого действия; косвенного действия, механизм которого заключается в эндогенном выделении катехоламина, и смешанного действия, т.е. симпатомиметики, действие которых протекает по обоим указанным механизмам [13]. В предлагаемом описании под термином "адренэргические агонисты прямого или косвенного действия" имеются в виду вещества, оказывающие симпатомиметическое действие по прямому, косвенному или смешанному механизму.

Классификация адренэргических рецепторов на α- и β-рецепторы в настоящее время является общепризнанной. Идея такой классификации основана на величине активности групп симпатомиметических лекарств на различные эффекторные центры и особенно укрепилась после того, как были открыты специфические блокирующие агенты для каждого рецептора. α-рецепторы ответственны главным образом за сужение кровеносных сосудов и мидриазис, а β-рецепторы являются посредником адренэргического действия, например расширения кровеносных сосудов, кардиостимуляции, бронхиальной релаксации, кишечной релаксации, и метаболических эффектов, например повышенного липолиза, гликонеогенеза и т.п. Известны два основных типа β -рецепторов; β₁-,β₂-рецепторы. Распределение этих типов рецепторов в различных тканях в настоящее время недостаточно выяснено. Предполагается однако, что β₁-рецепторы находятся главным образом в сердце, а β₂-рецепторы доминируют в бронхах и в гладких мускульных тканях сосудистой системы и печени и поджелудочной железы. β-рецепторы у страдающих ожирением представляют собой смешанную популяцию β₁-,β₂-рецепторов, тогда как в скелетных мышцах содержатся практически только β₂-рецепторы. Недавно было показано, что возможно существование и других типов β-рецепторов. Установлено, что β-адреноцепторы в бурой жировой ткани крыс не являются ни β₁-, ни β₂-рецепторами [14].

В настоящем описании под термином "термогенное соединение" или "термогенно активное соединение" имеется в виду соединение, способное увеличивать в живом организме животного уровень метаболизма, или другими словами увеличивать расход энергии.

Термогенные соединения в соответствии с настоящим изобретением относятся к двум различным классам терапевтически активных веществ, а именно один класс включает β-адренэргические агонисты, а другой - ксантины. Под использующимся термином "терапевтически активные соединения" имеются в виду любые физиологически или терапевтически активные вещества, оказывающие местное или системное действие на организм животных (за исключением грызунов), в частности млекопитающих, включая человека, приматов и домашних животных.

Примерами термогенно активных и/или снижающих аппетит β-адренэргических агонистов прямого или косвенного действия в соответствии с изобретением являются эфедрин, сальбутамол, тербуталин, кленбутерол, изопротеренол, метараминол, этилефрин, норэфедрин и псевдоэфедрин, йогимбин, тирамин, амфетамин, циннамедрин, оксиэфедрин, метилэфедрин, мефентермин, фенилэфрин, нилидрин, изоксуприн и диэтилпропион или их производные или фармацевтически приемлемые соли. По одному из вариантов осуществления предпочтительным является применение эфедрина в форме L-эфедрина, выбранного из группы, состоящий из (1R, 2S)-2-метиламино-1-фенил-1-пропанола, (1S, 2R)-метиламино-1-фенил-1-пропанола и их комбинаций. Эта группа включает также фармацевтически приемлемые соли и пролекарства указанных соединений.

В качестве термогенно активного ксантина в соответствии с изобретением можно использовать метилксантин, выбранный из группы, состоящей из кофеина, теобромина, теофиллина, аминофиллина, ацепифиллина, этофиллина, проксифиллина, дипрофиллина, холина, теофиллината, энпрофиллина, бамифиллина, буфиллина, этамифиллина, гептаминолацефиллината, пимефиллинникотината, протеобромина и суксамидофиллина или их производных комплексов или фармацевтически приемлемых солей. Предпочтительно, в частности, использовать кофеин.

Фармацевтически приемлемые соли термогенных соединений в соответствии с настоящим изобретением включают соли сильных неорганических или слабых органических кислот, например гидрохлорида, сульфаты, нитраты и ацетаты.

Под термином "пролекарства" в настоящем описании имеются в виду биообратимые производные лекарства, отличающиеся тем, что будучи сами по себе терапевтически неактивными, они в результате ферметативных или неферметативных процессов могут превращаться в организме в активное лекарство.

Примерами подходящих пролекарств термогенных соединений в соответствии с изобретением являются соединения, получаемые путем соответствующей биообратимой дериватизации одной или нескольких реакционноспособных групп исходного лекарства.

Фармацевтически приемлемые комплексы термогенных соединений в соответствии с настоящим изобретением включают комплексы типа кофеина бензоата натрия.

Комбинация в соответствии с изобретением, включающая два термогенных соединения в весовом соотношении от примерно 1:8 до примерно 1:24, предпочтительно от примерно 1:8 до примерно 1:20, наиболее предпочтительно от примерно 1: 8 до примерно 1:18, в частности от примерно 1:10 до примерно 1: 16, например, примерно 1: 12, в расчете на изотермогенные количества L-эфедрина (в том случае, если в качестве β-агониста используют не L-эфедрин) и кофеина (в том случае, если в качестве ксантина используется не кофеин), при введении ее животным (за исключением грызунов), предпочтительно млекопитающим, наиболее предпочтительно человеку, дает сверхаддитивный термогенный эффект.

Сверхаддитивный эффект (сверхсуммарный) комбинации двух соединений может быть обнаружен путем определения термогенных эффектов, возникающих при введении каждого из соединений по отдельности и в комбинации друг с другом пациентам-добровольцам в клинических опытах, проводимых двойным слепым методом с использованием в качестве контроля плацебо. В данном случае сверхаддитивный термогенный эффект (САЭ) определяется как отношение фактического термогенного эффекта (ФАЭ) при использовании комбинации двух лекарств к рассчетному термогенному эффекту (РАЭ). РАЭ может быть рассчитан как термогенный эффект, вызываемый β-агонистом, например эфедрином, плюс термогенный эффект, вызываемый метилксантином, например кофеином. При этом каждый термогенный эффект определяется по отдельности и в него вносится поправка на плацебо. Фактический сверхаддитивный эффект (в %) может быть рассчитан по следующей формуле

Определенный в результате таких проводимых двойным слепым методом испытаний с контролем с использованием плацебо сверхаддитивный термогенный эффект обычно примерно на 10, предпочтительно примерно на 30, более предпочтительно примерно на 50%, наиболее предпочтительно примерно на 70% выше суммы термогенных активностей компонентов при введении их по отдельности, рассчитанной вышеуказанным образом.

Для достижения достаточно значительного с терапевтической точки зрения сверхаддитивного термогенного эффекта оба лекарства, составляющие предлагаемую композицию, должны входить в нее в таком количестве, чтобы весовое соотношение между β-агонистом и ксантином находилось в пределах от примерно 1:8 до примерно 1: 24, предпочтительно 1:8 - 1:20, наиболее предпочтительно от примерно 1: 9 до примерно 1:18, в частности от примерно 1:10 до примерно 1: 16, например, примерно 1:12, в расчете на изотермогенные количества L-эфедрина (в том случае, если в качестве β-агониста используются не L-эфедрин) и кофеина (в том случае, если в качестве ксантина используется не кофеин).

В предлагаемом описании под изотермогенным количеством двух или более соединений имеются в виду дозы, которые после орального введения натощак подвергаемым эксперименту субъектам увеличивает общий расход энергии на такую же величину. Исследования должны проводиться на здоровых добровольцах. Увеличение общего расхода энергии может быть рассчитано путем интегрирования кривой зависимости расхода энергии от времени за определенный отрезок времени после введения композиции.

По предпочтительному варианту осуществления изобретения фармацевтическая композиция включает в качестве активного компонента комбинацию эфедрина и кофеина в весовом соотношении от примерно 1:8 до примерно 1:24, предпочтительно от примерно 1:8 до примерно 1:20, наиболее предпочтительно от примерно 1: 8 до примерно 1:18, в частности от примерно 1:10 до примерно 1:16, например, примерно 1:12.

Терапевтическая доза соединений в соответствии с настоящим изобретением может варьироваться в зависимости от размеров подвергаемого лечению животного, характера заболевания или симптомов и его тяжести. Практически однако можно обойтись следующими руководствами. Для орального введения количество L-эфедрина или другого оказывающего прямое или косвенное термогенное действие и/или снижающего аппетит адренэргического агониста, например β-агониста, составляет примерно 10 - 40, в частности 10-30, например, примерно 16-17 мг на единичную дозу, в расчете на изотермогенное количество L-эфедрина (в том случае, если в качестве β-агониста используется не L-эфедрин). Эта доза может вводиться от 1 до примерно 10, предпочтительно от 2 до примерно 8, в частности от 2 до примерно 4 раз в день. Указанная дозировка относится к L-эфедрину в виде свободного основания. Эквивалентные дозы, например, для эфедрин гидрохлорида могут быть рассчитаны с учетом разницы молекулярных весов эфедрина в форме свободного основания и эфедрина в форме гидрохлорида. Так, 1 мг эфедрина в форме свободного основания соответствует 1 мг • (мол. вес эфедрин гидрохлорида/мол. вес эфедрина)=1 мг • 1,20 = 1,20 мг.

Для кофеина или другого ксантина доза для орального введения составляет от примерно 80 мг до 1,9 г, предпочтительно примерно 80 - 720 мг, в частности 80-500, например, 180-220 мг на единичную дозу в расчете на изотермогенное количество кофеина (в том случае, если в качестве ксантина используется не кофеин). Эта доза может вводиться от 1 до примерно 10, предпочтительно от 2 до примерно 8, в частности от 2 до примерно 4 раз в день.

Композиции в соответствии с изобретением могут быть приготовлены для введения их любым способом, например орально, ректально, в нос, местно (дермально) или парентерально. Так, они могут быть приготовлены в виде таблеток, капсул, суспензий, эмульсий, растворов, препаратов для инъекций, свеч, аэрозолей, спреев и т.д.

Препараты для орального введения включают таблетки, содержащие активный компонент в смеси с фармацевтически приемлемыми наполнителями. Такими наполнителями могут быть, например, инертные разбавители, такие как карбонат кальция, хлорид натрия, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия; грануляторы и диспергаторы, например картофельный крахмал или альгиновая кислота; связующие, например крахмал, желатин или аравийская камедь, и смазывающие добавки, например стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Другими фармацевтически приемлемыми наполнителями могут быть красители, вкусовые добавки, пластификаторы, смачивающие добавки и т.п. Такие таблетки могут не иметь покрытия или на них может быть нанесено известными способами покрытие, задерживающее дезинтеграцию и абсорбцию в желудочно-кишечном тракте, благодаря чему обеспечивается длительное действие лекарства. В качестве такого материала, обеспечивающего задержку действия лекарства, можно использовать, например, моно- или дистеарат глицерина.

Препараты для орального введения могут быть также приготовлены в виде жевательных таблеток или жестких желатиновых капсул, в которых активный компонент находится в смеси с инертным твердым разбавителем, например карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, а также мягких желатиновых капсул, в которых активный компонент находится в смеси с водой или маслянистым веществом, например арахисовым маслом, жидким парафином или оливковым маслом.

Композиции в соответствии с изобретением могут быть также приготовлены в виде порошков, диспергирующихся порошков или гранул, пригодных для получения водных суспензий. Препараты для получения суспензий содержат активный компонент в смеси с диспергатором или смачивателем, агентом, способствующим образованию суспензий, и одним или несколькими консервантами. Подходящими диспергаторами или смачивателями являются, например, природные фосфатиды, такие как лецитин, или продукты конденсации оксида и, например, жирной кислоты, длиннозвенного алифатического спирта или частичного эфира жирной кислоты и гекситола или ангидрида гекситола, например полиоксиэтиленстеарат, полиоксиэтиленсорбитол моноолеат, полиоксиэтиленсорбитан моноолеат и т.п. В качестве агентов, способствующих образованию суспензий, можно использовать, например, карбоксиметилцеллюлозу натрия, метилцеллюлозу, альгинат натрия и т.п.

Фармацевтические композиции в соответствии с изобретением могут также вводиться парентерально (внутривенно, внутримышечно, подкожно и т.д.) в виде препаратов, содержащих обычные, нетоксичные, фармацевтически приемлемые носители и адьюванты. Составление и получение таких композиций хорошо известно специалистам в данной области. Конкретное описание способов приготовления фармацевтических препаратов содержится в "Remington's Pharmaceutical Sciences" [15].

Фармацевтические композиции в соответствии с изобретением для парентерального введения могут включать термогенные соединения в виде стерильных препаратов для инъекций. Для получения таких композиций термогенные соединения растворяют или диспергируют в приемлемом для парентерального введения жидком инертном носителе. К подходящим для таких целей носителям и растворителям относятся вода, вода с нужным pH, которое устанавливается путем добавления к ней соответствующего количества соляной кислоты, гидроксила натрия или подходящего буфера, 1,3-бутандиол, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Водный препарат может, кроме того, содержать один или несколько консервантов, например метил-этил- или н-пропил-п-оксибензоат.

Композиции в соответствии с изобретением, подходящие для ректального введения, включают свечи (типа эмульсий или суспензий) и ректальные желатиновые капсулы (растворы или суспензии). В типичных суппозиториях термогенные соединения находятся в смеси с фармацевтически приемлемой основой, например, какаовым маслом, этерифицированными жирными кислотами, глицеринированным желатином, и различными водорастворимыми или диспергирующимися в ней основами типа полиэтиленгликолей и полиоксиэтиленсорбитановых эфиров жирных кислот. В них могут входить также различные добавки, например усилители или поверхностно-активные вещества.

Типичными препаратами для введения в нос на основе композиций в соответствии с изобретением являются носовые спреи и аэрозоли для ингаляции. В таких композициях активные компоненты обычно находятся в виде растворов или суспензий в подходящем инертном наполнителе. Фармацевтически приемлемые инертные носители и наполнители, а также другие фармацевтически приемлемые материалы (в случае их использования), входящие в состав композиций, таких как разбавители, усилители, вкусовые добавки, консерванты и т.д., выбираются в соответствии с принятой и известной в данной области фармацевтической практикой.

Фармацевтические композиции в соответствии с изобретением могут также вводиться местно, например, путем нанесения на кожу для чрескожного проникновения, в виде препаратов, содержащих фармацевтически приемлемые носители и наполнители, включая микросферы и липосомы. К таким препаратам относятся кремы, мази, лосьоны, линитменты, гели, гидрогели, растворы, суспензии, пасты, пластыри и другие виды трансдермальных лекарственных систем. Фармацевтически приемлемые носители или наполнители могут включать эмульгаторы, антиоксиданты, буферы, консерванты, смачиватели, добавки, способствующие проникновению, хелатные агенты, гелеобразующие добавки, мазевые основы, ароматизирующие добавки и добавки, защищающие кожу.

Примерами эмульгаторов являются природные смолы, аравийская камедь или трагант, природные фосфатиды, например, соевый лецитин и производные сорбитанмоноолеата.

Примерами антиоксидантов являются бутилированный оксианизол (BHA), аскорбиновая кислота и ее производные, токоферол и его производные и цистеин.

Примерами консервантов являются парабены и хлорид бензалкония.

Примерами смачивателей являются глицерин, пропиленгликоль, сорбитол и мочевина.

Примерами добавок, способствующих проникновению, являются пропиленгликоль, диметилсульфоксид, триэтаноламин, N,N-диметилацетамид, N,N-диметилформамид, 2-пирролидон и его производные, тетрагидрофурфуриловый спирт и азон^®.

Примерами гелеобразующих добавок являются карбопол, производные целлюлозы, бентонит, альгинаты, желатин и поливинилпирролидон.

Примерами мазевых основ являются воск, парафин, цетилпальмитат, растительное масло, сорбитановые эфиры жирных кислот (Span), полиэтиленгликоли и продукты конденсации сорбитановых эфиров жирных кислот и этиленоксида, например, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат (Tween).

Предпочтительно, фармацевтические композиции в соответствии с изобретением включают комбинацию продукта, содержащего β-адренэргический агонист в комбинации с ксантином, т.е. в случае таблеток одна таблетка включает смесь двух активных компонентов. Фармацевтическая композиция в соответствии с изобретением может однако состоять и из одной упаковки, включающей две отдельные упаковки, одна из которых содержит препарат β-адренэргического, а вторая - ксантинового соединения. В этом случае к упаковке должна прикладываться инструкция с указанием, что оба лекарства предпочтительно принимать одновременно. Оба лекарственных препарата могут быть приготовлены в одинаковых или различных формах. Предпочтительно, чтобы обе формы были одинаковыми.

