Пептидные эпоксикетоны для ингибирования протеасомы - RU2450016C2

Код документа: RU2450016C2

Чертежи

Описание

Предшествующий уровень техники

В эукариотах деградация белка преимущественно опосредована через метаболический путь убиквитина, в котором белки, нацеливаемые для деструкции, лигированы с 76 аминокислотой полипептида убиквитина. Затем, после нацеливания, убиквитинированные белки служат в качестве субстратов для 26S протеасомы, поликаталитической протеазы, которая расщепляет белки на короткие пептиды посредством воздействия трех главных протеолитических активностей. Наряду с имеющейся главной функцией в функциональном внутриклеточном белковом цикле, опосредованная протеасомой деградация также играет ключевую роль во многих процессах, таких как презентация главного комплекса гистосовместимости (МНС) I класса, апоптоз и жизнеспособность клеток, процессинг антигена, активация NF-kB и трансдукция провоспалительных сигналов.

20S Протеасома представляет собой поликаталитический комплекс протеазы, имеющий цилиндрическую форму, 700 кДa, включающий 28 субъединиц, классифицируемых как α- и β-тип, который скомпонован в виде 4 стекированных (сложенных в стопку) гептамерных колец. В дрожжах и других эукариотах, 7 различных α субъединиц образуют внешние кольца, и 7 различных β субъединиц включают внутренние кольца. Субъединицы α служат в качестве связывающих сайтов для регуляторных комплексов 19S (РА700) и 11S (РА28), а также в качестве физического барьера для внутренней протеолитической камеры, образованной кольцами двух β субъединиц. Поэтому полагают, что in vivo протеасома существует в виде 26S частицы («26S протеасома»). Эксперименты in vivo показали, что ингибирование 20S формы протеасомы может быть легко коррелировано с ингибированием 26S протеасомы.

Расщепление аминоконцевых пропоследовательностей β субъединиц во время образования частицы раскрывает аминоконцевые остатки треонина, которые служат в качестве каталитических нуклеофилов. Следовательно, субъединицы, ответственные за каталитическую активность в протеасоме, имеют аминоконцевой нуклеофильный остаток, и такие субъединицы принадлежат семейству N-концевых нуклеофильных (Ntn) гидролаз (где нуклеофильный N-концевой остаток представляет собой, например, Cys, Ser, Thr и другие нуклеофильные фрагменты). Такое семейство включает, например, пенициллин G ацилазу (PGA), пенициллин V ацилазу (PVA), глутамин PRPP амидотрансферазу (GAT) и бактериальную гликозиласпарагиназу. Кроме экспрессируемых убиквитином β субъединиц высшие позвоночные животные также имеют три интерферон-γ-индуцибельные β субъединицы (LMP7, LMP2 и MECL1), которые заменяют их собственные заменяемые части, β5, β1 и β2, соответственно. Когда присутствуют все три IFN-γ-индуцибельные субъединицы, протеасому называют “иммунопротеасомой”. Поэтому эукариотические клетки могут иметь две формы протеасомы в различных соотношениях.

С помощью применения различных пептидных субстратов установлены три главные протеолитические активности для эукариотических 20S протеасом: химотрипсин-подобная активность (СТ-L), которая расщепляет последующие большие гидрофобные остатки; трипсино-подобная активность (Т-L), которая расщепляет последующие остатки основного характера, и пептидилглутамилпептидная гидролизующая активность (PGPH), которая расщепляет последующие кислотные остатки. Описаны также две дополнительные менее охарактеризованные активности для протеасомы: активность BrAAP, которая расщепляет последующие аминокислоты с разветвленной цепью, и активность SNAAP, которая расщепляет последующие небольшие нейтральные аминокислоты. Хотя обе формы протеасомы обладают всеми пятью ферментативными активностями, на основании специфических субстратов описаны различия в величине активностей между формами. По-видимому, для обеих форм протеасомы, главные протеолитические активности протеасомы вносят вклад через различные каталитические сайты внутри ядра 20S.

Имеется несколько примеров малых молекул, которые используют для ингибирования активности протеасомы, однако такие соединения обычно недостаточно специфичны для трансдифференцировки между двумя формами протеасомы. Поэтому не представляется возможным изучение и исследование роли каждой специфической формы протеасомы на клеточном и молекулярном уровне. Следовательно, необходимо создание ингибитора(ов) малой молекулы, который предпочтительно ингибирует одну форму протеасомы, чтобы сделать возможным исследование роли каждой формы протеасомы на клеточном и молекулярном уровне.

Сущность изобретения

Один аспект изобретения относится к ингибиторам, которые предпочтительно ингибируют активность иммунопротеасомы по сравнению с активностью конститутивной протеасомы. В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к лечению относящихся к иммунным заболеваний, включающему введение соединения изобретения. В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к лечению рака, включающему введение соединения изобретения.

Один аспект изобретения относится к соединениям, имеющим структуру формулы (I), или их фармацевтически приемлемой соли,

где каждый Ar независимо представляет собой ароматическую или гетероароматическую группу, необязательно замещенную 1-4 заместителями;

каждый А независимо выбран из С=О, C=S и SO₂, предпочтительно, С=О, или

А необязательно представляет собой ковалентную связь, когда является смежной по отношению к присутствующему Z;

В отсутствует или представляет собой N(R⁹)R¹⁰, предпочтительно, отсутствует;

L отсутствует или выбран из С=О, C=S или SO₂, предпочтительно, SO₂ или С=О;

М отсутствует или представляет собой С_1-12алкил, предпочтительно, С_1-8алкил;

Q отсутствует или выбран из О, NH или N-С_1-6алкила;

Х выбран из О, S, NH и N-С_1-6алкила, предпочтительно, О;

Y отсутствует или представляет собой С=О и SO₂;

каждый Z независимо выбран из О, S, NH и N-С_1-6алкила, предпочтительно, О; или

Z необязательно представляет собой ковалентную связь, когда является смежным по отношению к присутствующему А;

R¹ выбран из Н, -С_1-6алкил-В, С_1-6гидроксиалкила, С_1-6алкоксиалкила, арила и С_1-6арилалкила;

R² и R³ каждый независимо выбран из арила, С_1-6арилалкила, гетероарила и С_1-6гетероарилалкила;

R⁴ представляет собой N(R⁵)L-Q-R⁶;

R⁵ выбран из водорода, ОН, С_1-6арилалкила и С_1-6алкила, предпочтительно, водорода;

R⁶ выбран из водорода, С_1-6алкила, С_2-6алкенила, С_2-6алкинила, Ar-Y-, карбоциклила, гетероциклила, N-концевой защитной группы, арила, С_1-6арилалкила, гетероарила, С_1-6гетероарилалкила, R¹¹ZАZ-C_1-8алкила-, R¹⁴Z-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, R¹¹ZAZ-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, гетероциклилМZAZ-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкила-, (R¹³)₂N-C_1-12алкила-, (R¹³)₃N⁺-С_1-12алкила-, гетероциклилМ-, карбоциклилМ-, R¹⁴SO₂C_1-8алкила- и R¹⁴SO₂NH, предпочтительно, N-кэппирующей группы, или

R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-6алкил-Y-С_1-6алкил, С_1-6алкил-ZAZ-С_1-6алкил, ZAZ-C_1-6алкил-ZAZ-С_1-6алкил, ZAZ-С_1-6алкил-ZAZ или С_1-6алкил-А, тем самым образуя кольцо;

R⁷ и R⁸ независимо выбраны из водорода, С_1-6алкила и С_1-6арилалкила, предпочтительно, водорода;

R⁹ выбран из водорода, ОН и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила, и

R¹⁰ представляет собой N-концевую защитную группу;

R¹¹ и R¹² независимо выбраны из водорода, катиона металла, С_1-6алкила, С_2-6алкенила, С_2-6алкинила, арила, гетероарила, С_1-6арилалкила и С_1-6гетероарилалкила, предпочтительно, из водорода, катиона металла и С_1-6алкила, или R¹¹ и R¹² вместе представляют собой С_1-6алкил, тем самым образуя кольцо;

каждый R¹³ независимо выбран из водорода и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила, и

R¹⁴ независимо выбран из водорода, С_1-6алкила, С_2-6алкенила, С_2-6алкинила, карбоциклила, гетероциклила, арила, гетероарила, С_1-6арилалкила и С_1-6гетероарилалкила;

R¹⁵ выбран из водорода, С_1-6алкила, С_1-6гидроксиалкила, С_1-6алкокси,

-С(О)ОС_1-6алкила, -С(О)NHC_1-6алкила и С_1-6арилалкила;

при условии, что в любом случае присутствия последовательности ZAZ по меньшей мере один член последовательности должен быть другим, чем ковалентная связь.

Другой аспект изобретения относится к соединениям, имеющим структуру формулы (II), или их фармацевтически приемлемой соли

каждый А независимо выбран из С=О, C=S и SO₂, предпочтительно, С=О, или

А необязательно представляет собой ковалентную связь, когда является смежным по отношению к присутствующему Z;

В отсутствует или представляет собой N(R⁹)R¹⁰, предпочтительно, отсутствует;

L отсутствует или выбран из С=О, C=S и SO₂, предпочтительно, SO₂ или С=О;

М отсутствует или представляет собой С_1-12алкил, предпочтительно, С_1-8алкил;

Q отсутствует или выбран из О, NH и N-С_1-6алкила;

Х выбран из О, S, NH и N-С_1-6алкила, предпочтительно, О;

Y отсутствует или выбран из С=О и SO₂;

каждый Z независимо выбран из О, S, NH и N-С_1-6алкила, предпочтительно, О; или

R² и R³ каждый независимо выбран из арила, С_1-6арилалкила, гетероарила и С_1-6гетероарилалкила;

R⁴ представляет собой N(R⁵)L-Q-R⁶;

R⁵ выбран из водорода, ОН, С_1-6арилалкила и С_1-6алкила, предпочтительно, водорода;

R⁶ выбран из водорода, С_1-6алкила, С_2-6алкенила, С_2-6алкинила, Ar-Y-, карбоциклила, гетероциклила, N-концевой защитной группы, арила, С_1-6арилалкила, гетероарила, С_1-6гетероарилалкила, R¹¹ZAZ-C_1-8алкила-, R¹⁴Z-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, R¹¹ZAZ-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, гетероциклилМZAZ-С_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкила-, (R¹³)₂N-C_1-12алкила-, (R¹³)₃N⁺-C_1-12алкила-, гетероциклилМ-, карбоциклилМ-, R¹⁴SO₂C_1-8алкила- и R¹⁴SO₂NH, предпочтительно, N-кэппирующей группы, или

R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-6алкил-Y-С_1-6алкил, С_1-6алкил-ZAZ-C_1-6алкил, ZAZ-C_1-6алкил-ZAZ-C_1-6алкил, ZAZ-С_1-6алкил-ZAZ или С_1-6алкил-А, тем самым образуя кольцо;

R⁸ выбран из водорода, С_1-6алкила и С_1-6арилалкила, предпочтительно, водорода;

R⁹ выбран из водорода, ОН и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила, и

R¹⁰ представляет собой N-концевую защитную группу;

каждый R¹³ независимо выбран из водорода и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила; и

R¹⁵ выбран из водорода, С_1-6алкила, С_1-6гидроксиалкила, С_1-6алкокси, -С(О)ОС_1-6алкила, -С(О)NHС_1-6алкила и С_1-6арилалкила;

при условии, что в любом случае присутствия последовательности ZAZ по меньшей мере один член из последовательности должен быть другим, чем ковалентная связь.

Другой аспект изобретения относится к соединениям, имеющим структуру формулы (III), или их фармацевтически приемлемой соли,

где каждый А независимо выбран из С=О, C=S и SO₂, предпочтительно, С=О, или

В отсутствует или представляет собой N(R⁹)R¹⁰, предпочтительно, отсутствует;

L отсутствует или выбран из С=О, C=S и SO₂, предпочтительно, SO₂ или С=О;

М отсутствует или представляет собой С_1-12алкил, предпочтительно, С_1-8алкил;

W выбран из -СНО и -В(OR¹¹)₂;

Q отсутствует или выбран из О, NH и N-С_1-6алкила;

Y отсутствует или выбран из С=О и SO₂;

каждый Z независимо выбран из О, S, NH и N-С_1-6алкила, предпочтительно, О; или

R¹ выбран из Н, -С_1-6алкил-В, С_1-6гидроксиалкила, С_1-6алкоксиалкила, арила и С_1-6арилалкила;

R² и R³ каждый независимо выбран из арила, С_1-6арилалкила, гетероарила и С_1-6гетероарилалкила;

R⁴ представляет собой N(R⁵)L-Q-R⁶;

R⁵ выбран из водорода, ОН, С_1-6арилалкила и С_1-6алкила, предпочтительно, водорода;

R⁶ выбран из водорода, С_1-6алкила, С_2-6алкенила, С_2-6алкинила, Ar-Y-, карбоциклила, гетероциклила, N-концевой защитной группы, арила, С_1-6арилалкила, гетероарила, С_1-6гетероарилалкила, R¹¹ZAZ-C_1-8алкила-, R¹⁴Z-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-С_1-8алкил-ZAZ-С_1-8алкила-, R¹¹ZAZ-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, гетероциклилМZAZ-C_1-8алкила-, (R¹¹)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкила, (R¹³)₂N-C_1-12алкила-, (R¹³)₃N⁺-С_1-12алкила-, гетероциклилМ-, карбоциклилМ-, R¹⁴SO₂C_1-8алкила- и R¹⁴SO₂NH, предпочтительно, N-кэппирующей группы, или

R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-6алкил-Y-С_1-6алкил, С_1-6алкил-ZAZ-C_1-6алкил, ZAZ-C_1-6алкил-ZAZ-C_1-6алкил, ZAZ-C_1-6алкил-ZAZ или С_1-6алкил-А, тем самым образуя кольцо;

R⁷ и R⁸ независимо выбраны из водорода, С_1-6алкила и С_1-6арилалкила, предпочтительно, водорода;

R⁹ выбран из водорода, ОН и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила, и

R¹⁰ представляет собой N-концевую защитную группу;

каждый R¹³ независимо выбран из водорода и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила, и

каждый R¹⁶ независимо выбран из водорода и С_1-6алкила, или присутствие двух R¹¹ вместе может представлять собой С_1-6алкил, тем самым образуя кольцо вместе с находящимися атомами бора и кислорода, к которым они присоединены;

Другой аспект изобретения относится к соединениям, имеющим структуру формулы (IV), или их фармацевтически приемлемой соли,

где каждый А независимо выбран из С=О, C=S и SO₂, предпочтительно, С=О, или

L отсутствует или выбран из С=О, C=S и SO₂, предпочтительно, SO₂ или С=О;

М отсутствует или представляет собой С_1-12алкил, предпочтительно, С_1-8алкил;

W выбран из -СНО и В(OR¹¹)₂;

Q отсутствует или выбран из О, NH и N-С_1-6алкила;

Y отсутствует или выбран из С=О и SO₂;

каждый Z независимо выбран из О, S, NH и N-С_1-6алкила, предпочтительно, О; или

Z необязательно представляет собой ковалентную связь, когда является смежным по отношению к присутствующему A;

R² и R³ каждый независимо выбран из арила, С_1-6арилалкила, гетероарила и С_1-6гетероарилалкила;

R⁴ представляет собой N(R⁵)L-Q-R⁶;

R⁵ выбран из водорода, ОН, С_1-6арилалкила и С_1-6алкила, предпочтительно, водорода;

R⁶ выбран из водорода, С_1-6алкила, С_2-6алкенила, С_2-6алкинила, Ar-Y-, карбоциклила, гетероциклила, N-концевой защитной группы, арила, С_1-6арилалкила, гетероарила, С_1-6гетероарилалкила, R¹¹ZAZ-C_1-8алкила, R¹⁴Z-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, R¹¹ZAZ-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, гетероциклилМZAZ-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкила-, (R¹³)₂N-C_1-12алкила-, (R¹³)₃N⁺-C_1-12алкила-, гетероциклилМ-, карбоциклилМ-, R¹⁴SO₂C_1-8алкила- и R¹⁴SO₂NH, предпочтительно, N-кэппирующей группы, или

R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-6алкил-Y-С_1-6алкил, С_1-6алкил-ZAZ-С_1-6алкил, ZAZ-C_1-6алкил-ZAZ-C_1-6алкил, ZAZ-C_1-6алкил-ZAZ или С_1-6алкил-А, тем самым образуя кольцо;

R⁸ выбран из водорода, С_1-6алкила и С_1-6арилалкила, предпочтительно, водорода;

R⁹ выбран из водорода, ОН и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила, и

R¹⁰ представляет собой N-концевую защитную группу;

каждый R¹³ независимо выбран из водорода и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила; и

при условии, что в любом случае присутствия последовательности ZAZ, по меньшей мере один член последовательности должен быть другим, чем ковалентная связь.

Краткое описание чертежей

На фиг.1 показан уровень экспрессии иммунопротеасомы некоторых клеточных линий и образцов из организма пациента, включающих множественную миелому, лейкозы, лимфомы и солидные опухоли.

На фиг.2(А) показано действие соединения 14 на развитие заболевания на мышиных моделях ревматоидного артрита (RA), где дозирование начинали, когда животные впервые проявляли симптомы заболевания (показано стрелками), и демонстрируемые данные представляют собой средний количественный показатель заболевания (±SEM; N=7/группа) и являются репрезентативными для трех независимых экспериментов.

На фиг.2(В) показано действие соединения 14 на развитие заболевания на мышиных моделях RA, где RA индуцировали на день 0 у самки DBA/1 мыши иммунизацией коровьим коллагеном типа II в CFA, где дозирование начинали, когда животные впервые проявляли симптомы заболевания (показано стрелками), и демонстрируемые данные представляют собой средний количественный показатель заболевания (±SEM; N=10/группа).

Подробное описание изобретения

Изобретение включает соединения, полезные в качестве ингибиторов фермента. Такие соединения в основном полезны для ингибирования ферментов, имеющих нуклеофильную группу у N-конца. Например, активности ферментов или субъединиц ферментов, имеющих N-концевые аминокислоты с нуклеофилами в боковых цепях, такие как треонин, серин или цистеин, можно успешно ингибировать описываемыми в данном описании ингибиторами фермента. Активности ферментов или субъединиц ферментов, имеющих неаминокислотные нуклеофильные группы у N-концов, такие как, например, защитные группы или углеводы, также можно успешно ингибировать описываемыми в данном описании ингибиторами фермента.

Не основываясь на какой-либо конкретной теории действия, полагают, что такие N-концевые нуклеофилы Ntn образуют ковалентные аддукты с эпоксидом, азиридином, альдегидом или боратной функциональной группой описываемых ингибиторов фермента. Например, полагают, что в субъединице β5/Pre2 20S протеасомы N-концевой треонин необратимо образует морфолино или пиперазино аддукт после взаимодействия с пептидным эпоксидом или азиридином, таким как описано ниже. Такое образование аддукта может включать расщепление с раскрытием кольца эпоксида или азиридина.

В отношении стереохимии, применяют правила Кэна-Ингольда-Прелога для определения абсолютной стереохимии. Эти правила описаны, например, в Organic Chemistry, Fox and Whitesell; Jones and Bartlett Publishers, Boston, MA (1994); Section 5-6, pp.177-178, который, таким образом, включен в настоящее описание посредством ссылки. Пептиды могут иметь повторяющуюся структуру основной цепи с боковыми цепями, отходящими от единиц основной цепи. Обычно, каждая единица основной цепи имеет связанную с ней боковую цепь, хотя в некоторых случаях боковая цепь представляет собой атом водорода. В других вариантах осуществления не каждая единица основной цепи имеет присоединенную боковую цепь. Пептиды, применяемые в пептидных эпоксидах или пептидных азиридинах, имеют две или более единиц основной цепи. В некоторых вариантах осуществления, применяемых для ингибирования химотрипсиноподобной (СТ-L) активности протеасомы, присутствует от двух до восьми единиц основной цепи, и в некоторых предпочтительных вариантах осуществления для ингибирования CT-L присутствует от двух до шести единиц основной цепи.

Боковые цепи, отходящие от единиц основной цепи, могут включать боковые цепи природных алифатических или ароматических аминокислот, такие как водород (глицин), метил (аланин), изопропил (валин), втор-бутил (изолейцин), изобутил (лейцин), фенилметил (фенилаланин), и боковую цепь, составляющую аминокислоту пролин. Боковые цепи могут быть также другими алифатическими или ароматическими группами разветвленного или неразветвленного строения, такими как этил, н-пропил, н-бутил, трет-бутил, и арилзамещенными производными, такими как 1-фенилэтил, 2-фенилэтил, (1-нафтил)метил, (2-нафтил)метил, 1-(1-нафтил)этил, 1-(2-нафтил)этил, 2-(1-нафтил)этил, 2-(2-нафтил)этил и подобные. Арильные группы могут быть дополнительно замещены С_1-6алкильными группами разветвленного или неразветвленного строения или замещенными алкильными группами, ацетилом и тому подобным, или дополнительными арильными группами, или замещенными арильными группами, такими как бензоил и тому подобное. Гетероарильные группы также могут быть применимы в качестве заместителей боковых цепей. Гетероарильные группы включают азот-, кислород- и серосодержащие арильные группы, такие как тиенил, бензотиенил, нафтотиенил, тиантренил, фурил, пиранил, изобензофуранил, хроменил, пирролил, имидазолил, пиразолил, пиридил, пиразинил, индолил, пуринил, хинолил и тому подобное.

В некоторых вариантах осуществления полярные или заряженные остатки могут быть введены в пептидные эпоксиды или пептидные азиридины. Например, могут быть введены природные аминокислоты, такие как гидроксисодержащие (Thr, Tyr, Ser) или серосодержащие (Met, Cys), а также аминокислоты, не являющиеся незаменимыми, например таурин, карнитин, цитруллин, цистин, орнитин, норлейцин и другие. Могут быть также включены заместители боковых цепей неприродного происхождения с заряженными или полярными группами, такие как, например, С_1-6алкильные цепи или С_6-12арильные группы с одной или несколькими гидроксигруппами, имеющими короткую цепь алкокси, сульфидными, тио, карбоксильными, сложноэфирными, фосфо, амидо или аминогруппами, или такие заместители, замещенные одним или несколькими атомами галогена. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления имеется по меньшей мере одна арильная группа, присутствующая в боковой цепи пептидного фрагмента.

В некоторых вариантах осуществления единицы основной цепи представляют собой амидные единицы [-NH-CHR-C(=O)-], в которых R представляет собой боковую цепь. Такое обозначение не исключает природную аминокислоту пролин или другие неприродные циклические вторичные аминокислоты, которые будут очевидны для специалистов в данной области.

В других вариантах осуществления единицы основной цепи представляют собой N-алкилированные амидные единицы (например, N-метил и тому подобное), олефиновые аналоги (в которых одна или несколько амидных связей заменены олефиновыми связями), аналоги тетразола (в которых кольцо тетразола вводит цис-конфигурацию в основную цепь) или сочетания таких связей основной цепи. Еще в других вариантах осуществления α-углеродный атом аминокислоты модифицирован α-алкильным замещением, например аминоизомасляной кислотой. В некоторых следующих вариантах осуществления боковые цепи представляют собой локально модифицированные, например, ΔЕ или ΔZ дегидромодификацией, в которой двойная связь присутствует между α и β атомами боковой цепи, или, например, ΔЕ или ΔZ циклопропильной модификацией, в которой циклопропильная группа присутствует между α и β атомами боковой цепи. Еще в следующих вариантах осуществления с использованием аминокислотных групп могут применяться D-аминокислоты. Следующие варианты осуществления могут включать циклизацию боковой цепи с основной цепью, образование дисульфидной связи, образование лактама, азосвязи и другие модификации, обсуждаемые в “Peptides and Mimics, Design of Conformationally Constrained” Hruby and Boteju, в “Molecular Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference”, ed. Robert A.Meyers, VCH Publishers (1995), pp.658-664, которые включены в данное описание посредством ссылки.

