Ингибиторы фосфатаз cdc25 - RU2285521C2

Описание

Настоящее изобретение касается новых ингибиторов фосфатаз cdc25, в частности фосфотазы cdc25-C.

Контроль перехода между различными фазами клеточного цикла во время митоза или мейоза обеспечивается комплексом белков, ферментативная активность которых связана с различными стадиями фосфорилирования. Эти стадии контролируются двумя большими классами ферментов: киназами и фосфатазами.

Синхронизация различных фаз клеточного цикла позволяет, таким образом, реорганизовывать архитектуру клетки во время каждого цикла в живой природе в целом (микроорганизмы, дрожжи, позвоночные, растения). Среди киназ главную роль в контроле клеточного цикла играют циклинзависимые киназы (CDKs). Их активность регулируется ассоциациями их молекул с другими белками, называемыми циклинами. Кроме того, эндогенные ингибиторы способны предупреждать такую активность. Ряд ингибиторов этой группы уже идентифицирован и изучен в различных терапевтических областях, таких как онкология, для предупреждения деления опухолевых клеток (McDonald et el-Deiry, Int.J.Oncol. (2000), 16, 871-886) или нейробиология, для предупреждения естественного или химически индуцированного апоптоза нормальных клеток (например, нейронов) (ср. Maas et coll., J.Neurochem. (1998), 70, 1401-1410, Park et coll., J. Neurosci. 17, 1256-1270).

Кроме того, ферментативная активность указанных различных CDK контролируется двумя другими семействами ферментов, которые имеют противоположное действие (Jessus et Ozon, Prog. Cell Cycle Res. (1995), 1, 215-228). В первую входят киназы, такие как Weel и Miki, которые инактивируют CDK путем фосфорилирования некоторых аминокислот (Den Haese et coll., Mol. Biol. Cell(1995), 6, 371-385). Во вторую входят фосфатазы, такие как cdc25, которые активируют CDK путем дефосфорилирования остатков тирозина и треонина CDK (Gould et coll., Science (1990), 250, 1573-1576). Дефосфорилирование происходит благодаря взаимодействию белок/белок между циклином и cdc25 на первом этапе, затем на втором этапе CDK является мишенью этого комплекса (Morris et Divita, J.Mol. Biol. (1999), 286, 475-487). Кроме того, сам циклин В фосфорилируется киназой cdc2 (cdk1), с которой он связан (Borgne et coll., Biol.Chem. (1999), 274, 11977-11986).

Если для дрожжей описана только одна форма cdc25, то белки cdc25 человека кодирует группа из трех генов cdc25-A, cdc25-B и cdc25-C. Кроме того, были идентифицированы варианты, полученные в результате альтернативного сплайсинга гена cdc25-B: речь идет о cdc25B1, cdc25B2, cdc25B3 (Baldin et coll., Oncogene (1997), 14, 2485-2495). Белки, кодированные этими вариантами, могли быть локализованы в клетке различным образом (Davezac et coll. Oncogene (2000), 19, 2179-2185). Активность cdc25 регулируют киназы cdc2 и cdck2. Но при отсутствии киназы cdc2 активность cdc25 может регулироваться другими киназами (Izumi et Maller, Mol. Biol. Cell (1995), 6, 215-226). Среди последних белок chkl фосфорилирует cdc25-C по серину в положении 216, что увеличивает его аффинность к протеину шаперону 14-3-3. Эта связь нейтрализует cdc25-C и, следовательно, удерживает фермент cdk1 в фосфорилированном и потому инактивном состоянии, не позволяя начаться митозу. Протеин шаперон позволяет комплексу переходить в цитоплазму благодаря протеиновому звену экспорта ядра (Lopez-Girona et coll., Nature (1999), 397, 172-175).

Химический ингибитор chkl (SB-218070) позволяет клетке продолжать ее клеточный цикл, несмотря на повреждение ДНК. Этот аспект позволяет повысить эффективность некоторых цитотоксических соединений, таких как камптотецин (Jackson et coll., Canser Res. (2000), 60, 566-572).

Первоначально роль фосфотаз cdc25 в онкогенезе была описана группой Beach, показавшей, что cdc25A и cdc25B во взаимодействии с Ha-RASG12V образуют локусы (foci) после трансфекции нормальных клеток (Galactionov et coll., Science (1995), 269, 1575-1577). Трансформирующая активность cdc25A и cdc25B наблюдается также, когда трансфекция происходит в клетках, потерявших ген подавления опухолей RB1. Кроме того, экспрессия генов cdc25-A и cdc25-B, вероятно, находится под прямым контролем онкогена с-Мус (Galaktionov et coll., Nature (1996), 382, 511-517). И наоборот, фосфотаза cdc25-C, вероятно, не контролируется последним.

Повышенная экспрессия cdc25 и, главным образом, cdc25-A вероятно препятствует остановке клеткой ее клеточного цикла в случае агрессивного воздействия на геном и, таким образом, уклонению от возможного процесса репарации (Mailand et coll., Science (2000), 288, 1425-1429).

К тому же повышенная экспрессия различных форм cdc25 в настоящее время выявлена в многочисленных сериях опухолей человека:

- Рак груди: измерение с помощью riboprobe показывает, что 32% опухолей имеют повышенную экспрессию cdc25-B. Повышенная экспрессия cdc25-A установлена примерно в 50% рака груди и ассоциируется с неблагоприятным прогнозом (Cangi et all, Résumé 2984, AACR meeting San Francisco, 2000).

- Лимфомы: в циркулирующих лимфоцитах экспрессия РНК cdc25-В1 и -В3 была выявлена с помощью RT-PCR, тогда как экспрессия cdc25-A, -В2 и -С была очень слабой или не поддавалась выявлению. Напротив, анализ этих генов в неходжкинских лимфомах показывает высокую экспрессию cdc25-A и -В примерно в 35% опухолей. Варианты cdc25-B1 и -В3 были выявлены во всех исследованных опухолях. Напротив, экспрессия cdc25-C остается очень слабой во всех пробах (Hernandez et all, Int.J. Cancer (2000), 89, 148-152). Важно отметить корреляцию экспрессии таких белков, как myc и cdc25. Повышенную экспрессию с-myc демонстрируют также 26 из 35 (74%) неходжкинских лимфом с повышенной степенью cdc25-B. Напротив, 27 из 28 (96%) опухолей с низкой степенью экспрессии cdc25-B не обнаруживают поддающийся выявлению с-myc (Р<0,0001). В связи с этим можно предположить, что экспрессия cdc25, связанная с экспрессией myc, может участвовать в развитии лимфом такого типа (Hernandez et all, Cancer Res.(1998), 58, 1762-1767).

- Рак головы и шеи: Gasparotto et all отмечают, что в 20 опухолях, исследованных с помощью количественного RT-PCR, наблюдалась повышенная экспрессия cdc25-A и -В, в то время как экспрессия cdc25-C выражена очень слабо (Gasparotto et all, Cancer Res.(1997), 57, 2366-2368).

Кроме того, группа E.Sausville сообщает об обратной корреляции между уровнем экспрессии cdc25-B на планшете с 60 линиями и их чувствительностью к ингибиторам CDK, таким как оломуцин или флавопиридол, что наводит на мысль о том, что присутствие cdc25 может вызвать сопротивляемость к некоторым противоопухолевым агентам и более конкретно к ингибиторам CDK (Hose et all, Proceeding of AACR, Abstract 3571, San Francisco, 2000).

Витамин К3, называемый также менадионом, был первым селективным ингибитором фосфатазы cdc25 (Ham et all, Bioorg. Med. Спет.Lett. (1998) 8, 2507-2510). Впоследствии были обнаружены другие ингибиторы cdc25, обладающие ингибиторной активностью микромолярного порядка в отношении рекомбинантных ферментов. Среди таких продуктов можно назвать:

1. Аналоги нафтохинонов, являющиеся производными менадиона (Ham et all, Bioorg. Med. Chem. Lett. (1998) 8, 2507-2510).

2. Cpd5, являющийся тиолалкильным производным витамина К (Tamura et all, Cancer Res. (2000), 60, 1317-1325). Константы ингибирования (Kis), измеренные на cdc25-A, -B2 и -С, составляют 15, 1,7 и 1,3 мкмоль соответственно.

3. 4-(бензил-(2-[(2,5-дифенилоксазол-4-карбонил) амино]этил)карбамоил)-2-деканоиламинобутановая кислота, называемая также SC-альфа-альфа-дельта 9 (Tamura et all, Oncogene (1999), 18, 6989-6996).

4. Некоторые из соединений из библиотеки Ugi, содержащие группы, имитирующие фосфаты, являются неконкурентными ингибиторами cdc25-A, которые не действуют на активный сайт. Наиболее активное соединение имеет CI₅₀ порядка 0,5 мкМ, и интерактивный сайт в настоящее время находится в процессе идентификации (Bergnes et all, Bioorg. Med. Chem. Lett. (1999), 9, 2849-2854).

5. Производные хинолин-4-она и 1, 7-нафтиридин-4-она. Некоторые из этих соединений являются одновременно ингибиторами cdc25, а также cdc2 (el-Subbagh et all, Arch. Pharm. (WeinheimJ (1999), 332, 19-24).

6. Дизидиолид и производные, содержащие группу γ-гидроксибутенолида. Эффективность этих соединений обсуждается в документе Blanchard et all, Bioorg. Med. Chem.Lett. (1999), 9, 2537-2538.

7. Некоторые 5-замещенные 2-бромоиндоло[3,2-b]хиноксалины. Некоторые из этих соединений являются одновременно ингибиторами cdc25, а также cdc2 (Abadi et all, Arch. Pharm. (Weinheim.) (1998), 331, 352-358).

В заявке РСТ WO 00/17190 описаны производные амидинов, которые ингибируют NO-синтазы и улавливают свободные радикалы. Указанные соединения обладают в связи с этим многочисленными фармакологическими свойствами, и можно рассматривать их применение для лечения многих патологий, главным образом в области неврологии. Упрощенной общей формулой этих соединений может быть общая формула (ЕТ1):

в которой

А обозначает радикал, улавливающий свободные радикалы, например замещенный фенил;

Х и Y являются связующими звеньями, например, алкиленовыми, алкиленкарбонильными, карбонилалкиленовыми радикалами;

R обозначает Н или алкил;

В обозначает карбоциклический или гетероциклический арильный радикал и предпочтительно 2-тиенил.

Изобретение касается новых ингибиторов cdc25 и, в частности, cdc25-C общей формулы (I), охарактеризованной ниже. Эти соединения могут применяться в качестве лекарственных средств для лечения следующих заболеваний/нарушений:

- ингибирование опухолевой пролиферации, отдельно или в сочетании с другими видами лечения;

- ингибирование пролиферации нормальных клеток, отдельно или в сочетании с другими видами лечения;

- предупреждение спонтанного облысения;

- предупреждение облысения, вызванного экзогенными продуктами;

- предупреждение облысения вследствие облучения;

- предупреждение апоптоза, спонтанного или индуцированного в нормальных клетках;

- предупреждение мейоза и оплодотворения;

- предупреждение созревания ооцитов;

- всех заболеваний/всех нарушений, связанных с отсроченным применением ингибиторов CDK, и, в частности, пролиферативных неопухолевых заболеваний (например, ангиогенез, псориаз или рестеноз), пролиферативных опухолевых заболеваний, паразитологии (пролиферация protozoae), вирусных инфекций, нейродегенеративных заболеваний, миопатий;

- всех заболеваний/всех нарушений, связанных с клиническим применением витамина К и его производных.

