Аминоиндановые соединения и их применение при лечении боли - RU2612959C2

Чертежи

Описание

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Местные обезболивающие средства, такие как лидокаин, пригодны для облегчения боли во многих случаях, однако страдают недостатком нежелательной блокады двигательной функции. Они являются неселективными блокаторами натриевого канала, которые неспособны различать активность натриевого канала, необходимую для нормально существующего восприятия, и подобную активность натриевого канала, участвующую в ноцицепторной передаче сигнала. Катионный блокатор натриевого канала, QX-314, селективно блокирует активность натриевого канала в ноцицепторных нейронах при его введении в присутствии капсаицина, агониста катионного канала транзиторного рецепторного потенциала, подсемейства V, 1 члена (TRPV1). TRPV1 предпочтительно экспрессируется периферийно в первичных афферентных ноцицепторах небольшого диаметра и повышающе регулируется при хронических болевых состояниях. Однако TRPV1 отсутствует в афферентных нейронах крупного диаметра, которые передают тактильные ощущения, а также TRPV1 отсутствует в эфферентных волокнах двигательных нейронов.

QX-314 является N-этилированным аналогом лидокаина и имеет постоянный положительный заряд. Он не может пересекать нейронную клеточную мембрану при наружном нанесении и не влияет на нейронную активность натриевого канала, если не предоставлен доступ в клеточную цитоплазму через открытые каналы TRPV1, и в этом случае он вызывает пролонгированную блокаду активности натриевого канала. Электрофизиологические испытания единичных клеток с фиксацией потенциала показали, что QX-314 проникает через капсаицин-активированные каналы TRPV1 и блокирует активность натриевого канала. In vivo ишиасное введение комбинации QX-314/капсаицина вызывает выраженную и продолжительную блокаду ноцицептор-селективного нерва.

Кажущееся сродство QX-314 in vitro (IC₅₀) для блокирования натриевого потока в нейронах DRG (при совместном использовании с 1 мкМ капсаицина и измеренное с использованием подхода фиксации потенциала на целой клетке) составляет лишь 30 мкМ.

В данной области техники остается потребность в соединениях, применимых при контролировании долгосрочной или хронической боли, и в соединениях для контролирования боли, которые минимизируют ухудшение двигательной функции.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В одном аспекте настоящего изобретения представлено соединение формулы (I) или (II), где R¹-R⁴, X, A, m, n, p и q описаны в настоящем документе.

В другом аспекте представлены соединения формул с (I-А) по (I-D), где R¹-R⁴, X, m, n, p и q описаны в настоящем документе.

В другом аспекте настоящего изобретения представлена фармацевтическая композиция, содержащая соединение любой из формул с (I) по (I-NN) и фармацевтически приемлемый носитель. В одном варианте воплощения фармацевтическая композиция содержит также активатор рецептора TRPV1. В другом варианте воплощения активатором рецептора TRPV1 является лидокаин.

В следующем аспекте представлена фармацевтическая композиция, которая содержит лидокаин и следующее соединение, где Х описан в настоящем документе.

В следующем аспекте настоящего изобретения представлена фармацевтическая композиция, содержащая комбинацию, необязательно с лидокаином, где Х описан в настоящем документе:

В другом аспекте представлены способы лечения боли или зуда, которые включают введение соединения формулы (I) и/или (II) пациенту, нуждающемуся в этом. В одном варианте воплощения способы включают также введение активатора рецептора TRPV1.

В другом аспекте представлены способы оценки ингибирования реакции натриевого канала под действием указанного соединения.

В следующем аспекте представлена клеточная линия нейробластомы N1E115, которая устойчиво экспрессирует TRPV1 человека.

Другие аспекты и преимущества настоящего изобретения легко понятны из следующего подробного описания настоящего изобретения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На Фиг. 1-11 представлены сравнительные данные, иллюстрирующие анти-ноцицептивное действие QX-314, известного анти-ноцицептивного средства, а также трех (3) соединений, описанных в настоящем документе, которые охватываются соединением формулы (I). Фигуры являются диаграммами силы вокализации при оттягивании лапы (г) в зависимости от времени (часы) для данных о боли при сдавливании или % от максимально возможного эффекта в случае данных для модели кожного рефлекса пучка мышц. Если показано, три звездочки (***) обозначают вероятность менее 0,001. Две звездочки (**) обозначают вероятность менее 0,01. Одна звездочка (*) обозначает вероятность менее 0,05. Столбики (├─┤), содержащиеся на диаграмме, при их наличии, представляют различие между продолжительностью анти-ноцицепции с лидокаином и без него, если есть. Наконец, стрелка (→) на оси y представляет наивысшую приложенную силу. Эти данные и данные в примерах иллюстрируют, что испытанные соединения для новых и инновационных катионных блокаторов натриевого канала обладают более высокой силой действия, чем QX-314 in vitro, и более продолжительным действием in vivo при совместном введении с соответствующим раздражителем TRPV1 и, по меньшей мере, в одном случае даже без совместного введения раздражителя TRPV1 (смотри Таблицу 7 в настоящем документе).

Фиг. 1 иллюстрирует анти-ноцицептивное действие QX-314 с использованием модели сдавливания на крысах. Использовали две дозы 0,5% раствора QX-314 в присутствии и в отсутствие фиксированного количества (2%) лидокаина, при этом комбинацию лекарств вводили инъекцией непосредственно вокруг седалищного нерва (то есть ишиасное введение) одной задней конечности. Черные ромбы (◆) представляют результаты для 200 мкл инъекции комбинированного раствора QX-314 и лидокаина. Черные квадраты (■) представляют результаты для 100 мкл инъекции комбинированного раствора QX-314 и лидокаина. Перевернутые треугольники (▼) представляют результаты для 200 мкл инъекции только раствора QX-314. Треугольники (▲) представляют результаты для 100 мкл инъекции только раствора QX-314. Черные круги (●) представляют результаты для 200 мкл инъекции только 2% лидокаина.

На Фиг. 2 представлено анти-ноцицептивное действие соединения примера 2, то есть (S)-1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)-этил]пиперидиния йодида, с использованием модели сдавливания на крысах. Две дозы 0,5% раствора (S)-1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния йодида использовали в присутствии и в отсутствие фиксированного количества (2%) лидокаина. Черные ромбы (◆) представляют результаты для 200 мкл инъекции комбинированного раствора (S)-1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния йодида (200 мкл) и лидокаина. Черные круги (●) представляют результаты для 100 мкл инъекции комбинированного раствора (S)-1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния йодида и лидокаина. Перевернутые треугольники (▼) представляют результаты только для 200 мкл инъекции раствора (S)-1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния йодида. Треугольники (▲) представляют результаты только для 100 мкл инъекции раствора (S)-1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния йодида.

На Фиг. 3 представлено анти-ноцицептивное действие соединения примера 3, то есть 1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино)метил]пиперидиния йодида, с использованием модели сдавливания на крысах. Две дозы 0,5% раствора 1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино)метил]пиперидиния йодида использовали в присутствии и в отсутствие фиксированного количества (2%) лидокаина. Черные круги (●) представляют результаты для 200 мкл инъекции комбинированного раствора 1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино)метил]пиперидиния йодида и лидокаина. Черные квадраты (■) представляют результаты для 100 мкл инъекции комбинированного раствора 1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино)метил]пиперидиния йодида и лидокаина. Треугольники (▲) представляют результаты только для 200 мкл инъекции раствора 1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино)метил]пиперидиния йодида. Перевернутые треугольники (▼) представляют результаты только для 100 мкл инъекции раствора 1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино)метил]пиперидиния йодида.

На Фиг. 4 представлено анти-ноцицептивное действие 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида (Пример 24) с использованием модели сдавливания на крысах. Две дозы 0,25% и 0,5% растворов 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида использовали в присутствии и в отсутствие фиксированных количеств (1 и 2%) лидокаина. Перевернутые треугольники (▼) представляют результаты для 200 мкл инъекции комбинированного раствора 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида (0,5%) и лидокаина (2%). Треугольники (▲) представляют результаты для 100 мкл инъекции комбинированного раствора 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида (0,5%) и лидокаина (2%). Ромбы (◆) представляют результаты для 200 мкл инъекции комбинированного раствора 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида (0,25%) и лидокаина (1%). Заполненные окружности (●) представляют результаты только для 200 мкл инъекции раствора 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида (0,5%). Заполненные квадраты (■) представляют результаты только для 200 мкл инъекции раствора 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида (0,25%).

На Фиг. 5 представлено сравнение анти-ноцицептивного действия соединений Примеров 4, 16, 23 и 24 с использованием модели сдавливания на крысах. Независимо использовали инъекции по одной сотне мкл комбинированных растворов каждого из указанных соединений (0,5%) в присутствии фиксированного количества (2%) лидокаина. Перевернутые треугольники (▼) представляют результаты для соединения Примера 4. Квадраты (■) представляют результаты для соединения Примера 16. Круги (●) представляют результаты для соединения Примера 23. Треугольники (▲) представляют результаты для соединения Примера 24.

На Фиг. 6-7 представлено влияние объема инъекции на анти-ноцицептивное действие растворов, содержащих соединение Примера 24 и лидокаин, в виде графика силы вокализации при оттягивании лапы (г) в зависимости от времени (часы). Стрелка (→) на оси y представляет наивысшую приложенную силу.

Фиг. 6 содержит данные для 100 мкл инъекции комбинированных 0,5% растворов соединения Примера 24 в присутствии фиксированного количества (2%) лидокаина. Каждый круг (●) представляет индивидуальную болевую реакцию животного как функцию от времени, для общей группы из шести крыс.

Фиг. 7 содержит данные для 200 мкл инъекции комбинированных 0,25% растворов соединения Примера 24 в присутствии фиксированного количества (1%) лидокаина. Каждый круг (●) представляет индивидуальную болевую реакцию животного как функцию от времени, для общей группы из шести крыс.

На Фиг. 8 представлены данные, иллюстрирующие анти-ноцицептивное действие соединения Примера 24, то есть 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида, которое охвачено соединением формулы (I), с использованием коэффициента седалищной функции и модели следа крысы. Эта фигура является диаграммой оценки следа в зависимости от времени (часы). Оценка следа 0 указывает, что на лапу, обработанную инъекцией, не воздействует весовая нагрузка, лапа волочится или подкошена с поворотом вверх подошвенной поверхности. Оценки следа 1-3 отражали то, что весовая нагрузка воздействует, в основном, на колени, что лодыжка и пальцы используются щадяще, пальцы скручены и/или подошвенная поверхность лапы приподнята вогнутым образом. Оценки следа 4-6 отражают то, что весовая нагрузка воздействует, в основном, на колени и лодыжку, и лишь небольшой вес приходится на пальцы. Оценки следа 6-10 отражают то, что весовая нагрузка распределена на колено, лодыжку и пальцы, и что происходит периодическое щажение коленных суставов. Оценка следа 11 указывает на то, что распределение веса является нормальным и имеет место правильное положение подошвенной поверхности лапы. Дозы 0,25% и 0,5% растворов 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида использовали в присутствии и в отсутствие фиксированных количеств (1 и 2%) лидокаина. Квадраты (■) представляют результаты для 200 мкл инъекции комбинированного раствора 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида (0,5%) и лидокаина (2%). Круги (●) представляют результаты для 200 мкл инъекции комбинированного раствора 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида (0,25%) и лидокаина (1%). Вертикальные треугольники (▲) представляют результаты только для 200 мкл инъекции раствора 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида (0,25%). Перевернутые треугольники (▼) представляют результаты только для 200 мкл инъекции раствора лидокаина (2%). Три звездочки (***) обозначают вероятность менее 0,001; две звездочки (**) обозначают вероятность менее 0,01; и одна звездочка (*) обозначает вероятность менее 0,05.

На Фиг. 9 представлено сравнение анти-ноцицептивного действия соединения примера 43, то есть ((R)-2-[2-(индан-2-ил-о-толил-амино)этил]-1,1-диметил-пиперидиния бромида), при введении непосредственно вокруг седалищного нерва в виде односторонней 200 мкл инъекции только 0,2% раствора (■) или в комбинации с лидокаином (2%, ●).

На Фиг. 10 представлено влияние 200 мкл односторонней инъекции, вокруг седалищного нерва, комбинированного раствора соединения примера 43, то есть ((R)-2-[2-(индан-2-ил-о-толил-амино)-этил]-1,1-диметил-пиперидиния бромида, 0,2%), и лидокаина (2%) на двигательную функцию по оценке с использованием системы баллов для походки, описанной в настоящем документе. Данные были нанесены на график в том же масштабе, который использовали для Фиг. 9, для облегчения сравнения временных интервалов для обезболивания и двигательного нарушения, вызванного соединением примера 43.

На Фиг. 11 показаны анти-ноцицептивные действия 100 мкл подкожной инъекции соединения примера 43, то есть ((R)-2-[2-(индан-2-ил-о-толил-амино)-этил]-1,1-диметил-пиперидиния бромида, 0,2%), отдельно (●) или в комбинации с лидокаином (2%, ■), в модели кожного болевого рефлекса пучка мышц. Комбинированный раствор обусловил увеличение продолжительности обезболивания по сравнению с продолжительностью обезболивания, вызванного только соединением примера 43. Аналогичная инъекция 100 мкл лидокаина (2%), без примера 43, обеспечила быстрое обезболивание, которое достигло 100% примерно за 0,5 часа после инъекции и вернулось к исходной отметке примерно через 2 часа (данные не показаны).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем изобретении представлены новые соединения, которые, будучи необязательно использованными в комбинации с агонистом TRPV1, способны снижать или исключать боль или зуд, обусловленный травмой, повреждением или патологией ткани. Эти новые соединения имеют постоянный заряд за счет наличия четвертичного атома азота, содержащегося в азотсодержащем кольце, что обеспечивает им высокую растворимость. Эти соединения являются четвертичными аммониевыми солями, в которых противоанионом является анион галогена, то есть хлорид-, бромид- или йодид-ион; или трифторацетат, сульфат, фосфат, ацетат, фумарат, малеат, цитрат, пируват, сукцинат, оксалат, сульфонат, например, метансульфонат, трифторметансульфонат, толуолсульфонат, такой как п-толуолсульфонат, бензолсульфонат, этансульфонат, камфорсульфонат, 2-мезитиленсульфонат или нафталинсульфонат, такой как 2-нафталинсульфонат, бисульфат, малонат, ксинафоат, аскорбат, олеат, никотинат, сахаринат, адипат, формиат, гликолят, L-лактат, D-лактат, аспартат, малат, L-тартрат, D-тартрат, стеарат, 2-фуроат, 3-фуроат, нападизилат (нафталин-1,5-дисульфонат или нафталин-1-(сульфоновая кислота)-5-сульфонат), эдизилат (этан-1,2-дисульфонат или этан-1-(сульфоновая кислота)-2-сульфонат), изетионат (2-гидроксиэтилсульфонат), D-манделат, L-манделат, пропионат, фталат, гидрохлорат, гидробромат или нитрат.

Новые заряженные соединения, описанные в настоящем документе, не способны проходить через клеточную мембрану. Однако, предполагается, что они проникают в клетку в терапевтически эффективных количествах при обеспечении доступа через открытые каналы TRPV1. Это представляет одно из преимуществ заряженных соединений по настоящему изобретению в сравнении их с соответствующими нейтральными молекулами, которые предположительно свободно проникают через все клеточные мембраны.

В одном аспекте настоящего изобретения представлено соединение формулы (I) или (II).

В этих соединениях n равен от 1 до 3; m равен от 1 до 4; р равен от 0 до 2; q равен от 0 до 4. В одном варианте воплощения n равен 1. В другом варианте воплощения n равен 2. В другом варианте воплощения n равен 3. В следующем варианте воплощения р равен 0. В другом варианте воплощения р равен 1. В другом варианте воплощения р равен 2. В другом варианте воплощения q равен 0. В следующем варианте воплощения q равен 1. В следующем варианте воплощения q равен 2. В другом варианте воплощения q равен 3. В следующем варианте воплощения q равен 4. В следующем варианте воплощения m равен 2, а n равен 1. В другом варианте воплощения m равен 2, и n равен 2. В следующем варианте воплощения m равен 3, а n равен 2. В следующем варианте воплощения m равен 3, а n равен 1. В следующем варианте воплощения m равен 4, а n равен 2. В следующем варианте воплощения m равен 4, а n равен 3. В другом варианте воплощения m равен 2. В следующем варианте воплощения m равен 3.

А является фенилом или гетероарилом.

R¹ и R⁴ независимо являются C₁-C₆ алкилом или CH₂CH₂OH. Альтернативно, R¹ и R⁴ объединяются вместе с образованием 4-6-членного карбоциклического или гетероциклического кольца. В одном варианте воплощения R¹ и R⁴ объединяются с образованием необязательно замещенного карбоциклического кольца, такого как циклобутан, циклопентан, циклогексан, циклогептан и циклооктан. В другом варианте воплощения R¹ и R⁴ объединяются с образованием необязательно замещенного гетероциклического кольца, такого как циклический простой эфир, амин или сульфид. В следующем варианте воплощения R¹ и R⁴ объединяются с образованием циклического простого эфира.

R² является H, галогеном, NO₂, OH или C₁-C₆ алкокси. В одном варианте воплощения R¹ и R⁴ являются одинаковыми. В другом варианте воплощения R¹ и R⁴ являются различными. В следующем варианте воплощения R¹ и/или R⁴ являются метилом, этилом, пропилом (н-пропилом или изопропилом), бутилом, пентилом, гексилом или тому подобным.

R³ является водородом, галогеном, CN, NO₂, NH₂, необязательно замещенным C₁-C₆ алкилом, C₂-C₆ алкенилом, C₂-C₆ алкинилом, OH, CF₃, OCF₃, SCF₃, необязательно замещенным C₁-C₆ алкокси, C₂-C₆ алкинилокси, гетероциклилокси, гетероарилокси, необязательно замещенным C₁-C₆ алкилтио, гетероарилтио, C(O)O(C₁-C₆ алкил), C(O)(C₁-C₆ алкил), C(O)(арил), C(O)(гетероцикл), C(O)NH₂, C(O)NH(C₁-C₆ алкил), C(O)NH(арил), C(O)NH(гетероцикл), C(O)NH(гетероарил), C(O)N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил), C(O)N(арил)(C₁-C₆ алкил), C(S)NH₂, необязательно замещенным арилом, гетероарилом, гетероциклом, NHC(O)(C₁-C₆ алкил), NHC(O)(арил), NHC(O)(гетероарил), NHC(O)O(C₁-C₆ алкил), N(C₁-C₆ алкил)C(O)(C₁-C₆ алкил), N(C₁-C₆ алкил)C(O)O(C₁-C₆ алкил), NHC(O)NH₂, NHC(O)NH(C₁-C₆ алкил), NHC(O)NH(гетероарил), NHSO₂(C₁-C₆ алкил), SO₂(C₁-C₆ алкил), SO₂NH₂, SO₂NH(C₁-C₆ алкил), SO₂NH(C₂-C₆ алкинил), SO₂N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил), SO₂NH(гетероарил), NH(C₁-C₆ алкил), N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил), N(C₁-C₆ алкил)(C₂-C₆ алкенил) или N(C₁-C₆ алкил)(гетероцикл). Альтернативно, две группы R³ связываются с образованием необязательно замещенного 6-членного арила, необязательно замещенного 5- или 6-членного карбоциклического кольца или необязательно замещенного 5- или 6-членного гетероцикла или гетероарила, содержащего от 1 до 3 атомов кислорода, азота или серы и 4 или 5 атомов углерода. В одном варианте воплощения R³ является галогеном. В другом варианте воплощения R³ является хлором или фтором. В следующем варианте воплощения R³ является CN. В другом варианте воплощения R³ является C(O)OCH₃. В следующем варианте воплощения R³ является C(O)NH₂. В следующем варианте воплощения R³ является SO₂CH₃. В другом варианте воплощения R³ является CH₃.

X^- является анионом галогена, трифторацетатом, сульфатом, фосфатом, ацетатом, фумаратом, малеатом, цитратом, пируватом, сукцинатом, оксалатом, сульфонатом, например, метансульфонатом, трифторметансульфонатом, толуолсульфонатом, таким как п-толуолсульфонат, бензолсульфонатом, этансульфонатом, камфорсульфонатом, 2-мезитиленсульфонатом или нафталинсульфонатом, таким как 2-нафталинсульфонат, бисульфатом, малонатом, ксинафоатом, аскорбатом, олеатом, никотинатом, сахаринатом, адипатом, формиатом, гликолятом, L-лактатом, D-лактатом, аспартатом, малатом, L-тартратом, D-тартратом, стеаратом, 2-фуроатом, 3-фуроатом, нападизилатом (нафталин-1,5-дисульфонатом или нафталин-1-(сульфоновая кислота)-5-сульфонатом), эдизилатом (этан-1,2-дисульфонатом или этан-1-(сульфоновая кислота)-2-сульфонатом), изетионатом (2-гидроксиэтилсульфонатом), D-манделатом, L-манделатом, пропионатом, тартратом, фталатом, гидрохлоратом, гидроброматом и нитратом. В одном варианте воплощения X является галогеном. В другом варианте воплощения X является хлором, бромом или йодом. В другом варианте воплощения X является йодом.

Настоящим изобретением охватывается также вариант воплощения, в котором два атома водорода, присоединенные к атому углерода, то есть CH₂, могут быть заменены двойной связью с атомом кислорода или атомом серы с образованием карбонила, то есть C(O), или тиокарбонила, то есть C(S), соответственно.

В другом варианте воплощения соединение имеет формулу (I-A), (I-AA) или (II-A), где R¹, R³, R⁴, A, X, m, n и q описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

В следующем варианте воплощения соединение имеет формулу (I-В), (I-ВВ) или (II-В), где R¹, R², R⁴, A, X, m, n и p описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

В другом варианте воплощения соединение имеет формулу (I-С), (I-СС) или (II-С), где R¹, R⁴, A и X описаны в настоящем документе.

В следующем варианте воплощения соединение имеет формулу (I-D) или (I-DD), где R¹, R⁴ и X описаны в настоящем документе.

В другом варианте воплощения соединение имеет формулу (I-Е), где R¹, R⁴ и X описаны в настоящем документе.

В другом варианте воплощения соединение имеет формулу (I-F)-(I-FFFF) или (II-F)-(II-FFFF), где R¹, R⁴ и X описаны в настоящем документе.

В следующем варианте воплощения соединение имеет формулу (I-G), (I-GG) или (II-G), где R¹, R⁴, A, X, m и n описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

В другом варианте воплощения соединение имеет формулу (I-H), где R¹, R⁴, X, m и n описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

В следующем варианте воплощения соединение имеет формулу (I-J), где R¹, R⁴, X, m и n описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

В следующем варианте воплощения соединение имеет формулу (I-K), где R¹, R⁴, X, m и n описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

В другом варианте воплощения соединение имеет формулу (I-L) или (II-L), где R¹, R⁴, X, m и n описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

В следующем варианте воплощения соединение имеет формулу (I-M) или (II-M), где R¹, R⁴, X, m и n описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

В следующем варианте воплощения соединение имеет формулу (I-N) или (II-N), где R¹, R⁴, X, m и n описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

В другом варианте воплощения соединение имеет формулу (I-O), (I-OO), (II-O) или (II-OO), где R¹, R⁴, X, m и n описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

В следующем варианте воплощения соединение имеет формулу (I-P) или (II-P), где R¹, R⁴, X, m и n описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

В другом варианте воплощения соединение имеет формулу (I-Q) или (II-Q), где R¹, R⁴, X, m и n описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

В следующем варианте воплощения соединение имеет формулу (I-R) или (II-R), где R¹, R⁴, X, m и n описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

В следующем варианте воплощения соединение имеет формулу (I-S) или (II-S), где R¹, R⁴, X, m и n описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

В другом варианте воплощения соединение имеет формулу (I-T) или (II-T), где R¹, R⁴, X, m и n описаны в настоящем документе. В одном примере m равен 2 или 3.

Некоторые соединения по настоящему изобретению имеют один или несколько хиральных центров, и настоящее изобретение включает каждый отдельный энантиомер таких соединений, а также смеси этих энантиомеров. Если в соединениях по настоящему изобретению существует несколько хиральных центров, то настоящее изобретение включает каждую возможную комбинацию хиральных центров соединения, а также все их возможные энантиомерные и диастереомерные смеси. Подразумеваются все хиральные, диастереомерные и рацемические формы структуры, если специально не указана определенная стереохимия или изомерная форма. В данной области хорошо известно, как получить оптически активные формы, например, разделением рацемических форм или синтезом из оптически активных исходных материалов.

В отношении соединений, описанных в настоящем документе, используются следующие определения. В общем, количество углеродных атомов, присутствующих в данной группе, обозначено «C_x-C_y», где x и y являются нижним и верхним пределами, соответственно. Количество углеродных атомов, при использовании в определениях настоящего документа, относится к углеродному скелету и углеродным ответвлениям, но не включает углеродные атомы заместителей, таких как алкокси-замещения и тому подобные. Если не указано иное, номенклатура заместителей, описанных в настоящем документе неявно, определяется названием слева направо концевой части функциональности, за которой следует соседняя функциональность после точки присоединения. При использовании в настоящем документе «необязательно замещенный» означает, что, по меньшей мере, 1 атом водорода необязательно замещенной группы был замещен.

«Алкил» относится к углеводородной цепи, которая может быть прямой или разветвленной. В одном варианте воплощения алкил содержит от 1 до 6 (включительно) углеродных атомов. В другом варианте воплощения алкил содержит от 1 до 5 (включительно) углеродных атомов. В следующем варианте воплощения алкил содержит от 1 до 4 (включительно) углеродных атомов. В другом варианте воплощения алкил содержит от 1 до 3 (включительно) углеродных атомов. В следующем варианте воплощения алкил содержит от 1 до 2 углеродных атомов. Примеры алкиловых групп, которые являются углеводородными цепями, включают, но не ограничиваясь этим, метил, этил, пропил, бутил, пентил и гексил, причем подразумеваются все изомеры этих примеров.

Алкиловые группы могут также состоять из или содержать циклический алкиловый радикал, то есть «карбоциклическое кольцо». Примеры карбоциклических колец включают, но не ограничиваясь этим, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и тому подобные. В одном варианте воплощения карбоциклическое кольцо является 3-6-членным. В следующем варианте воплощения карбоциклическое кольцо является 3-5-членным. В следующем варианте воплощения карбоциклическое кольцо является 4-6-членным. В другом варианте воплощения карбоциклическое кольцо является 3- или 4-членным, то есть циклопропилом или циклобутилом. Если специально не указано иное, то алкиловые группы являются незамещенными, то есть они содержат только атомы углерода и водорода. Однако, если алкиловая группа или карбоциклическое кольцо является замещенным, то перед ним указывается термин «необязательно замещенный» или «замещенный». Необязательные заместители алкиловых групп или карбоциклических колец включают, без ограничения, галоген, CN, NO₂, C₁-C₆ алкил, OH, C₁-C₆ алкокси, C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси, C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкил-C₁-C₆ алкокси, гетероциклилокси, C₁-C₆ алкилтио, арил, гетероцикл, гетероарил, C(O)(C₁-C₆ алкил), C(O)(гетероцикл), C(O)O(C₁-C₆ алкил), C(O)NH₂, C(O)NH(C₁-C₆ алкил), C(O)N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил), SO₂(C₁-C₆ алкил), SO₂(C₂-C₆ алкинил), SO₂NH(C₁-C₆ алкил), SO₂(гетероцикл), NHC(O)(C₁-C₆ алкил), NHSO₂(C₁-C₆ алкил), N(C₁-C₆ алкил)SO₂(C₁-C₆ алкил), NH₂, NH(арил), N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил) или NHC(O)NH₂.

«Алкенил» относится к углеводородной цепи, которая является прямой или разветвленной и содержит, по меньшей мере, одну степень ненасыщенности (то есть с одной или несколькими двойными углерод-углеродными связями), или к углеводородной группе, которая состоит из или содержит циклический алкениловый радикал. Каждая алкениловая двойная связь может существовать в Е или Z конформации. В одном варианте воплощения алкенил содержит от 2 до около 6 (включительно) углеродных атомов или целые значения или интервалы между ними. В другом варианте воплощения алкенил содержит от 2 до 5 (включительно) углеродных атомов. В следующем варианте воплощения алкенил содержит от 2 до 4 (включительно) углеродных атомов. В другом варианте воплощения алкенил содержит от 2 до 3 углеродных атомов. Алкенил содержит, по меньшей мере, 1 двойную связь. В одном варианте воплощения алкенил может содержать от 1 до 3 двойных связей или целые числа между ними. Примеры алкениловой углеводородной цепи включают, но не ограничиваясь этим, этен, пропен, бутен, пентен и гексен. Примеры алкенила, который состоит из или содержит циклический алкениловый радикал, включают, но не ограничиваясь этим, циклопентен и циклогексен. Алкенил может быть незамещенным или замещенным одной или несколькими группами, включая, без ограничения, галоген, CN, NO₂, C₁-C₆ алкил, OH, C₁-C₆ алкокси, C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси, C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси, гетероциклилокси, C₁-C₆ алкилтио, арил, гетероцикл, гетероарил, C(O)(C₁-C₆ алкил), C(O)(гетероцикл), C(O)O(C₁-C₆ алкил), C(O)NH₂, C(O)NH(C₁-C₆ алкил), C(O)N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил), SO₂(C₁-C₆ алкил), SO₂(C₂-C₆ алкинил), SO₂NH(C₁-C₆ алкил), SO₂(гетероцикл), NHC(O)(C₁-C₆ алкил), NHSO₂(C₁-C₆ алкил), N(C₁-C₆ алкил)SO₂(C₁-C₆ алкил), NH₂, NH(арил), N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил) или NHC(O)NH₂.

«Алкинил» относится к углеводородной цепи, которая является прямой или разветвленной цепью и содержит, по меньшей мере, одну степень ненасыщенности, то есть с одной или несколькими тройными углерод-углеродными связями. В одном варианте воплощения алкинил содержит от 2 до около 6 (включительно) углеродных атомов или целые значения или интервалы между ними. В другом варианте воплощения алкинил содержит от 2 до 5 (включительно) углеродных атомов. В следующем варианте воплощения алкинил содержит от 2 до 4 (включительно) углеродных атомов. В другом варианте воплощения алкинил содержит от 2 до 3 углеродных атомов. Алкинил содержит, по меньшей мере, 1 тройную связь. В одном варианте воплощения алкинил может содержать от 1 до 3 тройных связей или целые числа между ними. Примеры алкинила включают, но не ограничиваясь этим, этин, пропин, бутин, пентин и гексин. Алкинил может быть незамещенным или замещенным одной или несколькими группами, включая, без ограничения, галоген, CN, NO₂, C₁-C₆ алкил, OH, C₁-C₆ алкокси, C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси, C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси, гетероциклилокси, C₁-C₆ алкилтио, арил, гетероцикл, гетероарил, C(O)(C₁-C₆ алкил), C(O)(гетероцикл), C(O)O(C₁-C₆ алкил), C(O)NH₂, C(O)NH(C₁-C₆ алкил), C(O)N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил), SO₂(C₁-C₆ алкил), SO₂(C₂-C₆ алкинил), SO₂NH(C₁-C₆ алкил), SO₂(гетероцикл), NHC(O)(C₁-C₆ алкил), NHSO₂(C₁-C₆ алкил), N(C₁-C₆ алкил)SO₂(C₁-C₆ алкил), NH₂, NH(арил), N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил) или NHC(O)NH₂.

«Алкокси» относится к

O(алкил), где алкил необязательно замещен и является таким, как описано выше. В одном варианте воплощения алкокси содержит от 1 до 6 (включительно) углеродных атомов или целые значения или интервалы между ними. В другом варианте воплощения алкокси содержит от 1 до 5 (включительно) углеродных атомов или интервалы между ними. В следующем варианте воплощения алкокси содержит от 1 до 4 (включительно) углеродных атомов. В другом варианте воплощения алкокси содержит от 1 до 3 (включительно) углеродных атомов. В следующем варианте воплощения алкокси содержит от 1 до 2 углеродных атомов. Примеры алкокси включают, но не ограничиваясь этим, метокси, этокси, пропокси и бутокси. Алкиловый радикал алкокси-группы может быть незамещенным или замещенным, как описано выше для «алкила».

«Алкинилокси» относится к

O(алкинил), где алкинил необязательно замещен и является таким, как описано выше. Примеры алкинилокси включают, но не ограничиваясь этим, пропинилокси, бутинилокси, пентинилокси и гексинилокси.

«Гетероциклилокси» относится к

O(гетероцикл), где гетероцикл необязательно замещен и является таким, как описано ниже.

«Гетероарилокси» относится к

O(гетероарил), где гетероарил необязательно замещен и является таким, как описано ниже.

«Арил» относится к ароматической углеводородной группе, содержащей атомы углерода. В одном варианте воплощения арил содержит от 6 до 10 углеродных атомов, то есть является 6-, 7-, 8-, 9- или 10-членным. В другом варианте воплощения арил является ароматической или частично ароматической бициклической группой. В следующем варианте воплощения арил является фениловой группой. В другом варианте воплощения арил является нафтилом (таким как α-нафтил или β-нафтил), 1,2,3,4-тетрагидронафтилом или инданилом. Ариловая группа может быть незамещенной или замещенной одной или несколькими группами, включая, без ограничения, галоген, CN, NO₂, C₁-C₆ алкил, OH, C₁-C₆ алкокси, C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси, C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси, гетероциклилокси, C₁-C₆ алкилтио, арил, гетероцикл, гетероарил, C(O)(C₁-C₆ алкил), C(O)(гетероцикл), C(O)O(C₁-C₆ алкил), C(O)NH₂, C(O)NH(C₁-C₆ алкил), C(O)N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил), SO₂(C₁-C₆ алкил), SO₂(C₂-C₆ алкинил), SO₂NH(C₁-C₆ алкил), SO₂(гетероцикл), NHC(O)(C₁-C₆ алкил), NHSO₂(C₁-C₆ алкил), N(C₁-C₆ алкил)SO₂(C₁-C₆ алкил), NH₂, NH(арил), N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил) или NHC(O)NH₂.

«Галоген» относится к F, Cl, Br и I.

Термин «гетероатом» относится к атому серы, азота или кислорода.

«Гетероарил» относится к моноциклическому ароматическому 5- или 6-членному кольцу, содержащему, по меньшей мере, один кольцевой гетероатом. В одном варианте воплощения гетероарил содержит от 1 до 5 углеродных атомов (включительно) или целые значения или интервалы между ними. В следующем варианте воплощения гетероарил содержит от 2 до 5 углеродных атомов (включительно). В другом варианте воплощения гетероарил содержит от 3 до 5 углеродных атомов (включительно). В следующем варианте воплощения гетероарил содержит от 4 до 5 углеродных атомов. «Гетероарил» относится также к бициклическим ароматическим кольцевым системам, в которых такая гетероариловая группа, как только что описано, конденсирована, по меньшей мере, с одним другим циклическим фрагментом. В одном варианте воплощения фениловый радикал конденсирован с 5- или 6-членным моноциклическим гетероарилом с образованием бициклического гетероарила. В другом варианте воплощения циклический алкил конденсирован с моноциклическим гетероарилом с образованием бициклического гетероарила. В следующем варианте воплощения бициклический гетероарил является пиридином, конденсированным с 5- или 6-членным моноциклическим гетероарилом. В другом варианте воплощения гетероариловое кольцо имеет 1 или 2 атома азота в кольце. В следующем варианте воплощения гетероариловое кольцо имеет 1 атом азота и 1 атом кислорода. В другом варианте воплощения гетероариловое кольцо имеет 1 атом азота и 1 атом серы. Примеры гетероариловых групп включают, без ограничения, фуран, тиофен, индол, азаиндол, оксазол, тиазол, изоксазол, изотиазол, имидазол, пиридин, пиримидин, пиразин, пиридазин, пиррол, пиразол, 1,3,4-оксадиазол, 1,2,4-триазол, тетразол, бензоксазол, бензотиазол, бензофуран, бензизоксазол, бензимидазол, азабензимидазол, индазол, хиназолин, хинолин и изохинолин. Гетероарил может быть незамещенным или замещенным одной или несколькими группами, включая, без ограничения, галоген, CN, NO₂, C₁-C₆ алкил, OH, C₁-C₆ алкокси, C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси, C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси, гетероциклилокси, C₁-C₆ алкилтио, арил, гетероцикл, гетероарил, C(O)(C₁-C₆ алкил), C(O)(гетероцикл), C(O)O(C₁-C₆ алкил), C(O)NH₂, C(O)NH(C₁-C₆ алкил), C(O)N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил), SO₂(C₁-C₆ алкил), SO₂(C₂-C₆ алкинил), SO₂NH(C₁-C₆ алкил), SO₂(гетероцикл), NHC(O)(C₁-C₆ алкил), NHSO₂(C₁-C₆ алкил), N(C₁-C₆ алкил)SO₂(C₁-C₆ алкил), NH₂, NH(арил), N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил) или NHC(O)NH₂.

«Гетероцикл» относится к моноциклической или бициклической группе, в которой, по меньшей мере, 1 кольцевой атом является гетероатомом. Гетероцикл может быть насыщенным или частично насыщенным. В одном варианте воплощения гетероцикл содержит от 3 до 7 углеродных атомов (включительно) или целые значения или интервалы между ними. В следующем варианте воплощения гетероцикл содержит от 4 до 7 углеродных атомов (включительно). В другом варианте воплощения гетероцикл содержит от 4 до 6 углеродных атомов (включительно). В следующем варианте воплощения гетероцикл содержит от 5 до 6 углеродных атомов (включительно). Примеры гетероциклов включают, но не ограничиваясь этим, азиридин, оксиран, тииран, морфолин, тиоморфолин, пирролин, пирролидин, азепан, дигидрофуран, тетрагидрофуран, дигидротиофен, тетрагидротиофен, дитиолан, пиперидин, 1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил, тетрагидропиран, пиран, тиан, тиин, пиперазин, гомопиперазин, оксазин, азекан, тетрагидрохинолин, пергидроизохинолин, 5,6-дигидро-4Н-1,3-оксазин-2-ил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октан, 3,6-диазабицикло[3.1.1]гептан, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октан, 6-окса-3,8-диазабицикло[3.2.1]октан, 7-окса-2,5-диазабицикло[2.2.2]октан, 2,7-диокса-5-азабицикло[2.2.2]октан, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-ил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.2]октан, 3,6-диокса-8-азабицикло[3.2.1]октан, 3-окса-6-азабицикло[3.1.1]гептан, 3-окса-8-азабицикло[3.2.1]октан-8-ил, 5,7-диокса-2-азабицикло[2.2.2]октан, 6,8-диокса-3-азабицикло[3.2.1]октан, 6-окса-3-азабицикло[3.1.1]гептан, 8-окса-3-азабицикло[3.2.1]октан-3-ил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан-5-ил, 6-азабицикло[3.2.1]окт-6-ил, 8-азабицикло[3.2.1]октан-8-ил, 3-окса-7,9-диазабицикло[3.3.1]нонан-9-ил, 9-окса-3-азабицикло[3.3.1]нонан-3-ил, 3-окса-9-азабицикло[3.3.1]нонан-9-ил, 3,7-диокса-9-азабицикло[3.3.1]нонан-9-ил, 3,4-дигидро-2Н-1,4-бензоксазин-7-ил, тиазин, дитиан и диоксан. В другом варианте воплощения гетероцикл содержит 1 или 2 атома азота. В следующем варианте воплощения гетероцикл содержит 1 или 2 атома азота и от 3 до 6 атомов углерода. В другом варианте воплощения гетероцикл содержит 1 или 2 атома азота, от 3 до 6 атомов углерода и 1 атом кислорода. В следующем варианте воплощения гетероцикл является 5-8-членным. В другом варианте воплощения гетероцикл является 5-членным. В следующем варианте воплощения гетероцикл является 6-членным. В другом варианте воплощения гетероцикл является 8-членным. Гетероцикл может быть незамещенным или замещенным одной или несколькими группами, включая, без ограничения, галоген, CN, NO₂, C₁-C₆ алкил, OH, C₁-C₆ алкокси, C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси, C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкокси, гетероциклилокси, C₁-C₆ алкилтио, арил, гетероцикл, гетероарил, C(O)(C₁-C₆ алкил), C(O)(гетероцикл), C(O)O(C₁-C₆ алкил), C(O)NH₂, C(O)NH(C₁-C₆ алкил), C(O)N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил), SO₂(C₁-C₆ алкил), SO₂(C₂-C₆ алкинил), SO₂NH(C₁-C₆ алкил), SO₂(гетероцикл), NHC(O)(C₁-C₆ алкил), NHSO₂(C₁-C₆ алкил), N(C₁-C₆ алкил)SO₂(C₁-C₆ алкил), NH₂, NH(арил), N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил) или NHC(O)NH₂.

«Алкилтио» относится к

S(алкил), где алкил необязательно замещен и является таким, как описано выше. В одном варианте воплощения алкилтио содержит от 1 до 6 (включительно) углеродных атомов или целые значения или интервалы между ними. Примеры алкилтио включают, но не ограничиваясь этим, SCH₂CH₂, SCH₂CH₂CH₃, SCH₂CH₂CH₃, SCH₂CH₂CH₂CH₃,SCH₂CH₂CH₂CH₃и SCH₂CH₂CH₂CH₃.

«Гетероарилтио» относится к

S(гетероарил), где гетероарил необязательно замещен и является таким, как описано ниже.

«Алкилсульфонил» относится к

SO₂(алкил), где алкил необязательно замещен и является таким, как описано выше. Примеры алкилсульфонила включают, но не ограничиваясь этим, CH₃SO₂, CH₃CH₂CH₂SO₂, CH₃CH(CH₃)SO₂, CH₃CH₂CH₂CH₂SO₂, CH₃CH(CH₃)CH₂SO₂, (CH₃)₃CSO₂ и тому подобные.

«Алкинилсульфонил» относится к

SO₂(алкинил), где алкинил необязательно замещен и является таким, как описано выше. Примеры алкинилсульфонила включают, но не ограничиваясь этим, CH≡CSO₂, CH≡CHCH₂SO₂ и тому подобные.

«Гетероциклсульфонил» относится к

SO₂(гетероцикл), где гетероцикл необязательно замещен и является таким, как описано выше.

«Алкиламино» относится к группе NH или N, где атом азота указанной группы присоединен к 1 или 2 алкиловым заместителям, соответственно, причем алкил необязательно замещен и является таким, как описано выше. Алкиламино связан через атом азота указанной группы. В одном варианте воплощения алкиламино относится к

NH(алкил). В другом варианте воплощения алкиламино относится к N(алкил)(алкил), то есть «диалкиламино». В следующем варианте воплощения алкиламино относится к N(C₁-C₆ алкил)(C₁-C₆ алкил). В другом варианте воплощения алкиламино относится к N(алкил)(гетероцикл). В следующем варианте воплощения алкиламино относится к N(алкил)(арил). В другом варианте воплощения алкиламино относится к N(алкил)(гетероарил). В следующем варианте воплощения алкиламино относится к N(алкил)(алкенил). Если атом азота связан с двумя алкиловыми группами, то каждая алкиловая группа может быть выбрана независимо. В другом варианте воплощения две алкиловые группы у атома азота могут быть взяты вместе с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 3-4-членного азотсодержащего гетероцикла, в котором до двух углеродных атомов гетероцикла могут быть замещены N(H), N(C₁-C₆ алкил), N(арил), N(гетероарил), O, S(O) или S(O)₂. Примеры алкиламино включают, но не ограничиваясь этим, N(CH₃)₂, N(CH₂CH₃)(CH₃), N(CH₂CH₃)₂, N(CH₂CH₂CH₃)₂, N(CH₂CH₂CH₂CH₃)₂, N(CH(CH₃)₂)(CH₃) и тому подобные.

«Ариламино» относится к группе NH или N, где атом азота указанной группы присоединен к 1 или 2 ариловым заместителям, соответственно, причем арил необязательно замещен и является таким, как описано выше. Ариламино связан через атом азота указанной группы. В одном варианте воплощения ариламино относится к

NH(арил). В другом варианте воплощения ариламино относится к N(арил)(арил), то есть «диариламино». Если атом азота связан с двумя ариловыми группами, то каждый арил может быть выбран независимо.

