Лечение вируса гриппа а h7n9 - RU2682049C2

Код документа: RU2682049C2

Чертежи

Показать все 41 чертежа(ей)

Описание

РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Данная заявка испрашивает приоритет согласно предварительной заявке на патент США 61/931949, поданной 27 января 2014, которая полностью включена здесь для ссылки.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Рассматриваемая в данный момент заявка содержит перечень последовательностей, который был подан в электронном виде в формате ASCII и полностью включен здесь для ссылки. Указанная копия в формате ASCII, созданная 13 января 2015 года, имеет имя P5782R1-WO_SL.txt и размер 51,106 байтов.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к антителам против вируса гриппа A H7N9, являющимся эффективными в плане связывания, нейтрализации и лечения вируса гриппа A H7N9, композициям, включающим данные антитела, и способам их применения.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Вирус гриппа A H7N9 представляет собой одну подгруппу вирусов гриппа, которая обычно распространена среди птиц и является эндемической среди домашних кур в Азии. До недавнего времени данный вирус гриппа не встречался у людей. Новый реассортантный вирус птичьего гриппа A H7N9, ассоциируемый с тяжелой инфекцией человека, был впервые отмечен в начале 2013 в Китае, (см., например, Gao et al. (2013) NEJM 368: 1888-1897). Первоначальная вспышка данной инфекции, связанной с вирусом птичьего гриппа у людей, в течение весны 2013 года привела к 132 зарегистрированным случаям заражения и 44 смертям. Считается, что большинство инфицированных лиц заразилось вирусом путем непосредственного контакта с зараженной домашней птицей. На сегодняшний день устойчивая передача вируса птичьего гриппа A H7N9 от человека к человеку не наблюдалась. Тем не менее, исследования на хорьках, которые, подобно людям, заражают друг друга через кашель и чихание, показали, что один штамм вируса гриппа A H7N9, выделенный от человека, может переноситься от хорька к хорьку воздушно-капельным путем.

Пандемический потенциал данного вируса вызывает значительные опасения. Поскольку вирусы гриппа чрезвычайно изменчивы, вероятность того, что вирус птичьего гриппа H7N9 станет переносимым от человека к человеку и что такой перенос сможет привести к глобальной пандемии, не может исключаться. Если вирусы гриппа H7N9 приобретут способность эффективно переноситься от человека к человеку, может произойти глобальная вспышка заболевания, поскольку люди не обладают защитными иммунными реакциями на данные типы вирусов. Таким образом, существует потребность в новых способах лечения, являющихся эффективными в плане лечения и профилактики инфекций, связанных с вирусом гриппа A H7N9, у людей.

Настоящее изобретение удовлетворяет данную потребность и обеспечивает иные преимущества в плане лечения инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к антителам против гемагглютинина (анти-НА), композициям, включающим антитела против гемагглютинина, и способам их применения. Антитела против гемагглютинина по настоящему изобретению являются эффективными в плане нейтрализации вируса гриппа A H7N9; антитела против гемагглютинина по настоящему изобретению представляют собой антитела против вируса гриппа A H7N9, в частности антитела против гемагглютинина Н7.

Изобретатели открыли обеспечивающие широкую нейтрализацию антитела человека, которые связываются с белком НА Н7 и являются эффективными в плане нейтрализации вирусов гриппа A H7N9. Антитела против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению являются эффективными в плане связывания Н7НА из, например, изолятов вируса гриппа A H7N9 A/Shanghai/1/2013 и А/Anhui/1/2013. Кроме того, антитела против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению являются эффективными в плане нейтрализации штамма реассортантного вируса гриппа A H7N9, A/Shanghai/2/2013 IDCDC RG32A.

В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело против гемагглютинина (выделенное антитело против вируса гриппа A H7N9) по настоящему изобретению включает три гипервариабельных участка тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельных участка легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), при этом:

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57;

(d) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59;

(e) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60; a

(f) HVR-L3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61.

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к выделенному антителу против гемагглютинина (выделенному антителу против вируса гриппа A H7N9), включающему: по меньшей мере, одну, две, три, четыре, пять и/или шесть последовательностей гипервариабельного участка (HVR), при этом:

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57;

(d) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59;

(e) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60; а

(f) HVR-L3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61.

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к выделенному антителу против гемагглютинина (выделенному антителу против вируса гриппа A H7N9) включающему три гипервариабельных участка легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и LVR-L3), при этом:

(a) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59;

(b) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60; а

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к выделенному антителу против гемагглютинина (выделенному антителу против вируса гриппа A H7N9) включающему три гипервариабельных участка тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-Н3), при этом:

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57; а

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к выделенному антителу против гемагглютинина (выделенному антителу против вируса гриппа A H7N9) включающему: по меньшей мере, одну, две и/или три последовательности гипервариабельного участка (HVR) легкой цепи, при этом:

(a) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59;

(b) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60; и

(с) HVR-L3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61.

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57; а

В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело против гемагглютинина (выделенное антитело против вируса гриппа A H7N9) по настоящему изобретению включает вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, при этом вариабельный участок тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 74, а вариабельный участок легкой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 75.

В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело против гемагглютинина (выделенное антитело против вируса гриппа A H7N9) по настоящему изобретению включает тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76, а легкая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77.