Кроме того, соединения согласно настоящему изобретению, благодаря своим свойствам ингибирования фосфатаз cdc25, могут также применяться для ингибирования пролиферации микроорганизмов, в частности дрожжей. Одним из преимуществ этих соединений является их низкая токсичность для здоровых клеток.

Таким образом, заявителем было неожиданно обнаружено, что соединения общей формулы (I)

в которой А обозначает радикал (А1)

в котором две из групп R¹, R², R³, R⁴ и R⁵ обозначают атомы водорода, а три другие независимо выбирают из атома водорода, атома галогена и радикалов: алкильного, гидрокси, алкокси, алкилкарбонилокси, алкилтио или NR⁶R⁷, при условии, что:

- или R¹ и один из R² и R⁴ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и NR⁶R⁷;

- или R² и один из R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и NR⁶R⁷;

- или R⁴ и один из R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и NR⁶R⁷;

- или один из R¹, R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и NR⁶R⁷; и остаток B-N(W)-X-Y связан с радикалом А через атом азота;

причем R⁶ и R⁷ обозначают независимо в каждом случае их присутствия атом водорода или алкильный радикал, или R⁶ и R⁷образуют вместе с атомом азота 4-7-членный гетероцикл, содержащий от 1 до 2 гетероатомов, причем звенья, необходимые для образования гетероцикла, выбирают независимо из радикалов -CR⁸ R⁹-, -O-, -S- и -NR¹⁰-, при этом R⁸ и R⁹ обозначают независимо в каждом случае их присутствия атом водорода или радикал: алкильный, алкокси, бензилоксикарбониламино или диалкиламино, и R¹⁰ независимо обозначает в каждом случае своего присутствия атом водорода или алкильный радикал,

или А обозначает радикал (А2)

в котором:

- или R¹¹ и один из R¹³, R¹⁴ и R¹⁵ обозначают гидроксильные радикалы, тогда как другие радикалы, выбранные из R¹³, R¹⁴ и R¹⁵, а также R¹⁶ обозначают атомы водорода,

- или R¹² и R¹⁶ обозначают гидроксильные радикалы, тогда как R¹¹, R¹³, R¹⁴, и R¹⁵ обозначают атомы водорода;

В обозначает радикал -СО-, -NH-CO-(СН₂)_n- или -(СН₂)_p-, причем n обозначает целое число от 0 до 3 и р обозначает целое число от 0 до 1;

W обозначает атом водорода или алкильный радикал;

X обозначает радикал -(CH₂)_q-, -(CH₂)_q-NH- или -СО-(СН₂)_r-, причем q обозначает целое число от 1 до 6 и r обозначает целое число от 0 до 6;

или группа B-N(W)-X-Y обозначает радикал

в котором В то же, что охарактеризовано выше, t обозначает целое число от 0 до 2, s обозначает целое число от 0 до 1 и R¹⁷ и R¹⁸ обозначают радикалы, выбранные независимо из атома водорода и алкильного радикала;

и:

- если Х обозначает радикал -(CH₂)_q- или -СО-(СН₂)_r-, то Y обозначает радикал

в котором R¹⁹ обозначает атом водорода, атом галогена, радикал нитро, алкил, алкилтио, NR²¹R²², -SO₂-NR²³R²⁴, -NH-SO₂-R²⁵или -О-Р(О)(OR²⁶)(OR²⁷),

при этом R²¹ и R²² независимо обозначают атом водорода или алкильный радикал,

R²³ и R²⁴ независимо обозначают атом водорода или алкильный радикал, или R²³ и R²⁴ обозначают вместе с атомом азота, с которым они связаны, 5-7-членный гетероцикл, дополнительные звенья которого выбирают независимо из -CHR²⁸-, -NR²⁹-, -О- и -S-, причем R²⁸ и R²⁹ обозначают независимо в каждом случае своего присутствия атом водорода или алкильный радикал,

R²⁵ при этом обозначает алкил, галогеналкил или один из радикалов, выбранный из арила, гетероарила, аралкила или гетероаралкила, арильное или гетероарильное ядро которого возможно замещено одним или несколькими радикалами, независимо выбранными из атома галогена и алкила, галогеналкила, гидроксила, алкоксила или нитрогруппы, что не относится к возможным атомам азота гетероарильного ядра, возможные заместители которых выбирают из алкильных радикалов,

R²⁶ и R²⁷ при этом независимо выбирают из алкильных радикалов, и R²⁰ обозначает атом водорода, атом галогена или алкил, алкокси или алкилтио,

или Y обозначает радикал (Т), представленный ниже

в котором R²⁰ обозначает атом водорода или алкил, алкокси или алкилтио,

- если Х обозначает радикал -(CH₂)_q-NH- или если группа

B-N(W)-X-Y обозначает радикал

то Y обозначает только радикал -SO₂-R³⁰, в котором R³⁰обозначает алкильный, галогеналкильный радикал или один из радикалов, выбранных из арила, гетероарила, аралкила или гетероаралкила, арильное или гетероарильное ядро которого возможно замещено одним или несколькими радикалами, выбранными независимо из атома галогена и алкила, галогеналкила, гидроксила, алкоксила или нитрогруппы, что не относится к возможным атомам азота гетероарильного ядра, возможные заместители которых выбирают из алкильных радикалов,

при дополнительном условии, что если группа B-N(W)-X-Y обозначает радикал

то В обозначает только радикал -СО- или -(CH₂)-;

или фармацевтически приемлемые соли соединений общей формулы (I), определенной выше,

являются ингибиторами фосфатаз cdc25 и, в частности, ингибиторами фосфатазы cdc25-C и, следовательно, могут применяться для получения лекарственного средства, предназначенного для ингибирования фосфатаз cdc25 и, в частности, фосфатазы cdc25-C.

Под алкилом, если иные уточнения отсутствуют, подразумевают алкильный радикал, линейный или разветвленный, содержащий от 1 до 12 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 10 атомов углерода и более предпочтительно от 1 до 6 атомов углерода. Под алкенилом, если иные уточнения отсутствуют, подразумевают алкильный радикал, линейный или разветвленный, содержащий от 1 до 6 атомов углерода и имеющий, по меньшей мере, одну ненасыщенность (двойную связь). Под алкинилом, если иные уточнения отсутствуют, подразумевают алкильный радикал, линейный или разветвленный, содержащий от 1 до 6 атомов углерода и имеющий, по меньшей мере, одну двойную ненасыщенность (тройную связь). Под карбоциклическим или гетероциклическим арилом подразумевают карбоциклическую или гетероциклическую систему, содержащую, по меньшей мере, один ароматический цикл, причем система называется гетероциклической, если, по меньшей мере, один из циклов, из которых она состоит, содержит гетероатом (О, N или S); если карбоциклический или гетероциклический арильный радикал называют замещенным, при условии, что иные уточнения отсутствуют, то подразумевают, что этот карбоциклический или гетероциклический арильный радикал замещен от 1 до 3 раз, предпочтительно от 1 до 2 раз не атомом водорода, а другими радикалами, которые, если они не уточнены, выбирают из атома галогена и алкильного или алкоксильного радикалов; кроме того, если иные уточнения отсутствуют, под арилом подразумевают только карбоциклический арил. Под галогеналкилом подразумевают алкильный радикал, по меньшей мере, один из атомов водорода которого (и возможно все) заменен на атом галогена.

Под радикалами алкилтио, алкокси, галогеналкильным, галогеналкокси, аминоалкильным, алкенильным, алкинильным, аралкильным подразумевают соответственно радикалы алкилтио, алкокси, галогеналкильный, галогеналкокси, аминоалкильный, алкенильный, алкинильный, аралкильный, в которых алкильный радикал имеет значение, указанное выше.

Под линейным или разветвленным алкилом, содержащим от 1 до 6 атомов углерода, подразумевают, в частности, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил и трет-бутил, пентил, неопентил, изопентил, гексил, изогексил. Под карбоциклическим арилом подразумевают, в частности, фенильный и нафтильннй радикалы. Под гетероциклическим арилом или гетероарилом подразумевают, в частности, тиенил, имидазолил, тиазолил, оксазолил и пиридил. Наконец, под галогеном подразумевают атомы фтора, хлора, брома или йода.

Под фармацевтически приемлемой солью подразумевают, в частности, соли присоединения с неорганическими кислотами, такие как гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, сульфат, фосфат, дифосфат и нитрат, или с органическими кислотами, такие как ацетат, малеат, фумарат, тартрат, сукцинат, цитрат, лактат, метансульфонат, п-толуолсульфонат, памоат и стеарат.К настоящему изобретению относятся также в случае, если они являются приемлемыми, соли, полученные с такими основаниями, как гидроксид натрия или калия. В отношении других примеров фармацевтически приемлемых солей можно обратится к "Salt selection for basic drugs", Int.J.Pharm. (1986), 33, 201-217.

В некоторых случаях соединения согласно настоящему изобретению могут содержать асимметричные атомы углерода. Следовательно, соединения согласно настоящему изобретению имеют две возможные энантиомерные формы, т.е. конфигурации "R" и "S". К настоящему изобретению относятся обе энантиомерные формы и все комбинации этих форм, включая рацемические смеси "RS". В целях упрощения, если ни одна специфическая конфигурация не указана в структурных формулах, следует понимать, что присутствуют обе энантиомерные формы и их смеси.