Фармацевтические композиции в соответствии с изобретением могут использоваться для медицинских целей, в частности для введения комбинации β -адренэгического агента и ксантина животным (за исключением грызунов), предпочтительно млекопитающим, в частности людям.

По одному из аспектов изобретение относится к способу лечения от избыточного веса или ожирения отдельных субъектов, в частности людей, или снижения отношения масс жировой ткани и нежирной части тела у людей или домашних животных.

В настоящем описании под термином "избыточный вес" имеется в виду превышения веса тела по сравнению с "желательным весом", тогда как под термином "ожирение" имеется в виду превышение веса тела на 20 или более процента по сравнению с "желательным весом". Желательные веса для человека рекомендованы Council on Scientific c Affairs [1] и определяются по таблицам роста и веса Metropolitan как средняя точка интервала для лиц среднего сложения.

Предлагаемое изобретение далее относится к способу лечения болезней, которые могут явиться следствием осложнений в результате избыточного веса или ожирения. К таким болезням относятся сахарный диабет типа II, гиперхолестеринемия, гипертриглицеридемия и гипертензия.

Изобретение относится также к способу уменьшения отношения масс жировой ткани и нежирной части тела или к способу лечения от избыточного веса или ожирения или связанных с ними осложнений с помощью диеты. Такая диета, в сочетании с которой пациенты могут получать композицию в соответствии с настоящим изобретением, может включать пищу с низким содержанием углеводов, жиров и низкой калорийностью, например, 800-2500 ккал/день.

Изобретение, кроме того, относится к применению комбинации β-адренэргического агента и ксантина для получения фармацевтических композиций для лечения от избыточного веса или ожирения или обостряемых ими заболеваний.

Применение в ветеринарии.

Композиции в соответствии с изобретением могут также использоваться для введения домашним животным для повышения эффективности животноводства (увеличения дневного привеса и лучшего использования кормов), для улучшения качества мяса или того и другого. Повышения качества мяса обычно достигают путем уменьшения отношения масс жировой ткани и нежирной части мяса, а именно путем увеличения содержания мяса, например, за счет расходования жира.

Улучшение характеристик и качества мяса происходит, по-видимому, за счет уменьшения наращивания жира и/или за счет увеличения наращивания скелетных мышц. У растущих животных содержание липида в организме, по-видимому, определяется соотношением скоростей липолиза и липогенеза [46]. Стимулирование липолиза и/или ингибирование липогенеза в жировой ткани может привести к уменьшению отложения жира. Опыты in vivo и in vitro, проведенные на свиньях и жвачных [47-50], позволяют сделать вывод, что некоторые β-агонисты стимулируют липолиз и ингибируют липогенез в жировой ткани, результатом чего является снижение наращивания жира.

Наращивание скелетных мышц может быть связано с ингибированием разложения белков или с увеличением интенсивности их синтеза. Ранее были проведены исследования для выяснения влияния β-агонистов на синтез или расщепление белков [51, 52] но и в настоящее время механизм их действия на накопление белков окончательно не выяснен.

Введение животным композиций в соответствии с настоящим изобретением может оказаться целесообразным для увеличения нежирной массы тела за счет расхода жира у домашних животных, в частности свиней, бычков, крупного рогатого скота, овец и домашней птицы. Предлагаемые композиции могут вводиться животным вместе с кормом, в количествах, зависящих от размера животных.

Предпочтительно композицию, включающую комбинацию β -адренэргического агониста, например эфедрин гидрохлорида, и ксантина, например кофеина, вводят орально в виде порошка, хорошо смешанного с порошкоообразным кормом, задаваемым обычно животному. Такой диетический порошкообразный корм содержит белок, жир и витамины в количествах, обычно рекомендуемых для оптимального роста конкретного животного, или он может содержать меньшее количество белка, достаточное с учетом увеличения количества синтезируемого белка за счет введения препарата. Вышеописанные композиции для орального и парентерального введения, естественно, могут использоваться и для введения домашним животным. Композиции для орального введения могут использоваться как сами по себе, так и в смеси с кормом.

Весовое соотношение между β-адренэргическим агонистом и ксантином обычно находится в пределах от примерно 1:8 до примерно 1:24, предпочтительно от примерно 1: 8 до примерно 1:20, наиболее предпочтительно от примерно 1:8 до примерно 1:18, в частности от примерно 1:10 до примерно 1:16, например, равняться примерно 1:12. Однако соотношение, при котором достигается оптимальный эффект (т.е. синергетический или сверхаддитивный эффект β -адренэргического агониста и ксантина), может изменяться в зависимости от природы используемых соединений и вида животных.

Дневная доза комбинации β-адренэргического агониста и ксантина зависит от способа введения и вида подлежащего лечению животного. Как правило, дневная доза эфедрин гидрохлорида находится в пределах примерно 0,005-50, предпочтительно примерно 0,05-20 мг на кг живого веса, а дневная доза кофеина - в пределах примерно 0,04-1200, предпочтительно 0,5-500 мг на кг живого веса.

Отношение масс жировой ткани и нежирной части мяса определяется как отношение веса жира к весу мяса после разделки туши животного.

В молодом быке весом, например, 456 кг обычно содержится примерно 174 кг мяса, примерно 31 кг жира и примерно 45 кг костей. Отношение масс жировой ткани и нежирной части мяса таким образом будет равно примерно 0,17. Соответственно в свинье весом, например, 90 кг обычно содержится примерно 35 кг мяса, примерно 20 кг жира и примерно 7 кг костей. Отсюда указанное соотношение для этой свиньи будет равно 0,57. Нормальные пределы отношений масс жировой ткани и нежирной части мяса, таким образом, зависят от вида животных, и за критерий улучшения качества мяса может быть принято уменьшение этого отношения по сравнению с его нормальным значением для данного вида животных. Как правило, при оральном введении комбинации эфедрина и кофеина наблюдается снижение по меньшей мере на 5, предпочтительно по меньшей мере на 10% от нормальной величины этого отношения.

Пример 1A. Получение капсул, содержащих эфедрин и кофеин.

Капсулы, содержащие эфедрин и кофеин, получали, используя в качестве исходного материала следующие компоненты, мг:
Эфедрин гидрохлорид Ph.Eur. - 20
Кофеин Ph.Eur. - 200
Лактоза Ph.Eur. - Примерно 90
Приведенные количества относятся к одной ампуле.

Перечисленные компоненты просеивают, смешивают и расфасовывают в желатиновые ампулы обычными методами, используемыми при получении капсул.

Пример 1B. Получение таблеток, содержащих эфедрин и кофеин.

Таблетки, содержащие эфедрин и кофеин, получали из перечисленных в табл. 1 компонентов с помощью обычных, используемых для получения таблеток методов, включая мокрое гранулирование.

При желании на последующей стадии на таблетки может быть нанесено покрытие обычными способами.

Пример 1C. Получение таблеток, содержащих эфедрин и кофеин.

Таблетки, содержащие эфедрин и кофеин, получали из перечисленных в табл. 2 компонентов с помощью обычных используемых для получения таблеток методов, путем прямого прессования.

При желании на последующей стадии на таблетки может быть нанесено покрытие обычными способами.

Пример 2. Изучение термогенного действия кофеина и эфедрина при их использовании по отдельности и комбинации друг с другом в зависимости от дозы.

Исследование проводилось в Институте физиологии C.Panum Institute, Копенгагенский университет, Дания.

Цель исследования заключалась в выяснении зависимости между величиной дозы кофеина, эфедрина и комбинации их друг с другом и термогенным эффектом, а также действием, оказываемым ими на сердечно-сосудистую систему и метаболизм.

Исследования проводились в два этапа. На первом этапе в проводимых двойным слепым методом опытах с контролем с помощью плацебо определялось действие трех различных доз кофеина, трех различных доз эфедрина и двух разных плацебо. Порядок проведения опытов был не упорядочен, а опыты были выстроены в такой последовательности, которая позволила определить эффект переноса.

На основании результатов первого этапа были выбраны три комбинации различных доз кофеина и эфедрина. Опыты на втором этапе проводились неупорядоченно, двойным слепым методом.

На обоих этапах опыты проводились на одних и тех же добровольцах, что позволило непосредственно сравнивать результаты обеих серий, считая все опыты случайными группами, без внесения каких-либо поправок на предвзятость.

Выбор объекта исследований.

После получения соответствующего согласия была составлена группа из 6 здоровых добровольцев нормального веса (по 3 каждого пола) в возрасте от 20 до 32 лет. Средний возраст этих добровольцев составлял 25 (±1) лет, рост 179 (±11) см, вес 70 (±13) кг, процент избыточного веса -1,7 (±8,3) %, содержание жира 13 (±3) кг. Цифры в скобках представляют собой стандартные отклонения. Процент избыточного веса был рассчитан исходя из индивидуального веса (IBW) с помощью средних точек интервала для среднего телосложения (MMF), приведенных в таблицах желательного веса Metropolitan Life Insurance Company

Исключались субъекты, постоянно потребляющие более 1-2 чашек кофе в день (более 100 - 200 мг кофеина). Не допускался прием добровольцами на время исследования никаких лекарств за исключением испытуемых препаратов.

Все 6 добровольцев закончили весь курс исследований.

Использовавшиеся препараты.

A. Препарат эфедрина - капсулы, содержащие 10, 20 или 40 мг эфедрин гидрохлорида.

B. Препарат кофеина - капсулы, содержащие 100, 200 или 400 мг кофеина.

C. Препарат, содержащий комбинации эфедрина и кофеина, - капсулы, приготовленные в соответствии с примером 1A, содержащие следующие количества эфедрин гидрохлорида и кофеина: (20 мг + 200 мг), (20 мг + 100 мг) и (10 мг + 200 мг).

D. Плацебо - капсулы без активного лекарства.

Все ампулы на вид и на вкус были одинаковы. В качестве инертного наполнителя использовалась лактоза.

Капсулы вводились орально в виде единичных доз и запивались 300 мл водопроводной воды (20^oC).

Схема исследований.

Каждый доброволец получал все лекарства. Промежуток между сериями испытаний составлял не менее трех дней.

Перед началом испытаний добровольцев инструктировали, чтобы они воздерживались как минимум за 12 ч до начала опытов от приема пищи и содержащих кофеин стимуляторов, таких как кофе, чай и курение. Кроме того, перед испытаниями исключалась физическая активность.

Прием испытывавшихся лекарств наблюдался и контролировался путем определения концентрации продуктов метаболизма метилксантина в плазме до и после приема. Полученные таким образом результаты использовались для того, чтобы убедиться, что добровольцы не принимали продуктов, содержащих кофеин, или другие стимуляторы.

Перед началом исследований добровольцев (субъектов, участвовавших в испытаниях) информировали о порядке проведения испытаний для предупреждения гипервентиляции и т.п.

По меньшей мере за 60 мин до начала испытаний зеленый катетер Venflon вводили через кожу в вену впереди от локтевого сустава для взятия крови. В процессе исследования катетер держали открытым, пропуская через него после каждого взятия пробы изотонический раствор хлорида натрия (154 ммоль/л). Температуру поддерживали постоянной, равной 25-27^oC.

В ходе исследований пациенты лежали, но спать им не разрешали. Им не разрешали также менять положение, чтобы исключить какое-либо влияние физической активности на расход энергии и содержание катехоламина.

Все пробы крови для определения концентраций субстрата, продуктов метаболиза и гормонов отбирали из вены спереди от локтевого сустава. Пробу брали за 30 мин (-30) до приема капсулы, в момент ее приема (0), через 30, 60, 90, 120, 150 и 180 мин. После адаптации в течение примерно 10 мин собирали в течение 10 мин выдыхаемый газ в мешки Дугласа. Пробу газа отбирали после каждого взятия пробы крови.

Оценка эффекта
Расход энергии. Расход энергии человеком может быть определен с высокой точностью с помощью прямых калориметрических измерений. Это требует однако использования очень дорогой аппаратуры. Кроме того, этот метод не может быть использован для определения непродолжительных термоэффектов, вызываемых термогенными агентами, из-за изменений аккумулированного тепла в теле [17]. Косвенная (определение потребления кислорода и количество выделяющегося диоксида углерода) и прямая калориметрия дают почти одинаковые результаты при проведении измерений на находящихся в покое людях в условиях теплового комфорта и стабильности [17]. Показано, что косвенная калориметрия дает очень точные результаты благодаря очень высокой воспроизводимости определения количества потребляемого кислорода и выделяющегося диоксида углерода. Кроме того, сравнение результатов, полученных с помощью различных разновидностей косвенной калориметрии, свидетельствует о том, что использование вентилируемого зонта, маски и мундштука дает близкие по величине значения [18]. Установлено, что вариационный коэффициент для расхода энергии в покое, определенный описанным ниже способом с интервалами в один день и в одну неделю, равен соответственно 2,4 и 2,2%.

Расход энергии определяли методом косвенной калориметрии. Выдыхаемый газ непрерывно анализировали на содержание кислорода и диоксид углерода с помощью оксигенметра Codart Rapox и газоанализатора Beckman LB-I Medical. Принимали дыхательный процесс установившимся, содержание диоксида углерода в последней выдыхаемой фракции не менялось. Выдыхаемый газ собирали в мешки Дугласа и анализировали на содержание кислорода и диоксида углерода с помощью газовых электродов Radiometer, соединенных с кислотно-щелочным анализатором (РНМ 71, Копенгаген, Дания). Объем выдыхаемого газа определяли с помощью газометра. Для получения точных результатов с низкими вариационными коэффициентами перед измерениями, а именно перед каждым отбором пробы газа для анализа, газовые электроды калибровали с помощью стандартных газов известного состава. Стандартные газы анализировали с помощью аппаратуры для микроизмерений Scholander'a, позволяющей проводить измерения с ошибкой менее 0,0005%. Таким образом, ошибка определений при анализе выдыхаемого газа составляет ±0,1 - 0,2 % [19]. Показано, что использовавшаяся аппаратура при повторяющихся ежечасно измерениях дает вариационный коэффициент ≤ 3%. Принималось, что имеет место фиксированный катаболизм белков, поскольку ошибка при расчете расхода энергии, если пренебречь поправкой на азот мочевины, была пренебрежимо мала [20] . Расход энергии рассчитывали с учетом генезиса [21].

Лабораторные методы.

Через не снимающуюся в ходе исследований канюлю пробы крови без стаза отбирали в охлаждаемый льдом шприц. Пробы крови затем центрифугировали при 4^oC, сразу же экстрагировали из них неэтерифицированные жирные кислоты (NEFA) и анализировали их по методике, описанной в [22]. Концентрацию глюкозы в плазме определяли с помощью оксидазы глюкозы [23], концентрацию глицерина - по методике, описанной Laurell и Tibbling [24], концентрацию лактата - по методике, описанной Noll [25], а концентрацию триглицерида - по методике, описанной Giegel [26]. Пробы крови для определения метаболитов метилксантина собирали в пробки, в которых содержались восстановленный глутатион и этиленгликоль-бис (β-аминоэтил)- N, N, N', N'-тетрауксусная кислота (EGTA). Пробы сразу же центрифугировали, и плазму до анализа на метилксантины хранили при -40^oC (см. пример 4). Концентрацию иммунореактивного инсулина, глюкогона поджелудочной железы и С-пептида в плазме определяли с помощью тест-наборов для радиоиммунного анализа Novo, Копенгаген. Все аликвотные части плазмы, предназначенные для анализа на метаболиты метилксантина и гормоны поджелудочной железы, кодировали и анализировали в случайном порядке, для того, чтобы избежать систематической ошибки, которая может возникнуть при определенной очередности анализа проб. Концентрации натрия и калия в пробах плазмы определяли методом плазменной спектрофотометрии.

Безопасность исследований.

Артериальное кровяное давление измеряли на правой руке с помощью сфигмоманометра a.m. Riva-Rocci, а частоту сердечных сокращений - путем пальпации периферийных биений в ипсилатеральной радиальной артерии. Указанные измерения проводили после каждого взятия пробы крови.

Для измерения кровяного давления использовали аппаратуру "Trimline", выпускаемую фирмой РуМаН (Копенгаген). Использовали манжету шириной 12-14 см. Манометрическое давление медленно и постепенно снижали с 200 мм рт. ст., регистрируя первый звук Короткова. Соответствующее этому моменту давление принимали за систолическое давление. За диастолическое кровяное давление принимали манометрическое давление, соответствующее изменению характера звуков Короткова от коротких ударов к приглушенным.