В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело против гемагглютинина (выделенное антитело против вируса гриппа A H7N9) по настоящему изобретению включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу профилактики, лечения или нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа А H7N9, при этом данный способ включает введение субъекту, имеющему или обладающему риском наличия инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, терапевтически эффективного количества антитела, при этом антитело включает три гипервариабельных участка тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельных участка легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), при этом:

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57;

(d) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59;

(e) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60; а

(f) HVR-L3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу профилактики, лечения или нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа А H7N9, при этом данный способ включает введение субъекту, имеющему или обладающему риском наличия инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, терапевтически эффективного количества антитела, при этом антитело включает вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, при этом вариабельный участок тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 74, и при этом вариабельный участок легкой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 75.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу профилактики, лечения или нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа А H7N9, при этом данный способ включает введение субъекту, имеющему или обладающему риском наличия инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, терапевтически эффективного количества антитела, при этом антитело включает тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76, а легкая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу профилактики, лечения или нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа А H7N9, при этом данный способ включает введение субъекту, имеющему или обладающему риском наличия инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, терапевтически эффективного количества антитела, при этом антитело включает тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 76, а легкая цепь состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 77.

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63;

(d) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65;

(e) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66; а

(f) HVR-L3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67.

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63;

(d) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65;

(e) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66; а

(f) HVR-L3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67.

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к выделенному антителу против гемагглютинина (выделенному антителу против вируса гриппа A H7N9), включающему три гипервариабельных участка легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и LVR-L3), при этом:

(a) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65;

(b) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66; а

(с) HVR-L3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67.

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к выделенному антителу против гемагглютинина (выделенному антителу против вируса гриппа A H7N9), включающему три гипервариабельных участка тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-Н3), при этом:

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:63; а

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к выделенному антителу против гемагглютинина (выделенному антителу против вируса гриппа A H7N9), включающему: по меньшей мере, одну, две и/или три последовательности гипервариабельного участка (HVR) легкой цепи, при этом:

(a) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65;

(b) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66; а

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к выделенному антителу против гемагглютинина (выделенному антителу против вируса гриппа A H7N9), включающему: по меньшей мере, одну, две и/или три последовательности гипервариабельного участка (HVR) тяжелой цепи, при этом:

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63; а

В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело против гемагглютинина (выделенное антитело против вируса гриппа A H7N9) по настоящему изобретению включает вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, при этом вариабельный участок тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78, а вариабельный участок легкой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79.

В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело против гемагглютинина (выделенное антитело против вируса гриппа A H7N9) по настоящему изобретению включает тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80, а легкая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81.

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63;

(d) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65;

(e) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66; а

(f) HVR-L3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу профилактики, лечения или нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа А H7N9, при этом данный способ включает введение субъекту, имеющему или обладающему риском наличия инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, терапевтически эффективного количества антитела, при этом антитело включает вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, при этом вариабельный участок тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78, а вариабельный участок легкой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу профилактики, лечения или нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа А H7N9, при этом данный способ включает введение субъекту, имеющему или обладающему риском наличия инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, терапевтически эффективного количества антитела, при этом антитело включает тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80, а легкая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу профилактики, лечения или нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа А H7N9, при этом данный способ включает введение субъекту, имеющему или обладающему риском наличия инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, терапевтически эффективного количества антитела, при этом антитело включает тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 80, а легкая цепь состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 81.

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 69;

(d) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71;

(e) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72; а

(f) HVR-L3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73.

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 69;

(d) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71;

(e) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72; а

(f) HVR-L3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73.

(a) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71;

(b) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72; а

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к выделенному антителу против гемагглютинина (выделенному антителу против вируса гриппа A H7N9), включающему три гипервариабельных участка тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-Н3), при этом:

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 69; а

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к выделенному антителу против гемагглютинина (выделенному антителу против вируса гриппа A H7N9), включающему: по меньшей мере, одну, две и/или три последовательности гипервариабельного участка (HVR) легкой цепи, при этом:

(a) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71;

(b) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72; а

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к выделенному антителу против гемагглютинина (выделенному антителу против вируса гриппа A H7N9), включающему: по меньшей мере, одну, две и/или три последовательности гипервариабельного участка (HVR) тяжелой цепи, при этом:

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 69; а

В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело против гемагглютинина (выделенное антитело против вируса гриппа A H7N9) по настоящему изобретению включает вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, при этом вариабельный участок тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 82, а вариабельный участок легкой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 83.

В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело против гемагглютинина (выделенное антитело против вируса гриппа A H7N9) по настоящему изобретению включает тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84, а легкая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85.

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 69;

(d) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71;

(e) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72; а

(f) HVR-L3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу профилактики, лечения или нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа А H7N9, при этом данный способ включает введение субъекту, имеющему или обладающему риском наличия инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, терапевтически эффективного количества антитела, при этом антитело включает вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, при этом вариабельный участок тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 82, а вариабельный участок легкой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 83.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу профилактики, лечения или нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа А H7N9, при этом данный способ включает введение субъекту, имеющему или обладающему риском наличия инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, терапевтически эффективного количества антитела, при этом антитело включает тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84, а легкая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу профилактики, лечения или нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа А H7N9, при этом данный способ включает введение субъекту, имеющему или обладающему риском наличия инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, терапевтически эффективного количества антитела, при этом антитело включает тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 84, а легкая цепь состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 85.

Изобретение также относится к выделенным нуклеиновым кислотам, кодирующим антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению. Изобретение также относится к векторам, включающим нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению. Изобретение также относится к клеткам-хозяевам, включающим нуклеиновую кислоту или вектор по настоящему изобретению. Вектор может быть любого типа, например рекомбинантный вектор, такой как вектор экспрессии. Могут применяться любые из множества клеток-хозяев. В одном варианте осуществления клетка-хозяин представляет собой прокариотическую клетку, например, E. coli. В другом варианте осуществления клетка-хозяин представляет собой эукариотическую клетку, например клетку млекопитающего, такую как клетка яичника китайского хомячка (СНО).