Предпочтительно соединения общей формулы (I) согласно изобретению отвечают одной из следующих характеристик:

- А обозначает радикал (А1)

в котором две из групп R¹, R², R³, R⁴ и R⁵ обозначают атомы водорода, а три другие независимо выбраны из атома водорода, атома галогена и алкила, алкилкарбонилокси, гидроксила, алкоксила или NR⁶R⁷, при условии, что:

- или R¹ и один из R² и R⁴ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и NR⁶R⁷;

- или R² и один из R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и NR⁶R⁷;

- или R⁴ и один из R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и NR⁶R⁷;

- или один из R¹, R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и NR⁶R⁷; и остаток B-N(W)-X-Y связан с радикалом А через атом азота;

при этом R⁶ и R⁷ обозначают независимо в каждом случае их присутствия атом водорода или алкильный радикал, или R⁶ и R⁷образуют вместе с атомом азота 5-7-членный гетероцикл, содержащий от 1 до 2 гетероатомов, причем звенья, необходимые для образования гетероцикла, выбирают независимо из радикалов -CR⁸R⁹-, -О-, -S- и -NR¹⁰-, при этом R⁸ и R⁹ обозначают независимо в каждом случае их присутствия атом водорода или алкильный или алкоксильный радикал, и R¹⁰ независимо обозначает в каждом случае своего присутствия атом водорода или алкильный радикал,

или же А обозначает радикал (А2)

в котором:

- или R¹¹ и один из R¹³, R¹⁴ и R¹⁵ обозначают гидроксил, тогда как другие радикалы, выбранные из R¹³, R¹⁴ и R¹⁵, а также R¹⁶обозначают атомы водорода,

- или R¹² и R¹⁶ обозначают гидроксил, тогда как R¹¹, R¹³, R¹⁴ и R¹⁵ обозначают атомы водорода;

- В обозначает радикал -СО-, -NH-CO-(CH₂)_n- или -(СН₂)_р-, причем n обозначает целое число от 0 до 2; и р обозначает целое число от 0 до 1;

- W обозначает атом водорода или алкильный радикал;

- Х обозначает радикал -(CH₂)_q-, -(CH₂ )_q-NH- или -СО-(СН₂)_r-, причем q обозначает целое число от 1 до 4 и г обозначает целое число от 0 до 5;

или группа B-N(W)-X-Y обозначает радикал

в котором В имеет то же значение, что определено в общей формуле (I), t обозначает целое число от 0 до 2, s обозначает целое число от 0 до 1, R¹⁷ и R¹⁸ обозначают радикалы, независимо выбранные из атома водорода и алкильного радикала;

- если Х обозначает радикал -(CH₂)_q- или -СО-(СН₂)_r-, тогда Y обозначает радикал

в котором R¹⁹ обозначает атом водорода, атом галогена, радикал нитро, алкильный, алкилтио, NR²¹R²², -SO₂ -NR²³R²⁴, -NH-SO₂-R²⁵ или -О-Р(О) (OR²⁶) (OR²⁷),

при этом R²¹ и R²² независимо обозначают атом водорода или алкильный радикал,

R²³ и R²⁴ независимо обозначают атом водорода или алкильный радикал или R²³ и R²⁴ обозначают вместе с атомом азота, с которым они связаны, 5-6-членный гетероцикл, дополнительные звенья которого выбраны независимо из -CHR²⁸-, -NR²⁹-, -О- и -S-, причем R²⁸ и R²⁹ обозначают независимо в каждом случае своего присутствия атом водорода или алкильный радикал,

R²⁵ при этом обозначает алкильный или арильный радикал, возможно замещенный одним или несколькими радикалами, выбранными из атома галогена и алкила, галогеналкила, алкоксила или нитрогруппы, что не относится к вероятным атомам азота гетероарильного ядра, возможные заместители которых выбирают из алкильных радикалов,

R²⁶ и R²⁷ при этом независимо выбирают из алкильных радикалов,

и R²⁰ обозначает атом водорода, или алкильный, или алкоксильный радикал,

или Y обозначает радикал формулы (Т)

в котором R²⁰ обозначает атом водорода или алкильный или алкоксильный радикал,

- если Х обозначает радикал -(CH₂)_q-NH-, или если группа В-N(W)-X-Y обозначает радикал

то Y обозначает радикал -SO₂ -R³⁰, в котором R³⁰ обозначает алкильный, галогеналкильный радикал или один из радикалов, выбранных из арила, гетероарила, аралкила или гетероаралкила, арильное или гетероарильное ядро которых возможно замещено одним или несколькими радикалами, выбранными независимо из атома галогена и алкила, галогеналкила, алкоксила или нитрогруппы, что не относится к вероятным атомам азота гетероарильного ядра, возможные заместители которых выбирают из алкильных радикалов.

Более предпочтительно соединения общей формулы (I) согласно изобретению отвечают, по меньшей мере, один из следующих признаков:

- А обозначает радикал (А1)

в котором две из групп R¹, R², R³, R⁴ и R⁵ обозначают атомы водорода, а три другие независимо выбраны из атома водорода, атома галогена и алкила, алкилкарбонилокси, гидроксила, алкоксила или NR⁶R⁷, при условии, что:

- или R¹ и один из R² и R⁴ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и NR⁶ R⁷;

- или R² и один из R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и NR⁶R⁷;

- или R⁴ и один из R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и NR⁶R⁷;

- или один из R¹, R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и NR⁶R⁷; и остаток B-N(W)-X-Y связан с радикалом А через атом азота;

причем R⁶ и R⁷ обозначают независимо в каждом случае их присутствия атом водорода или алкильный радикал, содержащий от 1 до 3 атомов углерода, или R⁶ и R⁷ образуют вместе с атомом азота 5-6-членный гетероцикл, содержащий от 1 до 2 гетероатомов, причем звенья, необходимые для образования гетероцикла, выбирают независимо из радикалов -CR⁸R⁹-, -О- и -NR¹⁰-, при этом R⁸ и R⁹обозначают независимо в каждом случае их присутствия атом водорода или алкильный или алкоксильный радикал, и R¹⁰ независимо обозначает в каждом случае своего присутствия атом водорода или алкильный радикал,

или А обозначает радикал (А2)

в котором:

- или R¹¹ и R¹⁵ обозначают гидроксил, тогда как R¹², R¹³, R¹⁴ и R¹⁶ обозначают атомы водорода,

- или R¹² и R¹⁶ обозначают гидроксил, тогда как R¹¹, R¹³, R¹⁴ и R¹⁵ обозначают атомы водорода;

- W обозначает атом водорода или метильный или этильный радикал;

- Х обозначает радикал -(CH₂)_q-, -(CH₂)_q-NH- или -СО- (CH₂)_r-, причем q обозначает целое число от 1 до 3 и r обозначает целое число от 0 до 4;

или группа B-N(W)-X-Y обозначает радикал

в котором В обозначает то же, что в общей формуле (I), t обозначает целое число от 0 до 2, s обозначает целое число от 0 до 1, R¹⁷ и R¹⁸ обозначают радикалы, независимо выбранные из атома водорода и алкильного радикала, содержащего от 1 до 3 атомов углерода;

- если Х обозначает радикал -(CH₂)_q- или -СО-(СН₂)_r-, тогда Y обозначает радикал

в котором R¹⁹ обозначает радикал нитро, NR²¹R²², -SO₂ -NR²³R²⁴, -NH-SO₂-R²⁵ или -О-Р(О) (OR²⁶) (OR²⁷),

при этом R²¹ и R²² независимо обозначают атом водорода или алкильный радикал,

R²³ и R²⁴ независимо обозначают атом водорода или алкильный радикал, или R²³ и R²⁴ обозначают вместе с атомом азота, с которым они связаны, 5-,6-членный гетероцикл, дополнительные звенья которого выбраны независимо из -CHR²⁸-, -NR²⁹-, -О- и -S-, причем R²⁸ и R²⁹ обозначают независимо в каждом случае своего присутствия атом водорода или алкильный радикал,

R²⁵ при этом обозначает алкильный или арильный радикал, возможно замещенный одним или несколькими радикалами, выбранными из атома галогена и алкила, галогеналкила, алкоксила или нитрогруппы, что не относится к вероятным атомам азота гетероарильного ядра, возможные заместители которых выбирают из алкильных радикалов,

причем R²⁶ и R²⁷ при этом независимо выбирают из алкильных радикалов,

и R²⁰ обозначает атом водорода или алкильный радикал,

или Y обозначает радикал формулы (Т)

в которой R²⁰ обозначает атом водорода или алкильный радиал,

- если Х обозначает радикал -(CH₂)_q-NH- или если группа B-N(W)-X-Y обозначает радикал

тогда Y обозначает радикал -SO₂-R³⁰, в котором R³⁰ обозначает алкильный, галогеналкильный радикал или один из арильных или аралкильных радикалов, арильное ядро которых возможно замещено одним или несколькими радикалами, выбранными независимо из атома галогена и алкила, галогеналкила, алкоксила или нитрогруппы, что не относится к вероятным атомам азота гетероарильного ядра, возможные заместители которых выбирают из алкильных радикалов.

Еще более предпочтительно соединения общей формулы (I) согласно изобретению отвечают, по меньшей мере, одному из следующих признаков:

- А обозначает радикал (А1)

в котором две из групп R¹, R², R³, R⁴ и R⁵ обозначают атомы водорода, а три другие независимо выбирают из атома водорода, атома галогена и алкила, ацетокси, гидрокси, метокси или NR⁶R⁷, при условии, что:

- или R¹ и один из R² и R⁴ независимо выбирают из гидроксила, ацетокси и NR⁶R⁷;

- или R² и один из R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, ацетокси и NR⁶R⁷;

- или R⁴ и один из R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, ацетокси и NR⁶R⁷;

- или один из R¹, R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, ацетокси и NR⁶R⁷; и остаток B-N(W)-X-Y связан с радикалом А через атом азота;

причем R⁶ и R⁷ обозначают независимо в каждом случае их присутствия атом водорода или алкильный радикал, содержащий от 1 до 3 атомов углерода (причем этот алкильный радикал предпочтительно является метильным радикалом), или R⁶ и R⁷ образуют вместе с атомом азота 6-членный гетероцикл, содержащий 1-2 гетероатома, причем звенья, необходимые для образования гетероцикла, выбирают независимо из радикалов -CR⁸R⁹-, -О-, -S- и -NR¹⁰-, при этом R⁸ и R⁹ обозначают независимо в каждом случае их присутствия атом водорода или алкильный радикал (причем этот алкильный радикал предпочтительно является метильным радикалом), и R¹⁰ независимо обозначает в каждом случае своего присутствия атом водорода или алкильный радикал (причем этот алкильный радикал предпочтительно является метильным радикалом),

или же А обозначает радикал (А2)

в котором R¹¹ и R¹⁵ обозначают гидроксил, тогда как R¹², R¹³, R¹⁴ и R¹⁶ обозначают атомы водорода,

- W обозначает атом водорода или метильный радикал;

- Х обозначает радикал -(CH₂)_q-, -(CH₂)_q-NH- или -СО-(СН₂)_r-, причем q обозначает целое число от 1 до 3 и r обозначает целое число от 0 до 4;

или группа B-N(W)-X-Y обозначает радикал

в котором В обозначает то же, что в общей формуле (I), t обозначает целое число от 0 до 1, s обозначает целое число от 0 до 1, R¹⁷ и R¹⁸ обозначают радикалы, выбранные независимо из атома водорода и метильного радикала,

- если Х обозначает радикал -(CH₂)_q- или -СО-(СН₂)_r-, тогда Y обозначает радикал

в котором R¹⁹ обозначает радикал нитро, NR²³R²², -SO₂-NR²³R²⁴, -NH-SO₂-R²⁵ или -О-Р(О) (OR²⁶) (OR²⁷),

при этом R²¹ и R²² независимо обозначают атом водорода или алкильный радикал,

R²³ и R²⁴ независимо обозначают атом водорода или алкильный радикал, или R²³ и R²⁴ обозначают вместе с атомом азота, с которым они связаны, 5-6-членный гетероцикл, дополнительные звенья которых выбирают независимо из -CHR²⁸-, -NR²⁹-, -О- и -S-, причем R²⁸ и R²⁹ обозначают независимо в каждом случае своего присутствия атом водорода или алкильный радикал,

R²⁵ при этом обозначает алкильный или арильный радикал, возможно замещенный одним из радикалов, выбранных из атома галогена и алкила, галогеналкила, алкоксила или нитрогруппы, что не относится к вероятным атомам азота гетероарильного ядра, возможные заместители которых выбирают из алкильных радикалов,

R²⁶ и R²⁷ при этом независимо выбирают из алкильных радикалов,

и R²⁰ обозначает атом водорода или метильный радикал (и предпочтительно атом водорода);

или Y обозначает радикал формулы (Т)

в котором R²⁰ обозначает атом водорода или метильный радикал (и предпочтительно атом водорода),

если Х обозначает радикал -(CH₂)_q-NH- или если группа B-N(W)-X-Y обозначает радикал

то Y при этом обозначает радикал -SO₂-R³⁰, в котором R³⁰обозначает алкильный радикал или один из арильных или аралкильных радикалов, арильное ядро которых возможно замещено одним или несколькими радикалами, выбранными независимо из атома галогена и алкила, галогеналкила, алкоксила или нитрогруппы, что не относится к вероятным атомам азота гетероарильного ядра, возможные заместители которых выбирают из метильных радикалов.