«Алкилкарбониламино» относится к

NHC(O)(алкил) или N(алкил)C(O)(алкил), где алкиловые группы определяются независимо и независимо необязательно замещены, как описано выше. Примеры алкилкарбониламино включают, но не ограничиваясь этим, CH₃CONH, CH₃CH₂CONH, CH₃CH₂CH₂CONH, CH₃CH(CH₃)CONH и тому подобные.

«Арилкарбониламино» относится к

NHC(O)(арил), где ариловая группа является такой, как описано выше, и необязательно замещена так, как описано выше.

«Гетероарилкарбониламино» относится к

NHC(O)(гетероарил), где гетероариловая группа является такой, как описано выше, и необязательно замещена так, как описано выше.

«Алкилсульфониламино» относится к

NHSO₂(алкил), где алкиловая группа необязательно замещена и является такой, как описано выше. Примеры алкилсульфониламино включают, но не ограничиваясь этим, CH₃SO₂NH, CH₃CH₂SO₂NH, CH₃CH₂CH₂SO₂NH, CH₃CH(CH₃)SO₂NH и тому подобные.

«Сложный эфир» относится к

C(O)O(алкил), который связан через атом углерода. Алкиловая группа необязательно замещена и является такой, как описано выше. Примеры сложного эфира включают, без ограничений, C(O)OCH₃, C(O)O(CH₂CH₃), C(O)O(CH₂CH₂CH₃), C(O)(O)(CH₂CH₂CH₂CH₃) и тому подобные.

«Карбамат» относится к

NHC(O)O(алкил) или N(алкил)C(O)O(алкил), где алкиловые группы определяются независимо и независимо необязательно замещены, как описано выше. Примеры карбамата включают, но не ограничиваясь этим, NHC(O)OCH₃, NHC(O)OCH₂CH₃, NHC(O)OCH₂CH₂CH₃, NHC(O)OCH₂CH₂CH₂CH₃ и тому подобные.

«Карбамид» относится к группе, имеющей

NHC(O)NH , где один из атомов азота связан с алкиловой или гетероариловой группой. Алкиловые или гетероариловые группы необязательно замещены и являются такими, как описано выше. Примеры карбамида включают, без ограничений, NHC(O)NHCH₃, NHC(O)NHCH₂CH₃, NHC(O)NHCH₂CH₂CH₃, NHC(O)NHCH₂CH₂CH₂CH₃и тому подобные.

«Алкиламинокарбонил» относится к

C(O)NH(алкил) или C(O)N(алкил)(алкил), где алкиловые группы определяются независимо и независимо необязательно замещены, как описано выше. Примеры алкиламинокарбонила включают, но не ограничиваясь этим, CH₃NHCO, CH₃CH₂NHCO, CH₃CH₂CH₂NHCO, CH₃CH(CH₃)NHCO и тому подобные.

«Ариламинокарбонил» относится к

C(O)NH(арил) или C(O)N(арил)(арил), где ариловые группы определяются независимо и независимо необязательно замещены, как описано выше.

«Гетероариламинокарбонил» относится к

C(O)NH(гетероарил) или C(O)N(гетероарил)(гетероарил), где гетероариловые группы определяются независимо и независимо необязательно замещены, как описано выше.

«Гетероцикламинокарбонил» относится к

C(O)NH(гетероцикл) или C(O)N(гетероцикл)(гетероцикл), где гетероциклические группы определяются независимо и независимо необязательно замещены, как описано выше.

«Алкиламиносульфонил» относится к

SO₂NH(алкил) или SO₂N(алкил)₂, где алкиловые группы определяются независимо и независимо необязательно замещены, как описано выше. Примеры алкиламиносульфонила включают, но не ограничиваясь этим, SO₂NHCH₃, SO₂NHCH₂CH₃, SO₂NHCH₂CH₃CH₃, SONHC(CH₃)CH₃, SO₂N(CH₃)₂, SO₂NH(CH₃)(CH₂CH₃) и тому подобные.

«Алкиниламиносульфонил» относится к

SO₂NH(алкинил), где алкиниловая группа необязательно замещена и является такой, как описано выше. Примеры алкиниламиносульфонила включают, но не ограничиваясь этим, CH≡CNHSO₂, CH≡CCH₂NHSO₂и тому подобные.

«Гетероариламиносульфонил» относится к

SO₂NH(гетероарил) или SO₂N(гетероарил)₂, где гетероариловые группы определяются независимо и независимо необязательно замещены, как описано выше.

«Пациентом» или «субъектом» является млекопитающее, например, пациент или субъект, являющийся человеком или животным, например, мышью, крысой, морской свинкой, собакой, кошкой, лошадью, коровой, свиньей или приматом, не являющимся человеком, таким как обезьяна, шимпанзе, павиан или горилла.

Термин % энантиомерный избыток (% э.и.), используемый в настоящем документе, применяется специалистами в данной области для обозначения энантиомерной чистоты образца, то есть процентного содержания одного энантиомера по сравнению с другими энантиомерами в образце. В одном варианте воплощения «высокий» % э.и. составляет, по меньшей мере, 90, по меньшей мере, 91, по меньшей мере, 92, по меньшей мере, 93, по меньшей мере, 94, по меньшей мере, 95, по меньшей мере, 96, по меньшей мере, 97, по меньшей мере, 98 или может быть получен 100%.

Термины «включают», «включает» и «включающий» следует понимать как включающие, а не исключающие. Термины «состоят», «состоящий» и их варианты следует понимать как исключающие, а не включающие.

При использовании в настоящем документе термин «около» обозначает вариабельность на 10% от данного значения, если не указано иное.

Способы, применимые для получения соединений формул (I) и (II), представлены ниже в Примерах и обобщены на Схемах 1-27. Специалистам в данной области понятно, что Схемы 1-27 могут быть адаптированы для получения других соединений формул (I) и (II) по настоящему изобретению.

В следующих способах представлен синтез соединений формул (I) и (II). Следующие примеры представлены для иллюстрации некоторых вариантов воплощения настоящего изобретения, однако их не следует толковать как ограничение рамок настоящего изобретения.

В одном аспекте соединения формулы (I-OO) получают с использованием синтетических стадий, представленных на Схеме 1, где R¹-R⁴, X, m, q и p являются такими, как описано в настоящем документе. На этой схеме кислоту 1а с защитной группой, такой как бутоксикарбонильная (BOC) группа, превращают в соответствующий сложный эфир 2а. В одном варианте воплощения сложный эфир 2а образуют с использованием изобутил хлорформиата, диазометана и бензоата серебра или оксида серебра. В другом варианте воплощения защищенная кислота 1а является N-Boc-азетидин-2-карбоновой кислотой (BOC Sciences, Ширли, штат Нью-Йорк), Boc-пирролидин-2-карбоновой кислотой, Boc-L-пипеколиновой кислотой или N-Boc-азепан-2-карбоновой кислотой (AstaTech, Inc., Бристоль, штат Пенсильвания). Затем сложный эфир 2а превращают в бензиламин 4а. В одном варианте воплощения это превращение осуществляют с использованием трифторуксусной кислоты, а затем бензилбромида. Соединение 4а затем восстанавливают до соответствующего спирта 5а. В одном варианте воплощения это восстановление осуществляют с использованием диизобутил-алюминия гидрида (DIBAL-H) или лития-алюминия гидрида (LAH). Затем спирт 5а превращают в соответствующий хлорид 6а с использованием соответствующего хлорирующего агента. В одном варианте воплощения хлорирующим агентом является тионилхлорид, оксихлорид фосфора, пентахлорид фосфора или комбинация четыреххлористого углерода и трифенилфосфина. Затем хлорид 6а связывают с замещенным аминоинданом 7а с образованием соединения 8а. В одном варианте воплощения хлорид 6а связывают с аминоинданом 7а в присутствии NaNH₂, трет-бутоксида калия, трет-бутоксида натрия или бутиллития, среди прочих. Затем бензиловую группу соединения 8а удаляют гидрированием с образованием соединения 9а. В одном варианте воплощения гидрирование осуществляют с использованием формиата аммония, газообразного водорода и Pd/C или Pd(OH)₂. N-атом гетероциклического кольца соединения 9а затем замещают с образованием соединения 11а. В одном варианте воплощения N-атом гетероциклического кольца соединения 9а замещают группой R¹. В другом варианте воплощения замещением является алкилирование. В следующем варианте воплощения алкилирование выполняют с использованием альдегида, такого как пропанальдегид, ацетальдегид или формальдегид, и NaCNBH₃. Тот же N-атом дополнительно замещают группой R⁴ с образованием соединения формулы (I-OO). В одном варианте воплощения дополнительным замещением является алкилирование. В другом варианте воплощения дополнительное замещение выполняют с использованием алкилгалогенида, алкилтрифлата или алкилбезилата. В следующем варианте воплощения дополнительное замещение осуществляют с использованием 1-йодпропана, этилйодида, метилйодида, метилтрифлата, этилтрифлата, пропилтрифлата или метилбезилата, среди прочих.

На Схеме 2, где R¹-R⁴, X, q и p являются такими, как описано в настоящем документе, изображен синтез соединений формулы (I-P). На этой схеме Boc-L-пипеколиновую кислоту 1 превращают в соответствующее сложноэфирное соединение 2, то есть трет-бутиловый эфир (S)-2-(метоксикарбонилметил)пиперидин-1-карбоновой кислоты. В одном варианте воплощения трет-бутиловый эфир (S)-2-(метоксикарбонилметил)пиперидин-1-карбоновой кислоты образуют с использованием изобутил хлорформиата, диазометана и бензоата серебра. Затем трет-бутиловый эфир (S)-2-(метоксикарбонилметил)пиперидин-1-карбоновой кислоты превращают в бензиламин 4, то есть метиловый эфир (S)-2-(1-бензил-пиперидин-2-ил)уксусной кислоты. В одном варианте воплощения это превращение осуществляют с использованием трифторуксусной кислоты, с последующей обработкой бензилбромидом. Затем соединение 4 восстанавливают до соответствующего спирта 5, то есть (S)-2-(1-бензил-пиперидин-2-ил)-этанола. В одном варианте воплощения это восстановление осуществляют с использованием диизобутил-алюминия гидрида (DIBAL-H). Спирт 5 затем превращают в соответствующий хлорид 6, то есть (S)-1-бензил-2-(2-хлорэтил)пиперидин, с использованием тионилхлорида. Затем хлорид 6 связывают с аминоинданом 7а с образованием соединения 8b. В одном варианте воплощения хлорид 6а связывают с аминоинданом 7а в присутствии NaNH₂. Затем бензиловую группу соединения 8b удаляют гидрированием с образованием соединения 9b. В одном варианте воплощения гидрирование осуществляют с использованием формиата аммония и Pd/C. N-атом гетероциклического кольца соединения 9b затем замещают с образованием соединения 11b. В одном варианте воплощения N-атом гетероциклического кольца соединения 9b замещают группой R¹. В другом варианте воплощения замещением является алкилирование. В следующем варианте воплощения алкилирование выполняют с использованием пропанальдегида и NaCNBH₃. Тот же N-атом соединения 11b дополнительно замещают группой R⁴ с образованием соединения формулы (I-P). В одном варианте воплощения дополнительным замещением является алкилирование. В другом варианте воплощения дополнительное замещение осуществляют с использованием алкилгалогенида. В следующем варианте воплощения дополнительное замещение осуществляют с использованием 1-йодпропана.

На Схеме 3 изображено прямое превращение соединения 9с в соединение формулы (I), где R¹ и R⁴ являются одинаковыми, и R¹-R⁴, m, n, p, q и X являются такими, как описано в настоящем документе. Выполняя этот прием, можно обойти получение промежуточного соединения 11а или 11b. Это превращение осуществляют с использованием, по меньшей мере, 2 эквивалентов R¹X или R⁴X, где Х является йодом, бромом или хлором. В одном варианте воплощения используют, по меньшей мере, 5 эквивалентов, по меньшей мере, 10 эквивалентов, по меньшей мере, 20 эквивалентов, по меньшей мере, 30 эквивалентов, по меньшей мере, 40 эквивалентов, по меньшей мере, 50 эквивалентов, по меньшей мере, 60 эквивалентов, по меньшей мере, 70 эквивалентов, по меньшей мере, 80 эквивалентов, по меньшей мере, 90 эквивалентов и, по меньшей мере, 100 эквивалентов R¹X или R⁴X. В другом варианте воплощения это превращение осуществляют с использованием алкилирующего агента. В следующем варианте воплощения это превращение осуществляют с использованием метилйодида, этилйодида, пропилйодида, бензилйодида, метилтрифлата, этилтрифлата, пропилтрифлата или метилбезилата.

Точно так же, на Схеме 4 изображено прямое превращение соединения 9b в соединение формулы (I-Q), где R¹ и R⁴ являются одинаковыми, и R¹-R⁴, p, q и X являются такими, как описано в настоящем документе. Это превращение осуществляют с использованием, по меньшей мере, 2 эквивалентов R¹X или R⁴X, где Х является йодом, бромом или хлором. В одном варианте воплощения это превращение осуществляют с использованием алкилирующего агента. В следующем варианте воплощения это превращение осуществляют с использованием метилйодида, этилйодида или пропилйодида.

Соединения формулы (I), где R¹-R⁴, m, n, p, q и X являются такими, как описано в настоящем документе, могут быть также получены по преобразованиям, указанным на Схеме 5. На первой стадии этой схемы происходит защита N-атома соединения 12а с образованием защищенного соединения 13а. В одном варианте воплощения N-атом соединения 12а защищают с использованием необязательно замещенной бензиловой или карбаматной группы. В другом варианте воплощения N-атом соединения 12а защищают бензилом, п-метоксибензилом или BOC. В следующем варианте воплощения N-атом соединения 12а защищают при помощи бензилгалогенида, такого как бензилбромид, п-метоксибензилбромид или boc-ангидрид. Затем соединение 13а превращают в хлорид 14а с использованием реагентов и приемов, известных в данной области. В одном варианте воплощения соединение 13а хлорируют при помощи тионилхлорида, оксихлорида фосфора, пентахлорида фосфора или комбинации четыреххлористого углерода и трифенилфосфина. Затем соединение 14а связывают с аминоинданом с образованием соединения 15а. В одном варианте воплощения соединение 14а связывают с аминоиндановым соединением 7а с образованием соединения 15а. Затем с N-атома соединения 15а снимают защиту, используя реагенты и приемы, стандартные в данной области. В одном варианте воплощения с N-атома снимают защиту при помощи формиата аммония, газообразного водорода в присутствии катализатора, такого как Pd-C, Pd(OH)₂, трифторуксусная кислота или диоксан-HCl. Желательно, чтобы снятие защиты осуществлялось при повышенных температурах для получения соединения 16а. Затем N-атом соединения 16а может быть замещен группой R¹ с использованием реагентов и приемов, известных специалистам в данной области, с образованием соединения 17а. В одном варианте воплощения N-атом соединения 16а замещают группой R¹ при помощи соответствующим образом замещенного альдегида или алкилгалогенида с образованием соединения 17а. В одном варианте воплощения N-атом соединения 16а может быть замещен группой R¹ с использованием формальдегида и NaCNBH₃. Затем соединение 17а может быть дополнительно замещено по N-атому группой R⁴ с образованием соединения формулы (I). В одном варианте воплощения дополнительным замещением является алкилирование. В другом варианте воплощения дополнительное замещение осуществляют с использованием алкилгалогенида, алкилтрифлата или алкилбезилата, такого как R⁴X, где Х является галогеном, таким как йод, хлор или бром, трифлатом или безилатом. В следующем варианте воплощения дополнительное замещение осуществляют с использованием 1-йодпропана, этилйодида, метилйодида, метилтрифлата, этилтрифлата, пропилтрифлата или метилбезилата.

Таким же образом, соединения формулы (I-P), где R¹-R⁴, p, q и X являются такими, как описано в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с преобразованиями, указанными на Схеме 6. Исходная стадия включает защиту N-атома пиперидин-2-метанола (12) с образованием защищенного (1-бензилпиперидин-2-ил)метанола (13). В одном варианте воплощения N-атом пиперидин-2-метанола защищают с использованием необязательно замещенной бензиловой группы. В другом варианте воплощения N-атом пиперидин-2-метанола защищают бензиловой группой. В следующем варианте воплощения N-атом пиперидин-2-метанола защищают с использованием бензилгалогенида, такого как бензилбромид. Затем (1-бензилпиперидин-2-ил)-метанол превращают в 1-бензил-2-(хлорметил)пиперидин (14) с использованием реагентов и приемов, известных в данной области. В одном варианте воплощения (1-бензилпиперидин-2-ил)-метанол хлорируют с использованием тионилхлорида. Затем соединение 14 связывают с аминоинданом с образованием соединения 15b. В одном варианте воплощения соединение 14 связывают с аминоинданом 7а с образованием соединения 15b. Затем с N-атома соединения 15b снимают защиту, используя реагенты и приемы, стандартные в данной области. В одном варианте воплощения с N-атома снимают защиту при помощи формиата аммония в присутствии катализатора, такого как Pd-C. Желательно, чтобы снятие защиты осуществлялось при повышенных температурах для получения соединения 16b. Затем N-атом соединения 16b может быть замещен группой R¹ с использованием реагентов и приемов, известных специалистам в данной области, с образованием соединения 17b. В одном варианте воплощения N-атом соединения 16b замещают группой R¹ при помощи соответствующим образом замещенного альдегида с образованием соединения 17b. В одном варианте воплощения N-атом соединения 16b может быть замещен группой R¹ с использованием формальдегида. Затем соединение 17b может быть дополнительно замещено по N-атому группой R⁴ с образованием соединения формулы (I-P). В одном варианте воплощения дополнительным замещением является алкилирование. В другом варианте воплощения дополнительное замещение осуществляют с использованием алкилгалогенида, такого как R⁴X, где Х является йодом, хлором или бромом. В следующем варианте воплощения дополнительное замещение осуществляют с использованием 1-йодпропана.

На Схеме 7 изображен вариант воплощения, по которому из соединения 9d образуется соединение формулы (I-R), то есть соединение формулы (I), где R³ является F, p равен 1, и R¹ и R⁴являются одинаковыми, и R¹, R², R⁴, n, p и X являются такими, как описано в настоящем документе. На этой схеме соединение 9d замещено группой R¹ или R⁴ у N-атома. В одном варианте воплощения с соединением 9d реагирует, по меньшей мере, 2 эквивалента R¹X или R⁴X, где Х является уходящей группой, такой как йод, хлор, бром, трифлат или безилат. В другом варианте воплощения с соединением 9d реагирует, по меньшей мере, 2 эквивалента алкилгалогенида. В следующем варианте воплощения с соединением 9d реагирует, по меньшей мере, 2 эквивалента метилйодида, этилйодида, пропилйодида, метилтрифлата, этилтрифлата или пропилтрифлата.

На Схеме 8 представлен конспект получения из соединения 9е соединения формулы (I-S), где R¹, R², R⁴, p и X являются такими, как определено в настоящем документе. На этой схеме соединение 9е замещено группой R¹ или R⁴ у N-атома. В одном варианте воплощения с соединением 9е реагирует, по меньшей мере, 2 эквивалента R¹X или R⁴X, где Х является уходящей группой, такой как йод, хлор или бром. В другом варианте воплощения с соединением 9е реагирует, по меньшей мере, 2 эквивалента алкилгалогенида. В следующем варианте воплощения с соединением 9е реагирует, по меньшей мере, 2 эквивалента метилйодида, этилйодида или пропилйодида.

На Схеме 9 представлен альтернативный путь к соединению формулы (I), где R¹ и R⁴ являются одинаковыми или различными, и R¹-R⁴, m, n, p, q и X являются такими, как описано в настоящем документе, с использованием реагента 18а. В частности, соединение 7а реагирует с соединением 18а с образованием соединения 17а. В одном варианте воплощения реакцию между соединениями 7а и 18а осуществляют в присутствии амида натрия, трет-бутоксида калия, трет-бутоксида натрия или бутиллития. Затем может быть выполнено замещение N-атома группой R⁴ для получения соединения формулы (I). В одном варианте воплощения замещение R⁴ является алкилированием по N-атому. В другом варианте воплощения замещение R⁴ осуществляют с использованием R⁴X, где Х является уходящей группой, такой как йод, хлор или бром. В следующем варианте воплощения замещение R⁴ осуществляют с использованием алкилгалогенида, такого как метилйодид, этилйодид или пропилйодид. Выполнение этих приемов дает соединение формулы (I).

На Схеме 10 представлен альтернативный путь к соединению формулы (I-T), где R¹ и R⁴ являются одинаковыми или различными, и R¹-R⁴, p, q и X являются такими, как описано в настоящем документе, с использованием реагента 18b. В частности, соединение 7а реагирует с соединением 18b с образованием соединения 17c. В одном варианте воплощения реакцию между соединениями 7а и 18b осуществляют в присутствии амида натрия. Затем может быть выполнено замещение N-атома группой R⁴ для получения соединения формулы (I-T). В одном варианте воплощения замещение R⁴ является алкилированием по N-атому. В другом варианте воплощения замещение R⁴ осуществляют с использованием R⁴X, где Х является уходящей группой, такой как йод, бром или хлор. В следующем варианте воплощения замещение R⁴ осуществляют с использованием алкилгалогенида, такого как метилйодид, этилйодид или пропилйодид. Выполнение этих приемов дает соединение формулы (I-T).

На Схеме 11 представлено получение соединения формулы (I-U), где R¹ и являются одинаковыми, и R², R³, X, n, p и q являются такими, как описано в настоящем документе, с использованием реагента 20а. В частности, соединение 20а восстанавливают в присутствии кислоты с образованием соединения 21а. В одном варианте воплощения это восстановление осуществляют с использованием стандартных реагентов и условий, таких как газообразный водород в присутствии катализатора. В одном варианте воплощения катализатором является PtO₂. Затем соединение 20а защищают при помощи соответствующей защитной группы с образованием соединения 22а. В одном варианте воплощения защитной группой является бензиловая группа. В другом варианте воплощения соединение 22а получают с использованием бензилгалогенида, такого как бензилбромид или п-метоксибензилбромид. Затем соединение 22а окисляют с образованием соответствующего альдегида 23а. Это окисление осуществляют с использованием реагентов и условий, известных специалистам в данной области. В одном варианте воплощения окисление осуществляют с использованием оксалилхлорида, диметилсульфоксида (ДМСО) и триэтиламина. Затем соединение 23а связывают с аминоинданом 7b с образованием соединения 24а. Эту реакцию обычно выполняют в присутствии триацетоксиборгидрида натрия. Затем атом азота аминоиндана замещают R³-замещенной фениловой группой. В одном варианте воплощения замещение выполняют при помощи бромбензола. В другом варианте воплощения замещение выполняют в присутствии каталитических реагентов, таких как трет-бутоксид, таких как трет-бутоксид калия, натрия или лития, фосфатного агента, такого как 2-дициклогексилфосфино-2'-(N,N-диметиламино)бифенил (DavePhos), и палладиевого реагента, такого как Pd₂(dba)₃. Затем бензиловую группу соединения 25а удаляют при помощи стандартных агентов снятия защиты. В одном варианте воплощения соединение 25а превращают в соединение 26а с использованием формиата аммония и палладиевого катализатора, такого как Pd/C или Pd(OH)₂. Затем соединение 26а замещают группой R¹/R⁴ при помощи алкилирующего агента с образованием соединения (I-U). В одном варианте воплощения алкилирующим агентом является алкилгалогенид, алкилтрифлат или алкилбезилат. В следующем варианте воплощения алкилирующим агентом является 1-йодпропан, этилйодид, метилйодид, метилтрифлат, этилтрифлат, пропилтрифлат или метилбезилат, среди прочих.

На Схеме 12 представлен синтез соединения (I-UU), где R¹-R⁴, X, p и q являются такими, как описано в настоящем документе, исходя из пиридин-2-пропанола (20). В частности, соединение 20 восстанавливают при помощи газообразного водорода в присутствии PtO₂и хлороводородной кислоты с образованием 3-циклогексил-пропан-1-ола гидрохлорида (21). Затем соединение 21 защищают бензиловой группой, используя бензилбромид, с образованием 3-(1-бензил-пиперидин-2-ил)-пропан-1-ола (22). Затем соединение 22 окисляют с образованием соответствующего 3-(1-бензил-пиперидин-2-ил)пропиональдегида (23), используя оксалилхлорид, ДМСО и триэтиламин. Затем соединение 23 связывают с аминоинданом 7b с образованием соединения 24b, и эту реакцию выполняют в присутствии триацетоксиборгидрида натрия. Затем атом азота аминоинданового фрагмента замещают фениловой группой при помощи бромбензола, трет-бутоксида калия, DavePhos и Pd₂(dba)₃ для получения соединения 25b. Затем бензиловую группу соединения 25а удаляют, используя стандартные реагенты для снятия защиты, такие как формиат аммония, с образованием соединения 26а. Соединение 26а алкилируют для получения соединения (I-UU). В одном варианте воплощения алкилирующим агентом является алкилгалогенид, алкилтрифлат или алкилбезилат, такой как 1-йодпропан, этилйодид, метилйодид, метилтрифлат, этилтрифлат, пропилтрифлат или метилбезилат, среди прочих.

На Схеме 13 изображено получение соединения формулы (I-V), где R¹ и R⁴ являются одинаковыми, и R¹-R⁴, X, p и q являются такими, как описано в настоящем документе. На этой схеме Boc-защищенную кислоту 1а превращают в соответствующий сложный эфир 2а путем метилирования кислотного фрагмента. В одном варианте воплощения соединение 1а взаимодействует с метилирующим агентом с образованием соединения 2а. В другом варианте воплощения соединение 1а реагирует с метилйодидом, метилтрифлатом или метилбезилатом, среди прочих. Затем сложный эфир 2а превращают в бензиламин 4а. В одном варианте воплощения это превращение осуществляют с использованием трифторуксусной кислоты, а затем бензилбромида. Соединение 4а затем восстанавливают до соответствующего спирта 5а. В одном варианте воплощения восстановление выполняют при помощи DIBAL-H или LAH. Затем спирт 5а превращают в соответствующий альдегид 23а, используя окислитель. В одном варианте воплощения окислителем является оксалилхлорид, ДМСО и триэтиламин. Затем соединение 23а связывают с замещенным аминоинданом 7b образованием соединения 24с. В одном варианте воплощения соединение 23а связывают с аминоинданом 7b в присутствии триацетоксиборгидрида натрия. Затем N-атом соединения 24с замещают необязательно замещенной фениловой группой с образованием соединения 8с. В одном варианте воплощения N-атом соединения 8с замещают бромбензолом. Затем бензиловую группу соединения 8с удаляют гидрированием с образованием соединения 9f. В одном варианте воплощения гидрирование осуществляют с использованием формиата аммония, газообразного водорода и Pd/C или Pd(OH)₂. N-атом гетероциклического кольца соединения 9f затем замещают с образованием соединения (I-V). В одном варианте воплощения это замещение осуществляют с использованием алкилирующего агента. В следующем варианте воплощения это замещение выполняют с использованием алкилгалогенида, алкилтрифлата или алкилбезилата. В следующем варианте воплощения это замещение осуществляют с использованием 1-йодпропана, этилйодида, метилйодида, метилтрифлата, этилтрифлата, пропилтрифлата или метилбезилата, среди прочих. В другом варианте воплощения это замещение осуществляют, используя, по меньшей мере, 2 эквивалента алкилирующего агента.

На Схеме 14 представлен синтез соединения формулы (I-VV), где R¹-R⁴, X, p и q являются такими, как описано в настоящем документе. На этой схеме Boc-пирролидин-2-карбоновую кислоту (1с) превращают в 2-метиловый эфир 1-трет-бутилового эфира пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (2d) путем метилирования кислотного фрагмента при помощи метилйодида, метилтрифлата или метилбезилата, среди прочих. Затем сложный эфир 2d превращают в метиловый эфир 1-бензил-пирролидин-2-карбоновой кислоты (4с), используя трифторуксусную кислоту, а затем бензилбромид. Затем соединение 4с восстанавливают до соответствующего (1-бензил-пирролидин-2-ил)-метанола (5с), используя DIBAL-H или LAH. Затем спирт 5с преобразуют в соответствующий 1-бензил-пирролидин-2-карбальдегид (23b), используя окислитель. В одном варианте воплощения окислителем является оксалилхлорид, ДМСО и триэтиламин. Затем соединение 23b связывают с замещенным аминоинданом 7b с образованием соединения 24d. В одном варианте воплощения соединение 23b связывают с аминоинданом 7b в присутствии триацетоксиборгидрида натрия. Затем N-атом соединения 24d замещают фениловой группой с образованием соединения 8d. В одном варианте воплощения замещение N-атома соединения 24d осуществляется при помощи бромбензола. Затем бензиловую группу соединения 8d удаляют гидрированием с образованием соединения 9g. В одном варианте воплощения гидрирование осуществляют с использованием формиата аммония, газообразного водорода и Pd/C или Pd(OH)₂. N-атом гетероциклического кольца соединения 9g затем алкилируют при помощи алкилгалогенида, алкилтрифлата или алкилбезилата с образованием соединения формулы (I-VV). В одном варианте воплощения это замещение осуществляют с использованием 1-йодпропана, этилйодида, метилйодида, метилтрифлата, этилтрифлата, пропилтрифлата или метилбезилата, среди прочих. В другом варианте воплощения это замещение осуществляют, используя, по меньшей мере, 2 эквивалента алкилирующего агента.

В другом аспекте получены соединения формулы (I-W), где R¹-R⁴, А, X, m, q и p описаны в настоящем документе. На этой схеме кислоту 1а превращают в соответствующий сложный эфир 2b, как описано на Схеме 1. Сложный эфир 2b затем восстанавливают до соответствующего спирта 37а, используя соответствующий восстановитель. В одном варианте воплощения восстановителем является гидридный агент, такой как лития-алюминия гидрид или DIBAL-H. Затем спирт 37а окисляют с образованием альдегида 38а. Это окисление может быть выполнено с использованием реагентов и условий, известных специалистам в данной области. В одном варианте воплощения окисление осуществляют с использованием оксалилхлорида, ДМСО и триэтиламина. Затем соединение 38а связывают с аминоинданом 7b с образованием соединения 39а. Эта реакция может быть осуществлена в присутствии мягкого восстановителя, такого как триацетоксиборгидрид натрия. Затем атом азота соединения 39а замещают группой A-(R³)_q с образованием соединения 40а. В одном варианте воплощения соединение 39а замещают необязательно замещенной фениловой группой. В другом варианте воплощения соединение 39а замещают необязательно замещенным гетероарилом. В следующем варианте воплощения замещение выполняют при помощи бромбензола. В другом варианте воплощения замещение выполняют в присутствии каталитических реагентов, таких как трет-бутоксид, таких как трет-бутоксид калия, натрия или лития, фосфатного агента, такого как DavePhos, и палладиевого реагента, такого как Pd₂(dba)₃. Затем трет-бутоксикарбонильную группу соединения 40а удаляют при помощи стандартных агентов снятия защиты. В одном варианте воплощения соединение 40а превращают в соединение 41а, используя кислотную среду, такую как диоксан-HCl или трифторуксусная кислота. Затем соединение 41а замещают группой R¹/R⁴, где R¹ и R⁴ являются одинаковыми, используя алкилирующий агент, с образованием соединения (I-W), как описано для Схемы 1.

На Схеме 16 представлено получение соединений формулы (I-WW), где R¹-R⁴, А, p, q и Х являются такими, как описано в настоящем документе. На этой схеме 1-трет-бутиловый эфир пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (1с) превращают в соответствующий трет-бутиловый эфир 2-метоксикарбонилметилпирролидин-1-карбоновой кислоты (2е). В одном варианте воплощения трет-бутиловый эфир 2-метоксикарбонилметилпирролидин-1-карбоновой кислоты получают с использованием хлорформиата, диазометана и бензоата серебра. Затем трет-бутиловый эфир 2-метоксикарбонилметилпирролидин-1-карбоновой кислоты (2е) восстанавливают до трет-бутилового эфира 2-(2-гидроксиэтил)пирролидин-1-карбоновой кислоты (37), используя восстановитель. В одном варианте воплощения восстановителем является гидридный агент, такой как лития-алюминия гидрид. Затем соединение 37 окисляют с образованием трет-бутилового эфира 2-(2-оксоэтил)пирролидин-1-карбоновой кислоты (38). Это окисление выполняют при помощи оксалилхлорида, ДМСО и триэтиламина. Затем соединение 38 связывают с аминоинданом 7b с образованием соединения 39b. Эта реакция может быть выполнена в присутствии триацетоксиборгидрида натрия. Затем атом азота соединения 39b замещают группой A-(R³)_q с образованием соединения 40b. В другом варианте воплощения замещение выполняют при помощи бромбензола, необязательно в присутствии каталитических реагентов, таких как трет-бутоксид, таких как трет-бутоксид калия, натрия или лития, фосфатного агента, такого как DavePhos, и палладиевого реагента, такого как Pd₂(dba)₃. Затем трет-бутоксикарбонильную группу соединения 40b удаляют с использованием диоксана-HCl или трифторуксусной кислоты, с образованием соединения 41b. Затем соединение 41b замещают группой R¹/R⁴, используя алкилирующий агент, такой как алкилгалогенид, с образованием соединения (I-WW).

На Схеме 17 представлен второй способ получения соединения формулы (I-W), где R¹ и R⁴ являются одинаковыми, и R¹-R⁴, А, m, p, q и X являются такими, как описано в настоящем документе. В частности, атом азота соединения 12b защищают с образованием соединения 37а. В одном варианте воплощения атом азота защищают защитной группой, такой как трет-бутоксикарбонильная группа. Затем соединение 37а окисляют с образованием соответствующего альдегида 38а. Это окисление осуществляют с использованием реагентов и условий, известных специалистам в данной области. В одном варианте воплощения окисление осуществляют с использованием оксалилхлорида, ДМСО и триэтиламина. Затем соединение 38а связывают с аминоинданом 7b образованием соединения 39а. Эта реакция может быть, как правило, осуществлена в присутствии мягкого восстановителя, такого как триацетоксиборгидрид натрия. Затем атом азота соединения 39а замещают группой A-(R³)_q с образованием соединения 40а. В одном варианте воплощения соединение 39а замещают необязательно замещенной фениловой группой. В другом варианте воплощения соединение 39а замещают необязательно замещенным гетероарилом. В следующем варианте воплощения это замещение выполняют при помощи бромбензола или бромпиридина, такого как 2-бром-пиридин, 3-бром-пиридин или 4-бром-пиридин. В другом варианте воплощения замещение выполняют в присутствии каталитических реагентов, таких как трет-бутоксид, таких как трет-бутоксид калия, натрия или лития, фосфинового катализатора, такого как P(i-BuNCH₂CH₂)₃N, и палладиевого реагента, такого как Pd₂(dba)₃. Затем защитную группу, то есть трет-бутоксикарбонильную группу, соединения 40а удаляют при помощи стандартных реагентов снятия защиты с образованием соединения 41а. В одном варианте воплощения снятие защиты осуществляют с использованием кислотной среды, такой как диоксан-HCl или трифторуксусная кислота. Затем соединение 26а замещают группой R¹/R⁴, где R¹ и R⁴ являются одинаковыми, используя алкилирующий агент, с образованием соединения (I-W). В одном варианте воплощения алкилирующим агентом является алкилгалогенид, алкилтрифлат или алкилбезилат. В следующем варианте воплощения алкилирующим агентом является 1-йодпропан, этилйодид, метилйодид, метилтрифлат, этилтрифлат, пропилтрифлат или метилбезилат, среди прочих.

На Схеме 18 представлено получение соединения формулы (I-WWW), где R¹ и R⁴ являются одинаковыми, и R¹-R⁴, А, p, q и X являются такими, как описано в настоящем документе. В частности, атом азота пиперидин-2-этанола (12с) защищают трет-бутоксикарбонильной группой с образованием трет-бутилового эфира 2-(2-гидроксиэтил)пиперидин-1-карбоновой кислоты (37b). Затем соединение 37b окисляют с образованием трет-бутилового эфира 2-(2-оксоэтил)пиперидин-1-карбоновой кислоты (38b). В одном варианте воплощения окисление выполняют при помощи оксалилхлорида, ДМСО и триэтиламина. Затем соединение 38b связывают с аминоинданом 7b с образованием соединения 39c. Эту реакцию обычно выполняют в присутствии триацетоксиборгидрида натрия. Затем атом азота соединения 39с замещают группой A-(R³)_q с образованием соединения 40с. В одном варианте воплощения это замещение осуществляют с использованием необязательно замещенного фенила. В другом варианте воплощения это замещение осуществляют с использованием необязательно замещенного гетероарила. В следующем варианте воплощения это замещение выполняют при помощи бромбензола или бромпиридина, такого как 2-бром-пиридин, 3-бром-пиридин или 4-бром-пиридин. В другом варианте воплощения замещение выполняют в присутствии каталитических реагентов, таких как трет-бутоксид, таких как трет-бутоксид калия, натрия или лития, фосфинового катализатора, такого как P(i-BuNCH₂CH₂)₃N, и палладиевого реагента, такого как Pd₂(dba)₃. Затем защитную группу, то есть трет-бутоксикарбонильную группу, соединения 40с удаляют при помощи стандартных реагентов снятия защиты с образованием соединения 41с. В одном варианте воплощения снятие защиты осуществляют с использованием кислотной среды, такой как диоксан-HCl или трифторуксусная кислота. Затем соединение 41с замещают группой R¹/R⁴, где R¹ и R⁴ являются одинаковыми, используя алкилирующий агент, с образованием соединения (I-WWW). В одном варианте воплощения алкилирующим агентом является алкилгалогенид, алкилтрифлат или алкилбезилат. В следующем варианте воплощения алкилирующим агентом является 1-йодпропан, этилйодид, метилйодид, метилтрифлат, этилтрифлат, пропилтрифлат или метилбезилат, среди прочих.

На Схеме 19 представлен третий способ получения соединения (I-W), где R¹-R⁴, A, m, p, q и X являются такими, как описано в настоящем документе, через соединение 39а, которое может быть получено так, как описано в настоящем документе. Атом азота соединения 39а замещают группой A-(R³)_q с образованием соединения 40а. В одном варианте воплощения соединение 39а замещают необязательно замещенным фенилом. В другом варианте воплощения соединение 39а замещают необязательно замещенным гетероарилом. В следующем варианте воплощения замещение выполняют при помощи бромбензола, бромпиридина или бромпиримидина. В другом варианте воплощения замещение выполняют в присутствии каталитических реагентов, таких как трет-бутоксид, таких как трет-бутоксид калия, натрия или лития, фосфинового катализатора, такого как P(i-BuNCH₂CH₂)₃N, или сильного основания, такого как супероснование Веркаде, и палладиевого реагента, такого как Pd₂(dba)₃. Затем защитную группу, то есть трет-бутоксикарбонильную группу, соединения 40а удаляют при помощи стандартных реагентов снятия защиты с образованием соединения 41а. В одном варианте воплощения снятие защиты осуществляют с использованием кислотной среды, такой как диоксан-HCl или трифторуксусная кислота. Затем соединение 41а замещают группой R¹/R⁴, где R¹ и R⁴ являются одинаковыми, используя алкилирующий агент, с образованием соединения (I-W). В одном варианте воплощения алкилирующим агентом является алкилгалогенид, алкилтрифлат или алкилбезилат. В следующем варианте воплощения алкилирующим агентом является 1-йодпропан, этилйодид, метилйодид, метилтрифлат, этилтрифлат, пропилтрифлат или метилбезилат, среди прочих.

На Схеме 20 представлено другое получение соединения (I-WWW), где R¹-R⁴, A, p, q и X являются такими, как описано в настоящем документе, через соединение 39с, при этом атом азота соединения 39с замещают группой A-(R³)_q с образованием соединения 40с. В одном варианте воплощения замещение выполняют при помощи бромбензола, бромпиридина или бромпиримидина. В следующем варианте воплощения это замещение выполняют в присутствии трет-бутоксида натрия, P(i-BuNCH₂CH₂)₃N и Pd₂(dba)₃. Затем защитную группу, то есть трет-бутоксикарбонильную группу, соединения 40с удаляют при помощи стандартных реагентов снятия защиты с образованием соединения 48а. В одном варианте воплощения снятие защиты выполняют при помощи диоксана-HCl или трифторуксусной кислоты. Затем соединение 48а замещают группой R¹/R⁴, где R¹ и R⁴ являются одинаковыми, используя алкилирующий агент, с образованием соединения (I-WWW). В одном варианте воплощения алкилирующим агентом является алкилгалогенид, такой как 1-йодпропан, этилйодид, метилйодид, метилтрифлат, этилтрифлат, пропилтрифлат или метилбезилат, среди прочих.

На Схеме 21 представлено следующее получение соединения (I-WWW), где R¹-R⁴, А, m, p, q и Х являются такими, как описано в настоящем документе. В частности, атом азота соединения 12b защищают с образованием соединения 5а. В одном варианте воплощения атом азота защищают защитной группой, такой как бензиловая группа, используя реагент, такой как бензилбромид. Затем соединение 5а окисляют с образованием соответствующего альдегида 23с. Это окисление осуществляют с использованием реагентов и условий, известных специалистам в данной области. В одном варианте воплощения окисление осуществляют с использованием окислителя, такого как оксалилхлорид/ДМСО, и сильного основания, такого как триэтиламин. Затем соединение 23с связывают с аминоинданом 7b с образованием соединения 24f. Эту реакцию обычно осуществляют в присутствии мягкого восстановителя, такого как триацетоксиборгидрид натрия. Затем атом азота соединения 24f замещают группой A-(R³)_q с образованием соединения 8е. В одном варианте воплощения соединение 24f замещают необязательно замещенным фенилом. В другом варианте воплощения соединение 24f замещают необязательно замещенным гетероарилом. В следующем варианте воплощения это замещение выполняют при помощи бром-ариловой или бром-гетероциклической группы. В другом варианте воплощения замещение выполняют при помощи бромбензола, бромпиридина или бромтиазола. В другом варианте воплощения замещение выполняют в присутствии каталитических реагентов, таких как трет-бутоксид, таких как трет-бутоксид калия, натрия или лития, основания, такого как супероснование Веркаде, и палладиевого реагента, такого как Pd₂(dba)₃. Затем защитную группу, то есть бензильную группу, соединения 8е удаляют при помощи стандартных реагентов снятия защиты с образованием соединения 41а. В одном варианте воплощения снятие защиты выполняют при помощи изобутил хлорформиата. Затем соединение 41а замещают группой R¹с образованием соединения 61с. В одном варианте воплощения замещение группой R¹ является алкилированием. В другом варианте воплощения алкилирование выполняют с использованием альдегида, такого как пропанальдегид, ацетальдегид или формальдегид. Затем соединение 61с замещают группой R⁴ при помощи алкилирующего агента. В одном варианте воплощения алкилирующим агентом является алкилгалогенид, алкилтрифлат или алкилбезилат. В следующем варианте воплощения алкилирующим агентом является 1-йодпропан, этилйодид, метилйодид, метилтрифлат, этилтрифлат, пропилтрифлат или метилбезилат, среди прочих.

На Схеме 22 представлено другое получение соединения (I-WWW), где R¹-R⁴, А, Х, p и q являются такими, как описано в настоящем документе. В частности, атом азота пиперидин-2-этанола (12с) защищают с образованием 2-(1-бензилпиперидин-2-ил)этанола (5). В одном варианте воплощения атом азота защищают бензиловой группой, используя бензилбромид. Затем 2-(1-бензилпиперидин-2-ил)этанол окисляют с образованием (1-бензилпиперидин-2-ил)ацетальдегида (23с). В одном варианте воплощения окисление выполняют при помощи оксалилхлорида, ДМСО и триэтиламина. Затем (1-бензилпиперидин-2-ил)ацетальдегид связывают с аминоинданом 7b с образованием соединения 24е. В одном варианте воплощения эту реакцию выполняют в присутствии триацетоксиборгидрида натрия. Затем атом азота соединения 24е замещают группой A-(R³)_q с образованием соединения 8f. В одном варианте воплощения замещение выполняют при помощи бромбензола, бромпиридина или бромтиазола, каталитического реагента, такого как трет-бутоксид, такой как трет-бутоксид калия, натрия или лития, основания, такого как супероснование Веркаде, и палладиевого реагента, такого как Pd₂(dba)₃. Затем защитную группу, то есть бензиловую группу, соединения 8f удаляют при помощи изобутил хлорформиата. Затем соединение 41с замещают группой R¹с образованием соединения 61d. В одном варианте воплощения замещение группой R¹ выполняют с использованием альдегида, такого как пропиональдегид, ацетальдегид или формальдегид. Затем соединение 61d замещают группой R⁴, используя алкилирующий агент, такой как алкилгалогенид, алкилтрифлат или алкилбезилат, с образованием соединения (I-WWW).