Изобретение также относится к способу получения антитела против вируса гриппа А H7N9 по настоящему изобретению. Например, изобретение относится к способам получения антитела против вируса гриппа A H7N9 (которое, как определено здесь, включает полноразмерное антитело и его фрагменты), при этом данный способ включает экспрессию в подходящей клетке-хозяине рекомбинантного вектора по изобретению, кодирующего антитело против вируса гриппа A H7N9 или его фрагменты, таким образом что обеспечивается получение данного антитела или его фрагментов. В некоторых вариантах осуществления данный способ включает культивирование клетки-хозяина, включающей нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению (или его фрагмент), таким образом что обеспечивается экспрессия данной нуклеиновой кислоты. Способ также может включать выделение антитела против вируса гриппа A H7N9 или его фрагментов из культуры клеток-хозяев или культуральной среды клеток-хозяев.

Изобретение также относится к фармацевтическим составам, включающим антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтический состав может также включать дополнительный терапевтический агент (например, ингибитор нейраминидазы, такой как оселтамивир, занамивир или перамивир; другое антитело, такое как другое антитело против вируса гриппа A H7N9, другое антитело против гемагглютинина или антитело против М2; и так далее).

Изобретение также относится к композициям, включающим антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению. Композиция может также включать дополнительный терапевтический агент (например, ингибитор нейраминидазы, такой как оселтамивир, занамивир или перамивир; другое антитело, такое как другое антитело против вируса гриппа A H7N9, другое антитело против гемагглютинина или антитело против М2; и так далее).

Изобретение также относится к композиции, включающей антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению, для применения в целях профилактики инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению, для применения в целях профилактики инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. Изобретение также относится к композиции, включающей антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению, для применения в целях лечения инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению, для применения в целях лечения инфекции, связанной с вирусом гриппа А H7N9. Изобретение также относится к композиции, включающей антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению, для применения в целях ингибирования инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению, для применения в целях ингибирования или нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9.

Композиции, включающие антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению, также могут применяться при производстве лекарственного средства. Лекарственное средство может быть предназначено для применения в целях ингибирования, лечения или профилактики инфекции, связанной с вирусом гриппа А H7N9. В определенных вариантах осуществления лекарственное средство может также включать дополнительный терапевтический агент (например, ингибитор нейраминидазы, такой как оселтамивир, занамивир или перамивир; другое антитело, такое как другое антитело против вируса гриппа A H7N9, другое антитело против гемагглютинина или антитело против М2; и так далее).

Изобретение также относится к способу ингибирования инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, при этом данный способ включает введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества композиции, включающей антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению, что обеспечивает ингибирование инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. Изобретение также относится к способу лечения инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, при этом данный способ включает введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества композиции, включающей антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению, что обеспечивает лечение инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. Изобретение также относится к способу профилактики инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, при этом данный способ включает введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества композиции, включающей антитело против вируса гриппа А H7N9 по настоящему изобретению, что обеспечивает профилактику инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. Изобретение также относится к способу нейтрализации вируса гриппа A H7N9, при этом данный способ включает применение эффективного количества композиции, включающей антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению, что обеспечивает нейтрализацию инфекции, связанной с вирусом гриппа А H7N9.

Изобретение также относится к способу ингибирования, лечения или профилактики инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, при этом данный способ включает введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества композиции, включающей антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению, и введение пациенту эффективного количества дополнительного терапевтического агента, что обеспечивает ингибирование, лечение или профилактику инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. В некоторых вариантах осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой ингибитор нейраминидазы, такой как оселтамивир, занамивир или перамивир. В других вариантах осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой другое антитело против вируса гриппа A H7N9. В других вариантах осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой другое антитело против гемагглютинина. В других вариантах осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой антитело против М2. В рамках различных аспектов данных комбинированных видов лечения терапевтические агенты вводят примерно в одинаковое время, вводят совместно или вводят последовательно или непрерывно. В конкретных вариантах осуществления ингибитор нейраминидазы вводят перед введением антитела против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению.

В другом аспекте изобретение относится к применению антитела против вируса гриппа А H7N9 по настоящему изобретению при производстве лекарственного средства. Лекарственное средство может быть предназначено для применения в целях ингибирования, лечения или профилактики инфекции, связанной с вирусом гриппа А H7N9. В определенных вариантах осуществления лекарственное средство может также включать дополнительный терапевтический агент (например, ингибитор нейраминидазы, такой как оселтамивир, занамивир или перамивир; другое антитело, такое как другое антитело против вируса гриппа A H7N9, другое антитело против гемагглютинина или антитело против М2; и так далее).

В другом аспекте изобретение относится к применению нуклеиновой кислоты по изобретению при производстве лекарственного средства. Лекарственное средство может быть предназначено для применения в целях ингибирования, лечения или профилактики инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. Лекарственное средство может быть также предназначено для применения в целях нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. В определенных вариантах осуществления лекарственное средство может также включать дополнительный терапевтический агент (например, ингибитор нейраминидазы, такой как оселтамивир, занамивир или перамивир; другое антитело, такое как другое антитело против вируса гриппа A H7N9, другое антитело против гемагглютинина или антитело против М2; и так далее).