Наиболее предпочтительными для использования согласно изобретению являются следующие соединения (в случае необходимости в форме солей), описанные в примерах:

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-4-(диметиламино)-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2,7-дигидрокси-N-{2-[4-[(2-тиенил(имино)метил)амино]фенил]этил}-2-нафталинкарбоксамид;

-3-[(3-{[амино(2-тиенил)метилиден]амино}бензил)амино]-N-[4-(диметиламино)фенил]пропанамид;

-4-(4-аминофенил)-N-[4-(4-метил-1-пиперазинил)фенил]бутанамид;

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-4-(диметиламино)-2-({[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2-(диметиламино)-6-метокси-4-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)-1,4-бензолдиол;

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенилацетат;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(-4-нитрофенил)этил]-2-нафтамид;

-N-[4-(диметиламино)бензил]-3, 7-дигидрокси-2-нафтамид;

-4-{2-[(3,7-дигидрокси-2-нафтоил)амино]этил}диэтилфенилфосфат;

-N-{2-[4-(аминосульфонил)фенил]этил}-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(4-аминофенил)этил]-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-(2-{4-[(метилсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид;

-N-(2-{4-[(бутилсульфонил)амино]фенил}этил)-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-метилфенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-(2-{4-[(1-нафтилсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-{2-[4-({[2-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-N-(2-{4-[(бензилсульфонил)амино]фенил}этил)-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-{2-[4-({[3-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-нитрофенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-{2-[4-({[4-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-(2-{4-[(тиен-2-илсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-метоксифенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(1-метил-1Н-имидазол-4-ил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-N-[2-(4-{[(4-фторфенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-{3-[(4-метил-1-пиперидинил)сульфонил]бензил}-2-нафтамид;

-5-(4-{[(1Е)амино(2-тиенил)метилиден]амино}фенил)-N-[2-(диметиламино)фенил]пентанамид;

-3((4-[(4-метилфенил)сульфонил]пиперазин-1-ил}карбонил)нафталин-2,6-диол;

-3{[4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил]карбонил}нафталин-2,6-диол;

-3-{[4-(бутилсульфонил)пиперазин-1-ил]карбонил}нафталин-2,6-диол;

или фармацевтически приемлемые соли указанных соединений.

Следующие соединения являются еще более предпочтительными для использования согласно изобретению:

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-((метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-4-(диметиламино)-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2-(диметиламино)-6-метокси-4-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)-1,4-бензолдиол;

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенилацетат;

-4-{2-[(3, 7-дигидрокси-2-нафтоил)амино]этил}диэтилфенилфосфат;

-N-{2-[4-(аминосульфонил)фенил]этил}-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-(2-{4-[(метилсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид;

-N-(2-{4-[(бутилсульфонил)амино]фенил}этил)-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-метилфенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-{2-[4-({[3-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-N-[2-(4-{[(4-фторфенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-{3-[(4-метил-1-пиперидинил)сульфонил]бензил}-2-нафтамид;

-3({4-[(4-метилфенил)сульфонил]пиперазин-1-ил}карбонил)нафталин-2,6-диол;

или фармацевтически приемлемые соли указанных соединений.

Кроме того, 5-(4-{[(1Е)амино(2-тиенил)метилиден]амино}фенил)-N-[2-диметиламино)фенил]пентанамид и его фармацевтически приемлемые соли также являются предпочтительными для использования согласно изобретению.

Наиболее предпочтительными для использования согласно изобретению являются следующие соединения:

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-((метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-4-(диметиламино)-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)-1,4-бензолдиол;

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенилацетат;

-3,7-дигидрокси-N-{2-[4-({[3-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-{3-[(4-метил-1-пиперидинил)сульфонил]бензил}-2-нафтамид;

или фармацевтически приемлемые соли указанных соединений.

Предпочтительно соединения общей формулы (I) используют для получения лекарственных средств, предназначенных для лечения заболевания, выбранного из следующих заболеваний: пролиферативные опухолевые заболевания и, в частности, рак, пролиферативные неопухолевые заболевания, паразитарные заболевания, вирусные инфекции, спонтанное облысение, облысение, вызванное экзогенными продуктами, и облысение, вызванное облучением.

Однако предпочтительно соединения общей формулы (I), используемые для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения пролиферативных заболеваний, паразитарных заболеваний и вирусных инфекций, являются такими, что радикал Y не обозначает радикал формулы (Т). Соединения общей формулы (I), в которых радикал Y обозначает радикал формулы (Т), предпочтительно применяются для лечения спонтанного облысения, облысения, вызванного экзогенными продуктами, и облысения, вызванного облучением.

В особенности соединения общей формулы (I) могут быть использованы для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения рака, и, в частности, рака груди, лимфом, рака шеи и головы, рака легких, рака ободочной кишки, рака предстательной железы и рака поджелудочной железы.

В соответствии с особым вариантом изобретения соединения общей формулы (I), охарактеризованные выше, могут быть использованы для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения спонтанного облысения, облысения, вызванного экзогенными продуктами, и облысения, вызванного облучением.

Настоящее изобретение касается также соединений общей формулы (II) в качестве лекарственных средств

в которой

А обозначает радикал (А1),

в котором две из групп R¹, R², R³, R⁴ и R⁵ обозначают атомы водорода, а три другие независимо выбирают из атома водорода, атома галогена и алкила, гидроксила, алкоксила, алкилкарбонилокси, алкилтио или HR⁶R⁷, при условии, что:

- или R¹ и один из R² и R⁴ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и HR⁶R⁷;

- или R² и один из R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и HR⁶R⁷;

- или R⁴ и один из R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и HR⁶R⁷;

- или один из R¹, R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и HR⁶R⁷; и остаток B-N(W)-X-Y связан с радикалом А через атом азота;

причем R⁶ и R⁷ обозначают независимо в каждом случае их присутствия атом водорода или алкильный радикал, или R⁶ и R⁷образуют вместе с атомом азота 4-7-членный гетероцикл, содержащий 1-2 гетероатома, причем звенья, необходимые для образования гетероцикла, выбирают независимо из радикалов -CR⁸R⁹-, -О-, -S- и -NR¹⁰-, при этом R⁸ и R⁹ обозначают независимо в каждом случае их присутствия атом водорода или алкил, алкоксил, бензилоксикарбониламино или диалкиламино, и R¹⁰независимо обозначает в каждом случае своего присутствия атом водорода или алкильный радикал,

или А обозначает радикал (А2)

в котором:

- или R¹¹ и один из R¹³, R¹⁴ и R¹⁵ обозначают гидроксил, тогда как другие радикалы, выбранные из R¹³, R¹⁴ и R¹⁵, а также R¹⁶обозначают атомы водорода,

- или R¹² и R¹⁶ обозначают гидроксил, тогда как R¹¹, R¹³, R¹⁴ и R¹⁵ обозначают атомы водорода;

В обозначает радикал -СО-, -NH-CO-(СН₂)_n - или -(CH₂)_p-, причем n обозначает целое число от 0 до 3 и р обозначает целое число от 0 до 1;

W обозначает атом водорода или алкильный радикал;

Х обозначает радикал -(CH₂)_q-, -(CH₂)_q-NH- или -СО-(СН₂)_r-, причем q обозначает целое число от 1 до 6 и r обозначает целое число от 0 до 6;

или группа B-N(W)-X-Y обозначает радикал

в котором В то же, что было охарактеризовано выше, t обозначает целое число от 0 до 2, s обозначает целое число от 0 до 1 и R¹⁷ и R¹⁸ обозначают радикалы, выбранные независимо из атома водорода и алкильного радикала;

и:

- если Х обозначает радикал -(CH₂)_q- или -СО-(СН₂)_r-, тогда Y обозначает радикал

в котором R¹⁹ обозначает атом водорода, атом галогена, радикал нитро, алкил, алкилтио, NR²¹R²², -SO₂-NR²³R²⁴, -NH-SO₂-R²⁵или -О-Р(О) (OR²⁶) (OR²⁷),

причем R²¹ и R²² независимо обозначают атом водорода или алкильный радикал,

R²³ и R²⁴ независимо обозначают атом водорода или алкильный радикал, или R²³ и R²⁴ обозначают вместе с атомом азота, с которым они связаны, 5-7-членный гетероцикл, дополнительные звенья которого выбирают независимо из -CHR²⁸-, -NR²⁹-, -О- и -S-, причем R²⁸ и R²⁹ обозначают независимо в каждом случае своего присутствия атом водорода или алкильный радикал,

R²⁵ при этом обозначает алкил, галогеналкил или один из радикалов, выбранный из арила, гетероарила, аралкила или гетероаралкила, арильное или гетероарильное ядро которых возможно замещено одним или несколькими радикалами, выбранными независимо из атома галогена и алкила, галогеналкила, гидроксила, алкоксила или нитрогруппы, что не относится к возможным атомам азота гетероарильного ядра, возможные заместители которых выбирают из алкильных радикалов,

R²⁶ и R²⁷ при этом независимо выбирают из алкильных радикалов,

и R²⁰ обозначает атом водорода, атом галогена или алкил, алкокси или алкилтио,

- если Х обозначает радикал -(CH₂)_q-NH- или если группа B-N(W)-X-Y обозначает радикал

то Y обозначает только радикал -SO₂-R³⁰, в котором R³⁰обозначает алкильный, галогеналкильный радикал или один из радикалов, выбранных из арила, гетероарила, аралкила или гетероаралкила, арильное или гетероарильное ядро которых возможно замещено одним или несколькими радикалами, выбранными независимо из атома галогена и алкила, галогеналкила, гидроксила, алкоксила или нитрогруппы, что не относится к возможным атомам азота гетероарильного ядра, возможные заместители которых выбирают из алкильных радикалов,

при дополнительном условии, что если группа B-N(W)-X-Y обозначает радикал

то В обозначает только радикал -СО- или -(CH₂)-;

или фармацевтически приемлемые соли соединений общей формулы (II).