В конце каждого опыта, включающего прием испытуемого соединения, путем опроса участвовавших в эксперименте добровольцев оценивали наличие или отсутствие побочных эффектов.

Статистический анализ.

Действие испытывавшихся соединений оценивали отдельно для каждого субъекта как разность между площадью под кривой, характеризующей влияние лекарства, полученной численным интегрированием методом трапецеидального приближения, и площадью прямоугольника с тем же основанием и ординатой, равной исходному значению. Для определения расчетного, теоретического, эффекта комбинации эфедрина кофеина складывали эффекты отдельных доз после вычета из них среднего эффекта, вызываемого плацебо. Этот расчет выполняли отдельно для каждого субъекта перед проведением статистического анализа. Для анализа разностей экспериментальных периодов в пределах одного эксперимента и разностей между эффектами, вызываемыми различными испытуемыми веществами, проводили дисперсионный анализ по двум направлениям рандомизированных блоков [28]. Возможный эффект переноса оценивали путем сравнения данных, полученных в два периода с использованием плацебо, с помощью парного t-теста. Значимым принимали значение p, меньшее 0,05. Линейный регрессионный и корреляционный анализ проводили стандартными методами [28]. Все полученные результаты выражали в виде среднего значения ± стандартное отклонение от этого среднего (SE).

Результаты. Оценка эффекта.

Расход энергии и дыхательный коэффициент.

Базисный расход энергии в двух опытах с использованием плацебо равнялся 1,10 ± 0,08 и 1,09 ± 0,10 ккал/мин соответственно. Текущий вариационный коэффициент равнялся 2,4%. В табл.3 приведены значения термогенного эффекта в виде среднего расхода энергии в двух опытах с использованием плацебо продолжительностью в 3 ч. Эти средние значения расхода энергии рассчитывались как площадь под кривой. В качестве базовых значений использовались величины, полученные до приема испытуемых соединений. В табл.3, таким образом, приведены интегральные эффекты в ответ на плацебо.

Эфедрин. В среднем расход энергии после введения 10, 20 и 40 мг эфедрин гидрохлорида, составляющий соответственно 16,0 ± 10,9 (p=0,016), 6,3 ± 5,3 (пренебрежимо мало) и 12,1 ± 4,9 ккал/3 ч (p=0,05) был выше, чем в случае плацебо. Соотношения между расходом энергии для различных доз эфедрин гидрохлорида и плацебо приведены в табл.4.

Приведенные значения являются минимальными, так как расход энергии не возвращался к исходному через 3 ч после приема лекарства. Какой-либо четкой зависимости между величиной дозы и термогенным эффектом не было обнаружено.

Кофеин. В среднем расход энергии после введения 100, 200 и 400 мг кофеина, составлявший соответственно 9,2 ± 5,7 (p=0,11), 7,2 ± 6,0 (p=0,17) и 32,4 ± 8,2 ккал/3 ч (p<0,001), был выше, чем в случае плацебо (табл. 4). Как уже отмечалось, приведенные в таблице значения являются минимальными, поскольку расход энергии не возвращался к исходному значению через 3 ч после приема лекарства. Линейный регрессионный анализ показал наличие линейной зависимости между дозой кофеина и интегральным эффектом с поправкой на концентрацию кофеина в плазме. Исходное значение до приема лекарства равнялось p= 0,000015. Обнаружено также существование определенной зависимости между дозой кофеина и термогенным эффектом (расходом энергии) (p=0,006).

Комбинации эфедрина и кофеина.

В среднем расход энергии после введения комбинаций эфедрин гидрохлорида и кофеина в количествах (10 и 200 мг) (20 и 100 мг) и (20 и 200 мг), составлявший соответственно 16,6 ± 7,4, 13,9 ± 2,7 и 24,0 ± 8,6 ккал/3 ч, был выше, чем в случае плацебо (см. табл. 4). Приведенные значения являются минимальными, так как расход энергии не возвращался к исходному значению через 3 ч после приема лекарства.

На основе результатов, полученных при введении эфедрина и кофеина по отдельности, для каждого добровольца может быть рассчитан теоретический термогенный эффект при оральном введении комбинации обоих компонентов как сумма индивидуальных эффектов для β-агониста (эфедрина) и метилксантина (кофеина) за вычетом удвоенного термогенного эффекта для плацебо. В табл. 5 приведены значения рассчитанного и фактического (с поправкой на термогенный эффект для плацебо) термогенных эффектов. Поправку на эффект, вызываемый плацебо, вносили путем вычитания из суммарного термогенного эффекта, возникающего при введении исследуемого лекарства, термогенного эффекта для плацебо.

Сравнение рассчитанного и фактического эффекта показывает, что комбинации 10/200 и 20/100 дают такой же или несколько более низкий термогенный эффект по сравнению с рассчитанным. Эти различия однако несущественные. Однако в случае комбинации 20/200 явно имеет место сверхаддивный эффект (см. пример 3 для определения сверхаддитивного термогенного эффекта), так как фактический эффект (24,0 ± 8,6 ккал/3 ч) значительно выше рассчитанного (12,3 ± 10,9 ккал/3 ч, p=0,02). Стандартная ошибка при определении среднего фактического эффекта была значительно ниже рассчитанных значений.

Подводя итог, можно сделать вывод, что эфедрин, кофеин и их комбинации оказывают термогенное действие. Сверхаддитивный термогенный эффект наблюдался после орального введения композиции эфедрина и кофеина, состоявшей из 20 мг эфедрин гидрохлорида и 200 мг кофеина, тогда как в случае двух других комбинаций эфедрина и кофеина (10/20 и 20/100) имел место лишь аддитивный эффект.

Далее, дыхательный коэффициент во всех опытах слегка уменьшался, что свидетельствует о том, что расход энергии, стимулируемый вводимыми лекарствами, обусловлен увеличением окисления углеводородов и липидов.

Безопасность исследования.

Побочные эффекты.

Вводимые в ходе исследований активные соединения и плацебо, за исключением кофеина в количестве 400 мг (p<0,01), который в такой дозе уже не применялся на втором этапе исследований, не оказывали существенного побочного действия. Применение эфедрин гидрохлорида в количестве 40 мг также было исключено из-за довольно значительного возрастания систолического кровяного давления и частоты сердечных сокращений. Таким образом, за исключением кофеина в количестве 400 мг и эфедрин гидрохлорида в количестве 40 мг используемые лекарства не оказывали сильного побочного действия.

Лабораторные методы.

Существенное влияние все испытуемые соединения оказывали лишь на содержание в сыворотке глюкозы, неэтерифицированных жирных кислот (NEFA) и глицерина.

Содержание глюкозы в сыворотке.

По сравнению с плацебо оральное введение эфедрина и кофеина приводило к появлению гипергликемического эффекта. Эффект был большой и одинаково выражен для доз эфедрин гидрохлорида 20 и 40 мг. Комбинации эфедрина и кофеина оказывали действие, мало отличающееся от рассчетного, а комбинация 20/200 оказывала более заметное действие.

Содержание в сыворотке неэтерифицированных жирных кислот и глицерина.

Оральное введение эфедрина и кофеина, а также их комбинаций приводило к увеличению концентраций NEFA и глицерина в сыворотке, что, по-видимому, связано с увеличением интенсивности липолиза, вызываемого постом.

Резюме.

1. И эфедрин и кофеин обладают термогенной активностью.

2. Термогенные эффекты, вызываемые эфедрином и кофеином, усиливаются при оральном введении фармацевтической композиции, включающей 20 мг эфедрин гидрохлорида и 200 мг кофеина, т.е. такая комбинация обладает сверхаддитивной (сверхсуммарной) термогенной активностью.

Пример 3. Условия, необходимые для синергетического взаимодействия.

Для определения сверхаддитивного термогенного эффекта (САЭ) комбинации двух соединений необходимо измерить по отдельности термогенные эффекты каждого из соединений и комбинации их друг с другом на здоровых добровольцах. Исследования необходимо проводить двойным слепым методом с контролем с использованием плацебо.

Определения.

РАЭ: сумма определенных по отдельности термогенных эффектов β-агониста (например, эфедрина) и метилксантина (например, кофеина) за вычетом двойного термогенного эффекта плацебо.

Статистическую оценку проводили методом двухмаршрутного вариационного анализа повторяемых измерений, т.е. при ФАЭ > РАЭ число повторных измерений равно 3 при 2 степенях свободы. Уровень значимости p < 0,05 при двухстороннем тестировании.

Значение САЭ в процентах может быть рассчитано по следующей формуле:

При обработке данных табл.5 в примере 2 в соответствии с вышеприведенным определением получаются значения, приведенные в табл.6.

Для комбинации 20/200 p равнялось 0,02.

Пример 4. Сравнение биологической доступности таблеток с комбинацией эфедрина и кофеина и таблеток эфедрина и кофеина в опытах со здоровыми добровольцами.

Опыты проводились в DAK-лаборатории (Копенгаген).

Цель исследований заключалась 1) в сравнении количеств эфедрина и кофеина, абсорбирующихся из таблеток с комбинацией эфедрин/кофеин, с абсорбцией из таблеток с одним активным веществом (таблеток эфедрина и таблеток кофеина соответственно) и 2) в сравнении кинетических параметров, таких как T_1/2 (период биологического полураспада), T_max (время достижения максимальной концентрации лекарства в плазме) и C_max (максимальная концентрация лекарства в плазме) после орального введения различных таблеток для кинетической оценки возможного взаимодействия лекарств после одновременного введения эфедрина и кофеина в виде их комбинации.

Исследования проводились в форме открытых рандомизированных cross over опытов. Добровольцы были разделены на две группы по 6 человек в каждой. Каждый доброволец получал три типа разных таблеток в виде единичных доз с интервалом как минимум 6 дней.

Добровольцы. В группу добровольцев были включены 13 взрослых здоровых человек. Один доброволец после первого дня отказался от дальнейшего участия в исследованиях из-за подозрения в синдроме отмены кофеина. 12 добровольцев (трое мужчин и 6 женщин), в возрасте от 28 до 42 лет (средний возраст 37 лет), весом от 55 до 82 кг (средний вес 66 кг) и ростом 159 - 179 (средний рост 167 см) участвовали в исследованиях от начала до конца. Все добровольцы сообщили о своем согласии участвовать в исследовании. 4 добровольца выкуривали примерно 20 сигарет в день, один выкуривал 1-3 сигареты, семь не курили совсем.

При отборе добровольцев пользовались следующими критериями: исключались
- беременные или кормящие женщины или женщины, хотящие стать беременными;
- добровольцы, принимающие хронические лекарства, включая оральные контрацептивы, но за исключением витаминов и минеральной воды;
- добровольцы с аллергией к любым соединениям в таблетках;
- добровольцы с острыми или хроническими заболеваниями, что могло бы сказаться на a) здоровье добровольца, b) результатах исследований (решение принималось ответственным исследователем);
- добровольцы-доноры, сдававшие кровь в период за две недели до начала исследования;
- добровольцы, подозреваемые в неуступчивом характере;
- добровольцы, у которых в ходе предварительных лабораторных исследований были выявлены существенные клинические отклонения.

Перед началом опытов один из исследователей обследовал всех добровольцев обычным образом. В программу обследований включалось измерение кровяного давления, определение частоты сердечных сокращений и снятие ЭКГ. Брались пробы кровы для следующих анализов: на гемоглобин, лейкоциты, ASAT, лактатдегидрогеназу, фосфаты щелочных металлов, амилазу и креатинин. Пробы мочи анализировали на содержание сахара, крови и альбумина (качественный анализ).

Принимались за нормальные следующие интервалы значений: гемоглобин: для мужчин 8-11 ммоль/л, для женщин 7-10 ммоль/л; лейкоциты: 3-9•10⁹/л; ASAT: 10-40 Ед./л; лактатдегидрогеназа: 200-450 Ед./л; фосфаты щелочных металлов: 50-275 Ед./л; амилазы: 70-300 Ед./л; креатинин: 60-130 мкмоль/л.

Все добровольцы по данным обследования были физически здоровыми, данные их лабораторных анализов находились в пределах нормы.

Ни один из добровольцев не был исключен из группы на основании вышеприведенных критериев.

Вводившиеся лекарства.

A: таблетки кофеина 200 мг; таблетки DAK, содержащие 200 мг кофеина.

B: таблетки эфедрина 20 мг; таблетки DAK с содержанием в одной таблетке 20 мг эфедрин гидрохлорида;
C: таблетки с комбинацией эфедрин/кофеин 20/200 мг; таблетки DAK, содержащие 20 мг эфедрин гидрохлорида и 200 мг кофеина; таблетки были получены в соответствии с примером 1B.

Все таблетки были одинаковы по весу, внешнему виду и вкусу.

Схема исследований.

Лекарства.

Одна таблетка проглатывалась в 8.30 утра и запивалась 150 мл воды.

Пища. В день, в который проводились исследования, добровольцам разрешался легкий завтрак не позже, чем в 7 утра. Легкий завтрак состоял и 2 ломтиков белого хлеба с маслом и (необязательно) джема и сока, воды или другого не содержащего кофеина напитка (за исключением молочных продуктов). С 7.00 утра и до легкого стандартного ленча в час дня добровольцам есть не разрешалось. Пить разрешалось после 10.00 утра. После ленча разрешалось пить и есть неограниченно.

Ограничения. Добровольцам не разрешалось принимать пищу или напитки, содержащие кофеин, за 3 дня (72 ч) до начала исследований и до взятия последней пробы крови (во второй день исследований). К пище и напиткам, содержащим кофеин, относили кофе, чай, какао, колу или другие напитки, содержащие кофеин, а также любые шоколадные изделия.

Добровольцам не разрешалось потреблять алкогольные напитки за день (24 ч до и в период взятия проб на анализ).

В течение всего периода исследований добровольцы не должны были изменять принятый ими режим курения.

Другие лекарства. За 3 дня до начала и в продолжении исследований добровольцам не разрешалось принимать никаких лекарств (за исключением витаминов и минеральной воды).

Взятие проб.

Пробы крови. Брали 16 проб крови из вены (с помощью аппаратуры Venflon за первые 12 ч) до и в следующие моменты времени после введения лекарства: через 15, 30, 45, 60 мин, 1, 5, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 10, 12, 24, 28 и 32 ч.

Отобранные пробы крови выдерживали в течение 30 мин в защищенном от света месте, после чего центрифугировали при скорости вращения 300 об./мин. Сыворотку переносили в другую склянку и замораживали до проведения анализа.

Пробы мочи. Мочу собирали после приема таблеток B и C. После приема таблеток A мочу не собирали.

Фракции мочи собирали в склянки из коричневого стекла с широким горлом непосредственно перед приемом лекарства и затем после приема в следующие интервалы: 0-3, 3-6, 6-9, 9-12, 12-24, 24-32 и 32-48 ч.

Отобранные пробы выдерживали до принятия ими комнатной температуры, определяли их общий объем и измеряли pH в течение периода отбора проб 24 ч. Аликвотные части переносили в маленькие склянки и замораживали до проведения анализа.

Анализ проб.

Определение содержания кофеина в сыворотке. Концентрацию кофеина и метаболитов, теобромина, теофилина и параксантина в сыворотке определяли с помощью высокопроизводительной жидкостной хроматографии (HPLC) по методике, описанной Вильямсом и др. (29), которая была несколько модифицирована в отношении природы подвижной фазы, длины волны, экстракции и охранной колонки. Кроме того, не использовались внешние стандарты.

200 мкл сыворотки подкисляли 200 мкл 0,1 M соляной кислоты и встряхивали в делительной воронке с 5,0 мл смеси 2-пропанола и дихлорметана в объемном соотношении 1: 9. 4 мл органической фазы переносили в другую склянку после центрифугирования и упаривали досуха при 45^oC в токе азота. Остаток растворяли в 200 мкл стерильной воды и 50 мкл раствора вводили шприцем в хроматографическую систему.

Параметры и аппаратура.

Колонки: Lichrosorb RP8 (10 мкм) (высота 250 мм; внутренний диаметр 4,6 мм) с охранной колонкой (высота 23 мм; внутренний диаметр 3,9 мм), заполненная Bondapak C-18/Corsil (37-50 мкм).

Аппаратура: Waters Assoc. Cromatography насос M 6000 A; детектор с изменяемой длиной волны фирмы Waters Assoc., модель 450, инжектор VK и принтер Servogor Z10.

Подвижная фаза: смесь тетрагидрофурана и воды в объемном соотношении 4,2:95,8. Скорость потока: 2 мл/мин. Длина волны: 270 нм. Давление: 3000 фунтов на кв. дюйм. Температура в колонке: 25^oC. AVFS 0,01-0,02-0,04-0,1 при 10 мВ.