В другом аспекте изобретение относится к применению вектора экспрессии по изобретению при производстве лекарственного средства. Лекарственное средство может быть предназначено для применения в целях ингибирования, лечения или профилактики инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. Лекарственное средство может быть также предназначено для применения в целях нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. В определенных вариантах осуществления лекарственное средство может также включать дополнительный терапевтический агент (например, ингибитор нейраминидазы, такой как оселтамивир, занамивир или перамивир; другое антитело, такое как другое антитело против вируса гриппа A H7N9, другое антитело против гемагглютинина или антитело против М2; и так далее).

В другом аспекте изобретение относится к применению клетки-хозяина по изобретению при производстве лекарственного средства. Лекарственное средство может быть предназначено для применения в целях ингибирования, лечения или профилактики инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. Лекарственное средство может быть также предназначено для применения в целях нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. В определенных вариантах осуществления лекарственное средство может также включать дополнительный терапевтический агент (например, ингибитор нейраминидазы, такой как оселтамивир, занамивир или перамивир; другое антитело, такое как другое антитело против вируса гриппа A H7N9, другое антитело против гемагглютинина или антитело против М2; и так далее).

В другом аспекте изобретение относится к применению промышленного изделия по изобретению при производстве лекарственного средства. Лекарственное средство может быть предназначено для применения в целях ингибирования, лечения или профилактики инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. Лекарственное средство может быть также предназначено для применения в целях нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. В определенных вариантах осуществления лекарственное средство может также включать дополнительный терапевтический агент (например, ингибитор нейраминидазы, такой как оселтамивир, занамивир или перамивир; другое антитело, такое как другое антитело против вируса гриппа A H7N9, другое антитело против гемагглютинина или антитело против М2; и так далее).

В другом аспекте изобретение относится к применению набора по изобретению при производстве лекарственного средства. Лекарственное средство может быть предназначено для применения в целях ингибирования, лечения или профилактики инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. Лекарственное средство может быть также предназначено для применения в целях нейтрализации инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. В определенных вариантах осуществления лекарственное средство может также включать дополнительный терапевтический агент (например, ингибитор нейраминидазы, такой как оселтамивир, занамивир или перамивир; другое антитело, такое как другое антитело против вируса гриппа A H7N9, другое антитело против гемагглютинина или антитело против М2; и так далее).

В рамках различных аспектов антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению связывает гемагглютинин Н7. В рамках некоторых аспектов антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению связывает гемагглютинин Н7 вируса гриппа A H7N9. В рамках других аспектов антитело против вируса гриппа А H7N9 по настоящему изобретению связывает гемагглютинин Н7 и нейтрализует вирус гриппа A H7N9. В некоторых вариантах осуществления антитело против вируса гриппа А H7N9 по настоящему изобретению нейтрализует вирус гриппа A H7N9 in vitro, in vivo или in vitro и in vivo.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На Фиг. 1А, 1В и 1С приведены данные, иллюстрирующие связывание mAb1, mAb2 и mAb3 с гемагглютинином Н7 в рамках ELISA, соответственно.

На Фиг. 2А, 2В и 2С приведены данные, иллюстрирующие in vitro нейтрализацию штамма A/Shanghai/2/2013 IDCDC RG32A вируса гриппа A H7N9 посредством mAb1, mAb2 и антитела для отрицательного контроля, соответственно.

На Фиг. 3А и 3В показана аминокислотная последовательность тяжелой цепи, легкой цепи, вариабельного участка тяжелой цепи и вариабельного участка легкой цепи mAb1.

На Фиг. 4А и 4В показана аминокислотная последовательность тяжелой цепи, легкой цепи, вариабельного участка тяжелой цепи и вариабельного участка легкой цепи mAb2.

На Фиг. 5А и 5В показана аминокислотная последовательность тяжелой цепи, легкой цепи, вариабельного участка тяжелой цепи и вариабельного участка легкой цепи mAb3.

На Фиг. 6 показана аминокислотная последовательность гипервариабельных участков тяжелой цепи и легкой цепи (т.е. CDR) mAb1, mAb2 и mAb3.

На Фиг. 7 показана последовательность нуклеиновой кислоты гемагглютинина Н7 вируса гриппа A H7N9 A/Anhui/1/2013.

На Фиг. 8 показана последовательность нуклеиновой кислоты гемагглютинина Н7 вируса гриппа A H7N9 A/Shanghai/1/2013.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

I. ОПРЕДЕЛЕНИЯ

"Акцепторный каркасный участок человека" в соответствии с настоящим описанием представляет собой каркасный участок, включающий аминокислотную последовательность каркасного участка вариабельного домена легкой цепи (VL) или каркасного участка вариабельного домена тяжелой цепи (VH), полученный из каркасного участка иммуноглобулина человека или консенсусного каркасного участка человека, как указано ниже. Акцепторный каркасный участок человека, "полученный из" каркасного участка иммуноглобулина человека или консенсусного каркасного участка человека, может включать их интактную аминокислотную последовательность, или он может содержать изменения в такой аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах осуществления количество аминокислотных изменений составляет 10 или менее, 9 или менее, 8 или менее, 7 или менее, 6 или менее, 5 или менее, 4 или менее, 3 или менее, или 2 или менее. В некоторых вариантах осуществления акцепторный каркасный участок человека VL идентичен последовательности каркасного участка иммуноглобулина человека VL или последовательности консенсусного каркасного участка человека.