каждый А независимо выбран из С=О, C=S и SO₂, предпочтительно, С=О, или

В отсутствует или представляет собой N(R⁹)R¹⁰, предпочтительно, отсутствует;

L отсутствует или выбран из С=О, C=S или SO₂, предпочтительно, SO₂или С=О;

М отсутствует или представляет собой С_1-12алкил, предпочтительно, С_1-8алкил;

Q отсутствует или выбран из О, NH или N-С_1-6алкила;

Х выбран из О, S, NH и N-С_1-6алкила, предпочтительно, О;

Y отсутствует или представляет собой С=О и SO₂;

каждый Z независимо выбран из О, S, NH и N-С_1-6алкила, предпочтительно, О; или

R¹ выбран из Н, -С_1-6алкил-В, С_1-6гидроксиалкила, С_1-6алкоксиалкила, арила и С_1-6арилалкила;

R² и R³ каждый независимо выбран из арила, С_1-6арилалкила, гетероарила и С_1-6гетероарилалкила;

R⁴ представляет собой N(R⁵)L-Q-R⁶;

R⁵ выбран из водорода, ОН, С_1-6арилалкила и С_1-6алкила, предпочтительно, водорода;

R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-6алкил-Y-С_1-6алкил, С_1-6алкил-ZAZ-С_1-6алкил, ZAZ-C_1-8алкил-ZAZ-С_1-6алкил, ZAZ-С_1-6алкил-ZAZ или С_1-6алкил-А, тем самым образуя кольцо;

R⁷ и R⁸ независимо выбраны из водорода, С_1-6алкила и С_1-6арилалкила, предпочтительно, водорода;

R⁹ выбран из водорода, ОН и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила, и

R¹⁰ представляет собой N-концевую защитную группу;

каждый R¹³ независимо выбран из водорода и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила, и

R¹⁵ выбран из водорода, С_1-6алкила, С_1-6гидроксиалкила, С_1-6алкокси,

-С(О)ОС_1-6алкила, -С(О)NHC_1-6алкила и С_1-6арилалкила, предпочтительно, С_1-6алкила и С_1-6гидроксиалкила, более предпочтительно, метила, этила, гидроксиметила и 2-гидроксиэтила;

В некоторых вариантах осуществления R¹ выбран из -С_1-6алкил-В и С_1-6арилалкила. В некоторых таких вариантах осуществления R¹ замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из гидрокси, галогена, амида, амина, карбоновой кислоты (или ее соли), сложного эфира (включающего сложный С_1-6алкиловый эфир, сложный С_1-5алкиловый эфир и сложный ариловый эфир), тиола или простого тиоэфира. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления R¹ замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из карбоновой кислоты и сложного эфира. В некоторых вариантах осуществления R¹ выбран из метила, этила, изопропила, карбоксиметила и бензила. В некоторых вариантах осуществления R¹ представляет собой -С_1-6алкил-В и С_1-6арилалкил. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления В отсутствует.

В некоторых вариантах осуществления R² выбран из С_1-6арилалкила и С_1-6гетероарилалкила. В некоторых таких вариантах осуществления R² выбран из С_1-6алкилфенила, С_1-6алкилиндолила, С_1-6алкилтиенила, С_1-6алкилтиазолила и С_1-6алкилизотиазолила, где алкильный фрагмент может содержать шесть, пять, четыре, три, два или один атом углерода, предпочтительно, один или два. В некоторых таких вариантах осуществления R² замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из гидрокси, галогена, амида, амина, карбоновой кислоты (или ее соли), сложного эфира (включающего сложный С_1-6алкиловый эфир, сложный С_1-5алкиловый эфир и сложный ариловый эфир), тиола или простого тиоэфира. В некоторых таких вариантах осуществления R² замещен заместителем, выбранным из алкила, тригалогеналкила, алкокси, гидрокси или циано. В некоторых таких вариантах осуществления R² выбран из С_1-6алкилфенила и С_1-6алкилиндолила. В некоторых таких предпочтительных вариантах осуществления R² выбран из:

где D выбран из Н, ОМе, O-трет-Bu, OH, CN, CF₃ и СН₃. В некоторых вариантах осуществления D выбран из Н, OMe, OH, CN, CF₃ и СН₃.

В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления, где D присоединен к шестичленному кольцу, D присоединен в положении 4 относительно места присоединения, предпочтительно, исключая варианты осуществления, где положение 4 кольца занято азотом пиридинового кольца.

В некоторых вариантах осуществления R³ выбран из С_1-6арилалкила и С_1-6гетероарилалкила, где алкильный фрагмент может содержать шесть, пять, четыре, три, два или один атом углерода, предпочтительно, один или два. В некоторых таких вариантах осуществления R³ замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из гидрокси, галогена, амида, амина, карбоновой кислоты (или ее соли), сложного эфира (включающего сложный С_1-6алкиловый эфир, сложный С_1-5алкиловый эфир и сложный ариловый эфир), тиола или простого тиоэфира. В некоторых таких вариантах осуществления R³ замещен заместителем, выбранным из алкила, тригалогеналкила, алкокси, гидрокси или циано. В некоторых таких вариантах осуществления R³ выбран из С_1-6алкилфенила и С_1-6алкилиндолила. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления R³ выбран из:

где D выбран из Н, ОМе, О-трет-Bu, OH, CN, CF₃ или СН₃. В некоторых вариантах осуществления D выбран из Н, ОМе, ОН, CN, CF₃ или СН₃.

В некоторых вариантах осуществления R⁵ представляет собой водород, L представляет собой С=О или SO₂, R⁶ представляет собой Ar-Y-, и каждый Ar независимо выбран из фенила, индолила, бензофуранила, нафтила, хинолинила, хинолонила, тиенила, пиридила, пиразила и тому подобного. В некоторых таких вариантах осуществления Ar может быть замещен Ar-E-, где Е выбран из прямой связи, -О- и С_1-6алкила. В некоторых других вариантах осуществления, где Q представляет собой С_1-6алкил, Q может быть замещен, предпочтительно, Ar, например фенилом.

В некоторых вариантах осуществления R⁵ представляет собой водород, Q отсутствует, L представляет собой С=О или SO₂, и R⁶ выбран из Ar-Y и гетероциклила. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления гетероциклил выбран из хромонила, хроманила, морфолино и пиперидинила. В некоторых других предпочтительных таких вариантах осуществления Ar выбран из фенила, индолила, бензофуранила, нафтила, хинолинила, хинолонила, тиенила, пиридила, пиразила и тому подобного.

В некоторых вариантах осуществления R⁵ представляет собой водород, L представляет собой С=О или SO₂, Q отсутствует, и R⁶ представляет собой С_1-6алкенил, где С_1-6алкенил представляет собой замещенную винильную группу, где заместитель представляет собой предпочтительно арильную или гетероарильную группу, более предпочтительно, фенильную группу, необязательно замещенную одним-четырьмя заместителями.

В некоторых вариантах осуществления L и Q отсутствуют, и R⁶ выбран из С_1-6алкила, С_2-6алкенила, С_2-6алкинила, С_1-6арилалкила и С_1-6гетероарилалкила. В некоторых таких вариантах осуществления R⁵ представляет собой С_1-6алкил, и R⁶ выбран из бутила, аллила, пропаргила, фенилметила, 2-пиридила, 3-пиридила и 4-пиридила.

В других вариантах осуществления L представляет собой SO₂, Q отсутствует, и R⁶ выбран из С_1-6алкила и арила. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ выбран из метила и фенила.

В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=О, и R⁶ выбран из С_1-6алкила, С_2-6алкенила, С_2-6алкинила, арила,

С_1-6арилалкила, гетероарила, С_1-6гетероарилалкила,

R¹¹ZA-C_1-8алкила-, R¹⁴Z-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-С_1-8алкила,

(R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-С_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-,

(R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-Z-C_1-8алкила-,

R¹¹ZA-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, гетероциклилМZAZ-C_1-8алкила,

(R¹³)₂N-C_1-8алкила-, (R¹³)₃N⁺-C_1-8алкила-, гетероциклилМ-,

карбоциклилМ-, R¹⁴SO₂C_1-8алкила- и R¹⁴SO₂NH-, где каждый присутствующий Z и А независимо является другим, чем ковалентная связь. В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, и R⁶ представляет собой Н.

В некоторых вариантах осуществления R⁵ представляет собой С_1-6алкил, R⁶ представляет собой С_1-6алкил, Q отсутствует, и L представляет собой С=О. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой этил, изопропил, 2,2,2-трифторэтил или 2-(метилсульфонил)этил.

В других вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, и R⁶ представляет собой С_1-6арилалкил. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ выбран из 2-фенилэтила, фенилметила, (4-метоксифенил)метила, (4-хлорфенил)метила и (4-фторфенил)метила.

В других вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, R⁵ представляет собой С_1-6алкил, и R⁶ представляет собой арил. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой замещенный или незамещенный фенил.

В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, и R⁶ выбран из гетероарила и С_1-6гетероарилалкила. В некоторых таких вариантах R⁶ представляет собой гетероарил, выбранный из пиррола, фурана, тиофена, имидазола, изоксазола, оксазола, оксадиазола, тиазола, тиадиазола, триазола, пиразола, пиридина, пиразина, пиридазина и пиримидина. В некоторых альтернативных таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой С_1-6гетероарилалкил, выбранный из пирролилметила, фуранилметила, тиенилметила, имидазолилметила, изоксазолилметила, оксазолилметила, оксадиазолилметила, тиазолилметила, тиадиазолилметила, триазолилметила, пиразолилметила, пиридилметила, пиразинилметила, пиридазинилметила и пиримидинилметила.

В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует или представляет собой О, и R⁶ представляет собой карбоциклилМ-, где М представляет собой С_0-1алкил. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой циклопропил или циклогексил.

В некоторых вариантах осуществления L и А представляют собой С=О, Q отсутствует, Z представляет собой О, М представляет собой С_1-8алкил, предпочтительно, метилен, и R⁶ выбран из R¹¹ZA-C_1-8алкила-, R¹⁴Z-C_1-8алкила-, R¹¹ZA-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-С_1-8алкил-Z-C_1-8алкила- и гетероциклилМZAZ-C_1-8алкила-, где каждый присутствующий А независимо является другим, чем ковалентная связь. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой гетероциклилМZAZ-C_1-8алкил-, где гетероциклил представляет собой замещенный или незамещенный оксодиоксоленил или N(R¹⁶)(R¹⁷), где R¹⁶ и R¹⁷ вместе представляют собой С_1-6алкил-Y-С_1-6алкил, предпочтительно С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил, тем самым образуя кольцо.

В некоторых предпочтительных вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, М представляет собой С_1-8алкил, и R⁶ выбран из (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкила, (R¹³)₂NC_1-8алкила, (R¹³)₃N⁺C_1-8алкила- и гетероциклил-М-. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой (R¹³)₂NC_1-8алкил или (R¹³)₃N⁺C_1-8алкил-, где R¹³ представляет собой С_1-6алкил. В некоторых других таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой гетероциклилМ-, где гетероциклил выбран из морфолино, пиперидино, пиперазино и пирролидино.

В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=О, R⁵ представляет собой С_1-6алкил, Q выбран из О и NH, и R⁶ выбран из С_1-6алкила, циклоалкил-М, С_1-6арилалкила и С_1-6гетероарилалкила. В других вариантах осуществления L представляет собой С=О, R⁵ представляет собой С_1-6алкил, Q выбран из О и NH, и R⁶ представляет собой С_1-6алкил, где С_1-6алкил выбран из метила, этила и изопропила. В следующих вариантах осуществления L представляет собой С=О, R⁵ представляет собой С_1-6алкил, Q выбран из О и NH, и R⁶ представляет собой С_1-6арилалкил, где арилалкил представляет собой фенилметил. В других вариантах осуществления L представляет собой С=О, R⁵ представляет собой С_1-6алкил, Q выбран из О и NH, и R⁶ представляет собой С_1-6гетероарилалкил, где гетероарилалкил представляет собой (4-пиридил)метил.

В некоторых вариантах осуществления L отсутствует или представляет собой С=О, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-6алкил-Y-С_1-6алкил, С_1-6алкил-ZA-С_1-6алкил или С_1-6алкил-А, где каждый присутствующий Z и А независимо является другим, чем ковалентная связь, тем самым образуя кольцо. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q и Y отсутствуют, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L и Q отсутствуют, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, Y выбран из NH и N-С_1-6алкила, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L представляет собой С=О, Y отсутствует, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L и А представляют собой С=O, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-2алкил-ZA-С_1-2алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L и А представляют собой С=O, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_2-3алкил-A.

В некоторых вариантах осуществления R⁷ и R⁸ независимо выбраны из водорода и С_1-6алкила. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления R⁷ и R⁸ независимо выбраны из водорода и метила. В более предпочтительных таких вариантах осуществления R⁷ и R⁸ оба представляют собой водород.

В некоторых вариантах осуществления Х представляет собой О, R² и R³ каждый независимо представляет собой С_1-6арилалкил, и R¹ выбран из С_1-6алкила, С_1-6гидроксиалкила, С_1-6алкоксиалкила, арила и С_1-6арилалкила, любой из которых необязательно замещен одним или несколькими амидными, аминными, карбоновыми кислотами (или их солью), сложными эфирами (включающими сложный С_1-6алкиловый эфир, сложный С_1-5алкиловый эфир и сложный ариловый эфир), тиольными или простыми тиоэфирными заместителями.

Подходящие N-концевые защитные группы, известные в данной области синтеза пептидов, включают трет-бутоксикарбонил (Вос), бензоил (Bz), флуорен-9-илметоксикарбонил (Fmoc), трифенилметил (тритил), трихлорэтоксикарбонил (Troc) и тому подобное. Применение различных N-защитных групп, например бензилоксикарбонильной группы или трет-бутилоксикарбонильной группы (Вос), различных реагентов сочетания, например дициклогексилкарбодиимида (DCC), 1,3-диизопропилкарбодиимида (DIC), 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (EDC), N-гидроксиазабензотриазола (HATU), карбонилдиимидазола или моногидрата 1-гидроксибензотриазола (НОВТ), и различных условий расщепления, например трифторуксусной кислоты (ТФУК, TFA), HCl в диоксане, гидрирования на Pd-C в органических растворителях (таких как метанол или этилацетат), трис(трифторацетат)бора и цианогенбромида, и взаимодействия в растворе, с выделением и очисткой промежуточных продуктов, хорошо известны в данной области синтеза пептидов и в равной степени применимы для получения представленных соединений. Подходящие для защиты N-концевые защитные группы также можно найти, например, в публикации Greene, T.W.; Wuts, P.G.M. “Protective Groups in Organic Synthesis”, 3^rd ed.; Willey: New York, 1999, или Kocienski, P.J., “Protecting Groups”, Georg Thieme Verlag, 1994.

В некоторых вариантах осуществления стереохимическая конфигурация атомов углерода, имеющих заместители R¹, R² или R³, независимо представляет собой D или L. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления стереохимическая конфигурация по меньшей мере одного из атомов углерода, имеющего заместители R¹, R² и R³, соответственно представляет собой D. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления стереохимическая конфигурация атома углерода, имеющего заместители R¹, представляет собой D. В некоторых таких вариантах осуществления стереохимическая конфигурация атома углерода, имеющего заместители R², представляет собой D. В некоторых таких вариантах осуществления стереохимическая конфигурация атома углерода, имеющего заместители R³, представляет собой D. В некоторых вариантах осуществления стереохимическая конфигурация по меньшей мере двух их атомов углерода, имеющих заместители R¹, R² и R³, соответственно, представляет собой D. Еще в другом предпочтительном варианте осуществления стереохимическая конфигурация всех трех атомов углерода, имеющих заместители R¹, R² и R³, соответственно, представляет собой D.

каждый Ar независимо представляет собой ароматическую или гетероароматическую группу, необязательно замещенную 1-4 заместителями;

каждый А независимо выбран из С=О, C=S и SO₂, предпочтительно, С=О, или

В отсутствует или представляет собой N(R⁹)R¹⁰, предпочтительно, отсутствует;

L отсутствует или выбран из С=О, C=S и SO₂, предпочтительно, SO₂ или С=О;

М отсутствует или представляет собой С_1-12алкил, предпочтительно, С_1-8алкил;

Q отсутствует или выбран из О, NH и N-С_1-6алкила;

Х выбран из О, S, NH и N-С_1-6алкила, предпочтительно, О;

Y отсутствует или выбран из С=О и SO₂;

каждый Z независимо выбран из О, S, NH и N-С_1-6алкила, предпочтительно, О; или

R² и R³ каждый независимо выбран из арила, С_1-6арилалкила, гетероарила и С_1-6гетероарилалкила;

R⁴ представляет собой N(R⁵)L-Q-R⁶;

R⁵ выбран из водорода, ОН, С_1-6арилалкила и С_1-6алкила, предпочтительно, водорода;

R⁶ выбран из водорода, С_1-6алкила, С_2-6алкенила, С_2-6алкинила, Ar-Y-, карбоциклила, гетероциклила, N-концевой защитной группы, арила, С_1-6арилалкила, гетероарила, С_1-6гетероарилалкила, R¹¹ZAZ-C_1-8алкила-, R¹⁴Z-C_1-8алкила-, (R¹⁴O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, R¹¹ZAZ-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, гетероциклилМZAZ-С_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкила-, (R¹³)₂N-C_1-12алкила-, (R¹³)₃N⁺-C_1-12алкила-, гетероциклилМ-, карбоциклилМ-, R¹⁴SO₂C_1-8алкила- и R¹⁴SO₂NH, предпочтительно, N-кэппирующей группы, более предпочтительно, трет-бутоксикарбонила или бензилоксикарбонила, или

R⁸ выбран из водорода, С_1-6алкила и С_1-6арилалкила, предпочтительно, водорода;

R⁹ выбран из водорода, ОН и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила, и

R¹⁰ представляет собой N-концевую защитную группу;

каждый R¹³ независимо выбран из водорода и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила; и

R¹⁵ выбран из водорода, С_1-6алкила, С_1-6гидроксиалкила, С_1-6алкокси, -С(О)ОС_1-6алкила, -С(О)NHС_1-6алкила и С_1-6арилалкила, предпочтительно, С_1-6алкила и С_1-6гидроксиалкила, более предпочтительно, метила, этила, гидроксиметила и 2-гидроксиэтила;

В некоторых вариантах осуществления R² выбран из С_1-6арилалкила и С_1-6гетероарилалкила. В некоторых таких вариантах осуществления R² выбран из С_1-6алкилфенила, С_1-6алкилиндолила, С_1-6алкилтиенила, С_1-6алкилтиазолила и С_1-6алкилизотиазолила, где алкильный фрагмент может содержать шесть, пять, четыре, три, два или один атом углерода, предпочтительно, один или два. В некоторых таких вариантах осуществления R² замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из гидрокси, галогена, амида, амина, карбоновой кислоты (или ее соли), сложного эфира (включающего сложный С_1-6алкиловый эфир, сложный С_1-5алкиловый эфир и сложный ариловый эфир), тиола или простого тиоэфира. В некоторых таких вариантах осуществления R² замещен заместителем, выбранным из алкила, тригалогеналкила, алкокси, гидрокси или циано. В некоторых таких вариантах осуществления R² выбран из С_1-6алкилфенила и С_1-6алкилиндолила. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления R² выбран из:

где D выбран из Н, ОМе, О-трет-Bu, ОН, CN, CF₃ и СН₃. В некоторых вариантах осуществления D выбран из Н, ОМе, ОН, CN, CF₃ и СН₃.

В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления, где D присоединен к шестичленному кольцу, D присоединен в положении 4 по отношению к месту присоединения, предпочтительно, исключая варианты осуществления, где положение 4 кольца занято атомом азота пиридинового кольца.

В некоторых вариантах осуществления R³ выбран из С_1-6арилалкила и С_1-6гетероарилалкила. В некоторых случаях алкильный фрагмент может содержать шесть, пять, четыре, три, два или один атом углерода, предпочтительно, один или два. В некоторых таких вариантах осуществления R³ замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из гидрокси, галогена, амида, амина, карбоновой кислоты (или ее соли), сложного эфира (включающего сложный С_1-6алкиловый эфир, сложный С_1-5алкиловый эфир или сложный ариловый эфир), тиола или простого тиоэфира. В некоторых таких вариантах осуществления R³ замещен заместителем, выбранным из алкила, тригалогеналкила, алкокси, гидрокси или циано. В некоторых таких вариантах осуществления R³ выбран из С_1-6алкилфенила и С_1-6алкилиндолила. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления R³ выбран из:

В некоторых вариантах осуществления R⁵ представляет собой водород, L представляет собой С=О или SO₂, R⁶ представляет собой Ar-Y-, и каждый Ar независимо выбран из фенила, индолила, бензофуранила, нафтила, хинолинила, хинолонила, тиенила, пиридила, пиразила и тому подобного. В некоторых таких вариантах осуществления Ar может быть замещен Ar-E-, где Е выбран из прямой связи, -О- и С_1-6алкила. В некоторых других таких вариантах осуществления, где Q представляет собой С_1-6алкил, Q может быть замещен, предпочтительно, Ar, например фенилом.

В некоторых вариантах осуществления R⁵ представляет собой водород, Q отсутствует, L представляет собой С=О или SO₂, и R⁶ выбран из Ar-Y и гетероциклила. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления гетероциклил выбран из хроманила, хроманила, морфолино и пиперидинила. В некоторых других предпочтительных таких вариантах осуществления Ar выбран из фенила, индолила, бензофуранила, нафтила, хинолинила, хинолонила, тиенила, пиридила, пиразила и тому подобного.

В некоторых вариантах осуществления R⁵ представляет собой водород, L представляет собой С=О или SO₂, Q отсутствует, и R⁶ представляет собой С_2-6алкенил, где С_2-6алкенил представляет собой замещенную винильную группу, где заместитель предпочтительно представляет собой арильную или гетероарильную группу, более предпочтительно, фенильную группу, необязательно замещенную одним-четырьмя заместителями.

В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=O, и R⁶ выбран из С_1-6алкила, С_2-6алкенила, С_2-6алкинила, арила,

С_1-6арилалкила, гетероарила, С_1-6гетероарилалкила,

R¹¹ZA-C_1-8алкила-, R¹⁴Z-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкила-,

(R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-ZAZ-С_1-8алкила-,

(R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-Z-С_1-8алкила-,

R¹¹ZA-С_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, гетероциклилМZAZ-C_1-8алкила-,

(R¹³)₂N-C_1-8алкила-, (R¹³)₃N⁺-C_1-8алкила-, гетероциклилМ-,

В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, и R⁶ выбран из гетероарила и С_1-6гетероарилалкила_. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой гетероарил, выбранный из пиррола, фурана, тиофена, имидазола, изоксазола, оксазола, оксадиазола, тиазола, тиадиазола, триазола, пиразола, пиридина, пиразина, пиридазина и пиримидина. В некоторых альтернативных таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой С_1-6гетероарилалкил, выбранный из пирролилметила, фуранилметила, тиенилметила, имидазолилметила, изоксазолилметила, оксазолилметила, оксадиазолилметила, тиазолилметила, тиадиазолилметила, триазолилметила, пиразолилметила, пиридилметила, пиразинилметила, пиридазинилметила и пиримидинилметила.

В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует или представляет собой O, и R⁶ представляет собой карбоциклилМ-, где М представляет собой С_0-1алкил. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой циклопропил или циклогексил.

В некоторых вариантах осуществления L и А представляют собой С=О, Q отсутствует, Z представляет собой О, М представляет собой С_1-8алкил, предпочтительно, метилен, и R⁶ выбран из R¹¹ZА-C_1-8алкила-, R¹⁴Z-C_1-8алкила-, R¹¹ZA-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-ZAZ-С_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-Z-С_1-8алкила- и гетероциклилМZAZ-С_1-8алкила-, где каждый присутствующий А независимо является другим, чем ковалентная связь. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой гетероциклилМZAZ-C_1-8алкил-, где гетероциклил представляет собой замещенный или незамещенный оксодиоксоленил или N(R¹⁶)(R¹⁷), где R¹⁶ и R¹⁷ вместе представляют собой С_1-6алкил-Y-С_1-6алкил, предпочтительно, С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил, тем самым образуя кольцо.

В некоторых предпочтительных вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, М представляет собой С_1-8алкил, и R⁶ выбран из (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкила-, (R¹³)₂NC_1-8алкила-, (R¹³)₃N⁺С_1-8алкила- и гетероциклил-М-. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой (R¹³)₂NC_1-8алкил или (R¹³)₃N⁺C_1-8алкил-, где R¹³ представляет собой С_1-6алкил. В некоторых других таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой гетероциклилМ-, где гетероциклил выбран из морфолино, пиперидино, пиперазино и пирролидино.

В некоторых вариантах осуществления L отсутствует или представляет собой С=О, R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-6алкил-Y-С_1-6алкил, С_1-6алкил-ZA-C_1-6алкил или С_1-6алкил-А, где каждый присутствующий Z и А независимо является другим, чем ковалентная связь, тем самым образуя кольцо. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q и Y отсутствуют, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L и Q отсутствуют, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, Y выбран из NH и N-С_1-6алкила, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L представляет собой С=О, Y отсутствует, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L и А представляют собой С=O, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-2алкил-Y-С_1-2алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L и А представляют собой С=O, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_2-3алкил-А.

В некоторых вариантах осуществления R⁸ выбран из водорода и С_1-6алкила. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления R⁸ выбран из водорода и метила. В более предпочтительных таких вариантах R⁸ представляет собой водород.

В некоторых вариантах осуществления Х представляет собой О, R² и R³ каждый независимо представляет собой С_1-6арилалкил, и R¹ выбран из С_1-6алкила, С_1-6гидроксиалкила, С_1-6алкоксиалкила, арила и С_1-6арилалкила, любой из которых необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из амида, амина, карбоновой кислоты (или ее соли), сложного эфира (включающего сложный С_1-6алкиловый эфир, сложный С_1-5алкиловый эфир и сложный ариловый эфир), тиола или простого тиоэфира.

В некоторых вариантах осуществления стереохимическая конфигурация атомов углерода, имеющих заместители R² или R³, представляет собой независимо D или L. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления стереохимическая конфигурация по меньшей мере одного из атомов углерода, имеющего заместители R² и R³, соответственно, представляет собой D. В некоторых таких вариантах осуществления стереохимическая конфигурация атома углерода, имеющего заместители R², представляет собой D. В таких вариантах осуществления стереохимическая конфигурация атома углерода, имеющего заместители R³, представляет собой D. В некоторых вариантах осуществления стереохимическая конфигурация обоих атомов углерода, имеющих заместители R² и R³, соответственно, представляет собой D.