Время удерживания: теобромина 2,8 мин, параксантина 3,6 мин, теофиллина 3,9 мин, кофеина 5,2 мин.

Содержание кофеина, теофиллина, параксантина и теобромина в пробах рассчитывали по калибровочным кривым для каждого из указанных соединений (0-1-5-10 мкг/мл) после вычитания значения для слепой пробы.

Калибровочные кривые были линейными в интервале концентраций 1-10 мкг/мл. Степень извлечения из сыворотки с добавкой смеси 4 соединений составляла 83% для теобромина, 81% для параксантина, 90% для теофиллина и 99% для кофеина по сравнению с водным раствором, содержащим все 4 соединения (0,2 мк/мл). Относительные стандартные отклонения в фактическом интервале концентраций составляли 3,2% для теобромина, 4,9% для параксантина, 4,4% для теофиллина и 5,7% для кофеина. Пределы обнаружения составляли 0,04 мкг/мл для теобромина, 0,06 мкг/мл для теофиллина и параксантина и 0,08 мкг/мл для кофеина.

Пробы сыворотки сохранялись в замороженном состоянии (-20^oC) без разложения в течение как минимум 5 недель.

Определение содержания эфедрина в моче.

Содержание эфедрина и метаболита, норэфедрина в моче определяли с помощью высокопроизводительной жидкостной хроматографии (HPLC), используя комбинацию методов, описанную Lurie [30] и Lai и др. [31], несколько видоизмененную в отношении подвижной фазы, охранительной колонки и способа экстракции, а также без использования внешних стандартов.

2 мл мочи подщелачивали 0,5 мл 5%-ного раствора гидроксида калия и встряхивали в делительной воронке с 5 мл смеси гексана и дихлорметана в объемном соотношении 60: 40. после центрифугирования 3,5 мл органической фазы переносили в другую склянку, встряхивали в делительной воронке со 100 мкл 0,1 М соляной кислоты и затем упаривали досуха при 40^oC в токе азота. Остаток растворяли в 100 мкл воды и 50 мкл полученного раствора вводили шприцем в хроматографическую систему.

Параметры и аппаратура. Колонки: μ Bondapak C-18 (10 мкм) высота 300 мм, внутренний диаметр 3,9 мм с охранительной колонкой (высота 23 мм, внутренний диаметр 3,9), заполненной Bondapak C18/Corasil (37-50 мкм). Аппаратура: хроматографический насос фирмы Waters Assoc. модель 510; детекторы фирмы Waters Assoc. модель 440; инжектор VK 6 и принтер Saevogor Z10.

Подвижная фаза: смесь метанола, 0, 02 М натриевой соли н-гептансульфокислоты и 1%-ной уксусной кислоты в объемном соотношении 35:64:1. Скорость потока: 2 мл/мин. Длина волны: 254 нм. Давление: 2500 фунтов на кв. дюйм. Температура в колонке: 40^oC. AVFS: 0,005 - 0,01 - 0,02 - 0,05 - 0,1 при 10 мВ.

Время удерживания: эфедрина 9,5 мин, норэфедрина 8,6 мин.

Содержание эфедрина и норэфедрина в пробах определяли по индивидуальным калибровочным кривым на моче каждого из добровольцев (0 - 5 - 10 - 50 мкг/мл).

Калибровочные кривые были линейными в интервале концентраций 0 - 50 мкг/мл. Степень извлечения из мочи, в которую вводилась добавка смеси двух соединений, составляла 87% для эфедрина и 36% для норэфедрина по сравнению с водным раствором этих двух соединений (50 мкг/мл). Относительно стандартные отклонения в фактическом интервале концентраций составляли 6,6% для эфедрина и 7,7% для норэфедрина. Пределы обнаружения составляли 0,3 мкг/мл для эфедрина и 0,6 мкг/мл для норэфедрина.

Пробы мочи сохранялись в замороженном состоянии (-20^oC) без разложения в течение как минимум 3 недель.

Контроль безопасности исследований.

Кровяное давление и частоту сердечных сокращений измеряли перед и через 2 и 4 ч после приема лекарства.

Об отрицательной реакции на лекарства добровольцы сами сообщали исследователям. Регистрировались симптом, момент его появления, продолжительность и тяжесть (незначительный, умеренный, сильный).

Кинетические расчеты.

Кофеин и метаболиты. Регистрировали пик концентрации (C_max) кофеина и его метаболитов, теобромина и параксантина, и момент, соответствующий этому пику (T_max). Измеряли площадь под кривой концентрации в сыворотке - время (AUC_0-∞) по методу трапеций и экстраполировали полученное значение от C_32ч (концентрация в сыворотке через 32 ч после приема лекарства) на бесконечность путем деления C_32ч на k_e (константа скорости элиминирования). (AUC_0-∞), а также период полураспада (T_1/2), среднее время пребывания (MRT), период полуабсорбции кофеина (T_1/2абс.) и период полуметаболизма параксантина (T_1/2мет.) рассчитывали путем подбора формул по кривым симлексным методом (SIMPFIT) [32].

(AUC_0-∞) корректировали затем с помощью k_e для выявления различий в скорости выделения в разные дни приема лекарства.

Эфедрин и норэфедрин. Рассчитывали фактическое количество эфедрина и норэфедрина в моче через 48 ч (Ae^0-48), а также максимум скорости выделения (ΔAe/Δt_max) и время, соответствующее этому максимуму (T).
Статистический анализ.

Двухмаршрутный вариационный анализ осуществляли по методу SAS. GLM по всем кинетическим параметрам и логарифмированным параметрам. Таким же образом анализировали данные, характеризующие сердечно-сосудистую систему (кровяное давление и частоту сердечных сокращений), используя вместо абсолютных значений разности (2-0), (4-0) и (4-2) ч.

Результаты. Определяли концентрации кофеина, теобромина и параксантина (мкг/мл) в сыворотке после приема таблеток кофеина 200 мг и таблеток с комбинацией эфедрина и кофеина 20/200 12 добровольцами. Другой метаболит, теофиллин, не был обнаружен (т.е. теофиллин или отсутствовал, или же присутствовал в количествах, ниже предела обнаружения, равного 0,06 мкг/мл).

Фармакокинетические параметры кофеина, теобромина и параксантина, рассчитанные из кривых, а также путем аппроксимации, приведены в табл. 7, в которой даны средние значения и S.D. (стандартные отклонения). В таблице приведены также рассчитанные методом двухмаршрутного анализа дисперсии значения (SAS. GLM).

Лишь T_max параксантина после приема двух видов таблеток (таблеток кофеина 200 мг и таблеток с комбинацией эфедрина и кофеина 20/200 мг) существенно различаются. Различия всех остальных параметров очень незначительны (p > 0,05).

Эфедрин и норэфедрин. Определяли содержание эфедрина и его метаболита, норэфедрина (мг) в моче, отбиравшейся за определенные промежутки времени, а также общее количество (мг) за 48 ч после приема таблеток эфедрина 20 мг и таблеток с комбинацией эфедрина и кофеина 20/200 мг у 12 добровольцев и измеряли объем мочи, выделяющейся за эти промежутки. Кроме того, определяли pH проб мочи.

В табл. 8, 9 приведены рассчитанные параметры Ae^0-48, ΔAe/Δt_max,T для эфедрина и норэфедрина. Приведены средние значения, S. D. и интервалы, а также рассчитанные методом двухмаршрутного дисперсионного анализа значения p (SAS, GLM).

Лишь ΔAe/Δt_max норэфедрина было существенным. Остальные параметры различались незначительно (p > 0, 05).

Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют об отсутствии существенного различия в абсорбции (т.е. в количестве абсорбированного соединения или в скорости абсорбции) кофеина из таблеток кофеина 200 мг и таблеток с комбинацией эфедрина и кофеина 20/200 мг и в абсорбции эфедрина из таблеток эфедрина 20 мг и таблеток с комбинацией эфедрина и кофеина 20/200 мг. Не было обнаружено фармакокинетического взаимодействия между эфедрином и кофеином. Таким образом, сверхаддитивный эффект, имевший место после орального введения композиции, представляющей собой комбинацию эфедрина и кофеина, включающей 20 мг эфедрин гидрохлорида и 200 мг кофеина (см. пример 2), действительно является сверхаддитивным эффектом и не является следствием изменения фармакокинетических параметров эфедрина и кофеина после приема таблеток с их комбинацией.

Кроме того, не наблюдалось клинически важного фармакокинетического взаимодействия между кофеином и эфедрином или их метаболитами, а следовательно, и не происходило накопление токсичных метаболитов после приема таблеток с комбинацией, включающей эфедрин и кофеин.

Пример 5. Изучение двойным слепым методом влияния таблеток с комбинацией эфедрина и кофеина (EFK) на снижение веса и безопасность у пациентов, страдающих ожирением, по сравнению с эфедрином, кофеином и плацебо.

Исследование проводились в Hvidovre госпитале копенгагенского университета.

Целью предлагаемого исследования было 1) изучение влияния таблеток с комбинацией эфедрина и кофеина (EFK) на снижение веса и безопасность у пациентов, страдающих ожирением, по сравнению с таблетками эфедрина, кофеина и плацебо и 2) выяснение, оказывает ли комбинация эфедрина и кофеина сверхаддитивное действие на потерю веса.

Постановка исследований. Исследования проводили рандомизированным двойным слепым параллельным методом с 4 группами лекарств по 2 • 2 факториальному плану.

Всем пациентам давали испытуемые лекарства и предписывали диету калорийностью 4,2 мДж/день в течение 24 недель.

Выбор пациентов. Для исследований было отобрано 180 пациентов в возрасте 20 - 65 лет с избыточным весом 20 - 80%, которые дали свое согласие на участие в исследованиях.

Исключались из чиста участвовавших в исследованиях:
1) пациенты, страдающие гипертензией (диасталическое кровяное давление более 110 мм рт. ст.) и/или принимающие гипертензивные средства (за исключением мочегонных);
2) беременные или кормящие женщины или женщины, хотящие стать беременными;
3) пациенты, страдающие различными заболеваниями, на которые испытуемые лекарства могут оказывать действие или если эти лекарства могут являться потенциально опасными для здоровья пациентов, например пациенты с желудочно-кишечными заболеваниями, которые могут препятствовать абсорбции лекарств; пациенты с сердечными заболеваниями, такими как аритмия, синдром WPW и некомпенсированные болезни сердца; пациенты, страдающие требующими лечения серьезными эндокринологическими заболеваниями (диабетом типа I), или заболеваниями щитовидной железы;
4) пациенты, страдающие в течение предыдущих 5 лет злокачественными заболеваниями (за исключением carcinoma basocellulare), психозами, пациенты, привыкшие к чрезмерному употреблению лекарств;
5) пациенты, которые за 14 дней до начала исследований получали лекарства, способствующие набиранию веса, или принимали ингибиторы моноаминоксидазы;
6) пациенты, лечившиеся от ожирения хирургическим методом (за исключением косметической хирургии);
7) пациенты, которые меняли оральные контрацептивные в течение последних трех месяцев или которые принимали теофиллин или другие метилксантины в течение последнего месяца перед началом исследований;
8) пациенты, результаты лабораторных анализов которых к моменту начала исследований отклонялись от нормы, что могло свидетельствовать о том, что участие их в исследованиях может оказаться вредным для их здоровья, и
9) пациенты, которые начали курс похудения и потеряли более 8 кг веса за последние два месяца до начала исследований.

Повышенное содержание триглицеридов кислот и холестерина в сыворотке не являлись однако причиной для исключения пациентов из числа лиц, допускавшихся для прохождения исследований.

141 пациент полностью прошли весь курс исследований: по 35 из групп, принимавших EFK (комбинация эфедрина и кофеина), эфедрин и плацебо, и 36 из числа принимавших кофеин. 39 пациентов были отстранены от дальнейшего участия в исследованиях, 6 из них из-за отрицательной реакции на лекарства (3 из группы EFK, 1 из группы принимавших эфедрин и 2 из группы принимавших кофеин). Во всех случаях исключения пациентов из числа участвующих в исследованиях делалась запись, происходило это из-за прекращения приема лекарств, отрицательной реакции на лекарства, отклонения лабораторных анализов от нормы, обострения болезни, беременности, несоблюдения режима, нежелания участия в исследованиях и т. д. Если пациенты отстранялись от участия в исследовании из-за отрицательных реакций на лекарства, отклонения лабораторных анализов от нормы, анормального кровяного давления или изменений в ЭКГ, то они наблюдались до исчезновения указанных симптомов и в течение как минимум трех месяцев раз в месяц вызывались на прием.

Использование лекарства.

А. Группа EFK: таблетки EFK, содержащие комбинацию 20 мг эфедрин гидрохлорида и 200 мг кофеина, полученные по способу в соответствии с примером 1B.

B. Группа эфедрина: таблетки эфедрина, содержащие 20 мг эфедрин гидрохлорида.

C. Группа кофеин: таблетки кофеина, содержащие 200 мг кофеина.

D. Группа плацебо: таблетки плацебо, не содержащие активных лекарственных соединений.

Все таблетки были одинаковыми по весу, внешнему виду и вкусу.

Пациентам был прописан прием по 1 таблетки 3 раза в день за час до еды в сочетании с диетой 4,2 мДж/день, состоящей из белкового порошка NUPO^® [33] (1,6 мДж/день) и дополнительной пищи по выбору (2,6 мДж/день) в течение 24 недель.

В ходе исследований пациентам не разрешалось принимать никаких других лекарств от избыточного веса или ожирения. Допускался (после консультаций с врачом) лишь прием лекарств, которые не взаимодействовали с исследуемыми медикаментами. Соблюдение пациентами схемы приема лекарств контролировалось путем подсчета возвращаемых таблеток.

Порядок проведения исследований. Перед началом исследований пациентов информировали о них, обследовали состояние пациентов на начало исследований и получали их согласие на добровольное участие в исследованиях.

Записывались возраст, вес, рост и пол пациентов, принимавшиеся ими лекарства, потребление кофеина, и пациенты получали инструктаж по диете.

Каждые две недели пациенты получали инструкции по диете и взвешивались. Если пациент не был согласен с диетой NUPO^®, то ему давали другую диету, не содержащую NUPO^® с калорийностью 4,2 мДж/день.

Раз в четыре недели пациенты проходили врачебный осмотр.

Путем рандомизации пациенты были разбиты на 4 группы (в отношении приема лекарств): группы EFK, эфедрина, кофеина и плацебо. Распределение по полу в этих группах статистически не различалось (p = 0,09). Средний возраст пациентов составлял 36 лет, средний рост - 167 см, средний вес - 95 кг, средний избыточный вес - 51%. Все 4 группы были сопоставимы по возрасту (p = 0,59), росту (p = 0,48) и проценту избыточного веса (p = 0,78). Среднее исходное систолическое кровяное давление ровнялось 126 мм рт. ст., среднее начальное диастолическое кровяное давление 81 мм рт. ст., средняя начальная частота сердечных сокращений 77 ВРМ (ударов в минуту). Все 4 группы были сопоставимы по начальным систолическому (p = 0,36) и диастолическому (p = 0,38) кровяным давлениям и начальной частоте сердечных сокращений (p = 0,32). Они были сравнимы также по исходному потреблению кофеина (в среднем по 5,8 произвольных чашек кофе в день) (p = 0,20).

Оценка эффективности. Пациенты взвешивались на весах с десятичной шкалой врачами-диетологами при каждом визите. Использовались весы Seca electronic (модель 707). Предельный вес составлял 200 кг, цена деления шкалы 100 г. Калибровка весов проводилась раз в неделю.

Оценка безопасности.

Субъективные методы. Отрицательные реакции на лекарства записывались сотрудниками при каждом визите путем косвенного опроса и/или на основании сообщения самого пациента.

Через 14 дней после прекращения курса приема таблеток врач-психиатр записывал все чувства беспокойства, которые могли возникнуть у пациента в течение этого времени, а также физические и психологические симптомы.

Объективные методы.

Обследование общего физического состояния. Перед началом исследований сотрудник, проводивший исследование, обследовал общее физическое состояние всех пациентов.

Измерение кровяного давления и частоты сердечных сокращений. Кровяное давление измерялось раз в 4 недели сфтигмоманометром Trim line (РуМаН). Измерения проводились при сидячем положении пациента, на правой руке, после нахождения пациента в покое в течение как минимум 10 мин. Использовалась манжета шириной 14 - 16 см. Манометрическое давление медленно и постепенно снижали, начиная с 200 мм рт. ст., и регистрировали первый звук Короткова. Показания манометра в этот момент принимали за систолическое кровяное давление. За диастолическое кровяное давление принимали манометрическое давление в момент, когда звуки Короткова из гулких ударов превращались в приглушенные звуки.