На Схеме 23 представлен синтез соединения, в котором R¹ и R⁴ объединены, а R², R³, A, m, p, q, Y и X являются такими, как описано в настоящем документе, то есть соединения (I-Y). В частности, атом азота соединения 41а может быть замещен необязательно замещенной группой -CH₂YCH₂- с образованием соединения формулы (I-Y). В одном варианте воплощения R¹ и R⁴ объединяются с образованием карбоцикла, то есть где Y является атомом углерода. В другом варианте воплощения R¹ и R⁴ объединяются с образованием гетероциклического кольца. В следующем варианте воплощения R¹ и R⁴ объединяются с образованием циклического простого эфира. В следующем варианте воплощения замещение атома азота выполняют при помощи 1-гало-2-(2-хлоралкокси)алкана, такого как 1-хлор-2-(2-хлорэтокси)этан.

На Схеме 24 представлен синтез соединения, то есть соединения (I-YY), в котором R¹ и R⁴ объединены с образованием гетероциклического кольца, а R², R³, A, p, q и X являются такими, как описано в настоящем документе. В одном варианте воплощения R¹ и R⁴ объединяются с образованием циклического простого эфира. В следующем варианте воплощения алкилирование атома азота выполняют при помощи 1-гало-2-(2-хлоралкокси)алкана, такого как 1-хлор-2-(2-хлорэтокси)этан.

На Схеме 25 представлено получение соединений формулы (I), где R¹-R⁴, А, m, n, p, q и Х являются такими, как описано в настоящем документе. Эти соединения получают, в первую очередь, аминируя кетон 70а с образованием соединения 7с. В одном варианте воплощения кетон 70а аминируют при помощи первичного амина. В другом варианте воплощения кетон 70а аминируют при помощи H₂N-A-(R³)_q. Это преобразование осуществляют в присутствии мягкого восстановителя, такого как Na(OAc)₃BH. Затем соединение 7с связывают с амином 58а с образованием соединения 8f. Уходящая группа амина 58а может быть выбрана специалистом в данной области. В одном варианте воплощения уходящей группой является галоген, мезилат, тозилат или трифлат. В другом варианте воплощения связывание соединений 7с и 58а осуществляют с использованием алкоксида, такого как алкоксиды, описанные выше. Затем с соединения 8f снимают защиту удалением бензиловой группы, используя приемы и реагенты, известные в данной области, с образованием соединения 9h. В одном варианте воплощения снятие защиты выполняют гидрированием. В другом варианте воплощения гидрирование выполняют с использованием формиата аммония, газообразного водорода и Pd/C или Pd(OH)₂. Затем кольцевой атом азота последовательно замещают группами R¹ и R⁴, используя реагенты и условия, описанные выше, например, в соответствии с описаниями для Схем 1-24, с образованием соединений 61а и (I), соответственно.

На Схеме 26 представлено получение соединений формулы (I-WWWW), где R¹-R⁴, p, q и Х являются такими, как описано в настоящем документе. Эти соединения получают аминированием кетона 70а с образованием соединения 7d. В одном варианте воплощения кетон 70а аминируют, используя первичный амин 71а в присутствии мягкого восстановителя, такого как Na(OAc)₃BH. Затем соединение 7d связывают с амином 58 в присутствии алкоксида с образованием соединения 8е. Затем с соединения 8е снимают защиту путем гидрирования с образованием соединения 9i. Затем кольцевой атом азота соединения 9i последовательно замещают группами R¹ и R⁴, используя реагенты и условия, описанные выше, с образованием соединений 61b и (I-WWWW), соответственно.

На Схеме 27 представлен альтернативный путь к соединению (I-Z), где R¹-R³, А, m, p, q и Х являются такими, как описано в настоящем документе, через соединение 40а. Соединение 37а может быть получено так, как описано в публикации Tetrahedran, 2007, 63:3000-3005, которая включена в настоящий документ путем ссылки, а затем его окисляют с образованием соединения 38а. Это окисление может быть выполнено с использованием окислителя, такого как гипохлорит натрия, и катализатора 2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-ил)оксиданил (TEMPO). Затем получают соединение 40а добавлением соединения 38а к раствору соединения 7с и Na(OAc)₃BH. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что такой порядок добавления приводит к получению соединения 40а с высоким энантиомерным избытком (э.и.). Затем с соединения 40а снимают защиту путем восстановления BOC-группы, используя стандартные восстановители, с образованием диамина 41с. В одном варианте воплощения BOC-группу восстанавливают до метиловой группы, используя лития-алюминия гидрид. Затем атом азота соединения 41с замещают группой R¹, как описано выше для других R¹/R⁴ замещений, с образованием соединения формулы (I-Z). В одном варианте воплощения алкилирование выполняют с использованием алкилгалогенида, такого как метилбромид или метилйодид, в растворителе, таком как дихлорэтан или метил-трет-бутиловый эфир. Этот способ может быть также использован для получения (S)-энантиомера соединения (I-Z).

В одном варианте воплощения представлен способ получения соединения формулы (I), где А является фенилом, который включает (i) превращение

в ; (ii) превращение соединения 2a в (iii) восстановление соединения 4a до ; (iv) хлорирование соединения 5a с образованием (v) связывание соединения 6a с с образованием

; (vi) удаление бензильной группы соединения 8a путем гидрирования с образованием ; (vii) замещение соединения 9a группой R¹ с образованием ; и (viii) замещение соединения 11a группой R⁴.

В другом варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где А является фенилом, который включает (i) превращение

в ; (ii) превращение соединения 2a в ; (iii) восстановление соединения 4a до (iv) хлорирование соединения 5a с образованием (v) связывание соединения 6a с с образованием (vi) удаление бензиловой группы соединения 8a путем гидрирования с образованием (vii) замещение соединения 9a группой R¹ с образованием и (viii) замещение соединения 11a группой R⁴.

В следующем варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где А является фенилом, который включает замещение группами R¹ и R⁴

В одном аспекте соединением 9c является

В другом варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где А является фенилом, который включает (i) защиту атома азота

с образованием (ii) хлорирование соединения 13a с образованием (iii) связывание соединения 14a с с образованием (iv) снятие защиты с соединения 15a с образованием (v) замещение соединения 16a группой R¹ с образованием и (vi) замещение соединения 17a группой R⁴.

В следующем варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где А является фенилом, который включает (i) защиту атома азота пиперидин-2-метанола с образованием

(ii) хлорирование соединения 13a с образованием (iii) связывание соединения 14a с с образованием (iv) снятие защиты с соединения 15a с образованием (v) замещение соединения 16a группой R¹ с образованием и (vi) замещение соединения 17a группой R⁴.

В другом варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где А является фенилом, R³ является 2-F, m равен 2, и q равен 1, который включает замещение группами R¹ и R⁴

В одном аспекте соединением 9d является

В следующем варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где А является фенилом, который включает (i) связывание

и с образованием и (ii) замещение соединения 17a группой R⁴.

В другом варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где А является фенилом, который включает (i) связывание

и с образованием и (ii) замещение соединения 17a группой R⁴.

В следующем варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где m равен 3, который включает (i) восстановление

с использованием кислоты с образованием (ii) защиту соединения 21a бензиловой группой с образованием (iii) окисление соединения 22a с образованием (iv) связывание соединения 23a с с образованием (v) замещение атома азота соединения 24a R³-замещенной фениловой группой с образованием (vi) снятие защиты с соединения 25a с образованием и (vii) замещение соединения 26a группами R¹ и R⁴.

В следующем варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где m равен 3, который включает (i) восстановление

с использованием кислоты с образованием (ii) защиту соединения 21a бензиловой группой с образованием (iii) окисление соединения 22a с образованием (iv) связывание соединения 23a с с образованием (v) замещение атома азота соединения 24a R³-замещенной фениловой группой с образованием (vi) снятие защиты с соединения 25a с образованием и (vii) замещение соединения 26a группами R¹ и R⁴.

В другом варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где А является фенилом, который включает (i) превращение

в (ii) превращение соединения 2a в (iii) восстановление соединения 4a до (iv) окисление соединения 5a с образованием (v) связывание соединения 23a с с образованием (v) замещение атома азота соединения 24c R³-замещенной фениловой группой с образованием (vi) снятие защиты с соединения 8c с образованием и (vii) замещение кольцевого азота группами R¹ и R⁴.

В другом варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где А является фенилом, который включает (i) превращение

в (ii) превращение соединения 2с в (iii) восстановление соединения 4с до (iv) окисление соединения 5с с образованием (v) связывание соединения 23a с с образованием (v) замещение атома азота соединения 24c R³-замещенной фениловой группой с образованием (vi) снятие защиты с соединения 8c с образованием и (vii) замещение кольцевого азота группами R¹ и R⁴.

В следующем варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, который включает (i) превращение

в (ii) восстановление соединения 2b до (iii) окисление соединения 37a до (iv) связывание соединения 38a с до (v) связывание соединения 39a с группой A-(R³)_q с образованием (vi) снятие защиты с соединения 40a с образованием и (vii) замещение соединения 41a группами R¹ и R⁴.

В следующем варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, который включает (i) превращение

в (ii) восстановление соединения 2b до (iii) окисление соединения 37a до (iv) связывание соединения 38a с в (v) связывание соединения 39a с группой A-(R³)_q с образованием (vi) снятие защиты с соединения 40a с образованием и (vii) замещение соединения 41a группами R¹ и R⁴.

В другом варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, который включает (i) BOC-защиту

с образованием (ii) окисление соединения 37a с образованием (iii) связывание соединения 38a с с образованием (iv) замещение соединения 39a группой A-(R³)_q с образованием (v) снятие защиты с соединения 40a с образованием и (vi) замещение соединения 41a группами R¹ и R⁴.

В другом варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где n равен 2, который включает (i) замещение

группой A-(R³)_q с образованием (ii) снятие защиты с соединения 40a с образованием и (iii) замещение соединения 41a группами R¹ и R⁴.

В другом варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где n равен 2, который включает (i) замещение

группой A-(R³)_q с образованием (ii) снятие защиты с соединения 40a с образованием и (iii) замещение соединения 41a группами R¹ и R⁴.

В следующем варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, который включает (i) защиту

с образованием (ii) окисление соединения 5a с образованием (iii) связывание соединения 23a с с образованием (iv) замещение соединения 24f группой A-(R³)_q с образованием (v) снятие защиты с соединения 8е с образованием (vi) замещение соединения 41a группой R¹ с образованием и (vii) замещение соединения 61с группой R⁴.

В следующем варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где n равен 2, который включает (i) замещение

группой A-(R³)_q с образованием (ii) снятие защиты с соединения 40a с образованием и (iii) замещение соединения 41a группами R¹ и R⁴.

В следующем варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, который включает (i) защиту

с образованием (ii) окисление соединения 5a с образованием (iii) связывание соединения 23a с с образованием (iv) замещение соединения 24f группой A-(R³)_q с образованием (v) снятие защиты с соединения 8е с образованием (vi) замещение соединения 41a группой R¹ с образованием и (vii) замещение соединения 61с группой R⁴.

В другом варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, который включает взаимодействие

с X"-(CH₂)_r-Y-(CH₂)_s-X", где r равен от 1 до 4; s равен от 1 до 4; Y является CH₂, O или S; и X" является уходящей группой.

В другом варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, который включает взаимодействие

с ClCH₂CH₂OCH₂CH₂Cl.

В следующем варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, который включает (i) взаимодействие

с H₂N-A-(R³)_q с образованием (ii) связывание соединения 7c с с образованием (iii) снятие защиты с соединения 8f с образованием (iv) замещение соединения 9h группой R¹ с образованием и (v) замещение соединения 61a группой R⁴.

В следующем варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, который включает (i) взаимодействие

с с образованием (ii) связывание соединения 7c с с образованием (iii) снятие защиты с соединения 8f с образованием (iv) замещение соединения 9h группой R¹ с образованием и (v) замещение соединения 61a группой R⁴.

В другом варианте воплощения представлен способ получения соединения по настоящему изобретению, где R⁴ является CH₃, который включает (i) окисление

до (ii) связывание соединения 38a с в (iii) восстановление соединения 40a до и (iv) замещение соединения 41c группой R¹. В одном аспекте соединение 40а получают добавлением соединения 38а к раствору, содержащему соединение 7с и мягкий восстановитель. В другом аспекте мягким восстановителем является Na(OAc)₃BH. В следующем аспекте % э.и. соединения 40а составляет, по меньшей мере, около 97% э.и.

Фармацевтические композиции/схемы приема по настоящему изобретению содержат соединение формул (I) и/или (II), необязательно с другими фармацевтически инертными или неактивными компонентами. В одном варианте воплощения фармацевтически инертным или неактивным компонентом является один или несколько фармацевтически приемлемых носителей или формообразующих средств. Настоящее изобретение предполагает также смешивание соединения формул (I) и/или (II) с одним или несколькими терапевтическими средствами, то есть активными компонентами, описанными ниже. В следующем варианте воплощения соединение формул (I) и/или (II) смешивают с одним или несколькими инертными/неактивными компонентами и одним или несколькими терапевтическими средствами.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению содержат такое количество соединения формул (I) и/или (II), которое является эффективным для лечения боли или зуда у субъекта. В частности, доза соединения формул (I) и/или (II) для достижения терапевтического эффекта зависит от таких факторов, как состав композиции, фармакологическая эффективность лекарства, возраст, вес и пол пациента, состояние, подлежащее лечению, тяжесть симптомов пациента, конкретное соединение формул (I) и/или (II), способ доставки и характер реакции пациента. Подразумевается также, что терапия и доза соединения формул (I) и/или (II) могут вводиться в единой лекарственной форме, и что специалисты в данной области могут соответственно подобрать единую лекарственную форму с учетом относительной степени активности. Решение относительно определенной используемой дозы (и количества введений в день) находится на усмотрении опытного врача, и может варьироваться титрованием дозы для конкретных обстоятельств, чтобы получить заданный терапевтический эффект.

В одном варианте воплощения терапевтически эффективное количество составляет от около 0,0001% до около 25% вес./вес. В другом варианте воплощения терапевтически эффективное количество составляет менее чем около 20% вес./вес., около 15% вес./вес., около 10% вес./вес., около 5% вес./вес. или около 1% вес./вес. В другом варианте воплощения терапевтически эффективное количество составляет от около 0,0001% до около 10% вес./вес. В следующем варианте воплощения терапевтически эффективное количество составляет от около 0,005 до около 5% вес./вес. В другом варианте воплощения терапевтически эффективное количество составляет от около 0,01 до около 5% вес./вес. В следующем варианте воплощения терапевтически эффективное количество составляет около 0,01% вес./вес., около 0,05% вес./вес., около 0,1% вес./вес., около 0,2% вес./вес., около 0,3% вес./вес., около 0,4% вес./вес., около 0,5% вес./вес., около 0,6% вес./вес., около 0,7% вес./вес., около 0,8% вес./вес., около 0,8% вес./вес., около 0,9% вес./вес., около 1% вес./вес., около 2% вес./вес., около 3% вес./вес., около 4% вес./вес. или около 5% вес./вес.

Терапевтически эффективные количества могут обеспечиваться по регулярному графику, то есть на ежедневной, еженедельной, ежемесячной или ежегодной основе, или по нерегулярному графику, в котором изменяются дни введения, недели, месяцы и так далее. Альтернативно, может варьироваться терапевтически эффективное количество, подлежащее введению. В одном варианте воплощения терапевтически эффективное количество для первой дозы выше, чем терапевтически эффективное количество для одной или нескольких последующих доз. В другом варианте воплощения терапевтически эффективное количество для первой дозы ниже, чем терапевтически эффективное количество для одной или нескольких последующих доз. Эквивалентные дозы могут вводиться за различные периоды времени, включая, но не ограничиваясь этим, примерно каждые 2 часа, примерно каждые 6 часов, примерно каждые 8 часов, примерно каждые 12 часов, примерно каждые 24 часа, примерно каждые 36 часов, примерно каждые 48 часов, примерно каждые 72 часа, примерно каждую неделю, примерно каждые 2 недели, примерно каждые 3 недели, примерно каждый месяц, примерно каждые 2 месяца, примерно каждые 3 месяца и примерно каждые 6 месяцев. Количество и частота доз, соответствующих полному курсу лечения, определяются в соответствии с решением лечащего врача. Терапевтически эффективные количества, описанные в настоящем документе, относятся к общим количествам, введенным в данный период времени; то есть если вводится более одного соединения формул (I) и/или (II), то терапевтически эффективные количества соответствуют суммарному введенному количеству.

Соединение формул (I) и/или (II) может быть введено любым способом, с учетом конкретного состояния, для которого оно было выбрано. Соединения формул (I) и/или (II) могут быть доставлены перорально, инъекцией, ингаляцией (включая пероральное, внутриносовое и внутритрахеальное введение), окулярно, трансдермально (посредством композиций простой пассивной диффузии или посредством использования облегченной доставки, например, ионтофореза, микропорации с микроиглами, радиочастотной абляции или тому подобного), внутрисосудистым введением, подкожно, внутримышечно, сублингвально, внутричерепным введением, эпидурально, интратекально, ректально, внутрипузырным введением и вагинально, среди прочего. Желательно, чтобы соединение формул (I) и/или (II) могло быть введено инъекцией, трансдермально или локально. В одном варианте воплощения количество соединения формул (I) и/или (II) составляет от около 0,05% вес./вес. до около 10% вес./вес. композиции в зависимости от способа введения. Для глазного применения количество соединения формул (I) и/или (II) может составлять от около 0,05% вес./вес. до около 2,5% вес./вес.

При использовании для дермальной анестезии количество соединения формул (I) и/или (II) составляет от около 0,1% вес./вес. до около 10% вес./вес. При использовании не окулярным введением, для локального (например, перорального, назального, ректального, уретрального, вагинального) введения количество соединения формулы (I) и/или (II) составляет от около 0,5% вес./вес. до около 5% вес./вес. При использовании в виде инъекции количество соединения формул (I) и/или (II) составляет от около 0,25% вес./вес. до около 3% вес./вес. для инъекций. При использовании для инфузии (например, эпидуральной, спинальной или проводниковой анестезии) количество соединения формул (I) и/или (II) составляет от около 0,1% вес./вес. до около 3% вес./вес.

В одном варианте воплощения соединение формул (I) и/или (II) может быть введено локально в глаза, например, в виде растворов, суспензий или мазей. Примеры офтальмически совместимых носителей, которые могут быть использованы, включают, без ограничения, водный раствор, такой как физиологический солевой раствор, масляный раствор или мази, содержащие офтальмически совместимые консерванты, поверхностно-активные вещества, буферы и регуляторы вязкости. Эти композиции могут также содержать стабилизаторы, антибактериальные средства и могут выпускаться в различных дозированных единицах, пригодных для глазного введения. Также могут быть использованы лекарственные вставки, растворимые или нерастворимые.

В другом варианте воплощения соединение формул (I) и/или (II) может быть введено инъекцией. Растворы для инъекции или инфузии могут быть приготовлены в виде водных растворов. Желательно, чтобы соединение формул (I) и/или (II) присутствовало в концентрации от около 0,1% вес./вес. до около 3% вес./вес. Эти растворы могут содержать также стабилизаторы, антибактериальные средства, буферы и могут выпускаться в ампулах, содержащих различные дозированные единицы, или в бутылках.

В следующем варианте воплощения соединение формул (I) и/или (II) может быть введено ректально. Дозированные единицы для ректального введения могут быть приготовлены в форме мазей или суппозиториев, которые содержат соединение формул (I) и/или (II) в смеси с нейтральной жирной основной, или они могут быть приготовлены в форме желатиновых ректальных капсул, которые содержат соединение формул (I) и/или (II) в смеси, например, с растительным маслом или парафиновым маслом. Для лечения геморроя применимы мази, суппозитории или кремы, содержащие, по меньшей мере, одно соединение формул (I) и/или (II).

В другом варианте воплощения соединение формул (I) и/или (II) может быть введено трансдермально. Известно множество систем трансдермальной доставки. Для применения в этих системах соединение формулы (I) и/или (II) может быть смешано с различными формообразующими средствами, которые могут включать, например, регуляторы рН, консерванты и/или усилители проницаемости, для образования раствора, мази, крема, лосьона или геля. Такая композиция может образовывать составную часть трансдермальной системы доставки («пластырь» и так далее).

Может быть выбрана такая система трансдермальной доставки, которая обеспечивает или облегчает прохождение соединения по настоящему изобретению через дермальный слой и в заданную область, такую как мышечная ткань или периневральное пространство. Такие системы могут включать композицию с усилителями проницаемости кожи. Примеры усилителей проницаемости кожи включают физические усилители (ультразвук, ионтофорез, электропорация, магнетофорез, микроиглы), везикулы, корпускулярные системы (липосомы, ниосомы, трансферсомы, микроэмульсии, твердые липидные наночастицы) и химические усилители (сульфоксиды, азоны, гликоли, алканолы, терпены и так далее). Следующие примеры химических усилителей включают, например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, изопропанол, этанол, олеиновую кислоту, N-метилпирролидон, которые увеличивают проницаемость кожи для указанных соединений и обеспечивают проникновение соединений через кожу в более глубокие ткани. Смотри публикацию Sagie & Kohane, "Prolonged Sensory-Selective Nerve Blockade", PNAS, 2010(8): 3740-3745, 2010, которая включена в настоящий документ путем ссылки, где представлены дополнительные примеры химических усилителей.

Фармацевтические композиции, содержащие соединение формул (I) и/или (II), могут быть составлены для введения в неразбавленном виде или с одним или несколькими фармацевтическими носителями. Количество фармацевтического(их) носителя(ей) определяется растворимостью и химической природой соединения формул (I) и/или (II), выбранным способом введения и стандартной фармакологической практикой. Фармацевтический носитель(и) может быть твердым или жидким, и может включать одновременно твердые и жидкие носители. Известно множество применимых жидких носителей, и они могут быть легко выбраны специалистами в данной области. Такие носители могут включать, например, диметилсульфоксид (ДМСО), физиологический солевой раствор, буферный солевой раствор, циклодекстрин, гидроксипропилциклодекстрин (HPβCD), н-додецил-β-D-мальтозид (DDM) и их смеси. Аналогично, специалистам в данной области известно множество твердых носителей и формообразующих средств.

Соединения формул (I) и/или (II) также могут быть введены вместе с другими стабилизаторами мембраны (локальными анестетиками), например, для получения эвтектических смесей.

Несмотря на то, что соединение формул (I) и/или (II) может быть введено самостоятельно, оно может быть введено также в присутствии одного или нескольких фармацевтических носителей, которые являются физиологически совместимыми. Носители могут быть в сухой или жидкой форме и должны быть фармацевтически приемлемыми. Жидкие фармацевтические композиции обычно являются стерильными растворами или суспензиями. При использовании для парентерального введения жидких носителей, желательно, чтобы они были стерильными жидкостями. Жидкие носители обычно используют при получении растворов, суспензий, эмульсий, сиропов и эликсиров. В одном варианте воплощения соединение формул (I) и/или (II) растворяют в жидком носителе. В другом варианте воплощения соединение формул (I) и/или (II) суспендируют в жидком носителе. Специалисты в области составления композиций могут выбрать подходящий жидкий носитель в зависимости от способа введения. Соединение формул (I) и/или (II) может быть альтернативно составлено в композицию с твердым носителем. В одном варианте воплощения эта композиция может быть спрессована в форме единицы дозирования, то есть таблетки или капсулы. В другом варианте воплощения композиция может быть добавлена к форме единицы дозирования, то есть капсулы. В следующем варианте воплощения композиция может быть составлена для введения в виде порошка. Твердый носитель может выполнять различные функции, то есть может выполнять функции двух или более формообразующих средств, описанных ниже. Например, твердый носитель может действовать также как ароматизатор, смазывающее вещество, солюбилизатор, суспендирующий агент, наполнитель, глидант, добавка для прессования, связующее вещество, разрыхлитель или инкапсулирующий материал.

Также композиция может быть дополнительно разделена и содержать соответствующие количества соединения формул (I) и/или (II). Например, единица дозирования может быть упакованными композициями, например, упакованными порошками, пробирками, ампулами, наполненными шприцами или саше, содержащими жидкость.

Примеры формообразующих средств, которые могут быть смешаны с одним или несколькими соединениями формул (I) и/или (II), включают, без ограничения, адъюванты, антиоксиданты, связующие вещества, буферы, покрытия, красители, добавки для прессования, разбавители, разрыхлители, эмульгаторы (например, полиоксиэтиленовые эфиры жирных кислот), смягчающие вещества, инкапсулирующие материалы, наполнители, ароматизаторы, глиданты, гранулирующие агенты, смазывающие вещества, металлохелаты, регуляторы осмотического давления, регуляторы рН (например, гидроксид натрия), консерванты, солюбилизаторы, сорбенты, стабилизирующие агенты, подсластители (такие как сахарин), поверхностно-активные вещества, суспендирующие средства, сиропы, загустители (например, карбоксиполиметилен или гидроксипропилметилцеллюлоза), усилители проницаемости (например, гидроксиполиэтоксидодекан, ДМСО, DMAC, DDM и так далее) или регуляторы вязкости (такие как полимеры для увеличения вязкости). Смотри, например, формообразующие средства, описанные в книге "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 5^е издание, редакторы: Rowe, Sheskey, and Owen, APhA Publications (Вашингтон, ФО Колумбия), 14 декабря 2005 года, которая включена в настоящий документ путем ссылки.

В одном варианте воплощения композиции могут быть использованы в качестве летучих препаратов для ингаляций. Для этого способа введения композиции могут быть приготовлены в виде жидких единиц дозирования с помощью соединения формул (I) и/или (II) и носителя для доставки посредством распылительного насоса или в виде сухого порошка для инсуффляции.

В другом варианте воплощения композиции могут быть использованы в виде аэрозолей, то есть для перорального или интраназального введения. Для этого способа введения композиции составляют для применения в аэрозольных емкостях под давлением, вместе с газообразным или сжиженным газом-вытеснителем, например, дихлордифторметаном, диоксидом углерода, азотом, пропаном и тому подобными. Также обеспечивают доставку дозированного количества за одно или несколько срабатываний.

В другом варианте воплощения композиции могут быть введены при помощи устройства доставки с модифицированным высвобождением. «Модифицированное высвобождение», при использовании в настоящем документе, относится к доставке соединения формулы (I) и/или (II), которое контролируется, например, в течение периода, составляющего, по меньшей мере, от около 8 часов (например, отсроченная доставка), до периода, составляющего, по меньшей мере, около 12 часов (например, устойчивая доставка). Такие устройства могут также обеспечивать незамедлительное высвобождение (например, терапевтические уровни достигаются быстрее, чем примерно через 1 час, или быстрее, чем примерно через 2 часа). Специалистам в данной области известны соответствующие устройства доставки с модифицированным высвобождением. Для применения в таких устройствах доставки с модифицированным высвобождением, соединение формул (I) и/или (II) составляется в композицию, как описано в настоящем документе.

В следующем варианте воплощения композиции могут быть введены трансдермально, то есть посредством использования пластыря, элюирующего лекарство. В одном варианте воплощения такой пластырь является «ионтофоретическим» трансдермальным пластырем, в котором одно или несколько лекарственных средств доставляется при помощи простого или более сложного (например, контролируемого микропроцессором) электрического тока, с использованием, например, встроенной батарейки. В следующем варианте воплощения пластырь является «микроигловым» трансдермальным пластырем, который содержит микроиглы, покрытые или содержащие (в растворимой или нерастворимой форме) фармацевтическую композицию по настоящему изобретению. Смотри, например, патенты США №№ 7798987 и 7537795, описание которых включено в настоящий документ путем ссылки. Сами микроиглы могут быть растворимыми или нерастворимыми; смотри, например, технологию «микроигл», описанную в публикациях Sullivan et al., "Dissolving Polymer Microneedle Patches for Influenza Vaccination", Nature Medicine, 16:915-920 (18 июля 2010 года, онлайн публикация) и Lee et al., "Dissolving Microneedle Patch for Transdermal Delivery of Human Growth Hormone", Small, 4 января 2011 года, онлайн публикация, которые включены в настоящий документ путем ссылки. Другие применимые системы трансдермальной доставки включают системы радиочастотной абляции, описанные в публикации Sintov et al., "Radiofrequency-Driven Skin Microchanneling as a New Way for Electrically Assisted Transdermal Delivery of Hydrophilic Drugs”, Controlled Release 89: 311-320 (2003) и в патенте США № 7558625, описание которых включено в настоящий документ путем ссылки.

Следующие примеры трансдермальных пластырей, применимых для введения соединений формулы (I) и/или (II), включают пластыри, описанные в патентах США №№ 5411738 и 5827528, а также в публикации Prausnitz and Langer, "Transdermal drug delivery", Nature Biotechnology, 26(11):1261-1268, ноябрь 2006 года, которые включены в настоящий документ путем ссылки. Желательно, чтобы пластырь при помощи соответствующего адгезива наносился на кожу, где он должен оставаться, по меньшей мере, один час. В одном варианте воплощения пластырь оставляют на месте в течение около 1 часа и заменяют еженедельно, общее время использования составляет около 2 или около 3 часов. В другом варианте воплощения пластырь оставляют на месте в течение около 2 часов. В следующем варианте воплощения пластырь оставляют на месте в течение около 3 часов. В другом варианте воплощения пластырь оставляют на месте в течение около 4 часов. В другом варианте воплощения пластырь оставляют на месте в течение более продолжительных или более коротких промежутков времени.

Также подразумевается введение соединений формул (I) и/или (II) с другим лекарственным средством(ами) или терапевтическим агентом(ами). В одном варианте воплощения соединения формул (I) и/или (II) смешивают с другими лекарственными средствами или терапевтическими агентами в одной композиции. Однако настоящее изобретение не ограничивается этим. В других вариантах воплощения, соединения формул (I) и/или (II) могут вводиться в одной или нескольких отдельных композициях с другими соединениями формул (I) и/или (II) или другими лекарственными средствами или терапевтическими агентами, описанными ниже.

В одном варианте воплощения соединения по настоящему изобретению могут быть использованы для лечения боли или зуда при совместном использовании с активатором рецептора TRPV1. Термин «активатор рецептора TRPV1», используемый в настоящем документе, относится к любому агенту или раздражителю, который активирует рецепторы TRPV1 или ноцицепторы и обеспечивает вхождение, по меньшей мере, одного ингибитора потенциал-управляемого ионного (например, натриевого или кальциевого) канала. В одном варианте воплощения активатор рецептора TRPV1 включает, но не ограничиваясь этим, капсаицин, дигидрокапсаицин и нордигидрокапсаицин, лидокаин, артикаин, прокаин, тетракаин, мепивикаин, бупивикаин, эвгенол, камфор, клотримазол, арванил (N-арахидоноилванилламин), анандамид, 2-аминоэтоксидифенилборат (2APB), AM404, резинифератоксин, форбол 12-фенилацетат 13-ацетат 20-гомованиллат (PPAHV), олванил (NE 19550), OLDA (N-олеоилдопамин), N-арахидонилдопамин (NADA), 6'-йодрезинифератоксин (6'-IRTX), Cl 8 N-ацилэтаноламины, производные липоксигеназы (такие как 12-гидропероксиэйкозатетраеновая кислота), пептиды ингибитора цистеинового узла (ICK) (ваниллотоксины), пипелин, MSKl 95 (N-[2-(3,4-диметилбензил)-3-(пивалоилокси)пропил]-2-[4-(2-аминоэтокси)-3-метоксифенил]ацетамид), JYL79 (N-[2-(3,4-диметилбензил)-3-(пивалоилокси)пропил]-N'-(4-гидрокси-3-метоксибензил)тиомочевина), гидрокси-α-саншул, 2-аминоэтоксидифенилборат, 10-шогаол, олеилгингерол, олеилшогаол, SU200 (N-(4-трет-бутилбензил)-N'-(4-гидрокси-3-метоксибензил)тиомочевина) нонивамид и жирные ациламиды тетрагидроизохинолинов. В другом варианте воплощения активатором рецептора TRPV1 является лидокаин, априндин, бензокаин, бутакаин, кокаин, дибукаин, энкаинид, мексилетин, оксетакаин (оксетазаин), прилокаин, пропаракаин, прокаинамид, н-ацетилпрокаинамид, хлорпрокаин (незакаин, нескаин), диклонин, этидокаин, левобупивакаин, ропивакаин, циклометикаин, диметокаин (ларокаин), пропоксикаин, тримекаин и симпокаин. В следующем варианте воплощения активатором рецептора TRPV1 является лидокаин. В другом варианте воплощения активатором TRPV1 может быть детергент или поверхностно-активное вещество, примеры которых можно найти в широко применяемых гигиенических продуктах, таких как мыло и шампуни (например, лаурилсульфат натрия). Смотри публикацию Lilja et al. "Surfactant-Induced TRPV1 activity - A Novel Mechanism for Eye Irritation?" Technological Sciences, 99(1):174-180, 2007, которая включена в настоящий документ путем ссылки. В другом варианте воплощения активатором рецептора TRPV1 является повышенная температура или воспаление.

При использовании так, как описано в настоящем документе, активатор рецептора TRPV1 может быть использован в больших или меньших количествах по сравнению с количеством соединения формулы (I) или (II), или их комбинации. В одном варианте воплощения отношение активатора рецептора TRPV1 к соединению формулы (I), формулы (II) или их комбинации составляет, по меньшей мере, около 0,5:1. В следующем варианте воплощения отношение активатора рецептора TRPV1 к соединению формулы (I), формулы (II) или их комбинации составляет, по меньшей мере, около 1:1. В следующем варианте воплощения отношение активатора рецептора TRPV1 к соединению формулы (I), формулы (II) или их комбинации составляет 25:1 или менее. В другом варианте воплощения отношение активатора рецептора TRPV1 к соединению формулы (I), формулы (II) или их комбинации составляет от около 0,5:1 до около 25:1. В другом варианте воплощения отношение активатора рецептора TRPV1 к соединению формулы (I), формулы (II) или их комбинации составляет менее, чем около 1:1. В следующем варианте воплощения отношение активатора рецептора TRPV1 к соединению формулы (I), формулы (II) или их комбинации составляет, по меньшей мере, около 2:1. В следующем варианте воплощения отношение активатора рецептора TRPV1 к соединению формулы (I), формулы (II) или их комбинации составляет, по меньшей мере, около 3:1. В другом варианте воплощения отношение активатора рецептора TRPV1 к соединению формулы (I), формулы (II) или их комбинации составляет, по меньшей мере, 4:1. В следующем варианте воплощения отношение активатора рецептора TRPV1 к соединению формулы (I), формулы (II) или их комбинации составляет около 10:1. В другом варианте воплощения отношение активатора рецептора TRPV1 к соединению формулы (I), формулы (II) или их комбинации составляет от около 0,5 до около 1 до от около 25 до около 1.

Для применения в фармацевтических комбинациях и способах, описанных ниже, подразумеваются также ингибиторы потенциал-управляемых ионных каналов. В одном варианте воплощения потенциал-управляемыми ионными каналами являются натриевые или кальциевые ионные каналы. В следующем варианте воплощения ингибитор потенциал-управляемого натриевого канала включает, без ограничения, QX-314, N-метил-прокаин (QX-222), N-октил-гуанидин, 9-аминоакридин и панкуроний. В другом варианте воплощения ингибитор потенциал-управляемых кальциевых каналов включает, но не ограничиваясь этим, D-890 (четвертичный метоксиверапамил) и CERM 1 1888 (четвертичный бепридил). В следующем варианте воплощения ингибиторы потенциал-управляемого ионного канала, такие как рилузол, мексилитин, фенитоин, карбамазепин, прокаин, токаинид, прилокаин, диизопирамид, бенциклан, хинидин, бретилий, лифаризин, ламотригин, флунаризин, артикаин, бупивикаин, мепивикаин, флуспирилен, орфенадрин, фенбензамин, бепридил, пимозид, пенфлуридол, флуспирилен, пропиверин, дизопирамид, метадон, толтеродин, тридигексетиловые соли, трипеленнамин, мепирамин, бромфенирамин, хлорфенирамин, дексхлорфенирамин, карбиноксамин, левометадил ацетат, галлопамил, верапамил, девапамил, тиапамил, эмопамил, диклонин, прамоксин, ламотригин, мибефрадил, габапентин, амилорид, дилтиазем, нифедипин, нимодипин, нитрендипин, кокаин, мексилетин, пропафенон, хинидин, оксетазаин, артикаин, рилузол, бенциклан, лифаризин и стрихнин, могут использоваться вместе с соединением формул (I) и/или (II).

В комбинации с соединением формул (I) и/или (II) в композициях, комбинациях или способах, описанных в настоящем документе, могут быть использованы также мембранопроницаемые ингибиторы потенциал-управляемых ионных каналов. В одном варианте воплощения мембранопроницаемый ингибитор потенциал-управляемых ионных каналов включает, но не ограничиваясь этим, кокаин, карбамазепин, дизопирамид, ламотригин, прокаинамид, фенитоин, окскарбазепин, топирамат, зонизамид, тетракаин, этил аминобензоат, прилокаин, дизопирамид фосфат, флекаинид ацетат, мексилетин, пропафенон, хинидин глюконат, хинидин полигалактуронат, хлорпрокаин, дибукаин, диклонин, мепивакаин, прамоксин, прокаин, тетракаин, оксетазаин, пропитокаин, левобупивакаин, бупивакаин, лидокаин, морицизин, токаинид, пропаракаин, ропивакаин, хинидин сульфат, энкаинид, ропивакаин, этидокаин, морицизин, хинидин, энкаинид, флекаинид, токаинид, фосфенитоин, хлорпрокаин, диклонин, L-(-)-1-бутил-2',6'-пипеколоксилидид и прамоксин.

Кроме того, один или несколько агентов, обычно используемых для лечения боли, то есть обезболивающих, могут использоваться в сочетании с комбинацией по настоящему изобретению в способах, композициях и наборах, описанных в настоящем документе. Такие агенты включают, но не ограничиваясь этим, нестероидные противовоспалительные лекарства (NSAID), опиоиды, трициклические антидепрессанты, ингибиторы транспорта аминов и противосудорожные средства (такие как габапентиноиды).

Соединение формул (I) и/или (II) может быть введено вместе с сосудосуживающим средством (например, эпинефрином или вазопрессином) при использовании в растворах для инъекций.

Соединение формул (I) и/или (II) может быть смешано с глюкозой или декстрозой при использовании для инфузии или в качестве местного обезболивающего или противозудного средства.

Далее, соединение формул (I) и/или (II) может быть смешано с загустителями для получения желе, или может содержать также усилители проницаемости для использования в локальных или дермальных применениях, таких как местные мочеполовые процедуры.

Спреи для местной анестезии рта и ротоглотки могут содержать соединение формул (I) и/или (II), сахарин и/или спирт.

Наконец, соединение формул (I) и/или (II) может быть составлено в композицию в виде мази для введения в досягаемые слизистые оболочки.

Один или несколько дополнительных агентов, обычно используемых для лечения зуда, могут использоваться в сочетании с комбинацией по настоящему изобретению в способах, композициях и наборах, описанных в настоящем документе. Такие агенты включают местные или пероральные стероиды и антигистамины.

В одном варианте воплощения комбинация по настоящему изобретению включает следующие соединения:

В другом варианте воплощения комбинация по настоящему изобретению включает следующие соединения:

и лидокаин.

В следующем варианте воплощения комбинация включает лидокаин и следующее соединение:

Также в настоящем документе представлены схемы приема, наборы или упаковки фармацевтических композиций, содержащих соединения формул (I) и/или (II) или композиции, описанные в настоящем документе. Эти наборы могут быть систематизированы для указания приема единой композиции или комбинации композиций в каждое заданное время.

Соответственно, набор содержит упаковку или емкость с соединением формул (I) и/или (II), составленным в композицию для заданного способа доставки. Соответственно, набор содержит инструкции по дозированию и вкладыш, касающиеся соединения формул (I) и/или (II). Необязательно набор может дополнительно содержать инструкции по контролированию локальных или циркулирующих уровней продукта, а также материалы для выполнения таких анализов, включая, например, реактивы, луночные планшеты, емкости, маркеры или метки и тому подобные. Такие наборы легко упаковывают соответствующим для лечения заданного показания способом. Например, набор может содержать также инструкции по применению пластыря, распылительного насоса или другого устройства доставки. Другие соответствующие компоненты, подлежащие включению в такие наборы, легко понятны специалистам в данной области, с учетом заданного показания и способа доставки.

Соединения формул (I) и/или (II) или композиции, описанные в настоящем документе, могут быть однократными дозами или предназначенными для непрерывного или периодического прерывистого введения. Для непрерывного введения упаковка или набор может включать соединение формул (I) и/или (II) в каждой дозированной единице (например, раствор, лосьон, таблетка, пилюля, пластырь, элюирующий лекарство, или другое устройство, описанное выше или используемое для доставки лекарства) и необязательно инструкции по введению доз чаще, чем один раз в день, ежедневно, еженедельно или ежемесячно, в течение предварительно определенного времени или по предписанию. Если соединение формул (I) и/или (II) подлежит периодической доставке прерывистым образом, то упаковка или набор может включать плацебо для применения в периоды, когда соединение формул (I) и/или (II) не доставляется. При необходимости варьирования концентраций композиции, компонентов композиции или относительных отношений соединений формул (I) и/или (II) или агентов в составе композиции с течением времени, упаковка или набор может содержать последовательность дозированных единиц, которая обеспечивает заданное изменение.

В данной области известно множество упаковок или наборов для дозирования фармацевтических средств для периодического перорального применения. В одном варианте воплощения упаковка имеет указатели для каждого периода. В другом варианте воплощения упаковка является фольговой или блистерной упаковкой, маркированной ампулой, пробиркой или бутылкой.

Средства упаковки набора могут сами быть приспособлены для введения, как, например, ингалятор, шприц, пипетка, глазная пипетка или другие подобные приспособления, через которые композиция по настоящему изобретению может применяться на поврежденной области тела, такой как легкие, инъецироваться субъекту или даже наноситься на другие компоненты набора и смешиваться с ними.

Один или несколько компонентов этих наборов также могут быть представлены в высушенной или лиофилизированной форме. Если реагенты или компоненты представлены в высушенной форме, то восстановление обычно осуществляют добавлением соответствующего растворителя. Предполагается, что растворитель также может быть представлен в другой упаковке.

Наборы по настоящему изобретению также обычно включают средства для размещения пробирок или других соответствующих упаковочных средств в фиксированном положении для коммерческой продажи, такие как, например, литьевые или выдувные пластиковые контейнеры, в которых удерживаются необходимые пробирки. Независимо от количества или типа упаковок и в соответствии с изложенным выше описанием, наборы могут также включать или могут быть упакованы вместе с отдельным инструментом для облегчения инъекции/введения или размещения композиции в организме животного. Такой инструмент может быть ингалятором, шприцом, пипеткой, пинцетом, мерной ложкой, глазной пипеткой или любым другим одобренным в медицине средством доставки.

В одном варианте воплощения представлен набор, который содержит соединение формул (I) и/или (II). Соединение формул (I) и/или (II) может быть в присутствии или в отсутствие одного или нескольких носителей или формообразующих средств, описанных выше. Набор может необязательно содержать инструкции по введению соединения формул (I) и/или (II) субъекту, страдающему от боли или зуда.

В следующем варианте воплощения представлен набор, который содержит соединение формул (I) и/или (II) во второй дозированной единице и один или несколько носителей или формообразующих средств, описанных выше, в третьей дозированной единице. Набор может необязательно содержать инструкции по введению соединения формул (I) и/или (II) субъекту, страдающему от боли или зуда.