Термин "аффинность" означает интенсивность суммарных общих нековалентных взаимодействий между отдельным участком связывания молекулы (например, антитела) и его партнером по связыванию (например, антигеном). Если не указано иное, в соответствии с используемым здесь значением термин "аффинность связывания" означает собственную аффинность связывания, которая соответствует взаимодействию 1:1 между членами связывающейся пары (например, антителом и антигеном). Сродство молекулы X к ее партнеру Y, как правило, можно представить в виде константы диссоциации (Kd). Аффинность может быть измерена с помощью стандартных способов, известных в данной области, включая описанные здесь. Конкретные иллюстративные и примерные варианты осуществления, связанные с измерением аффинности связывания, описаны ниже.

Термин "аффинно-зрелый" означает антитело, содержащее одно или несколько изменений в одном или нескольких гипервариабельных участках (HVR) по сравнению с исходным антителом, которое не обладает данными изменениями, при этом данные изменения приводят к повышению аффинности антитела к антигену.

Термины "антитело против гемагглютинина" и "антитело, которое связывается с гемагглютинином" означают антитело, которое связывает гемагглютинин с достаточной аффинностью, таким образом что данное антитело может применяться в качестве диагностического и/или терапевтического агента при использовании гемагглютинина в качестве мишени, включая использование в качестве мишени гемагглютинина вируса гриппа. В одном варианте осуществления степень связывания антитела против гемагглютинина с неродственным, не являющимся гемагглютинином белком составляет менее чем около 10% от степени связывания антитела с гемагглютинина при измерении, например, с помощью радиоиммуноанализа (RIA). В определенных вариантах осуществления антитело, которое связывается с гемагглютинином обладает величиной константы диссоциации (Kd)≤1 мкМ, ≤100 нМ, ≤10 нМ, ≤1 нМ, ≤0,1 нМ, ≤0,01 нМ, или ≤0,001 нМ (например, 10^-8 М или менее, например от 10^-8 М до 10^-13 М, например от 10^-9 М до 10^-13 М). В определенных вариантах осуществления антитело против гемагглютинина связывается с эпитопом гемагглютинина, который сохраняется среди гемагглютинина различных штаммов, подтипов и изолятов вирусов гриппа А.

Термин "антитело", используется здесь в самом широком смысле и охватывает различные типы антител, включая, без ограничения, моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) и фрагменты антител, при условии, если они обладают требуемой антиген-связывающей активностью.

Термин "фрагмент антитела" означает молекулу, отличную от интактного антитела, которая включает часть интактного антитела, связывающуюся с тем же антигеном, что и интактное антитело. Термин "фрагмент антитела" также означает молекулу, отличную от интактного антитела, которая включает часть интактного антитела, связывающуюся с гемагглютинином и нейтрализующую вирус гриппа А. Примеры фрагментов антител включают, без ограничения, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂; диатела; линейные антитела; одноцепочечные молекулы антител (например, svFv); и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.

Термин "антитело, которое связывается с тем же эпитопом", что и указанное антитело, означает антитело, которое блокирует связывание указанного антитела с его антигеном по данным конкурентного анализа на 50% или более, и наоборот, указанное антитело блокирует связывание антитела с его антигеном по данным конкурентного анализа на 50% или более. Пример конкурентного анализа описан здесь.

Термин "химерное" антитело означает антитело, в котором одна часть тяжелой и/или легкой цепи получена из определенного источника, или от определенных видов, а другая часть тяжелой и/или легкой цепи получена из другого источника, или от других видов.

Термин "класс" антитела означает тип константного домена или константного участка тяжелой цепи. Существует пять основных классов антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, при этом некоторые из них могут быть также разделены на подклассы (изотипы), например IgG1, IgG2, IgG₃, IgG₄, IgA1 и IgA₂. Константные домены тяжелой цепи, которые соответствуют разным классам иммуноглобулинов, называют α, δ, ε, γ и μ, соответственно.

Термин "цитотоксический агент" в соответствии с используемым здесь значением означает вещество, которое ингибирует или предотвращает проявление клеточной функции и/или вызывает гибель или разрушение клетки. Цитотоксические агенты включают, без ограничения, радиоактивные изотопы (например, At²¹¹, I¹³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Bi²¹², P³², Pb²¹² и радиоактивные изотопы Lu); химиотерапевтические средства или лекарства (такие как метотрексат, адриамицин, алкалоиды барвинка (винкристин, винбластин, этопозид), доксорубицин, мелфалан, митомицин С, хлорамбуцил, даунорубицин или другие интеркалирующие средства); ингибиторы роста; ферменты и их фрагменты, такие как нуклеолитические ферменты; антибиотики; токсины, такие как низкомолекулярные токсины или ферментативно активные токсины бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения, в том числе их фрагменты и/или варианты; и разные противоопухолевые или противораковые средства, описанные ниже.

Термин "эффекторные функции" означает виды биологической активности, присущие Fc-участку антитела, которые варьируют в зависимости от изотипа антитела. Примеры эффекторных функций антител включают: связывание C1qи комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC); связывание с рецептором Fc; анти тело-зависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз; понижающую регуляцию рецепторов клеточной поверхности (например, B-клеточного рецептора); и активацию В-клеток.

Термин "эффективное количество" агента, такого как фармацевтическая композиция, означает количество, являющееся эффективным в рамках применяемых дозировок и периодов времени для достижения требуемого терапевтического или профилактического результата.

Термин " Fc-участок" используется здесь для обозначения C-терминального участка тяжелой цепи иммуноглобулина, который содержит, по меньшей мере, часть константного участка. Термин включает Fc-участки с нативными последовательностями и вариантные Fc-участки. В одном варианте осуществления Fc-участок тяжелой цепи IgG человека расположен от Cys226, или от Pro230, до карбоксильного конца тяжелой цепи. Тем не менее, C-терминальный лизин (Lys447) Fc-участка может присутствовать или отсутствовать. Если здесь не указано иное, нумерация аминокислотных остатков в Fc-участке или константном участке приведена в соответствии с системой нумерации ЕС, также называемой ЕС указателем, как описано в Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-е изд. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.