В частности, изобретение касается следующих соединений общей формулы (II) в качестве лекарственных средств:

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-4-(диметиламино)-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-4-(4-аминофенил)-N-[4-(4-метил-1-пиперазинил)фенил]бутанамид;

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-4-(диметиламино)-2-({[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2-(диметиламино)-6-метокси-4-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)-1,4-бензолдиол;

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенилацетат;

-3, 7-дигидрокси-N-[2-(4-нитрофенил)этил]-2-нафтамид;

-N-[4-(диметиламино)бензил]-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-4-{2-[(3,7-дигидрокси-2-нафтоил)амино]этил}диэтилфенилфосфат;

-N-{2-[4-(аминосульфонил)фенил]этил}-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(4-аминофенил)этил]-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-(2-{4-[(метилсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид;

-N-(2-{4-[(бутилсульфонил)амино]фенил}этил)-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-метилфенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-(2-{4-[(1-нафтилсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-{2-[4-({[2-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-N-(2-{4-[(бензилсульфонил)амино]фенил}этил)-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-{2-[4-({[3-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-нитрофенил)сульфонил]амино}фенил)этил}-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-{2-[4-({[4-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-(2-{4-[(тиен-2-илсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-метоксифенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(1-метил-1Н-имидазол-4-ил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-N-[2-(4-{[(4-фторфенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-{3-[(4-метил-1-пиперидинил)сульфонил]бензил}-2-нафтамид;

-3-({4-[(4-метилфенил)сульфонил]пиперазин-1-ил}карбонил)нафталин-2,6-диол;

-3-{[4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил]карбонил}нафталин-2,6-диол;

-3-{[4-(бутилсульфонил)пиперазин-1-ил]карбонил}нафталин-2,6-диол;

или фармацевтически приемлемые соли указанных соединений.

Кроме того, изобретение касается также в качестве лекарственного средства 5-(4-{[(1Е)-амино(2-тиенил)метилиден]-амино}фенил)-N-[2-(диметиламино)фенил]пентанамида или одной из его фармацевтически приемлемых солей.

Кроме того, изобретение касается фармацевтических композиций, содержащих в качестве активного вещества по меньшей мере одно из соединений общей формулы (II), указанной выше, или фармацевтически приемлемую соль такого соединения и предпочтительно соединение, выбранное из следующих соединений:

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-4-(диметиламино)-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-4-(4-аминофенил)-N-[4-(4-метил-1-пиперазинил)фенил]бутанамид;

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-4-(диметиламино)-2-({[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2-(диметиламино)-6-метокси-4-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)-1,4-бензолдиол;

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенилацетат;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(4-нитрофенил)этил]-2-нафтамид;

-N-[4-(диметиламино)бензил]-3, 7-дигидрокси-2-нафтамид;

-4-{2-[(3,7-дигидрокси-2-нафтоил)амино]этил}диэтилфенилфосфат;

-N-{2-[4-(аминосульфонил)фенил]этил}-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(4-аминофенил)этил]-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-(2-{4-(метилсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид;

-N-(2-{4-[(бутилсульфонил)амино]фенил)этил)-3, 7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-метилфенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-(2-{4-[(1-нафтилсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-{2-[4-({[2-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-N-(2-{4-[(бензилсульфонил)амино]фенил}этил)-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-{2-[4-({[3-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-нитрофенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-{2-(4-({[4-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил]-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-(2-{4-[(тиен-2-илсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-метоксифенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(1-метил-1Н-имидазол-4-ил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-N-[2-(4-{[(4-фторфенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-{3-[(4-метил-1-пиперидинил)сульфонил]бензил}-2-нафтамид;

-3-({4-[(4-метилфенил)сульфонил]пиперазин-1-ил}карбонил)нафталин-2,6-диол;

-3{[4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил]карбонил}нафталин-2,6-диол;

-3-{[4-(бутилсульфонил)пиперазин-1-ил]карбонил}нафталин-2,6-диол;

или фармацевтически приемлемые соли указанных соединений.

В соответствии с вариантом изобретения фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит 5-(4-{[(1Е)-амино(2-тиенил)метилиден]амино}фенил)-N-[2-(диметиламино)фенил]пентанамид или одну из его фармацевтически приемлемых солей.

Более предпочтительно фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит в качестве активного вещества соединение, выбранное из следующих соединений:

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({метил[2-(4-

нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-4-(диметиламино)-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2-(диметиламино)-6-метокси-4-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)-1,4-бензолдиол;

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенилацетат;

-4-{2-[(3,7-дигидрокси-2-нафтоил)амино]этил}диэтилфенилфосфат;

-N-{2-[4-(аминосульфонил)фенил]этил}-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-(2-{4-[(метилсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид;

-N-(2-{4-[(бутилсульфонил)амино]фенил}этил)-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-метилфенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-{2-[4-({[3-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-N-[2-(4-{[(4-фторфенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-{3-[(4-метил-1-пиперидинил)сульфонил]бензил}-2-нафтамид;

-3-({4-[(4-метилфенил)сульфонил]пиперазин-1-ил}карбонил)нафталин-2,6-диол;

или фармацевтически приемлемую соль указанных соединений.

Еще более предпочтительно фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит в качестве активного вещества соединение, выбранное из следующих соединений:

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-4-(диметиламино)-2-((метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)-1,4-бензолдиол;

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-((метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенилацетат;

-3, 7-дигидрокси-N-{2-[4-({[3-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-{3-[(4-метил-1-пиперидинил)сульфонил]бензил}-2-нафтамид;

или фармацевтически приемлемую соль одного из них.

Изобретение касается, кроме того, применения соединения формулы (II), охарактеризованной выше, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения заболевания, выбранного из следующих заболеваний: пролиферативные опухолевые заболевания и, в частности, рак, пролиферативные неопухолевые заболевания, паразитарные заболевания, вирусные инфекции, нейродегенеративные заболевания, миопатии, спонтанное облысение, облысение, вызванное экзогенными продуктами, и облысение, вызванное облучением.

Предпочтительно соединения общей формулы (II) используются для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения заболевания, выбранного из следующих заболеваний: пролиферативные опухолевые заболевания, и, в частности, рак, пролиферативные неопухолевые заболевания, паразитарные заболевания, вирусные инфекции, спонтанное облысение, облысение, вызванное экзогенными продуктами, и облысение, вызванное облучением.

В особенности соединения общей формулы (II) могут быть использованы для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения рака, и, в частности, рака груди, лимфом, рака шеи и головы, рака легких, рака ободочной кишки, рака предстательной железы и рака поджелудочной железы.

Изобретение касается также соединений общей формулы (III), в качестве новых промышленных продуктов:

в которой

А обозначает радикал (А1)

в котором две из групп R¹, R², R³, R⁴ и R⁵ обозначают атомы водорода, а три другие независимо выбирают из атома водорода, атома галогена и алкила, гидроксила, алкоксила, алкилкарбонилокси, алкилтио или HR⁶R⁷, при условии, что:

- или R¹ и один из R² и R⁴ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и HR⁶R⁷;

- или R² и один из R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и HR⁶R⁷;

- или R⁴ и один из R³ и R⁵ независимо выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и HR⁶R⁷;

или один из R¹, R³ и R⁵ выбирают из гидроксила, алкилкарбонилокси и HR⁶R⁷, и остаток B-N(W)-X-Y связан с радикалом А через атом азота;

причем R⁶ и R⁷ обозначают независимо в каждом случае их присутствия атом водорода или алкильный радикал, или R⁶ и R⁷образуют вместе с атомом азота 4-7-членный гетероцикл, содержащий от 1 до 2 гетероатомов, причем звенья, необходимые для образования гетероцикла, выбирают независимо из радикалов -CR⁸R⁹-, -О-, -S- и -NR¹⁰-, при этом R⁸ и R⁹ обозначают независимо в каждом случае их присутствия атом водорода или алкил, алкокси, бензилоксикарбониламино или диалкиламино, и R¹⁰ независимо обозначает в каждом случае своего присутствия атом водорода или алкильный радикал,

или А обозначает радикал (А2)

в котором:

- или R¹¹ и один из R¹³, R¹⁴ и R¹⁵ обозначают гидроксил, тогда как другие радикалы, выбранные из R¹³, R¹⁴ и R¹⁵, а также R¹⁶обозначают атомы водорода,

- или R¹² и R¹⁶ обозначают гидроксил, тогда как R¹¹, R¹³, R¹⁴ и R¹⁵ обозначают атомы водорода;

В обозначает радикал -СО-, -NH-CO-(CH₂)_n- или -(СН₂)_р-, причем n обозначает целое число от 0 до 3 и р обозначает целое число от 0 до 1;

W обозначает атом водорода или алкильный радикал;

Х обозначает радикал -(СН₂)_q-, -(CH₂)_q-NH- или -СО-(СН₂)_r-, причем q обозначает целое число от 1 до 6 и r обозначает целое число от 0 до 6;

или группа B-N(W)-X-Y обозначает радикал

в котором В то же, что было охарактеризовано выше, t обозначает целое число от 0 до 2, s обозначает целое число от 0 до 1 и R¹⁷ и R¹⁸ обозначают радикалы, независимо выбранные из атома водорода и алкильного радикала;

и:

- если Х обозначает радикал -(CH₂)_q- или -СО-(СН₂)_r-, тогда Y обозначает радикал

в котором R¹⁹ обозначает радикал -SO₂-NR²³R²⁴, -NH-SO₂-R²⁵ или -О-Р(О) (OR²⁶) (OR²⁷),

причем R²³ и R²⁴ независимо обозначают атом водорода или алкильный радикал, или R²³ и R²⁴ обозначают вместе с атомом азота, с которым они связаны, 5-7-членный гетероцикл, дополнительные звенья которого выбирают независимо из -CHR²⁸-, -NR²⁹-, -О- и -S-, при этом R²⁸ и R²⁹ обозначают независимо в каждом случае своего присутствия атом водорода или алкильный радикал,

R²⁵ при этом обозначает алкил, галогеналкил или один из радикалов, выбранных из арила, гетероарила, аралкила или гетероаралкила, арильное или гетероарильное ядро которых возможно замещено одним или несколькими радикалами, независимо выбранными из атома галогена и алкила, галогеналкила, гидроксила, алкоксила или нитрогруппы, что не относится к возможным атомам азота гетероарильного ядра, возможные заместители которых выбирают из алкильных радикалов,

R²⁶ и R²⁷ при этом независимо выбирают из алкильных радикалов,

и R²⁰ обозначает атом водорода, атом галогена или алкил, алкокси или алкилтио,

- если Х обозначает радикал -(CH₂)_q-NH- или если группа B-N(W)-X-Y обозначает радикал

тогда Y обозначает только радикал -SO₂-R³⁰, в котором R³⁰обозначает алкильный, галогеналкильный радикал или один из радикалов, выбранных из арила, гетероарила, аралкила или гетероаралкила, арильное или гетероарильное ядро которых возможно замещено одним или несколькими радикалами, независимо выбранными из атома галогена и алкила, галогеналкила, гидроксила, алкоксила или нитрогруппы, что не относится к возможным атомам азота гетероарильного ядра, возможные заместители которых выбирают из алкильных радикалов,

при дополнительном условии, что если группа B-N(W)-X-Y обозначает радикал

то В обозначает только радикал -СО- или -(СН₂)-;

или солей соединений общей формулы (III).