Как рассмотрено выше, способы, композиции и наборы по настоящему изобретению могут быть использованы для лечения боли или зуда, которые являются результатом ряда состояний. Термин «боль», используемый в настоящем документе, включает все типы боли. В одном варианте воплощения боль может быть острой или хронической. В другом варианте воплощения боль может быть ноцицептивной, дисфункциональной, идиопатической, невропатической, соматической, висцеральной, воспалительной и/или процедурной. Например, боль может быть болью при мигрени, болью в спине, болью в шее, гинекологической болью, предродовой или родовой болью, ортопедической болью, болью после приступа, болью после хирургического или процедурного вмешательства, постгерпетической невралгией, кризом серповидных клеток, интерстициальным циститом, урологической болью (такой как уретрит), зубной болью, головной болью, болью в результате ранения или медицинской процедуры, такой как хирургическое вмешательство (такое как бурсэктомия или смещение бедренного, коленного или другого сустава), наложение швов, репозицирование перелома, биопсия и тому подобное. Боль может также возникать у пациентов, страдающих раком, и она может быть обусловлена многочисленными причинами, такими как воспаление, сдавливание нерва и механические силы из-за растяжения ткани вследствие инвазии опухоли и опухолевого метастаза в кость или другие ткани.

В одном варианте воплощения боль является невропатической болью, такой как постгерпетическая невралгия. В другом варианте воплощения боль является воспалительной болью. В следующем варианте воплощения боль является ноцицептивной болью. В другом варианте воплощения боль является процедурной болью. В следующем варианте воплощения боль обусловлена раком пищевода, колитом, циститом, синдромом раздраженного кишечника, колитом или идиопатической невропатией.

«Соматическая боль» включает боль в костях, суставах, мышцах, коже или соединительной ткани.

«Центральная боль» включает боль, возникающую в результате травмы головного мозга, приступа или повреждения спинного мозга.

«Висцеральная боль» включает боль внутренних органов, таких как дыхательные пути или желудочно-кишечный тракт и поджелудочная железа, мочевые пути и половые органы. В одном варианте воплощения висцеральная боль является результатом поражения оболочки органа раком. В другом варианте воплощения висцеральная боль является результатом обструкции полого органа. В следующем варианте воплощения висцеральная боль является результатом воспаления, как при цистите или рефлюксном эзофагите.

«Идиопатическая боль» относится к боли, которая не имеет основной причины, или относится к боли, обусловленной состоянием, которое остается недиагностированным.

«Дисфункциональная боль» относится к боли, которая возникает в отсутствие вредного раздражителя, повреждения ткани или поражения нервной системы. В одном варианте воплощения дисфункциональная боль является результатом ревматологических состояний, таких как артрит и фибромиалгия, головная боль типа давления, расстройства раздраженного кишечника и эритромелалгия.

«Ноцицептивная боль» включает боль, обусловленную вредным раздражителем, который угрожает или фактически поражает ткани организма. В одном варианте воплощения ноцицептивная боль является результатом пореза, ушиба, перелома кости, размозжения, ожога, травмы, хирургического вмешательства, родов, растяжения, удара, инъекции, зубной процедуры, биопсии кожи или обструкции. В другом варианте воплощения ноцицептивная боль локализуется в коже, мышечно-скелетной системе или внутренних органах.

«Невропатическая боль» является болью в результате неправильной обработки входной сенсорной информации периферической или центральной нервной системой в результате повреждения этих систем. В одном варианте воплощения невропатическая боль является хронической и незлокачественной. В одном варианте воплощения невропатическая боль обусловлена травмой, хирургическим вмешательством, образованием грыжи межпозвоночного диска, повреждением спинного мозга, диабетом, инфекцией с опоясывающим герпесом (опоясывающим лишаем), ВИЧ/СПИД, поздней стадией рака, ампутацией (такой как мастэктомия), кистевым туннельным синдромом, хроническим употреблением алкоголя, воздействием радиации и непредусмотренными побочными эффектами лечения нейротоксическими средствами, такими как некоторые анти-ВИЧ и химиотерапевтические лекарства. В другом варианте воплощения невропатическая боль может быть описана как «жжение», «пощипывание», «покалывание» или «простреливание».

Выражение «воспалительная боль» включает боль в результате воспаления, обусловленного множеством факторов. В одном варианте воплощения воспалительная боль возникает в результате повреждения ткани или воспаления. В другом варианте воплощения воспалительная боль обусловлена травмой (включая травмы суставов, мышц и сухожилий), хирургическими процедурами, инфекцией и/или артритом.

«Процедурная боль» включает ссылки на боль, возникающую в результате медицинской процедуры. Медицинская процедура может включать любой тип медицинской, зубной или хирургической процедуры. В одном варианте воплощения процедурной болью является послеоперационная боль. В другом варианте воплощения боль связана с инъекцией, дренированием абсцесса, хирургией, дерматологической, зубной процедурой, офтальмической процедурой, артроскопией и применением другого медицинского инструментария и/или косметической хирургией.

«Мигрень» является головной болью в результате активации сенсорных волокон, иннервирующих оболочку головного мозга.

Термин «зуд» относится ко всем типам зуда и ощущений жжения, которые могут быть локализованными или генерализованными и могут быть острыми, периодическими или постоянными. Зуд может быть идиопатическим, аллергическим, метаболическим, инфекционным, вызванным лекарствами или возникать в результате определенных болезненных состояний из-за болезни печени или почек, или рака. «Прурит» является сильным зудом, но при использовании в настоящем документе может включать «зуд», описанный выше. В одном варианте воплощения зуд может быть результатом стресса, тревоги, солнечного УФ-облучения, метаболических и эндокринных расстройств (например, болезни печени или почек, гипертиреоидизма), рака, реакций на лекарства, пищевых реакций, паразитарных инфекций, грибковых инфекций, аллергических реакций, болезней крови (например, истинной полицитемии), укусов насекомых, беременности, метаболических расстройств, печеночной или почечной недостаточности, экземы и дерматологических состояний, таких как дерматит, экзема или псориаз.

Термин «лечить», «лечение» или любые их вариации включают терапию, используемую для устранения болезни или состояния у пациента или субъекта. В одном варианте воплощения болезнь или состояние могут быть исключены на постоянной основе или на короткий промежуток времени. В другом варианте воплощения тяжесть болезни или состояния, или одного или нескольких симптомов, характерных для болезни или состояния, может быть снижена на постоянной основе или на короткий промежуток времени. Эффективность лечения боли или зуда может быть определена при помощи любого стандартного показателя боли или зуда, такого как показатели, описанные в настоящем документе, или может быть определена на основании субъективной оценки боли или зуда пациентом. Пациент считается «вылеченным», если отмечается снижение боли или зуда, или снижение реакции на раздражитель, который вызывает боль или зуд.

Для измерения эффективности любых способов, композиций или наборов, описанных в настоящем документе, может быть использован индекс измерения. Индексы, применимые для измерения боли, связанной с мышечно-скелетными, иммуновоспалительными и невропатическими расстройствами, включают визуальную аналоговую шкалу (VAS), шкалу Лайкерта, категорийные шкалы боли, описания, индекс Лекена, индекс выраженности остеоартроза университетов Западного Онтарио и МакМастера (WOMAC) и Австралийско-Канадский индекс остеоартроза суставов кистей (AUSCAN), каждый из которых хорошо известен в данной области. Такие индексы могут быть использованы для измерения боли, зуда, функционирования, тугоподвижности или других переменных.

Визуальная аналоговая шкала (VAS) обеспечивает измерение одномерного количества. В VAS обычно используется отображение расстояния, такое как изображение линии с мелкими метками, нанесенными на равных расстояниях, например, десять интервалов по 1 см. Например, пациента могут попросить оценить восприятие боли или зуда выбором точки на линии, которая наилучшим образом соответствует восприятию боли или зуда, где один конец линии соответствует «отсутствию боли» (оценка 0 см) или «отсутствию зуда», а другой конец линии соответствует «невыносимой боли» или «невыносимому зуду» (оценка 10 см). Этот прием обеспечивает простой и быстрый подход к получению количественной информации о том, как пациент воспринимает боль или зуд. Шкалы VAS и их применение описаны, например, в патентах США №№ 6709406 и 6432937, соответствующее описание которых включено в настоящий документ путем ссылки.

Шкала Лайкерта также обеспечивает измерение одномерного количества. Как правило, шкала Лайкерта имеет дискретные целочисленные значения в диапазоне от нижнего значения (например, 0, означающего отсутствие боли) до наивысшего значения (например, 7, означающего предельную боль). Пациента, испытывающего боль, просят выбрать число между нижним значением и высшим значением для отображения степени испытываемой боли. Шкалы Лайкерта и их применение описаны, например, в патентах США №№ 6623040 и 6766319, соответствующее описание которых включено в настоящий документ путем ссылки.

Индекс Лекена и индекс выраженности остеоартроза (OA) университетов Западного Онтарио и МакМастера (WOMAC) оценивают боль, функционирование и тугоподвижность в коленях и тазобедренных суставах пациентов, страдающих остеоартрозом, с использованием заполняемых самостоятельно опросников. WOMAC включает оценку коленей и тазобедренных суставов, тогда как в способе Лекена один опросник предназначен для коленей, а другой - для тазобедренных суставов. Эти опросники применимы, поскольку они содержат большее количество информации по сравнению с VAS или шкалой Лайкерта. Опросники индекса WOMAC и индекса Лекена всесторонне обоснованы при остеоартрозе, включая хирургические условия (например, артропластику коленей и тазобедренных суставов). Их метрические характеристики существенно не различаются.

Индекс AUSCAN (Австралийско-Канадский индекс остеоартроза суставов кистей) использует достоверный, надежный и адаптивный опросник, заполняемый пациентом самостоятельно. В одном случае этот опросник содержит 15 вопросов в трех измерениях (боль, 5 вопросов; тугоподвижность, 1 вопрос; и физическое функционирование, 9 вопросов). В индексе AUSCAN может быть использована, например, шкала Лайкерта или VAS.

Другие соответствующие индексы, которые применимы для измерения боли, включают описательную шкалу боли (PDS), словесные описательные шкалы (VDS), числовую шкалу интенсивности боли (NPIS), шкалу невропатической боли (NPS), список симптомов невропатической боли (NPSI), список текущей боли (PPI), критерий гериатрической боли (GPM), опросник боли МакГилла (MPQ), среднюю интенсивность боли (описательную дифференциальную шкалу), числовую шкалу боли (NPS), общий показатель оценок (GES), краткий опросник боли МакГилла, многостадийный личностный опросник штата Миннесота, характеристику боли и комплексный болевой опросник, детский опросник состояния здоровья и детский оценочный опросник.

Зуд может быть также измерен по субъективным критериям, известным специалистам в данной области (VAS, шкала Лайкерта, описатели и тому подобные). Другой подход заключается в измерении царапин, которые объективно коррелируют с зудом, с использованием датчика вибрации или реагирующих на движение измерителей.

В одном варианте воплощения способы лечения, описанные в настоящем документе, включают введение пациенту соединения формул (I) и/или (II). Кроме того, пациенту могут вводиться необязательные агенты, такие как описаны выше для применения в комбинации, до, одновременно c или после соединения формул (I) и/или (II).

В другом варианте воплощения способы, описанные в настоящем документе, включают введение пациенту соединения формул (I) и/или (II) и активатора рецептора TRPV1. В одном варианте воплощения соединение формул (I) и/или (II) вводят пациенту до активатора рецептора TRPV1. В другом варианте воплощения активатор рецептора TRPV1 вводят пациенту до соединения формул (I) и/или (II). В следующем варианте воплощения соединение формул (I) и/или (II) и активатор рецептора TRPV1 вводят пациенту одновременно.

Настоящим изобретением предусматривается также введение соединения формул (I) и/или (II) после активации рецептора TRPV1. В частности, этот способ осуществляют после активации рецептора TRPV1. Такая активация может быть результатом введения экзогенного активирующего соединения или раздражителя, или может возникать в результате эндогенной активации, инициированной патофизиологическим состоянием, таким как воспаление, которое активирует рецепторы TRPV1.

Для оценки способности соединений ингибировать боль за счет ингибирования внутренних натриевых каналов применимы многочисленные анализы in vivo и модели на животных. Эти модели могут включать или могут не включать открытие (активацию) каналов TRPV1 за счет инициации боли физическим, механическим или химическим (например, капсаицином) способом. Примеры применимых моделей включают, например, модели, описанные в публикациях Khan et al., Anesthesiology, January 2002, 96(1):109-116; AM Binshtok et al., Anesthesiology, июль 2009 года, 111(1):127-137; CR Reis et al., Anesthesiology, июль 2009 года, 111(1):122-126; P Gerner et al., Anesthesiology, ноябрь 2008 года, 109(5):872-878; и AM Binshtok et al., Nature, октябрь 2007 года, 449:607-610, которые включены в настоящий документ путем ссылки. Однако, по многим причинам, понятным специалистам в данной области, желательно обеспечить in vitro анализы, которые позволяют идентифицировать соединения с заданными свойствами. В настоящем документе описаны два таких анализа in vitro.

В одном варианте воплощения была разработана модифицированная система анализа на основе FLIPR® (спектрофотометр для чтения планшетов для визуализации флуоресценции), которая способна различать неспецифическое вхождение исследуемых соединений в отличие от hTRPV1-опосредованного вхождения. Преимущественно, в этой системе анализа используется активируемое при нагревании открывание каналов hTRPV1 с последующей оценкой блокирования внутреннего натриевого канала. Этот анализ позволяет соединению с постоянным зарядом селективно входить через открытые каналы hTRPV1, и может быть оценена и измерена эффективность соединения для ингибирования натриевых каналов со стороны цитоплазмы той же клетки.

В модифицированном анализе FLIPR® используются клетки, которые функционально экспрессируют hTRPV1.

При использовании в настоящем документе термин «функционально экспрессируют» включает те клетки, которые экспрессируют белок TRPV1 человека и которые реагируют на раздражитель, который естественным образом открывает этот канал, включая, например, тепловое (например, нагревание) или химическое (например, капсаицин, лидокаин) воздействие, описанное в настоящем документе. Применимые анализы могут включать анализы кальция или трансмембранного потенциала, описанные в настоящем примере (смотри, например, Пример 36). Однако в данной области известны другие функциональные анализы (например, электрофизиологические испытания с фиксацией потенциала, такие как те, которые были использованы учеными в Binshtok et al., Nature 449(4) 607-610, 2007).

Для экспрессии и создания TRPV1 в цис или в транс могут быть выбраны соответствующие клетки, с использованием известных методик. В одном варианте воплощения для экспрессии hTRPV1 выбрана клеточная линия нейробластомы, такая как N1E115 [CRL-2263] или ND7/23 [ECACC, код по каталогу: 92090903]. Однако могут быть выбраны другие клеточные линии нейробластомы, например, такие как IMR-32 [CRL-127]; Neuro-2a [CRL-131]; NB41A3 [CRL-147]; B104-1-1 [CRL-1887]; SK-N-AS [CRL-2137]; SK-N-F1 [CRL-2142]; SK-N-DZ [CRL-2149]; SH-SY5Y [CRL-2266]; BE(2)-M17 [CRL-2267]; BE(2)-C [CRL-2268]; MC-IXC [CRL-2270]; SK-N-BE(2) (CRL-2271); CHP-212 (CRL-2273]; B35 [CRL-2754], которые имеются в продаже у компании American Type Culture Collection, Манассас, штат Вирджиния (США). Могут быть выбраны и другие клеточные линии.

Для формирования описания способа получения клеток смотри, в общем, например, публикацию Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Колд Спринг Харбор, штат Нью-Йорк (США), 2001 год. В одном варианте воплощения устойчивая клеточная линия может быть получена с использованием методик, описанных в публикации Sambrook et al., при помощи hTRPV1-кодирующих последовательностей дикого типа (дт) или рекомбинантных последовательностей. Например, получение одной такой клеточной линии подробно описано в настоящем документе (смотри Пример 32). Получение другой клеточной линии описано в WO 2007/0066068; способ LipofectAMINE^® может быть использован для трансфекции TRPV1 и hTRPV1 в человеческие эмбриональные клетки почек (HEK293) по методике производителя (Gibco). Для создания устойчиво экспрессирующей клеточной линии, дт-TRPV1-трансфицированные клетки HEK могут быть субклонированы в генетицин (0,6 мг/мл), содержащий среду (DMEM, содержащую 10% FCS, 10 Е/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 250 нг/мл амфотерицина В) и размножены в течение двух недель для обеспечения возможности отбора. Для получения одной клеточной линии, постоянно экспрессирующей TRPV1, трансфицированные клетки могут быть помещены в 96-луночные планшеты (по 1 клетке на лунку), а колонии, выращенные из одной клетки, затем испытывают на восприимчивость к капсаицину путем измерения увеличения внутриклеточного содержания кальция. Окончательно отобранные клоны подвергают еще трем циклам клонирования из одной клетки, чтобы убедиться, что клеточные линии получены из одной клетки. Специалистам в данной области легко понятны варианты этой методики. В другом варианте воплощения клетки могут быть отобраны из устойчивой клеточной линии для экспрессии hTRPV1, в транс, например, из вирусного вектора или другого соответствующего генетического элемента.

В одном варианте воплощения выбран белок hTRPV1, который имеет последовательность SEQ ID NO:1 [номер доступа NCBI NM_080706.3].

1 MKKWSSTDLG AAADPLQKDT CPDPLDGDPN SRPPPAKPQL STAKSRTRLF GKGDSEEAFP

61 VDCPHEEGEL DSCKTITVSP VITIQRPGDG KTGARLLSQD SVAASTEKTL RLYDRRSIFE

121 AVAQNNCQDL ESLLLFLQKS KKHLTDNEFK DPETGKTCLL KAMLNLHDGQ NTTIPLLLEI

181 ARQTDSLKEL VNASYTDSYY KGQTALHIAI ERRNMALVTL LVENGADVQA AAHGDFFKKT

241 KGRPGFYFGE LPLSLAACTN QLGIVKFLLQ NSWQTADISA RDSVGNTVLH ALVEVADNTA

301 DNTKFVTSMY NEILMLGAKL HKTLKLEELT NKKGMTPLAL AAGTGKIGVL AYILQREIQE

361 PECRHLSRKF TEWAYGPVHS SLYDLSCIDT CEKNSVLEVI AYSSSETPNR HDMLLVEPLN

421 RLLQDKWDRF VKRIFYFNFL VYCLYMIIFT MAAYYRPVDG LPPFKMEKTG DYFRVTGEIL

481 SVLGGVYFFF RGIQYFLQRR PSMKTLFVDS YSEMLFFLQS LFMLATVVLY FSHLKEYVAS

541 MVFSLALGWT NMLYYTRGFQ QMGIYAVMIE KMILRDLCRF MFVYIVFLFG FSTAVVTLIE

601 DGKNDSLPSE STSHRWRGPA CRPPDSSYNS LYSTCLELFK FTIGMGDLEF TENYDFKAVF

661 IILLLAYVIL TYILLLNMLI ALMGETVNKI AQESKNIWKL QRAITILDTE KSFLKCMRKA

721 FRSGKLLQVG YTPDGKDDYR WCFRVDEVNW TTWNTNVGII NEDPGNCEGV KRTLSFSLRS

781 SRVSGRHWKN FALVPLLREA SARDRQSAQP EEVYLRQFSG SLKPEDAEVF KSPAASGEK

Однако специалистам в данной области понятно, что могут быть сделаны незначительные изменения этой последовательности при условии сохранения заданной функциональности белка. Альтернативно, может быть выбран другой белок TRPV1 (например, из морской свинки, мыши или других видов), и эта последовательность может быть модифицирована для применения в настоящем изобретении. Такие модификации могут быть сделаны по многим причинам, включая, например, необходимость улучшения выхода или очистки.

Для получения hTRPV1-экспрессирующих клеток отбирают конструкт, содержащий кодирующую последовательность для указанной выше последовательности hTRPV1. В одном варианте воплощения кодирующая последовательность является любой последовательностью, которая кодирует указанный выше белок. В другом варианте воплощения кодирующую последовательность выбирают из одного из четырех вариантов транскриптов, описанных в NCBI для человеческого TRPV1 (hTRPV1), (NM_018727.5, NM_080704.3, NM_080705.3 и NM_080706.3). Функциональная последовательность, кодирующая белок (ОРС - открытая рамка считывания), для всех четырех транскриптов является одинаковой. В представленных ниже примерах конструкт содержит только функциональную последовательность, кодирующую белок. Однако в другом варианте воплощения может быть использован также другой вариант, включая самый длинный вариант (вариант 3, номер доступа NCBI: NM_080706.3). В другом варианте воплощения выбрана другая ОРС или другая последовательность, содержащая ОРС. В одном варианте воплощения последовательность клонируют из существующего конструкта, как описано в представленных ниже примерах. В другом варианте воплощения используют рекомбинантную последовательность.

Несмотря на то, что возможно применение клеток, инфицированных или трансфицированных, так что они экспрессируют hTRPV1 в транс, желательным является применение клеточной линии, которая устойчиво экспрессирует hTRPV1 канал. Такие клеточные линии могут быть созданы специалистами в данной области с использованием информации, содержащейся в настоящем документе и известной в данной области.

В одном варианте воплощения, для получения клеточной линии, hTRPV1 амплифицируют при помощи ПЦР из кДНК IMR322 (клеточная линия нейробластомы). Полученный продукт ПЦР, содержащий кодирующую последовательность белка hTRPV1, клонируют в производящий вектор под управлением мощного промотора. Как показано ниже, был использован промотор цитомегаловируса человека. Однако может быть использован также другой промотор с сильной конститутивной экспрессией в клетках-хозяевах млекопитающих. Необязательно, последовательность может быть изменена при помощи ПЦР. Клетки, подлежащие трансфекции (например, клетки N1E115), получают при помощи липофектамина 2000 (Invitrogen, № по каталогу 11668-019), как описано в настоящем документе. Трансфицированные клетки переносят с использованием обычных способов, и были использованы стандартные приемы трансфекции. К концу второй недели появляются трансфицированные устойчивые колонии, которые затем разрастаются и испытываются функциональными анализами. Окончательные клональные кандидаты для исследования были отобраны на основании данных функционального анализа. В этих анализах оценивают способность клеток экспрессировать hTRPV1 функциональным образом, то есть таким образом, что при соприкосновении, по меньшей мере, с одним из раздражителей, на которые реагирует дт-hTRPV1, открывается канал hTRPV1. Например, клетка, экспрессирующая функциональный hTRPV1, может реагировать на капсаицин или на нагревание, или на другую химическую, механическую или физическую характеристику раздражителя hTRPV1 в естественных условиях. Примеры соответствующих анализов описаны ниже в Примере 36 и включают анализы трансмембранного потенциала и кальция. Другие применимые анализы включают стандартные подходы электрофизиологических испытаний единичных клеток с фиксацией потенциала, такие как были использованы учеными Binshtok et al., Nature 449(4) 607-610, 2007. Анализ TRPV1 выполняют с использованием платформы измерений флуоресценции FLIPR®-384 (Molecular Devices, Inc.), работающей в режиме анализа трансмембранного потенциала, или другой соответствующей системы, используя hTRPV1-экспрессирующие клетки, описанные в настоящем документе. Наборы для анализа трансмембранного потенциала FLIPR® (синий и красный) имеются в продаже у компании Molecular Devices Corp (Саннивейл, штат Калифорния, США), которая поставляет многие из красителей и материалов, использованных в следующем анализе. Однако аналогичные материалы могут быть приобретены из других источников, по необходимости или по желанию.

В анализе, описанном в настоящем документе, используется способ активации канала TRPV1, который отличается от обычно описываемого в литературе и данной области техники (то есть капсаицина). Доказано, что применение капсаицина для открывания канала hTRPV1 в клетках неприменимо, поскольку он ослабляет диапазон сигнал-шум последующего компонента анализа, реакции натриевого канала, в клеточной линии hTRPV1-N1E115. Альтернативно, предполагается, что в качестве замены данной клеточной линии может быть использована другая клеточная линия, полученная так, как описано в настоящем документе. Следовательно, необходимо разработать другой способ открывания этого канала. Было обнаружено, что способ тепловой активации, использованный в настоящем документе, дает надежные и воспроизводимые характеристики.

Этот анализ легко выполняют в многолуночных аналитических планшетах, в которые добавляют клетки в питательной среде и инкубируют их при условиях, обеспечивающих образование сплошного монослоя в течение нескольких часов до начала анализа. Могут быть использованы стандартные среды и условия для выращивания. Для каждого эксперимента готовят второй экземпляр клеточных аналитических планшетов.

Отработанную среду из планшетов, в которые были высеяны клетки, удаляют в день анализа и заменяют синим красителем для трансмембранного потенциала (Molecular Devices). Краситель был приготовлен в аналитическом буфере по инструкциям производителя. Планшет с красителем инкубируют при комнатной температуре (около 25°C) в течение около 30 минут для предварительного наполнения клеток красителем. Необязательно, клетки могут быть наполнены красителем одновременно с добавлением испытываемых соединений.

Иллюстративный аналитический буфер был приготовлен с использованием очищенной, деионизированной воды в соответствии с Таблицей 1. Несмотря на то, что определенные компоненты могут варьироваться, для применения в этом анализе желательна ионная природа аналитического буфера. Значение рН было доведено до 7,4 при помощи гидроксида калия, а объем дополнили водой Milli-Q (Millipore) до 500 мл. Если не упомянуто иное, то все разбавления были выполнены в Аналитическом Буфере.

Таблица 1СольКонцентрация (мМ)NaCl150KCl3,25CaCl₂ 2H₂O2MgCl₂ 6H₂O3HEPES10Глюкоза11 (198 мг/100 мл)

Исследуемые соединения разбавили в Аналитическом Буфере и добавили в каждую лунку определенного 384-луночного «планшета с соединением», который служит в качестве исходного планшета для добавления соединения с использованием платформы FLIPR®. Концентрацию соединений в планшете с соединением довели до заданной конечной концентрации при добавлении клеток в «планшет с клетками». После завершения периода инкубации с красителем, планшеты с клетками, наполненные красителем, и исходные планшеты с соединением вставляют в устройство FLIPR®Tetra™ с матрицей из 384 наконечников FLIPR^® (Molecular Devices, Inc.) по инструкциям производителя. Соединения автоматически добавляют к планшетам с клетками, наполненным красителем, используя программу, встроенную в прибор FLIPR®Tetra™.

Сразу после добавления соединения в одном из двух экземпляров клеточных планшетов активируют hTRPV1 при помощи нагревания. В частности, весь многолуночный планшет, содержащий смесь соединения и клеток, инкубируют при 47°C в течение 10 минут, после чего их возвращают в комнатную температуру (около 25°C) на следующие 30 минут. Тепловую активацию hTRPV1 не выполняли для второго планшета с клетками, который просто выдерживали при комнатной температуре все 40 минут.

Реакцию на трансмембранный потенциал определяют в клетках, наполненных красителем и соединением, путем добавления вератридина, который, как известно, является «агонистом» натриевого канала. Как показано в примере, представленном в настоящем документе, планшет с агонистом, содержащий вератридин (Sigma), приготавливают заранее и вставляют в соответствующее устройство, такое как, например, устройство FLIPR® TETRA® для «2-го добавления» по инструкциям производителя. Концентрацию вератридина в «планшете с агонистом» довели до конечной концентрации 100 мкМ при добавлении клеток в планшет с клетками. Также могут быть использованы конечные концентрации вератридина больше или меньше 100 мкМ, но сигнал, измеренный устройством FLIPR®^Tetra™ или другим соответствующим устройством, может соответственно изменяться.

Воздействие вератридина на клетки в планшете с клетками вызывает открывание натриевых каналов в клетках, а результирующий поток ионов создает деполяризацию трансмембранного потенциала, которая обнаруживается как флуоресцентный сигнал прибором FLIPR® Tetra^™. Активность исследуемых соединений определяют по их способности ослаблять вератридин-индуцированный флуоресцентный сигнал, где наиболее сильнодействующими веществами являются те, которые демонстрируют усиление активности в активированном нагреванием планшете с клетками по сравнению с планшетом с клетками, не активированным нагреванием. Эта дифференциальная активность отражает усиленное поглощение соединения активированными нагреванием и открытыми hTRPV1 каналами и основывается на том факте, что для блокирования натриевого канала необходимо, чтобы исследуемое соединение действовало с цитоплазматической стороны клеточной мембраны.

После оценки при помощи этих скрининговых анализов, соединения могут быть выбраны для изучения в моделях на животных. Стандартную оценку обезболивающего действия соединений выполнили с использованием аппарата для испытания боли при щипке на грызунах (Bioseb (Франция)). Щипок кожи обеспечивает механический раздражитель, который может быть классифицирован, и который является особенно применимым для оценки острого механического раздражения (как описано в публикации AM Binshtok et al., Anesthesiology, июль 2009 года, 111(1):127-137, которая включена в настоящий документ путем ссылки). Другой, обычно используемой моделью боли на грызунах является испытательный прибор Hargreaves plantar (IITC (США)), который особенно применим для оценки термической ноцицепции. В другой модели используется рефлекторная реакция кожного пучка мышц под действием булавочного укола (так называемая модель CTMR) для оценки кожного обезболивания после локализованной подкожной инъекции обезболивающего средства (публикация Khan et al., Anesthesiology, январь 2002 года, 96(1):109-116, которая включена в настоящий документ путем ссылки).

Следующие примеры являются лишь иллюстративными, и они не предназначены для ограничения настоящего изобретения.

ПРИМЕРЫ

Если не указано иное, то все исходные материалы были приобретены из общеизвестных источников, имеющихся на рынке.¹H-ЯМР спектры были записаны с использованием триметилсилана (ТМС) в качестве внутреннего стандарта для соединений, растворенных в CDCl₃. Для соединений, растворенных в ДМСО-d₆, MeOD и D₂O, прибор был калиброван при δ 2,5, 3,3 и 4,82 м.д., соответственно. Значения химических сдвигов указаны в δ (миллионные доли).

Для анализа жидкостной хроматомасс-спектрометрии (LCMS) использовали прибор LCMS/MS API 2000 (Applied Biosystem). Колонки включали:

Колонка V: колонка Zorbax® C18, 4,6×50 мм, 5 мкм

Колонка W: колонка Zorbax® Extend C18, 4,6×50 мм, 5 мкм

Колонка X: колонка Gemini® NX C18, 4,6×50 мм, 5 мкм

Колонка Y: колонка Xbridge® C18, 4,6×50 мм, 5 мкм

Колонка Z: колонка Reprosil®, 4,6×50 мм, 5 мкм

Элюент (растворитель) обычно включал (кислотный или основной буфер в качестве водной фазы):

Канал А: (i) 0,05% муравьиной кислоты в воде;

(ii) 10 мМ ацетата аммония в воде; или

(iii) 0,05% ТФК в воде.

Канал В: ацетонитрил (органическая фаза).

Показатели УФ-датчика замеряли при двух длинах волн: 220 и 260 нм.

Градиенты LCMS были одними из следующих:

1. Контроль реакции по LCMS и способ анализа конечного соединения (для соединений с общей полярностью)

Условия градиента: Время хроматографирования 5 минут

Программы времени: P1:10 мМ ацетата аммония в

воде/ацетонитриле

Q1: 0,05% ТФК в воде/ацетонитриле,

R1: 0,05% муравьиной кислоты в воде/ацетонитриле.

Содержание ацетонитрила в градиенте варьировалось от 10% до 90% до 10%.

Скорость потока: 1,2 мл/минута.

2. Контролирование реакции по LCMS и способ анализа конечного соединения при 12 минутах хроматографии (для близко элюируемых соединений):

Условия градиента: Время хроматографирования 12 минут

Программы времени: P2: 10 мМ ацетата аммония в

воде/ацетонитриле

Q2: 0,05% ТФК в воде/ацетонитриле

R2: 0,05% муравьиной кислоты в воде/ацетонитриле

Содержание ацетонитрила в градиенте варьировалось от 5% до 90% до 5%

Скорость потока: 1,0 мл/минута.

3. LCMS после разработки способа в HPLC - условия градиента, как для HPLC.

Масс-спектральные данные были получены с использованием следующего:

Способ ионизации: ESI (электрораспылительная ионизация) с использованием источника API

(ионизации при атмосферном давлении)

Потенциал декластеризации: 10-70 В зависимости от ионизации

соединения

Массовый диапазон:100-800 а.е.м.Тип сканирования:Q1Полярность:+/-veИсточник ионов:Turbo sprayНапряжение ионораспыления:+5500 для режима +ve и -4500 для режима -veТемпература источника массы:200°C

Анализ HPLC был выполнен с использованием приборов Shimadzu® LC-2010, Agilent® серии 1200 и Waters® Alliance® HT. Колонки включали:

(i) колонка Zorbax® SB C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм

(ii) колонка Atlantis® dC18 (150×4,6 мм) 5 мкм

(iii) колонка Gemini® NX C18 (50×4,6 мм) 3 мкм

(iv) колонка XBridge® C18 (50×4,6 мм) 3 мкм

(v) колонка XBridge® C18 (50×4,6 мм) 5 мкм

(vi) колонка XTerra® C18 (250×4,6 мм) 5 мкм

(vii) колонка Gemini® C18 (50×4,6 мм) 5 мкм

(viii) колонка Zorbax® SB-C18 (4,6×50 мм) 5 мкм

(ix) колонка Sunfire®-C18 (150×4,6 мм) 5 мкм.

Подвижные фазы включали следующие компоненты, а градиенты подвижной фазы изменялись от А. 90% до 10% до 90%. Скорость потока составляла 1 мл/минуту.

A. 0,05% ТФК в воде, 0,05% HCOOH в воде, 0,05% уксусной кислоты в воде, 10 мМ ацетата аммония в воде (кислотный или основной буфер); и

Б. ацетонитрил или метанол (органическая фаза).

Анализ сверхпроизводительной жидкостной хроматографии (UPLC) был выполнен с использованием приборов Agilent® серии 1100 и серии 1200. Колонки включали:

(i) колонка Zorbax® SB C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм

(ii) колонка Zorbax® XDB C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм

(iii) колонка Gemini® NX C18 (50×4,6 мм) 3 мкм

(iv) колонка XBridge® C18 (50×4,6 мм) 3 мкм,

которые использовались при комнатной температуре. Подвижная фаза включала следующие компоненты, а градиенты подвижной фазы изменялись от А. 95% до 5% до 95%. Скорость потока варьировалась от 0,8 до 1 мл/минута.

0,05% ТФК в воде, 0,05% HCOOH в воде

Б. Ацетонитрил

Пример 1: Общий способ А1 - Получение (S)-1,1,-дипропил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния йодида

A. Трет-Бутиловый эфир (S)-2-(метоксикарбонилметил)пиперидин-1-карбоновой кислоты (Соединение 2)

К перемешанному раствору boc-L-пипеколиновой кислоты (1; 15 г, 68,10 ммоль) в тетрагидрофуране (ТГФ; 175 мл) добавили N-метилморфолин (9,4 мл, 85,12 ммоль) при -30°C, затем по каплям добавили изобутил хлорформиат (9,8 мл, 74,90 ммоль) при -30°С. Полученную смесь перемешивали при этой температуре в течение 1 часа. Затем к реакционной смеси добавили раствор диазометана в диэтиловом эфире и перемешивали смесь при комнатной температуре (rt) в течение 16 часов. Реакционную смесь погасили добавлением ледяной уксусной кислоты (10 мл), а затем концентрировали. Остаток растворили в диэтиловом эфире (500 мл), промыли водой (100 мл) и насыщенным солевым раствором (25 мл). Объединенные органические слои высушили, отфильтровали и концентрировали.

Неочищенный материал растворили в метаноле (130 мл), частями добавили бензоат серебра (4 г) в условиях ледяного охлаждения, и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 16 часов. К реакционной смеси добавили насыщенный солевой раствор (50 мл) и отфильтровали через реагент Целит®, и промыли метанолом. Органический слой выпарили in vacuo, остаток разбавили этилацетатом (EtOAc, 470 мл) и промыли водой (50 мл) и насыщенным солевым раствором (20 мл). Органический слой высушили, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией, используя силикагель размером 230-400 меш, элюируя 3% EtOAc в гексане, для получения соединения 2 в виде жидкости.

Выход: 10,2 г (58,28%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 4,51 (с, 1H), 3,81 (д, J=11 Гц, 1H), 3,57 (с, 3H), 2,77-2,74 (м, 1H), 2,55 (д, J=7 Гц, 2H), 1,58-1,52 (м, 6H), 1,37 (с, 9H);

LCMS: [M+H]=258,2, RT=3,55 минуты, (программа R1, колонка X).

Б. Метиловый эфир (S)-2-(1-бензил-пиперидин-2-ил)уксусной кислоты (Соединение 4)

К перемешанному раствору соединения 2 (10 г, 38,91 ммоль) в дихлорметане (ДХМ; 70 мл) по каплям добавили трифторуксусную кислоту (ТФК; 20 мл) в условиях ледяного охлаждения, и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 4 часов. Растворитель выпарили из реакционной смеси in vacuo. Неочищенный материал растворили в ацетонитриле (130 мл), частями добавили K₂CO₃ (27 г, 194,55 ммоль) в условиях ледяного охлаждения, и перемешивали смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавили бензилбромид (3; 7 мл, 58,37 ммоль) и полученную смесь нагревали при 100°C в течение 16 часов. Смесь отфильтровали и промыли EtOAc. Органический слой промыли водой (75 мл) и насыщенным солевым раствором (30 мл). Объединенные органические слои высушили, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 4,5% EtOAc в гексане, для получения соединения 4 в виде жидкости.

Выход: 6,1 г (63,47%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,32-7,21 (м, 5H), 3,75 (д, J=14 Гц, 1H), 3,58 (с, 3H), 3,30 (д, J=14 Гц, 1H), 2,87-2,84 (м, 1H), 2,69 (дд, J=15, 5 Гц, 1H), 2,56-2,52 (м, 1H), 2,47-2,41 (м, 1H), 2,15-2,10 (м, 1H), 1,64-1,52 (м, 2H), 1,44-1,32 (м, 4H);

LCMS: [M+H]=248,0, RT=3,61 минут (программа P1, колонка Y).

В. (S)-2-(1-Бензил-пиперидин-2-ил)этанол (Соединение 5)

К перемешанному раствору соединения 4 (6 г, 24,29 ммоль) в сухом ТГФ (200 мл) по каплям добавили диизобутилалюминия гидрид (DIBAL-H; 1,2 М в толуоле, 81 мл, 97,16 ммоль) при -30°C. Затем реакционную смесь перемешивали при 0-5°C в течение 4 часов. Реакционную смесь погасили добавлением насыщенного раствора NH₄Cl (15 мл) при -50°C. Реакционную смесь концентрировали и разбавили EtOAc. Органический слой промыли водой и насыщенным солевым раствором, высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали для получения соединения 5.

Выход: 5,1 г (95,87%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,30-7,18 (м, 5H), 4,40 (с, 1H), 3,87 (д, J=14 Гц, 1H), 3,51-3,44 (м, 2H), 3,23 (д, J=14 Гц, 1H), 2,62-2,58 (м, 1H), 2,44-2,42 (м, 1H), 2,05-2,00 (м, 1H), 1,82-1,77 (м, 1H), 1,66-1,59 (м, 3H), 1,40-1,23 (м, 5H);

LCMS: [M+H]=220,5, RT=1,78 минуты (программа P1, колонка Y).

Г. (S)-1-Бензил-2-(2-хлорэтил)пиперидин (Соединение 6)

Раствор соединения 5 (3,5 г, 15,98 ммоль), тионилхлорида (6 мл) и четырех капель концентрированной HCl в хлороформе (40 мл) нагревали при 75°C в течение 16 часов. Реакционную смесь концентрировали, добавили насыщенный раствор бикарбоната натрия (50 мл) и экстрагировали продукт EtOAc. Органический слой отделили и промыли водой и насыщенным солевым раствором, высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 3,5% EtOAc в гексане, для получения соединения 6 в виде жидкости.

Выход: 3,1 г (81,85%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,30-7,22 (м, 5H), 3,82 (д, J=14 Гц, 1H), 3,72-3,62 (м, 2H), 3,32-3,30 (м, 1H), 2,63-2,55 (м, 2H), 2,12-2,04 (м, 2H), 1,99-1,89 (м, 1H), 1,66-1,59 (м, 2H), 1,42-1,32 (м, 4H);

LCMS: [M+H]=237,8, RT=3,78 минут (программа P1, колонка Y).

Д. (S)-N-[2-(1-Бензил-пиперидин-2-ил)этил]-N-фенилиндан-2-ил-амин (Соединение 8)

К перемешанному раствору NaNH₂ (0,74 г, 18,99 ммоль) в толуоле (80 мл) по каплям добавили раствор соединения 7 (2,91 г, 13,92 ммоль) в толуоле (10 мл) в условиях ледяного охлаждения, и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем к реакционной смеси по каплям добавили раствор соединения 6 (3 г, 12,66 ммоль) в толуоле (10 мл) в условиях ледяного охлаждения, и нагревали смесь при 110°C в течение 16 часов. Эту реакционную смесь разбавили EtOAc (70 мл) и промыли водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 11,2% EtOAc в гексане, для получения соединения 8, которое выделили в виде липкого твердого вещества.

Выход: 1,5 г (28,90%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,30-7,10 (м, 11H), 6,79 (д, J=8 Гц, 2H), 6,64 (т, J=7 Гц, 1H), 4,64-4,61 (м, 1H), 3,67 (д, J=14 Гц, 1H), 3,23-3,15 (м, 5H), 2,95-2,90 (м, 2H), 2,53-2,50 (м, 1H), 2,31 (уш.с, 1H), 2,02-1,98 (м, 1H), 1,67-1,60 (м, 2H), 1,51-1,49 (м, 2H), 1,35-1,17 (м, 4H);

LCMS: [M+H]=411,0, RT=3,20 минуты (программа P1, колонка Y).

Е. (S)-2-N-Фенил-N-[2-(пиперидин-2-ил)этил]индан-2-ил-амин (Соединение 9)

Перемешанный раствор соединения 8 (0,55 г, 1,34 ммоль) и формиата аммония (0,85 г, 13,41 ммоль) в метаноле (30 мл) продували N₂ в течение 30 минут. Добавили десятипроцентный Pd-C (0,07 г) и продолжали перемешивание еще 5 минут. Полученную смесь нагревали при 100°C в течение 3 часов. Реакционную смесь отфильтровали через реагент Целит® и промыли метанолом. Фильтрат концентрировали, а неочищенный материал растворили в 50% смеси ацетонитрил-вода и лиофилизировали для получения соединения 9.

Выход: 0,4 г (93,14%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7,24-7,10 (м, 6H), 6,81 (д, J=8 Гц, 2H), 6,63 (т, J=7 Гц, 1H), 4,68-4,60 (м, 1H), 3,38-3,36 (м, 1H), 3,24-3,11 (м, 3H), 2,96 (дд, J=16, 8 Гц, 2H), 2,93-2,88 (м, 1H), 2,45-2,35 (м, 2H), 1,66-1,65 (м, 1H), 1,47-1,45 (м, 4H), 1,27-1,23 (м, 2H), 0,96-0,93 (м, 1H);

LCMS: [M+H]=320,8, RT=3,03 минуты (программа P1, колонка Y).

Ж. (S)-N-Фенил-N-[2-(1-пропил-пиперидин-2-ил)этил]индан-2-ил-амин (Соединение 11)

К перемешанному раствору соединения 9 (0,35 г, 1,09 ммоль) в метаноле (15 мл) добавили NaCNBH₃ (0,082 г, 1,2 ммоль) в условиях ледяного охлаждения, а затем перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 30 минут. К реакционной смеси по каплям добавили пропанальдегид (10; 0,1 мл, 1,37 ммоль) в условиях ледяного охлаждения, и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь концентрировали на ротационном испарителе. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 4,6% MeOH в ДХМ для получения соединения 11.

Выход: 0,37 г (93,59%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,22-7,15 (м, 6H), 6,89-6,87 (м, 2H), 6,73-6,70 (м, 1H), 4,63-4,61 (м, 1H), 3,33-3,31 (м, 1H), 3,23-3,16 (м, 6H), 2,99-2,94 (м, 4H), 1,99-1,97 (м, 1H), 1,72-1,53 (м, 10H), 0,85-0,82 (м, 6H);

LCMS: [M+H]=363,0, RT=3,44 минуты (программа P1, колонка Y).