Частоту сердечных сокращений определяли по периферийной пульсации путем пальпации правой радиальной артерии.

ЭКГ. 9-канальную ЭКГ снимали перед началом исследований и через 12 и через 24 недели после начала приема лекарств. Использовали два типа аппаратуры (Minigraf 3 minor, Mass., США, и МАС 1, Marguette Electronics Inc., США). Скорость движения ленты составляла 25 мм/мин.

Лабораторные методы. Анализы крови и мочи лабораторных исследований брали до начала испытания и через 12 и 24 недели после начала.

Проводились следующие анализы.

Гематологические параметры: определялось содержание гемоглобина, лейкоцитов и тромбоцитов и находилась разность лейкоцитов.

Параметры плазмы белка: определялось содержание альбумина.

Параметры кислотно-щелочного баланса: определялось общее содержание бикарбоната.

Параметры электролита: определялось содержание калия и натрия.

Параметры печени: для контроля функционирования печени определяли содержание билирубина, фосфатов щелочных металлов, лактатдегидрогеназы (LDH) и аспартатаминотрансферазы (ASAT).

Параметры почек: определялось содержание креатинина и уриновой кислоты. Мочу с помощью индикаторных бумажных полосок анализировали на глюкозу, гемоглобин и белок.

Метаболические факторы: для оценки изменений содержания глюкозы и метаболизма липидов у пациентов в ходе исследований определяли содержание триглицеридов кислот (TGA), холестерина и глюкозы (натощак).

Все клинико-химические анализы за исключением анализа на TGA и анализов мочи с помощью индикаторных бумажных полосок проводили в Departament of Clinical Chemistry, Hvidovre Hospital по обычным методикам. Все эти методики известны и описаны в литературе [7, 40-48]. Определение TGA и анализ мочевины с помощью индикаторных бумажных полосок проводили в лаборатории Department of Internal Medicine, Division of Endocrynology, Hvidovre Hospital по методике, описанной в [26].

Статистические методы.

В основу статистического анализа потери веса была положена разность логарифмов начального веса при контрольном взвешивании. Такая методика была принята вследствие перекоса данных, вызванного тем, что наибольшие потери веса наблюдались у пациентов с самым большим начальным весом.

Для статистического анализа использовался односторонний t-тест Стьюдента SAS. GLM.

Корреляцию между весом и содержанием триглицерида, холестерина и глюкозы натощак проводили с помощью дисперсионного анализа (SAS. GLM).

Сверхаддитивный эффект выражали как разность между эффектами эфедрина в присутствии и отсутствие кофеина, т.е. сверхаддитивный эффект равнялся эффекту EFK минус эффект эфедрина, минус эффект кофеина, плюс эффект плацебо. Поскольку как уже отмечалось, данные представлялись в логарифмическом виде, отрицательные значения означают наличие сверхаддитивного эффекта. Нуль соответствует аддитивному, а положительное значение - субаддитивному эффекту.

Статистический анализ проводился путем одностороннего дисперсного анализа (SAS. GLM).

Демографические данные выражали в виде средних значений для каждой из 4 групп и сравнивали с помощью одностороннего дисперсного анализа (SAS. GLM). Начальное число пациентов (мужчин и женщин) сравнивали с помощью Chi²-теста (SAS PROC FREQ).

Среднюю разность между значениями кровяного давления, частоты сердечных сокращений и данными лабораторных анализов в начальный момент (недели 0) и недели 12 и 24 по отношению к начальным значениям для каждой из групп анализировали методом одностороннего распределения Стьюдента (SAS). Сравнение групп при данном обследовании осуществляли с помощью одностороннего дисперсионного анализа (SAS. GLM). Разность по сравнению с начальными значениями использовали для того, чтобы исключить возможность влияния на результаты. Так, например, пациенты с высокими показателями, выбывающие из дальнейшего исследования, будут оказывать влияние на среднее значение при следующем контроле, затушевывая таким образом имеющееся на самом деле различие.

Результаты.

Потеря веса. У одного пациента из группы, получавшей кофеин, динамика потери веса была резко отличной от остальных пациентов. За 24 недели он потерял 42,6 кг по сравнению со средним значением 11,7 кг для всей группы. Результаты этого пациента поэтому были исключены из рассмотрения, и анализ проводился по данным для 140 пациентов (118 женщин и 22 мужчин).

Вес пациентов всех четырех групп значительно снизился за 4 недели после начала приема лекарств и за оставшееся время исследований. В случае пациентов, получавших EFK, потери веса через 8 недель после начала исследований были значительно выше по сравнению с пациентами, получавшими плацебо.

Через 24 недели относительный вес, т.е.

По сравнению с предсказанной потерей веса после приема по отдельности эфедрина и кофеина совершенно неожиданно в случае приема EFK имела место дополнительная потеря веса в 3,5 кг.

Подводя итог, можно сделать вывод, что EFK оказывает значительно более сильное действие в отношении снижения веса по сравнению с плацебо и дает сверхаддитивный эффект по сравнению с предсказанным, теоретически рассчитанным эффектом для комбинации эфедрина и кофеина. Расчет был выполнен на основе данных табл. 10 для эффектов при приеме по отдельности двух лекарств в разное время. При этом теоретический эффект рассчитывался как сумма эффектов отдельных лекарств за вычетом эффектов плацебо.

Безопасность исследований.

39 пациентов в ходе исследований были исключены из числа участников, 6 из них вследствие отрицательных реакций. 74 пациента жаловались на отрицательные реакции, из них 27 из группы EFK, 20 - из группы, принимавшей эфедрин, 16 - из группы, принимавшей кофеин, и 11 - из группы, принимавшей плацебо. Чаще всего пациенты из групп, получавших активные лекарства, сообщали о симптомах, связанных с центральной нервной системой, таких как инсомния, тремор и головокружение. Поступали также жалобы на тахикардию, сердцебиение, постуральную гипотензию и гипертензию. Чаще всего об отрицательных реакциях на лекарство сообщали в начале исследования. Обычно эти реакции были непродолжительны. Ни физических, ни психологических синдромов отмены через 24 недели не отмечалось. Некоторые пациенты однако жаловались на состояние беспокойства после прекращения приема лекарства. 34 пациента, в частности из числа принимавших эфедрин, жаловались на чувство голода. И, наконец, главным образом пациенты из группы, принимавшей EFK, жаловались на усталость после отмены лекарства.

Таким образом, ни одно из испытывавшихся лекарств не оказывало сильного побочного действия.

Измерение кровяного давления и частоты сердечных сокращений.

И систолическое, и диастолическое кровяное давление снижались в ходе исследования во всех четырех группах.

В неделю 24 среднее систолическое кровяное давление снизилось на 4,8 мм рт. ст. (4,0% от первоначального значения) в группе пациентов, принимавших EFK, на 8,7 мм рт. ст. (7,0% от первоначального значения) в группе пациентов, принимавших эфедрин, на 9,3 мм рт. ст. (7,3% от первоначальной величины) в группе пациентов, принимавших кофеин, и на 6,7 мм рт. ст. (5,2% от первоначальной величины) в группе пациентов, принимавших плацебо. Существенное статистическое различие между группами отсутствовало (p = 0,42), однако в пределах группы после 12 недель снижение было значительным.

В неделю 24 среднее диастолическое кровяное давление снизилось на 5,0 мм рт . ст. (6,3% от первоначальной величины) в группе пациентов, принимавших EFK, на 6,9 мм рт. ст. (8,6% от первоначальной величины) в группе пациентов, принимавших эфедрин, на 8,9 мм рт. ст. (11,0%) в группе пациентов, принимавших кофеин, и на 5,2 мм рт. ст. (6,3% от первоначальной величины) в группе пациентов, принимавших плацебо. Как и в случае систолического кровяного давления, не наблюдалось существенного различия между средними значениями диастолического кровяного давления у пациентов разных групп (p = 0,36), однако в пределах одной группы через 12 недель после начала приема лекарства среднее диастоличческое кровяное давление значительно снижалось (величина p находилась в пределах между 0,0001 и 0,01). Снижение диастолического кровяного давления коррелировало с потерей веса (расчеты проводились для всех пациентов через 12 и 24 недели; p равнялось 0,01 и 0,03 соответственно).

Относительно кровяного давления, таким образом, можно сделать вывод, что прием EFK в сочетании с диетой приводит к существенному снижению и систолического, и диастолического давления.

В неделю 24 средняя частота сердечных сокращений уменьшилась на 0,9 BPM (1,2% от первоначальной величины) в группе пациентов, принимавших EFK, на -3,1 BPM (-4,3% от первоначальной величины) (т.е. возросла) в группе пациентов, принимавших эфедрин, на 5,7 ВРМ (7,3% от первоначальной величины) в группе пациентов, принимавших кофеин, и на 4,9 ВРМ (6,2% от первоначальной величины) в группе пациентов, принимавших плацебо. В случае групп пациентов, принимавших EFK и эфедрин, в ходе исследования наблюдались колебания частоты сердечных сокращений. Через 12 и 24 недели после начала приема лекарств различия между пациентами четырех групп были статистически существенными (значения p равнялись 0,03 и 0,003 соответственно). Кроме того, имела место явная корреляция между уменьшением частоты сердечных сокращений и потерей веса в недели 12 и 24 (p = 0,04 и 0,008 соответственно).

Таким образом, можно сделать вывод, что введение EFK в сочетании с диетой приводит к существенному уменьшению частоты сердечных сокращений.

Лабораторные методы. Клинически важные изменения имели место только в случае концентрации в сыворотке триглицерида кислоты и глюкозы. Статистически значимое снижение содержания триглицерида кислоты и глюкозы наблюдалось во всех четырех группах. Это следует из нижеприведенных табл. 11 и 12.

Кроме того, снижение содержания триглицерида кислоты в сыворотке явно коррелирует с потерей веса (p равно 0,07, 0,2, 0,002 и 0,0001 для EFK, эфедрина, кофеина и плацебо соответственно).

Таким образом, исходя из результатов описанных испытаний с клиническим контролем, проводившихся в течение 24 недель, можно сделать вывод, что:
1. EFK в комбинации с диетой с калорийностью 4,2 мДж/день эффективна для лечения ожирения.

2. EFK оказывает сверхаддитивное действие на снижение веса.

3. Лечение EFK приводит к снижению кровяного давления (и систолического, и диастолического) и уменьшению частоты сердечных сокращения.

4. Прием EFK приводит к существенному снижению содержания в сыворотке глюкозы и триглицеридов.

5. Прием EFK не оказывает серьезного побочного действия и не вызывает синдрома отмены после прекращения приема лекарства.

Пример 6. Оценка эффективности относительно длительности действия и безопасности таблеток с комбинацией эфедрина и кофеина (EFK) для лечения от избыточного веса и ожирения.

Исследования проводились в Hvidovre Hospital копенгагенский университет, Дания.

Целью предлагаемого исследования являлось изучение 1) длительности отрицательного действия таблеток EFK и 2) их эффективности в отношении длительности действия после курса лечения в течение 24 недель от избыточного веса или ожирения в сочетании с диетой с калорийностью 5,04 мДж/день.

Исследования проводились открытым методом. Все пациенты получали таблетки EFK и диету калорийностью 5,04 мДж/день в течение 24 недель.

В исследовании участвовали все те пациенты, которые полностью прошли весь курс исследования в течение 24 дней, описанных в примере 5, и не проявляли отрицательных реакций на лекарства, и которые, кроме того, не получали после этого лекарства в течение 2 недель. Дополнительным условием для участия было то, чтобы к началу настоящего исследования пациенты имели избыточный вес более 10%.

Таким образом, в исследовании принимали участие 128 пациентов: 30 из группы пациентов, принимавших EFK, 31 из группы пациентов, принимавших эфедрин, 35 из группы пациентов, принимавших кофеин, и 32 из группы пациентов, принимавших плацебо.

101 пациент (85 женщин и 16 мужчин) прошли весь курс исследований в течение 50 недель. 27 пациентов выбыли из числа участвующих: 6 из группы пациентов, принимавших EFK, и по 7 из всех остальных групп.

Во всех случаях фиксировалось с чем связано прекращение участия в исследовании: неэффективность курса, отрицательные реакции на лекарства, отклонение лабораторных анализов от нормы, осложнение болезни, наступление беременности, несоблюдение режима приема лекарств, нежелание участвовать в продолжении опытов или какиеи-либо другие причины. Фиксировались также случаи, когда отстранение пациентов от участия в исследовании было связано с достижением ими идеального веса. Если пациенты отстранялись от дальнейшего участия в исследованиях из-за отрицательных реакций на лекарство или отклонения лабораторных анализов от нормы, то они наблюдались до исчезновения этих симптомов и затем в течение как минимум трех месяцев ежемесячно приглашались для обследования.

Исключались из числа участников:
1) пациенты, страдающие гипертензией (диастолическое кровяное давление выше 110 мм рт. ст.) и/или принимавшие гипотензивные средства (за исключением диуретиков);
2) кормящие или беременные женщины или женщины, желающие забеременеть;
3) пациенты, страдающие болезнями, на ход которых испытуемые лекарства могли бы оказывать воздействие или которые могли бы представлять опасность для здоровья пациента, например пациенты, страдающие желудочно-кишечными заболеваниями, которые могут затруднить абсорбцию лекарства; пациенты с сердечными заболеваниями, такими как аритмия, синдром WPW и некомпенсированные болезни сердца; пациенты, страдающие требующими серьезного лечения эндокринными заболеваниями (диабет типа I) или заболеванием щитовидной железы;
4) пациенты, страдающие в течение последних 5 лет до начала исследований злокачественными заболеваниями (за исключением carcinoma basocellulare), психозами, привыкшие к чрезмерному употреблению лекарств или страдающие лекарственной зависимостью;
5) пациенты, которые в течение 14 дней до начала исследований принимали лекарства, способствующие наращиванию веса, средства, снижающие аппетит (другие, чем EFK), эфедрин или кофеин, или ингибиторы моноаминоксидазы;
6) пациенты, сменившие оральные контрацептивы в течение последних трех месяцев перед началом исследований или принимавшие в течение последнего месяца перед началом исследований теофиллин или другие метилксантины;
7) пациенты, лечившиеся от ожирения хирургическими методами (за исключением косметической хирургии);
8) пациенты, результаты лабораторных анализов которых к началу исследований отклонялись от нормы и которые давали повод для предположения, что участие пациентов в исследовании может нанести ущерб их здоровью.

Повышенное содержание триглицеридов кислот и холестерина в сыворотке не служило причиной для исключения пациентов из числа участников эксперимента.

Курс лечения. Получали таблетки EFK с содержанием эфедрин гидрохлорида 20 мг и кофеина 200 мг, полученные по способу в соответствии с примером 1C.

Пациенты соблюдали диету с калорийностью 5,04 мДж/день [34] и принимали по 1 таблетке 3 раза в день за час до еды.

В процессе исследований пациентам не разрешалось принимать никаких других лекарств от избыточного веса или ожирения. Лишь после консультации с врачом разрешалось принимать лекарства, которые не оказывали влияния на действие испытуемого препарата.

Прием лекарства контролировался по количеству возвращаемых таблеток.

Перед началом исследований пациентам рассказывали о них и оценивали возможность их участия в этих исследованиях на основе вышеописанных критериев. Получалось согласие пациентов добровольно участвовать в исследованиях и определялся их вес.

Прием лекарств начинался через 28 дней после окончания курса исследований, описанных в примере 5. Из данных этих исследований были известны возраст, пол и вес пациентов, а также принимавшиеся ими помимо испытуемых лекарства и общее потребление кофеина. Все эти параметры использовались в качестве исходных для оценки результатов настоящего исследования.

Раз в четыре недели пациенты принимались диетологом. Нумерация недель являлась продолжением нумерации недель в примере 5. Визиты к врачу в данном исследовании проходили в следующие недели: 26, 30, 34, 38, 42, 46 и 50. Во время этих визитов пациенты получали инструкции по диете, их взвешивали и опрашивали об отрицательных реакциях на лекарства.

Если вес пациентов в ходе исследований снижался до идеального, лекарственную терапию прекращали, однако пациенты могли продолжать консультироваться у диетологов.

В недели 38 и 50 врач измерял кровяное давление и частоту сердечных сокращений, записывал отрицательные реакции на лекарство, если таковые были, и изменения в приеме других лекарств.