где каждый А независимо выбран из С=О, C=S и SO₂, предпочтительно, С=О, или

В отсутствует или представляет собой N(R⁹)R¹⁰, предпочтительно, отсутствует;

L отсутствует или выбран из С=О, C=S и SO₂, предпочтительно, SO₂ или С=О;

М отсутствует или представляет собой С_1-12алкил, предпочтительно, С_1-8алкил;

W выбран из -СНО и -В(OR¹¹)₂;

Q отсутствует или выбран из О, NH и N-С_1-6алкила;

Y отсутствует или выбран из С=О и SO₂;

каждый Z независимо выбран из О, S, NH и N-С_1-6алкила, предпочтительно, О; или

R¹ выбран из Н, -С_1-6алкил-В, С_1-6гидроксиалкила, С_1-6алкоксиалкила, арила и С_1-6арилалкила;

R² и R³ каждый независимо выбраны из арила, С_1-6арилалкила, гетероарила и С_1-6гетероарилалкила;

R⁴ представляет собой N(R⁵)L-Q-R⁶;

R⁵ выбран из водорода, ОН, С_1-6арилалкила, предпочтительно, водорода;

R⁶ выбран из водорода, С_1-6алкила, С_2-6алкенила, С_2-6алкинила, Ar-Y-, карбоциклила, гетероциклила, N-концевой защитной группы, арила, С_1-6арилалкила, гетероарила, С_1-6гетероарилалкила, R¹¹ZAZ-C_1-8алкила-, R¹⁴Z-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-С_1-8алкил-ZAZ-С_1-8алкила-, R¹¹ZAZ-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, гетероциклилМZAZ-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-С_1-8алкила, (R¹³)₂N-C_1-12алкила-, (R¹³)₃N⁺-С_1-12алкила-, гетероциклилМ-, карбоциклилМ-, R¹⁴SO₂C_1-8алкила- и R¹⁴SO₂NH, предпочтительно, N-кэппирующей группы, более предпочтительно, трет-бутоксикарбонила или бензилоксикарбонила; или

R⁷ и R⁸ независимо выбраны из водорода, С_1-6алкила и С_1-6арилалкила, предпочтительно, водорода;

R⁹ выбран из водорода, ОН и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила, и

R¹⁰ представляет собой N-концевую защитную группу;

каждый R¹³ независимо выбран из водорода и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила, и

В некоторых вариантах осуществления R¹ выбран из -С_1-6алкил-В и С_1-6арилалкила. В некоторых таких вариантах осуществления R¹ замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из гидрокси, галогена, амида, амина, карбоновой кислоты (или ее соли), сложного эфира (включающего сложный С_1-6алкиловый эфир, сложный С_1-5алкиловый эфир и ариловый эфир), тиола и простого тиоэфира. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления R¹ замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из карбоновой кислоты и сложного эфира. В некоторых вариантах осуществления R¹ выбран из метила, этила, изопропила, карбоксиметила и бензила. В некоторых вариантах осуществления R¹ представляет собой -С_1-6алкил-В и С_1-6арилалкил. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления В отсутствует.

В некоторых вариантах осуществления R² выбран из С_1-6арилалкила и С_1-6гетероарилалкила. В некоторых вариантах осуществления R² выбран из С_1-6алкилфенила, С_1-6алкилиндолила, С_1-6алкилтиенила, С_1-6алкилтиазолила и С_1-6алкилизотиазолила, где алкильный фрагмент может содержать шесть, пять, четыре, три, два или один атом углерода, предпочтительно, один или два. В некоторых таких вариантах осуществления R² замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из гидрокси, галогена, амида, амина, карбоновой кислоты (или ее соли), сложного эфира (включающего сложный С_1-6алкиловый эфир, сложный С_1-5алкиловый эфир и сложный ариловый эфир), тиола или простого тиоэфира. В некоторых таких вариантах осуществления R² замещен заместителем, выбранным из алкила, тригалогеналкила, алкокси, гидрокси или циано. В некоторых таких вариантах осуществления R² выбран из С_1-6алкилфенила и С_1-6алкилиндолила. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления R² выбран из:

где D выбран из Н, ОМе, O-трет-Bu, OH, CN, CF₃ и СН₃. В некоторых вариантах осуществления D выбран из Н, OMe, ОН, CN, CF₃ и СН₃.

В некоторых вариантах осуществления R³ выбран из С_1-6арилалкила и С_1-6гетероарилалкила. В некоторых случаях алкильный фрагмент может содержать шесть, пять, четыре, три, два или один атом углерода, предпочтительно, один или два. В некоторых таких вариантах осуществления R³ замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из гидрокси, галогена, амида, амина, карбоновой кислоты (или ее соли), сложного эфира (включающего сложный С_1-6алкиловый эфир, сложный С_1-5алкиловый эфир и сложный ариловый эфир), тиола или простого тиоэфира. В некоторых таких вариантах осуществления R³ замещен заместителем, выбранным из алкила, тригалогеналкила, алкокси, гидрокси или циано. В некоторых таких вариантах осуществления R³ выбран из С_1-6алкилфенила и С_1-6алкилиндолила. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления R³ выбран из:

В некоторых вариантах осуществления R⁵ представляет собой водород, L представляет собой С=О или SO₂, R⁶ представляет собой Ar-Y-, и каждый Ar независимо выбран из фенила, индолила, бензофуранила, нафтила, хинолинила, хинолонила, тиенила, пиридила, пиразила и тому подобного. В некоторых вариантах осуществления Ar может быть замещен Ar-E-, где Е выбран из прямой связи, -О- и С_1-6алкила. В некоторых других таких вариантах осуществления, где Q представляет собой С_1-6алкил, Q может быть замещен, предпочтительно, Ar, например фенилом.

В некоторых вариантах осуществления R⁵ представляет собой водород, Q отсутствует, L представляет собой С=О или SO₂, R⁶ выбран из Ar-Y- и гетероциклила. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления гетероциклил выбран из хромонила, хроманила, морфолино и пиперидинила. В некоторых других предпочтительных таких вариантах осуществления Ar выбран из фенила, индолила, бензофуранила, нафтила, хинолинила, хинолонила, тиенила, пиридила, пиразила и тому подобного.

В некоторых вариантах осуществления R⁵ представляет собой водород, L представляет собой С=О или SO₂, Q отсутствует, R⁶ представляет собой С_2-6алкенил, где С_2-6алкенил представляет собой замещенную винильную группу, где заместитель представляет собой, предпочтительно, арильную или гетероарильную группу, более предпочтительно, фенильную группу, необязательно замещенную одним-четырьмя заместителями.

С_1-6арилалкила, гетероарила, С_1-6гетероарилалкила,

R¹¹ZA-C_1-8алкила-, R¹⁴Z-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-С_1-8алкила-,

(R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-С_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-,

(R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-С_1-8алкил-Z-C_1-8алкила-,

R¹¹ZA-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, гетероциклилМZAZ-C_1-8алкила-,

(R¹³)₃N⁺-C_1-8алкила-, гетероциклилМ-, карбоциклилМ-,

R¹⁴SO₂C_1-8алкила- и R¹⁴SO₂NH-, где каждый присутствующий Z и А независимо является другим, чем ковалентная связь. В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, и R⁶ представляет собой Н.

В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, и R⁶ выбран из гетероарила и С_1-6гетероарилалкила. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой гетероарил, выбранный из пиррола, фурана, тиофена, имидазола, изоксазола, оксазола, оксадиазола, тиазола, тиадиазола, триазола, пиразола, пиридина, пиразина, пиридазина и пиримидина. В некоторых альтернативных таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой С_1-6гетероарилалкил, выбранный из пирролилметила, фуранилметила, тиенилметила, имидазолилметила, изоксазолилметила, оксазолилметила, оксадиазолилметила, тиазолилметила, тиадиазолилметила, триазолилметила, пиразолилметила, пиридилметила, пиразинилметила, пиридазинилметила и пиримидинилметила.

В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует или представляет собой O, и R⁶ представляет собой карбоциклилМ-, где М представляет собой С_0-1алкил. В некоторых вариантах осуществления R⁶ представляет собой циклопропил или циклогексил.

В некоторых вариантах осуществления L и А представляют собой С=О, Q отсутствует, Z представляет собой О, М представляет собой С_1-8алкил, предпочтительно, метилен, и R⁶ выбран из R¹¹ZA-C_1-8алкила-, R¹¹Z-C_1-8алкила-, R¹¹ZA-C_1-8алкил-ZAZ-С_1-8алкила, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-Z-C_1-8алкила- и гетероциклилМZAZ-C_1-8алкила-, где каждый присутствующий А независимо является другим, чем ковалентная связь. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой гетероциклилМZAZ-С_1-8алкил-, где гетероциклил представляет собой замещенный или незамещенный оксодиоксоленил или N(R¹⁶)(R¹⁷), где R¹⁶ и R¹⁷ вместе представляют собой С_1-6алкил-Y-С_1-6алкил, предпочтительно, С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил, тем самым образуя кольцо.

В некоторых предпочтительных вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, М представляет собой С_1-8алкил, и R⁶ выбран из (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкила-, (R¹³)₂NC_1-8алкила, (R¹³)₃N⁺C_1-8алкила- и гетероциклил-М-. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой (R¹³)₂NC_1-8алкил или (R¹³)₃N⁺C_1-8алкил-, где R¹³ представляет собой С_1-6алкил. В некоторых других таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой гетероциклилМ-, где гетероциклил выбран из морфолино, пиперидино, пиперазино и пирролидино.

В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=О, R⁵ представляет собой С_1-6алкил, Q выбран из О и NH, и R⁶ выбран из С_1-6алкила, циклоалкил-М, С_1-6арилалкила и С_1-6гетероарилалкила. В других вариантах осуществления L представляет собой С=О, R⁵ представляет собой С_1-6алкил, Q выбран из О и NH, и R⁶ представляет собой С_1-6алкил, где С_1-6алкил выбран из метила, этила и изопропила. В следующих вариантах осуществления L представляет собой С=О, R⁵ представляет собой С_1-6алкил, Q выбран из О и NH, и R⁶ представляет собой С_1-6арилалкил, где арилалкил представляет собой фенилметил. В других вариантах осуществления L представляет собой С=О, R⁵ представляет собой С_1-6алкил, Q выбран из О и NH, и R⁶представляет собой С_1-6гетероарилалкил, где гетероарилалкил представляет собой (4-пиридил)метил.

В некоторых вариантах осуществления L отсутствует или представляет собой С=О, R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-6алкил-Y-С_1-6алкил, С_1-6алкил-ZA-С_1-6алкил или С_1-6алкил-А, где каждый присутствующий Z и А независимо является другим, чем ковалентная связь, тем самым образуя кольцо. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q и Y отсутствуют, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-C_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L и Q отсутствуют, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, Y выбран из NH и N-С_1-6алкила, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L и Q отсутствуют, и R⁵ и R⁶ представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L представляет собой С=О, Y отсутствует, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L и А представляют собой С=O, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-2алкил-ZA-С_1-2алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L и А представляют собой С=O, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_2-3алкил-А.

В некоторых вариантах осуществления R⁷ и R⁸ независимо выбраны из водорода и С_1-6алкила. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления R⁷ и R⁸ независимо выбраны из водорода и метила. В более предпочтительных таких вариантах осуществления R⁷ и R⁸ оба представляют собой водород.

В некоторых вариантах осуществления Х представляет собой О, R² и R³ каждый независимо представляет собой С_1-6арилалкил, и R¹ выбран из С_1-6алкила, С_1-6гидроксиалкила, С_1-6алкоксиалкила, арила и С_1-6арилалкила, любой из которых необязательно замещен одним или несколькими заместителями из амида, амина, карбоновой кислоты (или ее соли), сложного эфира (включающего сложный С_1-6алкиловый эфир, сложный С_1-5алкиловый эфир и сложный ариловый эфир), тиола и простого тиоэфира.

В некоторых вариантах осуществления стереохимическая конфигурация атомов углерода, имеющих заместители R¹, R² или R³, независимо представляет собой D или L. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления стереохимическая конфигурация по меньшей мере одного из атомов углерода, имеющего заместители R¹, R² и R³, соответственно, представляет собой D. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления стереохимическая конфигурация атома углерода, имеющего заместители R¹, представляет собой D. В некоторых таких вариантах осуществления стереохимическая конфигурация атома углерода, имеющего заместители R², представляет собой D. В некоторых таких вариантах осуществления стереохимическая конфигурация атома углерода, имеющего заместители R³, представляет собой D. В некоторых вариантах осуществления стереохимическая конфигурация по меньшей мере двух из атомов углерода, имеющих заместители R¹, R² и R³, соответственно, представляет собой D. Еще в другом предпочтительном варианте осуществления стереохимическая конфигурация всех трех атомов углерода, имеющих заместители R¹, R² и R³, соответственно, представляет собой D.

где каждый А независимо выбран из С=О, C=S и SO₂, предпочтительно, С=О, или

L отсутствует или выбран из С=О, C=S и SO₂, предпочтительно, SO₂ или С=О;

М отсутствует или представляет собой С_1-12алкил, предпочтительно, С_1-8алкил;

W выбран из -СНО и В(OR¹¹)₂;

Q отсутствует или выбран из О, NH и N-С_1-6алкила;

Y отсутствует или выбран из С=О и SO₂;

каждый Z независимо выбран из О, S, NH и N-С_1-6алкила, предпочтительно, О; или

R² и R³ каждый независимо выбран из арила, С_1-6арилалкила, гетероарила и С_1-6гетероарилалкила;

R⁴ представляет собой N(R⁵)L-Q-R⁶;

R⁵ выбран из водорода, ОН, С_1-6арилалкила и С_1-6алкила, предпочтительно, водорода;

R⁶ выбран из водорода, С_1-6алкила, С_2-6алкенила, С_2-6алкинила, Ar-Y-, карбоциклила, гетероциклила, N-концевой защитной группы, арила, С_1-6арилалкила, гетероарила, С_1-6гетероарилалкила, R¹¹ZAZ-C_1-8алкила, R¹⁴Z-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, R¹¹ZAZ-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, гетероциклилМZAZ-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкила-, (R¹³)₂N-C_1-12алкила-, (R¹³)₃N⁺-C_1-12алкила-, гетероциклилМ-, карбоциклилМ-, R¹⁴SO₂C_1-8алкила- и R¹⁴SO₂NH, предпочтительно, N-кэппирующей группы, более предпочтительно, трет-бутоксикарбонила или бензилоксикарбонила; или

R⁸ выбран из водорода, С_1-6алкила и С_1-6арилалкила, предпочтительно, водорода;

R⁹ выбран из водорода, ОН и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила, и

R¹⁰ представляет собой N-концевую защитную группу;

каждый R¹³ независимо выбран из водорода и С_1-6алкила, предпочтительно, С_1-6алкила; и

В некоторых вариантах осуществления R² выбран из С_1-6арилалкила и С_1-6гетероарилалкила. В некоторых таких вариантах осуществления R² выбран из С_1-6алкилфенила, С_1-6алкилиндолила, С_1-6алкилтиенила, С_1-6алкилтиазолила и С_1-6алкилизотиазолила, где алкильный фрагмент может содержать шесть, пять, четыре, три, два или один атом углерода, предпочтительно, один или два. В некоторых таких вариантах осуществления R² замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из гидрокси, галогена, амида, амина, карбоновой кислоты (или ее соли), сложного эфира (включающего сложный С_1-6алкиловый эфир, сложный С_1-5алкиловый эфир и сложный ариловый эфир), тиола или простого тиоэфира. В некоторых таких вариантах осуществления R² замещен заместителем, выбранным из алкила, тригалогеналкила, алкокси, гидрокси или циано. В некоторых вариантах осуществления R² выбран из С_1-6алкилфенила и С_1-6алкилиндолила. В некоторых предпочтительных таких вариантах осуществления R² выбран из:

В некоторых вариантах осуществления R⁵ представляет собой водород, L представляет собой С=О или SO₂, R⁶ представляет собой Ar-Y-, и каждый Ar независимо выбран из фенила, индолила, бензофуранила, нафтила, хинолинила, хинолонила, тиенила, пиридила, пиразила и тому подобного. В некоторых таких вариантах осуществления Ar может быть замещен Ar-E-, где Е выбран из прямой связи, -О- и С_1-6алкила. В некоторых других таких вариантах осуществления, когда Q представляет собой С_1-6алкил, Q может быть замещен, предпочтительно, Ar, например фенилом.

В некоторых вариантах осуществления R⁵ представляет собой водород, L представляет собой С=О или SO₂, Q отсутствует, и R⁶ представляет собой С_2-6алкенил, где С_2-6алкенил представляет собой замещенную винильную группу, где заместитель представляет собой, предпочтительно, арильную или гетероарильную группу, более предпочтительно, фенильную группу, необязательно замещенную одним-четырьмя заместителями.

С_1-6арилалкила, гетероарила, С_1-6гетероарилалкила,

R¹¹ZA-C_1-8алкила-, R¹⁴Z-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкила-,

(R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-,

(R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-Z-C_1-8алкила-,

R¹¹ZA-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, гетероциклилМZAZ-С_1-8алкила-,

(R¹³)₂N-C_1-8алкила-, (R¹³)₂N⁺-С_1-8алкила-, гетероциклилМ-,

В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, и R⁶ выбран из гетероарила и С_1-6гетероарилалкила. В некоторых вариантах осуществления R⁶ представляет собой гетероарил, выбранный из пиррола, фурана, тиофена, имидазола, изоксазола, оксазола, оксадиазола, тиазола, тиадиазола, триазола, пиразола, пиридина, пиразина, пиридазина и пиримидина. В некоторых альтернативных таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой С_1-6гетероарилалкил, выбранный из пирролилметила, фуранилметила, тиенилметила, имидазолилметила, изоксазолилметила, оксазолилметила, оксадиазолилметила, тиазолилметила, тиадиазолилметила, триазолилметила, пиразолилметила, пиридилметила, пиразинилметила, пиридазинилметила и пиримидинилметила.

В некоторых вариантах осуществления L и А представляют собой С=О, Q отсутствует, Z представляет собой О, М представляет собой С_1-8алкил, предпочтительно, метилен, и R⁶ выбран из R¹¹ZA-C_1-8алкила-, R¹⁴Z-C_1-8алкила-, R¹¹ZA-C_1-8алкил-ZAZ-С_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-ZAZ-C_1-8алкила-, (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкил-Z-C_1-8алкила- и гетероциклилМZAZ-C_1-8алкила-, где каждый присутствующий А независимо является другим, чем ковалентная связь. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой гетероциклилМZAZ-C_1-8алкил-, где гетероциклил представляет собой замещенный или незамещенный оксодиоксоленил, или N(R¹⁶)(R¹⁷), где R¹⁶ и R¹⁷ вместе представляют собой С_1-6алкил-Y-С_1-6алкил, предпочтительно, С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил, тем самым образуя кольцо.

В некоторых предпочтительных вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, М представляет собой С_1-8алкил, и R⁶ выбран из (R¹¹O)(R¹²O)P(=O)O-C_1-8алкила-, (R¹³)₂NC_1-8алкила, (R¹³)₃N⁺C_1-8алкила- и гетероциклил-М-. В некоторых таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой (R¹³)₂NC_1-8алкил или (R¹³)₃N⁺C_1-8алкил, где R¹³ представляет собой С_1-6алкил. В некоторых других таких вариантах осуществления R⁶ представляет собой гетероциклилМ-, где гетероциклил выбран из морфолино, пиперидино, пиперазино и пирролидино.

В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=О, R⁵ представляет собой С_1-6алкил, Q выбран из О и NH, и R⁶ выбран из С_1-6алкила, циклоалкил-М, С_1-6арилалкила и С_1-6гетероарилалкила. В некоторых вариантах осуществления L представляет собой С=О, R⁵ представляет собой С_1-6алкил, Q выбран из О и NH, и R⁶ представляет собой С_1-6алкил, где С_1-6алкил выбран из метила, этила и изопропила. В следующих вариантах осуществления L представляет собой С=О, R⁵ представляет собой С_1-6алкил, Q выбран из О и NH, и R⁶ представляет собой С_1-6арилалкил, где арилалкил представляет собой фенилметил. В других вариантах осуществления L представляет собой С=О, R⁵ представляет собой С_1-6алкил, Q выбран из О и NH, и R⁶ представляет собой С_1-6гетероарилалкил, где гетероарилалкил представляет собой (4-пиридил)метил.

В некоторых вариантах осуществления L отсутствует, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-6алкил-Y-С_1-6алкил, С_1-6алкил-ZA-С_1-6алкил или С_1-6алкил-А, где каждый присутствующий Z и А независимо является другим, чем ковалентная связь, тем самым образуя кольцо. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления L представляет собой С=О, Q и Y отсутствуют, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-ZA-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L и Q отсутствуют, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L представляет собой С=О, Q отсутствует, Y выбран из NH и N-С_1-6алкила, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L представляет собой С=О, Y отсутствует, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-3алкил-Y-С_1-3алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L и А представляют собой С=O, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_1-2алкил-Y-С_1-2алкил. В другом предпочтительном варианте осуществления L и А представляют собой С=O, и R⁵ и R⁶ вместе представляют собой С_2-3алкил-А.

В некоторых вариантах осуществления R⁸ выбран из водорода и С_1-6алкила. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления R⁸ выбран из водорода и метила. В более предпочтительных вариантах осуществления R⁸ представляет собой водород.

В некоторых вариантах осуществления Х представляет собой О, R² и R³ каждый независимо представляет собой С_1-6арилалкил, и R¹ выбран из С_1-6алкила, С_1-6гидроксиалкила, С_1-6алкоксиалкила, арила и С_1-6арилалкила, любой из которых необязательно замещен одним или несколькими заместителями из амида, амина, карбоновой кислоты (или ее соли), сложного эфира (включающего сложный С_1-6алкиловый эфир, сложный С_1-5алкиловый эфир и сложный ариловый эфир), тиола и простого тиоэфира.

В некоторых вариантах осуществления стереохимическая конфигурация атомов углерода, имеющих заместители R² и R³, представляет собой D или L. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления стереохимическая конфигурация по меньшей мере одного из атомов углерода, имеющих заместители R² и R³, соответственно, представляет собой D. В некоторых таких вариантах осуществления стереохимическая конфигурация атома углерода, имеющего заместители R², представляет собой D. В таких вариантах осуществления стереохимическая конфигурация атома углерода, имеющего заместители R³, представляет собой D. В некоторых вариантах осуществления стереохимическая конфигурация обоих атомов углерода, имеющих заместители R² и R³, соответственно, представляет собой D.

Один аспект изобретения относится к ингибиторам, которые предпочтительно ингибируют активность иммунопротеасомы по сравнению с активностью конститутивной протеасомы. В некоторых вариантах осуществления отношение ЕС₅₀ соединения любой из формул I-IV в испытании на активность конститутивной протеасомы по сравнению с ЕС₅₀ такого же соединения в испытании на активность иммунопротеасомы составляет выше 1. В некоторых таких вариантах осуществления соотношение ЕС₅₀ выше 2, 3, 4 или даже 5. В данном описании описаны подходящие испытания для определения активности конститутивной протеасомы и активности иммунопротеасомы (см. пример 18).

Термин «С_x-yалкил» относится к замещенным или незамещенным насыщенным углеводородным группам, включающим алкильные группы с неразветвленной цепью и алкильные группы с разветвленной цепью, которые содержат от x до y атомов углерода в цепи, включая галогеналкильные группы, такие как трифторметил и 2,2,2-трифторэтил и т.д. С₀алкил означает водород, когда группа находится в концевом положении, и означает связь, если группа внутренняя. Термин «С_2-yалкенил» и «С_2-yалкинил» относятся к замещенным или незамещенным ненасыщенным алифатическим группам аналогичной длины и возможного замещения для алкилов, описанных выше, но которые содержат по меньшей мере одну двойную или тройную связь, соответственно.

Термин «алкокси» относится к алкильной группе, имеющей присоединенный к ней атом кислорода. Репрезентативные алкоксигруппы включают метокси, этокси, пропокси, трет-бутокси и тому подобное. «Простой эфир» представляет собой два углеводорода, ковалентно связанных атомом кислорода. Соответственно, заместитель алкила, который представляет такой алкил простого эфира, представляет собой алкокси или сходный с алкокси.

Термин «С_1-6алкоксиалкил» относится к С_1-6алкильной группе, замещенной алкоксигруппой, тем самым образуя простой эфир.

Применяемый в данном описании термин «С_1-6арилалкил» относится к С_1-6алкильной группе, замещенной арильной группой.

Термин «амин» и «амино» признан в данной области и относится как к незамещенным, так и замещенным аминам и их солям, например группе, которая может быть представлена общими формулами:

где R⁹, R¹⁰ и R^10' каждый независимо представляет собой водород, алкил, алкенил, -(СН₂)_m-R⁸, или R⁹ и R¹⁰, взятые вместе с атомом N, к которому они присоединены, образуют гетероцикл, имеющий от 4 до 8 атомов в кольцевой структуре; R⁸ представляет собой арил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклил или полициклил; и m равен 0 или целому числу от 1 до 8. В предпочтительных вариантах осуществления только один из R⁹ или R¹⁰ может быть карбонилом, например R⁹, R¹⁰ и атом азота вместе не образуют имид. В еще более предпочтительных вариантах R⁹ и R¹⁰ (и необязательно R^10') каждый независимо представляет собой водород, алкил, алкенил или -(СН₂)_m-R⁸. В некоторых вариантах осуществления аминогруппа имеет основной характер, означающий, что она имеет pK_a>7,00. Протонированные формы таких функциональных групп имеют pK_a выше 7,00.