3. (S)-1,1-Дипропил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния йодид

К перемешанному раствору соединения 11 (0,25 г, 0,69 ммоль) в дихлорэтане (ДХЭ, 5 мл) добавили K₂CO₃ (1,15 г, 8,29 ммоль) и 1-йодпропан (3 мл) в закрытой пробирке и нагревали смесь при 65°C в течение 16 часов. Реакционную смесь отфильтровали и промыли ДХМ. Органический слой концентрировали на ротационном испарителе. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 5,3% метанолом (MeOH) в ДХМ, для получения (S)-1,1-дипропил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния йодида.

Выход: 0,12 г (31,32%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,25-7,16 (м, 6H), 6,87 (д, J=8 Гц, 2H), 6,73 (т, J=7 Гц, 1H), 4,67-4,64 (м, 1H), 3,40-3,35 (м, 2H), 3,27-3,13 (м, 8H), 3,01-2,95 (м, 3H), 1,95-1,82 (м, 2H), 1,70-1,50 (м, 10H), 0,87 (т, J=7 Гц, 3H), 0,80 (т, J=7 Гц, 3H);

LCMS: [M⁺]=405,4, RT=3,49 минуты;

UPLC: 98,00%, RT=4,03 минуты, λ_200нм, подвижная фаза (i) 0,05% ТФК в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB 1,8 мкм.

Альтернативно, соединение Примера 1 может быть получено способом, описанном на Схеме 27.

Пример 2: Общий способ А2 - Получение (S)-1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния йодида

К перемешанной смеси соединения 9 (0,15 г, 0,47 ммоль) и K₂CO₃ (0,78 г, 5,63 ммоль) в ДХЭ (2 мл) добавили этилйодид (2 мл) и нагревали при 65°C в закрытой пробирке в течение 16 часов. Реакционную смесь отфильтровали, промыли MeOH-ДХМ и концентрировали на ротационном испарителе. Коричневатый твердый неочищенный материал очистили, используя колоночную хроматографию с силикагелем 230-400 меш, элюируя 4% MeOH в ДХМ. Твердый материал растирали с эфиром-гексаном для получения (S)-1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния йодида.

Выход: 0,17 г (71,62%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,26-7,16 (м, 6H), 6,87 (д, J=8 Гц, 2H), 6,72 (т, J=7 Гц, 1H), 4,68-4,61 (м, 1H), 3,52-3,47 (м, 1H), 3,39-3,16 (м, 9H), 3,04-2,92 (м, 3H), 1,88-1,85 (м, 2H), 1,66-1,47 (м, 6H), 1,19-1,08 (м, 6H);

LCMS: [M⁺]=377,8, RT=3,33 минуты;

HPLC: 97,43%, RT=2,73 минуты, λ_200нм, подвижная фаза (i) 0,05% HCOOH в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB-C18 (4,6×50 мм) 1,8 мкм.

Альтернативно, соединение Примера 2 может быть получено способом, описанном на Схеме 27.

Пример 3: Общий способ В1 - Получение 1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино)метил]пиперидиния йодида

A. (1-Бензилпиперидин-2-ил)метанол (соединение 13)

К перемешанному раствору пиперидин-2-метанола (12; 6 г, 52,09 ммоль) в диметилформамиде (ДМФ, 50 мл) последовательно добавили K₂CO₃ (10,78 г, 78,14 ммоль) и бензилбромид (6,85 мл, 57,30 ммоль) при 0°C и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 16 часов. Затем реакционную смесь отфильтровали, а фильтрат концентрировали. Остаток растворили в EtOAc, а органический слой промыли водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией на силикагеле 230-400 меш, элюируя 30% EtOAc в гексане, для получения соединения 13.

Выход: 6,0 г (56,6%);

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ 7,37-7,21 (м, 5H), 4,05 (д, J=13 Гц, 1H), 3,85 (дд, J=11, 4 Гц, 1H), 3,50 (дд, J=11,4 Гц, 1H), 3,30 (д, J=13 Гц, 1H), 2,88-2,83 (м, 1H), 2,69 (уш.с, 1H), 2,47-2,43 (м, 1H), 2,17-2,11 (м, 1H), 1,70-1,54 (м, 4H), 1,40-1,33 (м, 2H).

Б. 1-Бензил-2-(хлорметил)пиперидин (соединение 14)

К перемешанному раствору соединения 13 (3,6 г, 15,00 ммоль) в хлороформе (50 мл) добавили тионилхлорид (1,34 мл) при 0°C. Реакционную смесь нагревали с дефлегматором в течение 2 часов, а затем концентрировали. Остаток растворили в EtOAc и промыли насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией на силикагеле 230-400 меш, элюируя 10% EtOAc в гексане, для получения соединения 14 в виде маслянистого вещества.

Выход: 3,2 г (82,0%);

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ 7,37-7,28 (м, 4H), 7,23-7,21 (м, 1H), 4,01-3,96 (м, 1H), 3,79-3,66 (м, 2H), 3,32 (д, J=13 Гц, 1H), 2,76-2,72 (м, 1H), 2,61 (уш.с, 1H), 2,13-2,11 (м, 1H), 1,73-1,50 (м, 5H), 1,42-1,33 (м, 1H);

LCMS: [M+H]=224,2, RT=3,77 минуты (программа P1, колонка Y).

В. N-[(1-Бензил-пиперидин-2-ил)метил]-N-фенилиндан-2-ил-амин (соединение 15)

К перемешанному раствору амида натрия (706 мг, 18,1 ммоль) в толуоле (10 мл) добавили раствор соединения 7 (2,76 г, 13,2 ммоль) в толуоле (10 мл) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. К реакционной смеси добавили раствор соединения 14 (2,69 г, 12,1 ммоль) в толуоле, и полученную смесь нагревали с дефлегматором в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавили EtOAc и промыли водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией на силикагеле 230-400 меш, элюируя 15% EtOAc в гексане, для получения соединения 15.

Выход: 1,5 г (31,9%);

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ 7,32-7,27 (м, 4H), 7,23-7,13 (м, 7H), 6,89 (д, J=8 Гц, 2H), 6,80 (д, J=7 Гц, 1H), 4,54-4,50 (м, 1H), 4,11 (д, J=14 Гц, 1H), 3,57 (дд, J=14, 4 Гц, 1H), 3,32 (д, J=14 Гц, 1H) 3,24-3,04 (м, 5H), 2,76-2,71 (м, 1H), 2,64-2,62 (м, 1H), 2,16-2,10 (м, 1H), 1,82-1,76 (м, 1H), 1,63-1,61 (м, 1H), 1,48-1,31 (м, 4H).

Г. N-Фенил-N-(пиперидин-2-илметил)индан-2-ил-амин (соединение 16)

Раствор соединения 15 (1,5 г, 3,79 ммоль) в метаноле (50 мл) продували аргоном в течение 20 минут. Затем добавили формиат аммония (2,33 г, 37,87 ммоль) и продували раствор еще 10 минут. Добавили Pd-C (10%; 216 мг) и нагревали реакционную смесь с дефлегматором в течение 3 часов. Реакционную смесь отфильтровали через реагент Целит® и промыли метанолом. Фильтрат концентрировали, а неочищенный материал очистили хроматографией на силикагеле 230-400 меш, элюируя 2% метанола в ДХМ, для получения соединения 16.

Выход: 1,06 г (92,1%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,21-7,13 (м, 6H), 6,95 (д, J=8 Гц, 2H), 6,73 (т, J=7 Гц, 1H), 4,67-4,63 (м, 1H), 3,15-2,93 (м, 7H), 2,68-2,66 (м, 1H), 2,45-2,42 (м, 1H), 1,70-1,60 (м, 2H), 1,51-1,48 (м, 1H), 1,33-1,19 (м, 2H), 1,06-1,00 (м, 1H).

Д. N-[(1-Метил-пиперидин-2-ил)метил]-N-фенилиндан-2-ил-амин (соединение 17)

К перемешанному раствору соединения 16 (0,2 г, 0,65 ммоль) в ДХЭ (10 мл) последовательно добавили формальдегид (35% в H₂O, 0,08 мл, 0,98 ммоль), Na(OAc)₃BH (0,415 г, 1,95 ммоль) и уксусную кислоту (AcOH, 0,1 мл) в условиях ледяного охлаждения. Полученную смесь оставили перемешиваться при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавили ДХМ и подщелачивали NaOH (1 н.). Органический слой отделили и промыли водой и насыщенным солевым раствором, высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией на силикагеле 230-400 меш, элюируя 5% метанола в ДХМ, для получения соединения 17.

Выход: 0,12 г (57,4%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,22-7,13 (м, 6H), 6,88 (д, J=8 Гц, 2H), 6,70 (т, J=7 Гц, 1H), 4,61-4,56 (м, 1H), 3,54 (дд, J=14, 4 Гц, 1H), 3,15-2,96 (м, 5H), 2,71-2,66 (м, 1H), 2,21 (с, 3H), 2,11-2,03 (м, 1H), 2,00-1,91 (м, 1H), 1,70-1,59 (м, 2H), 1,47-1,35 (м, 2H), 1,13-1,06 (м, 2H);

LCMS: [M+H]=321,0, RT=3,32 минуты (программа P1, колонка Y).

Е. 1,1-Диметил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино)метил]пиперидиния йодид

К перемешанному раствору соединения 17 (0,1 г, 0,31 ммоль) в ДХЭ (5 мл) добавили метилйодид (0,058 мл, 0,94 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением, а неочищенный материал очистили кристаллизацией из метанола-эфира для получения 1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино)метил]пиперидиния йодида.

Выход: 0,06 г (41,62%).

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,27(т, J=7,76 Гц, 2H), 7,22-7,19 (м, 2H), 7,15-7,13 (м, 2H), 7,04 (д, J=7,96 Гц, 2H), 6,90 (т, J=7 Гц, 1H), 4,50-4,46 (м, 1H), 3,83 (д, J=12 Гц, 1H), 3,41-3,35 (м, 4H), 3,19 (с, 3H), 3,06 (д, J=8 Гц, 2H), 3,00-2,98 (м, 5H), 1,95-1,92 (м, 1H), 1,79-1,64 (м, 4H), 1,33-1,30 (м, 1H);

LCMS: [M⁺]=335,0, RT=3,26 минуты;

UPLC: 99,72%, RT=3,92 минуты, λ_200нм, подвижная фаза (i) 0,05% ТФК в воде, (i) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB -C18 (4,6×50 мм) 1,8 мкм.

Пример 4: Общий способ В2 - Получение 1,1-диметил-2-[2-((2-фторфенил)(индан-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодида

К перемешанному раствору (2-фторфенил)индан-2-ил-(2-пиперидин-2-ил-этил)амина (100 мг, 0,30 ммоль) в CHCl₃(3 мл) в закрытой пробирке добавили метилйодид (97 мкл, 1,48 ммоль) и карбонат калия (204 мг, 1,48 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при 50°C в течение 16 часов. Затем реакционную смесь отфильтровали через воронку из пористого стекла. Фильтрат концентрировали in vacuo и очистили колоночной хроматографией с силикагелем 230-400, используя MeOH-ДХМ (1-5%) в качестве элюента. Твердое вещество лиофилизировали для получения 1,1-диметил-2-[2-((2-фторфенил)(индан-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодида.

Выход: 84 мг (57,47%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,33 (т, J=15 Гц, 1H), 7,22-7,11 (м, 7H), 4,23-4,19 (м, 1H), 3,42 (д, J=13 Гц, 1H), 3,31-3,22 (м, 2H), 3,10-3,07 (м, 1H), 3,05-3,03 (м, 1H), 3,01-2,99 (м, 1H), 2,91 (с, 3H), 2,88-2,85 (м, 2H), 2,80 (с, 3H), 2,01-1,97 (м, 1H), 1,86-1,76 (м, 2H), 1,69-1,66 (м, 2H), 1,56-1,53 (м, 2H), 1,41-1,34 (м, 3H);

LC-MS: [M⁺]=367, RT=2,64 минуты;

UPLC: 98,63%, RT=3,96 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 0,05% ТФК в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм)

Пример 5: Общий способ С - Получение 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пирролидиния йодида

A. Индан-2-ил-[2-(1-метил-пирролидин-2-ил)этил]фениламин (соединение 19)

К перемешанному раствору амида натрия (256 мг, 6,58 ммоль) в толуоле (10 мл) добавили раствор индан-2-ил-фенил-амина (7; 1,0 г, 4,78 ммоль) в толуоле (5 мл) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. К реакционной смеси добавили раствор 2-(2-хлорэтил)-1-метил-пирролидина гидрохлорида (18; 0,808 г, 4,39 ммоль) в толуоле (5 мл), и полученную смесь нагревали с дефлегматором в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавили EtOAc и промыли водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на нейтральном оксиде алюминия, элюируя 0,8% метанола в ДХМ, для получения соединения 19.

Выход: 0,1 г (7,1%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,26-7,14 (м, 6H), 6,81 (д, J=8 Гц, 2H), 6,65 (т, J=7 Гц, 1H), 4,65-4,62 (м, 1H), 3,22-3,14 (м, 4H), 2,97-2,88 (м, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,94-1,91 (м, 2H), 1,77-1,68 (м, 2H), 1,57-1,53 (м, 2H), 1,29-1,23 (м, 2H);

LCMS: [M+H]=321,0, RT=3,22 минуты (программа P1, колонка Y).

Б. 1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пирролидиния йодид

К перемешанному раствору соединения 19 (0,1 г, 0,31 ммоль) в ДХЭ (3 мл) добавили метилйодид (0,058 мл, 0,94 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением, а неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на нейтральном оксиде алюминия, элюируя 1% метанола в ДХМ, для получения 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пирролидиния йодида.

Выход: 0,06 г (41,8%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,24-7,15 (м, 6H), 6,90 (д, J=8 Гц, 2H), 6,74 (т, J=7 Гц, 1H), 4,65-4,61 (м, 1H), 3,59-3,55 (м, 1H), 3,45-3,39 (м, 6H), 3,24-3,13 (м, 4H), 2,98-2,94 (м, 5H), 2,74 (с, 3H), 2,30-2,21 (м, 1H), 2,02-1,94 (м, 3H), 1,67-1,62 (м, 1H), 1,54-1,50 (м, 1H);

LCMS: [M⁺]=335,4, RT=3,65 минуты;

UPLC: 97,93%, RT=3,37 минуты, λ_200нм, подвижная фаза (i) 0,05% ТФК в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB-C18 (4,6×50 мм) 1,8 мкм.

Пример 6: Общий способ получения N-(индан-2-ил)фениламина (соединение 7)

К перемешанному раствору 2-инданона (5 г, 37,83 ммоль) в ДХМ (135 мл) частями последовательно добавили анилин (3,4 мл, 37,83 ммоль), AcOH (2,16 мл, 37,83 ммоль) и Na(OAc)₃BH (11,22 г, 52,96 ммоль) в условиях ледяного охлаждения. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь затем разбавили EtOAc (450 мл) и промыли водой (150 мл) и насыщенным солевым раствором (50 мл). Органический слой высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash® и элюировали 1,7% EtOAc в гексане для получения соединения 7.

Выход: 7,1 г (89,80%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,24-7,21 (м, 2H), 7,15-7,13 (м, 2H), 7,08 (т, J=8 Гц, 2H), 6,61 (д, J=8 Гц, 2H), 6,53 (т, J=7 Гц, 1H), 5,83 (д, J=7 Гц, 1H), 4,24-4,16 (м, 1H), 3,28 (дд, J=16, 7 Гц, 2H), 2,79 (дд, J=16,7 Гц, 2H);

LCMS: [M+H]=210,2, RT=3,72 минуты (программа P1, колонка Y).

Пример 7: Общий способ D - Получение 1,1-диметил-2-[3-((индан-2-ил)фенил)амино)пропил]пиперидиния йодида

A: 3-(Пиперидин-2-ил)пропан-1-ола гидрохлорид (соединение 21)

К перемешанному раствору соединения 20 (5 г, 36,4 ммоль) в этаноле (32 мл) добавили концентрированную HCl (3,2 мл), и дегазировали реакционную смесь N₂ в течение 15 минут. Затем добавили оксид платины (PtO₂; 1 г) и дегазировали в течение 5 минут. Наконец, реакционную смесь гидрировали при комнатной температуре в аппарате Парра в течение 16 часов под давлением H₂ 45 psi. Реакционную смесь отфильтровали через реагент Целит® и промыли этанолом. Фильтрат концентрировали для получения неочищенного продукта 21, который использовали в этом виде для следующей стадии.

Выход: 6,2 г (94,8%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 8,88 (уш.с, 1H), 8,71 (уш.с, 1H), 4,57 (с, 1H), 3,40 (д, J=4 Гц, 2H), 3,17 (д, J=12 Гц, 1H), 2,96 (уш.с, 1H), 2,81-2,79 (м, 1H), 1,84 (д, J=13 Гц, 1H), 1,71-1,65 (м, 3H), 1,62-1,58 (м, 1H), 1,56-1,43 (м, 3H), 1,40-1,38 (м, 1H).

Б: 3-(1-Бензил-пиперидин-2-ил)пропан-1-ол (соединение 22)

К перемешанному раствору соединения 21 (3 г, 16,71 ммоль) в этаноле (23 мл) частями добавили K₂CO₃ (11,5 г, 83,55 ммоль) в условиях ледяного охлаждения. Затем добавили бензилбромид (2 мл, 16,71 ммоль) и нагревали реакционную смесь с дефлегматором в течение 2 часов. Реакционную смесь отфильтровали и промыли EtOAc. Фильтрат концентрировали, остаток растворили в EtOAc, промыли насыщенным раствором NaHCO₃ и насыщенным солевым раствором, высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле 230-400, используя 1-3% MeOH в ДХМ в качестве элюента, для получения соединения 22.

Выход: 2,6 г (66,7%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,30-7,29 (м, 4H), 7,23-7,21 (м, 1H), 4,40 (с, 1H), 3,91 (д, J=14 Гц, 1H), 3,37 (с, 2H), 3,16 (д, J=14 Гц, 1H), 2,62 (д, J=12 Гц, 1H), 2,28 (с, 1H), 1,99-1,94 (м, 1H), 1,60-1,48 (м, 4H), 1,43-1,24 (м, 4H);

LCMS [M+H]: 234,2, RT=2,07 минуты, (программа P1, колонка Y).

В: 3-(1-Бензил-пиперидин-2-ил)пропиональдегид (соединение 23)

Оксалилхлорид (0,55 мл, 6,44 ммоль) добавили к перемешанному раствору ДМСО (0,92 мл, 12,87 ммоль) в сухом ДХМ (40 мл) при -78°C и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. По каплям добавили соединение 22 (1 г, 4,29 ммоль), растворенное в ДХМ (15 мл), и перемешивали реакционную смесь при -78°C в течение 1 часа. Затем реакционную смесь погасили добавлением по каплям Et₃N (2,9 мл, 21,45 ммоль) и перемешивали раствор при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем к раствору добавили воду и экстрагировали реакционную смесь ДХМ. Органический слой высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали для получения неочищенного соединения 23, которое использовали в этом виде на следующей стадии.

Выход: 820 мг (83%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 9,68 (с, 1H), 7,52-7,31 (м, 5H), 3,88-3,84 (м, 1H), 3,55-3,47 (м, 1H), 3,20-3,16 (м, 1H), 2,67 (уш.с, 1H), 2,33 (уш.с, 1H), 2,10-2,01 (м, 1H), 1,88-1,76 (м, 2H), 1,72-1,61 (м, 3H), 1,45-1,21 (м, 4H).

Г: [3-(1-Бензил-пиперидин-2-ил)пропил]индан-2-ил-амин (соединение 24)

К перемешанному раствору соединения 23 (820 мг, 3,55 ммоль) в ДХМ (15 мл) по каплям добавили 2-аминоиндан (472 мг, 3,55 ммоль) в условиях ледяного охлаждения. К реакционной смеси добавили уксусную кислоту (0,2 мл), затем частями добавили триацетоксиборгидрид натрия (2,2 г, 10,65 ммоль) в условиях ледяного охлаждения. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавили ДХМ, промыли насыщенным раствором NaHCO₃ и насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле 230-400, используя 1-3% MeOH в ДХМ в качестве элюента, для получения соединения 24.

Выход: 500 мг (40,5%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,29 (д, J=4 Гц, 4H), 7,22-7,17 (м, 3H), 7,12-7,11 (м, 2H), 3,91 (д, J=14 Гц, 1H), 3,59 (т, J=7 Гц, 1H), 3,18 (д, J=13 Гц, 1H), 3,11-3,05 (дд, J=7, 16 Гц, 2H), 2,75-2,70 (дд, J=6, 16 Гц, 2H), 2,63 (уш.с, 3H), 2,29 (уш.с, 1H), 2,04-1,97 (м, 1H), 1,58 (уш.с, 4H), 1,45-1,28 (м, 5H), 1,23 (с, 1H);

LCMS [M+H]=349,2, RT=2,89 минуты, (программа P1, колонка Y)

Д: [3-(1-Бензил-пиперидин-2-ил)пропил]индан-2-ил-фениламин (соединение 25)

К перемешанному раствору соединения 24 (400 мг, 1,15 ммоль) в сухом толуоле (12 мл) добавили бромбензол (0,12 мл, 1,15 ммоль) и трет-бутоксид калия (322 мг, 2,87 ммоль). Реакционную смесь продували азотом в течение 30 минут. Наконец, добавили DavePhos (90 мг, 0,23 ммоль) и Pd₂(dba)₃ (136 мг, 0,15 ммоль) и нагревали реакционную смесь до 110°C в течение 16 часов. Данные тонкослойной хроматографии (ТСХ) показали, что реакция завершена. Затем реакционную смесь разбавили этилацетатом, промыли водой и насыщенным солевым раствором, высушили над Na₂SO₄ и концентрировали. Неочищенную реакционную смесь очистили колоночной хроматографией на силикагеле 230-400, используя 5-20% EtOAc в гексане в качестве элюента, для получения соединения 25.

Выход: 290 мг (59,5%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,29-7,21 (м, 6H), 7,16-7,12 (м, 5H), 6,79 (д, J=8 Гц, 2H), 6,63 (т, J=7 Гц, 1H), 3,86 (д, J=14 Гц, 1H), 3,17-3,07 (м, 5H), 2,96-2,90 (дд, J=6, 16 Гц, 2H), 2,60-2,58 (м, 1H), 2,20 (уш.с, 1H), 1,98-1,89 (м, 1H), 1,56 (уш.с, 2H), 1,48-1,40 (м, 5H), 1,30-1,23 (м, 3H);

LCMS [M+H]=424,8, RT=3,14 минуты, (программа P1, колонка Y).

Е: Индан-2-ил-фенил-(3-пиперидин-2-ил-пропил)амин (соединение 26)

Соединение 25 (340 мг, 0,80 ммоль) и формиат аммония (506 мг, 8,02 ммоль) в метаноле (20 мл) продували N₂ в течение 15 минут, добавили 10% Pd-C катализатор (68 мг), продувание продолжали еще 5 минут, и нагревали смесь при 110°C в течение 6 часов. Реакционную смесь отфильтровали через реагент Целит® и промыли метанолом. Объединенные органические слои концентрировали на ротационном испарителе. К остатку добавили небольшое количество воды и экстрагировали продукт EtOAc. Органический слой высушили, отфильтровали и концентрировали для получения соединения 26.

Выход: 248 мг (92,6%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,24-7,23 (м, 2H), 7,19-7,15 (м, 4H), 6,81 (д, J=8 Гц, 2H), 6,66 (т, J=7 Гц, 1H), 4,64 (т, J=7 Гц, 1H), 3,16-3,13 (м, 4H), 3,06 (д, J=13 Гц, 1H), 2,99-2,93 (дд, J=7, 16 Гц, 2H), 2,67-2,61 (м, 2H), 1,70-1,58 (м, 3H), 1,51-1,45 (м, 2H), 1,42-1,27 (м, 4H), 1,14-1,09 (м, 1H);

LCMS [M+H]=335,2, RT=3,73 минуты, (программа P1, колонка Z).

Ж: 1,1-Диметил-2-[3-(индан-2-ил)фенил)амино)пропил]пиперидиния йодид

К перемешанному раствору соединения 26 (100 мг, 0,30 ммоль) в CHCl₃(3 мл) в закрытой пробирке добавили метилйодид (97 мкл, 1,50 ммоль) и карбонат калия (207 мг, 1,50 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при 50°C в течение 16 часов. Реакционную смесь отфильтровали через воронку из пористого стекла. Фильтрат концентрировали на ротационном испарителе и очистили колоночной хроматографией на силикагеле 230-400, используя MeOH в ДХМ (1-3%) в качестве элюента, для получения 2-[3-(Индан-2-ил-фенил-амино)пропил]-1,1-диметил-пиперидиния йодида.

Выход: 51 мг (46,9%);

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,28 (с, 1H), 7,25 (с, 3H), 7,16 (т, J=3 Гц, 2H), 6,89-6,82 (м, 3H), 4,52 (т, J=7 Гц, 1H), 3,99 (д, J=13 Гц, 1H), 3,66-3,50 (м, 1H), 3,38-3,33 (м, 4H), 3,27-3,13 (м, 4H), 3,04-2,97 (м, 5H), 1,87-1,81 (м, 5H), 1,68-1,61 (м, 1), 1,48-1,42 (м, 2H), 1,29-1,23 (м, 2H);

LCMS [M⁺]=363, RT=3,32 минуты.

UPLC: 98,11%, RT=3,11 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 0,05% ТФК в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм.

Пример 8: Общий способ Е - Получение 1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)фенил)амино)метил]пирролидиния йодида

A: 2-Метиловый эфир 1-трет-бутилового эфира пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты

К перемешанному раствору 1-трет-бутилового эфира пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (5,0 г, 23,25 ммоль) и метилйодида (6,0 мл, 93,02 ммоль) в ДМФ (25 мл) частями добавили NaH (60% вес./вес., 2,3 г, 57,09 ммоль) при 0°C. Полученную смесь оставили перемешиваться при комнатной температуре на 24 часа. Реакционную смесь вылили в холодную воду и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промыли водой и насыщенным солевым раствором. В результате высушивания над Na₂SO₄, фильтрования и концентрирования получили неочищенное соединение 2d.

Выход: 5,0 г (93,91%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 4,18-4,13 (м, 1H), 3,65 (с, 3H), 3,38-3,32 (м, 2H), 2,22-2,18 (м, 1H), 1,87-1,78 (м, 3H), 1,32 (с, 9H);

LCMS [M+H]=230,2, RT=3,28 минуты (программа P1, колонка Z).

Б: Метиловый эфир 1-бензил-пирролидин-2-карбоновой кислоты

К перемешанному раствору соединения 2d (6,8 г, 29,69 ммоль) в ДХМ (55 мл) по каплям добавили ТФК (15,2 мл, 203,94 ммоль) в условиях ледяного охлаждения. Полученную смесь оставили перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением, неочищенный материал растворили в ацетонитриле (100 мл) и охладили смесь до 0°C. Затем добавили K₂CO₃ (20,48 г, 148,47 ммоль) (рН довели до основного) и перемешивали смесь при 0°C в течение 15 минут. Добавили бензилбромид (5,2 мл, 44,54 ммоль) и нагревали полученную реакционную смесь с дефлегматором в течение 16 часов. Реакционную смесь отфильтровали, а фильтрат концентрировали. Остаток растворили в этилацетате, а органический слой промыли водой и насыщенным солевым раствором. В результате высушивания над Na₂SO₄, фильтрования и концентрирования получили неочищенное соединение 4d.

Выход: 3,0 г (46,11%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,32-7,21 (м, 5H), 3,85 (д, J=13 Гц, 1H), 3,58 (с, 3H), 3,50 (д, J=13 Гц, 1H), 3,28-3,24 (м, 1H), 2,86-2,81 (м, 1H), 2,38-2,32 (м, 1H), 2,08-2,03 (м, 1H), 1,84-1,69 (м, 3H);

LCMS [M+H]=219,6, RT=3,35 минуты (программа P1, колонка X).

В: (1-Бензил-пирролидин-2-ил)метанол

К перемешанной суспензии LAH (1,03 г, 27,39 ммоль) в ТГФ (120 мл) добавили раствор соединения 4d (3,0 г, 13,69 ммоль) в ТГФ (30 мл) в условиях ледяного охлаждения. Полученную смесь оставили перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь погасили добавлением насыщенного солевого раствора и отфильтровали через слой Целита®. Фильтрат высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали для получения неочищенного соединения 5d.

Выход: 2,5 г (95,54%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,30-7,19 (м, 5H), 4,37 (т, J=5 Гц, 1H), 4,04 (д, J=13 Гц, 1H), 3,47-3,41 (м, 1H), 3,32 (д, J=13 Гц, 1H), 3,27-3,24 (м, 1H), 2,76-2,74 (м, 1H), 2,58-2,55 (м, 1H), 2,16-2,10 (м, 1H), 1,86-1,80 (м, 1H), 1,60-1,55 (м, 3H);

LCMS: [M+H]=192,0, RT=1,67 минуты (программа P1, колонка Y).

Г: 1-Бензилпирролидин-2-карбоксальдегид

К перемешанному раствору ДМСО (2,79 мл, 39,27 ммоль) в ДХМ (120 мл) по каплям добавили оксалилхлорид (1,69 мл, 19,63 ммоль) при -78°C и перемешивали смесь в течение 15 минут. Затем медленно добавили раствор соединения 5d (2,5 г, 13,08 ммоль) в ДХМ (30 мл) и перемешивали при -78°C в течение 1 часа. К реакционной смеси добавили триэтиламин (ТЭА; 9,1 мл, 65,44 ммоль) и разбавили реакционную смесь ДХМ. Органический слой промыли водой и насыщенным солевым раствором. В результате высушивания над Na₂SO₄, фильтрования и концентрирования получили неочищенное соединение 31а.

Выход: 2,59 г;

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 9,26 (д, J=4 Гц, 1H), 7,32-7,23 (м, 5H), 3,73 (д, J=13 Гц, 1H), 3,63 (д, J=13 Гц, 1H), 2,98-2,94 (м, 2H), 2,39-2,32 (м, 1H), 1,97-1,90 (м, 1H), 1,83-1,72 (м, 3H).

Д: (1-Бензил-пирролидин-2-илметил)индан-2-ил-амин

К перемешанному раствору соединения 31а (1,6 г, 8,46 ммоль) в ДХМ (30 мл) последовательно добавили 2-аминоиндан (1,12 г, 8,46 ммоль), Na(OAc)₃BH (5,38 г, 25,40 ммоль) и уксусную кислоту (0,5 мл) при 0°C. Полученную смесь оставили перемешиваться при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавили ДХМ, а органический слой промыли насыщенным раствором NaHCO₃, водой и насыщенным солевым раствором, высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали, а неочищенный материал очистили при помощи Combiflash®, элюируя 8% этилацетата в гексане для получения липкого соединения 24d.

Выход: 1,5 г (57,94%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,30-7,09 (м, 9H), 3,96 (д, J=13 Гц, 1H), 3,46-3,42 (м, 1H), 3,25 (д, J=13 Гц, 1H), 3,07-2,99 (м, 2H), 2,78-2,74 (м, 1H), 2,68-2,55 (м, 5H), 2,15-2,08 (м, 1H), 1,87-1,82 (м, 1H), 1,67-1,55 (м, 3H);

LCMS [M+H]=307,0, RT=3,23 минуты (программа P1, колонка X).

Е: (1-Бензилпирролидин-2-илметил)индан-2-ил-фениламин (соединение 33)

Перемешанную смесь соединения 24d (1,0 г, 3,26 ммоль), бромбензола (0,6 мл, 6,53 ммоль), KO^tBu (0,92 г, 8,16 ммоль) и DavePhos (0,26 г, 0,65 ммоль) в 1,4-диоксане (30 мл) продували азотом в течение 15 минут. Затем добавили Pd₂(dba)₃ (0,3 г, 0,33 ммоль), и полученную смесь нагревали при 100°C в течение 1 часа в микроволновых условиях. Реакционную смесь разбавили в этилацетате, а органический слой промыли водой и насыщенным солевым раствором. В результате высушивания над Na₂SO₄, фильтрования, концентрирования и хроматографии Combiflash®, элюируя с использованием 6% этилацетата в гексане, получили липкое соединение 8d.

Выход: 0,24 г (9,62%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,30-7,27 (м, 2H), 7,23-7,13 (м, 9H), 6,88-6,86 (м, 2H), 6,76-6,68 (м, 1H), 4,64-4,60 (м, 1H), 4,00 (д, J=13 Гц, 1H), 3,26-3,22 (м, 2H), 3,15-3,09 (м, 4H), 3,04-2,98 (м, 1H), 2,80-2,77 (м, 2H), 2,15-2,09 (м, 1H), 1,82-1,77 (м, 1H), 1,62-1,57 (м, 2H), 1,51-1,48 (м, 1H);

LCMS [M+H]=383,2, RT=2,69 минуты (программа P1, колонка Y).

Ж: Индан-2-ил-фенилпирролидин-2-ил-метиламин (соединение 34)

Перемешанную смесь соединения 8d (0,7 г, 1,83 ммоль) и HCOONH₄ (2,32 г, 36,79 ммоль) в MeOH (30 мл) продували азотом в течение 15 минут. Добавили десятипроцентный Pd-C (0,28 г) и нагревали полученную смесь с дефлегматором в течение 6 часов. Реакционную смесь отфильтровали через слой Целита® и промыли метанолом. Фильтрат концентрировали, а остаток поместили в этилацетат. Органический слой промыли водой и насыщенным солевым раствором. В результате высушивания над Na₂SO₄, фильтрования, концентрирования и хроматографии Combiflash®, элюируя 10% метанола в ДХМ, получили соединение 9g.

Выход: 0,35 г (65,50%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,23-7,20 (м, 4H), 7,15-7,13 (м, 2H), 6,97 (д, J=8 Гц, 2H), 6,78 (т, J=7 Гц, 1H), 4,61-4,57 (м, 1H), 3,33-3,30 (м, 1H), 3,16-3,06 (м, 4H), 3,01-2,89 (м, 4H), 1,86-1,67 (м, 3H), 1,44-1,38 (м, 1H);

LCMS [M+H]=293,0, RT=2,90 минуты (программа P1, колонка Y).

З: 1,1-Диметил-2-[((индан-2-ил)фенил)амино)метил]пирролидиния йодид

К перемешанному раствору соединения 9g (0,12 г, 0,41 ммоль) в CHCl₃ (4 мл) последовательно добавили K₂CO₃ (0,57 г, 4,1 ммоль) и метилйодид (0,3 мл, 4,1 ммоль). Полученную смесь нагревали при 50°C в течение 40 часов в закрытой пробирке. Реакционную смесь отфильтровали и промыли метанолом. Фильтрат концентрировали, а неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 2,5% метанола в ДХМ, для получения желтого твердого вещества, которое растирали с пентаном и эфиром для получения 2-[(индан-2-ил-фенил-амино)-метил]-1,1-диметил-пирролидиния йодида.

Выход: 0,056 г (30,48%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,32-7,28 (м, 2H), 7,20-7,10 (м, 6H), 6,96 (т, J=7 Гц, 1H), 4,43-4,38 (м, 1H), 3,79-3,74 (м, 1H), 3,60-3,54 (м, 2H), 3,52-3,46 (м, 2H), 3,16 (с, 3H), 3,09-2,99 (м, 4H), 2,92 (с, 3H), 2,18-2,15 (м, 1H), 1,97-1,90 (м, 3H);

LCMS [M⁺]=321,2, RT=2,99 минуты;

UPLC: 97,43%, RT=4,44 минуты, λ_200нм, подвижная фаза (i) 0,05% HCOOH в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Gemini® NX C18 (50×4,6 мм), 3 мкм.

Примеры 9-35

Дополнительные соединения, перечисленные в Таблице 2, были получены таким же образом, с использованием способов, описанных для Примеров 1-8 и на Схемах 1-27. Выходы и характеристики¹H-ЯМР, LCMS и HPLC для Примеров 9-35 даны сразу после Таблицы 2.

Пример 36: Общий способ F - Получение 1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пирролидиния йодида

A: Трет-бутиловый эфир 2-метоксикарбонилметилпирролидин-1-карбоновой кислоты (соединение 36)

К перемешанному раствору 1-трет-бутилового эфира пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты 35 (10 г, 46,46 ммоль) в сухом ТГФ по каплям добавили N-метилморфолин (6,4 мл, 58,1 ммоль) и изобутил хлорформиат (6,7 мл, 65,1 ммоль) при -30°C. Реакционную смесь перемешивали при той же температуре в течение одного часа и добавили раствор диазометана (приготовленный in situ) при -30°C. Полученную смесь оставили перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Избыток диазометана погасили уксусной кислотой (15 мл) и выпарили под пониженным давлением. Остаток растворили в эфире и промыли водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и выпарили. Остаток растворили в метаноле (100 мл), частями добавили Ag₂O (5,5 г) в условиях ледяного охлаждения, а затем оставили перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавили хлороформ, отфильтровали через реагент Целит® и промыли метанолом. Фильтрат концентрировали, а неочищенный материал очистили хроматографией на силикагеле (230-400 меш), элюируя 1-5% этилацетата в гексане, для получения светло-желтого жидкого соединения 36.

Выход: 4,0 г (45%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 3,99-3,95 (м, 1H), 3,59 (с, 3H), 3,23-3,21 (м, 2H), 2,72-2,65 (м, 1H), 2,38-2,34 (м, 1H), 1,98-1,95 (м, 1H), 1,81-1,72 (м, 2H), 1,65-1,63 (м, 1H), 1,39 (с, 9H).

Б: Трет-бутиловый эфир 2-(2-гидроксиэтил)пирролидин-1-карбоновой кислоты (соединение 37)

К перемешанному раствору LAH (0,94 г, 24,69 ммоль) в сухом ТГФ (100 мл) добавили раствор соединения 36 (3,0 г, 12,34 ммоль) в ТГФ (40 мл) при 0°С и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь погасили насыщенным солевым раствором и отфильтровали через слой Целита®. Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄ и выпарили. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 2-3% метанола в ДХМ для получения жидкого соединения 37.

Выход: 1,4 г (52,8%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 4,37 (т, J=5 Гц, 1H), 3,73-3,71 (м, 1H), 3,42-3,37 (м, 2H), 3,22-3,19 (м, 2H), 1,83-1,64 (м, 5H), 1,43-1,41 (м, 1H), 1,39 (с, 9H);

LCMS [M+H]=216,0, RT=2,83 минуты, (программа P1, колонка Y)

В: Трет-бутиловый эфир 2-(2-оксоэтил)пирролидин-1-карбоновой кислоты (соединение 38)

К перемешанному раствору ДМСО (2,08 мл, 29,30 ммоль) в ДХМ (60 мл) добавили оксалилхлорид (1,26 мл, 14,65 ммоль) при -78°C и перемешивали в течение 15 минут. Затем добавили раствор соединения 37 (2,1 г, 9,76 ммоль) в ДХМ (30 мл) при -78°C и перемешивали при той же температуре в течение 1 часа. Добавили ТЭА (4,9 мл, 48,83 ммоль) и оставили реакционную смесь нагреваться до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавили ДХМ и промыли водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и выпарили для получения неочищенного соединения 38.

Выход: 2,3 г (неочищенный)

Г: Трет-бутиловый эфир 2-[2-((индан-2-ил)амино)этил]пирролидин-1-карбоновой кислоты (соединение 39)

К перемешанному раствору соединения 38 (2,3 г, 10,80 ммоль) в ДХМ (90 мл) последовательно добавили 2-аминоиндан (1,4 мл, 10,80 ммоль), Na(OAC)₃BH (6,86 г, 32,39 ммоль) и уксусную кислоту (2 мл) при 0°C. Полученную смесь оставили перемешиваться при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавили ДХМ и промыли с 1 н. NaOH, водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и выпарили. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 3-4% метанола в ДХМ, для получения соединения 39.

Выход: 3,0 г (84,26%).

Д: Трет-бутиловый эфир 2-[2-(((индан-2-ил)фенил)амино)-этил]пирролидин-1-карбоновой кислоты (соединение 40)

К перемешанному раствору соединения 39 (1,5 г, 4,54 ммоль) в диоксане (22 мл) добавили бромбензол (1 мл, 9,09 ммоль), DavePhos (0,36 г, 0,91 ммоль) и KO^tBu (1,28 г, 11,36 ммоль) и продували аргоном в течение 15 минут. Затем добавили Pd₂(dba)₃(0,42 г, 0,45 ммоль) и снова продували раствор в течение 15 минут. Реакционную смесь нагревали в микроволновом реакторе в течение 1 часа при 100°C. Реакционную смесь разбавили в этилацетате и промыли водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и выпарили. Неочищенный продукт очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 5-6% этилацетата в гексане, для получения соединения 40.

Выход: 1,7 г (94,44%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,24-7,22 (м, 2H), 7,18-7,14 (м, 4H), 6,81 (д, J=8 Гц, 2H), 6,65 (т, J=7 Гц, 1H), 4,66-4,64 (м, 1H), 3,62-3,60 (м, 1H), 3,21-3,14 (м, 6H), 2,97-2,90 (м, 2H), 1,82-1,77 (м, 2H), 1,67-1,65 (м, 2H), 1,40-1,35 (м, 11H);

LCMS [M+H]=407,0, RT=2,53 минуты, (программа P1, колонка Y).

Е: 2-[2-(((Индан-2-ил)фенил)амино)этил]пирролидин (соединение 41)

Диоксан-HCl (25 мл) добавили к соединению 40 (1 г, 2,46 ммоль) при 0°С и оставили перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь выпарили, разбавили в этилацетате и промыли раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над безводным Na₂SO₄и выпарили для получения неочищенного соединения 41.

Выход: 0,6 г (неочищенный).

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,25-7,22 (м, 2H), 7,18-7,14 (м, 4H), 6,83 (д, J=8 Гц, 2H), 6,63 (т, J=7 Гц, 1H), 4,67-4,63 (м, 1H), 3,21-3,13 (м, 3H), 3,00-2,95 (м, 2H), 2,83-2,75 (м, 2H), 2,66-2,64 (м, 1H), 1,74-1,71 (м, 1H), 1,57-1,50 (м, 4H), 1,08-1,07 (м, 1H);

LCMS [M+H]=307,0, RT=3,01 минуты, (программа P1, колонка Y).

Ж: 1,1-Диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пирролидиния йодид

К перемешанному раствору соединения 41 (0,3 г, 0,98 ммоль) в хлороформе (6 мл) добавили K₂CO₃ (0,68 г, 4,90 ммоль) и этилйодид (0,75 мл, 9,8 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 50°C в течение 16 часов в закрытой пробирке. Реакционную смесь отфильтровали и выпарили. Неочищенный продукт очистили колоночной флэш-хроматографией, элюируя 1-2% метанола в ДХМ, для получения липкого соединения. Это соединение лиофилизировали и высушили под высоким вакуумом для получения заданного соединения.

Выход: 0,12 г (24,99%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,25-7,16 (м, 6H), 6,89 (д, J=8 Гц, 2H), 6,73 (т, J=7 Гц, 1H), 4,65-4,61 (м, 1H), 3,59-3,55 (м, 1H), 3,45-3,36 (м, 2H), 3,25-3,05 (м, 8H), 3,02-2,94 (м, 2H), 2,22-2,20 (м, 1H), 1,92-1,90 (м, 3H), 1,69-1,64 (м, 2H), 1,18-1,08 (м, 6H);

LCMS [M⁺]=363,0, RT=3,07 минуты, (программа P1, колонка Y);

UPLC: 98,00% (RT=4,97 минуты, λ_200нм, подвижная фаза A. 0,05% ТФК в воде, B. ацетонитрил; колонка: Zorbax^® SB-C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм).

Пример 37: Общий способ G - Получение 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(пиридин-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодида

A. Трет-бутиловый эфир 2-(2-гидроксиэтил)пиперидин-1-карбоновой кислоты (соединение 42)

К перемешанному раствору пиперидин-2-этанола (5 г, 38,69 ммоль) в ДХМ (80 мл) добавили ТЭА (6,5 мл, 46,43 ммоль), затем BOC ангидрид (9,8 мл, 42,56 ммоль) при 0°С, и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавили этилацетатом, а органический слой промыли водой и насыщенным солевым раствором, затем высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали для получения неочищенного соединения 42.