В неделе 50 снималась ЭКГ и бралась кровь для лабораторных исследований.

Оценка эффективности лечения.

Вес. Пациенты взвешивались врачами-диетологами на весах с десятичной шкалой при каждом визите. Использовались весы Seca electronic (модель 707). Верхний предел взвешивания составлял 200 кг, цена деления шкалы равнялась 100 г. Раз в неделю производилась калибровка весов.

Безопасность исследований.

Субъективные методы. При каждом визите путем прямого опроса и/или по сообщениям самих пациентов записывались отрицательные реакции на лекарство.

Объективные методы.

Измерение кровяного давления и определение частоты сердечных сокращений. Кровяное давление измерялось сфигмоманометром Trimline (РуМаН) в недели 38 и 50. Измерения проводились в сидячем положении на правой руке пациента после пребывания его в покое в течение не менее 10 мин. Использовали манжету шириной 14-16 см. Манометрическое давление медленно и постепенно снижали, начиная от 200 мм рт.ст., регистрируя давление при первом звуке Короткова, которое принимали за систолическое кровяное давление. Диастолическое кровяное давление определяли как манометрическое кровяное давление в момент, когда характер звуков Короткова изменялся с резких ударов на приглушенные.

Частоту сердечных сокращений определяли путем измерения методом пальпации частоты периферийной пульсации в правой радиальной артерии. Измерения также проводились в недели 38 и 50.

ЭКГ. В неделю 50 снималась 9-канальная ЭКГ (подробности см. в примере 5).

Лабораторные методы. Пробы крови и мочи для лабораторных исследований брали в неделю 50. Проводили те же анализы, что и в примере 5.

Статистические методы. Для выяснения вопроса, оказывают ли лекарства, получавшиеся пациентами в ходе исследований, описанных в примере 5 (EFK, эфедрин, кофеин и плацебо), какое-либо влияние на результаты настоящего исследования в отношении эффективности и безопасности, полученные данные анализировались с учетом принимаемых ранее лекарств (т.е. пациенты по-прежнему были разбиты на четыре группы в соответствии с примером 5).

Статистический анализ данных по взвешиванию проводился таким же образом, как и в случае примера 5, с использованием данных, представленных в виде разности между весом в день обследования через каждые четыре недели и первоначальным весом (неделя 26).

Средние разности кровяного давления и частоты сердечных сокращений между значениями в неделю 38 и 50 и исходными значениями (неделя 0) и между значениями в неделю 24 и неделю 50 сравнивали с исходными значениями для каждой группы по методу t-теста Стьюдента с простой выборкой (SAS Univariate). Сравнение групп пациентов, принимавших различные лекарства, для данного визита осуществляли с помощью одностороннего дисперсного анализа (SAS, GLM).

Анализ лабораторных данных проводили с использованием разностей между значениями, полученными в неделю 50, и исходными значениями (неделя 0).

Использование для анализа разностей с вычитанием исходных значений было необходимо для исключения влияния случайных погрешностей на конечный результат. В противном случае пациенты с большим весом, которые, например, позже выбывали из числа участвующих в испытаниях, могли оказывать влияние на средние значения при следующем контрольном обследовании и таким образом искажать результаты. Ряд пациентов со специфическими характеристиками использовался для всех других обследований. Анализ проводился с помощью Chi²-теста (SAS PROC FREQ).

Результаты.

Потеря веса. Все пациенты в ходе эксперимента получали EFK и все они дополнительно теряли вес, хотя статистически потери веса в продолжение 24 недель настоящего эксперимента были значительно ниже, чем в исследовании в соответствии с примером 5. Следует учесть однако, что в данном случае использовалась диета с калорийностью 5,04 мДж/день по сравнению с 4,2 мДж/день диеты в соответствии с примером 5. Кроме того, в группу пациентов, участвовавших в настоящем исследовании, были включены только пациенты, которые к концу исследования, описанного в примере 5, имели избыточный вес более 10%. Таким образом, не все пациенты, включенные в группу, начинавшую исследования с недели 0, участвовали в настоящем исследовании, начавшемся в неделю 26.

В неделю 26 средний вес с учетом всех пациентов, принимавших участие в исследовании, был равен 83,90 кг. Вес пациентов на этой стадии исследований снижался, и средняя потеря веса в неделю 50 составляла 2,2 (p = 0,0001). Вес пациентов в течение всего времени исследования был значительно ниже, чем в неделю 26.

Если сравнивать потери веса у пациентов с разбивкой их на прежние 4 группы приема лекарств (пример 5), с учетом того, что, начиная с недели 26, все они получали таблетки EFK, то оказывается, что средняя потеря веса в группе пациентов, принимавших EFK, составляла 1,6 кг (p = 0,12), в группе пациентов, принимавших эфедрин - 0,8 кг (p = 0,33), в группе пациентов, принимавших кофеин - 3,1 кг (p = 0,001) и в группе пациентов, принимавших плацебо - 3,3 кг (p = 0,003). Таким образом, пациенты, которые в ходе исследований в соответствии с примером 5 принимали кофеин или плацебо, дополнительно теряли вес в настоящем исследовании, тогда как у пациентов из групп, принимавших EFK и эфедрин, наблюдалось лишь небольшое снижение веса. Через 50 недель не наблюдалось различия между пациентами из разных групп.

Подводя итог, можно сделать вывод, что все пациенты в ходе настоящих исследований дополнительно теряли вес. Наибольший эффект наблюдался в случае пациентов, не принимавших активного лекарства, или принимавших кофеин (пациенты из групп, получавших плацебо, соответственно кофеин). Это свидетельствует о более высокой эффективности EFK по сравнению с плацебо и кофеином.

Безопасность исследований.

27 пациентов в ходе исследований были отстранены от дальнейшего участия: 4 из них из-за отрицательных реакций на лекарство (2 из группы пациентов, принимавших эфедрин, и 2 из группы пациентов, принимавших кофеин), 2 с жалобой на тахикардию, 1 - на депрессию, нервозность и раздражительность и 1 на повышенное потение, дизестезию пальцев и сонливость. Остальные 23 пациента были отстранены по разным причинам, например из-за несоблюдения режима приема лекарств, из-за нежелания участвовать в дальнейшем исследовании, из-за наступления беременности или других осложнений (например, из-за инфекционных заболеваний).

80% пациентов сообщили об отрицательных реакциях на лекарство. Главным образом они были связаны с центральной нервной и сердечно-сосудистой системами. В остальном отрицательные реакции были несильными и кратковременными. Большинство из них (75%) наблюдались в начале исследования.

Таким образом, таблетки EFK не оказывают серьезного побочного действия,
Объективные методы.

Измерение кровяного давления и определение частоты сердечных сокращений. В процессе проведения исследования в течение 50 недель наблюдалось снижение и систолического, и диастолического кровяного давления.

Систолическое кровяное давление снизилось примерно на 6 мм рт. ст. у всех пациентов с момента начала исследований (неделя 0) и до недели 38 (p = 0,0001) и недели 50 (p = 0, 0002). В течение последних 24 недель приема лекарства оно не изменялось. После 50 недель приема лекарства систолическое давление снизилось у пациентов всех четырех групп. Различие между пациентами отдельных групп отсутствовало (p = 0,88).

Диастолическое кровяное давление снизилось примерно на 2 мм. рт. ст. (p = 0,02) после 38 недель и на 4 мм рт. ст. (p = 0,0002) после 50 недель приема лекарства у всех пациентов. После 50 недель приема лекарства диастолическое кровяное давление снизилось у пациентов всех четырех групп (в группе EFK статистически незначимо) (p = 0,15). Существенного различия между пациентами разных групп не наблюдалось (p = 0, 57).

В недели 38 и 50 частота сердечных сокращений незначительно снизилась у всех пациентов.

Лабораторные методы. Для анализа изменения этих параметров использовали разности между значениями в недели 50 и 0. Изменения результатов лабораторных анализов не было отмечено, за исключением существенного снижения содержания триглицеридов кислот в сыворотке, глюкозы в крови, взятой натощак, и холестерина (табл. 13, 14 и 15 соответственно).

Метаболические факторы.

Содержание глюкозы в крови, взятой натощак. Как видно из табл. 13, содержание глюкозы в сыворотке крови, взятой натощак, резко снижалось (более чем на 10% = 0,58 ммоль/л). Различие между отдельными группами отсутствовало.

Холестерин. Прием лекарства оказывал влияние на содержание холестерина в сыворотке после 50 недель. Как видно из табл. 14, существенные изменения имели место после 24 недель (пример 5), однако в неделю 50 содержание холестерина снизилось у пациентов всех четырех групп. Снижение было существенным (примерно на 5%) и значимым (p=0,002). Различия между пациентами разных групп отсутствовали.

Триглицериды (TGA). Прием лекарства пациентами привел к снижению содержания TGA в сыворотке. Как видно из табл. 15, снижение было существенным (примерно на 20%) и явно значимым (p=0,0001). Различия между пациентами разных групп отсутствовали.

Помимо этого, у двух пациентов к концу исследования возросло содержание билирубина. Кроме того, однако, у них не было никаких других признаков заболевания печени.

Помимо результатов, полученных в примере 5, данные открытых исследований показали, что:
1) EFK является эффективным и безопасным лекарством для лечения от избыточного веса или ожирения в комбинации с диетой калорийностью 5,04 мДж/день;
2) снижение веса, достигнутое в результате приема EFK в ходе исследований в течение 0 - 24 недель, сохраняется и в ходе настоящего исследования;
3) прием таблеток EFK приводит к существенному снижению содержания в сыворотке холестерина, триглицерида и глюкозы.

Пример 7. Определение изотермогенной эффективности метилксантинов: теофиллина, кофеина и их комбинации.

Задачей предлагаемого исследования являлось изучение термогенного эффекта при введении пациентам различных доз теофиллина (50, 100 и 200 мг), кофеина 200 мг, комбинации 30 мг кофеина и 50 мг теофиллина и плацебо, обнаружения возможной взаимосвязи между величиной дозы теофиллина и эффектом и определение изотермогенных доз кофеина и теофиллина.

Под изотермогенными дозами двух или нескольких соединений в данном случае имеются в виду дозы, которые после орального введения субъектам, в течение 14 ч до этого не получавшим пищи, вызывает одинаковое увеличение расхода энергии организмом, причем расход энергии суммируется по меньшей мере за 3 ч по сравнению с исходной величиной.

Исследования подтвердились двойным слепым методом с контролем с использованием плацебо. Порядок проведения опытов был рандомизирован.

Для участия в опытах было отобрано после получения их согласия 6 здоровых нормальных субъектов обоего пола.

Исключались из числа кандидатов субъекты, постоянно потреблявшие более 1 - 2 чашек кофе в день (более 100 - 240 мг кофеина). Добровольцам не разрешалось принимать на время исследований помимо испытуемых никаких других лекарств.

Использовавшиеся лекарства.

A. Таблетки теофиллина с содержанием теофиллина 50, 100 или 200 мг.

B. Таблетки кофеина с содержанием кофеина 200 мг.

C. Таблетки, содержащие 30 мг кофеина и 50 мг теофиллина.

D. Таблетки плацебо, не содержащие активного лекарства.

Все таблетки были одинаковы по весу, внешнему виду и вкусу.

Таблетки вводились орально в виде единичной дозы и запивались 300 мл водопроводной воды.

План исследований, оценка его результатов, включая определение расхода энергии и использование различных лабораторных методов, а также безопасность исследований и статистический анализ подробно описаны в примере 2.

На основе анализа полученных данных может быть сделан вывод о взаимосвязи между дозой теофиллина и величиной эффекта. Определен также изотермогенный эффект теофиллина и кофеина. Кроме того, определен термогенный эффект комбинации 50 мг теофиллина и 30 мг кофеина.

Пример 8. Рандомизированное, проводимое двойным слепым методом многоплановое изучение действия таблеток EFK, представляющих собой комбинацию эфедрина и кофеина, на снижение веса при лечении страдающих ожирением пациентов по сравнению с таблетками Isomeride^® , содержащими дексфенфлурамин.

Задачей настоящего исследования является изучение эффективности таблеток EFK (комбинации 20 мг эфедрин гидрохлорида и 200 мг кофеина, DAK) и таблеток Isomeride^® (15 мг дексфенфлурамина, Servier) в комбинации с диетой ограниченной калорийности в отношении снижения веса, а также их безопасности и разработка программы увеличения физической активности в течение 15 недель, составляющих курс лечения.

Исследования проводились радомизированным двойным слепым методом на двух параллельных группах, получавших разные лекарства (группа, получавшая Isomeride, и группа, получавшая EFK).

Все пациенты получали в течение 15 недель испытуемое лекарство и диету калорийностью 5, 0 мДж/день. Кроме того, пациенты получали инструкции по программе физических упражнений повышенной интенсивности.

Всего для участия в исследовании было отобрано 103 пациента обоего пола. 53 из них были включены в группу, получавшую Isomeride, и 50 в группу, получавшую EFK. Пациенты отбирались их врачами общей практике из 10 разных центров. Большая часть пациентов (67 человек) вошла из 3 центров. Из остальных 7 центров в исследовании принимали участие 4 - 7 пациентов.

В группу участников включались пациенты в возрасте 18 - 35 лет с избыточным весом более 20 и менее 80%, давшие согласие на участие в исследовании.

Не включались в число участников:
1) пациенты, принимавшие в течение последних двух месяцев средства, снижающие аппетит;
2) пациенты, страдающие кишечно-желудочными заболеваниями, следствием чего могла бы быть пониженная абсорбция лекарства;
3) беременные или кормящие женщины или женщины, желающие забеременеть;
4) пациенты, болевшие в течение последних 5 лет злокачественными заболеваниями (за исключением carcinoma basocellulare);
5) пациенты, лечившиеся от ожирения хирургическим способом (за исключением косметической хирургии);
6) пациенты, злоупотребляющие приемом лекарств или страдающие алкоголизмом (ранее или в настоящее время);
7) пациенты, страдающие тяжелыми эндокринологическими заболеваниями, например диабетом типа I (IDDM) или заболеваниями щитовидной железы, требующими терапевтического лечения;
8) пациенты, в течение 14 дней до начала исследований принимавшие ингибиторы моноаминоксидазы;
9) пациенты, принимавшие лекарства, способствующие наращиванию веса, например литий, valproate, трициклические антидепрессанты или нейролептики;
10) пациенты, сменившие в течение последних 3 мес до начала исследований экстрогенные лекарства;
11) пациенты, потерявшие более 8 кг веса за последние 2 мес до начала исследований;
12) пациенты, страдающие гипертензией (с диастолическим кровяным давлением выше 115 мм рт.ст.) и/или нуждающиеся в лечении гипотензивными средствами (за исключением диуретиков);
13) пациенты, страдающие болезнями сердца, такими как аритмия, синдром WPW или некомпенсированными болезнями сердца;
14) пациенты, страдающие глаукомой (ранее или в настоящее время;
15) пациенты, страдающие депрессией (ранее или в настоящее время) или получающие таблетки от психиатрических заболеваний.

81 пациент прошел весь курс исследований: 43 человека из группы, получавшей Isomeride, и 38 из группы, получавшей EFK.

22 пациента не закончили исследований: 10 из группы, получавшей Isomeride, и 12 из группы, получавшей EFK. В случае 8 пациентов это было вызвано отрицательной реакцией на лекарство. При этом 6 пациентов были из группы, получавшей EFK, и 2 из группы, получавшей Isomeride. 5 пациентов были исключены при оценке результатов эксперимента, поскольку промежуток времени между двумя контрольными визитами их для обследования составлял 7 - 10 недель. Выбытие остальных пациентов было обусловлено различными причинами (нерегулярным приемом лекарства, отрицательными реакциями на лекарство (ADR), осложнениями, наступлением беременности, несоблюдением режима приема лекарства, нежеланием участвовать в исследовании).

Данные по потере веса анализировались для 81 пациента, закончивших исследование, тогда как другие данные, полученные в ходе контрольных обследований, анализировались для всех пациентов.

Использовавшиеся лекарства.

A. Таблетки EFK, представляющие собой комбинацию 20 мг эфедрин гидрохлорида и 200 мг кофеина, полученные по способу в соответствии с примером 1C.

B. Таблетки плацебо, не содержавшие активного лекарства.

C. Капсулы Isomeride^®, содержащие 15 мг дексфенфлурамина.

D. Капсулы плацебо, не содержавшие активного лекарства.

Таблетки, соответственно капсулы, были одинаковы по весу, внешнему виду и вкусу.