Термин «амид» и «амидо», который признают в данной области как аминозамещенный карбонил, включает группу, которую можно представить общей формулой:

где R⁹ и R¹⁰ имеют значения, как описано выше. Предпочтительные варианты осуществления амида не будут включать имиды, которые могут быть нестабильными.

Используемый в данном описании термин «арил» включает 5-, 6- и 7-членные замещенные или незамещенные ароматические группы с одним кольцом, в которых каждый атом кольца представляет собой углерод. Термин «арил» также включает полициклические кольцевые системы, имеющие два или более циклических колец, в которых два или более атомов углерода являются общими для двух соединенных колец, где по меньшей мере одно из колец представляет собой ароматическое, например, другие циклические кольца могут быть циклоалкильными, циклоалкенильными, циклоалкинильными, арильными, гетероарильными и/или гетероциклильными. Арильные группы включают бензол, нафталин, фенантрен, фенол, анилин и тому подобное.

Используемые в данном описании термины «карбоцикл» и «карбоциклил» относятся к неароматическому замещенному или незамещенному кольцу, в котором каждый атом кольца представляет собой углерод. Термин «карбоцикл» и «карбоциклил» также включает полициклические кольцевые системы, имеющие два или более циклических колец, в которых два или более атомов углерода являются общими для двух соединенных колец, где по меньшей мере одно из колец представляет собой карбоциклическое, например, другие циклические кольца могут быть циклоалкильными, циклоалкенильными, циклоалкинильными, арильными, гетероарильными и/или гетероциклильными.

Термин «карбонил» признан в данной области и включает такие группы, которые можно представить общей формулой:

или

где Х является связью или представляет собой атом кислорода или серы, и R¹¹ представляет собой водород, алкил, алкенил, -(СН₂)_m-R⁸ или фармацевтически приемлемую соль, R^11' представляет собой водород, алкил, алкенил или -(СН₂)_m-R⁸, где R⁸ имеет значения, как указано выше. Когда Х представляет собой атом кислорода и R¹¹ или R^11' не является водородом, формула представляет собой «сложный эфир». Когда Х представляет собой атом кислорода и R¹¹ представляет собой водород, формула представляет собой «карбоновую кислоту».

Используемый в данном описании термин «фермент» может представлять собой любую частично или полностью белковую молекулу, которая осуществляет химическую реакцию каталитическим способом. Такие ферменты могут быть природными ферментами, слитыми ферментами, проферментами, апоферментами, денатурированными ферментами, фарнезилированными ферментами, убиквитинированными ферментами, ферментами, ацилированными жирной кислотой, герангеранилированными ферментами, GPI-связанными ферментами, липид-связанными ферментами, пренилированными ферментами, мутантными ферментами природного происхождения или полученными синтетическим путем, ферментами с модификациями в боковой цепи или основной цепи, ферментами, имеющими лидерные последовательности, и ферментами, образующими комплекс с небелковым веществом, таким как протеогликаны, протеолипосомы. Ферменты можно получать любыми способами, включающими природную экспрессию, промотированную экспрессию, клонирование, различные пептидные синтезы на основе растворов и в твердой фазе, и подобными способами, известными специалисту в данной области.

Используемый в данном описании термин «С_1-6гетероарилалкил» относится к С_1-6алкильной группе, замещенной гетероарильной группой.

Термин «гетероарил» включает замещенные или незамещенные ароматические 5-7-членные кольцевые структуры, более предпочтительно, 5-6-членные кольца, кольцевые структуры которых включают от одного до четырех гетероатомов. Термин «гетероарил» также включает полициклические кольцевые системы, имеющие два или более циклических колец, в которых два или более атомов углерода являются общими для двух связанных колец, где по меньшей мере одно из колец представляет собой гетероароматическое, например, другие циклические кольца могут быть циклоалкильными, циклоалкенильными, циклоалкинильными, арильными, гетероарильными и/или гетероциклильными. Гетероарильные группы включают, например, пиррол, фуран, тиофен, имидазол, изоксазол, оксазол, оксадиазол, тиазол, тиадиазол, триазол, пиразол, пиридин, пиразин, пиридазин, пиримидин и тому подобное.

Используемый в данном описании термин «гетероатом» означает атом любого элемента, иной, чем атом углерода или водорода. Предпочтительные гетероатомы представляют собой азот, кислород, фосфор и серу.

Термины «гетероциклил» или «гетероциклическая группа» относятся к замещенным или незамещенным неароматическим 3-10-членным кольцевым структурам, более предпочтительно, к 3-7-членным кольцам, кольцевые структуры которых включают от одного до четырех гетероатомов. Термины «гетероциклил» или «гетероциклическая группа» также включают полициклические кольцевые системы, имеющие два или более циклических колец, в которых два или более атомов углерода являются общими для двух связанных колец, где по меньшей мере одно из колец представляет собой гетероциклическое, например, другими циклическими кольцами могут быть циклоалкильные, циклоалкенильные, циклоалкинильные, арильные, гетероарильные и/или гетероциклильные. Гетероциклические группы включают, например, тетрагидропиран, пиперидин, пиперазин, пирролидин, морфолин, лактоны, лактамы и тому подобное.

Термин «С_1-6гидроксиалкил» относится к С_1-6алкильной группе, замещенной гидроксигруппой.

Используемый в данном описании термин «ингибитор» подразумевает описание соединения, которое блокирует или уменьшает активность фермента (например, ингибирует протеолитическое расщепление стандартных флуорогенных пептидных субстратов, таких как suc-LLVY-AMC, Box-LLR-AMC и Z-LLE-AMC, ингибирует различные каталитические активности 20S протеасомы). Ингибитор может действовать путем конкурентного, антиконкурентного или неконкурентного ингибирования. Ингибитор может связываться обратимо или необратимо, и поэтому термин включает соединения, которые представляют собой губительные для фермента субстраты. Ингибитор может модифицировать один или несколько сайтов у (или вблизи) активного сайта фермента, или он может вызвать конформационное изменение в другом месте фермента.

Используемый в данном описании термин «пептид» включает не только стандартные амидные связи со стандартными α-заместителями, но и обычно применяемые пептидомиметики, другие модифицированные связи, боковые цепи неприродного происхождения и модификации боковой цепи, как подробно описано ниже.

Термин «полициклил» или «полициклический» относится к двум или более кольцам (например, циклоалкильным, циклоалкенильным, циклоалкинильным, арильным, гетероарильным и/или гетероциклильным), в которых два или более атомов углерода являются общими для двух связанных колец, например, кольца представляют собой «конденсированные кольца». Каждое из колец полицикла может быть замещенным или незамещенным.

Термин «предотвращение» признают в данной области и при применении в связи с болезненным состоянием, таким как локальный рецидив (например, боли), заболеванием, таким как рак, комплексным синдромом, таким как сердечная недостаточность, или любым другим болезненным состоянием, совершенно понятен в данной области и включает введение композиции, которая снижает частоту или замедляет возникновение симптомов болезненного состояния в организме субъекта по сравнению с субъектом, который не получает композицию. Поэтому предотвращение рака включает, например, уменьшение количества обнаруживаемых раковых новообразований в группе пациентов, получающих профилактическое лечение, относительно не подвергаемой лечению контрольной группы и/или замедление появления обнаруживаемых раковых новообразований у подвергаемой лечению группы по сравнению с не подвергаемой лечению контрольной группой, например, посредством статистически и/или клинически значимого количества. Предотвращение инфекции включает, например, снижение количества диагнозов инфекции у подвергаемой лечению группы по сравнению с не подвергаемой лечению контрольной группой и/или замедление появления симптомов инфекции у подвергаемой лечению группы по сравнению с не подвергаемой лечению контрольной группой. Предотвращение боли включает, например, уменьшение силы или, альтернативно, отсрочки болевых ощущений, испытываемых субъектами, у подвергаемой лечению группы по сравнению с не подвергаемой лечению контрольной группой.

Термин «пролекарство» включает соединения, которые при физиологических условиях превращаются в терапевтически активные агенты. Обычный способ получения пролекарства представляет собой включение выбранных групп, которые гидролизуются при физиологических условиях с высвобождением требуемой молекулы. В других вариантах осуществления пролекарство превращается с помощью ферментативной активности животного-хозяина.

Термин «профилактическое или терапевтическое» лечение признан в данной области и включает введение в организм хозяина одной или нескольких из предложенных композиций. Если проводят введение до клинического проявления нежелательного болезненного состояния (например, заболевания или другого нежелательного состояния животного-хозяина), то лечение представляет собой профилактическое (т.е. оно защищает хозяина от развития нежелательного болезненного состояния), тогда как если проводят введение после проявления нежелательного болезненного состояния, лечение представляет собой терапевтическое (т.е. оно подразумевает уменьшение, ослабление или стабилизацию существующего нежелательного болезненного состояния или его побочных действий).

Термин «замещенный» относится к части молекулы, имеющей заместители, заменяющие водород на одном или нескольких атомах углерода основной цепи. Следует понимать, что «замещение» или «замещенный» включает безоговорочное условие, при котором такое замещение находится в соответствии с допустимой валентностью замещаемого атома и заместителя, и такое замещение приводит к стабильному соединению, которое, например, не подвергается спонтанному превращению, такому как перегруппировка, циклизация, элиминирование и т.д. Используемый в данном описании термин «замещенный» предусматривает включение всех допустимых заместителей органических соединений. В широком аспекте, допустимые заместители включают ациклические и циклические, линейные и разветвленные, карбоциклические и гетероциклические, ароматические и неароматические заместители органических соединений. Допустимыми заместителями может быть один или несколько, одинаковые или различные для соответствующих органических соединений. Для цели данного изобретения гетероатомы, такие как азот, могут иметь водородные заместители и/или любые допустимые заместители описанных выше органических соединений, которые удовлетворяют валентностям гетероатомов. Заместители могут включать, например, галоген, гидроксил, карбонил (такой как карбоксил, алкоксикарбонил, формил или ацил), тиокарбонил (такой как сложный тиоэфир, тиоацетат или тиоформиат), алкокси, фосфорил, фосфат, фосфонат, фосфинат, амино, амидо, амидин, имин, циано, нитро, азидо, сульфгидрил, алкилтио, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамид, сульфонил, гетероциклил, арилалкил или ароматическую или гетероароматическую группу. Специалисту в данной области будет понятно, что замещаемые на углеводородной цепи группы могут сами по себе быть замещенными, если целесообразно.

«Терапевтически эффективное количество» соединения в связи со способом лечения относится к количеству соединения(ий) в препарате, которое при введении как часть требуемой схемы дозирования (млекопитающего, предпочтительно, человека) смягчает симптом, облегчает болезненное состояние или замедляет появление болезненных состояний, в соответствии с клинически приемлемыми стандартами для расстройства или болезненного состояния, которое подвергают лечению, или для косметической цели, например, в разумных пределах отношения польза/риск, применимого к любому терапевтическому лечению.

Термин «простой тиоэфир» относится к алкильной группе, как описано выше, имеющей присоединенный к ней серосодержащий фрагмент. В предпочтительных вариантах осуществления «простой тиоэфир» представлен -S-алкилом. Репрезентативные группы простого тиоэфира включают метилтио, этилтио и тому подобное.

Используемый в данном описании термин «подвергаемый лечению» или «лечение» включает обратимость, уменьшение или подавление симптомов, клинических признаков, лежащих в основе патологии болезненного состояния, таким способом, чтобы улучшить или стабилизировать состояние субъекта.

Применения ингибиторов фермента

Биологические последствия ингибирования протеасомы многочисленны. Ингибирование протеасомы предлагается в качестве предотвращения и/или лечения большого числа заболеваний, включающих, но не ограничиваясь ими, пролиферативные заболевания, нейротоксические/дегенеративные заболевания, ишемические болезненные состояния, воспаление, относящиеся к иммунным заболевания, ВИЧ, формы рака, отторжение трансплантированного органа, септический шок, вирусные и паразитарные инфекции, болезненные состояния, связанные с ацидозом, дегенерацию желтого пятна, легочные болезненные состояния, синдром мышечного истощения, фиброзные заболевания, заболевания, связанные с ростом костей и волос.

Ингибиторы протеасомы можно применять для лечения состояний, опосредованных непосредственно протеолитической функцией протеасомы, таких как мышечное истощение, или опосредованных не непосредственно через белки, которые процессированы протеасомой, такие как NF-kB. Протеасома принимает участие в быстрой элиминации и посттрансляционном процессинге белков (например, ферментов), вовлеченных в клеточную регуляцию (например, клеточный цикл, генную транскрипцию и метаболические пути), внеклеточную коммуникацию и иммунную ответную реакцию (например, презентацию антигена).

Сообщают, что после обработки клеток различными ингибиторами протеасомы на клеточном уровне происходит аккумуляция полиубиквитированных белков, клеточные морфологические изменения и апоптоз. Еще следует отметить, что коммерчески доступные ингибиторы протеасомы ингибируют как конститутивную, так и иммуно-форму протеасомы. Даже бортезомиб, единственный одобренный FDA ингибитор протеасомы для лечения пациентов с рецидивирующей множественной миеломой, не различает эти две формы (Altun et al., Cancer Res 65:7896, 2005). Поэтому то, что известно о терапевтическом ингибировании протеасом, основано на работе с молекулами, которые ингибируют обе формы протеасомы. Соответственно, соединения изобретения могут быть полезными для уменьшения интенсивности побочных действий, связанных с молекулами, которые ингибируют обе формы протеасомы.

Экспрессия иммунопротеасомы происходит преимущественно в клетках и органах, которые образуют лимфатическую систему, таких как белые кровяные клетки (лейкоциты), костный мозг и тимус, селезенка и лимфатические узлы. Хотя некоторые органы предпочтительно экспрессируют конститутивные протеасомы (например, сердце), другие, такие как, например, надпочечник, печень, легкие и кишечник, по-видимому, экспрессируют обе формы.

Иммунная система, лейкоциты и лимфоидные ткани которой играют главную роль, ответственны за защиту организма от внешних биологических влияний. При нормальном функционировании они защищают организм от бактериальных и вирусных инфекций. Иммунная система также защищает аутологичные клетки, которые подвергаются онкогенной трансформации. Внутриклеточный протеолиз генерирует малые пептиды для презентации в Т-лимфоцитах, чтобы индуцировать иммунные ответные реакции, опосредованные МНС I класса. Протеасома представляет собой главного поставщика таких предшественников пептидов, однако различия между антигенными пептидами наблюдали среди клеток с различными количествами каждой формы протеасомы (Cascio et al., EMBO J 20:2357-2366, 2001). В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способу ингибирования презентации антигена в клетке, включающему воздействие на клетку соединением настоящего изобретения. В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способу изменения набора антигенных пептидов, продуцируемых протеасомой или другой Ntn с поликаталитической активностью. Например, если активность иммунопротеасомной протеасомы селективно ингибируют, оставшейся конститутивной протеасомой может быть продуцирован другой набор антигенных пептидов и презентирован в молекулах МНС на поверхностях клеток, чем набор, который продуцировался бы и презентировался без какого-либо ферментного ингибирования.

Несколько расстройств и болезненных состояний, связанных с аномальной функцией иммунной системы, обозначают в данном описании как относящиеся к иммунным болезненным состояниям. Вероятно, наиболее общеизвестное, относящееся к иммунному болезненное состояние представляет собой аллергические расстройства, такие как аллергии, астма и подобная атопическому дерматиту экзема. Такое происходит, когда иммунная система избыточно реагирует на воздействие антигенов в окружающей среде. Поэтому следующий вариант осуществления представляет собой способ подавления иммунной системы субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества соединения, ингибитора протеасомы, способом настоящего изобретения.

Иммунодефицитные расстройства возникают, когда часть иммунной системы должным образом не работает или не представлена. Они могут воздействовать на В лимфоциты, Т лимфоциты или фагоциты и могут быть либо наследственными (например, дефицит IgA, тяжелый комбинированный иммунодефицит (SCID), тимическая дисплазия и хронический грануломатоз), либо приобретенными (например, синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) и индуцированные дозированным средством иммунодефициты). Стратегию дозирования с использованием селективных ингибиторов протеасомы данного изобретения можно применять для лечения относящихся к иммунным болезненных состояний, таких как иммунодефицитные расстройства.

При аутоиммунных расстройствах иммунная система несоответствующим образом воздействует на здоровые органы и ткани организма таким образом, как если бы они были инородными захватчиками. Примером аутоиммунного заболевания является синдром Шегрена, который характеризуется инфильтрацией и фокальной аккумуляцией лимфоцитов в экзокринных железах. Изучение анализа уровня экспрессии протеасомы обнаружило значительную положительную регуляцию бета5i (LMP7) исключительно в слюнных железах SS пациентов (Egerer et al., Arthritis Rheum 54:1501-8, 2006). Другие примеры таких относящихся к иммунным болезненных состояний включают обыкновенную волчанку, ревматоидный артрит, склеродермию, анкилозирующий спондиллоартрит, дерматомиозит, псориаз, рассеянный склероз и воспалительное заболевание кишечника (такое как язвенный колит и болезнь Крона). Отторжение трансплантированной ткани/органа происходит, когда иммунная система ошибочно воздействует на клетки, которые введены в организм хозяина. Заболевание трансплантат против хозяина (GVHD), являющееся результатом аллогенной трансплантации, возникает, когда Т клетки из ткани донора продолжают наступление и воздействуют на ткани хозяина. Во всех трех случаях, аутоиммунное заболевание, отторжение трансплантата и GVHD, может быть полезным модулирование иммунной системы путем лечения субъекта композицией изобретения.

Воспаление представляет собой первую ответную реакцию иммунной системы на инфекцию или раздражение. Клеточный компонент воспаления включает движение лейкоцитов, которые экспрессируют иммунопротеасому, из кровеносных сосудов в воспаленные ткани. Такие клетки играют важную роль в устранении раздражителя, бактерий, паразита или клеточного дебриса. Уже известно, что ингибиторы протеасомы обладают противовоспалительной активностью (Meng et al. PNAS 96:10403-10408, 1999). В случаях хронического воспаления, которое характеризуется доминирующим присутствием макрофагов, клетки, которые первоначально служили в качестве защитных агентов, начинают высвобождать токсины и цитокины, включая TNF-α, теперь становятся губительными для организма, приводя к повреждению и утрате ткани. В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способу лечения воспаления и воспалительных заболеваний, включающему введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения, ингибитора протеасомы настоящего изобретения. Воспалительные заболевания включают острые (например, бронхит, конъюнктивит, панкреатит) и хронические болезненные состояния (например, хронический холецистит, бронхоэктаз, стеноз клапана аорты, рестеноз, псориаз и артрит) наряду с болезненными состояниями, связанными с воспалением, такими как фиброз, инфекция и ишемия.

После повреждения ткани, включающего повреждение вследствие воспалительного процесса, начинается развитие регенерации и заживление. Во время стадии регенерации, утраченная ткань заменяется путем пролиферации клеток того же типа, которые реконструируют нормальное пространственное расположение. Однако несоответствующая регенерация пространственного расположения ткани может иметь серьезные последствия. В некоторых случаях хронического воспалительного заболевания печени, регенерированные ткани образуют аномальное узелковое пространственное расположение, которое приводит к циррозу и портальной гипертензии. Процесс восстановления происходит, когда утраченная ткань заменяется фиброзным рубцом, который образуется из грануляционной ткани. Фиброз представляет собой избыточное и постоянное образование ткани шрама, являющееся результатом гиперпролиферативного роста фибробластов, и связан с активацией пути передачи сигнала TGF-β. Фиброз включает обширное отложение внеклеточного матрикса и может происходить фактически в любой ткани или охватывать несколько различных тканей. Обычно, уровень внутриклеточного белка передачи сигнала (Smad), который активирует транскрипцию целевых генов после стимуляции TGF-β, регулируется активностью протеасомы (Xu et al., 2000). Однако ускорение разложения компонентов передачи сигнала TGF-β наблюдали в случаях рака и других пролиферативных болезненных состояний. Поэтому некоторые варианты осуществления изобретения относятся к способу лечения гиперпролиферативных болезненных состояний, таких как диабетическая ретинопатия, дегенерация желтого пятна, диабетическая нефропатия, гломерулосклероз, IgA нефропатия, цирроз, атрезия желчных протоков, застойная сердечная недостаточность, склеродермия, вызванный облучением фиброз и фиброз легких (идиопатический легочный фиброз, коллагенозное сосудистое заболевание, саркоидоз, интерстициальное легочное заболевание и внешние легочные расстройства). Лечению жертв ожогов часто препятствует фиброз, поэтому в некоторых вариантах осуществления изобретение относится к местному или системному введению ингибиторов для лечения ожогов. Заживление раны после операции часто связано с бесформенными шрамами, которые можно предотвращать ингибированием фиброза. Поэтому в некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способу предотвращения или уменьшения образования шрамов.

Инфицирование бактериями, паразитом или вирусом, все приводит к инициированию воспалительного процесса. Когда полученное воспаление овладевает всем организмом, имеет место системный синдром ответной реакции на воспаление (SIRS). Термин сепсис применяют, когда это является результатом инфекции. Полагают, что сверхпродуцирование индуцированных липополисахаридом (LPS) цитокинов, таких как TNFα, является центральным для процессов, связанных с септическим шоком. Неудивительно, что LPS также индуцирует увеличение во всех компонентах пути метаболизма МНС-1, включая субъединицы иммунопротеасомы LMP2 и LMP7 (MacAry et al., PNAS 98:3982-3987, 2001). Кроме того, обычно принимают, что первая стадия в активации клеток LPS представляет собой связывание LPS со специфическими мембранными рецепторами. α- и β-субъединицы комплекса 20S протеасомы идентифицированы как LPS-связывающие белки, что позволяет предполагать, что LPS-индуцированная сигнальная трансдукция может быть важной терапевтической мишенью при лечении или предотвращении сепсиса (Qureshi, N. et al., J. Immun. (2003) 171:1515-1525). Поэтому в некоторых вариантах осуществления описываемые ингибиторы протеасомы можно применять для ингибирования TNFα, чтобы предотвращать и/или лечить септический шок.

В другом варианте осуществления предложенные композиции применяют для лечения паразитарной инфекции, такой как инфекции, вызванные протозойными паразитами. Полагают, что протеасома таких паразитов вовлечена, главным образом, в клеточную дифференциацию и активности репликации (Paugam et al., Trends Parasitol. 2003, 19(2):55-59). Помимо этого, показано, что вид entamoeba теряет способность к инцистированию после воздействия ингибиторов протеасомы (Gonzales, et al., Arch. Med. Res. 1997, 28, Spec No: 139-140). В некоторых таких вариантах осуществления композиции ингибитора протеасомы применяют для лечения паразитарных инфекций в организме людей, вызванных протозойным паразитом, выбранным из Plasmodium sps. (включая P. falciparum, P. vivax, P. malariae и P. ovale, которые вызывают малярию), Trypanosoma sps. (включая T. Cruzi, которая вызывает болезнь Чага, и T. brucei, которая вызывает африканскую сонную болезнь), Leishmania sps. (включая L. amazonesis, L. donovani, L. infantum, L. mexicana и т.д.), Pneumocystis carinii (известно, что протозои вызывают пневмонию у пациентов со СПИД и других иммуносупрессивных пациентов), Toxoplasma gondii, Entamoeba histolytica, Entamoeba invadens и Giardia lamrlia. В некоторых вариантах осуществления предложенные композиции применяют для лечения паразитарных инфекций у животных и домашнего скота, вызванных протозойным паразитом, выбранным из Plasmidium hermani, Criptosporidium sps., Echinococcus granulosus, Eimeria tenella, Sarcocystis neurona и Neurospora crassa. Другие соединения, применимые в качестве ингибиторов протеасомы при лечении паразитарных заболеваний, описаны в WO 9810779, который включен в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.

В некоторых вариантах осуществления композиции ингибитора протеасомы ингибируют активность протеасомы у паразита без возвращения к норме лейкоцитов. В некоторых таких вариантах осуществления длительный период полужизни кровяных клеток может обеспечивать продолжительную защиту, учитывая терапию против повторяющихся воздействий паразитов. В некоторых вариантах осуществления описываемые в данном описании ингибиторы протеасомы могут обеспечивать продолжительную защиту с учетом химиопрофилактики против будущего инфицирования.

Вирусные инфекции вносят вклад в патологию многих заболеваний. Сердечные болезненные состояния, такие как проявление миокардита и распространенная кардиомиопатия связаны с Коксаки вирусом B3. В сравнительных анализах микроряда полного генома инфицированных сердец мышей, все три субъединицы иммунопротеасомы были равномерно активированы в сердцах мышей, у которых обнаруживали хронический миокардит (Szalay et al., Am J Pathol 168:1542-52, 2006). Некоторые вирусы используют систему убиквитин-протеасома на стадии вхождения вируса, когда вирус высвобождается из эндосомы в цитозоль. Мышиный вирус гепатита (MHV) принадлежит к семейству Coronaviridae, которое также включает коронавирус тяжелого острого респираторного синдрома (SARS). Yu и Lai (J Viril 79:644-648, 2005) продемонстрировали, что обработка клеток, инфицированных MHV, ингибитором протеасомы приводит к уменьшению вирусной репликации, коррелируя с уменьшенным вирусным титром по сравнению с титром необработанных клеток. Вирусу гепатита В человека (HBV), члену семейства вирусов Hepadnaviridae, требуются для распространения кодированные вирусом белки оболочки. Ингибирование пути деградации протеасомы вызывает значительное уменьшение количества секретируемых белков оболочки (Simsek et al., J Virol 79:12914-12920, 2005). Помимо HBV другие вирусы гепатита (А, С, D и Е) также могут использовать путь деградации убиквитин-протеасома для секреции, морфогенеза и патогенеза.