Выход: 10 г (неочищенный);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 4,33 (т, J=5 Гц, 1H), 4,20-4,18 (м, 1H), 3,82-3,79 (м, 2H), 3,37-3,34 (м, 1H), 2,73 (т, J=13 Гц, 1H), 1,79-1,72 (м, 1H), 1,61-1,47 (м, 7H), 1,38 (с, 9H), 1,26-1,22 (м, 1H);

LCMS [M+H]=230,2, RT=2,95 минуты, (программа P1, колонка Y).

Б. Трет-бутиловый эфир 2-(2-оксоэтил)пиперидин-1-карбоновой кислоты (соединение 43)

К перемешанному раствору ДМСО (1,86 мл, 26,2 ммоль) в ДХМ (60 мл) добавили (COCl)₂ (1,13 мл, 13,1 ммоль) при -78°С, и перемешивали реакционную смесь при -78°С в течение 15 минут. Затем по каплям добавили соединение 42 (2 г, 8,733 ммоль) в ДХМ (20 мл) при -78°С, а затем перемешивали раствор при той же температуре в течение 1 часа. Затем добавили ТЭА (6,06 мл, 43,66 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавили ДХМ, а органический слой промыли водой и насыщенным солевым раствором, затем высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали для получения неочищенного липкого соединения 43.

Выход: 2,4 г (неочищенный).

В. Трет-бутиловый эфир 2-[2-((индан-2-ил)амино)этил]пиперидин-1-карбоновой кислоты (соединение 44)

К перемешанному раствору соединения 43 (2,4 г, 10,57 ммоль) в ДХМ (50 мл) последовательно добавили 2-аминоиндан (1,37 мл, 10,57 ммоль), триацетоксиборгидрид натрия (6,72 г, 31,72 ммоль) и уксусную кислоту (2 капли) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавили ДХМ и подщелочили 1 н. NaOH. Органический слой промыли водой и насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очистили колоночной хроматографией (используя силикагель 230-400 меш), элюируя 4-5% метанола в ДХМ, для получения заданного соединения 44.

Выход: 1,6 г (44,4%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,18-7,13 (м, 2H), 7,11-7,08 (м, 2H), 4,19 (уш.с, 1H), 3,84-3,81 (м, 1H), 3,52-3,49 (м, 1H), 3,07-3,02 (м, 2H), 2,76-2,60 (м, 5H), 1,86-1,83 (м, 1H), 1,57-1,50 (м, 7H), 1,39 (с, 9H), 1,25-1,23 (м, 1H);

LCMS [M+H]=345,0, RT=3,04 минуты, (программа P1, колонка Y).

Г: Трет-бутиловый эфир 2-[2-((индан-2-ил)(пиридин-2-ил)амино)этил]пиперидин-1-карбоновой кислоты (соединение 45)

Перемешанную смесь соединения 44 (0,6 г, 1,74 ммоль), 2-бром-пиридина (0,17 мл, 1,74 ммоль) и NaO^tBu (0,23 г, 2,44 ммоль) в толуоле (20 мл) продували аргоном в течение 15 минут. Затем добавили Pd₂(dba)₃(0,08 г, 0,09 ммоль) и P(i-BuNCH₂CH₂)₃N (0,12 мл, 0,35 ммоль). Полученную смесь снова дегазировали аргоном в течение 15 минут и нагревали при 110°С в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавили этилацетатом и промыли водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное соединение очистили колоночной хроматографией (используя силикагель 230-400 меш), элюируя 1-2% этилацетата в гексане, для получения заданного соединения 45.

Выход: 0,32 г (43,6%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 8,10-8,08 (м, 1H), 7,51-7,47 (м, 1H), 7,25-7,23 (м, 2H), 7,17-7,15 (м, 2H), 6,62 (д, J=9 Гц, 1H), 6,57-6,54 (м, 1H), 5,29-5,26 (м, 1H), 4,10-4,08 (м, 1H), 3,78-3,75 (м, 1H), 3,36-3,34 (м, 1H), 3,22-3,13 (м, 3H), 2,98-2,91 (м, 2H), 2,65-2,59 (м, 1H), 1,83-1,80 (м, 1H), 1,67-1,61 (м, 1H), 1,54-1,50 (м, 1H), 1,45-1,42 (м, 4H), 1,32 (с, 9H), 1,26-1,17 (м, 1H);

LCMS [M+H]=422,6, RT=3,18 минуты, (программа R1, колонка X).

Д. 2-[2-((Индан-2-ил)(пиридин-2-ил)амино)этил]пиперидин (соединение 46)

Диоксан-HCl (10 мл) добавили к соединению 45 (0,35 г, 0,83 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь высушили под пониженным давлением. Неочищенное соединение растворили в этилацетате и промыли насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали для получения заданного соединения 46.

Выход: 0,23 г (87%);

LCMS [M+H]=322,4, RT=2,25 минуты, (программа R1, колонка Z).

E. 1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(пиридин-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодид

К перемешанному раствору соединения 46 (0,12 г, 0,37 ммоль) в хлороформе (5 мл) добавили K₂CO₃ (0,257 г, 1,87 ммоль) и метилйодид (0,12 мл, 1,87 ммоль). Полученную смесь нагревали при 50°C в течение 16 часов в закрытой пробирке. Реакционную смесь отфильтровали, а фильтрат концентрировали. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией (используя силикагель 230-400 меш), элюируя 2-3% метанола в ДХМ, для получения заданного соединения.

Выход: 0,08 г (44,96%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 8,11 (д, J=3 Гц, 1H), 7,52 (т, J=7 Гц, 1H), 7,27-7,25 (м, 2H), 7,19-7,17 (м, 2H), 6,74 (д, J=10 Гц, 1H), 6,63-6,60 (м, 1H), 5,17-5,10 (м, 1H), 3,46-3,43 (м, 3H), 3,28-3,25 (м, 2H), 3,20-3,13 (м, 2H), 3,07-2,99 (м, 5H), 2,85 (с, 3H), 2,12-2,09 (м, 1H), 1,92-1,89 (м, 1H), 1,82-1,76 (м, 1H), 1,70-1,67 (м, 2H), 1,60-1,50 (м, 2H), 1,40-1,37 (м, 1H);

LCMS [M⁺]=350,4, RT=1,72 минуты (программа R1, колонка Z)

UPLC: 99,57% (RT=2.70 минуты, λ_200нм, подвижная фаза A. 0,05% ТФК в воде, B. ацетонитрил; колонка: Zorbax® XDB-C18 (4,6×50 мм), 1,8 мкм).

Пример 38: Общий способ H - Получение 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(пиримидин-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодида

А. Трет-бутиловый эфир 2-[2-((индан-2-ил)(пиримидин-2-ил)амино)этил]пиперидин-1-карбоновой кислоты (соединение 47)

К перемешанному раствору соединения 44 (1,2 г, 3,48 ммоль) в сухом толуоле (35 мл) добавили 2-бром-пиримидин (0,55 г, 3,48 ммоль) и NaO^tBu (0,47 г, 4,88 ммоль) и продували раствор аргоном в течение 30 минут. Затем добавили Pd₂(dba)₃(0,159 г, 0,17 ммоль) и супероснование Веркаде (0,24 г, 0,70 ммоль), и нагревали раствор с дефлегматором в течение ночи. Реакционную смесь отфильтровали через реагент Целит® и промыли этилацетатом. Фильтрат промыли водой и насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 14-15% этилацетата в гексане, для получения соединения 47.

Выход: 0,303 г (20,6%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ 8,35 (д, J=5 Гц, 2H), 7,22 (с, 2H), 7,16-7,14 (м, 2H), 6,61 (т, J=5 Гц, 1H), 5,47-5,43 (м, 1H), 4,07 (с, 1H), 3,77-3,74 (м, 1H), 3,42-3,39 (м, 1H), 3,18-3,11 (м, 2H), 3,03-2,97 (м, 2H), 2,65 (т, J=12 Гц, 1H), 1,89-1,87 (м, 1H), 1,66-1,63 (м, 1H), 1,55-1,37 (м, 6H), 1,31 (с, 9H), 1,26-1,17 (м, 1H);

LCMS [M+H]=423,2, RT=2,62 минуты, (программа P1, колонка Y).

Б. 2-[2-((Индан-2-ил)(пиримидин-2-ил)амино)этил]пиперидин (соединение 48)

К соединению 47 (0,303 г, 0,72 ммоль) добавили диоксан-HCl (20 мл) в условиях ледяного охлаждения, и перемешивали раствор в течение 4 часов при комнатной температуре. Затем раствор концентрировали под пониженным давлением и растворили в этилацетате. Органический слой промыли насыщенным раствором NaHCO₃, водой и насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением для получения липкого соединения 48.

Выход: 0,21 г (90,83%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 8,34 (д, J=5 Гц, 2H), 7,22-7,21 (м, 2H), 7,16-7,14 (м, 2H), 6,59 (т, J=9 Гц, 1H), 5,37-5,34 (м, 1H), 4,07 (с, 1H), 3,77-3,74 (м, 1H), 3,55-3,53 (м, 2H), 3,16-3,01 (м, 4H), 2,9-2,88 (м, 1H), 1,53-1,45 (м, 5H), 1,35-1,23 (м, 3H);

LCMS [M+H]=322,8, RT=3,08 минуты, (программа P1, колонка Y).

В. 1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(пиримидин-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодид

К перемешанному раствору соединения 48 (0,21 г, 0,65 ммоль) в CHCl₃ (5 мл) добавили K₂CO₃ (0,45 г, 3,26 ммоль), затем добавили метилйодид (0,2 мл, 3,26 ммоль). Раствор перемешивали при 50°C в течение 16 часов в закрытой пробирке. Реакционную смесь отфильтровали через воронку из пористого стекла и концентрировали. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на нейтральном оксиде алюминия, элюируя 1-1,5% метанола в ДХМ, для получения заданного соединения.

Выход: 0,16 г (51,34%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ8,39 (д, J=5 Гц, 2H), 7,25-7,24 (м, 2H), 7,18-7,16 (м, 2H), 6,68-6,66 (м, 1H), 5,45-5,41 (м, 1H), 3,55-3,51 (м, 2H), 3,46-3,42 (м, 1H), 3,26-3,23 (м, 2H), 3,12-3,05 (м, 7H), 2,86 (с, 3H), 2,20-2,17 (м, 1H), 1,93-1,36 (м, 7H);

LCMS [M⁺]=351, RT=2,90 минуты, (программа P1, колонка Y);

UPLC: 99,9% (RT=4,70 минуты, λ_220нм, подвижная фаза; A. 0,05% ТФК в воде, B. ацетонитрил; колонка: Zorbax^® SB-C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм).

Пример 39: Общий способ I - Получение 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(тиазол-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодида

A. 2-(1-Бензилпиперидин-2-ил)этанол (соединение 49)

К перемешанному раствору пиперидин-2-этанола (20 г, 155 ммоль) в этаноле (240 мл) добавили K₂CO₃(106 г, 775,1 ммоль), затем добавили бензилбромид (18,4 мл, 155,04 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, отфильтровали через воронку из пористого стекла и концентрировали. Неочищенный материал растворили в этилацетате, органический слой промыли водой и насыщенным солевым раствором, затем высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали для получения жидкого соединения 49.

Выход: 25 г (73,65%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,31 (д, J=13 Гц, 4H), 7,24-7,19 (м, 1H), 4,41 (с, 1H), 3,88 (д, J=14 Гц, 1H), 3,54-3,41 (м, 2H), 3,31-3,23 (м, 1H), 2,62-2,58 (м, 1H), 2,45 (с, 1H), 2,06-2,01 (м, 1H), 1,83-1,76 (м, 1H), 1,66-1,57 (м, 3H), 1,42-1,26 (м, 4H);

LCMS [M+H]=220,4, RT=2,35 минуты, (программа P1, колонка Y).

Б. (1-Бензилпиперидин-2-ил)ацетальдегид (соединение 50)

К перемешанному раствору ДМСО (5,84 мл, 82,2 ммоль) в сухом ДХМ (220 мл) добавили (COCl)₂ (3,55 мл, 41,1 ммоль) при -78°С, и перемешивали смесь при той же температуре в течение 20 минут. Затем медленно добавили раствор соединения 49 (6 г, 27,4 ммоль) в ДХМ (30 мл) и перемешивали реакционную смесь при -78°C в течение 1 часа. Добавили ТЭА (13,8 мл, 137 ммоль) при -78°С и перемешивали реакционную смесь, и оставили достигать комнатной температуры. Реакционную смесь разбавили ДХМ, а органический слой промыли водой и насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали для получения липкого соединения 50.

Выход: 7,0 г (неочищенный);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 9,76 (с, 1H), 7,43-7,21 (м, 5H), 3,81 (д, J=13 Гц, 1H), 3,24 (д, J=8 Гц, 1H), 3,06 (д, J=6 Гц, 1H), 2,92 (с, 1H), 2,71-2,62 (м, 2H), 2,58-2,49 (м, 3H), 2,13-2,03 (м, 1H), 1,79-1,59 (м, 3H), 1,44-1,35 (м, 4H), 1,23-1,16 (м, 1H).

В. 2-[1-Бензил-2-((индан-2-ил)амино)этил]пиперидин (соединение 51)

К перемешанному раствору соединения 50 (7 г, 32,2 ммоль) в ДХМ (120 мл) последовательно добавили 2-аминоиндан (4,29 мл, 32,2 ммоль), Na(OAc)₃BH (20,5 г, 96,7 ммоль) и уксусную кислоту (3 мл) при 0°C. Полученную смесь оставили перемешиваться при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавили ДХМ и подщелачивали 1 н. раствором NaOH. Органический слой отделили и промыли водой и насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 1-2% метанола в ДХМ, для получения соединения 51.

Выход: 6,6 г (61,37%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,29-7,0 (м, 9H), 3,91 (д, J=14 Гц, 1H), 3,48-3,46 (м, 1H), 3,21 (с, 1H), 3,18-3,12 (м, 1H), 3,05-2,99 (м, 2H), 2,64 (д, J=8 Гц, 1H), 2,62-2,55 (м, 5H), 2,38 (с, 1H), 2,01-1,95, (м, 1H), 1,78 (с, 1H), 1,74-1,70 (м, 1H), 1,67-1,60 (м, 3H), 1,41-1,27 (м, 6H);

LCMS [M+H]=334,8, RT=3,0 минуты, (программа P1, колонка Y).

Г. 2-[1-Бензил-2-((индан-2-ил)(тиазол-2-ил)амино)этил]пиперидин (соединение 52)

К перемешанному раствору соединения 51 (2 г, 5,98 ммоль) в сухом толуоле (35 мл) добавили 2-бром-тиазол (0,53 мл, 5,98 ммоль) и NaO^tBu (0,805 г, 8,38 ммоль) и дегазировали раствор аргоном в течение 30 минут. Затем добавили Pd₂dba₃(0,274 г, 0,30 ммоль) и супероснование Веркаде (0,42 мл, 1,19 ммоль), и полученную смесь нагревали с дефлегматором в течение 16 часов. Реакционную смесь отфильтровали через слой Целита® и промыли этилацетатом. Органический слой промыли водой и насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 20-22% этилацетата в гексане, для получения соединения 52.

Выход: 0,688 г (27,42%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7,29-7,20 (м, 9H), 7,12 (м, 1H), 6,73 (д, J=4 Гц, 1H), 4,79-4,75 (м, 1H), 3,82 (д, J=14 Гц, 1H), 3,40-3,37 (м, 1H), 3,35-3,25 (м, 2H), 3,23-3,07 (м, 3H), 2,67-2,61 (м, 1H), 2,5-2,49 (м, 1H), 2,32-2,26 (м, 1H), 2,22-1,98 (м, 1H), 1,97-1,95 (м, 1H), 1,93-1,82 (м, 3H), 1,73-1,51 (м, 4H);

LCMS [M+H]=418,1, RT=3,95 минуты, (программа P1, колонка Y).

Д. 2-[2-((Индан-2-ил)(тиазол-2-ил)амино)этил]пиперидин (соединение 53)

К перемешанному раствору соединения 52 (0,688 г, 1,64 ммоль) в ДХЭ (15 мл) добавили изобутил хлорформиат (0,53 мл, 4,94 ммоль) при 0°С и нагревали раствор с дефлегматором в течение 9,5 часов. Добавили метанол (30 мл) и оставили смесь перемешиваться при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением для получения соединения 53.

Выход: 0,53 г (98,78%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,4-7,18 (м, 4H), 7,0 (д, J=4 Гц, 1H), 6,52-6,48 (м, 1H), 4,75 (с, 1H), 4,70-4,67 (м, 1H), 3,78 (с, 3H), 3,73-3,59 (м, 1H), 3,28-3,10 (м, 3H), 3,08-2,98 (м, 1H), 2,78-2,75 (м, 1H), 1,99-1,97 (м, 1H), 1,86-1,82 (м, 1H), 1,78-1,75 (м, 2H), 1,7-1,68 (м, 2H), 1,58-1,55 (м, 1H), 1,39-1,34 (м, 2H);

LCMS [M+H]=328, RT=3,08 минуты, (программа P1, колонка X).

Е. 2-[2-((Индан-2-ил)(тиазол-2-ил)амино)этил]-1-метилпиперидин (соединение 54)

К перемешанному раствору соединения 53 (0,53 г, 1,62 ммоль) в ДХЭ (25 мл) последовательно добавили формальдегид (35% раствор в H₂O, 0,2 мл, 2,43 ммоль), Na(OAc)₃BH (1,03 г, 4,86 ммоль) и уксусную кислоту (0,2 мл) при 0°C, и оставили раствор перемешиваться при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавили этилацетатом и подщелачивали 1 н. раствором NaOH. Органический слой отделили и промыли водой и насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией на нейтральном оксиде алюминия, элюируя 1% метанола в ДХМ, для получения соединения 54.

Выход: 0,25 г (45,25%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,26-7,24 (м, 2H), 7,18-7,15 (м, 2H), 7,13 (д, J=4 Гц, 1H), 6,74 (д, J=4 Гц, 1H), 4,80-4,76 (м, 1H), 3,35-3,31 (м, 1H), 3,31-3,20 (м, 3H), 3,12-3,06 (м, 2H), 2,67-2,64 (м, 1H), 2,03 (с, 3H), 1,87-1,84 (м, 1H), 1,75-1,69 (м, 2H), 1,61-1,55 (м, 2H), 1,45-1,38 (м, 1H), 1,35-1,32 (м, 2H), 1,23-1,11 (м, 3H);

LCMS [M+H]=342, RT=2,91 минуты, (программа P1, колонка Y).

Ж. 1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(тиазол-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодид

К перемешанному раствору соединения 54 (0,25 г, 0,733 ммоль) в ДХЭ (5 мл) добавили метилйодид (0,2 мл, 2,93 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов в закрытой пробирке. Реакционную смесь концентрировали, а неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на нейтральном оксиде алюминия, элюируя 1% метанола в ДХМ, для получения твердого соединения. Твердый материал кристаллизовали из метанол-эфира для получения заданного соединения в виде грязновато-белого твердого вещества.

Выход: 0,146 г (41,24%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,28-7,22 (м, 2H), 7,19-7,16 (м, 3H), 6,83 (д, J=4 Гц, 1H), 3,39-3,32 (м, 3H), 3,2-3,08 (м, 6H), 3,01 (с, 3H), 2,84 (с, 3H), 2,32-2,21 (м, 1H), 1,86-1,78 (м, 2H), 1,67 (д, J=12 Гц, 2H), 1,52-1,49 (м, 2H), 1,38-1,35 (м, 1H);

LCMS [M⁺]=356,2, RT=2,44 минуты, (программа R1, колонка Z);

UPLC: 99,28% (RT=4,56 минуты, λ_260нм, подвижная фаза A. 0,05% ТФК в воде, B. ацетонитрил; колонка: Zorbax^® SB-C18 (4,6×50 мм) 1,8 мкм).

Пример 40: Общий способ J - Получение 1,1-диметил-4-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния бромида

К перемешанному раствору соединения 55, которое получили по общему способу А1 для получения соединения 8 (за исключением замены соединения 7е на соединение 7 и 4-(2-гидроксиэтил)-1-метилпиперидина на соединение 5, (1,2 г, 3,45 ммоль), в ДХЭ (20 мл) добавили раствор метилбромида (25% раствор в толуоле, 5,23 мл, 13,79 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 16 часов в закрытой пробирке. Реакционную смесь концентрировали, а неочищенный материал очистили хроматографией на силикагеле (230-400 меш), элюируя 10% метанола в ДХМ, а затем кристаллизовали из метанол-эфира для получения заданного соединения.

Выход: 1,5 г (98,15%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,28 (д, J=8 Гц, 1H), 7,21 (т, J=8 Гц, 2H), 7,17-7,14 (м, 2H), 7,11-7,09 (м, 2H), 7,03 (т, J=7 Гц, 1H), 3,98-3,94 (м, 1H), 3,37-3,33 (м, 2H), 3,24-3,18 (м, 2H), 3,06 (с, 3H), 3,02-2,92 (м, 7H), 2,79 (дд, J=15, 8 Гц, 2H), 2,28 (с, 3H), 1,69-1,66 (м, 2H), 1,51-1,46 (м, 3H), 1,27-1,25 (м, 2H);

LCMS: [M⁺]=363,2, RT=3,30 минуты, (программа P1, колонка Y);

UPLC: 99,54% (RT=3,21 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: A. 0,05% ТФК в воде, B. ацетонитрил; колонка: Zorbax^® SB C18 (4,6×50 мм) 1,8 мкм).

Пример 41: Общий способ К - Получение 7-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]-3-окса-6-азаспиро[5.5]ундекан-6-ия хлорида

К перемешанному раствору NaOH (78 мг, 1,95 ммоль) в воде (16 мл) добавили 1-хлор-2-(2-хлор-этокси)этан (0,3 мл, 2,6 ммоль) и нагревали раствор с дефлегматором в течение 1 часа. Затем добавили раствор соединения 56 (435 мг, 1,3 ммоль) в метаноле (4-5 капель) и воде (4 мл), и полученный раствор нагревали с дефлегматором в течение 16 часов. К реакционной смеси добавили 40% NaOH в условиях ледяного охлаждения соли и экстрагировали хлороформом. Затем раствор высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на нейтральном оксиде алюминия, элюируя 2-3% метанола в ДХМ, для получения твердого вещества. Твердый материал растирали с сухим эфиром и высушили под вакуумом для получения заданного соединения в виде твердого белого вещества.

Выход: 88 мг (15,35%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,33-7,31 (м, 1H), 7,26-7,21 (м, 4H), 7,19-7,10 (м, 2H), 7,07-7,03 (м, 1H), 4,06-4,02 (м, 1H), 3,96-3,90 (м, 1H), 3,84-3,73 (м, 3H), 3,59-3,49 (м, 5H), 3,12-3,10 (м, 2H), 3,02-2,95 (м, 3H), 2,92-2,81 (м, 3H), 2,30 (с, 3H), 1,97 (уш.с, 1H), 1,88 (уш.с, 1H), 1,71 (уш.с, 2H), 1,58-1,48 (м, 4H);

LCMS [M⁺]=405, RT=3,32 минуты, (программа P1, колонка Y);

UPLC: 98,59% (RT=5.47 минуты, λ_220нм, подвижная фаза A. 0,05% ТФК в воде, B. ацетонитрил; колонка: Zorbax^® XDB-C18 (4,6×50 мм) 1,8 мкм).

Пример 42: Общий способ L - Получение 1,1-диметил-2-[2-((2,3-дигидробензо[b][1,4]диоксин-6-ил)(индан-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодида

А. N-2,3-Дигидро-бензо[1,4]диоксин-6-ил-N-индан-2-иламин (соединение 57)

К перемешанному раствору 2-инданона (2 г, 15,1 ммоль) в ДХЭ (50 мл) последовательно добавили 2,3-дигидро-бензо[1,4]диоксин-6-иламин (2,28 г, 15,1 ммоль), Na(OAc)₃BH (4,81 г, 22,6 ммоль), AcOH (1,8 мл) при 0°С, и перемешивали смесь в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь растворили в этилацетате и промыли 1 н. NaOH, водой и насыщенным солевым раствором. Раствор высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 9-10% этилацетата в гексане, для получения соединения 57.

Выход: 3,9 г (96,5%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,21-7,11 (м, 4H), 6,60-6,56 (м, 1H), 6,14-6,11 (м, 2H), 5,41 (д, J=7 Гц, 1H), 4,16-4,02 (м, 6H), 3,32-3,21 (м, 2H), 2,77-2,71 (м, 2H);

LCMS [M+H]=268,2, RT=3,54 минуты, (программа P1, колонка Y).

Б. 2-[1-Бензил-2-((2,3-дигидробензо[b][1,4]диоксин-6-ил)(индан-2-ил)амино)этил]пиперидин (соединение 59)

К перемешанному раствору соединения 57 (1 г, 3,74 ммоль) в сухом толуоле (25 мл) добавили KO^tBu (0,63 г, 5,61 ммоль) при 0°С, и нагревали раствор при 50°С в течение 5 часов. Затем добавили раствор 2-(1-бензил-пиперидин-2-ил)этилового эфира трифторметансульфоновой кислоты (58) (1,4 г, 4,11 ммоль) в сухом толуоле (5 мл) при 0°С и нагревали смесь с дефлегматором в течение 16 часов. Данные ТСХ показали неполное превращение исходного материала, поэтому добавили еще 0,5 экв. соединения 58 и нагревали с дефлегматором в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавили в этилацетате, а органический слой промыли водой и насыщенным солевым раствором. Раствор высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 7-8% метанола в ДХМ, для получения соединения 59.

Выход: 1,8 г (68,46%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,28-7,10 (м, 9H), 6,69-6,67 (м, 1H), 6,38 (м, 2H), 4,35-4,34 (м, 1H), 4,17-4,14 (м, 4H), 3,67-3,63 (м, 1H), 3,14-3,07 (м, 4H), 2,87-2,81 (м, 3H), 2,49-2,5 (м, 1H), 2,32-2,28 (м, 1H), 2,00-1,95 (м, 2H), 1,61-1,23 (м, 8H);

LCMS [M+H]=468,8, RT=4,37 минуты, (программа P1, колонка Y).

В. 2-[2-((2,3-Дигидробензо[b][1,4]диоксин-6-ил)(индан-2-ил)амино)этил]пиперидин (соединение 60)

К перемешанному раствору соединения 59 (1,55 г, 3 31 ммоль) в метаноле (30 мл) добавили HCOONH₄ (2,08 г, 33,11 ммоль) и продували раствор азотом в течение 30 минут. Затем добавили 10% Pd-C (0,4 г) и нагревали раствор с дефлегматором в течение 6 часов. Реакционную смесь отфильтровали через реагент Целит®, а фильтрат концентрировали. Осадок растворили в этилацетате и промыли водой и насыщенным солевым раствором. Раствор высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением для получения соединения 60.

Выход: 0,98 г (78,2%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,20-7,11 (м, 4H), 6,74-6,71 (м, 1H), 6,47-6,46 (м, 2H), 4,33-4,29 (м, 1H), 4,20-4,15 (м, 4H), 3,16-3,11 (м, 3H), 3,07-3,01 (м, 2H), 2,88-2,81 (м, 3H), 2,78-2,71 (м, 1H), 1,75-1,67 (м, 4H), 1,48-1,37 (м, 2H), 1,37-1,34 (м, 1H), 1,23-1,17 (м, 1H);

LCMS [M+H]=469,2, RT=3,05 минуты, (программа P1, колонка Y).

Г. 2-[2-((2,3-Дигидробензо[b][1,4]диоксин-6-ил)(индан-2-ил)амино)этил]-1-метилпиперидин (соединение 61)

К перемешанному раствору соединения 60 (0,5 г, 1,32 ммоль) в ДХЭ (25 мл) последовательно добавили формальдегид (35% раствор в H₂O, 0,17 мл, 1,98 ммоль), Na(OAc)₃BH (0,84 г, 3,96 ммоль) и AcOH (0,2 мл) при 0°С, и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь растворили в этилацетате и подщелачивали 1 н. NaOH. Органический слой отделили и промыли водой и насыщенным солевым раствором. Раствор высушили над безводным Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 5-5,2% метанола в ДХМ, для получения соединения 61.

Выход: 0,25 г (48,2%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,21-7,19 (м, 2H), 7,13-7,11 (м, 2H), 6,71-6,69 (м, 1H), 6,41-6,37 (м, 2H), 4,36-4,33 (м, 1H), 4,19-4,14 (м, 4H), 3,14-3,01 (м, 4H), 2,84 (дд, J=16, 8 Гц, 2H), 2,67-2,64 (м, 1H), 1,97 (с, 3H), 1,91-1,86 (м, 1H), 1,78 (с, 1H), 1,58-1,55 (м, 1H), 1,50-1,33 (м, 5H), 1,20-1,11 (м, 2H);

LCMS [M+H]=393,2, RT=3,02 минуты, (программа P1, колонка Y)

Д. 1,1-Диметил-2-[2-((2,3-дигидробензо[b][1,4]диоксин-6-ил)(индан-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодид

К перемешанному раствору соединения 61 (0,25 г, 0,64 ммоль) в ДХЭ (3 мл) добавили метилйодид (0,15 мл, 2,55 ммоль) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 40 часов в закрытой пробирке. Реакционную смесь концентрировали, а неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 6-7% метанола в ДХМ, для получения твердого вещества. Твердый материал растирали с эфиром и отфильтровали через воронку из пористого стекла, и высушили под высоким вакуумом для получения заданного соединения.

Выход: 0,185 г (54,39%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,20-7,19 (м, 2H), 7,14-7,12 (м, 2H), 6,75-6,73 (м, 1H), 6,50-6,49 (м, 2H), 4,34-4,30 (м, 1H), 4,19-4,17 (м, 4H), 3,43-3,40 (м, 1H), 3,15-3,05 (м, 6H), 3,03-2,8 (м, 8H), 1,96-1,94 (м, 1H), 1,85-1,76 (м, 2H), 1,69-1,65 (м, 2H), 1,54-1,51 (м, 1H), 1,39-1,34 (м, 2H);

LCMS [M⁺]=407, RT=2,90 минуты, (программа P1, колонка Y);

HPLC: 99,78% (RT=3,01 минуты, λ_220нм, подвижная фаза A. 10 мМ ацетата аммония в воде, B. Ацетонитрил; колонка: Gemini^® NX-C18 (4,6×50 мм) 3 мкм).

Пример 43: Общий способ М - Получение (R)-1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния бромида

Спирт 37b синтезировали так, как описано ранее (Tetrahedron 2007, 63, 3000-3005).

В 250-мл круглодонную колбу поместили трет-бутиловый эфир 2-(2-гидроксиэтил)пиперидин-1-карбоновой кислоты 37b (5,0 г, 21,80 ммоль), дихлорметан (7,50 мл), раствор KBr (0,52 г, 4,36 ммоль) в 2,0 мл воды и TEMPO (0,1 г, 0,64 ммоль). Смесь охладили примерно до -5°C. Медленно добавили раствор NaOCl (31,1 мл, 5,25%, 24,1 ммоль) за 20 минут, поддерживая температуру при 0°С. Затем смесь перемешивали при 0°C в течение 20 минут. Органический слой отделили, а водный слой экстрагировали дихлорметаном. Объединенные дихлорметановые экстракты промыли водой (50 мл), затем насыщенным солевым раствором. После высушивания над MgSO₄, смесь отфильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очистили силикагелевой колоночной хроматографией для получения продукта 38b (4,1 г, 83%) в виде бесцветного маслянистого вещества.

В чистую и сухую 250-мл круглодонную колбу поместили триацетоксиборгидрид натрия (5,59 г, 26,40 ммоль), молекулярные сита 4 Å (10,0 г), амин 7е (7,37 г, 33,00 ммоль) и дихлорметан (20,0 мл). Смесь перемешали и охладили примерно до 0°С, и добавили раствор альдегида 38b (5,0 г, 22,00 ммоль) в 40 мл дихлорметана. Затем смесь дополнительно перемешивали при 0°С в течение около 1 часа и при температуре окружающей среды еще 40 минут. Реакционную смесь погасили насыщенным водным раствором NaHCO₃ (100 мл). После отделения органического слоя смесь экстрагировали дихлорметаном. После высушивания над MgSO₄ органический слой концентрировали. Неочищенный продукт очистили силикагелевой колоночной хроматографией для получения продукта 40f (7,2 г, 75,3%) в виде бесцветного маслянистого вещества.

В сухую и чистую 250-мл круглодонную колбу поместили лития-алюминия гидрид (1,53 г, 40,27 ммоль) и ТГФ (30,0 мл). Смесь нагревали до дефлегмации. По каплям добавили раствор карбамата 40f (7,0 г, 16,11 ммоль) в ТГФ (40,0 мл) за 5 минут. После нагревания с дефлегматором в течение 15 часов, реакционную смесь охладили до 0°С и медленно и осторожно добавили воду (1,55 мл), затем ТГФ (100 мл) и 15% NaOH (1,55 мл). После перемешивания смеси при комнатной температуре в течение 1,0 часа, добавили MgSO₄ и перемешивали смесь еще 15 минут. Смесь отфильтровали и концентрировали для получения неочищенного продукта, который очистили силикагелевой колоночной хроматографией для получения продукта 11е (4,7 г, 84%) в виде бледно-желтого маслянистого вещества. Оптическая чистота по хиральной HPLC: 99,3% э.и.

В чистую и сухую 250 мл круглодонную колбу поместили диамин 11е (4,70 г, 13,49 ммоль) и 1,07 М бромметан в МТБЭ (126,0 мл, 134,8 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 20 часов, реакционную смесь отфильтровали. Твердый остаток на фильтре промыли МТБЭ для получения продукта (4,40 г, 73%) в виде белого порошка. Оптическая чистота по хиральной HPLC: 99,3% э.и.

Пример 44: Общий способ N - Получение (S)-1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния хлорида

Соединение примера 35 (0,185 г, 0,50 ммоль) растворили в метаноле:воде (1:9, 20 мл) и обрабатывали хлоридной формой смолы Amberlite IRA-400 в течение 2 часов. Раствор отфильтровали и промыли метанолом. Фильтрат концентрировали, а остаток обрабатывали 0,5 н. HCl (10 мл) в течение 30 минут. Реакционную смесь концентрировали, а остаток дважды перегнали азеотропной перегонкой с толуолом. Неочищенный материал очистили хроматографией Combiflash® (дважды), элюируя 15% метанола в ДХМ, для получения липкого соединения, рН которого составил между 4 и 5. Затем это соединение лиофилизировали в течение 16 часов. После лиофилизации твердый материал снова очистили хроматографией Combiflash®, элюируя 15% метанола в ДХМ, для получения бесцветного липкого соединения, рН которого составил 6. Липкое вещество лиофилизировали в течение 16 часов для получения заданного соединения в виде твердого белого вещества.

Выход: 0,075 г (49,84%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,30 (д, J=8 Гц, 1H), 7,25-7,15 (м, 4H), 7,13-7,09 (м, 2H), 7,04 (т, J=7 Гц, 1H), 4,04-4,0 (м, 1H), 3,43 (д, J=12 Гц, 1H), 3,32-3,26 (м, 1H), 3,23-3,11 (м, 2H), 3,01-2,81 (м, 8H), 2,79 (с, 3H), 2,31 (с, 3H), 1,96-1,93 (м, 1H), 1,79-1,65 (м, 4H), 1,54-1,49 (м, 1H), 1,40-1,38 (м, 1H), 1,28-1,26 (м, 1H);

LCMS: [M⁺]=363,2, RT=3,14 минуты, (программа P1, колонка Y);

UPLC: 98,07% (RT=5.66 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: A. 0,05% ТФК в воде, B. ацетонитрил; колонка: Zorbax^® SB-C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм).

Примеры 45-52

Дополнительные соединения, перечисленные в Таблице 2, были получены таким же образом, с использованием способов, описанных для Примеров 36-44 и на Схемах 1-27. Выходы и характеристики¹H-ЯМР, LCMS, и HPLC для Примеров 45-52 даны сразу после Таблицы 2.

Таблица 2Пр.СтруктураНазваниеПрограмма ЖХ, колонкаСпособ синтеза1

(S)-1,1-дипропил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино) этил]пиперидиния йодид P1, YA1 или M2

(S)-1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино) этил]пиперидиния йодидP1, YA2 или M

3

1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)
(фенил)амино)
метил]пиперидиния йодидP1, YB14

1,1-диметил-2-[2-((2-фторфенил)
(индан-2-ил)
амино)этил] пиперидиния йодид R1, XB25

1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)
(фенил)амино) этил]пирролидиния йодидP1, ZC7

1,1-диметил-2-[3-((индан-2-ил)
(фенил)амино) пропил]
пиперидиния йодидP1, YD8

1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)
(фенил)амино) метил]
пирролидиния йодидP1, YE

9

(S)-1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино) этил]пиперидиния йодидP1, XA2 или M10

(R)-1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино) этил]пиперидиния йодидP2, YA2 или M11

(R)-1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино) этил]пиперидиния йодидP1, YA2 или M12

(R)-1,1-дипропил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино) этил]пиперидиния йодидP1, YA2 или M13

1,1-диэтил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино) метил]пиперидиния йодидP1, YB1

14

1,1-диметил-2-[2-((3-фторфенил)
(индан-2-ил)
амино)этил] пиперидиния йодидR1, XB215

1,1-диметил-2-[2-((4-фторфенил)
(индан-2-ил)
амино)этил] пиперидиния йодидR1, XB216

1,1-диэтил-2-[2-((2-фторфенил)
(индан-2-ил)
амино)этил] пиперидиния йодидP1, YB217

1,1-диэтил-2-[2-((3-фторфенил)
(индан-2-ил)
амино)этил] пиперидиния йодидP1, YB218

1,1-диэтил-2-[2-((4-фторфенил)
(индан-2-ил)
амино)этил] пиперидиния йодидP1, YB2

19

1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(3-метилфенил)амино) этил]пиперидиния йодидP1, YB220

6-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино) этил]-5-азониаспиро[4.5] декана бромидP1, YB221

1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(3-метилфенил)амино) этил]пиперидиния йодидP1, YB222

1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(4-метилфенил)амино) этил]пиперидиния йодидP1, YB223

1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(4-метилфенил)амино) этил]пиперидиния йодидP1, YB2

24

1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино) этил]пиперидиния йодидP1, ZB225

1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино) этил]пиперидиния йодидP1, YB226

1,1-диэтил-2-[3-((индан-2-ил)(фенил)амино) пропил]-пиперидиния йодидP1, YD27

1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)(4-метилфенил)амино)метил]пиперидиния йодидP1, XB128

1,1-диметил-2-[((4-фторфенил)
(индан-2-ил) амино)метил] пиперидиния йодидP1, YB1

29

1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)(3-метилфенил)амино)метил]пиперидиния йодидP1, YB130

1,1-диэтил-2-[((индан-2-ил)(4-метилфенил)амино)метил]пиперидиния йодидP1, YB131

1,1-диметил-2-[((3-фторфенил)
(индан-2-ил) амино)метил] пиперидиния йодидP1, YB232

(S)-1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино) метил]пиперидиния йодидB133

(R)-1,1-диметил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино) метил]пиперидиния йодидB1

34

(S)-1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)
амино)этил]
пиперидиния йодидA2 или M35

(R)-1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)
амино)этил]
пиперидиния йодидA2 или M36

1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)
(фенил)амино)
этил]пирролидиния йодидP1, YF37

1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)
(пиридин-2-ил)
амино)этил] пиперидиния йодидR1, ZG38

1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)
(пиримидин-2-ил)
амино)этил]
пиперидиния йодидP1, YH

39

1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)
(тиазол-2-ил)
амино)этил] пиперидиния йодидR1, ZI40

1,1-диметил-4-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино) этил]пиперидиния бромидP1, YJ41

7-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)
амино)этил]-3-окса-6-азаспиро
[5.5]ундекан-6-ия хлорид P1, YK42

1,1-диметил-2-[2-((2,3-дигидробензо
[b][1,4]диоксин-6-ил)(индан-2-ил)
амино)этил]-пиперидиния йодидP1, YL

43

(R)-1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)
амино)этил]
пиперидиния бромидP1, XM44

(S)-1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино-этил]пиперидиния хлоридP1, YN45

1,1-диметил-4-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино-этил]пиперидиния йодидP1, YB146

1,1-бис(2-гидроксиэтил)-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино-этил]пиперидиния бромидP1, YB2

47

1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(6-метилпиридин-2-ил)амино)этил]-пиперидиния йодидP1, YF48

1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(6-метилпиридин-2-ил)амино)этил]-пиперидиния бромидP1, VJ49

(S)-1,1-диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)-этил]пиперидиния бромидP1, YA2 или M50

1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино-этил]пиперидиния хлоридP1, WN

51

(R)-1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино-этил]пиперидиния хлоридP1, VN52

1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино-этил]пиперидиния бромидP1, XM

Пример 9: (S)-1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,25 г (66,48%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,25-7,16 (м, 6H), 6,87 (д, J=8 Гц, 2H), 6,72 (т, J=7 Гц, 1H), 4,67-4,64 (м, 1H), 3,44-3,41 (м, 1H), 3,27-3,15 (м, 6H), 3,02-2,92 (м, 5H), 2,82 (с, 3H), 2,02-1,98 (м, 1H), 1,85-1,77 (м, 2H), 1,69-1,65 (м, 2H), 1,55-1,52 (м, 1H), 1,42-1,33 (м, 2H);

LCMS: m/z=349,6 [M⁺], RT=3,18 минуты;

HPLC: 98,41%, RT=2,73 минуты, λ_200нм, подвижная фаза (i) 0,05% ТФК в воде (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB-C18 (4,6×50 мм) 1,8 мкм.

Пример 10: (R)-1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,1 г (33,35%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,25-7,16 (м, 6H), 6,87 (д, J=8 Гц, 2H), 6,72 (т, J=7 Гц, 1H), 4,67-4,64 (м, 1H), 3,45-3,42 (м, 1H), 3,28-3,15 (м, 6H), 3,02-2,93 (м, 5H), 2,82 (с, 3H), 2,02-1,99 (м, 1H), 1,85-1,77 (м, 2H), 1,69-1,66 (м, 2H), 1,55-1,52 (м, 1H), 1,42-1,36 (м, 2H);

LCMS: m/z=349,2 [M⁺], RT=8,98 минуты;

HPLC: 96,78%, RT=2,73 минуты, λ_200нм, подвижная фаза (i) 0,05% ТФК в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB-C18 (4,6×50 мм) 1,8 мкм.

Пример 11: (R)-1,1-Диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,23 г (72,29%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,26-7,16 (м, 6H), 6,87 (д, J=8 Гц, 2H), 6,72 (т, J=7 Гц, 1H), 4,68-4,63 (м, 1H), 3,50-3,47 (м, 1H), 3,39-3,16 (м, 9H), 3,02-2,92 (м, 3H), 1,89-1,85 (м, 2H), 1,66-1,47 (м, 6H), 1,10 (т, J=7 Гц, 6H);

LCMS: m/z=377,0 [M⁺], RT=3,35 минуты;

UPLC: 96,63%, RT=3,66 минуты, λ_200нм, подвижная фаза (i) 0,05% ТФК в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB-C18 (4,6×50 мм) 1,8 мкм.

Пример 12: (R)-1,1-Дипропил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,12 г (32,69%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,25-7,16 (м, 6H), 6,87 (д, J=8 Гц, 2H), 6,73 (т, J=7 Гц, 1H), 4,68-4,64 (м, 1H), 3,41-3,37 (м, 3H), 3,27-3,13 (м, 8H), 3,01-2,85 (м, 3H), 1,95-1,82 (м, 2H), 1,70-1,50 (м, 9H), 0,87 (т, J=7 Гц, 3H), 0,80 (т, J=7 Гц, 3H);

LCMS: m/z=405,0 [M⁺], RT=3,54 минуты;

UPLC: 97,82%, RT=4,00 минуты, λ_200нм, подвижная фаза (i) 0,05% ТФК в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB-C18 (4,6×50 мм) 1,8 мкм.