Разбивка на группы по приему лекарства.

I. Прием по 1 таблетке EFK три раза в день и по 1 капсуле плацебо два раза в день.

II. Прием по 1 капсуле Isomeride^® два раза в день и по одной таблетке плацебо три раза в день.

Дозировка. 1 таблетка и 1 капсула утром, 1 таблетка днем и 1 таблетка и 1 капсула вечером в течение 15 недель.

На время исследований не разрешалось применять никаких других лекарств от избыточного веса или ожирения. Лишь после консультаций с врачом общего профиля разрешалось принимать лекарства, не оказывающие влияния на ход исследований. Режим приема лекарств контролировался по количеству возвращенных капсул и таблеток.

Перед началом исследований пациентов информировали об их характере. Прежде чем решить вопрос об участии пациентов в исследовании, они проходили контрольное обследование. От пациентов получалось согласие на добровольное участие в исследованиях.

Регистрировались возраст, рост, вес и пол пациентов, а также принимаемые ими другие лекарства, после чего им назначалась диета и давались инструкции по физическим упражнениям. Кроме того, брались пробы крови на клинический анализ.

В первую, третью и затем через каждые три недели пациентов во время визитов взвешивали, измеряли кровяное давление и частоту сердечных сокращений и назначали им диету и давали инструкции по физическим упражнениям.

Самое позднее в первый контрольный визит (неделя 1) проводили оценку результатов лабораторных анализов крови. При отклонении от нормы врач принимал решение, может ли пациент принимать участие в исследованиях или его следует исключить из числа участников.

Кровь брали в недели 0 и 15.

Путем рандомизации пациентов разбивали на две группы по приему лекарств. Распределение по полу в этих группах статистически не различалось (p=0,52). Средний возраст пациентов составлял 42 года, средний рост 167 см, средний вес 91 кг и средний процент избыточного веса 46%. Обе группы были сопоставимы по росту (p = 0,62), весу (p = 0,37) и проценту избыточного веса (p = 0,56). Пациенты из группы, получавшей Isomeride, были моложе: средний возраст пациентов из группы, получавшей Isomeride, равнялся 39, а у пациентов из группы, получавшей EFK, 46 годам (p = 0,33). Среднее начальное систолическое кровяное давление у пациентов из группы, получавшей Isomeride, равнялось 132, а у пациентов из группы, получавшей EFK, 139 мм рт.ст. (p = 0,06). Среднее начальное диастолическое кровяное давление у пациентов из группы, получавшей Isomeride, равнялось 85, а у пациентов из группы, получавшей EFK, 89 мм рт.ст. (p = 0, 12). Средняя начальная частота сокращений у всех пациентов равнялась 75 ВРМ. Различие между группами отсутствовало (p = 0,81). Средний индекс массы тела (BMI) в неделю 0 равнялся 33 кг/м². Различие между группами отсутствовало (p = 0,62).

Оценка результатов. Вес. Пациентов взвешивали на весах с десятичной шкалой во время каждого контрольного визита.

Пробы крови. Влияние принимаемых лекарств на содержание холестестерина в сыворотке (общего и DL) оценивали по результатам анализов крови, которую брали в недели 0 и 15.

Безопасность исследований.

Субъективные методы. Отрицательные реакции на лекарства фиксировались при каждом визите врачами общего профиля путем косвенного опроса или по заявлению самого пациента.

Объективные методы.

Обследование общего физического состояния. Перед началом исследований врач общего профиля проводил обследование общего физического состояния всех пациентов.

Измерение кровяного давления и частоты сердечных сокращений. Во время каждого контрольного визита измерялось кровяное давление и определялась частота сердечных сокращений по методике, описанной в примере 5.

Лабораторные методы. Пробы крови брали в недели 0 и 15.

Проводили следующие анализы:
гематологические параметры: гемоглобин, гематокрит, эритроциты, лейкоциты, тромбоциты;
параметры печени: билирубин, фосфаты щелочных металлов, лактатдегидрогеназа (LDH), аспартатаминотрансфераза SGOT/ASAT;
параметры почек: креатинин;
метаболические факторы: холестерин (общий и HDL).

Все клинические и химические анализы были выполнены в The Medical Laboratories, Копенгаген, Дания. Анализы проводились обычными общепринятыми методами.

Статистические методы.

За основной фактор, характеризующий эффективность метода, принимали потерю веса за 15 недель курса приема лекарства.

Вторичными параметрами были результаты клинических и химических определений ADR, систолическое и диастолические кровяные давления и частота сердечных сокращений.

Полученные данные имели типичные профили так называемых повторных измерений и анализировались обычным методом (ординарный t-тест) и методом, описанным Kenward [35]. Суть метода состоит в том, что вес в данный момент выражается через результаты, полученные в ходе одного или двух предыдущих измерений. Отклонения в ту или иную сторону могут быть приписаны эффекту, вызываемому лекарством. Этот метод, таким образом, дает возможность делать фактическую оценку данных, Преимущество метода состоит в том, что полученные с его помощью результаты являются независимыми и более чувствительны, чем обычные t-тесты.

Статистический анализ проводили путем следующего преобразования данных веса пациентов:
d_i = log₁₀(вес_i/вес₀),
где d_i - означает преобразованную переменную в неделю;
log₁₀ - десятичный логарифм;
вес_i - вес в неделю i;
вес₀ - вес в неделю 0.

К указанному преобразованию прибегали, поскольку потери веса были больше у пациентов с большим, чем у пациентом с меньшим избыточным весом.

Определение так называемой ante-структуры данных свидетельствует о сильной и лишь незначительно уменьшающейся во времени корреляции между неделями и о возрастании дисперсии. Это крайне затрудняет использование обычного дисперсионного анализа.

Для решения этой проблемы для предсказания результата нового измерения использовали самые последние результаты измерений для данного субъекта. Необходимое количество предыдущих измерений зависит от размера ante-структуры. Размер структуры определяли с учетом обратной корреляционной матрицы. Степень ante-структуры определяется числом вторичных диагоналей в матрице, имеющей разумный размер. В данном случае такой разумный размер был равен двум, т. е. для выполнения теста необходимо перед этим сделать два измерения. При этом речь идет об измерениях в недели 1 и 3, поскольку количество предыдущих измерений к этим моментам равнялось 0, соответственно 1.

Тем не менее тесты для оценки эффекта, вызываемого лекарствами, были независимыми. При проведении теста использовались следующие данные:
- логарифм отношения веса в неделю i к весу в неделю 0;
- систолическое кровяное давление в неделю i - систолическое кровяное давление в неделю 0;
- диастолическое кровяное давление в неделю i - диастолическое кровяное давление в неделю 0;
- частота сердечных сокращений в неделю i - частота сердечных сокращений в неделю 0.

Обычный t-тест проводился для оценки эффекта каждый раз при проведении измерений, а также в тех случаях, когда использовалась ante-структура.

Методы анализа данных, характеризующих сердечно-сосудистую систему.

Данные измерений систолического и диастолического кровяных давлений и частоты сердечных сокращений анализировали вышеописанным образом, т.е. с помощью обычного t-теста для измерений, выполненных при всех обследованиях и подгоночного t-теста. Принималось, что ante-структура была такая же, как и для веса 2.

Метод анализа ADR. Количество ADR для каждого лекарства и количество пациентов с ADR анализировали с помощью X²-теста. Этот метод охватывал все инцидентности ADR число пациентов с и без ADR в неделю и ADR в разных органах.

Анализ клинических и химических данных. Значения, полученные в ходе промежуточных обследований и в неделю 15, анализировали с помощью простого t-теста (SAS PROC t-тест). Различие между значениями в недели 15 и 0 также анализировали с помощью простого t-теста (SAS PROC одномерный).

Анализ демографических данных. Все различия между группами, получившими разные лекарства, в отношении демографических данных (т.е. значений в начале исследований) анализировали с помощью t-теста (SAS PROC t-тест). Анализ нормального распределения популяции не проводился.

Результаты.

Потеря веса. Снижение веса после курса лечения в течение 15 недель составляло 92,0% для группы пациентов, получавших Isomeride, и 90,5% для пациентов группы, получавшей EFK, от первоначального веса, что составляет 6,9 кг для пациентов первой и 8,3 кг для пациентов второй групп. Данные по весу пациентов приведены в табл. 16.

В табл. 17 и 18 приведены размеры t-тестов.

Как правило, потеря веса имела место при приеме обоих лекарств. У пациентов, закончивших весь 15-недельный курс исследований и принимавших Isomeride, потеря веса через одну неделю была значительно выше, чем у пациентов, принимавших EFK (p = 0,013).

В неделю 3 потеря веса у пациентов, принимавших Isomeride, была значительно выше, чем у пациентов, принимавших EFK. Наибольшей была значимость в случае пациентов, закончивших весь 15-недельный курс исследований (подгоночный t-тест, p = 0,018).

В неделю 15, т.е. к моменту, когда осуществлялась оценка исследований, наблюдалась незначительная тенденция в пользу EFK (подгоночный t-тест, p = 0,12) в отношении потери веса у пациентов с индексом массы тела BMI ≥ 30.

BMI имеет следующее определение:
BMI = вес (кг)/(рост (м))²
Индекс BMI можно использовать в качестве меры при сравнении избыточного веса у отдельных субъектов в тех случаях, когда различие в росте субъектов в данной популяции невелико. Обычно величина BMI находится в пределах 20 - 25 кг/м². Избыточный вес первой степени соответствует BMI 25 - 29,9 кг/м², избыточный вес II степени соответствует BMI 30 - 40 кг/м² и, наконец, максимальный избыточный вес соответствует BMI > 40 кг/м². Избыточный вес 20% соответствует BMI примерно 26,4 кг/м² для мужчин и 25,8 кг/м² для женщин.

Проводился анализ полученных данных по весу для пациентов, относившихся к разряду страдающих ожирением или сильным ожирением, т.е. имевших BMI ≥ 30 кг/м².

59 пациентов из числа участвовавших в исследовании имели BMI ≥ 30 кг/м², из них 29 из группы, получавшей Isomeride и 30 из группы, получавшей EFK. Через 15 недель средний вес пациентов из группы, получавший Isomeride, составлял 92,6, а средний вес пациентов из группы, получавшей EFK, 90,1% от первоначального значения, что соответствует потере веса 7,0 кг в первой и 9,0 кг во второй группах. После 15-недельного курса лечения снижение веса у пациентов из группы, получавшей EFK, было значительно выше, чем у пациентов из группы, получавшей Isomeride (подгоночный t-тест, p = 0,032).

Безопасность исследований.

50 пациентов жаловались на ADR: 43% приходилось на пациентов из группы, получавшей Isomeride, и 54% - на пациентов из группы, получавшей EFK.

Большая часть жалоб приходилась на неделю 1: 16 пациентов из группы, получавшей Isomeride, и 19 пациентов из группы, получавшей EFK (p = 0,48). В неделю 3 14 пациентов из группы, получавшей Isomeride, и 7 пациентов из группы, получавшей EFK, жаловались на ADR (p = 0, 13). В остальное время до конца исследований жалобы на ADR поступили лишь от нескольких пациентов, причем различие между группами, получавшими разные лекарства, отсутствовало.

Характер ADR между группами, получавшими разные лекарства, был различен. Пациенты, получавшие EFK, чаще жаловались на бессонницу, тошноту, тремор и возбуждение, тогда как пациенты, получавшие Isomeride, жаловались на бессоницу, жажду, головокружение, утомление и парестезию. На возбуждение и сердцебиение больше жаловались пациенты из группы, получавшей EFK, чем пациенты из группы, получавшей Isomeride (p = 0,001 и p = 0,04), тогда как пациенты из группы, получавшей Isomeride, больше жаловались на желудочно-кишечные симптомы (p = 0, 025).

Кровяное давление. После 15-недельного курса систолическое кровяное давление снизилось на 10,6 мм рт.ст. (p = 0,0001) у пациентов из группы, получавшей EFK, и на 7,8 мм рт.ст. (p = 0,001) у пациентов из группы, получавшей Isomeride. Различия между группами не наблюдалось (p = 0,41).

Лабораторные методы. После 15-недельного курса общее содержание холестерина в сыворотке снизилось у пациентов из обеих групп. У пациентов из группы, получавшей Isomeride, снижение составило 0,64 ммол/л (p = 0,0001), а у пациентов из группы, принимавшей EFK - 0,36 ммоль/л (p = 0,006). Различие между группами отсутствовало (p = 0,14).

Лечение таблетками EFK является эффективным и безопасным для пациентов с избыточным весом 20 - 80%. У пациентов, получавших EFK, вес снизился до 90,5% от первоначального по сравнению с 92,0% в случае пациентов, получавших Isomeride (p = 0,12). Это соответствует потере веса 8,3 кг в случае пациентов, получавших EFK, и 6,9 кг в случае пациентов, получавших Isomeride. В подгруппе, т.е. у пациентов с BMI ≥ 30 кг/м² (59 пациентов) среднее снижение веса составило 90,1% от исходного (9,0 кг) для пациентов из группы, получавшей EFK, и 92,6% (7,0 кг) для пациентов, получавших Isomeride. Различие между этими группами было явным (p = 0,03). Таким образом, эффективность лечения ожирения таблетками EFK, включающими комбинацию 20 мг эфедрин гидрохлорида и 200 мг кофеина, была выше по сравнению с капсулами Isomeride.

Кроме того, после 15-недельного курса у пациентов снижалось содержание холестерина в сыворотке.

Пример 9. Изучение термогенного действия таблеток с комбинацией эфедрина и кофеина при лечении страдающих ожирением женщин в комбинации с низкокалорийной диетой, проводимое двойным слепым методом с контролем с использованием плацебо.

Цель настоящего исследования заключалась в определении эффективности оказывающих термогенное действие и снижающих аппетит таблеток, содержащих комбинацию эфедрина и кофеина (20 мг эфедрин гидрохлорида и 200 мг кофеина), на потребление энергии и 24-часовой расход энергии (при продолжительности курса 8 недель) на 40 страдающих ожирением женщин. Пациентки методом случайной выборки были разбиты на две группы, одна из которых получала активное лекарство, а другая плацебо. Исследование проводилось двойным слепым методом. В задачу исследования входило также изучение влияния, если таковое имело место, β-андренэргической стимуляции на катоболизм белков и структурный состав тела. В задачу исследования, кроме того, входило определение 24-часового расхода энергии в дыхательных камерах перед приемом лекарства, в первый день приема лекарства без диеты и после 8-недельного курса в сочетании с ограниченной по калорийности диетой.

Отбор пациентов. В состав группы были включены 40 женщин в возрасте 18 - 60 лет с избыточным весом или ожирением более 30 и менее 80% (в соответствии с Metropolitan Life Insurance Table, 1983). От всех пациентов было получено согласие на участие в исследовании.

Не включались в число участников:
1) пациенты, страдающие гипертензией (с диастолическим кровяным давлением выше 130 мм рт.ст.);
2) беременные или кормящие женщины;
3) пациенты, страдающие психозами, привыкающие к чрезмерному употреблению лекарственных средств или злоупотребляющие алкоголем;
4) пациенты, нуждающиеся в приеме инсулина, страдающие аддисоновой болезнью, болезнью Иценко-Кушинга, гипо- и гипертиреозом или другими эндокринологическими заболеваниями;
5) пациенты, лечившиеся от ожирения хирургическими методами;
6) пациенты, принимавшие лекарства, оказывающие влияние на энергетический баланс;
7) пациенты, сменившие в течение последних двух месяцев оральные контрацептивы;
8) пациенты, потерявшие в последние 2 мес более 8 кг веса;
9) пациенты с отклонением лабораторных анализов от нормы.

Использовавшиеся лекарства.

А. Таблетки, включающие комбинацию 20 мг эфедрин гидрохлорида и 200 мг кофеина, полученные по способу в соответствии с примером 1C.

В. Таблетки плацебо без активного лекарства.

Все таблетки были одинаковы по внешнему виду, вкусу и весу.

Таблетки принимались орально по три раза в день и запивались 400 мл водопроводной воды. Наряду с таблетками пациентам предписывалась диета калорийностью 1000 ккал/день. Основу ее составляла диета, описанная Guaade и Astrup [34].

Схема исследований. В каждую группу (группа А и В) входило по 20 пациентов, которые в течение по меньшей мере одной недели перед первым пребыванием в дыхательной камере получали диету из расчета 40 ккал/кг нежирной массы (LBM). В течение 24 ч пребывания в дыхательной камере методом косвенной калориметрии измерялся расход энергии. Исследования в камере проводились по стандартной программе, с приемом пищи, ездой на велосипеде и т.д.).