В частности, изобретение касается следующих соединений общей формулы (III) в качестве новых продуктов:

-4-{2-[(3, 7-дигидрокси-2-нафтоил)амино]этил}диэтилфенилфосфат;

-N-{2-[4-(аминосульфонил)фенил]этил}-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-(2-{4-[(метилсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид;

-N-(2-{4-[(бутилсульфонил)амино]фенил}этил)-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-метилфенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-(2-{4-[(1-нафтилсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-{2-[4-({[2-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-N-(2-{4-[(бензилсульфонил)амино]фенил}этил)-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-{2-[4-({[3-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-нитрофенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-{2-[4-({[4-(трифторметил)фенил]сульфонил}амино)фенил]этил}-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-(2-{4-[(тиен-2-илсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид;

-3, 7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-метоксифенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(1-метил-1Н-имидазол-4-ил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид;

-N-[2-(4-{[(4-фторфенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-3,7-дигидрокси-2-нафтамид;

-3,7-дигидрокси-N-{3-[(4-метил-1-пиперидинил)сульфонил]бензил}-2-нафтамид;

-3({4-[(4-метилфенил)сульфонил]пиперазин-1-ил}карбонил)нафталин-2,6-диол;

-3{[4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил]карбонил}нафталин-2,6-диол;

-3-{[4-(бутилсульфонил)пиперазин-1-ил]карбонил}нафталин-2,6-диол;

или солей указанных соединений.

Изобретение касается также следующих соединений общей формулы (I) в качестве новых продуктов:

-4-(диметиламино)-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-4-(4-аминофенил)-N-[4-(4-метил-1-пиперазинил)фенил]бутанамид;

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-4-(диметиламино)-2-({[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2-(диметиламино)-6-метокси-4-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол;

-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)-1,4-бензолдиол;

-4-(диметиламино)-2-метокси-6-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенилацетат;

-3,7-дигидрокси-N-[2-(4-нитрофенил)этил]-2-нафтамид;

-N-[4(диметиламино)бензил]-3, 7-дигидрокси-2-нафтамид;

и солей указанных соединений.

Изобретение касается также 5-(4-{[(1Е)-амино(2-тиенил)метилиден]амино}фенил)-N-[2-(диметиламино)фенил]пентанамида в качестве нового промышленного продукта общей формулы (I).

Изобретение касается также фармацевтических композиций, содержащих в качестве активного вещества соединение общей формулы (III) или фармацевтически приемлемую соль последнего.

Его предметом также является применение соединений формулы (III) или фармацевтически приемлемых солей последних для получения лекарственных средств, предназначенных для лечения заболевания, выбранного из следующих заболеваний: пролиферативные опухолевые заболевания и, в частности, рак, пролиферативные неопухолевые заболевания, паразитарные заболевания, вирусные инфекции, нейродегенеративные заболевания, миопатии, спонтанное облысение, облысение, вызванное экзогенными продуктами, и облысение, вызванное облучением.

Предпочтительно соединения общей формулы (III) используются для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения заболевания, выбранного из следующих заболеваний: пролиферативные опухолевые заболевания, и, в частности, рак, пролиферативные неопухолевые заболевания, паразитарные заболевания, вирусные инфекции, спонтанное облысение, облысение, вызванное экзогенными продуктами, и облысение, вызванное облучением.

В особенности соединения общей формулы (III) могут быть использованы для получения лекарственного препарата, предназначенного для лечения рака, и, в частности, рака груди, лимфом, рака шеи и головы, рака легких, рака ободочной кишки, рака предстательной железы и рака поджелудочной железы.

В общем, те же предпочтения, что указаны в отношении соединений общей формулы (I), являются по аналогии применимыми к соединениям общих формул (II) и (III).

Изобретение касается также способа получения соединения общей формулы (I).3

в которой А, В, W, X, R²⁰ и R²⁵ обозначают то же, что и в общей формуле (I),

причем указанный способ отличается тем, что вводят во взаимодействие соединение общей формулы (I).2

и соединение общей формулы R²⁵-SO₂Cl в апротонном растворителе (таком как тетрагидрофуран, дихлорметан или диметилформамид) и в присутствии основания (такого как пиридин, триэтиламин или основание на носителе, например, морфолинометилполистирольная смола; при этом в случае необходимости основание может быть использовано в качестве реакционного растворителя).

Изобретение также касается способа получения соединения общей формулы (I).7

в которой А, В, W, q и R³⁰ обозначают то же, что и в общей формуле (I),

причем указанный способ отличается тем, что вводят во взаимодействие соединение общей формулы (XXVII)

и соединение общей формулы

в апротонном растворителе (таком как тетрагидрофуран, дихлорметан или диметилформамид) и в присутствии основания (такого как пиридин, триэтиламин или основание на носителе, например морфолинометилполистирольная смола; при этом в случае необходимости основание может быть использовано в качестве реакционного растворителя).

Изобретение также касается способа получения соединения общей формулы (I).8

в которой А, В, R¹⁷, R¹⁸, s, t и R³⁰ обозначают то же, что и в общей формуле (I),

причем указанный способ отличается тем, что вводят во взаимодействие соединение общей формулы (XXVII)bis

и соединение общей формулы

в апротонном растворителе (таком как тетрагидрофуран, дихлорметан или диметилформамид) и в присутствии основания (такого как пиридин, триэтиламин или основание на носителе, например морфолинометилполистирольная смола; при этом в случае необходимости основание может быть использовано в качестве реакционного растворителя).

Изобретение также касается способа получения соединения общей формулы (I).9

в которой А, W, X, R²⁰, R²⁶ и R²⁷ обозначают то же, что и в общей формуле (I), и В обозначает радикал -СО- или -СН₂-,

причем указанный способ отличается тем, что вводят во взаимодействие амин общей формулы (IV)_p

и:

- или, если В обозначает радикал -СО-, - кислоту общей формулы

в апротонном растворителе (таком как тетрагидрофуран, дихлорметан или диметилформамид) и в присутствии пептидного связующего (такого как дициклогексилкарбодиимид (DCC), 1,1'-карбонилдиимидазол (CDI) или 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид)гидрохлорид;

- или, если В обозначает радикал -СН₂-, - альдегид общей формулы

в спиртовом растворителе (например, метаноле) и в присутствии восстановителя (такого, как NaBH₄, NaBH₃CN или смола, содержащая ионы боргидрида).

Фармацевтическая композиция может быть в форме твердого вещества, например, порошка, гранул, таблеток, желатиновых капсул, липосом или суппозиториев. В качестве соответствующих твердых носителей можно использовать, например, фосфат кальция, стеарат магния, тальк, сахара, лактозу, декстрин, крахмал, желатин, целлюлозу, метилцеллюлозу, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидин и воск.

Фармацевтические композиции, содержащие соединение согласно изобретению, могут также быть в жидкой форме, например, в виде растворов, эмульсий, суспензий или сиропов. В качестве соответствующих жидких носителей можно использовать, например, воду, органические растворители, такие как глицерин или гликоли, а также их смеси в различных пропорциях с водой.

Лекарственное средство согласно изобретению может вводиться топически, перорально, парентерально, в виде внутримышечных инъекций и т.д.

Возможная доза приема препарата согласно изобретению может составлять от 0,1 мг до 10 г в зависимости от типа используемого активного вещества.

Согласно изобретению соединения общей формулы (I) можно получить, например, способами, описанными ниже.

ПОЛУЧЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ СОГЛАСНО ИЗОБРЕТЕНИЮ

Способы получения, описанные ниже, носят иллюстративный характер, и специалист может вносить в них те изменения, которые считает целесообразными как в отношении используемых реактивов, так и условий и методов осуществления реакций.

А) Случай, когда Y обозначает замещенный фенильный радикал

1. Случай, когда Y обозначает радикал типа нитрофенила:

Соединения общей формулы (I), в которых Y обозначает радикал типа нитрофенила (далее в тексте называется "соединения общей подформулы (I).1'') можно легко получить методами, описанными в заявке на патент РСТ WO 00/17190, или аналогичными им.

2. Случай, когда Y обозначает радикал типа аминофенила, диалкиламинофенила или алкилсульфониламино или радикал формулы (Т):

В случае, когда Y обозначает радикал типа аминофенила, диалкиламинофенила или алкилсульфониламино или радикал формулы (Т), соединения общей формулы (I) можно получить из производных нитрофенила общей подформулы (I).1 методами, изображенными ниже на схеме 1.

В случае, если ни X, ни В не обозначают -СН₂-, производные типа аминофенила общей подформулы (I).2, в которой А, В, W, Х и R²⁰ те же, что были охарактеризованы выше, можно легко получить по схеме 1 путем восстановления соединений общей формулы (I).1, например, путем воздействия водорода в присутствии катализатора типа палладия на угле в таком растворителе как, например, метанол, этанол, дихлорметан или тетрагидрофуран (THF). В особом случае, когда, по меньшей мере, один из Х или В обозначает -СН₂-, восстановление нитрогруппы можно осуществить, например, путем нагревания продукта в соответствующем растворителе, например, этилацетате с небольшим количеством этанола в присутствии SnCl₂(J.Heterocyclic Chem. (1987), 24, 927-930, Tetrahedron Letters (1984), 25(8), 839-842) или в присутствии SnCl₂/Zn (Synthesis. (1996), 9, 1076-1078), с помощью NaBH₄-BiCl₃ (Synth. Comm. (1995), 25(23), 3799-3803) в растворителе, таком как этанол, или с использованием Ni Raney с добавлением гидразингидрата (Monatshefte fur Chemie, (1995), 126, 725-732), или также с помощью индия в смеси этанола и хлорида аммония с обратным холодильником (Synlett (1988), 9, 1028).

Соединения общей формулы (I), в которых Y обозначает алкилсульфониламинофенил (т.е. соединения общей подформулы (I).3) можно легко получить из соединений общей формулы (I).2, схема 1, в соответствии с обычными методами синтеза сульфонамидов путем воздействия сульфонилгалогенида на аминное производное в апротонном растворителе, таком как THF, дихлорметан или диметилформамид (DMF) в присутствии такого основания, как пиридин, триэтиламин или основания на носителе, такого как морфолинометилполистирольная смола, или используя пиридин в качестве растворителя.

Соединения общей формулы (I), в которых Y обозначает радикал (Т) (т.е. соединения общей подформулы (I).4) можно легко получить из соединений общей формулы (I).2, схема 1, методами, описанными в заявке на патент РСТ WO 00/17190 или аналогичными им.

Наконец, производные типа алкиламинофенила или диалкиламинофенила (соответственно соединения общих подформул (I).5 и (I).6, схема 1) можно получить путем моно- или диалкилирования производных аминофенила общей подформулы (I).2 обычными методами, известными специалисту. Моноалкилирование осуществляют путем восстановительного аминирования с помощью альдегида или путем нуклеофильного замещения посредством взаимодействия с галогеноалкильным эквивалентом R²¹ -Hal в целях получения моноалкилированного производного общей подформулы (I).5. В случае необходимости можно затем осуществить второе алкилирование с помощью галогеналкила R²²-Hal в целях получения диалкилированного производного общей подформулы (I).6.

В особом случае, когда R²¹=R²²=-СН₃ или когда ни X, ни В не обозначает -CH₂ -, нитрофенильное производное общей подформулы (I).2 можно обработать соответствующими количествами параформальдегида в атмосфере водорода в растворителе, например этаноле, и в присутствии катализатора типа палладия на угле для получения диметиламинофенильного производного общей подформулы (I).6bis (см. ниже схему 2).