Моноцитогенез бактерии Listeria вызывает болезненное состояние, известное как листериоз, проявления которого изменяются от слабого (тошнота, рвота и диарея) до тяжелого (септицемия, менингит, энцефалит). Количественный анализ изменений в составе субъединицы протеасомы обнаружил, что инфицирование мышей лимфоцитарным вирусом хориоменингита или моноцитогенез Listeria приводит к почти полному замещению конститутивных протеасом иммунопротеасомами в печени в течение семи дней (Khan et al., J Immunol 167:6859-6868, 2001). Имеются прокариоты, которые эквивалентны частице эукариоты 20S протеасомы. Хотя состав субъединицы частицы прокариоты 20S проще, чем частицы эукариотов, она обладает способностью гидролизовать пептидные связи аналогичным образом. Например, нуклеофильное воздействие на пептидную связь происходит через остаток треонина на N-конце β-субъединиц. Поэтому вариант осуществления данного изобретения относится к способу лечения прокариотических инфекций, включающему введение субъекту эффективного количества описываемой в данном описании композиции ингибитора протеасомы. Прокариотические инфекции могут включать заболевания, вызванные либо микобактериями (такие как туберкулез, лепра или язва Бурули), либо архибактериями.

Соответственно, в некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способу лечения инфекции (например, бактериальной, паразитарной или вирусной), включающему контактирование клетки (или введение субъекту) с эффективным количеством соединения настоящего изобретения.

Ишемия и реперфузное повреждение приводят к гипоксии, болезненному состоянию, в котором проявляется недостаток доставки кислорода к тканям организма. Такое болезненное состояние вызывает повышенная деградация Ik-Bα, которая тем самым приводит к активации NF-kВ (Koong et al., 1994). Представляет интерес тот факт, что факторы, которые идентифицированы как способные усиливать экспрессию иммунопротеасомы, TNF-α и липополисахарид, также стимулируют активацию NF-kВ. Продемонстрировано, что интенсивность повреждения, которое приводит к гипоксии, можно уменьшить введением ингибитора протеасомы (Gao et al., 2000; Bao et al., 2001; Pye et al., 2003). Поэтому некоторые варианты осуществления изобретения относятся к способу лечения ишемического болезненного состояния или реперфузного повреждения, включающему введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения ингибитора протеасомы настоящего изобретения. Примеры таких болезненных состояний или повреждений включают, но не ограничиваются ими, острый коронарный синдром (ранимые бляшки), окклюзивное поражение артерии (окклюзии артерий и сосудов сердца, головного мозга, периферических), атеросклероз (коронарный склероз, заболевание коронарной артерии), инфаркты, сердечную недостаточность, панкреатит, миокардиальную гипертрофию, стеноз и рестеноз.

Кахексия представляет собой синдром, характеризующийся истощением скелетных мышц, связанным с усиленным протеолизом, обусловленным метаболизмом убиквитин-протеасомы. Ингибирование протеасомы уменьшает протеолиз, тем самым уменьшая как утрату мышечного белка, так и азотистую нагрузку на почки или печень (Tawa et al., JCI 100:197-203, 1997). Сообщают, что при кахексии повышена экспрессия провоспалительных цитокинов, TNF-α и IFN-γ, которые оба стимулируют экспрессию субъединиц иммунопротеасомы (Acharyya et al., JCI 114:370-378, 2004). Действительно, большая часть типов мышечной атрофии демонстрирует повышенные скорости деградации белка (Lecker et al., FASEB J 18:39-51, 2004). Мышечное истощение проявляется в нескольких угрожающих жизни заболеваниях, включающих рак, сепсис, почечную недостаточность, СПИД, истощение, денервационную атрофию, ацидоз, диабет, атрофию с мышечным бездействием и застойную сердечную недостаточность. Один вариант осуществления изобретения относится к лечению кахексии и заболеваний с мышечным истощением. Способы изобретения полезны для лечения таких болезненных состояний, как рак, хронические инфекционные заболевания, лихорадка, мышечное бездействие (атрофия) и денервация, нервное повреждение, истощение, почечная недостаточность, связанная с ацидозом, и печеночная недостаточность. См., например, Goldberg, патент США № 5340736.

Деградация некоторых белков протеасомой действует на механизмы передачи сигнала, которые в свою очередь действуют на генную транскрипцию, клеточный цикл и метаболические пути. Как отмечено выше, ингибиторы протеасомы блокируют как деградацию, так и процессинг убиквитинированного NF-kB in vitro и in vivo. Ингибиторы протеасомы также блокируют деградацию IkB-А и активацию NF-kB (Palombella, et al., Cell (1994) 78:773-785; и Traenckner, et al., EMBO J. (1994) 13:5433-5441). Один вариант осуществления изобретения представляет собой способ ингибирования деградации IkB-α, включающий контактирование клетки с соединением настоящего изобретения.

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способам воздействия циклин-зависимых эукариотических клеточных циклов, включающим воздействие на клетку (in vivo или in vitro) ингибитора протеасомы настоящего изобретения. Циклины представляют собой белки, вовлеченные в контроль клеточного цикла. Протеасомы принимают участие в деградации циклинов. Примеры циклинов включают митотические циклины, G1 циклины и циклин В. Деградация циклинов дает возможность клетке завершить одну стадию клеточного цикла (например, митоз) и войти в другую (например, деление). Полагают, что все циклины связаны с протеинкиназой р34^cdc2 или аналогичными киназами. Протеолиз целевого сигнала локализован на аминокислотах 42-RAALGNISEN-50 (бокс деструкции). Очевидно, что циклин превращается в форму, уязвимую для убиквитинлигазы, или что циклин-специфичная лигаза активируется во время митоза (Ciechanover, A., Cell, (1994) 79:13-21). Ингибирование протеасомы ингибирует деградацию циклина и, следовательно, ингибирует клеточную пролиферацию, например, в случаях рака, имеющего отношение к циклину (Kumatori et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1990) 87:7071-7075). В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способу лечения пролиферативного заболевания у субъекта (например, рака, псориаза или рестеноза), включающему введение субъекту эффективного количества композиции ингибитора протеасомы способом настоящего изобретения. Изобретение также относится к способу лечения у субъекта воспаления, связанного с циклином, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества композиции ингибитора протеасомы способом настоящего изобретения.

В созревающих ретикулоцитах и растущих фибробластах, клетках, лишенных инсулина или сыворотки, скорость протеолиза почти двойная, что наводит на мысль о роли протеасомы в клеточном метаболизме. В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способам уменьшения скорости внутриклеточной деградации белка в клетке. Каждый из таких способов включает контактирование клетки (in vivo или in vitro, например, мышцы у субъекта) с эффективным количеством фармацевтической композиции, содержащей ингибитор протеасомы настоящего изобретения.

Болезнь Альцгеймера (AD) представляет собой прогрессирующее нейродегенеративное болезненное расстройство, связанное с утратой высшей когнитивной функции. Патологические признаки заболевания включают старческие амилоидные бляшки, нейрофибриллярные клубки, дистрофические невриты и значительную нейрональную утрату в отдельных областях головного мозга. Микроглия, свойственная макрофагам в головном мозге, высвобождает многочисленные провоспалительные цитокины, включая TNF-α, после активирования Аβ42, пептидом, связанным с невритными и сосудистыми амилоидными бляшками. Такая микроглиальноопосредованная воспалительная ответная реакция вносит вклад в значительную нейрональную утрату. Основанные на клетках исследования продемонстрировали, что исходные кортикальные нейроны, обработанные кондиционированными средами из микроглиальных клеток BV2, стимулированных либо LPS/INS-γ, либо сонифицированными Аβ42 пептидами, приводят приблизительно к 60% снижению жизнеспособности клеток (Gan et al., J. Biol. Chem. 279:5565-5572, 2004). Более высокая экспрессия иммунопротеасомы обнаружена в ткани головного мозга у пациентов с AD, чем у не имеющих деменции пожилых людей (Mishto et al., Neurobiol Aging 27:54-66, 2006).

Пациенты, страдающие болезнью Гентингтона (HD), другим нейродегенеративным расстройством, демонстрируют двигательную дисфункцию и ухудшение познавательной способности в течение ряда лет до смерти. После апоптоза можно детектировать присутствие включений или интранейрональных агрегатов, вызванное расширенной мутацией полиQ (также обозначенное как расширение CAG триплетного повтора), сопровождаемое значительной атрофией в полосатом теле и участках коры головного мозга. Иммуногистохимией обнаружено, что происходит значительное усиление в экспрессии иммунопротеасомы в полосатом теле и фронтальной области коры головного мозга пациентов с HD по сравнению с показателями у нормальных взрослых соответствующего возраста (Diaz-Hernandez et al., J Neurosci 23:11653-1161, 2003). После дополнительного анализа обнаружено, что усиление преимущественно происходит в дегенеративных нейронах. С использованием мышиной модели HD исследователи обнаружили селективное увеличение как в химотрипсино-, трипсино-подобной активностях в подвергаемой воздействию, так и в содержащих агрегаты областях головного мозга, главным образом, коре головного мозга и полосатом теле (Diaz-Hernandez et al., J Neurosci 23:11653-1161, 2003).

Соответственно, некоторые варианты осуществления изобретения относятся к применению композиций ингибитора протеасомы настоящего изобретения для лечения нейродегенеративных заболеваний. Нейродегенеративные заболевания и болезненные состояния включают, но не ограничиваются ими, удар, ишемическое повреждение нервной системы, невральную травму (например, перкуссивное повреждение головного мозга, повреждение позвоночника и травматическое повреждение в нервной системе), рассеянный склероз и другие иммуноопосредованные невропатии (например, синдром Гуллиана-Барр и его варианты, острую двигательную аксональную нейропатию, острую воспалительную демиелинирующую полинейропатию и синдром Фишера), комплекс деменции при ВИЧ/СПИД, аксономию, диабетическую невропатию, болезнь Паркинсона, болезнь Гентингтона, рассеянный склероз, бактериальный, паразитарный, грибковый и вирусный менингит, энцефалит, сосудистую деменцию, деменцию вследствие множественного инфаркта, деменцию с тельцами Леви, деменцию передней доли, например болезнь Пика, субкортикальные деменции (например, болезнь Гентингтона или прогрессирующий супрануклеарный паралич), синдромы фокальной кортикальной атрофии (такие как первичная афазия), метаболическую токсическую деменцию (такую как хронический гипотиреоз или дефицит В12) и деменции, вызванные инфекциями (такие, как сифилис или хронический менингит).

Показано также, что ингибиторы, которые связываются с 20S протеасомой, стимулируют костеобразование в культурах костных органов. Кроме того, когда такие ингибиторы вводят системно мышам, некоторые ингибиторы протеасомы увеличивают объем кости и скорость костеобразования на 70% (Garrett, I.R. et al., J. Clin. Invest. (2003) 111:1771-1782), поэтому можно предположить, что убиквитин-протеасомные механизмы регулируют дифференциацию остеобластов и костеобразование. Поэтому описанные композиции ингибитора протеасомы можно применять при лечении и/или предотвращении заболеваний, связанных с потерей кости, таких как остеопороз.

Рак представляет собой общий термин для заболевания, характеризуемого неконтролируемым аномальным ростом клеток. Многие формы рака возникают через многостадийные пути метаболизма, вовлекающие инактивацию белков супрессоров опухоли и активацию онкогенных пептидов. Раковые клетки могут распространяться в другие части организма через лимфатическую систему или кровоток. Обычно, рак классифицируют в соответствии с наиболее значительно вовлеченным типом ткани или клетки. Как отмечали ранее, ингибитор протеасомы уже обоснован как терапевтическая стратегия для лечения рака, в особенности, множественной миеломы. Как показано на фиг.1, клетки множественной миеломы обладают обеими формами протеасомы, хотя соотношение может до некоторой степени изменяться. Множественная миелома представляет собой гематологическое заболевание, характеризуемое избыточным количеством аномальных клеток плазмы в костном мозге. Клетки плазмы развиваются из В-клеток, поэтому неудивительно, что другие злокачественные В-клетки также будут до некоторой степени экспрессировать иммунопротеасому. За исключением двух клеточных линий хронического миелогенного лейкоза, гем-аналогичных форм рака (например, множественной миеломы, лейкозов и лимфом), которые, по-видимому, обычно экспрессируют иммунопротеасому (фиг.1). Раковые клетки, происходящие из лимфоидных клеток, экспрессируют 30% или более иммунопротеасомы. В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способу лечения рака, включающему введение терапевтически эффективного количества соединения настоящего изобретения. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления рак представляет собой расстройство, связанное с гемом.

Интрига в том, что некоторые формы рака (например, солидные опухоли, плоскоклеточная карцинома головы и шеи, цервикальная карцинома и мелкоклеточная легочная карцинома), по-видимому, отрицательно регулируют экспрессию иммунопротеасомы (Evans et al., J Immunok 167:5420, 2001; Meissner et al., Clin Cancer Res 11:2552, 2005; Restifo et al., Exp Med 177:265-272, 1993). По-видимому, это коррелирует с недостаточным процессингом антигена и может представлять собой стратегию, применяемую опухолевыми клетками для избавления от иммунного надзора. Обработка клеток INF-γ может индуцировать экспрессию иммунопротеасомы. Поэтому некоторые варианты осуществления изобретения относятся к способу лечения форм рака, включающему введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества INF-γ или TNF-α и соединения ингибитора протеасомы настоящего изобретения.

Введение

Соединения, полученные, как описано в данном описании, можно вводить в различных формах, в зависимости от расстройства, подвергаемого лечению, и возраста, болезненного состояния и массы тела пациента, как хорошо известно в данной области. Например, когда соединения предназначены для перорального введения, их можно составлять в виде таблеток, капсул, гранул, порошков или сиропов, или для парентерального введения их можно составлять в виде инъекций (внутривенных, внутримышечных или подкожных), препаратов для капельной инфузии или суппозиториев. Для введения офтальмическим путем через мембрану слизистой оболочки, их можно составлять в виде глазных капель или глазных мазей. Такие препараты можно получать общепринятыми способами, и, если требуется, активный ингредиент можно смешивать с любой общепринятой добавкой или эксципиентом, таким как связующее, дезинтегрирующий агент, лубрикант, корригент, солюбилизирующий агент, вспомогательное средство для суспензии, эмульгирующий агент, покрывающий агент, циклодекстрин и/или буфер. Хотя доза будет изменяться в зависимости от симптомов, возраста и массы тела пациента, природы и интенсивности расстройства, подвергаемого лечению или предотвращению, пути введения и формы лекарственного средства, обычно, для взрослого пациента рекомендована суточная доза от 0,01 до 2000 мг соединения и ее можно вводить в однократной дозе или в разделенных дозах. Количество активного ингредиента, которое можно объединять с веществом носителя для получения единичной дозированной формы, обычно будет представлять собой такое количество соединения, которое вызывает терапевтический эффект.

Точное время введения и/или количество композиции, которое будет давать наиболее эффективные результаты исходя из эффективности лечения для данного пациента, будет зависеть от активности, фармакокинетики и биодоступности конкретного соединения, физиологического состояния пациента (включая возраст, пол, тип заболевания и стадию, общее физическое состояние, чувствительность к данной дозе и типа лекарственного средства), пути введения и т.д. Однако вышеуказанные методические рекомендации можно применять в качестве основы для точного регулирования лечения, например определения оптимального времени и/или количества введения, которое будет требовать не более чем рутинного эксперимента, включающего мониторинг субъекта и установление дозы и/или синхронизацию.

Используемая в данном описании фраза «фармацевтически приемлемый» относится к таким лигандам, веществам, композициям и/или дозированным формам, которые, в рамках обоснованного медицинского заключения, подходят для применения в контакте с тканями человеческих существ и животных без избыточной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, соразмерно с приемлемым соотношением польза/риск.

Используемая в данном описании фраза «фармацевтически приемлемый носитель» означает фармацевтически приемлемое вещество, композицию или среду, такую как жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, эксципиент, растворитель или инкапсулирующее вещество. Каждый носитель должен быть «приемлемым» в смысле совместимости с другими ингредиентами препарата и не губителен для пациента. Некоторые примеры веществ, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают: (1) сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; (2) крахмалы, такие как кукурузный крахмал, картофельный крахмал и замещенный или незамещенный β-циклодекстрин; (3) целлюлоза и ее производные, такие как натрийкарбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза и ацетат целлюлозы; (4) порошкообразный трагакант; (5) солод; (6) желатин; (7) тальк; (8) эксципиенты, такие как масло какао и воски для суппозиториев; (9) масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; (10) гликоли, такие как пропиленгликоль; (11) полиолы, такие как глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; (12) сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; (13) агар; (14) буферные агенты, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; (15) альгиновая кислота; (16) апирогенная вода; (17) изотонический физиологический раствор; (18) раствор Рингера; (19) этиловый спирт; (20) растворы фосфатного буфера и (21) другие нетоксичные совместимые вещества, используемые в фармацевтических препаратах. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции настоящего изобретения представляют собой апирогенные, т.е. не вызывающие значительного повышения температуры при введении пациенту.

Термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к относительно нетоксичным аддитивным солям ингибитора(ов) с неорганической и органической кислотой. Такие соли можно получать in situ во время конечного выделения и очистки ингибитора(ов) или отдельно, взаимодействием очищенного ингибитора(ов) в форме свободного основания с подходящей органической или неорганической кислотой и выделением образованной таким образом соли. Репрезентативные соли включают гидробромид, гидрохлорид, сульфат, бисульфат, фосфат, нитрат, ацетат, валерат, олеат, пальмитат, стеарат, лаурат, бензоат, лактат, фосфат, тозилат, цитрат, малеат, фумарат, сукцинат, тартрат, нафтилат, мезилат, глюкогептонат, лактобионат, лаурилсульфонатные соли и аминокислотные соли и тому подобное (см., например, Berge et al. (1977) “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sci. 66: 1-19).

В других случаях ингибиторы, используемые в способах настоящего изобретения, могут содержать одну или несколько кислотных функциональных групп, поэтому способных образовывать фармацевтически приемлемые соли с фармацевтически приемлемыми основаниями. Термин «фармацевтически приемлемые соли» в таких примерах относятся к относительно нетоксичным аддитивным солям ингибитора(ов) с неорганическим и органическим основанием. Такие соли можно таким же образом получать in situ во время конечного выделения и очистки ингибитора(ов) или отдельно, взаимодействием очищенного ингибитора(ов) в форме свободной кислоты с подходящим основанием, таким как гидроксид, карбонат или бикарбонат фармацевтически приемлемого катиона металла, с аммиаком или с фармацевтически приемлемым органическим первичным, вторичным или третичным амином. Репрезентативные щелочные или щелочноземельные соли включают соли лития, натрия, калия, кальция, магния, алюминия и тому подобное. Репрезентативные органические амины, используемые для образования аддитивных солей с основанием, включают этиламин, диэтиламин, этилендиамин, этаноламин, диэтаноламин, пиперазин и тому подобное (см., например, Berge et al., как указано выше).

Увлажняющие агенты, эмульгаторы и лубриканты, такие как лаурилсульфат натрия и стеарат магния, а также окрашивающие агенты, высвобождающие агенты, агенты покрытия, подсластители, корригенты и агенты отдушки, консерванты и антиоксиданты также могут присутствовать в композициях.

Примеры фармацевтически приемлемых антиоксидантов включают: (1) водорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, гидрохлорид цистеина, бисульфат натрия, метабисульфит натрия, сульфит натрия и тому подобное; (2) маслорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол (ВНА), бутилированный гидрокситолуол (ВНТ), лецитин, пропилгаллат, альфа-токоферол и тому подобное; и (3) агенты, хелатирующие металл, такие как лимонная кислота, этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), сорбит, винная кислота, фосфорная кислота и тому подобное.

Препараты, подходящие для перорального введения, могут быть в форме капсул, саше, пилюль, таблеток, лепешек (с использованием основы корригента, обычно сахарозы и акации аравийской или трагаканта), порошков, гранул, или в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости, или в виде жидкой эмульсии типа масло в воде или вода в масле, или в виде эликсира или сиропа, или в виде пастилок (с использованием инертной матрицы, такой как желатин и глицерин, или сахарозы и акации аравийской) и/или жидкостей для полоскания рта и тому подобного, каждая из которых содержит заранее заданное количество ингибитора(ов) в качестве активного ингредиента. Композицию также можно вводить в виде болюса, электуария или пасты.

В твердых дозированных формах для перорального введения (капсулах, таблетках, пилюлях, драже, порошках, гранулах и тому подобном) активный ингредиент смешивают с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, такими как цитрат натрия или дикальций фосфат, и/или с любым из следующих: (1) наполнителями или разбавителями, такими как крахмалы, циклодекстрины, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и/или кремниевая кислота; (2) связующими, такими как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и/или акация аравийская; (3) увлажнителями, такими как глицерин; (4) дезинтегрирующими агентами, такими как агар-агар, карбонат кальция, крахмал картофельный или тапиоки, альгиновая кислота, некоторые силикаты и карбонат натрия; (5) агентами для замедления растворения, такими как парафин; (6) ускорителями абсорбции, такими как соединения четвертичного аммония; (7) смачивающими агентами, такими как, например, ацетилсодержащий спирт и моностеарат глицерина; (8) абсорбентами, такими как каолин и бентонитовая глина; (9) лубрикантами, такими как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и их смеси; и (10) окрашивающими агентами. В случае капсул, таблеток и пилюль, фармацевтические композиции также могут содержать буферные агенты. Твердые композиции подобного типа также можно использовать в качестве наполнителей в мягких и твердых наполненных желатиновых капсулах с использованием таких эксципиентов, как лактоза или молочные сахара, а также полиэтиленгликолей с высокой молекулярной массой и тому подобного.

Таблетку можно изготовить путем прессования или формования, необязательно с одним или несколькими вспомогательными ингредиентами. Прессованные таблетки можно изготовить с использованием связующего (например, желатина или гидроксипропилметилцеллюлозы), лубриканта, инертного разбавителя, консерванта, дезинтегрирующего агента (например, гликолята натрия крахмала или поперечно-сшитой карбоксиметилцеллолозы натрия), поверхностно-активного или диспергирующего агента. Формованные таблетки можно изготавливать формованием в подходящем устройстве смеси порошкообразного ингибитора(ов), увлажненного инертным жидким разбавителем.

Таблетки и другие твердые дозированные формы, такие как драже, капсулы, пилюли и гранулы, необязательно могут быть с насечкой или получены с покрытиями и оболочками, такими как энтеросолюбильные покрытия и другие покрытия, хорошо известные в области изготовления фармацевтического средства. Их можно также изготавливать таким образом, чтобы обеспечить медленное или контролируемое высвобождение активного ингредиента с использованием, например, гидроксипропилметилцеллюлозы в изменяющихся пропорциях, чтобы обеспечить требуемый профиль высвобождения, других полимерных матриц, липосом и/или микросфер. Их можно стерилизовать, например, фильтрованием через удерживающий бактерии фильтр или введением стерилизующих агентов в форме стерильных твердых композиций, которые можно растворять в стерильной воде или какой-либо другой стерильной инъецируемой среде, непосредственно перед применением. Такие композиции необязательно могут также содержать замутняющие агенты и могут быть композицией, такой, где они высвобождают только активный ингредиент(ы) или, предпочтительно, в определенной части желудочно-кишечного тракта, необязательно замедленным способом. Примеры внедренных композиций, которые можно применять, включают полимерные вещества и воски. Активный ингредиент также может быть в микроинкапсулированной форме, если целесообразно, с одним или несколькими вышеуказанными эксципиентами.

Жидкие дозированные формы для перорального введения включают фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. Помимо активного ингредиента жидкие дозированные формы могут содержать инертные разбавители, обычно используемые в данной области, такие как, например, вода или другие растворители, солюбилизирующие агенты и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное, с проростками, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры жирной кислоты и сорбитана и их смеси.

Кроме инертных разбавителей, пероральные композиции также могут содержать адъюванты, такие как смачивающие агенты, эмульгирующие и суспендирующие агенты, подсластители, отдушки, корригирующие, окрашивающие, и консервирующие агенты.

Суспензии, кроме активного ингибитора(ов), могут содержать суспендирующие агенты, такие как, например, этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленсорбит и сложные эфиры сорбитана, микрокристаллическую целлюлозу, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант и их смеси.

Препараты для ректального или вагинального введения могут быть представлены в виде суппозитория, который можно получить смешиванием одного или нескольких ингибиторов с одним или несколькими подходящими нераздражающими эксципиентами или носителями, включающими, например, масло какао, полиэтиленгликоль, воск для суппозитория или салицилат, который представляет собой твердое вещество при комнатной температуре, но жидкость при температуре тела и поэтому будет плавиться в прямой кишке или вагинальной полости и высвобождать активный агент.