Термин "каркасный участок" или "FR" означает остатки вариабельного домена, отличные от остатков гипервариабельного участка (HVR). FR вариабельного домена в целом состоят из четырех FR доменов: FR1, FR2, FR3 и FR4. Соответственно, последовательности HVR и FR в целом присутствуют в VH (или VL) в следующей последовательности: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.

Термины "полноразмерное антитело", "интактное антитело" и "цельное антитело" используются здесь в качестве взаимозаменяемых и означают антитело, обладающее по существу такой же структурой, что и нативное антитело, или имеющее тяжелые цепи, которые содержат определенный здесь Fc-участок.

Термины "клетка-хозяин", "линия клеток-хозяев" и "культура клеток-хозяев" используются в качестве взаимозаменяемых и означают клетки, в которые была введена экзогенная нуклеиновая кислота, включая потомство таких клеток. Клетки-хозяева включают "трансформанты" и "трансформированные клетки", в том числе первично трансформированные клетки и полученное из них потомство, независимо от количества пассажей. Потомство может не являться полностью идентичным в плане содержания нуклеиновых кислот относительно исходной летки вследствие мутаций. В объем изобретения входит мутантное потомство, которое обладает той же функцией или биологической активностью, скрининг или отбор на основе которой осуществляли в рамках исходных трансформированных клеток.

"Антитело человека" представляет собой антитело, которое обладает аминокислотной последовательностью, соответствующей последовательности антитела, продуцируемого человеком или клеткой человека, или полученного из не являющегося человеком источника, в котором используются репертуары антител человека или другие последовательности, кодирующие антитела человека. Данное определение антитела человека в частности не включает гуманизированное антитело, включающее антиген-связывающие остатки не являющихся человеком источников.

"Консенсусный каркасный участок человека" представляет собой каркасный участок, который соответствует аминокислотным остаткам, наиболее часто встречающимся в наборе последовательностей каркасных участков VL или VH иммуноглобулина человека. Как правило, набор последовательностей VL или VH иммуноглобулина человека относится к подгруппе последовательностей вариабельных доменов. Как правило, подгруппа последовательностей представляет собой подгруппу, соответствующую описанной в Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-е изд., NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), т. 1-3. В одном варианте осуществления VL данная подгруппа представляет собой подгруппу каппа I как в Kabat et al., выше. В одном варианте осуществления VH данная подгруппа представляет собой подгруппу III как в Kabat et al., выше.

Термин "гуманизированное" антитело означает химерное антитело, включающее аминокислотные остатки из HVR не являющегося человеком вида и аминокислотные остатки из FR человека. В определенных вариантах осуществления гуманизированное антитело включает, по существу, все из, по меньшей мере, одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все HVR (например, CDR) соответствуют антителу не являющегося человеком вида, и все или по существу все FR соответствуют антителу человека. Гуманизированное антитело необязательно может включать, по меньшей мере, часть константного участка антитела, полученного из антитела человека. Термин "гуманизированная форма" антитела, например антитела не являющегося человеком вида, означает антитело, которое было подвергнуто гуманизации. Термин "гипервариабельный участок" или "HVR" в соответствии с используемым здесь значением означает каждый из участков вариабельного домена антитела, которые являются гипервариабельными в плане последовательности ("участки, определяющие комплементарность" или "CDR") и/или образуют петли с определенной структурой ("гипервариабельные петли") и/или содержат антиген-контактирующие остатки ("антигенные остатки"). Как правило, антитела включают шесть HVR: три в VH (H1, Н2, Н3) и три в VL (L1, L2, L3). Примеры HVR включают здесь:

(a) гипервариабельные петли, расположенные на аминокислотных остатках 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (Н2) и 96-101 (Н3) (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987));

(b) CDR, расположенные на аминокислотных остатках 24-34 (L1), 50-56 (L2), 89-97 (L3), 31-35b (H1), 50-65 (H2) и 95-102 (Н3) (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-е изд., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991));

(c) антигенные контакты, расположенные на аминокислотных остатках 27 с-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (H1), 47-58 (Н2) и 93-101 (Н3) (MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)); и

(d) комбинации (a), (b) и/или (с), включая аминокислотные остатки HVR 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49-56 (L2), 26-35 (H1), 26-35b (H1), 49-65 (H2), 93-102 (Н3) и 94-102 (Н3).

Если не указано иное, остатки HVR и другие остатки в вариабельном домене (например, остатки FR) пронумерованы здесь по Kabat et al., выше.

"Иммуноконъюгат" представляет собой антитело, конъюгированное с одной или несколькими гетерологичными молекулами, включающими, без ограничения, цитотоксическое средство.

"Лицо" или "субъект" представляет собой млекопитающее. Млекопитающие включают, без ограничения, домашних животных (например, коровы, овцы, кошки, собаки и лошади), приматов (например, люди и отличные от человека приматы, например, мартышки), кроликов и грызунов (например, мыши и крысы). В определенных вариантах осуществления особь или субъект представляет собой человека.

"Выделенное" антитело представляет собой антитело, которое было отделено от компонента его естественной среды. В некоторых вариантах осуществления антитело очищают до степени более чем 95% или 99%, которую определяют, например, с помощью электрофореза (например, SDS-PAGE, изоэлектрическое фокусирование (IEF), капиллярный электрофорез) или хроматографии (такой как ионообменная ВЭЖХ или ВЭЖХ на обращенной фазе). Обзор способов анализа чистоты антител см., например, у Flatman et al., J. Chromatogr. В 848: 79-87 (2007).