После первого пребывания в дыхательной камере начинался курс приема таблеток EFK или плацебо. Помимо первого, проводились еще два исследования в дыхательной камере: одно в первый день после начала приема лекарств и второе через 8 недель. Кроме того, еженедельно пациенты взвешивались и у них измерялось кровяное давление и определялась частота сердечных сокращений, а в недели 2, 4, 6 и 8 бралась кровь для анализов.

Полученные данные анализировались статистическими методами, например методом многофакторного дисперсного анализа, с тем, чтобы показать различие в расходе энергии пациентами, входящими в разные группы.

Пример 10. Влияние композиции, включающей комбинацию эфедрина и кофеина, вводившейся орально в виде добавки к корму свиньям, на соотношение жира и мяса.

Опыты проводили на пяти параллельных группах, получавших различные лекарства, по 5 х 5 - факториальной схеме.

Опыты проводились на шести пометах пяти хряков (кроссбреддатской и Йоркширской пород) весом 60 - 100 кг.

При отборе в качестве подопытных животных кастрированных хряков предпочтение последним по отношению к самками и некастрированным самцам было отдано вследствие того, что они содержат больше жира, и поэтому предполагалось, что эффект EFK, выражающийся в уменьшении накопления жира, в этом случае будет более ярко выражен и его легче можно будет определить.

Количество использующихся в опыте животных рассчитывали исходя из следующих посылок:
1. Вариация в составе мяса (σ) - 7%.

2. Опыт должен позволить определять различие (δ) в 5%.

Исходя из этих посылок, количество животных в одной группе может быть рассчитано следующим образом [40]:
n = (Z_α+Z_β)²σ_D /δ²
Поскольку эксперимент проводился на самцах из помета, полученные результаты можно рассматривать как парные [40]. Отсюда

При дисперсионном анализе, проводимом по двум маршрутам, степень свободы может быть разделена между общим средним значением (1), числом пометов (4), количеством лекарства (4) и ошибкой (IC).

Использовавшиеся лекарства. Все группы (I, II, III, IV и V) получали соответствующую комбинацию эфедрин гидрохлорида и кофеина в виде порошка, смешанного с кормом. Состав корма приведен в табл. 19. Различные количества эфедрин гидрохлорида и кофеина добавлялись к порошкообразному корму перед использованием и хорошенько перемешивались для получения корма с нужной концентрацией EFK. В ходе эксперимента свиньи получали корм в достаточном количестве. Содержание белков в корме было выше обычного (17%) для оптимального роста. Более высокое содержание белков было выбрано исходя из тех соображений, что если EFK ускоряет синтез белков, т.е. увеличивает содержание мяса, то этот эффект нельзя будет, по-видимому, объяснить, если свиньи будут получать корм с нормальным содержанием белков для оптимального роста.

Разбивка на группы.

В шести пометах кастрированные хряки были разбиты на 5 групп, различающихся по количеству получаемого с кормом EFK.

I. Группа, получавшая корм с плацебо, не содержащего эфедрин гидрохлорида и кофеин.

II. Группа, получавшая корм с содержанием 14 мг эфедрин гидрохлорида и 140 мг кофеина на кг корма (в дальнейшем для обозначения комбинации эфедрин гидрохлорид/кофеин используется выражение 14/140 мг EFK).

III. Группа, получившая корм с добавкой 28/280 EFK.

IV. Группа, получавшая корм с добавкой 56/560 EFK.

V. Группа, получавшая корм с добавкой 112/1120 мг EFK.

Исходя из того, что хряк весом 80 кг потребляет примерно 3 кг корма в день [36, 37] , содержание EFK для каждой группы соответствует 0/0, 0,5/5, 1,0/10, 2,0/20 и 4/40 мг EFK на кг живого веса. При весе 60 кг дневной расход корма составляет примерно 2,7, а при весе 100 кг - 3,5 кг [36, 37]. Это означает, что доза в расчете на кг живого веса несколько изменяется в ходе эксперимента. Это иллюстрируется данными табл. 20. При выражении этой дозы в единицах на кг нежирной части мяса эта разница будет меньше, поскольку в течение этого периода масса накапливаемого жира возрастает [36, 37].

При определении интервала доз исходили из результатов, полученных при исследованиях, проводимых на людях, в ходе которых было установлено, что эффективной является доза EFK 20/200 мг три раза в день, т.е. доза, соответствующая примерно 0,5-0,7 мг эфедрин гидрохлорида и 1,5-2,3 мг кофеина на кг веса.

Известно, что салбутамол в количестве 3 м.д. (3 мг/кг пищи) снижает количество накапливаемого жира и увеличивает количество белков у растущих свиней [38, 39]. При лечении людей от астмы рекомендуемая доза эфедрина в 10 раз выше, чем салбутамола. Отсюда напрашивается предположение, что оптимальный эффект при введении EFK свиньям будет наблюдаться при нахождении дозы в указанных пределах.

Схема эксперимента.

Регистрация и процесс роста. Еженедельно регистрировали количество потребляемой пищи и вес свиней. Из полученных данных рассчитывали дневной привес, потребление и усвоение пищи.

Убой. При достижении свиньями веса 100 кг их оглушали в атмосфере диоксида углерода и спускали кровь. Туши разделывали, разделяя мясо, подкожный, мышечный жир, кожу и кости. Кроме того, определяли площадь сечения Longissimus dorsi у последнего ребра [53]. Такая разделка позволяла рассчитать содержание различных анатомических фракций по отношению к весу туши и определить отношение масс жировой ткани и нежирной части мяса.

Полученные данные анализировали с помощью статистических методов, в частности с помощью многофакторного дисперсионного анализа. Полученные результаты позволяют сделать вывод о различии в содержании мяса и жира у животных из разных групп.

Список литературы:
1. Council on Scientific Affairs (1988). Treatment of obesity in adults. JAMA 260, 2547-48.

2. Dulloo, A. and D.S. Miller (1989). Epheadrine, caffeine and aspirin: "Over-the-counter" drugs that interact to stimulate thermogenesis in the obese. Nutrition 5, 7-9.

3. Astrup, A. V. (1989). Treatment of obesity with thermogenic agents. Nutrition 5, p. 70.

4. Astrup A. (1986). Thermogenesis in human brown adipose tissue and skeletal muscle induced by sympatomimetic stimulation. Acta Endocrinol. 112, suppl. 278, 1-32.

5. Hollands, M.A., J.R.S. Arch and M.A. Cowthorne (1981). A simple apparatus for compactive measurements of energy expenditure in human subjects: The thermic effect of caffeine. Am. J. Clin. Nutr. 34, 2291-2294.

6. Astrup, A., J. Bulow, J. Madsen and N.J. Christensen (1985). Contribution of BAT and skeletal muscle to thermogenesis induced by ephedrine in man. Am. J. Physiol. 218, E 507 - 514.

7. Astrup, A. (1987) Reduced energy expenditure contributes to obesity in predisposed individuals: Implications for treatment with thermogenic agents. J. Obes. Weight Reg. 6, 3 - 20.

8. Dulloo, A. G. and D.S. Miller (1986). The thermogenic properties of ephedrine/methylxanthine mixtures: Human studies. Int. J. Obesity 10, 467 - 481.

9. Cesari, H.P., R. Pasquali, F. Casimirri, N. Melchionda, C. Stefanini and A. Raitano (1989). The therapeutic dilemma of ephedrine in obesity and the inefficacy of caffeine. Int. J. Obesity 13, Suppl. 1, 152.

10. Eriksen. N. (1982). U.K. Patent 2004183B.

11. Editorial (1984). Drug Treatent, July 1984, 43-51.

12. Sebok. M. (1985). A double-blinded placebo-controlled, clinical study of the efficacy of a phenylpropanolamine/caffeine combination product as an aid to weight loss in adults. Curr.Ther.Res. 37, 701-708.

13. Goth. A. (1981). Medical Pharmacology, 10th. Ed., Mosby Publ., U.S. A. p. 190ff.

14. Arch. J. R.S., A.T. Ainsworth, M.A. Cawthorne, V.Piercy, M.V. Sennitt, V.E. Thody, C. Wilson and S. Wilson (1984). Nature, 309, 163-165.

15. Reminton's Pharmaceutical Sciences, 16th. Ed. (1980). Mack Publishing Company, Easton, U.S.A.

16. Durnin, J. V. G.A. and J. Womersley (1974). Body fat assessed from total body density and its estimation from skinfold thickness. Br.J.Nutr. 32, 77-97.

17. Jecquier, E. (1987). Energy metabolism in the human body. In Bender, A. E. and L.J. Brookes (eds.): Body weight control, Churchill Livingstone, 17.

18. Segal, K.R. (1987). Comparison of indirect calorimetric measurements of resting energy expenditure with a ventilated hood facemask, and mouth piece. Am.J.Clin.Nutr. 45, 1420-1423.

19. Scholander, P.F. (1947). Analyses for accurate estimation of respiratory gases in one-half cubic centimeter samples. J. Biol. Chem. 167, 235.

20. Weir. J.B. de V. (1949). New methods for calculating metabolic rate with special reference to protein metabolism. J. Physiol. 109, 1-9.

21. Garby, L. and A. Astrup (1987). The relationship between the respiratory quotient and the energy equivalent of oxygen during simultaneous glucose and lipid oxidation and lipogenesis. Acta Physiol.Scand. 129, 443-444.

22. Laurell, S. and G. Tibbling (1967). Colorimetric microdetermination of free fatty acids in plasma, Clin.Chim.Acta, 16, 57-62.

23. Bergmayer, H.V. and E.Bernt. Bestimmung mit Glucoseoxydase und Peroxydase (1970). In Bergmayer H.V. (ed.): Methoden der enzymatischen Analyse, Verlag Chemie, Wenheim, 1172-1181.

24. Laurell, S. and G. Tibbling (1966). An enzymatic fluorometric micromethod for the determination of glycerol. Clin. Chem. Acta 13, 317-322.

25. Noll, F. (1974) L(+)-Lactate. Determination with LDH, GPT and NAD. In Bergmeyer H V. (ed.): Methods of enzymatic analysis, 2nd ed.. Academic Press, New York, 1475.

26. Giegel, J.L., A.B. Ham and W. Clema (1975). Manual and semiautomated procedures for measurement of triglyceride in serum. Clin. Chem. 21, 1575-1581.

27. Christensen, N. J., P. Vestergaard, T. Sorensen and O.J. Rafealsen (1980). Cerebrospinal fluid adrenaline and noradrenaline in depressed patients. Acta Psychiat.Scand. 61, 178-182.

28. Brown, B.W. and M. Hollander (1977). Statistics, a biochemical introduction. John Wiley & Son, New York, 261-292.

29. Willems, H. J.J., A. van der Horst, P.N.F.C. de Goede and G.J. Haakmeester (1985). Determination of some anticonvulsants, antiarrhytmics, benzodiazepines, xanthines, paracetanol and chloramphenicol by reversed phase HPLC. Pharm.Weekbl.Sci.Ed. 7, 150.

30. Lurie, I.S. (1981). Improved isocratic mobile phases for the reverse phase ion-pair chromatographic analysis of drugs of forensic interest. J. Liq.Chromacogr. 4, 339.

31. Lai, C. M. , R. G. Stoll. Z.M. Look and A. Jacobi (1979). Urinary excretion of chlorpheniramine and pseudoephedrine in humans. J.Pharm.Sci. 68, 1243.

32. Nelder, J.A. and R. Mead (1965). Comput.J. 7, 308.

33. Andersen, T., O.G. Backer, A. Astrup and F. Quaade (1986). Nutrition 2, 83-86.

34. Quaade, F. and A. Astrup (1988). Is a good quality of life compatible with a slimming diet? What can we do to make dieting easier for the obese. Medicographica 10, 21-23.

35. Kenward, M. G. (1987). A method for comparing profiles of repeated measurements. Appl. Statist. 36, 296-308.

36. Whitlemore, C.T., Tullis, J.B. & Emmans, G.S. 1988. Protein growth in pigs. Anim. Prod. 46, 437-445.

37. Donker, R.A., Den Harlog, L.A., Brascamp, E.W., Merks, J.W.M., Noordewier, G.J. & Buiting, G.A.J. 1986. Restriction of feed intake to optimize the overall perfomance and composition of pigs. Livest. Prod. Sci. 15, 353-365.

38. Oksbjerg, N., Blackshaw, A., Henckel, P., Fernandez, J.A.F. & Agengaard, N. 1990. Alterations in protein accretion and histochemical characteristics of the M. longissimus dorsi in pigs caused by salbutamol (a β-adrenergic agonist). Acta Agric. Scand. (submitted).

39. Warriss, P. D., Kerstin, S.C., Rolph, T.P. & Brown, S.N. 1990. The effects of the beta-adrenergic agonist salbutamol on meat quality in pigs. J. Anim. Sci. 68, 128-136.

40. Snedecor, G.W. & Cockran, W.G. Statistical Methods. Sixth edition. Ames, Iowa, USA.

41. Jensen. K.B., Dane, P. Draby, N., Hansen. S.H. & Kanstrup, J. 1980, Helsinger-pillen som slankemiddel. Ugeskr. Leger, 1499-1501.

42. Williams, P.E.V. 1987. The use of β agonists as a means of altering body composition in livestock species. Nutrition Abstracts and Reviews (Series B). 57, 453-464.

43. Hanrahan, J.P. 1987. Beta-agonists and their effects on animal growth and carcass quality. Elsevier Applied Science, London and New York.

44. Anderson, D.B., Veenhuizen, E.L., Waitt, W.P. Paxton, R.E. and Young, s.s. 1987. The effect of dietary protein on nitrogen metabolism, growth performance and carcass composition of finishing pigs fed ractopamine. Federation Proceedings. 1021 (Abstract).

45. Warris, P.D. Kestin, S.C., Rolph, T.P. and Brown, S.N. 1990. The effects of the beta-adrenergic agonist salbutamol on meat quality in pigs. J. Anim.Sci. 68, 128-136.

46. Buttery, P.J. and Dawson, J.H. 1987. The mode of action of beta-agonists as manipulators of carcass composition. In "Beta- agonists and their effects on animal growth and carcass quality". Elsevier Applied Science, London and New York, 29-44.

47. Veenhuizen, E. L. Schmiegel, K.K., Waitt. W.P. and Anderseon, D.B. 1987, Lipolytic growth, feed efficiency, and carcass responses to phenethanolamines in swine. J.Anim.Sci. 65, 130.

48. Peterla, T.A., Richs, C.A. and Scanes. C.G. 1987. Comparison of effects of β agonists and recombinant bovine somatotropin on lipolysis and lipogenesis in ovine adipose tissue. J.Anim.Sci. 65, 278.

49. Peterla, T. A. , Richs, C. A. and Scanes, C.G. 1988. Cimaterol, α-,β -adernergic agonist, directly affects lipolysis and lipogenesis in porcine adipose tissue in vitro. J.Anim.Sci. 66, 249.

50. Thornton, R.F., Tume, R.K., Payne, G., Larsen, T.W., Johnson, G.W., and Hohenhaus, M.A., 1985. The influence of the β₂-adrenergic agonist, clenbuterol, on lipid metabolism and carcass composition of sheep. Proc. New Zealand Soc. Anim. Prod. 45, 97-101.

51. Adeola, O. , Ball, A.O., Young, L.G., 1989, Ractopamine stimulates porcine myofibrillar protein synthesis, J. Anim. Sci. 67, Suppl. 1, 191.

52. Wilson. M.A. Zhong, C., Forsberg, N.E., Dalrymple, R.H. and Ricks, C. A. 1988. Effects of cimaterol on protein synthesis protein degradation, amino acid transport and acetate oxidation in sheep external infercostal muscle. Nutrition Research 8, 1287-1296.

53. EEC 1979. Development of uniform methods for pig carcass classification in the EEC Document Vl/5804/78 rev.

Реферат

Использование: в медицинской практике для лечения избыточного веса или ожирения. Сущность изобретения: композиция, включающая в качестве активного компонента L-эфедрин, выбранный из группы (1R, 2S)- 2-метиламино-1-фенил-1- пропанол, (1S, 2R)-2-метиламино- 1-фенил-1-пропанол и их комбинации и кофеин в форме фармацевтической соли при соотношении эфедрина к кодеину 1 : 12, и способ лечения, предусматривающий 10 - 40 мг на разовую дозу эфедрина, способ улучшения качества туши домашнего животного. 3 с. и 3 з.п. ф-лы, 20 табл.

Формула