Препараты, которые представляют собой подходящие для вагинального введения, также включают пессарии, тампоны, кремы, гели, пасты, пены или распыляемые препараты, содержащие такие носители, которые известны в данной области как подходящие.

Дозированные формы для местного или чрескожного введения ингибитора(ов) включают порошки, спреи, мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, растворы, пластыри и формы для ингаляции. Активный компонент можно смешивать в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем и с любыми консервантами, буферами или пропеллентами, которые могут требоваться.

Мази, пасты, кремы и гели могут содержать, кроме ингибитора(ов), эксципиенты, такие как животные и растительные жиры, масла, воски, парафины, крахмал, трагакант, производные целлюлозы, полиэтиленгликоли, силиконы, бентониты, кремниевую кислоту, тальк и оксид цинка или их смеси.

Порошки и спреи могут содержать, кроме ингибитора(ов), эксципиенты, такие как лактоза, тальк, кремниевая кислота, гидроксид алюминия, силикаты кальция и полиамидные порошки или их смеси. Спреи могут дополнительно содержать обычные пропелленты, такие как хлорфторуглеводороды, и летучие незамещенные углеводороды, такие как бутан и пропан.

Ингибитор(ы) можно в альтернативном случае вводить с помощью аэрозоля. Этого достигают изготовлением водного аэрозоля, липосомного препарата или твердых частиц, содержащих композицию. Можно применять неводную суспензию (например, с фторуглеродным пропеллентом). Акустические распылители являются предпочтительными, потому что они минимизируют воздействие на агент напряжения сдвига, которое может приводить к разложению соединения.

Обычно водный аэрозоль получают путем приготовления водного раствора или суспензии агента вместе с общепринятыми фармацевтически приемлемыми носителями и стабилизаторами. Носители и стабилизаторы изменяются в зависимости от требований к конкретной композиции, но обычно включают неионные поверхностно-активные вещества (твины, плуроники, сложные эфиры сорбитана, лецитин, кремофоры), фармацевтически приемлемые сорастворители, такие как полиэтиленгликоль, нетоксичные белки, подобные сывороточному альбумину, олеиновую кислоту, аминокислоты, такие как глицин, буферы, соли, сахара, сахарные спирты. Аэрозоли обычно получают из изотонических растворов.

Чрескожные пластыри обладают дополнительной пользой обеспечения контролируемой доставки ингибитора(ов) в организм. Такие дозированные формы можно изготавливать растворением или диспергированием агента в соответствующей среде. Можно также использовать усилители абсорбции для увеличения проникновения ингибитора(ов) через кожу. Скорость такого проникновения можно регулировать либо предоставлением контролирующей скорость мембраны, либо диспергированием ингибитора(ов) в полимерной матрице или геле.

Фармацевтические композиции данного изобретения, подходящие для парентерального введения, содержат один или несколько ингибиторов в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми стерильными водными или неводными растворами, дисперсиями, суспензиями или эмульсиями или стерильными порошками, которые можно восстановить в стерильные инъецируемые растворы или дисперсии непосредственно перед применением, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, антимикробные агенты, растворенные вещества, которые превращают препарат в изотоничный с кровью, предназначенной реципиенту, или суспендирующие или загущающие агенты.

Примеры подходящих водных и неводных носителей, которые можно применять в фармацевтических композициях изобретения, включают воду, этанол, полиолы (такие как глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и тому подобное) и подходящие их смеси, растительные масла, такие как оливковое масло, и инъецируемые сложные органические эфиры, такие как этилолеат. Соответствующее жидкообразное состояние можно поддерживать, например, использованием покрывающих веществ, таких как лецитин, поддерживанием требуемого размера частиц в случае дисперсий и использованием поверхностно-активных веществ.

Такие композиции также могут содержать адъюванты, такие как консерванты, увлажняющие агенты, эмульгирующие агенты и диспергирующие агенты. Предотвращение воздействия микроорганизмов можно гарантировать включением различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например парабена, хлорбутанола, фенолсорбиновой кислоты и тому подобного. Также может потребоваться включение в композиции агентов для установления тоничности, таких как сахара, хлористый натрий и тому подобное. Помимо этого, продолжительную абсорбцию инъецируемой фармацевтической формы можно осуществлять включением агентов, которые замедляют абсорбцию, таких как моностеарат алюминия и желатин.

В некоторых случаях, для того чтобы пролонгировать действие лекарственного средства, требуется замедлить абсорбцию лекарственного средства из подкожной или внутримышечной инъекции. Например, отсроченной абсорбции парентерально введенного лекарственного средства достигают растворением или суспендированием лекарственного средства в масляной среде.

Формы инъецируемых депо готовят формированием матрицы для микроинкапсулирования ингибитора(ов) в биоразлагаемых полимерах, таких как полилактид-полигликолид. В зависимости от отношения лекарственного средства к полимеру и природы используемого специального полимера, можно регулировать скорость высвобождения лекарственного средства. Примеры других биоразлагаемых полимеров включают сложные поли(ортоэфиры) и поли(ангидриды). Кроме того, препараты инъецируемых депо получают удерживанием лекарственного средства в липосомах или микроэмульсиях, которые совместимы с тканями организма.

Препараты агентов можно вводить перорально, парентерально, местно или ректально. Конечно, их вводят в формах, подходящих для каждого пути введения. Например, их вводят в таблетках или в форме капсулы, посредством инъецирования, ингаляции, глазного лосьона, мази, суппозитория, инфузии; местно посредством лосьона или мази и ректально посредством суппозиториев. Предпочтительным является пероральное введение.

Используемые в данном описании фразы «парентеральное введение» и «введенное парентерально» означают способы введения, иные, чем энтеральное или местное введение, обычно инъекцией, и включают, но не ограничиваясь ими, внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, интратекальную, интракапсулярную, интраорбитальную, внутрисердечную, внутрикожную, внутрибрюшинную, через трахею, подкожную, под кутикулу, интраартикулярную, субкапсулярную, субарахноидальную, интраспинальную и надчревную инъекцию и инфузию.

Используемые в данном описании фразы «системное введение», «вводимое системно», «периферическое введение» и «введенное периферически» означают введение лиганда, лекарственного средства или другого вещества иначе, чем непосредственно в центральную нервную систему, таким образом, чтобы оно вошло в систему пациента и, следовательно, подверглось метаболизму и другим подобным процессам, например подкожным введением.

Такие ингибиторы можно вводить людям и другим животным для лечения любым подходящим путем введения, в том числе перорально, назально, например, в виде спрея, ректально, внутривагинально, парентерально, интрацистернально и местно, в виде порошков, мазей или капель, в том числе буккально и сублингвально.

Независимо от выбранного пути введения, ингибитор(ы), который можно применять в подходящей гидратированной форме, и/или фармацевтические композиции настоящего изобретения составляют в фармацевтически приемлемые дозированные формы общепринятыми способами, известными специалисту в данной области.

Фактические уровни дозирования активных ингредиентов в фармацевтических композициях данного изобретения могут изменяться таким образом, чтобы получить количество активного ингредиента, которое эффективно для достижения требуемой терапевтической ответной реакции для отдельного пациента, композиции и способа введения, причем нетоксичного для пациента.

Концентрация соединения настоящего изобретения в фармацевтически приемлемой смеси будет изменяться в зависимости от нескольких факторов, включая дозы соединения для введения, фармакокинетические характеристики применяемого соединения(ий) и пути введения. Обычно композиции данного изобретения могут быть предоставлены в водном растворе, содержащем приблизительно 0,1-10% мас./об. соединения настоящего изобретения, среди других веществ для парентерального введения. Типичные интервалы дозы составляют приблизительно от 0,01 до 50 мг/кг массы тела в день, вводимых в 1-4 раздельных дозах. Каждая раздельная доза может содержать такие же или различные соединения изобретения. Доза будет представлять собой эффективное количество в зависимости от нескольких факторов, включающих общее состояние здоровья пациента и препарат и пути введения выбранного соединения(ий).

Другой аспект изобретения представляет совместную терапию, в которой одно или несколько терапевтических агентов вводят с ингибитором протеасомы. Такого совместного лечения можно достигать путем последовательного, одновременного или раздельного дозирования индивидуальных компонентов лечения.

В некоторых вариантах осуществления соединение изобретения совместно вводят с одним или несколькими другими ингибиторами протеасомы.

В некоторых вариантах осуществления соединение изобретения совместно вводят с химиотерапевтическим агентом. Подходящие химиотерапевтические агенты могут включать природные вещества, такие как алкалоиды барвинка (т.е. винбластин, винкристин и винорелбин), паклитаксель, эпидиподофиллотоксины (т.е. этопосид, тенипосид), антибиотики (дактиномицин, (актиномицин D) даунорубицин, доксорубицин и идарубицин), антрациклины, митоксантрон, блеомуцины, пликамуцин (митрамицин) и митомуцин, ферменты (L-аспарагиназу, которая системно метаболизирует L-аспарагин и производит депривацию клеток, которые не обладают способностью синтезировать свой собственный аспарагин); антитромбоцитарные агенты; антипролиферативные/антимитоточеские алкилирующие агенты, такие как производные азотсодержащего иприта (меклоретамин, циклофосфамид и аналоги, мелфалан, хлоамбуцил), этиленимины и метилмеламины (гексаметилмеламин и тиотепа), алкилсульфонаты (бузулфан), нитрозомочевины (кармустин (BCNU) и аналоги, стрептозоцин), тразены-дакарбазинин (DTIC); антипролиферативные/антимитотические антиметаболиты, такие как аналоги фолиевой кислоты (метотрексат), аналоги пиримидина (фторурацил, флоксиридин и цитарабин), аналоги пурина и аналогичные ингибиторы (меркаптопурин, тиогуанин, пентостатин и 2-хлордеоксиаденозин); ингибиторы ароматазы (анастрозол, экземестан и летрозол); координационные комплексы платины (цисплатин, карбоплатин), прокарбазин, гидроксимочевина, митотан, аминоглутетимид; гормоны (т.е. эстроген) и агонисты гормона, такие как агонисты гормона, высвобождающего лютеинизирующий гормон (LHRH) (гозерелин, лейпролид и трипторелин). Другие химиотерапевтические агенты могут включать меклоретамин, камптотецин, ифосфамид, тамоксифен, ралоксифен, гемцитабин, навелбин или любой аналог или производный вариант вышеуказанного агента.

В некоторых вариантах осуществления соединение изобретения совместно вводят со стероидом. Подходящие стероиды могут включать, но не ограничиваются ими, 21-ацетоксипрегненолон, алклометазон, алгестон, амцинонид, беклометазон, бетаметазон, будесонид, хлоропреднизон, клобетазол, клокортолон, клопреднол, кортикостерон, кортизон, кортивазол, дефлазакорт, десонид, дезоксиметазон, дексаметазон, дифлоразон, дифлукортолон, дифупреднат, эноксолон, флуазакорт, флуклоронид, флуметазон, флунизолид, флуоцинолон ацетонид, флуоцинонид, флуокортин бутил, флуокортолон, флуорометолон, флуперолон ацетат, флупредниден ацетат, флупреднизолон, флурандренолид, флутиказон пропионат, формокортал, галцинонид, галобетазол пропионат, галометазон, гидрокортизон, лотепреднол этабонат, мазипредон, медризон, мепреднизон, метилпреднизолон, мометазон фуроат, параметазон, предникарбат, преднизолон, преднизолон 25-диэтиламиноацетат, преднизолон натрийфосфат, преднизон, преднивал, преднилиден, римексолон, тиксокортон, триамцинолон, триамцинолон ацетонид, триамцинолон бенетонид, триамцинолон гексацетонид и их соли и/или производные.

В некоторых вариантах осуществления соединение изобретения совместно вводят с иммунотерапевтическим агентом. Подходящие иммунотерапевтические агенты могут включать, но не ограничиваются ими, циклоспорин, талидомид и моноклональные антитела. Моноклональные антитела могут быль либо как таковыми, либо конъюгированными, например, с ритуксимабом, тозитумомабом, алемтузимабом, эпратузимабом, ибритумомаб тиуксетаном, гемтуземаб озогамицином, бевацизумабом, цетуксимабом, эрлотинибом и трастузумабом.

Пояснение примерами

Схема 1: синтез соединения примера 1

Синтез соединения (А)

К раствору Cbz-Trp-OH (10 г, 29 ммоль) в ДМФА (DMF) (150 мл) добавляли по каплям Me-Im (25,2 мл, 458 ммоль). Раствору давали возможность перемешиваться в течение 10 минут, с последующим добавлением TBSCl (23,9 г, 158 ммоль). Полученному раствору давали возможность перемешиваться в течение ночи. Затем добавляли воду (100 мл) и смесь экстрагировали EtOAc (3×50 мл). Объединенные органические слои промывали водой (3×50 мл) и насыщенным раствором соли (50 мл), сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением масла, которое растворяли в смеси вода/ТГФ 1:1 (200 мл), и к раствору добавляли K₂СО₃ (440 мг, 0,031 ммоль). Полученному раствору давали возможность перемешиваться в течение ночи. Затем органический растворитель удаляли при пониженном давлении и доводили рН до 2 с помощью 1 н. HCl. Полученный раствор экстрагировали EtOAc (3×75 мл) и объединенные органические слои сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением соединения (А).

Синтез соединения (В)

К раствору гидрохлорида диметилгидроксиламина (3,6 г, 36,9 ммоль) в DCM (20 мл) при 0ºС добавляли по каплям диизопропилэтиламин (DIEA) (5 мл, 54,7 ммоль). Полученному раствору давали возможность перемешиваться в течение 20 минут.

К раствору соединения (А) в DCM (20 мл) при 0ºС добавляли по каплям изобутилхлорформиат (IBCF) (5 мл, 51,5 ммоль), с последующим добавлением по каплям N-метилморфолина (NMM) (4,0 мл, 56,7 ммоль). Полученному раствору давали возможность перемешиваться в течение 10 минут перед добавлением его к предварительно полученному раствору гидрохлорида диметилгидроксиламина/DIEA. Смеси давали возможность перемешиваться в течение 3 ч при 0ºС, с последующим добавлением воды (50 мл). Слои разделяли и водный слой промывали DCM (3×15 мл). Объединенные органические слои промывали 1 н. HCl (3×20 мл) и насыщенным раствором соли (20 мл), сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением масла, которое очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь от 20 до 40% EtOAc/гексаны, с получением соединения (В).

Синтез соединения (С)

К раствору соединения (В) (6,82 г, 14,4 ммоль) в растворе ТГФ (40 мл) при -20ºС добавляли раствор изопропенилмагнийбромида (90 мл, 0,5М в ТГФ), при этом поддерживая внутри реакционной смеси температуру ниже -5ºС. Раствору давали возможность перемешиваться в течение 3 ч при 0ºС, с последующим добавлением 1 н. HCl (20 мл). Раствор фильтровали через целит 521 и осадок на фильтре промывали EtOAc. Затем органический растворитель удаляли при пониженном давлении и оставшийся водный раствор экстрагировали EtOAc (3×20 мл). Объединенные органические слои промывали насыщ. NaHCO₃ (3×15 мл) и насыщенным раствором соли (15 мл), сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением масла, которое очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь от 10 до 20% EtOAc/гексаны, с получением соединения (С).

Синтез соединений (D) и (Е)

К раствору соединения (С) (3,06 г, 6,75 ммоль) в МеОН (40 мл) и ТГФ (40 мл) добавляли СеCl₃·7H₂O (3,64 г, 9,77 ммоль). Полученной смеси давали возможность перемешиваться до тех пор, пока она не станет гомогенной. Затем раствор охлаждали до 0ºС и добавляли NaBH₄ (369 мг, 9,75 ммоль) в течение 10 минут. Раствору давали возможность перемешиваться в течение 1 часа, с последующим добавлением АсОН (5 мл) при непрерывном перемешивании в течение 20 минут. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, полученный остаток разбавляли водой (30 мл) и экстрагировали EtOAc (3×10 мл). Объединенные органические слои промывали водой (3×10 мл) и насыщенным раствором соли (10 мл), сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением смеси соединений 4/1 (D) и (Е).

Синтез соединений (F) и (G)

К раствору соединений (D) и (Е) в DCM (90 мл) при 0ºС добавляли VO(acac)₂ (63 мг, 0,23 ммоль), после перемешивания в течение 5 минут добавляли по каплям трет-BuOOH (2,25 мл, 6,0 М в декане). Полученному раствору давали возможность перемешиваться в течение 2 ч, затем фильтровали через целит 521 и осадок на фильтре промывали DCM (20 мл). Объединенные органические слои промывали насыщ. NaHCO₃ (3×20 мл) и насыщенным раствором соли (20 мл), сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением смеси соединений (F) и (G) 4/1.

Синтез соединения (H)

К раствору периодинана Dess-Martin (6,75 г, 15,9 ммоль) в DCM (75 мл) при 0ºС добавляли по каплям раствор соединений (F) и (G) в DCM (35 мл). Раствору давали возможность нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Затем растворитель концентрировали при пониженном давлении и остаток разбавляли EtOAc (20 мл) и насыщ. NaHCO₃ (20 мл). Полученную смесь фильтровали через целит 521 и осадок на фильтре промывали EtOAc (20 мл). Слои разделяли и органический слой промывали водой (3×10 мл) и насыщенным раствором соли (10 мл), сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением смеси соединений (Н) и (I) (4/1), которую очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь от 15 до 40% EtOAc/гексаны, с получением соединения (Н).

Синтез соединения 1

К раствору соединения (Н) (50 мг, 1,06 ммоль) в ТФУК (5 мл) добавляли Pd/C (14 мг, 10%). Полученной смеси давали возможность перемешиваться при давлении Н₂ 1 атмосфера в течение 2 ч, с последующим разбавлением DCM (10 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, полученный остаток разбавляли DCM (10 мл) и концентрировали при пониженном давлении второй раз. Остаток помещали в высокий вакуум на 2 ч, с получением соединения 1.

Схема 2: синтез соединения примера 2

Синтез соединения (J)

К раствору Fmoc-Trp(Boc)-OH (2,4 ммоль, 1,0 г) в DCM (20 мл) добавляли Me-Im (6,7 ммоль, 0,370 мл) и смесь перемешивали до тех пор, пока раствор не станет гомогенным, в этот момент добавляли 1-(мезитилен-2-сульфонил)-3-нитро-1,2,4-триазол (MSNT) (2,9 ммоль, 0,870 г). Как только MSNT растворялся реакционную смесь добавляли к смоле НМРВ-ВНА (0,8 ммоль, 1,25 г) и полученному раствору давали возможность встряхиваться в течение 45 минут. Смолу отфильтровывали и промывали ДМФА (50 мл), МеОН (50 мл) и DCM (50 мл). Затем смоле давали возможность сохнуть на воздухе, с получением соединения (J).

Синтез соединения (K)

К соединению (J) (0,40 ммоль, 0,62 г) добавляли смесь 20% пиперидин/ДМФА (10 мл) и полученному негомогенному раствору давали возможность встряхиваться в течение 20 минут. Смесь фильтровали, смолу промывали ДМФА (20 мл), МеОН (20 мл) и DCM (20 мл) и давали возможность сохнуть на воздухе, затем подвергали воздействию описанных выше условий реакции второй раз, с получением соединения (K).

Синтез соединения (L)

К соединению (K) (0,40 ммоль) добавляли ДМФА (20 мл), Cbz-D-Ala-OH (0,40 ммоль, 0,090 г), DIEA (1,6 ммоль, 0,12 мл), НОВТ (0,64 ммоль, 0,062 мг) и ВОР (0,64 ммоль, 0,178 г) и реакционной смеси давали возможность встряхиваться в течение 45 минут. Реакционную смесь фильтровали, смолу промывали ДМФА (40 мл), МеОН (40 мл) и DCM (40 мл) и давали возможность сохнуть на воздухе, с получением соединения (L).

Cинтез соединения (М)

К соединению (L) (0,08 ммоль) добавляли 5% ТФУК/DCM (2 мл) и смеси давали возможность встряхиваться в течение 20 минут. Реакционную смесь фильтровали и смолу промывали DCM (10 мл). Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, полученное масло разбавляли DCM (10 мл) и упаривали в итоге три раза, с получением соединения (М).

Синтез соединения (N)

К перемешиваемому раствору соединения (М) (0,11 ммоль, 0,019 г) в MeCN (4 мл) и ДМФА (1 мл) добавляли соединение (М) (0,1 ммоль), DIEA (2,9 ммоль, 0,5 мл), НОВТ (0,2 ммоль, 0,032 г) и HBTU (0,23 ммоль, 0,087 г) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли насыщ. NaHCO₃ (15 мл) и экстрагировали EtOAc. Органический слой промывали насыщ. NaHCO₃ и насыщенным раствором соли, сушили над MgSO₄ и летучие соединения удаляли при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь от 20 до 40% EtOAc/гексаны, с получением соединения (N).

Cинтез соединения 2

К перемешиваемому раствору соединения (N) (0,1 ммоль) в пиридине (1,5 мл) и ТГФ (3,0 мл) при 0ºС добавляли по каплям раствор HF/пиридин. Раствору давали возможность перемешиваться в течение 2 часов при 0ºС перед добавлением воды (5,0 мл) и экстракцией EtOAc. Объединенные органические слои промывали насыщ. NaHCO₃ и насыщенным раствором соли, сушили над MgSO₄, фильтровали и летучие соединения удаляли при повышенном давлении. Неочищенное вещество очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь от 30 до 60% EtOAc/гексаны, с получением соединения 2 (4,2 мг).

Схема 3: синтез соединения примера 3

Синтез соединения (О)

К раствору Fmoc-Tyr(Me)-OH (1,9 ммоль, 0,80 г) в DCM (20 мл) добавляли Ме-Im (6,7 ммоль, 0,370 мл). Когда раствор становился гомогенным, добавляли MSNT (2,9 ммоль, 0,870 г) и смесь перемешивали до растворения MSNT, в этот момент смоле НМРВ-ВНА (0,64 ммоль, 1,00 г) и полученному раствору давали возможность встряхиваться в течение 45 минут. Смолу отфильтровывали и промывали ДМФА (50 мл), МеОН (50 мл) и DCM (50 мл) и затем смоле давали возможность сохнуть на воздухе, с получением соединения (О).

Синтез соединения (Р)

К соединению (О) (0,40 ммоль, 0,62 г) добавляли смесь 20% пиперидин/ДМФА (10 мл) и полученному негомогенному раствору давали возможность встряхиваться в течение 20 минут. Смесь фильтровали, смолу промывали ДМФА (20 мл), МеОН (20 мл) и DCM(20 мл) и давали возможность сохнуть на воздухе. Затем смолу подвергали воздействию указанных выше условий реакции второй раз, с получением соединения (Р).

Синтез соединения (Q)

К соединению (Р) (0,40 ммоль) добавляли ДМФА (20 мл), Cbz-D-Ala-OH (0,40 ммоль, 0,090 г), DIEA (1,6 ммоль, 0,12 мл), НОВТ (0,64 ммоль, 0,062 мг) и ВОР (0,64 ммоль, 0,178 г) и реакционной смеси давали возможность встряхиваться в течение 45 минут. Реакционную смесь фильтровали, смолу промывали ДМФА (40 мл), МеОН (40 мл) и DCM (40 мл) и давали возможность сохнуть на воздухе, с получением соединения (Q).

Синтез соединения (R)

К соединению (Q) (0,08 ммоль) добавляли 5% NFA/DCM (2 мл) и смеси давали возможность встряхиваться в течение 20 минут. Реакционную смесь фильтровали и смолу промывали DCM (10 мл). Затем летучие соединения удаляли при пониженном давлении, полученное масло разбавляли DCM (10 мл) и упаривали в итоге три раза, с получением соединения (R).

Синтез соединения (S)

К перемешиваемому раствору соединения 1 (0,11 ммоль, 0,019 г) в MeCN (4 мл) и ДМФА (1 мл) добавляли соединение (R) (0,1 ммоль), DIEA (2,9 ммоль, 0,5 мл), НОВТ (0,2 ммоль, 0,032 г) и HBTU (0,23 ммоль, 0,087 г) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли насыщ. NaHCO₃ (15 мл) и экстрагировали EtOAc. Органический слой промывали насыщ. NaHCO₃ и насыщенным раствором соли, сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученное вещество очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь от 20 до 40% EtOAc/гексаны, с получением соединения (S).

Синтез соединения 3

К перемешиваемому раствору соединения (S) (0,1 ммоль) в пиридине (1,5 мл) и ТГФ (3,0 мл) при 0ºС добавляли по каплям раствор HF/пиридин. Раствору давали возможность перемешиваться в течение 2 часов при 0ºС, с последующим добавлением воды (5,0 мл) и экстракцией EtOAc. Затем органический слой промывали насыщ. NaHCO₃, насыщенным раствором соли, сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученное вещество очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь от 30 до 60% EtOAc/гексаны, с получением соединения 3 (6,7 мг).

Схема 4: синтез соединения примера 4

Синтез соединения (U)

К раствору гидрохлорида диметилгидроксиамина (18,4 г, 226,3 ммоль) в DCM (400 мл) при 0ºС добавляли по каплям DIEA (25,8 мл, 282 ммоль). Полученному раствору давали возможность перемешиваться в течение 20 минут.