3. Другие случаи, когда Y обозначает радикал типа замещенного фенила:

В других случаях, которые еще не упоминали, когда Y обозначает радикал типа замещенного фенила, соединения общей формулы (I) получают обычным способом, известным специалисту.

Если соединения общей формулы (I) содержат карбоксамидную группу (В=-СО-), их можно, например, получить методами пептидного синтеза, показанными ниже на схеме 3.

Карбоксамиды общей формулы (I), схема 3, в которых В обозначает -СО- и A, W, X, R¹⁹ и R²⁰, те же, что были охарактеризованы выше, получают путем конденсации кислот общей формулы (V) в присутствии аминов общей формулы (IV) в обычных условиях пептидного синтеза (М.Bodanszky The Practice of Peptide Synthesis, 145 (Springer-Verlag, 1984)), например, в THF, дихлорметане или DMF в присутствии связующего, такого как дициклогексилкарбодиимид (DCC), 1,1'-карбонилдиимидазол (CDI) (J.Med.Chem. (1992), 35 (23), 4464-4472) или 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлорид (EDC или WSCI) (John Jones, The chemical synthesis of peptides, 54 (Clarendon Press, Oxford, 1991)).

Если соединения общей формулы (I) являются такими, что В=-СН₂-, их, например, можно получить методами восстановительного аминирования, изображенными ниже на схеме 4.

Амины общей формулы (I), схема 4, в которых В обозначает -СН₂- и А, W, X, R₁₉ и R₂₀ те же, что были охарактеризованы выше, получают путем взаимодействия альдегидов общей формулы (VI) с аминами общей формулы (IV) в восстановительной среде. Взаимодействие происходит в спиртовом растворителе, например метаноле, до получения имина, который затем преобразовывают в амин с помощью восстановителя, такого как NaBH₄ или NaBH₃CN или борогидридная смола Amberlite^® IRA-400 (Aldrich; 2, 5 ммоль ВН₄^-/г смолы).

Если соединения общей формулы (I) такие, что B=-NH-CO-(CH₂)_n-, то их можно получить методами синтеза, изображенными ниже на схеме 5.

Соединения общей формулы (I), схема 5, в которых В обозначает -NH-CO-(СН₂)_n- и A, W, X, R¹⁹, R²⁰ и n, те же, что были охарактеризованы выше, получают путем взаимодействия аминов общей формулы (X) с карбоновыми кислотами общей формулы (XI) (в которой X'' является таким, что X''-СО=Х) методами пептидного синтеза, описанными выше, или путем взаимодействия тех же аминов общей формулы (X) с альдегидами общей формулы (XII) (в которой X' является таким, что X'-CH₂=X) в условиях восстановительного аминирования, описанных выше, или путем взаимодействия тех же аминов общей формулы (X) с галоидпроизводными общей формулы (XIII) обычными методами, известными специалисту. Амины общей формулы (X) получают путем конденсации аминов общей формулы (VII) в присутствии кислот общей формулы (VIII), в которых A, W и n те же, что были охарактеризованы выше, и Gp обозначает защитную группу аминной функции, такую, например, как карбаматная группа, в обычных условиях пептидного синтеза, которые описаны выше. С аминной функции затем защита снимается (снятие защиты происходит в кислотной среде в случае, если Gp обозначает карбаматную группу, такую, например, как трет-бутоксикарбонильная группа).

Если соединения общей формулы (I) такие, что В=-(СН₂)_р-, р=0 (иными словами В обозначает связь) и Х=-СО-(СН₂ )_r-, их можно, например, получить методами пептидного синтеза, изображенными ниже на схеме 6.

Карбоксамиды общей формулы (I), схема 6, в которых В обозначает -(СН₂)_р-, р=0, Х обозначает -СО-(СН₂)_r- и А, W, R¹⁹, R²⁰и r те, же, что были охарактеризованы выше, получают путем конденсации кислот общей формулы (XV) в присутствии аминов общей формулы (XIV) в обычных условиях пептидного синтеза, описанных выше.

Если соединения общей формулы (I) такие, что В=-(СН₂)_р-, р=0 (иными словами В обозначает связь) и X=-(CH₂)_q-, их можно, например, получить путем пептидного синтеза, как изображено ниже на схеме 7.

Соединения общей формулы (I), схема 7, в которых В обозначает -(CH₂)_p-, Р=0, Х обозначает -(CH₂)_q- и A, W, R¹⁹, R²⁰ и q те же, что были охарактеризованы выше, получают путем взаимодействия аминов общей формулы (XIV) с альдегидами общей формулы (XVI) в условия восстановительного аминирования, описанных выше, или путем взаимодействия тех же аминов общей формулы (XIV) с галоидпроизводными общей формулы (XVII) обычными известными специалисту методами.

4.Получение аминов общей формулы (IV):

Амины общей формулы (IV), в которых Х обозначает -(CH₂)_q-, W обозначает Н и R¹⁹ обозначает радикал -SO₂-NR²³R²⁴ (далее называемые аминами общей формулы (IV)_s), можно, в частности, получить в 6 стадий методами, известными из публикаций, и, конкретно, методом, изображенным ниже на схеме 8.

Спирт общей формулы (XXI), схема 8, например, получают в 3 стадии из кислоты общей формулы (XVIII) после перехода к сульфонамиду путем воздействия первичного или вторичного амина на сульфонилхлорид в условиях, описанных выше в отношении синтеза сульфонамидов, с последующей этерификацией, например, путем обработки с помощью триметилсилилдиазометана в спиртовом растворителе, например метаноле, и восстановлением группы сложного эфира с помощью восстановителя, например LiBH₄, в апротонном полярном растворителе, таком, например, как THF. Спиртовую функцию затем галогенируют с помощью CBr₄ в присутствии трифенилфосфина с последующим преобразованием во фталимид путем обработки с помощью фталимидата калия в полярном растворителе, например ацетонитриле. После отделения фталимида путем ввода гидразингидрата в спиртовой растворитель, например этанол, получают амин общей формулы (IV).

Амины общей формулы (IV), в которых R¹⁹ обозначает группу -О-Р(О) (OR²⁶) (OR²⁷) (далее называются аминами общей формулы (IV)_р), можно получить в 2 стадии методами, известными из публикаций, и, конкретно, если Х обозначает радикал -(CH₂)_q-, методом, изображенным ниже на схеме 9.

В соответствии с данным методом фенол общей формулы (XXIV) замещен, схема 9, с использованием производного типа фосфоната, с частности цианофосфоната общей формулы (XXV) в присутствии такого основания, как, например, триэтиламин, в таком растворителе, как дихлорметан. Защитную группу аминной функции (Gp) соединения общей формулы (XXVI) затем отделяют в соответствующих условиях (например, в кислотной среде в случае, если Gp является группой типа карбамата, например, трет-бутоксикарбонильной группой) и получают амин общей формулы (IV)_р.

В отношении других аминов общей формулы (IV) специалист может, например, обратиться к заявке на патент РСТ WO 00/17190.

5. Получение некоторых исходных реагентов:

Некоторые исходные реагенты не являются промышленными продуктами и их получают методами, описанными в литературе. Например, дигидрокси-2-нафтойные кислоты (А = нафтильное ядро) можно получить методами, описанными Marsilje et coll., Bioorg. Med. Chem. Lett (2000), 10, 477-481.

Исходные реагенты, в которых А обозначает фенил, замещенный алкилкарбонилоксильной группой, получают из соответствующих фенолов под действием хлорида соответствующей кислоты в присутствии такого основания, как, например, диизопропилэтиламин в растворителе, например дихлорметане.

Получение некоторых исходных реагентов иногда требует осуществления реакций защиты и снятия защиты, хорошо известных специалисту, который, если потребуется, может обратиться к следующей публикации: T.W.Greene et P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Second edition (Wiley-Interscience, 1991).

В) Случай, когда Y обозначает радикал -SO₂R³⁰:

Соединения общей формулы (I), в которых Y обозначает радикал -SO₂-R³⁰ (т.е. соединения общей подформулы (I).7, в которой Х обозначает радикал -(CH₂)_q-NH-, охарактеризованный выше, и соединения общей подформулы (I).8, в которой группа -N(W)-X-обозначает возможно замещенное пиперазинильное ядро) можно легко получить из аминов общих формул (XXVII) и (XXVII)bis (в которых А, В, W, R¹⁷, R¹⁸, q, s и t означают то же, что в общей формуле (I)) с применением способов синтеза сульфонамидов, описанных выше (ср. ниже схему 10).

Получение аминов общей формулы (XXVII) и (XXVII)bis

Если В обозначает -СО- или -(СН₂)_р-, где р=1, амины общей формулы (XXVII) и (XXVII)bis можно получить, например, способами, изображенными ниже на схеме 11.

Амины общей формулы (XXVII) или (XXVII)bis, в которых А, В, W, R¹⁷, R¹⁸, q, s и t те же, что охарактеризованы выше, получают обычными методами путем конденсации карбоновых кислот общей формулы (V) и альдегидов общей формулы (VI) на линейных диаминах общей формулы (XXIX) или циклических диаминах общей формулы (XXIX)bis, схема 11, методами, аналогичными описанным выше, в которых защитная группа Gp амина может являться карбаматной группой, например, трет-бутоксикарбонильной группой. Отделение защитной группы осуществляют известными способами, например, отделением в хлористоводородной кислоте в тех случаях, если присутствует трет-бутоксикарбонильная группа.

Если амины общей формулы (XXVII) являются такими, что B=(CH₂)_p и р=0 (т.е. В обозначает связь), их можно получить, например, методами синтеза, изображенными ниже на схеме 12.

Амины общей формулы (XXVII), схема 12, в которых В обозначает -(СН₂)_p- и р=0, Х обозначает -(CH₂)_q, A, W и q те же, что охарактеризованы выше, и Gp является защитной группой для аминной функции (например, защитной группой типа карбамата, такой как трет-бутоксикарбонильная группа), получают путем взаимодействия аминов общей формулы (XIV) с альдегидами общей формулы (XXXI) в условиях восстановительного аминирования, описанных выше, или путем взаимодействия тех же аминов общей формулы (XIV) с галогенированными производными общей формулы (XXXII) обычными методами, известными специалисту, с последующей стадией снятия защиты с промежуточного продукта общей формулы (XXXIII), осуществляемой в условиях, известных специалисту.

При отсутствии других определений все технические и научные термины, используемые здесь, обозначают то же, что обычно понимает средний специалист в области, к которой относится настоящее изобретение. Все публикации, заявки на патент, все патенты и любые другие ссылки, упомянутые здесь, включены в текст для справки.

Следующие примеры представлены в качестве иллюстрации и не должны ни в коем случае рассматриваться как ограничивающие объем изобретения.

Примеры

Характеристика некоторых соединений по их времени удерживания t.r.

Если для соединений, упомянутых в примерах, указано время удерживания r.t., то его измеряли путем высокоточной жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии (HPLC-MS) с использованием в соответствии с указаниями следующих условий элюирования:

- условие I: переход от смеси ацетонитрил-вода-трифторуксусная кислота 0-1000-0,2(А) к смеси ацетонитрил-вода-трифторуксусная кислота 850-150-0,2(B) через линейный градиент в течение 6 мин с последующим элюированием чистой смесью В в течение 2 мин.