Пример 13: 1,1-Диэтил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино)метил]пиперидиния йодид

Выход: 0,06 г (21,15%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,33 (т, J=8 Гц, 2H), 7,18-7,11 (м, 6H), 7,05 (т, J=7 Гц, 1H), 4,25 (т, J=8 Гц, 1H), 3,69-3,64 (м, 2H), 3,51-3,47 (м, 1H), 3,43-3,39 (м, 1H), 3,22-3,16 (м, 4H), 3,09-3,03 (м, 2H), 2,96-2,78 (м, 3H), 2,10-2,07 (м, 1H), 1,94-1,82 (м, 1H), 1,71-1,62 (м, 3H), 1,51-1,39 (м, 1H), 1,16 (т, J=7 Гц, 3H), 0,99 (т, J=7 Гц, 3H);

LCMS: m/z=363,1 [M⁺], RT=3,37 минуты;

HPLC: 95,74%, RT=11,27 минуты, λ_200нм, подвижная фаза (i) ацетонитрил, (ii) 0,05% ТФК в воде; колонка: Atlantis® dC18 (150×4,6 мм) 5 мкм.

Пример 14: 1,1-Диметил-2-[2-((3-фторфенил)(индан-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 63 мг (44,9%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,27-7,17 (м, 5H), 1,63 (т, J=8 Гц, 2H), 6,46 (т, J=8 Гц, 1H), 4,73-4,66 (м, 1H), 3,45-3,39 (м, 2H), 3,26-3,17 (м, 6H), 3,03-2,93 (м, 5H), 2,81 (с, 3H), 2,00-1,98 (м, 1H), 1,80 (т, J=15 Гц, 2H), 1,67 (д, J=13 Гц, 2H), 1,54-1,51 (м, 1H), 1,45-1,34 (м, 2H);

LCMS: m/z=367,2 [M⁺], RT=2,66 минуты;

UPLC: 97,81%, RT=3,97 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 0,05% ТФК в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм.

Пример 15: 1,1-Диметил-2-[2-((4-фторфенил)(индан-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,065 г (46%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,24-7,22 (м, 2H), 7,16-7,14 (м, 2H), 7,07 (т, J=9 Гц, 2H), 6,97-6,93 (м, 2H), 4,51-4,47 (м, 1H), 3,42 (д, J=13 Гц, 1H), 3,32-3,26 (м, 2H), 3,17-3,09 (м, 4H), 2,96-2,87 (м, 5H), 2,80 (с, 3H), 1,97 (уш.с, 1H), 1,81 (т, J=16 Гц, 2H), 1,67 (д, J=12 Гц, 2H), 1,55-1,51 (м, 1H), 1,39-1,37 (м, 2H);

LCMS: m/z=367,2 [M⁺], RT=2,59 минуты;

HPLC: 98,57%, RT=4,01 минуты, λ_204нм, подвижная фаза: (i) 10 мМ NH₄OAc в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Xbridge™ C18 (50×4,6 мм) 5 мкм.

Пример 16: 1,1-Диэтил-2-[2-((2-фторфенил)(индан-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 119 мг (38,53%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,30 (т, J=16 Гц, 1H), 7,19-7,09 (м, 7H), 4,25-4,21 (м, 1H), 3,54-3,49 (м, 1H), 3,30 (с, 1H), 3,28-3,19 (м, 4H), 3,11-2,97 (м, 4H), 2,89-2,84 (м, 2H), 1,87-1,84 (м, 2H), 1,65 (уш.с, 4H), 1,49-1,47 (уш.с, 2H), 1,09-1,02 (м, 6H);

LCMS: m/z=395,4 [M⁺], RT=3,25 минуты;

HPLC: 98,74%, RT=3,77 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 10 мМ NH₄OAc в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Xbridge™ C18 (50×4,6 мм) 3 мкм.

Пример 17: 1,1-Диэтил-2-[2-((3-фторфенил)(индан-2-ил)амино)этил)пиперидиния йодид

Выход: 0,060 г (35,32%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,27-7,17 (м, 5H), 6,65-6,59 (м, 2H), 6,47 (т, J=9 Гц, 1H), 4,71-4,68 (м, 1H), 3,48-3,46 (м, 1H), 3,40-3,34 (м, 2H), 3,30-3,19 (м, 5H), 3,03-2,93 (м, 4H), 1,85 (м, 2H), 1,66-1,44 (м, 7H), 1,11 (т, J=6 Гц, 6H);

LCMS: m/z=395,4 [M⁺], RT=3,25 минуты;

HPLC: 97,91%, RT=4,28 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 10 мМ NH₄OAc в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Xbridge™ C18 (50×4,6 мм) 5 мкм.

Пример 18: 1,1-Диэтил-2-[2-((4-фторфенил)(индан-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,101 г (32%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,23 (уш.с, 2H), 7,17-7,14 (м, 2H), 7,07 (т, J=9 Гц, 2H), 6,95-6,92 (м, 2H), 4,51 (м, 1H), 3,55-3,45 (м, 1H), 3,31 (с, 1H), 3,29-3,23 (м, 2H), 3,19-3,11 (м, 5H), 3,01-2,91 (м, 4H), 1,85 (уш.с, 2H), 1,66-1,62 (м, 4H), 1,46 (уш.с, 2H), 1,11-1,06 (м, 6H);

LCMS: m/z=395,4 [M⁺], RT=3,21 минуты;

HPLC: 99,51%, RT=3,71 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 10 мМ NH₄OAc в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Xbridge™ C18 (50×4,6 мм) 3 мкм.

Пример 19: 1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(3-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,053 г (40,47%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,24 (уш.с, 2H), 7,16 (т, J=3 Гц, 2H), 7,09 (т, J=8 Гц, 1H), 6,69-6,66 (м, 2H), 6,55 (д, J=7 Гц, 1H), 4,65-4,61 (м, 1H), 3,43 (д, J=12 Гц, 1H), 3,28-3,22 (м, 2H), 3,19-3,13 (дд, J=7, 16 Гц, 3H), 3,00-2,91 (м, 5H), 2,81 (с, 3H), 2,25 (с, 3H), 2,00 (уш,с, 1H), 1,81 (т, J=14 Гц, 2H), 1,67 (д, J=13 Гц, 2H), 1,54-1,51 (м, 2H), 1,39-1,36 (м, 2H);

LCMS: m/z=363,4 [M⁺], RT=1,21 минуты;

HPLC: 95,71%, RT=3,79 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 10 мМ NH₄OAc в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Xbridge™ C18 (50×4,6 мм) 3 мкм.

Пример 20: 6-[2-((Индан-2-ил)(фенил)амино)этил]-5-азониаспиро[4.5]декана бромид

Выход: 0,020 г (11,72%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,25-7,16 (м, 6H), 6,88 (д, J=8 Гц, 2H), 6,72 (т, J=7 Гц, 1H), 4,67-4,64 (м, 1H), 3,59-3,57 (м, 1H), 3,50-3,39 (м, 1H), 3,31 (с, 1H), 3,26-3,17 (м, 7H), 3,00-2,96 (м, 2H), 1,99-1,72 (м, 10H), 1,49-1,44 (м, 3H);

LCMS: m/z=375 [M⁺], RT=3,63 минуты;

UPLC: 99,64%, RT=3,62 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 0,05% ТФК в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм.

Пример 21: 1,1-Диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(3-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,194 г (47,38%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,25 (уш.с, 2H), 7,17 (т, J=3 Гц, 2H), 7,09 (т, J=8 Гц, 1H), 6,67 (д, J=8 Гц, 2H), 6,55 (д, J=7 Гц, 1H), 4,65-4,62 (м, 1H), 3,49-3,46 (м, 1H), 3,36-3,31 (м, 2H), 3,25-3,15 (м, 6H), 3,03-2,90 (м, 4H), 2,24 (с, 3H), 1,84 (уш.с, 2H), 1,66-1,58 (м, 4H), 1,46 (уш.с, 2H), 1,11-1,10 (м, 6H);

LCMS: m/z=391,2 [M⁺], RT=3,95 минуты;

UPLC: 97,75%, RT=3,73 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 0,05% ТФК в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм.

Пример 22: 1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(4-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,202 г (73,56%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,23-7,22 (м, 2H), 7,16-7,14 (м, 2H), 7,04 (д, J=8 Гц, 2H), 6,83 (д, J=8 Гц, 2H), 4,54-4,50 (м, 1H), 3,42 (д, J=13 Гц, 1H), 3,29-3,23 (м, 3H), 3,16-3,09 (м, 3H), 2,96-2,88 (м, 5H), 2,80 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 1,98 (уш.с, 1H), 1,84-1,73 (м, 2H), 1,67 (д, J=12 Гц, 2H), 1,53-1,47 (м, 1H), 1,39-1,36 (м, 2H);

LCMS: m/z=363,2 [M⁺], RT=3,33 минуты;

UPLC: 99,25%, RT=3,38 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 0,05% ТФК в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм.

Пример 23: 1,1-Диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(4-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,318 мг (51,26%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,24-7,22 (м, 2H), 7,17-7,15 (м, 2H), 7,04 (д, J=8 Гц, 2H), 6,81 (д, J=8 Гц, 2H), 4,54-4,52 (м, 1H), 3,52-3,48 (м, 1H), 3,30-3,23 (м, 3H), 3,21-3,11 (м, 6H), 3,00-2,90 (м, 3H), 2,20 (с, 3H), 1,84 (уш.с, 2H), 1,65-1,59 (м, 4H), 1,45 (уш.с, 2H), 1,11-1,07 (м, 6H);

LCMS: m/z=391,2 [M⁺], RT=3,28 минуты;

HPLC: 98,10%, RT=3,95 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 10 мМ NH₄OAc в воде, (ii) MeOH; колонка: Xbridge™ C18 (50×4,6 мм) 5 мкм.

Пример 24: 1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,092 г (31,35%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,30 (д, J=8 Гц, 1H), 7,25-7,17 (м, 4H), 7,12-7,10 (м, 2H), 7,05 (т, J=7 Гц, 1H), 4,04-4,01 (м, 1H), 3,41 (д, J=13 Гц, 1H), 3,32-3,22 (м, 2H), 3,19-3,10 (м, 2H), 3,02-2,96 (м, 2H), 2,93-2,84 (м, 2H), 2,79 (с, 6H), 2,31 (с, 3H), 2,05-1,93 (м, 1H), 1,77 (д, J=14 Гц, 2H), 1,67 (д, J=10 Гц, 2H), 1,53-1,50 (м, 1H), 1,43-1,37 (м, 1H), 1,29-1,23 (м, 1H);

LCMS: m/z=363,1 [M⁺], RT=2,85 минуты;

HPLC: 98,66%, RT=4,20 минуты, λ_210нм, подвижная фаза: (i) 10 мМ NH₄OAc в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Xbridge™ C18 (50×4,6 мм) 5 мкм.

Пример 25: 1,1-Диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,140 г (30,15%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,31 (д, J=8 Гц, 1H), 7,25-7,23 (м, 1H), 7,20-7,17 (м, 3H), 7,12-7,10 (м, 2H), 7,05 (т, J=7 Гц, 1H), 4,02-3,98 (м, 1H), 3,50-3,47 (м, 1H), 3,25-3,17 (м, 6H), 3,02-2,93 (м, 3H), 2,87 (д, J=8 Гц, 2H), 2,84-2,80 (м, 1H), 2,30 (с, 3H), 1,84-1,79 (м, 2H), 1,69-1,62 (м, 4H), 1,49-1,43 (м, 2H), 1,04 (т, J=6 Гц, 3H), 0,89 (т, J=7 Гц, 3H);

LCMS: m/z=391,2 [M⁺], RT=3,49 минуты;

HPLC: 99,51%, RT=8,11 минуты, λ_210нм, подвижная фаза: (i) 10 мМ NH₄OAc в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: XTerra® C18 (250×4,6 мм) 5 мкм.

Пример 26: 1,1-Диэтил-2-[3-((индан-2-ил)(фенил)амино)пропил]пиперидиния йодид

Выход: 58 мг (33%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,24-7,15 (м, 6H), 6,85 (д, J=8 Гц, 2H), 6,69 (т, J=7 Гц, 1H), 4,63 (т, J=7 Гц, 1H), 3,59-3,52 (м, 1H), 3,48-3,42 (м, 1H), 3,36-3,34 (м, 1H), 3,19-3,13 (м, 6H), 3,04-2,93 (м, 4H), 1,76-1,62 (м, 6H), 1,46-1,35 (м, 4H), 1,16 (т, J=7 Гц, 6H);

LCMS: m/z=391,2 [M+], RT=3,29 минуты;

UPLC: 99,47%, RT=3,27 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 0,05% ТФК в воде (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм.

Пример 27: 1,1-Диметил-2-[((индан-2-ил)(4-метилфенил)амино)метил]пиперидиния йодид

Выход: 193 мг (32%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,18 (т, J=4 Гц, 2H), 7,14-7,10 (м, 4H), 7,02 (д, J=3 Гц, 2H), 7,01 (д, J=8 Гц, 2H), 4,33-4,29 (м, 1H), 3,77 (д, J=12 Гц, 1H), 3,38 (д, J=7 Гц, 2H), 3,20 (с, 1H), 3,16 (с, 3H), 2,99-2,92 (м, 8H), 2,24 (с, 3H), 1,97 (д, J=13 Гц, 1H), 1,72-1,63 (м, 4H), 1,39-1,23 (м, 1H);

LCMS: m/z=349 [M+], RT=1,40 минуты;

UPLC: 99,42%, RT=4,40 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 0,05% ТФК в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Zorbax® SB C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм.

Пример 28: 1,1-Диметил-2-[((4-фторфенил)(индан-2-ил)амино)метил]пиперидиния йодид

Выход: 164 мг (30%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,19-7,11 (м, 8H), 4,29-4,25 (м, 1H), 3,77 (д, J=11 Гц, 1H), 3,39-3,35 (м, 2H), 3,25-3,15 (м, 5H), 3,01-2,87 (м, 7H), 1,98 (д, J=14 Гц, 1H), 1,78-1,64 (м, 4H), 1,33-1,30 (м, 1H);

LCMS: m/z=353,2 [M+], RT=3,17 минуты;

UPLC: 99,87%, RT=3,19 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 0,05% уксусной кислоты в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Gemini® NX C18 (50×4,6 мм) 3 мкм.

Пример 29: 1,1-Диметил-2-[((индан-2-ил)(3-метилфенил)амино)метил]пиперидиния йодид

Выход: 193 мг (42%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,23-7,13 (м, 5H), 6,86 (т, J=8 Гц, 2H), 6,72 (д, J=7 Гц, 1H), 4,46 (т, J=8 Гц, 1H), 3,82 (д, J=11 Гц, 1H), 3,42-3,37 (м, 2H), 3,25 (с, 1H), 3,19 (с, 3H), 3,03 (т, J=9 Гц, 2H), 2,98-2,95 (м, 5H), 2,26 (с, 3H), 1,95 (д, J=13 Гц, 1H), 1,76-1,65 (м, 4H), 1,35-1,31 (м, 1H);

LCMS: m/z=348,8 [M+], RT=3,34 минуты, (подвижная фаза: ацетат аммония в воде/ацетонитрил; колонка: X-Bridge);

UPLC: 99,85%, RT=3,19 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 0,05% уксусной кислоты в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Gemini® NX C18 (50×4,6 мм) 3 мкм.

Пример 30: 1,1-Диэтил-2-[((индан-2-ил)(4-метилфенил)амино)метил]пиперидиния йодид

Выход: 90 мг (29%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,17-7,10 (м, 8H), 4,14-4,08 (м, 1H), 3,66-3,60 (м, 2H), 3,52-3,47 (м, 1H), 3,39-3,34 (м, 1H), 3,25-3,15 (м, 5H), 3,07-3,01 (м, 1H), 2,91-2,82 (м, 3H), 2,27 (с, 3H), 2,12 (д, J=14 Гц, 1H), 1,89-1,86 (м, 1H), 1,66 (уш.с, 3H), 1,43 (уш.с, 1H), 1,16 (т, J=8 Гц, 3H), 0,95 (т, J=7 Гц, 3H);

LCMS: m/z=377 [M+], RT=3,40 минуты;

HPLC: 95,06%, RT=6,08 минуты, λ_210нм, подвижная фаза: (i) 10 мМ NH₄OAc в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: XBridge® C18 (50×4,6 мм) 5 мкм.

Пример 31: 1,1-Диметил-2-[((3-фторфенил)(индан-2-ил)амино)метил]пиперидиния йодид

Выход: 75 мг (25%);

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,28-7,16 (м, 5H), 6,79 (т, J=4 Гц, 2H), 6,64-6,60 (кв, J=6 Гц, 1H), 4,58 (кв, J=9 Гц, 1H), 3,86 (д, J=11 Гц, 1H), 3,47-3,41 (м, 4H), 3,21 (с, 3H), 3,13-3,02 (м, 4H), 3,00 (с, 3H), 1,88-1,70 (м, 5H), 1,35-1,32 (м, 1H);

LCMS: m/z=353 [M+], RT=3,09 минуты;

UPLC: 99,58%, RT=3,15 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: (i) 0,05% уксусной кислоты в воде, (ii) ацетонитрил; колонка: Gemini® NX C18 (50×4,6 мм) 3 мкм.

Пример 32: (S)-1,1-Диметил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино)метил]пиперидиния йодид

Выход: 1 г (69,2%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7,27 (т, J=8 Гц, 2H), 7,22-7,20 (м, 2H), 7,16-7,14 (м, 2H), 7,05 (д, J=8 Гц, 2H), 6,90 (т, J=7 Гц, 1H), 4,52-4,44 (м, 1H), 3,85 (д, J=12 Гц, 1H), 3,43-3,36 (м, 4H), 3,21 (с, 3H), 3,06 (д, J=8 Гц, 2H), 3,01-2,99 (м, 5H), 1,96-1,92 (м, 1H), 1,76-1,69 (м, 4H), 1,34-1,31 (м, 1H);

LCMS: m/z=335,4 [M⁺], RT=2,97 минуты;

UPLC: 98,93% (RT=3,13 минуты; λ_200нм, подвижная фаза A. 0,05% HCOOH в воде, B. ацетонитрил; колонка: Gemini NX C18 (50×4,6 мм) 3 мкм);

Удельное вращение: [-9,3°] при ≈25°C (0,60% раствор в MeOH);

Хиральная HPLC: 100% э.и. (RT=5,47 минуты; λ_254нм, подвижная фаза. Гексан:EtOH:ДЭА:ТФК=60:40:0,1:0,1; колонка: Chiralpak®-IC (4,6×250 мм) 5 мкм).

Пример 33: (R)-1,1-Диметил-2-[((индан-2-ил)(фенил)амино)метил]пиперидиния йодид

Выход: 0,62 г (78%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7,27 (т, J=8 Гц, 2H), 7,22-7,20 (м, 2H), 7,16-7,14 (м, 2H), 7,05 (д, J=8 Гц, 2H), 6,90 (т, J=7 Гц, 1H), 4,52-4,44 (м, 1H), 3,84 (д, J=12 Гц, 1H), 3,43-3,35 (м, 4H), 3,19 (с, 3H), 3,06 (д, J=8 Гц, 2H), 3,01-2,99 (м, 5H), 1,96-1,92 (м, 1H), 1,76-1,69 (м, 4H), 1,34-1,31 (м, 1H);

LCMS: m/z=335,0 [M⁺], RT=3,07 минуты;

UPLC: 99,83% (RT=3,13 минуты; λ_200нм, подвижная фаза A. 0,05% HCOOH в воде, B. Ацетонитрил; колонка: Gemini NX C18 (50×4,6 мм) 3 мкм);

Удельное вращение: [+9,3°] при ≈25°C (0,60% раствор в MeOH);

Хиральная HPLC: 99,3% э.и. (RT=5,97 минуты; λ_254нм, подвижная фаза. Гексан:EtOH:ДЭА:ТФК=60:40:0,1:0,1; колонка: Chiralpak®-IC (4,6×250 мм) 5 мкм).

Пример 34: (S)-1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,193 г (39,9%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7,31 (д, J=8 Гц, 1H), 7,25-7,17 (м, 4H), 7,13-7,10 (м, 2H), 7,05 (т, J=7 Гц, 1H), 4,05-4,00 (м, 1H), 3,43-3,40 (м, 1H), 3,26-3,12 (м, 3H), 3,02-2,93 (м, 2H), 2,90-2,82 (м, 5H), 2,79 (с, 3H), 2,31 (с, 3H), 1,99-1,95 (м, 1H), 1,79-1,66 (м, 4H), 1,53-1,50 (м, 1H), 1,40-1,37 (м, 1H), 1,29-1,23 (м, 1H);

LCMS: m/z=363,0 [M⁺], RT=3,23 минуты;

HPLC: 99,11% (RT=4,28 минуты; λ_212нм, подвижная фаза A. 10 мМ NH₄OAc в воде, B. Ацетонитрил; колонка: Xbridge-C18 (50×4,6 мм) 5 мкм);

Удельное вращение: [+13,5°] при ≈25°C (0,599% раствор в MeOH);

Хиральная HPLC: 100% э.и. (RT=8,66 минуты; λ_212нм,подвижная фаза. Гексан:EtOH:ДЭА:ТФК=70:30:0,1:0,1; колонка: Chiralpak®-IC (4,6×250 мм) 5 мкм).

Пример 35: (R)-1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,4 г (41,9%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7,31 (д, J=8 Гц, 1H), 7,25-7,17 (м, 4H), 7,13-7,10 (м, 2H), 7,05 (т, J=7 Гц, 1H), 4,05-4,00 (м, 1H), 3,43-3,40 (м, 1H), 3,26-3,12 (м, 3H), 3,02-2,96 (м, 2H), 2,91-2,84 (м, 5H), 2,79 (с, 3H), 2,31 (с, 3H), 1,99-1,95 (м, 1H), 1,79-1,66 (м, 4H), 1,53-1,50 (м, 1H), 1,40-1,37 (м, 1H), 1,29-1,24 (м, 1H);

LCMS: m/z=362,8 [M⁺], RT=3,20 минуты;

UPLC: 98,82% (RT=4,86 минуты; λ_200нм, подвижная фаза A. 0,05% ТФК в воде, B. Ацетонитрил; колонка: Zorbax SB C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм);

Удельное вращение: [-14,5°] при ≈25°C (0,60% раствор в MeOH);

Хиральная HPLC: 98,5% э.и. (RT=12,79 минуты; λ_212нм,подвижная фаза. Гексан:EtOH:ДЭА:ТФК=70:30:0,1:0,1; колонка: Chiralpak®-IC (4,6×250 мм) 5 мкм).

Пример 45: 1,1-Диметил-4-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,081 г (13,9%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ7,29-7,27 (м, 1H), 7,23-7,19 (м, 2H), 7,16-7,14 (м, 2H), 7,10-7,08 (м, 2H), 7,04-7,01 (м, 1H), 3,98-3,94 (м, 1H), 3,36-3,31 (м, 2H), 3,23-3,17 (м, 2H), 3,05 (с, 3H), 3,01-2,90 (м, 7H), 2,82-2,76 (м, 2H), 2,28 (с, 3H), 1,69-1,66 (м, 2H), 1,50-1,45 (м, 3H), 1,26 (уш.с, 2H);

LCMS [M⁺]=363, RT=3,38 минуты, (программа P1, колонка Y);

UPLC: 99,47% (RT=5,02 минуты, λ_220нм, подвижная фаза A. 0,05% ТФК, B. Ацетонитрил; колонка: Zorbax^® XDB-C18 (4,6×50 мм) 1,8 мкм).

Пример 46: 1,1-Бис(2-гидроксиэтил)-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния бромид

Выход: 0,033 г (10%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7,30-7,28 (м, 1H), 7,24-7,09 (м, 6H), 7,04 (т, J=7 Гц, 1H), 5,35-5,34 (м, 1H), 5,27-5,24 (м, 1H), 4,04-4,02 (м, 1H), 3,73-3,55 (м, 6H), 3,50 (с, 3H), 3,41-3,32 (м, 1H), 3,07-2,95 (м, 5H), 2,88-2,77 (м, 2H), 2,29 (с, 3H), 1,95 (уш.с, 1H), 1,86-1,83 (м, 2H), 1,64-1,61 (м, 3H), 1,46-1,36 (м, 2H);

LCMS [M⁺]=423, RT=3,19 минуты, (программа P1, колонка Y);

UPLC: 99,71% (RT=4,89 минуты, λ_220нм, подвижная фаза: A. 0,05% ТФК в воде, B. ацетонитрил; колонка: Zorbax^® SB-C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм).

Пример 47: 1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(6-метилпиридин-2-ил)амино)этил]пиперидиния йодид

Выход: 0,15 г (36,20%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7,40 (т, J=8 Гц, 1H), 7,26-7,25 (м, 2H), 7,18-7,16 (м, 2H), 6,54 (д, J=8 Гц, 1H), 6,48 (д, J=7 Гц, 1H), 5,12-5,05 (м, 1H), 3,46-3,41 (м, 3H), 3,28-3,22 (м, 2H), 3,19-3,13 (м, 2H), 3,05 (с, 3H), 3,02-2,98 (м, 2H), 2,86 (с, 3H), 2,29 (с, 3H), 2,17-2,13 (м, 1H), 1,97-1,93 (м, 1H), 1,83-1,77 (м, 1H), 1,70-1,67 (м, 2H), 1,61-1,55 (м, 1H), 1,51-1,37 (м, 2H);

LCMS [M⁺]=364,2, RT=3,19 минуты, (программа P1, колонка Y);

UPLC: 99,39% (RT=4,04 минуты, λ_220нм, подвижная фаза A. 0,05% ТФК в воде, B. Ацетонитрил; колонка: Zorbax^® XDB-C18 (4,6×50 мм) 1,8 мкм).

Пример 48: 1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(6-метилпиридин-2-ил)амино)этил]пиперидиния бромид

Выход: 0,057 г (18,8%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7,40 (т, J=8 Гц, 1H), 7,26-7,25 (м, 2H), 7,19-7,16 (м, 2H), 6,54 (д, J=8 Гц, 1H), 6,48 (д, J=7 Гц, 1H), 5,10-5,06 (м, 1H), 3,46-3,42 (м, 3H), 3,26-3,22 (м, 2H), 3,19-3,13 (м, 2H), 3,05-2,98 (м, 5H), 2,86 (с, 3H), 2,29 (с, 3H), 2,17-2,13 (м, 1H), 1,97-1,93 (м, 1H), 1,83-1,77 (м, 1H), 1,70-1,57 (м, 3H), 1,47-1,37 (м, 2H);

LCMS: [M⁺]=364,2, RT=3,04 минуты, (программа P1, колонка V);

UPLC: 99,87% (RT=4,02 минуты, λ_200нм, подвижная фаза A. 0,05% ТФК в воде, B. Ацетонитрил; колонка: Zorbax^® SB-C18 (4,6×50 мм) 1,8 мкм).

Пример 49: (S)-1,1-Диэтил-2-[2-((индан-2-ил)(фенил)амино)этил]пиперидиния бромид

Выход: 2,9 г (25%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7,25-7,16 (м, 6H), 6,87 (д, J=8 Гц, 2H), 6,72 (т, J=7 Гц, 1H), 4,67-4,63 (м, 1H), 3,52-3,47 (м, 1H), 3,40-3,34 (м, 1H), 3,28-3,16 (м, 8H), 3,04-2,92 (м, 3H), 1,88-1,86 (м, 2H), 1,67-1,47 (м, 6H), 1,10 (т, J=6 Гц, 6H);

LCMS [M⁺]=377,0, RT=3,11 минуты, (программа P1, колонка Y);

UPLC: 99,77% (RT=5,08 минуты, λ_200нм, подвижная фаза A. 0,05% ТФК в воде, B. Ацетонитрил; колонка: Zorbax^® SB-C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм);

Хиральная HPLC: 100% э.и. (RT=6,47 минуты, λ_257нм,подвижная фаза. MeOH:ДЭА:ТФК=100:0,1:0,1, колонка: Chiralpak®-IA (4,6×250 мм) 5 мкм);

Удельное оптическое вращение: [-10,8^o] при ≅25^oC (0,39% раствор в CHCl₃).

Пример 50: 1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния хлорид

Выход: 0,14 г (43%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7,31 (д, J=8 Гц, 1H), 7,25-7,17 (м, 4H), 7,12-7,11 (м, 2H), 7,05 (т, J=7 Гц, 1H), 4,05-4,01 (м, 1H), 3,43 (д, J=12 Гц, 1H), 3,28-3,12 (м, 4H), 3,00-2,96 (м, 2H), 2,92-2,80 (м, 8H), 2,31 (с, 3H), 1,99-1,96 (м, 1H), 1,79-1,65 (м, 4H), 1,57-1,47 (м, 1H), 1,41-1,36 (м, 1H), 1,28-1,26 (м, 1H);

LCMS: [M⁺]=363,2, RT=2,85 минуты, (программа P1, колонка W);

UPLC: 99,29% (RT=5,80 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: A. 0,05% ТФК в воде, B. ацетонитрил; колонка: Zorbax^® SB-C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм).

Пример 51: (R)-1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния хлорид

Выход: 0,033 г (20%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7,31 (д, J=8 Гц, 1H), 7,25-7,17 (м, 4H), 7,13-7,10 (м, 2H), 7,05 (т, J=7 Гц, 1H), 4,05-4,01 (м, 1H), 3,43 (д, J=12 Гц, 1H), 3,26-3,10 (м, 3H), 3,02-2,96 (м, 2H), 2,93-2,80 (м, 9H), 2,31 (с, 3H), 1,99-1,95 (м, 1H), 1,79-1,65 (м, 4H), 1,55-1,47 (м, 1H), 1,40-1,36 (м, 1H), 1,29-1,26 (м, 1H);

LCMS [M⁺]=363, RT=3,53 минуты, (программа P1, колонка V);

UPLC: 98,46% (RT=4,94 минуты, λ_200нм, подвижная фаза: A. 0,05% HCOOH в воде, B. ацетонитрил; колонка: Gemini^® NX C18 (50×4,6 мм) 3 мкм).

Пример 52: 1,1-Диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния бромид

Выход: 0,215 г (42%);

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7,31 (д, J=8 Гц, 1H), 7,25-7,17 (м, 4H), 7,12-7,10 (м, 2H), 7,05 (т, J=7 Гц, 1H), 4,05-4,01 (м, 1H), 3,42 (д, J=12 Гц, 1H), 3,26-3,12 (м, 3H), 3,02-2,96 (м, 2H), 2,91-2,79 (м, 9H), 2,31 (с, 3H), 1,99-1,95 (м, 1H), 1,79-1,65 (м, 4H), 1,57-1,47 (м, 1H), 1,43-1,36 (м, 1H), 1,29-1,26 (м, 1H);

LCMS: [M⁺]=363,4, RT=1,83 минуты, (программа P1, колонка V);

UPLC: 99,74% (RT=5,80 минуты, λ_200нм, подвижная фаза A. 0,05% ТФК в воде, B. Ацетонитрил; колонка: Zorbax^® SB-C18 (50×4,6 мм) 1,8 мкм).

Пример 53: hTRVI1-экспрессирующие клетки и анализы in vitro

Анализы in vitro были разработаны для оценки ингибирования ответа натриевого канала на соединения после стимуляции нагреванием (47°C) в клетках, экспрессирующих hTRPV1.

A. Получение клеток, экспрессирующих hTRPV1

Представленные ниже клетки были разработаны в качестве предварительного скрининга в помощь выбора соединения для дальнейшей оценки в анализе in vivo.

(i) Плазмида для доставки в клетки hTRPV1

Для получения линии клеток, открытая рамка считывания, кодирующая hTRPV1, была амплифицирована ПЦР из библиотеки кДНК на основе линии клеток нейробластомы человека IMR322 [NCBI dbEST ID: 18353] с использованием следующих праймеров:

(a) TRPV1_KpnIF (прямой праймер) [SEQ ID NO:2]

5’-ATAAACGGTACCGCCGCCACCATGAAGAAATGGAGCAGCAC-3’

(б) TRPV1_PmeIR (обратный праймер) [SEQ ID NO:3]

5’-ATCGGTTTAAACTCACTTCTCTCCGGAAGCGGC-3’

Прямой праймер содержит сайт KpnI [GGTACC (подчеркнут в (a) выше] и последовательность Kozak [GCCGCCACC (двойное подчеркивание в (a)]. Обратный праймер содержит сайт PmeI [GTTTAAAC, подчеркнуто в (б)].

Открытая рамка считывания hTRPV1 (соответствует NCBI NM_080706.3): SEQ ID NO:4:

ATGAAGAAATGGAGCAGCACAGACTTGGGGGCAGCTGCGGACCCACTCCAAAAGGACACC

TGCCCAGACCCCCTGGATGGAGACCCTAACTCCAGGCCACCTCCAGCCAAGCCCCAGCTC

TCCACGGCCAAGAGCCGCACCCGGCTCTTTGGGAAGGGTGACTCGGAGGAGGCTTTCCCG

GTGGATTGCCCTCACGAGGAAGGTGAGCTGGACTCCTGCCCGACCATCACAGTCAGCCCT

GTTATCACCATCCAGAGGCCAGGAGACGGCCCCACCGGTGCCAGGCTGCTGTCCCAGGAC

TCTGTCGCCGCCAGCACCGAGAAGACCCTCAGGCTCTATGATCGCAGGAGTATCTTTGAA

GCCGTTGCTCAGAATAACTGCCAGGATCTGGAGAGCCTGCTGCTCTTCCTGCAGAAGAGC

AAGAAGCACCTCACAGACAACGAGTTCAAAGACCCTGAGACAGGGAAGACCTGTCTGCTG

AAAGCCATGCTCAACCTGCACGACGGACAGAACACCACCATCCCCCTGCTCCTGGAGATC

GCGCGGCAAACGGACAGCCTGAAGGAGCTTGTCAACGCCAGCTACACGGACAGCTACTAC

AAGGGCCAGACAGCACTGCACATCGCCATCGAGAGACGCAACATGGCCCTGGTGACCCTC

CTGGTGGAGAACGGAGCAGACGTCCAGGCTGCGGCCCATGGGGACTTCTTTAAGAAAACC

AAAGGGCGGCCTGGATTCTACTTCGGTGAACTGCCCCTGTCCCTGGCCGCGTGCACCAAC

CAGCTGGGCATCGTGAAGTTCCTGCTGCAGAACTCCTGGCAGACGGCCGACATCAGCGCC

AGGGACTCGGTGGGCAACACGGTGCTGCACGCCCTGGTGGAGGTGGCCGACAACACGGCC

GACAACACGAAGTTTGTGACGAGCATGTACAATGAGATTCTGATCCTGGGGGCCAAACTG

CACCCGACGCTGAAGCTGGAGGAGCTCACCAACAAGAAGGGAATGACGCCGCTGGCTCTG

GCAGCTGGGACCGGGAAGATCGGGGTCTTGGCCTATATTCTCCAGCGGGAGATCCAGGAG

CCCGAGTGCAGGCACCTGTCCAGGAAGTTCACCGAGTGGGCCTACGGGCCCGTGCACTCC

TCGCTGTACGACCTGTCCTGCATCGACACCTGCGAGAAGAACTCGGTGCTGGAGGTGATC

GCCTACAGCAGCAGCGAGACCCCTAATCGCCACGACATGCTCTTGGTGGAGCCGCTGAAC

CGACTCCTGCAGGACAAGTGGGACAGATTCGTCAAGCGCATCTTCTACTTCAACTTCCTG

GTCTACTGCCTGTACATGATCATCTTCACCATGGCTGCCTACTACAGGCCCGTGGATGGC

TTGCCTCCCTTTAAGATGGAAAAAACTGGAGACTATTTCCGAGTTACTGGAGAGATCCTG

TCTGTGTTAGGAGGAGTCTACTTCTTTTTCCGAGGGATTCAGTATTTCCTGCAGAGGCGG

CCGTCGATGAAGACCCTGTTTGTGGACAGCTACAGTGAGATGCTTTTCTTTCTGCAGTCA

CTGTTCATGCTGGCCACCGTGGTGCTGTACTTCAGCCACCTCAAGGAGTATGTGGCTTCC

ATGGTATTCTCCCTGGCCTTGGGCTGGACCAACATGCTCTACTACACCCGCGGTTTCCAG

CAGATGGGCATCTATGCCGTCATGATAGAGAAGATGATCCTGAGAGACCTGTGCCGTTTC

ATGTTTGTCTACATCGTCTTCTTGTTCGGGTTTTCCACAGCGGTGGTGACGCTGATTGAA

GACGGGAAGAATGACTCCCTGCCGTCTGAGTCCACGTCGCACAGGTGGCGGGGGCCTGCC

TGCAGGCCCCCCGATAGCTCCTACAACAGCCTGTACTCCACCTGCCTGGAGCTGTTCAAG

TTCACCATCGGCATGGGCGACCTGGAGTTCACTGAGAACTATGACTTCAAGGCTGTCTTC

ATCATCCTGCTGCTGGCCTATGTAATTCTCACCTACATCCTCCTGCTCAACATGCTCATC

GCCCTCATGGGTGAGACTGTCAACAAGATCGCACAGGAGAGCAAGAACATCTGGAAGCTG

CAGAGAGCCATCACCATCCTGGACACGGAGAAGAGCTTCCTTAAGTGCATGAGGAAGGCC

TTCCGCTCAGGCAAGCTGCTGCAGGTGGGGTACACACCTGATGGCAAGGACGACTACCGG

TGGTGCTTCAGGGTGGACGAGGTGAACTGGACCACCTGGAACACCAACGTGGGCATCATC

AACGAAGACCCGGGCAACTGTGAGGGCGTCAAGCGCACCCTGAGCTTCTCCCTGCGGTCA

AGCAGAGTTTCAGGCAGACACTGGAAGAACTTTGCCCTGGTCCCCCTTTTAAGAGAGGCA

AGTGCTCGAGATAGGCAGTCTGCTCAGCCCGAGGAAGTTTATCTGCGACAGTTTTCAGGG

TCTCTGAAGCCAGAGGACGCTGAGGTCTTCAAGAGTCCTGCCGCTTCCGGAGAGAAGTGA

ATG: Старт-кодон гена (начинается с ORF)

TGA: Стоп-кодон гена (заканчивается ORF)

GGG→GGA: «качели» в обратном праймере (глицин к глицину)

ATG→ATC: Отмеченный полиморфизм отдельного нуклеотида (SNP) в Genecard, Met--->Ile, SNP ID: rs222747.

Был создан гибридный вектор экспрессии из двух представленных на рынке векторов следующим образом. Вектор pTK-Hygro (Clonetech, номер по каталогу 631750) был расщеплен HindIIIand Aval для высвобождения кассеты гигромицина, содержащей промотор ТК, ген гигромицина и сигнал HSV-TK polyA. Такая кассета гигромицина была клонирована в pcDNA4myc-HisB (Invitrogen Catalog No. V863-20) с использованием сайта AvrII. Кодирующая последовательность hTRPV1 была вставлена в полученный вектор pcDNA Hygro в сайтах Kpnl (5') и Pmel (3') и была таким образом фланкирована в верхней части промотором цитомегаловируса и в нижней части сигналом полиаденилирования гормона роста рогатого скота. Правильная вставка всей ORF в рекомбинантный вектор экспрессии ДНК (указываемая далее как ДНК) была подтверждена анализом последовательности. Полный остов плазмиды содержит точку начала ремпликации pUC (ori), ген резистентности к ампициллину, промотор pCMV, множественный сайт клонирования, содержащий сайты KpnI и PmeI, промотор E. coli EM-7 и ген резистентности к гигромицину в добавление к hTRPV1 ORF.

(ii) Разработка рекомбинантного N1E115, экспрессирующего hTRPV1

В способе использовали представленные ниже материалы:

Липофектамин 2000 (Invitrogen, номер по каталогу 11668-019), поли-этиленимин (Aldrich, номер по каталогу J40872), гигромицин-B (Invitrogen, номер по каталогу 10687-010). Набор с чистотой класса ультра был использован для получения сверхспиральной ДНК, а трансфекцию проводили в DMEM без содержания антибиотика и сыворотки.

Для пассажа клеток клетки N1E115 [Американская коллекция типовых культур, Manassas, Virginia (US), номер доступа CRL2263] были культивированы в среде роста, содержащей 1×DMEM (Sigma)+10% FBS (Gibco)+1% пенициллин-стрептомицин (Gibco) в 175 см² колбах (Nunc). На день высевания использованная среда из колб была аспирирована, и для смещения клеток со дна колб необходимо было постучать ладонями по сторонам колбы. Десять мл среды роста было добавлено для суспендирования клеток, и 1 мл суспендированных клеток было инокулировано в новой колбе T-175, содержащей 35 мл среды роста.

Протокол высевания клеток для трансфекции был следующим: 0,2×10⁶ клеток в 2 мл среды роста было добавлено в каждую лунку 6-луночных планшетов с крышками внутри ламинарного воздушного потока. Планшеты инкубировали при 37°C и 5% CO₂ в инкубаторе CO₂(Thermo) в течение 24 часов.

На день трансфекции, опосредованной липофектамином, ДНК и липофектамин были разведены в ламинарном боксе следующим способом: 4 мкг ДНК было разведено в 250 мкл DMEM. Затем 10 мкг липофектамина было разведено в 250 мкл DMEM. Растворам дали постоять при комнатной температуре (КТ) в течение 7 минут, после чего они были смешаны, и им дали отстояться при КТ в течение дополнительных 20 минут. После получения смеси для трансфекции, высеянные клетки были промыты 500 мкл DMEM. После промывания 500 мкл смеси липофектамин-ДНК было добавлено в лунки. В контрольные лунки был добавлен липофектамин-DMEM, и планшет был инкубирован при 37°C и 5% CO₂ в течение 4,5 часов. После инкубации среда из трансфицированных клеток была осторожно декантирована без повреждения клеток. Затем клетки были промыты один раз 1 мл DMEM. К клеткам была добавлена среда роста (DMEM+10% FBS), после чего клетки были промыты и инкубированы при 37°C и 5% CO₂ в течение 24 часов.

Спустя 24 часа после инкубации, трансфицированные клетки были визуально исследованы на предмет жизнеспособности и адгезии. Использованная среда была удалена из клеток, и в каждую лунку было добавлено 1,2 мл свежей среды роста, содержащей 300 мкг/мл гигромицина. Клетки были смещены пипетированием вверх и вниз. Клетки из каждой лунки были разделены в соотношении 1:4 и трансфицированы в новом 6-луночном планшете (300 мкл клеток/лунка). Трансфицированные клетки и контрольные клетки были под наблюдением каждый день, и используемая среда была заменена изначально через день. После окончания второй недели были выявлены трансфицированные стабильные колонии, которые затем были размножены и протестированы функциональным образом в ходе анализа кальцием и анализа натрием, проводимым следующим образом.

(iii) Пассажи клеток и выделение клонов клеток

Протокол пассажа клеток, описанный выше, был соблюден для пассажа клеток, как это описано ранее. Выделение клонов способом ограниченного разведения проводилось, как это описано ниже.

Получение фидерных клеток: Были собраны здоровые клетки N1E115 (клетки дикого типа). 1×10⁶ клеток/мл клеток N1E115 были обработаны митомицином С в концентрации 10 мкг/л×10⁶клеток в течение 20 минут при 37°C в инкубаторе CO₂. Спустя 20 минут клетки были промыты DMEM 5-6 раз. Затем клетки были перенесены в 75 см² колбу, содержащую 15 мл среды роста, и инкубировали при 37°C в течение 4 часов в инкубаторе CO₂. После инкубации фидерные клетки были промыты DMEM, и клетки стали готовы для высевания.

Получение стабильных клеток: Выглядящие здоровыми клетки hTRPV1-N1E115 были пеллетированы и ресуспендированы в среде роста в концентрации, которая, при высевании в 96-луночном планшете, дала бы концентрацию 0,3 клеток/лунка/100 мкл среде. К ней был добавлен избирательный антибиотик гигромицин b (300 мкг/мл).

Фидерные клетки были высеяны в 96-луночных планшетах в концентрации 1000 клеток/100 мкл/лунка. Клетки не были высеяны в лунки по краям. Вместо этого было добавлено 200 мкл стерильного забуференного фосфатом физиологического раствора (PBS). К слою фидерных клеток было добавлено 100 мкл суспензии стабильных клеток, содержащих 0,3 клеток/лунка/100 мкл. Планшеты были инкубированы при 37°C и 5% CO₂. Планшеты были оставлены в покое в инкубаторе CO₂ в течение 10 дней. По истечении 10 дней все планшеты с клетками были обследованы очень тщательно на предмет наличия отдельной колонии (предполагалось, что она будет получена от одной клетки). Каждая лунка была тщательно проверена. Были промаркированы лунки только с одной колонией.