К раствору Cbz-Phe-OH (50 г, 169 ммоль) в DCM (400 мл) при 0ºС добавляли по каплям IBCF (24,4 мл, 266 ммоль), с последующим добавлением по каплям NMM (20,7 мл, 293 ммоль). Полученному раствору давали возможность перемешиваться в течение 10 минут, затем добавляли предварительно полученный раствор гидрохлорид диметилгидроксиамина/DIEA. Смеси давали возможность перемешиваться в течение 3 ч при 0ºС, с последующим добавлением воды (250 мл). Затем слои разделяли и водный слой промывали DCM (3×100 мл). Объединенные органические слои промывали 1 н. HCl (3×100 мл) и насыщенным раствором соли (100 мл), сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением масла, которое очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь от 20 до 40% EtOAc/гексаны, с получением соединения (U).

Синтез соединения (V)

К раствору соединения (U) (47 г, 145 ммоль) в растворе ТГФ (400 мл) при -20ºС добавляли раствор изопропенилмагнийбромида (800 мл, 0,5М в ТГФ), поддерживая при этом температуру внутри раствора ниже -5ºС. Раствору давали возможность перемешиваться в течение 3 ч при 0ºС, с последующим добавлением 1 н. HCl (200 мл). Раствор фильтровали через целит 521 и осадок на фильтре промывали EtOAc. Затем органический растворитель удаляли при пониженном давлении и оставшийся водный раствор экстрагировали EtOAc (3×200 мл). Объединенные органические слои промывали насыщ. NaHCO₃ (3×150 мл) и насыщенным раствором соли (150 мл), сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением масла, которое очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь от 20 до 40% EtOAc/гексаны, с получением соединения (V).

Синтез соединений (W) и (X)

К раствору соединения (V) (30,03 г, 92,0 ммоль) в МеОН (500 мл) и ТГФ (500 мл) добавляли CeCl₃·7H₂O (48,04 г, 130 ммоль). Полученному раствору давали возможность перемешиваться до тех пор, пока он не станет гомогенным. Затем раствор охлаждали до 0ºС и добавляли NaBH₄ (4,90 мг, 129 ммоль) в течение 10-минутного периода. Раствору давали возможность перемешиваться в течение 1 ч, с последующим добавлением АсОН (70 мл) при непрерывном перемешивании в течение 20 минут. Затем смесь концентрировали при пониженном давлении, полученный остаток разбавляли водой (400 мл) и экстрагировали EtOAc (3×130 мл). Объединенные органические слои промывали водой (3×130 мл) и насыщенным раствором соли (130 мл), сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением смеси соединений (W) и (Х) 5/1.

Синтез соединений (Y) и (Z)

К раствору соединений (W) и (Х) в DCM (500 мл) при 0ºС добавляли VO(acac)₂ (900 мг, 3,26 ммоль), после перемешивания в течение 5 минут добавляли по каплям трет-BuOOH (30 мл, 6,0 М в декане). Полученному раствору давали возможность перемешиваться в течение 2 ч, затем фильтровали через целит 521 и осадок на фильтре промывали DCM (200 мл). Затем фильтрат промывали насыщ. NaHCO₃ (3×200 мл) и насыщенным раствором соли (200 мл), сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением смеси соединений (Y) и (Z) 5/1.

Синтез соединения (АА)

К раствору периодинана Dess-Martin (40 г, 94,2 ммоль) в DCM (300 мл) при 0ºС добавляли по каплям раствор соединений (Y) и (Z) в DCM (100 мл). Затем раствору давали возможность нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток разбавляли EtOAc (120 мл) и насыщ. NaHCO₃ (120 мл). Полученную смесь фильтровали через целит 521 и осадок на фильтре промывали EtOAc (120 мл). Слои разделяли и органический слой промывали водой (3×60 мл) и насыщенным раствором соли (60 мл), сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением масла, которое очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь от 15 до 40% EtOAc/гексаны, с получением соединения (АА).

Синтез соединения 4

К раствору соединения (АА) (50 мг, 1,06 ммоль) в ТФУК (5 мл) добавляли Pd/C (14 мг, 10%). Полученной смеси давали возможность перемешиваться при давлении Н₂ 1 атмосфера в течение 2 ч и затем разбавляли DCM (10 мл). Смесь фильтровали через целит 521 и осадок на фильтре промывали DCM (10 мл). Затем фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток разбавляли DCM (10 мл) и концентрировали при пониженном давлении второй раз. Остаток помещали в высокий вакуум на 2 ч, с получением соединения 4.

Схема 5: синтез соединения примера 5

Синтез соединения (СС)

К соединению (ВВ) (0,06 ммоль) добавляли ДМФА (2 мл), Cbz-D-Abu-OH (0,12 ммоль, 0,032 г), DIEA (0,256 ммоль, 0,075 мл), НОВТ (0,102 ммоль, 0,010 мг) и ВОР (0,102 ммоль, 0,075 г) и реакционной смеси давали возможность встряхиваться в течение 45 минут. Затем реакционную смесь фильтровали, смолу промывали ДМФА (4 мл), МеОН (4 мл) и DCM (4 мл) и давали возможность сохнуть на воздухе, с получением соединения (СС).

Синтез соединения (DD)

К соединению (СС) (0,08 ммоль) добавляли 50% ТФУК/DCM (2 мл) и смеси давали возможность встряхиваться в течение 20 минут. Реакционную смесь фильтровали и смолу промывали DCM (10 мл). Затем раствор концентрировали при пониженном давлении, полученное масло разбавляли DCM (10 мл) и упаривали в итоге три раза, с получением соединения (DD).

Синтез соединения 5

К перемешиваемому раствору соединения 4 (0,11 ммоль, 0,019 г) в МеCN (4 мл) и ДМФА (1 мл) добавляли соединение (DD) (0,1 ммоль), DIEA (2,9 ммоль, 0,5 мл), НОВТ (0,2 ммоль, 0,032 г) и HBTU (0,23 ммоль, 0,087 г) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакционную смесь разбавляли насыщ. NaHCO₃ (15 мл) и экстрагировали EtOAc. Органический слой промывали насыщ. NaHCO₃ и насыщенным раствором соли, сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученное вещество очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь от 25 до 55% EtOAc/гексаны, с получением соединения 5 (12,0 мг).

Схема 6: синтез соединения примера 6

Синтез соединения (ЕЕ)

К соединению (ВВ) (0,06 ммоль) добавляли ДМФА (2 мл), Cbz-D-Leu-OH (0,12 ммоль, 0,032 г), DIEA (0,256 ммоль, 0,075 мл), НОВТ (0,102 ммоль, 0,010 мг) и ВОР (0,102 ммоль, 0,075 г) и реакционной смеси давали возможность встряхиваться в течение 45 минут. Затем реакционную смесь фильтровали и осадок на фильтре промывали ДМФА (4 мл), МеОН (4 мл) и DCM (4 мл) и давали возможность сохнуть на воздухе, с получением соединения (ЕЕ).

Синтез соединения (FF)

К соединению (ЕЕ) (0,08 ммоль) добавляли 50% ТФУК/DCM (2 мл) и смеси давали возможность встряхиваться в течение 20 минут. Реакционную смесь фильтровали и смолу промывали DCM (10 мл). Летучие соединения удаляли при пониженном давлении, полученное масло разбавляли DCM (10 мл) и упаривали в итоге три раза, с получением соединения (FF).

Синтез соединения 6

К перемешиваемому раствору соединения 4 (0,11 ммоль, 0,019 г) в MeCN (4 мл) и ДМФА (1 мл) добавляли соединение (FF) (0,1 ммоль), DIEA (2,9 ммоль, 0,5 мл), НОВТ (0,2 ммоль, 0,032 г) и HBTU (0,23 ммоль, 0,087 г) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакционную смесь разбавляли насыщ. NaHCO₃ (15 мл) и экстрагировали EtOAc. Органический слой промывали насыщ. NaHCO₃ и насыщенным раствором соли, сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Затем полученное вещество очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь от 25 до 55% EtOAc/гексаны, с получением соединения 6 (14,0 мг).

Схема 7: синтез соединения примера 7

Синтез соединения 7

К перемешиваемому раствору соединения 4 (0,11 ммоль, 0,019 г) в MeCN (4 мл) и ДМФА (1 мл) добавляли соединение (R) (0,1 ммоль), DIEA (2,9 ммоль, 0,5 мл), НОВТ (0,2 ммоль, 0,032 г) и HBTU (0,23 ммоль, 0,087 г) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакционную смесь разбавляли насыщ. NaHCO₃ (15 мл) и экстрагировали EtOAc. Органический слой промывали насыщ. NaHCO₃ и насыщенным раствором соли, сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученное вещество очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь от 25 до 55% EtOAc/гексаны, с получением соединения 7 (10,5 мг).

Схема 8: синтез соединения примера 8

Синтез соединения (HH)

К раствору гидрохлорида диметилгидроксиламина (331 мг, 3,4 ммоль) в DCM (20 мл) при 0ºС добавляли по каплям триэтиламин (343 мг, 3,4 ммоль). Полученному раствору давали возможность перемешиваться в течение 20 минут.

К раствору Cbz-HomoPhe-OH (1,0 г, 3,2 ммоль) в DCM (100 мл) при 0ºС добавляли по каплям IBCF (460 мг, 3,35 ммоль), с последующим добавлением по каплям NMM (343 мг, 3,4 ммоль). Полученному раствору давали возможность перемешиваться в течение 10 минут и затем добавляли к предварительно полученному раствору диметилгидроксиамин HCl/TAE. Полученную смесь перемешивали при 0ºС в течение 3 ч, с последующим добавлением воды (50 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали DCM (3×100 мл). Объединенные органические слои промывали 1 н. HCl (30 мл) и насыщенным раствором соли (30 мл), сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Затем полученное вещество очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь EtOAc/гексаны (1:3), с получением промежуточного соединения (НН) (0,92 г).

Синтез соединения (II)

К раствору соединения (НН) (920 мг, 2,6 ммоль) в ТГФ (50 мл) при -20ºС добавляли раствор изопропенилмагнийбромида (26 мл, 12,9 ммоль, 0,5 М в ТГФ). Полученному раствору давали возможность перемешиваться при 0ºС в течение 6 часов, с последующим добавлением 1 н. HCl (10 мл). Полученную смесь фильтровали через целит 521 и осадок на фильтре промывали этилацетатом. Слои разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом (3×20 мл). Объединенные органические слои промывали насыщ. NaHCO₃ (30 мл) и насыщенным раствором соли (30 мл), сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при повышенном давлении. Полученное вещество очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь EtOAc/гексаны (1:3), с получением соединения (II) (700 мг).

Синтез соединений (JJ) и (KK)

К раствору соединения (II) (700 мг, 2,1 ммоль) в DCM (50 мл) при 0ºС добавляли последовательно CeCl₃·7H₂O (942 мг, 2,52 ммоль) и NaBH₄ (98 мг, 2,52 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, с последующим добавлением АсОН (5 мл). Смесь концентрировали при пониженном давлении и затем разбавляли EtOAc (100 мл) и насыщ. NaHCO₃ (50 мл). Затем водный слой экстрагировали EtOAc (2×50 мл) и объединенные органические слои сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением желтого масла, которое очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь EtOAc/гексаны (1:3), с получением соединений (JJ) и (KK) в соотношении 5/1.

Синтез соединений (LL) и (ММ)

К раствору соединений (JJ) и (KK) в ТГФ (50 мл) при 0ºС добавляли последовательно VO(асас)₂ (18 мг, 0,066 ммоль) и трет-BuOOH (0,9 мл, 6,0 М в декане). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 часов, затем фильтровали через целит 521 и осадок на фильтре промывали EtOAc (100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщ. NaHCO₃ (10 мл) и насыщенным раствором соли (10 мл), сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением соединений (LL) и (ММ) (585 мг) в соотношении 5/1.

Синтез соединения (NN)

К раствору периодинана Dess-Martin (1,40 г, 3,3 ммоль) в ДМСО (20 мл) при 0ºС добавляли соединения (LL) и (ММ) (585 мг) в ДМСО (10 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 6 часов и затем разбавляли EtOAc (100 мл) и насыщ. NaHCO₃ (50 мл), затем водную фазу экстрагировали EtOAc (2×50 мл) и объединенные органические слои сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением желтого масла, которое очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь EtOAc/гексаны (2:3), с получением соединения (NN) (465 мг).

Синтез соединения 8

К раствору соединения (NN) (290 мг, 0,82 ммоль) в ТФУК (5 мл) добавляли Pd/C (14 мг, 10%). Полученной смеси давали возможность перемешиваться при давлении Н₂ 1 атмосфера в течение 2 ч и затем разбавляли DCM (10 мл). Смесь фильтровали через целит 521 и осадок на фильтре промывали DCM (10 мл). Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении, остаток разбавляли DCM (10 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток помещали в высокий вакуум на 2 ч, с получением соединения 8.

Схема 9: синтез соединения примера 9

Синтез соединения (ОО)

К соединению (K) (0,06 ммоль) добавляли ДМФА (2 мл), Cbz-Ala-OН (0,12 ммоль, 0,032 г), DIEA (0,256 ммоль, 0,075 мл), НОВТ (0,102 ммоль, 0,010 мг) и ВОР (0,102 ммоль, 0,075 г) и реакционной смеси давали возможность встряхиваться в течение 45 минут. Затем реакционную смесь фильтровали, смолу промывали ДМФА (4 мл), МеОН (4 мл) и DCM (4 мл) и давали возможность сохнуть на воздухе, с получением соединения (ОО).

Синтез соединения (РР)

К соединению (ОО) (0,08 ммоль) добавляли 50% ТФУК/DCM (2 мл) и смеси давали возможность встряхиваться в течение 20 минут. Затем реакционную смесь фильтровали и смолу промывали DCM (10 мл). Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, полученное масло разбавляли DCM (10 мл) и выпаривали в итоге три раза, с получением соединения (РР).

Синтез соединения 9

К перемешиваемому раствору соединения 8 (0,11 ммоль, 0,019 г) в MeCN (4 мл) и ДМФА (1 мл) добавляли соединение (РР) (0,1 ммоль), DIEA (2,9 ммоль, 0,5 мл), НОВТ (0,2 ммоль, 0,032 г) и HBTU (0,23 ммоль, 0,087 г) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакционную смесь разбавляли насыщ. NaHCO₃ (15 мл) и экстрагировали EtOAc. Затем органический слой промывали насыщ. NaHCO₃ и насыщенным раствором соли, сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученное вещество очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь от 25 до 55% EtOAc/гексаны, с получением соединения 9 (7,8 мг).

Схема 10: синтез соединения примера 10

Синтез соединения (QQ)

К раствору Cbz-Asp (трет-Bu)-OH (0,32 ммоль, 108 мг) в ДМФА (2 мл) при 0ºС добавляли НОВТ (0,51 ммоль, 78 мг), HBTU (0,51 ммоль, 194 мг) и DIEA (1,2 ммоль, 0,2 мл). Как только полученная смесь становилась гомогенным раствором, добавляли смолу Phe-HMPB-BHA (0,13 ммоль, 200 мг) и полученной реакционной смеси давали возможность встряхиваться при 0-4ºС в течение ночи. Смолу отфильтровывали и промывали ДМФА (3×5 мл) и DCM (3×5 мл). Смоле давали возможность сохнуть на воздухе, с получением соединения (QQ).

Синтез соединения (RR)

К соединению (QQ) (0,13 ммоль) добавляли ТФУК/DCM (5 мл, 5:95) и давали возможность смеси встряхиваться при 0-4ºС в течение 30 минут. Затем реакционную смесь фильтровали и смолу промывали DCM (3×10 мл). Летучие соединения удаляли при пониженном давлении при 0ºС, с получением соединения (RR).

Синтез соединения (SS)

К раствору соединения (RR) (0,13 ммоль) и 4 (0,12 ммоль) в ТГФ (5 мл) при 0ºС добавляли НОВТ (0,18 ммоль, 31 мг), HBTU (0,18 ммоль, 76 мг) и DIEA (0,6 ммоль, 0,1 мл) и полученную реакционную смесь перемешивали при 0-4ºС в течение ночи. Затем реакционную смесь разбавляли EtOAc (100 мл) и насыщ. NaHCO₃ и водную фазу экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением желтого масла, которое очищали ВЭЖХ, элюируя смесью MeCN/водн. NH₄Oac, с получением соединения (SS).

Синтез соединения 10

К раствору соединения (SS) в DCM (5 мл) добавляли по каплям ТФУК (5 мл) и полученный раствор перемешивали в течение 3 ч. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали ВЭЖХ, элюируя смесью MeCN/водн. NH₄Oac, с получением соединения 10.

Схема 11: синтез соединения примера 11

Синтез соединения (ТТ)

К раствору Z-Ala-OH (0,32 ммоль, 71 мг) в ДМФА (2 мл) при 0ºС добавляли HOBT (0,51 ммоль, 78 мг), HBTU (0,51 ммоль, 194 мг) и диизопропилэтиламин (1,2 ммоль, 0,2 мл). Как только полученная смесь становилась гомогенной, добавляли Phe(4-MeO)-Wang-смолу (0,13 ммоль, 200 мг) и полученной реакционной смеси давали возможность встряхиваться в течение ночи. Затем смолу отфильтровывали и промывали ДМФА (3×5 мл) и DCM (3×5 мл). Полученной смоле давали возможность сохнуть на воздухе, с получением соединения (ТТ).

Синтез соединения (UU)

К соединению (ТТ) (0,13 ммоль) добавляли 50% ТФУК/DCM (5 мл) и смеси давали возможность встряхиваться в течение 30 минут. Затем реакционную смесь фильтровали и смолу промывали DCM (3×10 мл). Летучие соединения удаляли при пониженном давлении, с получением соединения (UU).

Синтез соединения 11

К раствору соединения (UU) (0,13 ммоль) и 4 (0,12 ммоль) в ТГФ (5 мл) при 0ºС добавляли HOBT (0,18 ммоль, 31 мг), HBTU (0,18 ммоль, 76 мг) и DIEA (0,6 ммоль, 0,1 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при 0-4ºС в течение ночи, с последующим разбавлением EtOAc (100 мл) и насыщ. NaHCO₃. Затем водную фазу экстрагировали EtOAc и объединенные органические слои сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением желтого масла, которое очищали ВЭЖХ, элюируя смесью MeCN/водн. NH₄Oac, с получением соединения 11.

Схема 12: синтез соединения примера 12

Синтез соединения 12

К раствору соединения (VV) (0,18 ммоль, 50 мг) и 4 (0,12 ммоль) в ТГФ (5 мл) при 0ºС добавляли НОВТ (0,18 ммоль, 31 мг), HBTU (0,18 ммоль, 76 мг) и DIEA (0,6 ммоль, 0,1 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при 0-4ºС в течение ночи, с последующим разбавлением EtOAc (100 мл) и насыщ. NaHCO₃. Затем водный слой экстрагировали EtOAc и объединенные органические слои сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением желтого масла, которое очищали ВЭЖХ, элюируя смесью MeCN/водн. NH₄Oac, с получением соединения 12.

Схема 13: синтез соединения примера 13

Синтез соединения (WW)

К раствору Fmoc-O-трет-бутил-L-тирозин (6,4 ммоль, 2,94 г) в DCM (22 мл) добавляли 1-метилимидазол (4,8 ммоль, 0,380 мл) и смесь перемешивали до тех пор, пока раствор не станет гомогенным, в этот момент добавляли 1-(мезитилен-2-сульфонил)-3-нитро-1,2,4-триазол (MSNT) (6,4 ммоль, 1,9 г). Как только MSNT растворился, реакционную смесь добавляли к смоле НМРВ-ВНА (1,28 ммоль, 2 г) и полученной смеси давали возможность встряхиваться в течение 45 минут. Смолу отфильтровывали и промывали ДМФА (50 мл), МеОН (50 мл) и DCM (50 мл). Затем смоле давали возможность сохнуть на воздухе, с получением соединения (WW).

Синтез соединения (ХХ)

К соединению (ХХ) (0,40 ммоль, 0,62 г) добавляли смесь 20% пиперидин/ДМФА (50 мл) и полученной смеси давали возможность встряхиваться в течение 20 минут. Смесь фильтровали, смолу промывали ДМФА (20 мл), МеОН (20 мл) и DCM (20 мл) и давали возможность сохнуть на воздухе перед тем, как ее подвергали воздействию указанных выше условий реакции второй раз.

К полученной смоле добавляли ДМФА (64 мл), Fmoc-Ala-OH (32 ммоль, 1,05 г), DIEA (12,8 ммоль, 2,2 мл), НОВТ (5,12 ммоль, 692 мг) и HBTU (5,12 ммоль, 1,94 г) и реакционной смеси давали возможность встряхиваться в течение 45 минут. Реакционную смесь фильтровали, смолу промывали ДМФА (40 мл), DCM (40 мл), МеОН (40 мл), Н₂О (40 мл), МеОН (40 мл), Н₂О (40 мл), МеОН (40 мл) и DCM (40 мл) и давали возможность сохнуть на воздухе, с получением соединения (ХХ).

Синтез соединения (YY)

К соединению (ХХ) (0,192 ммоль, 0,3 г) добавляли смесь 20% пиперидин/ДМФА (10 мл) и полученной смеси давали возможность встряхиваться в течение 20 минут. Смесь фильтровали, смолу промывали ДМФА (20 мл), МеОН (20 мл) и DCM (20 мл) и давали возможность сохнуть на воздухе перед тем, как ее подвергали воздействию вышеописанным условиям реакции второй раз.

К полученной смоле добавляли ДМФА (12 мл), морфолиноуксусную кислоту (0,48 ммоль, 70 мг), DIEA (1,92 ммоль, 334 мкл), НОВТ (0,768 ммоль, 104 мг) и HBTU (0,768 ммоль, 291 мг) и реакционной смеси давали возможность встряхиваться в течение 45 минут. Реакционную смесь фильтровали, смолу промывали ДМФА (40 мл), DCM (40 мл), МеОН (40 мл), Н₂О (40 мл), МеОН (40 мл), Н₂О (40 мл), МеОН (40 мл) и DCM (40 мл) и давали возможность сохнуть на воздухе, с получением соединения (YY).

Синтез соединения (ZZ)

К соединению (YY) (0,192 ммоль) добавляли 5% ТФУК/DCM (10 мл) и смеси давали возможность встряхиваться в течение 10 минут при 0ºС. Реакционную смесь фильтровали и смолу промывали DCM (10 мл). Летучие соединения удаляли при пониженном давлении, полученное масло разбавляли DCM (10 мл) и упаривали в итоге три раза, с получением соединения (ZZ).

Синтез соединения 13

К перемешиваемому раствору соединения (ZZ) (0,192 ммоль, 83 мг) в MeCN (6 мл) и ДМФА (2 мл) добавляли 4 (0,384 ммоль, 79 мг), DIEA (0,768 ммоль, 133 мкл), НОВТ (0,3 ммоль, 41 мг) и HBTU (0,3 ммоль, 116 мг) и смесь перемешивали при 0ºС в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляли насыщ. NaHCO₃ (15 мл) и экстрагировали EtOAc (3×). Органический слой промывали насыщ. NaHCO₃ и насыщенным раствором соли, сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное вещество очищали флэш-хроматографией, используя в качестве элюента EtOAc, затем EtOAc/MeOH/TEA (98/1/1), с получением соединения 13 в виде белого твердого вещества, которое характеризовали методом ЖХ/МС (LCRS(MH) m/z: 623,80).

Схема 14: синтез соединения примера 14

Синтез соединения (ААА)

Суспензию Вос-Tyr(Me)-OH (10 г) в безводном дихлорметане (450 мл) охлаждали

-5ºС на бане лед/ацетон. К полученной суспензии добавляли триэтиламин (9,4 мл, 67,8 ммоль) и DMAP (600 мг). Затем добавляли по каплям раствор бензилхлорформиата (5,7 мл, 40,6 ммоль) в дихлорметане (50 мл). Полученному раствору давали возможность перемешиваться при -5ºС в течение трех часов и затем давали возможность нагреться до комнатной температуры. Затем добавляли раствор насыщенного водного раствора бикарбоната натрия (200 мл). Органический слой отделяли и водный слой промывали дихлорметаном (200 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя смесь 80% гексаны/20% этилацетат, с получением 11,43 г белого твердого вещества (88% выход), которое характеризовали методом ЖХ/МС (LCRS (MH) m/z: 386,42).

Вос-Tyr(Me)-OВn (2 г, 5,2 ммоль) растворяли в дихлорметане (15 мл) и охлаждали до 0ºС, с последующим добавлением по каплям ТФУК (15 мл). Реакционной смеси давали возможность нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 часов. Растворители удаляли при пониженном давлении, с получением соединения (ААА) в виде прозрачного масла (1,4 г, 95% выход), которое характеризовали методом ЖХ/МС (LCRS (MH) m/z: 286,42) и использовали без дополнительной очистки.