Термин "выделенная" нуклеиновая кислота означает молекулу нуклеиновой кислоты, которая была отделена от компонента ее естественной среды. Выделенная нуклеиновая кислота включает молекулу нуклеиновой кислоты, содержащуюся в клетках, которые обычно содержат такую молекулу нуклеиновой кислоты, однако указанная молекула нуклеиновой кислоты присутствует вне хромосомы или в участке хромосомы, который отличается от природного местонахождения данной молекулы в хромосоме. Термин "выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело против гемагглютинина" означает одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих тяжелую и легкую цепи антитела (или их фрагменты), включая такую молекулу(ы) нуклеиновой кислоты в одном векторе или отдельных векторах, и такую молекулу(ы) нуклеиновой кислоты, которые присутствуют в одном или нескольких положениях в клетке-хозяине.

Термин "моноклональные антитело" в соответствии с используемым здесь значением означает антитело, полученное из по существу гомогенной популяции антител, т.е. отдельные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными и/или связывают один и тот же эпитоп, за исключением возможных вариантов антител, например содержащих встречающиеся в природе мутации или образующихся при процессе получения препарата моноклональных антител, при этом такие варианты обычно присутствуют в малых количествах. В отличие от препаратов поликлональных антител, которые обычно включают разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), все моноклональные антитела из препарата моноклональных антител направлены против одной детерминанты антигена. Таким образом, определение "моноклональный" указывает на свойство антитела, заключающееся в том, что антитело получено из практически гомогенной популяции антител и не должно рассматриваться в качестве требующего получения данного антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела для применения в соответствии с настоящим изобретением могут быть получены с помощью множества способов, включая, без ограничения, гибридомный способ, способы на основе рекомбинантных ДНК, способы на основе фагового дисплея и способы, в рамках которых применяют трансгенных животных, содержащих все или часть локусов иммуноглобулина человека, при этом здесь описаны данные способы и другие приводимые в качестве примеров способы получения моноклональных антител.

Термин "голое антитело" означает антитело, которое не конъюгировано с гетерологичным фрагментом (таким как цитотоксический фрагмент) или радиоизотопной меткой. Голое антитело может входить в присутствовать в фармацевтическом составе.

Термин "нативные антитела" означает встречающиеся в природе молекулы иммуноглобулина, имеющие различные структуры. Например, нативные антитела IgG представляют собой гетеротетрамерные гликопротеины с молекулярной массой около 150000 дальтон, состоящие из двух идентичных легких цепей и двух идентичных тяжелых цепей, соединенных дисульфидными связями. От N- до C-конца каждая тяжелая цепь обладает вариабельным участком (VH), также называемым вариабельным тяжелым доменом или вариабельным доменом тяжелой цепи, и далее тремя константными доменами (CH1, СН2 и СН3). Аналогично, от N- до C-конца каждая легкая цепь обладает вариабельным участком (VL), также называемым вариабельным легким доменом или вариабельным доменом легкой цепи, и далее константным легким (CL) доменом. В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена, легкая цепь антитела может быть отнесена к одному из двух типов, называемых каппа (κ) и лямбда (λ).

Термин "вкладыш в упаковку" используется для обозначения инструкций, которые обычно вкладывают в коммерческие упаковки терапевтических продуктов и которые содержат информацию по показаниям, применению, дозировке, способу введения, сочетанной терапии, противопоказаниям и/или предупреждения, касающиеся применения таких терапевтических продуктов.

"Степень идентичности аминокислотной последовательности в процентах (%)" в отношении указанной полипептидной последовательности представляет собой долю аминокислотных остатков в кандидатной последовательности, которые идентичны аминокислотным остаткам в указанной полипептидной последовательности после выравнивания последовательностей и внесения промежутков, если это необходимо, для достижения максимальной степени идентичности последовательностей без учета каких-либо консервативных замещений в качестве части степени идентичности последовательностей. Выравнивание с целью определения степени идентичности аминокислотных последовательностей может быть осуществлено разными способами, известными специалистам в данной области, например с помощью доступного компьютерного программного обеспечения, такого как программы BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области могут определить параметры, подходящие для выравнивания последовательностей, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания сравниваемых последовательностей по всей длине. Однако для целей настоящего описания значения % идентичности аминокислотных последовательностей получены с помощью компьютерной программы для сравнения последовательностей ALIGN-2. Компьютерная программа для сравнения последовательностей ALIGN-2 разработана компанией Genentech, Inc., при этом исходный код был зарегистрирована наряду с информацией для пользователя в Бюро регистрации авторских прав США, Washington D.C., 20559, под номером регистрации авторского права США TXU510087. Программа ALIGN-2 находится в свободном доступе от Genentech, Inc., South San Francisco, California, или может быть скомпилирована из исходного кода. Программа ALIGN-2 должна быть скомпилирована для использования на операционной системе UNIX, включая UNIX V4.0D. Все параметры сравнения последовательностей устанавливаются программой ALIGN-2 и являются неизменными.