В промаркированных лунках была заменена среда, использованная среда была слита, и была добавлена новая среда роста, содержащая 300 мкг/мл гигромицина В. Промаркированные лунки с отдельными колониями были размножены из 96-луночного планшета в 48-луночный планшет, затем в 6-луночный планшет. Наконец, клетки были трансфицированы в 25-см² колбы (5 мл среды роста+300 мкг/мл гигромицина В). Из колб для культивирования клетки были подсчитаны и высеяны для функционального скрининга в платформы для анализа натрием и кальцием. Финальный кандидат для клонирования для исследования был выбран на основе данных анализа, который подтвердил робастную экспрессию hTRPV1 с использованием вызванного капсаицином кальциевого ответа в анализе кальцием и отсутствие потери конститутивной активности натриевого канала, о чем можно судить по робастному ответу вератридина в анализе мембранного потенциала.

(iv) Кальциевый анализ для оценки функции hTRPV1-экспрессирующей клетки

Для кальциевого анализа клетки были высеяны в концентрации 5000 на 50 мкл DMEM +10% FBS+300 мкг/мл гигромицина на лунку в 384 планшете с прозрачным дном, покрытом поли-D-лизином, с инкубацией при 37°C и 5% CO₂ в течение 48 часов. На день анализа среда была осторожно слита, затем было проведено осторожное промывание модифицированным буфером Тироде (20 мкл/лунка)], который затем был осторожно слит.

Состав модифицированного буфера Тироде для анализа кальциевых каналов

СольКонцентрация (мМ)NaCl145KCl2,5CaCl₂ 2H₂05,4MgCl₂ 6H₂01,2HEPES10Глюкоза10 (180 мг/100 мл)Пробенецид2,943

Объем был доведен до 500 мл с использованием реагента воды Milli-Q®.

pH был скорректирован до 7,4 с использованием KOH.

К красителю FLIPR® кальций 4 (Molecular Devices) была добавлена плуроновая кислота в концентрации 0,025% (250 мкл 1% маточного раствора для 10 мл красителя). Затем 20 мкл красителя FLIPR® кальций 4 (Molecular Devices), полученного в модифицированном буфере Тироде (пробенецид (42 мг в 60 мкл 5 н. NaOH), было добавлено к 50 мл модифицированного буфера Тироде перед корректировкой рН), было добавлено в каждую лунку, и планшет был инкубирован при 25°C в течение 30 минут перед добавлением капсаицина (маточный раствор капсаицина был представлен 20 мМ в ДМСО, рабочий раствор 1мМ (в буфере) и финальная концентрация в планшете для анализа составила 10 мкМ, которую использовали для кальциевого анализа с соблюдением инструкций производителя). 20 мкл 2×(20 мкМ) капсаицина было добавлено в лунки в FLIPR® (Molecular Devices, Inc.), и планшеты были считаны в течение 15 минут.

(v) Анализ мембранного потенциала для оценки функционирования натриевых каналов в клетках, экспрессирующих hTRPV1

Клетки были высеяны в концентрации 5000 на 50 мкл [DMEM+10% FBS+300 мкг/мл гигромицина] на лунку, в 384 планшете с прозрачным дном, покрытом поли-D-лизином, с инкубацией при 37°C и 5% CO₂ в течение 48 часов. На день анализа среда была осторожно слита, и 30 мкл красителя (FMP синий краситель был получен в буфере для анализа) было добавлено в лунку, и загруженным красителем планшетам дали отстояться в течение 20 минут при комнатной температуре. Планшет с добавленным «агонистическим» препаратом был получен для аппарата FLIPR^®в соответствии с инструкциями производителя; этот планшет содержал вератридин (Sigma-Aldrich, номер по каталогу V5754) и токсин-II из Anemonia sulcata (ATX-II, Sigma-Aldrich по каталогу T3268). Концентрации вератридина и ATX-II в планшете с добавлением препарата составили 400 мкМ и 12 мкМ, соответственно, для получения финальных концентраций для анализа 100 мкМ и 3 мкМ при внесении 10 мкл комбинированного раствора в клеточный планшет с использованием инструмента FLIPR®. Агонистическое добавление было запрограммировано на инструменте FLIPR® для совпадения с началом считывания сигнала флуоресценции, и такие показатели были взяты при регулярных интервалах продолжительностью 10 минут.

B. Анализ in vitro, разработанный для оценки ингибирования ответа натриевого канала на соединения после стимуляции нагреванием (47°C) в клетках, экспрессирующих hTRPV1.

Был выполнен пассаж клеток hTRPV1-N1E115 культивацией в среде роста (содержащей 1x DMEM (Sigma)+10% FBS (Gibco)+1% пенициллин-стрептомицин (Gibco)+300 мкг/мл гигромицина В (Invitrogen, в виде маркера селекции)) в 175-мл колбах (Nunc). Клетки были разделены 1:10. Используемая среда из колб была аспирирована, и для смещения клеток с дна колб необходимо было постучать ладонями по сторонам колбы. Среда роста (10 мл) была добавлена для суспендирования клеток, и суспендированные клетки (1 мл) были инокулированы в новой колбе T-175, содержащей среду роста (35 мл). Для высевания клеток для анализа, 5000 клеток в 50 мкл среды роста было добавлено в каждую лунку 384-луночных стерильных планшетов с прозрачным дном, покрытых поли-D-лизином, содержащих крышки (Greiner-bio one), внутри ламинарного воздушного потока. Планшеты инкубировали при 37°C и 5% CO₂ в инкубаторе CO₂(Thermo). Спустя 48 часов на день анализа планшеты с высеянными клетками были исследованы под микроскопом для проверки здоровья, присоединения и конфлюэнтности монослоя перед анализом.

Использованная среда из планшетов с высеянными клетками была осторожно слита, и в каждую лунку планшета был добавлен синий краситель для определения мембранного потенциала FLIPR® Membrane potential Dye-Blue (представлен на рынке Molecular Devices Inc., US, в качестве «FLIPR синий, набор для анализа мембранного потенциала»). Краситель был получен в буфере для анализа с соблюдением инструкций производителя. Планшет с добавленным красителем инкубировали при 25° в течение 30 минут внутри инкубатора для планшетов (Thermo). Буфер для анализа был получен в соответствии с Таблицей 3. Уровень рН был скорректирован до 7,4 с использованием KOH (Sigma), и объем был доведен до 500 мл водой Milli-Q® (Millipore). Если не указано иное, все разведения были сделаны в буфере для анализа.

Таблица 3СольКонцентрация (мМ)NaCl150KCl3,25CaCl₂ 2H₂O2MgCl₂ 6H₂O3HEPES10Глюкоза11 (198 мг/100 мл)

Соединения были разведены в буфере для анализа и добавлены в 384-луночные планшеты из полипропилена с круглым дном (Costar), которые служат в качестве исходных планшетов для добавления соединений. После завершения периода инкубации с красителем, планшеты, нагруженные красителем, и планшеты с исходными соединениями были помещены в FLIPR®^Tetra (Molecular Devices, Inc.) с 384 FLIPR® боксами (Molecular Devices, Inc.). К планшетам, нагруженным красителями, были добавлены соединения с использованием системы FLIPR®^Tetra(1^е добавление). После добавления соединения планшеты были немедленно перенесены в инкубатор планшетов при 47°C (Thermo) и их инкубировали в течение 10 минут для активации hTRPV1. Затем планшеты были немедленно перенесены в инкубатор планшетов при 25°C (Thermo) и инкубированы в течение 30 минут. Планшеты с высеянными клетками, которые не должны быть активированы, были перенесены в инкубатор планшетов при 25°C (Thermo) и инкубированы в течение 30 минут. Агонистический планшет, содержащий вератридин (Sigma) и ATX-II, были получены, как это описано выше, перед 2-ым добавлением. Агонистическое добавление было проведено с использованием программного обеспечения FLIPR® и по времени совпадало со считыванием сигналов флуоресценции, которое проводилось при регулярных интервалах общей продолжительностью 12 минут.

Эталонное соединение QX-314 содержало hTRPV1-N1E115 и в ходе анализа FLIPR® имело значение IC₅₀при 47°C, равное 733 мМ. Значение IC₅₀≤100 мкМ указывает на 10-кратную улучшенную активность в сравнении с QX-314.

C. Способ оценки степени ингибирования ответа натриевых каналов с соединениями в клетках hNav1.5-HEK293.

Представленный ниже анализ проводили для оценки тенденции исследуемых соединений блокировать доминирующую изоформу натриевых каналов сердца. Натриевые каналы Nav1.5, как известно, проницаемы для четвертичных блокаторов натриевых каналов, таких как QX-314, и, следовательно, анализ проводили в отсутствие химического агониста TRPV1.

Клетки hNav1.5-HEK-293 (CreaCell, France, линия клеток почки эмбриона человека, экспрессирующих натриевый канал Nav1.5 человека) были культивированы в среде роста (содержащей 1XDMEM (Gibco)+10% FBS (PAA Gold)+2% глутамина 100 мМ (Gibco)+1% пенициллина 10000 Ед/мл стрептомицина 10000 мкг/мл (Invitrogen)+1,2 мг/мл генетицина G418 (Invitrogen)) в 75-мл колбах для связывания клеток (Corning). Были точно соблюдены следующие этапы. Используемая среда была слита, и клетки были промыты один раз PBS-1X. Был добавлен раствор Аккутазы® (1-2 мл; PAA). Планшет был помещен в инкубатор при нагреве 37°C в течение 3-5 минут. Как только клетки были рассоединены, была добавлена полная среда (9 мл) при 37°C. Суспензия клеток была отобрана в стерильную пипетку, и клетки были осторожно гомогенизированы для диссоциации клеточных агрегатов. Клетки были подсчитаны с использованием гемоцитометра с Blue Trypan и затем центрифугированы 5 минут при 400 g. Клетки могут быть амплифицированы или поддерживаться путем высевания 2105 клеток/мл в Т75 колбу (финальный объем: 15 мл). 8000 клеток в 50 мкл среды роста было добавлено в каждую лунку 384-луночных стерильных планшетов с прозрачным дном, покрытых поли-D-лизином, содержащих крышки (Greiner-bio one), внутри ламинарного воздушного потока. Планшеты инкубировали при 37°C и 5% CO₂ в инкубаторе CO₂(Thermo) в течение 48 часов.

На день анализа клетки были промыты буфером для анализа, который был приготовлен с использованием компонентов и количеств, указанных в Таблице 4. Уровень рН был скорректирован до 7,4 с использованием NaOH, и объем был доведен до 500 мл водой Milli-Q®.

Таблица 4СольКонцентрация (мМ)NaCl165KCl4,5CaCl₂ 2H₂O2MgCl₂ 6H₂O1HEPES10Глюкоза10 (180 мг/100 мл)

Буфер для анализа был добавлен к клеткам с последующей инкубацией при КТ (25°C) в течение 10 минут. Соединения были разведены в буфере для анализа. Соединения были добавлены и инкубированы при КТ (25°C) в течение 10 минут. К клеткам был добавлен красный краситель FMP (MDC), и планшет инкубировали при КТ (25°C) в течение 30 минут. Маточный раствор вератридина (20 мМ; Sigma) был приготовлен в ДМСО; в каждую лунку планшета с высеянными клетками в системе FLIPR® был добавлен вератридин (финальная концентрация 30 мкМ) в буфере для анализа, и показания считывались в течение 10 минут. В Таблице 5 представлены данные, иллюстрирующие активность исследуемых соединений относительно натриевых каналов в ответ на присутствие или отсутствие стимуляции нагреванием в клетках, экспрессирующих Соединения были исследованы на предмет дифференцированной активности при 25°C и 47°C и в двух исследуемых концентрациях. Соединения, имеющие более обнадеживающие профили, в дальнейшем были оценены на предмет IC₅₀ в анализе при 47°C, и примеры представлены в Таблице 5.

Таблица 5ПримерhTRPV1-N1E Nav 0,1 мМ (% ингибирования)hTRPV1-N1E Nav 1 мМ (% ингибирования)hTRPV1-N1E IC₅₀ (мкМ)
47°C25°C47°C25°C47°C156
(N=4, ДМСО)87
(N=4, ДМСО)NTNTNT244
(N=2,
0,5 мМ)89 (N=2,
0,5 М)50 (N=2)NT9316 (N=2)67 (N=2)23 (N=2)60
(N=2)3740 (N=3)94,7 (N=3)0 (N=3)67,0 (N=3)B'521 (N=2)50 (N=2)NTNTB'916
(N=2,
0,5 мМ)77
(N=2,
0,5 мМ)NTNTB'1024
(N=2,
0,5 мМ)91
(N=2,
0,5 мМ)6,5 (N=2)НТB'1107271 (N=2)НТB'

1249
(N=4, ДМСО)87
(N=4, ДМСО)НТНТНТ1367 (N=2)99 (N=2)64 (N=2)92 (N=2)B'146,3 (N=3)76,7 (N=3)3,8 (N=3)25,3 (N=3)B'152,8 (N=3)75,2 (N=3)0,7 (N=3)35,0 (N=3)B'160 (N=2)92,9 (N=2)Нераство-римоНераство-римоB'171 (N=3)86,1 (N=3)6,1 (N=3)28,9 (N=3)B'180 (N=3)86,9 (N=3)0 (N=3)38,2 (N=3)B'190 (N=2)87,9Нераство-римоНераство-римоB'2011,2 (N=3)94,8 (N=3)0 (N=3)48,9 (N=3)B'2144,7 (N=3)80,2 (N=3)58,2 (N=3)64,3 (N=3)B'228,7 (N=2)62,7 (N=2)48 (N=2)69,9 (N=2)B'2319,7 (N=2)89,6 (N=2)Нераство-римоНераство-римоA'2425,1 (N=2)88,5 (N=2)57,9 (N=2)84,2 (N=2)A'

2526,4 (N=2)89,6 (N=2)Нераство-римоНераство-римоA'727,3 (N=2)57,9 (N=2)Нераство-римоНераство-римоB'2644,6 (N=2)64,7 (N=2)Нераство-римоНераство-римоB'2768,1 (N=2)81,3 (N=2)61,4 (N=2)71,9 (N=2)NT2830,2 (N=2)43,7 (N=2)61,8 (N=2)86,6 (N=2)NT2968,9 (N=2)82,9 (N=2)64,6 (N=2)75,3 (N=2)NT3059,4 (N=2)97,2 (N=2)Нераство-римоНераство-римоNT313,8 (N=2)62,6 (N=2)Нераство-римоНераство-римоNT86,5 (N=2)22,7 (N=2)39,9 (N=2)69,5 (N=2)NT32НТНТНТНТB'33НТНТНТНТB'34НТНТНТНТB'35НТНТНТНТB'365,4 (N=2)74,0 (N=2)НТНТB'3721,5 (N=2)60,7 (N=2)59,5 (N=2)24,0 (N=2)B'

3825,9 (N=2)37,5 (N=2)46,6 (N=2)70,4 (N=2)НТ3910,6 (N=2)11,3 (N=2)31,3 (N=2)62,4 (N=2)НТ4034,3 (N=3)НТНТНТB'418,3 (N=3)НТНТНТB'420 (N=2)64,9 (N=2)НТНТНТ4393,9 (N=2)НТНТНТA'44НТНТНТНТB'4523,1 (N=2)83,3 (N=2)НТНТB'4631,8 (N=2)94,4 (N=2)НТНТB'4730,7 (N=2)79,5 (N=2)НТНТB'4829,6 (N=2)НТНТНТB'4922,2 (N=2)НТНТНТB'50НТНТНТНТB'51НТНТНТНТA'52НТНТНТНТB'A' : IC₅₀=1 - <10 мкМ
B' : IC₅₀=10-100 мкМ
НТ: Не тестировали

Подобным образом, в Таблице 6 представлены данные, иллюстрирующие активность исследуемых соединений относительно натриевых каналов, и отображающие четкое ингибирование в ответ при 47°C вместе с минимальным ингибированием при 25°C, и такие соединения были оценены на предмет их способности блокировать сердечный натриевый канал в клетке, экспрессирующей Nav1.5. Данные для нескольких таких соединений представлены в Таблице 6, концентрации таких соединений, требуемые для блокирования NaV1.5, указаны более высокими, чем это требуется для блокирования ответа натриевого канала в линии клеток TRPV1-N1E115.

Таблица 6ПримерHEK Nav 1,5 % инг.
при 0,5 мМHEK Nav 1,5 % инг. при 1,5 мМHEK Nav 1.5 IC₅₀ (мкМ) (AVG)289,298,1247377,699,1190972,497,26471076,197,66671197,997,844

Пример 54: Анализ механической ноцицепции in vivo

Этот анализ был проведен для мониторинга временного курса анальгезии при введении соединений поодиночке или в комбинации с лидокаином непосредственно поблизости от седалищного нерва.

Самцы крыс линии Sprague Dawley (SD) имели диапазон веса 180-220 грамм. Животные были акклиматизированы в течение трех дней для пребывания с лабораторным техником в условиях эксперимента. На день 1 все животные получили три сессии акклиматизации в лаборатории (30-45 минут) и были замотаны в полотенце (1 минута для каждого животного). На день 2 был соблюден такой же график акклиматизации вместе с прикосновением зажима (применение без силы) в сессии 3. На день 3 график акклиматизации был таким же, как и на день 2, и было записано первое исходное значение. На день 4 было записано второе исходное значение перед введением препарата/исследуемого соединения путем инъекции. Второе исходное значение учитывали для оценки эффекта лечения.

Порог отмены/применения силы (PWF) ипсилатеральной (правой задней) лапы был записан для всех животных утром на день эксперимента. Зажим использовали на основании последней фаланги, иногда на середине 5 и 4 плюсны, с отсечкой 500 грамм. Бранши щипцов зажима удерживали таким образом, что зубристый конец был обращен к тыльной стороне лапы, и плоский конец был обращен к подошвенной поверхности. Применение силы с помощью бранш щипцов было сделано путем медленного и непрерывного увеличения силы. Скорость увеличения силы была оптимизирована на практике с достижением значения отсечки (500 г) примерно за 6-7 секунд.

Для инъекции, для крыс использовали анестезию изофлураном (получен у Baxter Pharma, US) в течение короткого периода, и крыс содержали в положении лежа с растопыренными конечностями. Большой вертел и седалищный бугор были локализованы пальпацией, и между ними была проведена воображаемая линия, после чего была определена точка на этой линии на расстоянии примерно одной трети каудально относительно большого вертела. С помощью инъекционной иглы, направленной в дорсолатеральном направлении при угле 45° с прикосновением кончика иглы к седалищной кости, был введен соответствующий раствор исследуемого соединения/носителя (примерно 100 мкл или 200 мкл, отдельные эксперименты). Для инъекции использовалась игла калибром 27, присоединенная к шприцу для введения туберкулина. Инъекционный объем был введен осторожно. После инъекции животных содержали в восстановительной камере, и только после полного восстановления от анестезии животные были возвращены в клетки. Следили за тем, чтобы анестезия была мягкая, чтобы животные оставались под анестезий в течение очень короткого времени.

Исследуемые соединения, которые не были растворимы в нормальном физиологическом растворе, были приготовлены в требуемой концентрации в модифицированном носителе (0-15% водный раствор реагента Кремофор®) для получения композиции раствора. Все соединения вводили в обычной композиции нормального физиологического раствора, при возможности. Реагент Кремофор® использовали в качестве последнего средства. Порошок лидокаин.HCl (Sigma, USA) затем был растворен в этом же растворе для получения композиции комбинированного раствора исследуемого соединения и лидокаина. Использовали ультразвук для снижения размера частиц при необходимости. Финальная композиция была стерилизована через фильтр с использованием фильтров для наконечника шприца (0,22 мкм) перед введением.

На день 4, после введения соединения/носителя, были взяты два показателя PWL спустя 0,5 и 2 часа после введения, с последующим снятием показателей при интервалах 1 час или 2 часа, в зависимости от того, оставался ли ответ при значении отсечения или отмечались признаки восстановленной чувствительности. Снятие показаний продолжалось до тех пор, пока ответ на грамм-силу не отклонился до уровня, когда он по существу не отличался от исходного значения перед введением препарата. Другими словами, снятие показаний продолжалось в течение периода до 14 часов, после чего следующие показания были получены на день 5 спустя 24 часа после инъекции. Когда антиноцицептивный эффект по существу отмечался в течение 24 часов, снятие показаний было продолжено и проводилось, как и на день 4.

Статистическое программное обеспечение GraphPad® Prism 5 использовали для анализа. После колоночного анализа был проведен однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) для каждой группы, затем использовали критерий Дуннета для проверки значимости различий между исходными значениями и показателями в разных временных точках.

A: Сравнение соединений с используемым ранее в науке QX-314

С использованием представленных выше описания и анализа были приготовлены и тестированы композиции из Таблицы 7. Результаты таких анализов представлены на Фиг. 1-7 и обобщены в Таблице 7. В частности, Фиг. 1-7 являются графиками отмены/применения силы на лапу (г) относительно времени (часы).

Таблица 7
Длительность аналгезии для механической ноцицепцииИсследуемое соединениеКоличество исследуемого соединения (%)Количество лидокаина (%)Общее введенное количество (мкл)Среднее время аналгезии (ч)QX-3140.522009210060200201002Пример 20.52200>142100100200401000Пример 30.52200>152100120200901004Пример 90.521005Пример 110.521007Пример 240.52200>168

0.52100320.251200240.50200120.2502004Пример 430.2220028

Эти данные показывают, что соединения из Примеров 2, 3, 11, 24 и 43 обеспечивают аналгезирующие эффекты в течение, по меньшей мере, 7 часов, что превышает показатель QX-314. Имеет значимость еще и то, что соединение из Примера 3 обеспечивало аналгезирующий эффект со значительной продолжительностью в отсутствие лидокаина.

Б: Сравнение соединений по Формуле (I)

С использованием представленных выше описания и анализа были приготовлены и тестированы композиции из Таблицы 8. Результаты таких анализов представлены на Фиг. 5 и обобщены в Таблице 8. В частности, Фиг. 5 является графиком отмены/применения силы на лапу (г) относительно времени (часы).

Таблица 8ПримерКоличество исследуе-мого соединения (%)Количество лидокаина (%)Общее введенное количество (мкл)Среднее время аналгезии (ч)40,521001

160,521006230,521002240,5210032

Эти данные показывают, что соединение из Примера 24 в объеме введения 100 мкл обеспечивало антиноцицептивный эффект в течение периода времени до 32 часов. Кроме того, соединение из Примера 16 в объеме введения 100 мкл обеспечивало антиноцицептивный эффект в течение периода времени до 6 часов.

В: Эффект объема введения и концентрации

Инъекции были приготовлены в соответствии с описанием, представленным выше, и включали (i) 100 мкл раствора, содержащего 0,5% соединения из Примера 24 и 2% лидокаина, и (ii) 200 мкл раствора, содержащего 0,25% соединения из Примера 24 и 1% лидокаина. Такие инъекции вводили, как это описано выше, что позволило провести анализ эффекта объемов композиции 100 мкл в сравнении с 200 мкл.

Результаты таких анализов представлены на Фиг. 6 и 7. В частности, Фиг. 6 и 7 являются графиками отмены/применения силы на лапу (г) относительно времени (часы). Следует отметить, что в количестве 0,5% исследуемого соединения общая продолжительность антиноцицепции была снижена для объема введения до100 мкл. Следует также отметить, что повышение объема введения с 100 мкл до 200 мкл не повлияло на распределение ответа в течение до примерно 12 часов, и комбинация с лидокаином привела, за исключением присущего эффекта, к отсутствию изменений в течение 20 часов для данного исследуемого соединения.

Пример 55: Анализ функции седалищного нерва

Тест функции седалищного нерва является простым анализом наблюдения за походкой, который обеспечивает рудиментарную оценку двигательной функции задней конечности в соответствии с определенной ранее шкалой баллов на основе визуального осмотра отпечатков следов животных при их перемещении по ровной поверхности (основные принципы данного теста описаны в Lowdon (Journal of Neuroscience Methods 24(3), 1988, 279-281)). После инъекции исследуемого вещества (веществ), задние лапы животного были покрыты чернилами и затем помещены на ровную бумажную поверхность, после чего животному дали свободно передвигаться. Схема следов, оставленных смоченными в чернилах лапами на бумаге, анализируется, и оценивается «показатель отпечатков лап» на основе субъективной оценки. Система баллов оценивает степень тяжести нарушения по следующей схеме: Показатель следов 0 указывает на отсутствие веса, переносимого на инъецированную лапу, лапа поднята или скручена подошвой вверх. Показатель следов 1-3 отображал, что весовая нагрузка была преимущественно на колени, что лодыжки и пальцы использовались осторожно, пальцы были скручены, или подошвенная поверхность лапы была поднята и вогнута. Показатель следов 4-6 указывает, что весовая нагрузка идет преимущественно на колени и лодыжки, с очень незначительной нагрузкой на пальцы. Показатель следов 6-10 отображает, что весовая нагрузка распределяется на колени, лодыжки и пальцы, и существует случайное напряжение в коленных суставах. Показатель следов 11 указывает на нормальное распределение веса и отличное положение подошвы лапы.

Данные на Фиг. 8 указывают средний показатель следов относительно времени для группы крыс, которым вводили путем пери-седалищной инъекции дозы 0,25% и 0,5% растворов 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида в присутствии и отсутствии фиксированных количеств (1 и 2%) лидокаина. Квадраты (■) представляют результаты для 200 мкл инъекции комбинированного раствора 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида (0,5%) и лидокаина (2%). Кружки (●) представляют результаты для 200 мкл инъекции комбинированного раствора 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида (0,25%) и лидокаина (1%). Вертикальные треугольники (▲) представляют результаты для 200 мкл инъекции только раствора 1,1-диметил-2-[2-((индан-2-ил)(2-метилфенил)амино)этил]пиперидиния йодида (0,25%). Перевернутые треугольники (▼) представляют результаты только для инъекции 200 мкл раствора лидокаина (2%).

Данные из Фиг. 10 показывают средний показатель следов относительно времени для группы крыс, которым вводили путем односторонней пери-седалищной инъекции дозы 200 мкл 0,2% соединения из примера 43, т.е. ((R)-2-[2-(индан-2-ил-o-толил-амино)-этил]-1,1-диметил-пиперидиния бромид), в комбинации с 2% лидокаином. Инъекция привела к значительному дефициту движения в течение 2 часов после инъекции, что развилось до умеренного нарушения (показатель 5-8) в течение последующих 4 часов, и затем постепенно возвратилось до «нормы» в течение оставшихся 20 или около того часов оценки.

Пример 56: Местная анестезирующая активность

Аликвоты (0,25 мл) исследуемых растворов вводили в конъюнктивальный мешок находящихся в сознании кроликов (любого пола; 2-4 кг), и веко удерживали закрытым в течение примерно 20 секунд. Роговичный рефлекс был проверен перед применением исследуемого раствора и каждые 5 минут впоследствии. Для испытания роговичного рефлекса, к роговице притрагивались шесть раз упругой эластичной щетинкой. Продолжительность анестезии рассчитывали как период от временной точки, когда животное не ощущает ни одно из шести прикосновений щетинкой, до временной точки, когда животное снова реагирует на три из шести прикосновений. Для подтверждения обратимости местного анестезирующего эффекта, испытание продолжали до тех пока, пока животное не станет реагировать на все шесть прикосновений щетинкой в течение, по меньшей мере, 15 минут.

Пример 57: Кожная анестезирующая активность

Крысы были подвергнуты акклиматизации к окружающей среде и исследователю для включения в исследование в течение нескольких дней. Спустя 24 часа перед каждым экспериментом, кожа на спине самцов крыс была выбрита с использованием электроножниц. Анестезирующее действие исследуемых агентов после подкожной инъекции было определено с использованием способа «укола шпилькой», как это описано Khan (Khan et al., Anesthesiology, Jan 2002, 96(1):109-116). Объемы введения были стандартизированы при 100 мкл, каждое введение вызвало образование небольшого пузыря, граница которого была обозначена чернилами. Рефлекс подкожной фасции мышцы cutaneous trunci (CTMR) является рефлективным движением кожи по причине подергивания латеральных торакоспинальных мышц, вызванного вредной стимуляцией дорсального участка кожи. В качестве вредного стимула использовали иглу калибром 18; к участку «здоровой» кожи было применено шесть стимулов для определения исходной чувствительности, что затем было повторено в области пузыря. Местную анестезию оценивали на основе количества примененных стимулов, которые не вызвали ответа. Данные были представлены как % от максимального возможного эффекта (МРЕ), при этом 100% указывает на полное отсутствие ответа на каждый из шести уколов иглой в области инъекции. Степень местной анестезии оценивали при регулярных интервалах для получения графиков зависимости общей эффективности от продолжительности времени.

Пример 58: С. Местная (инфильтрация) анестезирующая активность

Примерно за 18-24 часов перед каждым экспериментом кожу подготавливали, как это описано в Примере 36. Анестезирующее действие каждого агента после внутрикожной инъекции определяют с использованием способа «укола шпилькой», подобного способу, описанному в Примере 36. Перед и при различных интервалах после введения, область кожи тестируют на предмет присутствия или отсутствия подергивания кожи в ответ на шесть стандартизованных кожных дотрагиваний заостренным металлическим "алгезиметром" при предварительно установленной максимальной силе в 20 грамм. Среднее количество покалываний, которое не привело к ответу в виде подергивания кожи, обозначается как «показатель анестезии». В этой системе шесть ответов на шесть стимулов представляет собой «отсутствие анестезирующей активности», а отсутствие ответа на шесть стимулов представляет собой «максимальную анестезирующую активность». В экспериментах с внутрикожными введениями агентов, спины морских свинок делят на четыре части с использованием маркера, после чего проводят инъекции 0,1 мл 0,25%, 0,5% и 1,0% растворов исследуемых соединений в физиологическом растворе, носителя (физиологического раствора) и, по меньшей мере, одного эталонного соединения, по одной инъекции в каждую из четырех определенных областей.

Пример 59: Острая внутривенная токсичность у мышей

Мышей (самцов) штамма ЯМРI весом 20-22 г использовали после периода стабилизации в течение, по меньшей мере, десяти дней в помещении для испытаний и в течение, по меньшей мере, одного часа в лаборатории. За 16 часов перед испытанием у всех животных отобрали пищу (но не воду). Животным дали свободный доступ к пище, начиная через два часа после введения препарата, что обычно происходит примерно в 9:00 утра. Всех животных контролировали ежедневно в течение 7 дней после введения дозы.

Все процитированные в данной заявке публикации включены сюда посредством ссылки. Принимая во внимание, что изобретение было описано, ссылаясь на отдельные варианты воплощения изобретения, очевидно, что модификации могут быть сделаны без отклонения от сущности изобретения. Такие модификации входят в объем прилагаемой формулы изобретения.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Endo Pharmaceuticals Inc.

Thompson, Scott K.

Priestley, Tony

Smith, Roger A.

Saha, Ashis K.

Rudra, Sonali

Hajra, Arun K.

Chatterjee, Dipanwita

Behrens, Carl H.

He, Yigang

Li, Hui-Yin

<120> Аминоиндановые соединения и их применение при лечении боли

<130> SKT-111-WO/END2APCT

<150> US 61/444,379

<151> 2011-02-18

<160> 4

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 839

<212> Белок

<213> Неизвестен

<220>

<223> TRPV1 человека

<400> 1

Met Lys Lys Trp Ser Ser Thr Asp Leu Gly Ala Ala Ala Asp Pro Leu

1 5 10 15

Gln Lys Asp Thr Cys Pro Asp Pro Leu Asp Gly Asp Pro Asn Ser Arg

20 25 30

Pro Pro Pro Ala Lys Pro Gln Leu Ser Thr Ala Lys Ser Arg Thr Arg

35 40 45

Leu Phe Gly Lys Gly Asp Ser Glu Glu Ala Phe Pro Val Asp Cys Pro

50 55 60

His Glu Glu Gly Glu Leu Asp Ser Cys Pro Thr Ile Thr Val Ser Pro

65 70 75 80

Val Ile Thr Ile Gln Arg Pro Gly Asp Gly Pro Thr Gly Ala Arg Leu

85 90 95

Leu Ser Gln Asp Ser Val Ala Ala Ser Thr Glu Lys Thr Leu Arg Leu

100 105 110

Tyr Asp Arg Arg Ser Ile Phe Glu Ala Val Ala Gln Asn Asn Cys Gln

115 120 125

Asp Leu Glu Ser Leu Leu Leu Phe Leu Gln Lys Ser Lys Lys His Leu

130 135 140

Thr Asp Asn Glu Phe Lys Asp Pro Glu Thr Gly Lys Thr Cys Leu Leu

145 150 155 160

Lys Ala Met Leu Asn Leu His Asp Gly Gln Asn Thr Thr Ile Pro Leu

165 170 175

Leu Leu Glu Ile Ala Arg Gln Thr Asp Ser Leu Lys Glu Leu Val Asn

180 185 190

Ala Ser Tyr Thr Asp Ser Tyr Tyr Lys Gly Gln Thr Ala Leu His Ile

195 200 205

Ala Ile Glu Arg Arg Asn Met Ala Leu Val Thr Leu Leu Val Glu Asn

210 215 220

Gly Ala Asp Val Gln Ala Ala Ala His Gly Asp Phe Phe Lys Lys Thr

225 230 235 240

Lys Gly Arg Pro Gly Phe Tyr Phe Gly Glu Leu Pro Leu Ser Leu Ala

245 250 255

Ala Cys Thr Asn Gln Leu Gly Ile Val Lys Phe Leu Leu Gln Asn Ser

260 265 270

Trp Gln Thr Ala Asp Ile Ser Ala Arg Asp Ser Val Gly Asn Thr Val

275 280 285

Leu His Ala Leu Val Glu Val Ala Asp Asn Thr Ala Asp Asn Thr Lys

290 295 300

Phe Val Thr Ser Met Tyr Asn Glu Ile Leu Met Leu Gly Ala Lys Leu

305 310 315 320

His Pro Thr Leu Lys Leu Glu Glu Leu Thr Asn Lys Lys Gly Met Thr

325 330 335

Pro Leu Ala Leu Ala Ala Gly Thr Gly Lys Ile Gly Val Leu Ala Tyr

340 345 350

Ile Leu Gln Arg Glu Ile Gln Glu Pro Glu Cys Arg His Leu Ser Arg

355 360 365

Lys Phe Thr Glu Trp Ala Tyr Gly Pro Val His Ser Ser Leu Tyr Asp

370 375 380

Leu Ser Cys Ile Asp Thr Cys Glu Lys Asn Ser Val Leu Glu Val Ile

385 390 395 400

Ala Tyr Ser Ser Ser Glu Thr Pro Asn Arg His Asp Met Leu Leu Val

405 410 415

Glu Pro Leu Asn Arg Leu Leu Gln Asp Lys Trp Asp Arg Phe Val Lys

420 425 430

Arg Ile Phe Tyr Phe Asn Phe Leu Val Tyr Cys Leu Tyr Met Ile Ile

435 440 445

Phe Thr Met Ala Ala Tyr Tyr Arg Pro Val Asp Gly Leu Pro Pro Phe

450 455 460

Lys Met Glu Lys Thr Gly Asp Tyr Phe Arg Val Thr Gly Glu Ile Leu

465 470 475 480

Ser Val Leu Gly Gly Val Tyr Phe Phe Phe Arg Gly Ile Gln Tyr Phe

485 490 495

Leu Gln Arg Arg Pro Ser Met Lys Thr Leu Phe Val Asp Ser Tyr Ser

500 505 510

Glu Met Leu Phe Phe Leu Gln Ser Leu Phe Met Leu Ala Thr Val Val

515 520 525

Leu Tyr Phe Ser His Leu Lys Glu Tyr Val Ala Ser Met Val Phe Ser

530 535 540

Leu Ala Leu Gly Trp Thr Asn Met Leu Tyr Tyr Thr Arg Gly Phe Gln

545 550 555 560

Gln Met Gly Ile Tyr Ala Val Met Ile Glu Lys Met Ile Leu Arg Asp

565 570 575

Leu Cys Arg Phe Met Phe Val Tyr Ile Val Phe Leu Phe Gly Phe Ser

580 585 590

Thr Ala Val Val Thr Leu Ile Glu Asp Gly Lys Asn Asp Ser Leu Pro

595 600 605

Ser Glu Ser Thr Ser His Arg Trp Arg Gly Pro Ala Cys Arg Pro Pro

610 615 620

Asp Ser Ser Tyr Asn Ser Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Glu Leu Phe Lys

625 630 635 640

Phe Thr Ile Gly Met Gly Asp Leu Glu Phe Thr Glu Asn Tyr Asp Phe

645 650 655

Lys Ala Val Phe Ile Ile Leu Leu Leu Ala Tyr Val Ile Leu Thr Tyr

660 665 670

Ile Leu Leu Leu Asn Met Leu Ile Ala Leu Met Gly Glu Thr Val Asn

675 680 685

Lys Ile Ala Gln Glu Ser Lys Asn Ile Trp Lys Leu Gln Arg Ala Ile

690 695 700

Thr Ile Leu Asp Thr Glu Lys Ser Phe Leu Lys Cys Met Arg Lys Ala

705 710 715 720

Phe Arg Ser Gly Lys Leu Leu Gln Val Gly Tyr Thr Pro Asp Gly Lys

725 730 735

Asp Asp Tyr Arg Trp Cys Phe Arg Val Asp Glu Val Asn Trp Thr Thr

740 745 750

Trp Asn Thr Asn Val Gly Ile Ile Asn Glu Asp Pro Gly Asn Cys Glu

755 760 765

Gly Val Lys Arg Thr Leu Ser Phe Ser Leu Arg Ser Ser Arg Val Ser

770 775 780

Gly Arg His Trp Lys Asn Phe Ala Leu Val Pro Leu Leu Arg Glu Ala

785 790 795 800

Ser Ala Arg Asp Arg Gln Ser Ala Gln Pro Glu Glu Val Tyr Leu Arg

805 810 815

Gln Phe Ser Gly Ser Leu Lys Pro Glu Asp Ala Glu Val Phe Lys Ser

820 825 830

Pro Ala Ala Ser Gly Glu Lys

835

<210> 2

<211> 41

<212> ДНК

<213> Неизвестен

<220>

<223> прямой праймер на основе Homo sapiens

<400> 2

ataaacggta ccgccgccac catgaagaaa tggagcagca c 41

<210> 3

<211> 33

<212> ДНК

<213> Неизвестен

<220>

<223> обратный праймер на основе Homo sapiens

<400> 3

atcggtttaa actcacttct ctccggaagc ggc 33

<210> 4

<211> 2520

<212> ДНК

<213> Неизвестен

<220>

<223> TRPV1 человека

<400> 4

atgaagaaat ggagcagcac agacttgggg gcagctgcgg acccactcca aaaggacacc 60

tgcccagacc ccctggatgg agaccctaac tccaggccac ctccagccaa gccccagctc 120

tccacggcca agagccgcac ccggctcttt gggaagggtg actcggagga ggctttcccg 180

gtggattgcc ctcacgagga aggtgagctg gactcctgcc cgaccatcac agtcagccct 240

gttatcacca tccagaggcc aggagacggc cccaccggtg ccaggctgct gtcccaggac 300

tctgtcgccg ccagcaccga gaagaccctc aggctctatg atcgcaggag tatctttgaa 360

gccgttgctc agaataactg ccaggatctg gagagcctgc tgctcttcct gcagaagagc 420

aagaagcacc tcacagacaa cgagttcaaa gaccctgaga cagggaagac ctgtctgctg 480

aaagccatgc tcaacctgca cgacggacag aacaccacca tccccctgct cctggagatc 540

gcgcggcaaa cggacagcct gaaggagctt gtcaacgcca gctacacgga cagctactac 600

aagggccaga cagcactgca catcgccatc gagagacgca acatggccct ggtgaccctc 660

ctggtggaga acggagcaga cgtccaggct gcggcccatg gggacttctt taagaaaacc 720

aaagggcggc ctggattcta cttcggtgaa ctgcccctgt ccctggccgc gtgcaccaac 780

cagctgggca tcgtgaagtt cctgctgcag aactcctggc agacggccga catcagcgcc 840

agggactcgg tgggcaacac ggtgctgcac gccctggtgg aggtggccga caacacggcc 900

gacaacacga agtttgtgac gagcatgtac aatgagattc tgatcctggg ggccaaactg 960

cacccgacgc tgaagctgga ggagctcacc aacaagaagg gaatgacgcc gctggctctg 1020

gcagctggga ccgggaagat cggggtcttg gcctatattc tccagcggga gatccaggag 1080

cccgagtgca ggcacctgtc caggaagttc accgagtggg cctacgggcc cgtgcactcc 1140

tcgctgtacg acctgtcctg catcgacacc tgcgagaaga actcggtgct ggaggtgatc 1200

gcctacagca gcagcgagac ccctaatcgc cacgacatgc tcttggtgga gccgctgaac 1260

cgactcctgc aggacaagtg ggacagattc gtcaagcgca tcttctactt caacttcctg 1320

gtctactgcc tgtacatgat catcttcacc atggctgcct actacaggcc cgtggatggc 1380

ttgcctccct ttaagatgga aaaaactgga gactatttcc gagttactgg agagatcctg 1440

tctgtgttag gaggagtcta cttctttttc cgagggattc agtatttcct gcagaggcgg 1500

ccgtcgatga agaccctgtt tgtggacagc tacagtgaga tgcttttctt tctgcagtca 1560

ctgttcatgc tggccaccgt ggtgctgtac ttcagccacc tcaaggagta tgtggcttcc 1620

atggtattct ccctggcctt gggctggacc aacatgctct actacacccg cggtttccag 1680

cagatgggca tctatgccgt catgatagag aagatgatcc tgagagacct gtgccgtttc 1740

atgtttgtct acatcgtctt cttgttcggg ttttccacag cggtggtgac gctgattgaa 1800

gacgggaaga atgactccct gccgtctgag tccacgtcgc acaggtggcg ggggcctgcc 1860

tgcaggcccc ccgatagctc ctacaacagc ctgtactcca cctgcctgga gctgttcaag 1920

ttcaccatcg gcatgggcga cctggagttc actgagaact atgacttcaa ggctgtcttc 1980

atcatcctgc tgctggccta tgtaattctc acctacatcc tcctgctcaa catgctcatc 2040

gccctcatgg gtgagactgt caacaagatc gcacaggaga gcaagaacat ctggaagctg 2100

cagagagcca tcaccatcct ggacacggag aagagcttcc ttaagtgcat gaggaaggcc 2160

ttccgctcag gcaagctgct gcaggtgggg tacacacctg atggcaagga cgactaccgg 2220

tggtgcttca gggtggacga ggtgaactgg accacctgga acaccaacgt gggcatcatc 2280

aacgaagacc cgggcaactg tgagggcgtc aagcgcaccc tgagcttctc cctgcggtca 2340

agcagagttt caggcagaca ctggaagaac tttgccctgg tccccctttt aagagaggca 2400

agtgctcgag ataggcagtc tgctcagccc gaggaagttt atctgcgaca gttttcaggg 2460

tctctgaagc cagaggacgc tgaggtcttc aagagtcctg ccgcttccgg agagaagtga 2520

Реферат

Изобретение относится к новым аминоиндановым соединениям, представленным формулами (I) или (II):,где: А является фенилом или моноциклическим ароматическим 5- или 6-членным кольцом, содержащим 1 или 2 гетероатома, выбранных из N и S; Rи R, независимо, являются С-Салкилом или СНСНОН; или Rи Rобъединены с образованием 4-6-членного карбоциклического или насыщенной 5- или 6-членной моноциклической группы, содержащей один дополнительный кольцевой гетероатом, такой как О; Rнезависимо выбран из группы, состоящей из галогена; Rнезависимо выбран из группы, состоящей из галогена и С-Салкила; или q равен 2, и две группы Rсвязаны с образованием насыщенной 5- или 6-членной моноциклической группы, содержащей 1-2 атома кислорода; m равен от 1 до 3; n равен от 1 до 3; p равен от 0 до 2; q равен от 0 до 2; и Xявляется ионом галогена, трифторацетатом, сульфатом, и т.д., а также к способам получения и применения этих соединений. Указанные соединения могут найти примение при лечении боли и/или зуда. Способы включают введение соединения формулы (I) или (II) и активатора рецептора TRPV1. 7 н. и 7 з.п. ф-лы, 8 табл., 11 ил., 59 пр.

Формула