Синтез соединения (ВВВ)

К раствору Boc-Ala-OH (750 мг, 3,9 ммоль), Н-Tyr(Me)-ОВn (950 мг, 3,3 ммоль), НОВТ (712 мг, 5,3 ммоль) и HBTU (2,0 г, 5,3 ммоль) в ацетонитриле (60 мл) и ДМФА (6 мл) добавляли по каплям N,N-диизопропилэтиламин (2,3 мл). Смесь перемешивали при 0°С в течение 2 часов, затем разбавляли этилацетатом (300 мл) и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2×100 мл) и насыщенным раствором соли (100 мл). Органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением непрозрачного масла, которое очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя смесь 50% гексаны/50% этилацетат, с получением 600 мг соединения (ВВВ) в виде белой пены (40% выход), которое характеризовали методом ЖХ/МС (LCRS (MH) m/z: 457,52).

Синтез соединения (ССС)

К раствору соединения (ВВВ) (5,9 г, 12,9 ммоль) в тетрагидрофуране (120 мл) при 0° добавляли 10% Pd/C (1,2 г) и полученной смеси давали возможность перемешиваться при давлении водорода 1 атмосфера в течение 2 часов. Затем смесь фильтровали через целит-545 и осадок на фильтре промывали тетрагидрофураном. Затем органический фильтрат концентрировали при пониженном давлении и помещали в условия высокого вакуума, с получением 4,53 г (95% выход) соединения (ССС), которое использовали без дополнительной очистки.

Синтез соединения (DDD)

К раствору соединения (ССС) (4 г, 10,9 ммоль), соединения 4 (2,23 г, 10,9 ммоль), НОВТ (2,36 г, 17,4 ммоль) и HBTU (6,6 г, 17,4 ммоль) в ацетонитриле (200 мл) и ДМФА (5 мл) при 0°С добавляли N,N-диизопропилэтиламин (7,6 мл) и смесь перемешивали при 0°С в течение 2 часов. Затем разбавляли этилацетатом (400 мл) и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2×100 мл) и насыщенным раствором соли (100 мл). Органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали ВЭЖХ (водный ацетат аммония (0,02 М) и ацетонитрил), с получением соединения (DDD) (4,47 г, 74% выход), как охарактеризовано методом ЖХ/МС (LCRS (MН) m/z: 554,79).

Синтез соединения (ЕЕЕ)

К раствору соединения (DDD) (2 г, 3,6 ммоль) в дихлорметане (32 мл) при 0°С добавляли трифторуксусную кислоту (8 мл) и полученный раствор перемешивали при той же температуре в течение еще одного часа. Затем раствор концентрировали при пониженном давлении и помещали в условия высокого вакуума, с получением соединения (ЕЕЕ), как подтверждено методом ЖХ/МС (LCRS (MН) m/z: 454,72), которое использовали без дополнительной очистки.

Синтез соединения 14

К раствору соединения (ЕЕЕ), морфолин-4-илуксусной кислоты (1,048 г, 7,22 ммоль), НОВТ (780 мг, 5,76 ммоль) и HBTU (2,2 г, 5,76 ммоль) в ацетонитриле (60 мл) и ДМФА (3 мл) при 0°С добавляли по каплям N,N-диизопропилэтиламин (2,5 мл). Смесь перемешивали при 0°С в течение 2 часов, затем разбавляли этилацетатом (300 мл) и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2×100 мл) и насыщенным раствором соли (100 мл). Органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали ВЭЖХ (водный ацетат аммония (0,02 М) и ацетонитрил), с получением соединения 14 (620 мг, 29% выход), которое характеризовали ЖХ/МС (LCRS (MН) m/z: 581,83).

Схема 15: синтез соединения примера 15

К раствору соединения (ЕЕЕ) (65 мг, 0,144 ммоль), гидрохлорида (2R,6S)-2,6-диметилморфолин-4-илуксусной кислоты (FFF) (50 мг, 0,288 ммоль), НОВТ (32 мг, 0,23 ммоль) и HBТU (88 мг, 0,23 ммоль) в ацетонитриле (15 мл) и ДМФА (1 мл) при 0°С добавляли по каплям N,N-диизопропилэтиламин (100 мкл) и смесь перемешивали при 0°С в течение 2 часов. Затем разбавляли этилацетатом (30 мл) и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2×15 мл) и насыщенным раствором соли (15 мл). Органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением остатка, который очищали ВЭЖХ (водный ацетат аммония (0,02 М) и ацетонитрил), с получением соединения 15 (32 мг, 36% выход), как охарактеризовано методом ЖХ/МС (LCRS (MН) m/z: 609,83).

Схема 16: синтез соединения примера 16

К раствору соединения (ЕЕЕ) (0,62 мг, 0,14 ммоль), (2-метил-1,3-тиазол-5-ил)уксусной кислоты (GGG) (25 мг, 0,15 ммоль), НОВТ (30 мг, 0,22 ммоль) и HBTU (84 мг, 0,22 моль) в ацетонитриле (15 мл) и ДМФА (1 мл) при 0°С добавляли по каплям N,N-диизопропилэтиламин (143 мкл) и полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 часов. Затем разбавляли этилацетатом (30 мл) и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2×15 мл) и насыщенным раствором соли (15 мл). Органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением остатка, который очищали ВЭЖХ (водный ацетат аммония (0,02М) и ацетонитрил), с получением соединения 16, которое характеризовали методом ЖХ/МС (LCRS (MН) m/z: 593,72).

Схема 17: синтез соединения примера 17

Синтез соединения (III)

К раствору соединения (ННН) (2 г, 5,9 ммоль), 4 (2,44 г, 11,89 ммоль), НОВТ (1,28 г, 9,5 ммоль) и HBTU (3,6 г, 9,5 ммоль) в ацетонитриле (180 мл) и ДМФА (10 мл) при 0°С добавляли по каплям N,N-диизопропилэтиламин (4,14 мл) и смесь перемешивали при 0°С в течение 2 часов. Затем разбавляли этилацетатом (200 мл) и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2×50 мл) и насыщенным раствором соли (50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением остатка, который очищали ВЭЖХ (водный ацетат аммония (0,02М) и ацетонитрил), с получением соединения (III) (1,5 г, 50% выход), как охарактеризовано методом ЖХ/МС (LCRS (MН) m/z: 524,71).

Синтез соединения (JJJ)

К раствору соединения (III) (60 мг, 0,1 ммоль) в дихлорметане (2 мл) при 0°С добавляли трифторуксусную кислоту (0,5 мл) и полученный раствор перемешивали при той же температуре в течение еще одного часа. Затем раствор концентрировали при пониженном давлении и помещали в условия высокого вакуума, с получением соединения (JJJ), как подтверждено методом ЖХ/МС (LCRS (MC) m/z: 424,51), которое использовали без дополнительной очистки.

Синтез соединения 17

К раствору соединения (JJJ), (2,4-диметил-1,3-тиазол-5-ил)уксусной кислоты (40 мг, 0,23 ммоль), НОВТ (25 мг, 183 ммоль) и HBTU (70 мг, 0,183 ммоль) в ацетонитриле (6 мл) и ДМФА (1 мл) при 0°С добавляли по каплям N,N-диизопропилэтиламин (80 мкл). Затем смесь перемешивали при 0°С в течение 2 часов. Затем разбавляли этилацетатом (50 мл) и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2×10 мл) и насыщенным раствором соли (10 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением остатка, который очищали ВЭЖХ (водный ацетат аммония (0,02 М) и ацетонитрил), с получением соединения 17 (29 мг, 44% выход), которое характеризовали ЖХ/МС (LCRS (MН) m/z: 577,86).

Пример 18: испытания для определения ингибирующего преимущества

Имеется три типа испытаний, которые можно применять, чтобы определить, ингибирует или нет молекула преимущественно конститутивную или иммунопротеасомную CT-L активность. В ферментативных кинетических испытаниях, таких как описано в заявке США № 09/569748, пример 2, и Stein et al., Biochem. (1996), 35, 3899-3908, используют препараты выделенной 20S протеасомы с более 90% субъединиц конститутивной протеасомы или субъединиц иммунопротеасомы. Ингибирующее преимущество молекулы, следовательно, основано на ЕС₅₀ отношении химотриптическиподобной активности конститутивной протеасомы к активности иммунопротеасомы (20S отношение).

Альтернативно, ЕС₅₀ для оценки CT-L соединения можно определить с использованием 26S протеасомы в контексте клеточного лизата. Соединение добавляют к лизату, образованному из клеток, которые либо преимущественно экспрессируют конститутивную протеасому (например, НТ29), либо иммунопротеасому (например, ТНР1). К тому же еще раз, ингибирующее преимущество основано на отношении ЕС₅₀ (лизатное отношение).

Наконец, можно применять подход, основанный на большем количестве клеток. Клетки, экспрессирующие приблизительно эквивалентные количества иммуно- и конститутивной протеасомы (например, RPMI-8226), обрабатывают тестируемым соединением, с последующим применением способа определения активности протеасомного ингибитора, как описано в заявке № 11/254541. Отношение ЕС₅₀, полученное в испытании, основанном на методе ELISA, с применением β5 антитела и LMP7 антител (отношение ELISA) обеспечивает основу для определения ингибирующего преимущества тестируемого соединения. Во всех примерах отношение 1 указывает, что молекула работает одинаково хорошо при ингибировании CT-L активности обеих форм протеасомы. Во всех трех испытаниях отношение меньше чем единица означает, что молекула ингибирует CT-L активность конститутивной протеасомы лучше, чем иммунопротеасомы. Отношения выше единицы означают, что молекула ингибирует химотрипсиноподобную активность имунопротеасомы лучше, чем активность конститутивной иммунопротеасомы.

Пример 19: анализ методом ELISA

Подходящий метод анализа ELISA можно найти в патентной заявке США № 11/254541, включенной в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте. Кратко, клетки RPMI-8226 обрабатывали 0,1-1 мкМ ингибитора В протеасомы. Затем образцы промывали забуференным фосфатом физиологическим раствором (PBS) и лизировали в гипотоническом буфере (20 мМ Tris pH 8,5 мМ EDTA), (Tris-HCl и EDTA доступны от Teknova, Inc., Hollister, CA). Клеточный дебрис удаляли центрифугированием при 14000 об/мин в микроцентрифуге (4°С) в течение 2 мин. Супернатант переносили в чистую пробирку, быстро замораживали в жидком азоте и хранили при -80°С. После оттаивания на льду образцы (30 мкл для анализов, выполненных в трех повторах) обрабатывали 500 нМ ингибитора А в течение 1 ч при комнатной температуре. После обработки ингибитором А лизат денатурировали добавлением семи объемов 1% SDS (210 мкл) (доступным от BIO-RAD, Hercules, CA) и нагреванием при 99°С при энергичном встряхивании в течение 5 мин. Образцу давали возможность охладиться и добавляли два объема (60 мкл) 10% Triton X-100 (доступного от BIO-RAD, Hercules, CA).

Гранулы стрептавадинсефарозы (6,5 мкл/на лунку) (доступные от Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) промывали три раза 1 мл PBS (доступным от Мediatech, Inc., Herndon, VA) в пробирках микроцентрифуги. Гранулы ресуспендировали в буфере ELISA типа промывание/блокирование (PBS+0,1% Tween 20+1% бычий сывороточный альбумин; 20 мкл/на лунку) и переносили в лунки 96-луночного планшета для фильтрования (PSA доступен от Sigma, St. Louis, MO; Tween доступен от Calbiochem, San Diego, CA). Денатурированную цельную кровь или лизаты РВМС, которые обрабатывали ингибитором 3, добавляли в лунки планшета для титрования, содержащие гранулы стрептавадинсефарозы (каждый образец анализировали в трех повторах) и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре при встряхивании (MultiScreen-DV непрозрачные планшеты с дурапористой мембраной с низким связыванием белка, доступные от Millipore, Billerica, MA). Несвязанное вещество удаляли мягкой фильтрацией и гранулы промывали шесть раз буфером ELISA типа промывание/блокирование (200 мкл каждое).

Первичные антитела для субъединицы β5 20S протеасомы человека (кроличьи поликлональные антитела, доступные от Biomol, Plymouth Meeting, PA) или субъединицы LMP7 20S иммунопротеасомы человека (кроличьи поликлональные антитела, доступные от Affinity BioReagents, Golden, CO) разводили 1:1000 в буфере ELISA типа промывание/блокирование, добавляли к гранулам (100 мкл/на лунку) и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре на орбитальном шейкере. Гранулы промывали шесть раз буфером ELISA типа промывание/блокирование с мягкой фильтрацией. Обработку вторичного антитела (1:5000) и промывание проводили, как описано для первичного антитела (конъюгат козье антикроличье антитело-HRP, доступный от Biosource, Camarillo, CA). Затем гранулы ресуспендировали в 100 мкл реагента для хемилюминесцентного обнаружения (Super Signal Pico Chemiluminescent Substrate^TM, доступного от Pierce, Rockford, IL) и люминесценцию считывали на планшет-ридере Tecan.

Заполнение активных сайтов протеасомы пептидным эпоксикетоновым ингибитором приводит к уменьшению подобной химотриптической активности и снижению в связывании биотинилированного зонда (ингибитора А). Такие данные дают возможность предположить, что основанный на методе ELISA анализ с использованием биотинилированного зонда точно отражает ингибирующую активность ингибитора В.

Иллюстративная особенность PD анализа, основанного на ELISA, состоит в том, что он дает возможность дифференцирования между ингибированием конститутивной протеасомы (β5) и ингибированием иммунопротеасомы (LMP7), потому что он использует специфичные для субъединицы антитела.

Применение другого зонда активного сайта (ингибитор С) расширяет применимость основанного на ELISA анализа для измерения заполнения нескольких конститутивных (β5, β1, β2) и иммунопротеасомных (LMP7, LMP2) активных сайтов в клеточной линии 8226 множественной миеломы, которая соэкспрессирует обе формы протеасомы. Расширенный анализ активного сайта можно применять для измерения относительной селективности ингибитора между как иммуно-, так и конститутивными протеасомами, а также среди трех активных сайтов каждой протеасомы. Помимо этого, основанный на ELISA анализ способен определить эффективность и селективность других классов ингибиторов протеасомы, включающих пептидные ингибиторы, основанные на бороновой кислоте.

Для проведения фармакодинамической оценки ингибитора цельную кровь и образцы РВМС собирали перед дозированием и в нескольких временных точках после дозирования. Получали лизаты и проводили анализы концентрации белка, чтобы стандартизировать для полного белка в каждом лизате. Уровень связывания ингибитора с субъединицами β5 и LMP7 в цельной крови и PBMCRPMI-8226 клетках соответственно определяли указанным выше методом стрептавидинового заполнения ELISA. Стандартные кривые с очищенной конститутивной протеасомой и иммунопротеасомой использовали для обеспечения линейности/динамического интервала анализа и для превращения хемилюминесцентного сигнала в абсолютное количество (мкг) связывания субъединицы. Отношение ЕС₅₀, полученное в анализе, основанном на ELISA, с использованием β5 антитела и LMP7 антител (ELISA отношение) обеспечивает основу для определения ингибирующего преимущества тестируемого соединения. Вышеуказанный ингибитор (В) имеет отношение выше 20, следовательно, он значительно более селективный при ингибировании химотриптическиподобной активности, связанной с иммунопротеасомой.

Для определения уровня протеасомного ингибирования для данного пациента количество β5 или LMP7, детектированное в образце после дозирования, сравнивали с образцом до введения дозы. Протеасомное ингибирование определяли после одной дозы или после цикла дозирования или применяли для наблюдения ингибирования сразу после дозирования, а также для наблюдения восстановления протеасомной активности после курса дозирования.

Пример 20: биологические результаты

Пример 21: Применение иммунопротеасомного ингибитора на модели ревматоидного артрита

Действие соединения 14 на развитие заболевания оценивали на 2 мышиных моделях ревматоидного артрита (фиг.2). На артрогенной модели антитела, в которой заболевание индуцируют введением антиколлагеновых антител и липополисахарида (LPS) (Terato et al., J Immunol 148:2103-2108, 1992), соединение 14 ингибирует развитие заболевания зависимым от дозы способом (фиг.2(А)). Ревматоидный артрит индуцировали на день 0 у самок мышей Balb/c введением IV анти-типа II коллагеновых антител, с последующим введением через 3 дня LPS. Соединение Х вводили IV 3 раза в неделю в течение 2 недель начиная со дня 4, в первый день животные демонстрировали симптом заболевания. Каждую лапу мыши измеряли в течение заболевания с использованием шкалы 0-4 и устанавливали суммарную клиническую оценку для каждого животного (максимальная оценка равна 16). Введение 6 мг/кг соединения 14 уменьшало интенсивность заболевания примерно на 50%, в то же время уровень дозы 20 мг/кг ингибировал заболевание более чем на 75%.

Действие введения соединения 14 на развитие заболевания также оценивали на альтернативной мышиной модели для RA, в которой заболевание обнаруживается на 21-30 день после иммунизации типа II бычьим коллагеном (Kagari et al., J Immunol 169:1459-1466, 2002). Введение 6 или 20 мг/кг соединения 14 начиная после первых симптомов заболевания ингибировало развитие заболевания по сравнению с контрольной средой (фиг.2(В)). Развитие заболевания снова измеряли с применением суммарной клинической оценки состояния лапы у мыши. Как показано выше, увеличение количества соединения 14 приводит к увеличенному снижению интенсивности заболевания.

Эквиваленты

Специалистам в данной области будет очевидно или они смогут выяснить, используя не более чем рутинное экспериментирование, многочисленные эквиваленты для соединений и способов их применения, описанных в данном описании. Полагают, что такие эквиваленты входят в объем данного изобретения и охватываются следующей формулой изобретения.

Все цитированные выше ссылки и публикации тем самым включены в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.

Реферат

Изобретение относится к соединению, имеющему структуру формулы (I), или его фармацевтически приемлемой соли, ! ! где указанные радикалы являются такими, как представлено в описании, а также относится к соединению, представляющему собой ! ! или его фармацевтически приемлемой соли. В настоящем изобретении заявляется фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении 20S протеасомы, содержащая фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель и терапевтически эффективное количество соединения, а также изобретение относится к способам лечения заболеваний, относящихся к иммунным, таким как воспалительное заболевание кишечника, к лечению рака, к лечению инфекции, к лечению пролиферативного заболевания, к лечению нейродегенеративного заболевания или лечению астмы, 18 н. и 16 з.п. ф-лы, 21 пр., 2 ил.

Формула

1. Соединение, имеющее структуру формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль,

где термин арил, указанный ниже, в качестве ароматической группы представляет собой фенил, необязательно замещенный метильными, метокси, гидрокси, СF₃, CN, трет-бутильными или трет-бутокси группами, и в качестве гетероароматической группы представляет собой индол, необязательно замещенный метильными, метокси, гидрокси, СF₃, CN, трет-бутильными или трет-бутокси группами;
В отсутствует;
L отсутствует или представляет собой С=O;
М отсутствует или представляет собой С_1-12алкил;
Q отсутствует или представляет собой NH;
Х представляет собой О;
Y отсутствует;
R¹ выбран из Н, -С_1-6алкил-В, арила и С_1-6арилалкила;
R² и R³ каждый независимо выбран из арила, С_1-6арилалкила и C_1-6гетероарилалкила, каждый из которых может быть необязательно замещен как указано ниже;
R⁴ представляет собой N(R⁵)-L-Q-R⁶;
R⁵ представляет собой Н;
R⁶ выбран из N-концевой защитной группы, арила и гетероциклилМ,
R⁷ и R⁸ представляют собой Н;
R¹⁵ представляет собой C_1-6алкил.

2. Соединение по п.1, где R¹⁵ представляет собой метил или этил.

3. Соединение по п.1, где L и Q отсутствуют.

4. Соединение по п.1, где R⁶ представляет собой N-концевую защитную группу.

5. Соединение по п.4, где R⁶ выбран из трет-бутоксикарбонила и бензилоксикарбонила.

6. Соединение по п.1, где углерод, имеющий заместитель R¹, имеет стереохимическую конфигурацию D.

7. Соединение по п.1, где R¹ выбран из -C_1-6алкилВ и С_1-6арилалкила.

8. Соединение по п.7, где R¹ выбран из метила, этила, изопропила, карбоксиметила и бензила.

9. Соединение по п.1, где R² выбран из С_1-6арилалкила и C_1-6гетероарилалкила.

10. Соединение по п.1, где R³ выбран из С_1-6арилалкила и C_1-6гетероарилалкила.

11. Соединение по п.1, где отношение ЕС₅₀, соединения в испытании на активность конститутивной протеасомы по сравнению с ЕС₅₀ соединения в испытании на активность иммунопротеасомы выше чем 1,0.

12. Соединение по п.11, где отношение ЕС₅₀ выше чем 3,0.

13. Соединение по п.1, где R⁶ представляет собой гетероциклилМ-.

14. Соединение по п.13, где R⁶ представляет собой гетероциклилМ-, а гетероциклильный фрагмент представляет собой морфолино.

15. Соединение по п.14, где L представляет собой С=O, Q отсутствует и М представляет собой С_1-6алкил.

16. Соединение, представляющее собой

или его фармацевтически приемлемая соль.

17. Способ лечения относящегося к иммунному заболевания, включающий введение соединения по любому из пп.1-15 или его фармацевтически приемлемой соли.

18. Способ по п.17, где относящееся к иммунному заболевание представляет собой воспалительное заболевание кишечника.

19. Способ по п.18, где воспалительное заболевание кишечника представляет собой болезнь Крона или язвенный колит.

20. Способ лечения рака, включающий введение соединения по любому из пп.1-15 или его фармацевтически приемлемой соли.

21. Способ лечения воспаления, включающий введение соединения по любому пп.1-15 или его фармацевтически приемлемой соли.

22. Способ лечения инфекции, включающий введение соединения по любому из пп.1-15 или его фармацевтически приемлемой соли.

23. Способ лечения пролиферативного заболевания, включающий введение соединения по любому из пп.1-15 или его фармацевтически приемлемой соли.

24. Способ лечения нейродегенеративного заболевания, включающий введение соединения по любому из пп.1-15 или его фармацевтически приемлемой соли.

25. Способ лечения астмы, включающий введение соединения по любому из пп.1-15 или его фармацевтически приемлемой соли.

26. Способ лечения относящегося к иммунному заболевания, включающий введение соединения по п.16 или его фармацевтически приемлемой соли.

27. Способ лечения рака, включающий введение соединения по п.16 или его фармацевтически приемлемой соли.

28. Способ лечения воспаления, включающий введение соединения по п.16 или его фармацевтически приемлемой соли.

29. Способ лечения инфекции, включающий введение соединения по п.16 или его фармацевтически приемлемой соли.

30. Способ лечения пролиферативного заболевания, включающий введение соединения по п.16 или его фармацевтически приемлемой соли.

31. Способ лечения нейродегенеративного заболевания, включающий введение соединения по п.16 или его фармацевтически приемлемой соли.

32. Способ лечения астмы, включающий введение соединения по п.16 или его фармацевтически приемлемой соли.

33. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении 20S протеасомы, содержащая фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, и терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп.1-15.

34. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении 20S протеасомы, содержащая фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель и терапевтически эффективное количество соединения по п.16.

Документы, цитированные в отчёте о поиске

Соединения для ингибирования фермента

Патенты аналоги

Соединения для ингибирования фермента

Авторы

ШЕНК Кевин Д. (US)

ПАРЛАТИ Франческо (US)

ЧЖОУ Хань-Цзе (US)

СИЛЬВЕН Катрин (US)

СМИТ Марк С. (US)

БЕННЕТТ Марк К. (US)

ЛЭЙДИГ Гай Дж. (US)

SHENK KEVIN D

PARLATI FRANCHESKO

CHZHOU KHAN-TSZE

SIL VEN KATRIN

SMIT MARK S

BENNETT MARK K

LEHJDIG GAJ DZH

SHENK KEVIN D.

PARLATI FRANCHESKO

CHZHOU KHAN'-TSZE

SIL'VEN KATRIN

SMIT MARK S.

BENNETT MARK K.

LEHJDIG GAJ DZH.

Патентообладатели

PROTEOLIKS INK

PROTEOLIKS, INK.

Заявители

PROTEOLIKS INK

PROTEOLIKS, INK.

СПК: A61K31/336 A61K38/00 A61P1/00 A61P1/04 A61P1/16 A61P1/18 A61P3/10 A61P3/12 A61P9/04 A61P9/10 A61P11/00 A61P11/06 A61P11/08 A61P13/12 A61P17/00 A61P17/06 A61P17/14 A61P19/00 A61P19/02 A61P21/00 A61P25/00 A61P25/16 A61P25/28 A61P27/02 A61P29/00 A61P31/00 A61P31/04 A61P31/12 A61P31/18 A61P33/00 A61P33/02 A61P35/00 A61P35/02 A61P37/00 A61P37/02 A61P37/06 A61P37/08 A61P43/00 C07D303/32 C07D405/12 C07D409/12 C07K5/06 C07K5/06026 C07K5/06034 C07K5/06043 C07K5/06052 C07K5/0606 C07K5/06078 C07K5/06086 C07K5/06095 C07K5/06113 C07K5/08 C07K5/0806 C07K5/0808 C07K5/0812 C07K5/0819 C07K5/0821 C07K5/1008 C07K5/1016

МПК: A61K31/404 A61K38/06 A61P35/00 A61P37/00

Публикация: 2012-05-10

Дата подачи заявки: 2007-06-19

РОССТИП

Поиск по товарам

Добавить свой товар

Сообщества

Товары

Участники

Патенты

Запросов

Поставщикам

О сервисе

Блогерам

Помощь