Если ALIGN-2 применяют для сравнения аминокислотных последовательностей, % идентичности некоторой аминокислотной последовательности А и некоторой аминокислотной последовательности В (или, другими словами, конкретная аминокислотная последовательность А обладает или характеризуется определенным % идентичности последовательности по отношению к конкретной аминокислотной последовательности В) рассчитывают следующим образом:

100×X/Y

где X представляет собой количество аминокислотных остатков, рассчитанное как идентичные совпадения, определенные с помощью программы для выравнивания ALIGN-2, при выравнивании А и В с применением данной программы, и где Y представляет собой общее количество аминокислотных остатков в В. Следует понимать, что если длина аминокислотной последовательности А не равна длине аминокислотной последовательности В, % идентичности по аминокислотной последовательности А к В не будет равен % идентичности по аминокислотной последовательности В к А. Если не указано иное, все используемые здесь значения % идентичности по аминокислотной последовательности получены в соответствии с описанием в предыдущем абзаце с применением компьютерной программы ALIGN-2.

Термин "фармацевтический состав" означает препарат, который находится в виде формы, обеспечивающей эффективную биологическую активность содержащегося в нем активного ингредиента, и не содержит других компонентов, обладающих неприемлемой токсичностью для субъекта, которому вводят состав.

Термин "фармацевтически приемлемый носитель" означает ингредиент в фармацевтическом составе, отличный от активного ингредиента, который является нетоксичным по отношению к субъекту. Фармацевтически приемлемый носитель включает, без ограничения, буфер, вспомогательное вещество, стабилизатор или консервант.

Термин "гемагглютинин" в соответствии с используемым здесь значением означает любой нативный гемагглютинин из любого источника в виде вируса гриппа, если не указано иное. Данный термин охватывает "полноразмерный" не подвергавшийся обработке гемагглютинин, а также любую форму гемагглютинина, которая получена в результате обработки вируса гриппа или клетки, инфицированной вирусом гриппа. Данный термин также охватывает встречающиеся в природе варианты гемагглютинина, например варианты, образованные в результате сплайсинга, или аллельные варианты. Термин "гемагглютинин" в соответствии с используемым здесь значением включает гемагглютинин Н7.

В соответствии с используемым здесь значением термин "лечение" (а также его грамматические производные, такие как "лечить" или "лечение") означает клиническое вмешательство с целью изменения естественного состояния подвергаемого лечению субъекта, которое может быть проведено для профилактики или в рамках течения клинической патологии. Желательные эффекты лечения включают, без ограничения, предотвращение появления или повторного возникновения заболевания (например, предотвращение появления или повторного возникновения инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9), снижение (например, уменьшение) или облегчение симптомов, уменьшение любых прямых или косвенных патологических последствий заболевания, понижение скорости прогрессирования заболевания, улучшение или временное улучшение состояния заболевания и ремиссию или улучшенный прогноз. В некоторых вариантах осуществления антитела по изобретению применяют для задержки развития заболевания или замедления прогрессирования заболевания.

Термин "вариабельный участок" или "вариабельный домен" означает домен тяжелой или легкой цепи антитела, который участвует в связывании антитела с антигеном. Вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи (VH и VL, соответственно) нативного антитела, как правило, имеют схожие структуры, при этом каждый домен включает четыре консервативных каркасных участка (FR) и три гипервариабельных участка (HVR). (См., например, Kindt et al. Kuby Immunology, 6-е изд., W.H. Freeman and Co., стр. 91 (2007).) Один VH или VL домен может являться достаточным для придания антиген-связывающей специфичности. Более того, антитела, способные связываться с конкретным антигеном, могут быть выделены с применением VH или VL домена антитела, связывающегося с антигеном, для скрининга библиотеки последовательностей, комплементарных VL или VH доменам, соответственно. См., например, Portolano et al., J. Immunol. 150: 880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352: 624-628 (1991). Термин "вектор" в соответствии с используемым здесь значением означает молекулу нуклеиновой кислоты, способную обеспечивать репродукцию другой нуклеиновой кислоты, с которой она связана. Данный термин включает вектор в виде самореплицирующейся структуры нуклеиновой кислоты, а также вектор, встроенный в геном клетки-хозяина, в которую она введена. Определенные векторы способны управлять экспрессией нуклеиновых кислот, с которыми они функционально связаны. Такие векторы в называются здесь "векторами экспрессии".

II. КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ

В одном аспекте изобретение частично основано на антителах против вируса гриппа А H7N9 и их применении. В определенных вариантах осуществления изобретение относится к антителам, которые связываются с гемагглютинином Н7. Антитела по изобретению могут применяться, например, для диагностики, лечения или профилактики инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9.

А. Примеры антител против вируса птичьего гриппа A H7N9

В одном аспекте изобретение относится к выделенным антителам, которые связывают гемагглютинин Н7. В определенных вариантах осуществления антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению связывает гемагглютинин Н7. В других вариантах осуществления антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению нейтрализует вирус гриппа A H7N9 in vitro. В других вариантах осуществления антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению нейтрализует вирус гриппа A H7N9 in vivo. В других вариантах осуществления антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению уменьшает инфекцию, связанную с вирусом гриппа A H7N9, предотвращает инфекцию, связанную с вирусом гриппа A H7N9, ингибирует инфекцию, связанную с вирусом гриппа A H7N9, или обеспечивает лечение инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9. В некоторых вариантах осуществления антитело против вируса гриппа A H7N9 по настоящему изобретению предотвращает, ингибирует или снижает опосредуемое гемагглютинином связывание мембраны вируса гриппа и эндосомальных мембран инфицированной клетки (обеспечивая, таким образом, ингибирование или снижение степени проникновения вирусной РНК в цитоплазму инфицированной клетки, что обеспечивает предотвращение, ингибирование или уменьшение дальнейшего распространения инфекции, связанной с вирусом гриппа).

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57;

(d) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59;

(e) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60; а

(f) HVR-L3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61.

(a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56;

(b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:57;