- условие II: переход от смеси ацетонитрил-вода-трифторуксусная кислота 100-900-0,2(А) к смеси ацетонитрил-вода-трифторуксусная кислота 850-150-0,2(B) через линейный градиент в течение 6 мин с последующим элюированием чистой смесью В в течение 2 мин.

- условие III: переход от смеси ацетонитрил-вода-трифторуксусная кислота 50-950-0,2(А) к смеси ацетонитрил-вода-трифторуксусная кислота 900-100-0,2(В) через линейный градиент в течение 8,5 мин с последующим элюированием чистой смесью В в течение 2 мин.

- условие IV: переход от смеси ацетонитрил-вода-трифторуксусная кислота 50-950-0,2(А) к смеси ацетонитрил-вода-трифторуксусная кислота 900-50-0,2(В) через линейный градиент в течение 8,5 мин с последующим элюированием чистой смесью В в течение 10,5 мин.

Пример 1: 4-(диметиламино)-2-метокси-6-({метил [2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол

Это соединение является промежуточным продуктом синтеза, используемым при получении соединения из примера 80 заявки WO 00/17190, N'-(4-{2-[[5-(диметиламино)-2-гидрокси-3-метоксибензил](метил)амино]этил}-фенил)-2-тиофенекарбоксимидамида, способом, описанным в этом документе.

Точка плавления: 91-93°С

МН+=360,30; t.r.=3,40 мин (условия элюирования I).

Пример 2: 4-(диметиламино)-2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенол

0,5 г (3 ммоль) 5-(диметиламино)-2-гидроксибензальдегида [Bull. Chem. Soc. Jpn. (1978), 51 (8), 2433-2434) и 0,72 г (3.33 ммоль) гидрохлорида N-метил-2-(4-нитрофенил)этиламина растворяют в 30 мл безводного метанола в инертной атмосфере в присутствии 0,65 мл триэтиламина (4,5 ммоль). Реакционную смесь интенсивно взбалтывают в течение 18 часов, прежде чем ввести порциями 126 мг (3,33 ммоль) NaBH₄. Взбалтывание продолжают еще в течение 4 часов, затем вводят 10 мл смеси воды со льдом. Реакционную смесь экстрагируют дважды 50 мл СН₂Cl₂. Органическую фазу промывают с помощью 10 мл воды, сушат на сульфате натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают на колонке с кремнеземом (элюент: CH₂Cl₂/MeOH: 97/3). Получают искомый продукт в виде масла коричневого цвета, выход 34% (0,34 г).

ЯМР¹H (DMSO d6, 200 МГц, δ): 2,23 (с, 3Н, СН₃); 2,71-2,77 (м, 8Н, 2СН₃, СН₂); 2,96 (т, 3Н, СН₂); 3,6 (с, 2Н, СН₂); 6,48-6,53 (м, 3Н ароматические); 7,50-7,55 (м, 2Н ароматические); 8,13-8,17 (м, 2Н ароматические).

MH⁺=330,31; t.r.=3,20 мин (условия элюирования I).

Пример 3: 2, 7-дигидрокси-N-{2-[4-[(2-тиенил(имино)метил)амино]фенил]этил}-2-нафталинкарбоксамидгидрохлорид

[Это соединение соответствует примеру 11 заявки WO 00/17190]

Пример 4: 3-[(3-{[амино(2-тиенил)метилиден]амино)бензил)-амино]-N-[4-(диметиламино)фенил]пропанамидгидрохлорид

[Это соединение соответствует примеру 50 заявки WO 00/17190]

Пример 5: 4-(4-аминофенид)-N-[4-(4-метил-1-пиперазинил)фенил]бутанамидгидрохлорид

5.1) 4-(4-нитрофенил)-N-[4-(4-метил-1-пиперазинил)фенил]бутанамид:

В раствор 0,55 г (2, 6 ммоль) 4-(4-нитрофенил)бутановой кислоты в дихлорметане (30 мл) вводят 4-(N-метилпиперазинил)анилин (0,5 г; 2,6 ммоль), гидроксибензотриазол (0,39 г; 2, 8 6 ммоль), 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлорид (1,1 г; 5,7 ммоль) и триэтиламин (0,8 мл; 5,7 ммоль). Реакционную среду взбалтывают в течение 16 часов при комнатной температуре, затем разбавляют 15 мл воды и экстрагируют продукт с помощью дихлорметана. Органическую фазу сушат на сульфате натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме, и остаток очищают на колонке с кремнеземом (элюент: CH₂Cl₂/EtO:4/1). Получают светлое масло, выход составляет 84% (0,84 г).

ЯМР¹H (CDCl₃ 100 МГц, δ): 2,0-2,3 (м, 2Н, CH₂); 2,3-2,5 (м, 5Н, СН₂, СН₃); 2,5-2,7 (м, 4Н, 2СН₂); 2,7-3,0 (м, 2Н, СН₂); 3,1-3,3 (м, 4Н, 2СН₂); 6,9 (с, 1Н, NH); 6,9-7,1 (м, 2Н ароматические); 7,3-7,5 (м, 4Н ароматические); 8,1-8,3 (м, 2Н ароматические).

5.2) 4-(4-аминофенил)-N-[4-(4-метил-1-пиперазинил)фенил]бутанамидгидрохлорид:

В раствор 0,84 г (2,2 ммоль) промежуточного продукта 5.1 в смеси этанола (150 мл) и дихлорметана (15 мл) вводят 0,1 г палладия на угле (10%). Полученное помещают в водородную атмосферу под давлением в 1,5 бар на 30 мин. Катализатор фильтруют и раствор выпаривают при пониженном давлении. Получают свободное основание с выходом 71% (0,55 г; 1,56 ммоль) в виде белого твердого вещества, которое затем растворяют в смеси этанол со льдом (45 мл) с добавлением 4,6 мл (4,7 ммоль) раствора 1 н. соляной кислоты в простом эфире. Раствор взбалтывают в течение 30 мин при комнатной температуре, затем выпаривают досуха, после чего остаток извлекают с помощью простого эфира и получают целевой гидрохлорид в виде светло-коричневого твердого вещества, выход 97% (0,64 г).

Точка плавления: 156-158°С.

ЯМР¹H (DMSO d6, 400 МГц, δ): 1,80-1,88 (м, 2Н, СН₂); 2,27 (т, 2Н, CH₂); 2,58 (т, 2Н, CH₂); 2,78 (с, 3Н, СН₃); 3,00-3,80 (м, 8Н, 4CH₂); 6,90-6,93 (м, 2Н ароматические); 7,04-7,06 (м, 2Н ароматические); 7,16-7,18 (м, 2Н ароматические); 7,47-7,49 (м, 2Н ароматические); 9,77 (с, 1Н, NH).

MH⁺ =353,23.

Пример 6: 4-(диметиламино)-2-метокси-6({[2-(4-нитрофенил)этил]амино)метил)фенол

Протокол эксперимента соответствует описанному в отношении соединения из примера 2, при этом N-метил-2-(4-нитрофенил)этиламин заменяют 2-(4-нитрофенил)этиламином и 2-гидрокси-5-(диметиламино)бензальдегид заменяют 2-гидрокси-3-метокси-5-(диметиламино)бензальдегидом. Получают масло коричневого цвета.

ЯМР¹H (CDCl₃, 400 МГц, δ): 2,85 (м, 6Н, N(CH₃)₂); 2,97 (м, 4Н, 2СН₂); 3,88 (с, 3Н, ОСН₃); 3,96 (с, 2Н, СН₂); 6,06-6,07 (д, 1Н ароматический); 6,36-6,37 (д, 1Н ароматический); 7,36-7,37 (д, 2Н ароматические); 8,17-8,37 (д, 2Н ароматические).

МН+=346,20; t.r.=3,40 мин (условия элюирования I).

Пример 7: 4-(диметиламино-2({[2-(4-нитрофенил)этил]амиио)метил)фенол

Протокол эксперимента соответствует описанному в отношении соединения из примера 2, при этом используют 2-(4-нитрофенил)этиламин вместо N-метил-2-(4-нитрофенил)этиламина. Получают масло коричневого цвета.

ЯМР¹H (DMSO d6, 400 МГц, δ): 2,71 (м, 6Н, N(CH₃)₂); 2,75-2,89 (м, 4Н, 2СН₂); 3,76 (с, 3Н, СН₃); 6,55 (м, 3Н, Н ароматические); 7,48-7,50 (д, 2Н ароматические); 8, 12-8,14 (д, 2Н ароматические).

МН+=316,26; t.r.=3,30 мин (условия элюирования I).

Пример 8: 2-(диметиламино)-6-метокси-4-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино)метил)фенол

Протокол эксперимента соответствует описанному в отношении соединения из примера 2, при этом используют 5-(диметиламино)-4-гидрокси-3-метоксибензальдегид [Bull. Chem. Soc. Jpn. (1978), 51(8), 2433-2434) вместо 5-(диметиламино)-3-метокси-2-гидроксибензальдегида. Получают масло коричневого цвета.

ЯМР¹H (DMSO d6, 400 МГц, δ): 2,61-2,64 (м, 2Н, СН₂); 2,71 (м, 6Н, N(СН₃)₂); 2,88-2,90 (м, 2Н, СН₂); 3,66 (с, 2Н, CH₂ ); 7,14-7,17 (м, 2Н ароматические); 7,48-7,51 (м, 2Н ароматические); 8,13-8,15 (м, 2Н ароматические).

МН+=360,27; t.r.=3,30 мин (условия элюирования I).

Пример 9: 2-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)-1,4-бензолдиол

Протокол эксперимента соответствует описанному в отношении соединения из примера 2, при этом используют 2, 5-дигидроксибензальдегид вместо 5-(диметиламино)-3-метокси-2-гидроксибензальдегида. Получают масло коричневого цвета.

ЯМР¹H (DMSO d6, 400 МГц, δ): 2,22 (с, 3Н, СН₃); 2,74 (т, 2Н, СН₂); 2,95 (т, 2Н, CH₂); 3,57 (с, 2Н, CH₂); 6,48 (м, 3Н ароматические); 7,50-7,52 (д, 2Н ароматические); 8,13-8,15 (д, 2Н ароматические).

МН+=303,25; t.r.=3,80 мин (условия элюирования I).

Пример 10: 4-(диэтиламино)-2-метокси-6-({метил[2-(4-нитрофенил)этил]амино)метил)фенилацетат

0,1 г (0,278 ммоль) 4-(диэтиламино)-2-метокси-6-({метил 2-(4-нитрофенил)этил]амино}метил)фенола (соединение из примера 1) растворяют в 5 мл безводного дихлорметана в присутствии 49 мкл (0,42 ммоль; 1,5 грамм-эквивалента) диизопропилэтиламина при 0°С. В раствор вводят по каплям 30 мкл (0,42 ммоль; 1,5 грамм-эквивалента) ацетилхлорида и полученное взбалтывают в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем вводят 10 мл дихлорметана в реакционную среду, которую потом промывают трижды в 10 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Органическую фазу сушат на сульфате магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают на колонке с кремнеземом (элюент: AcOEt/гептан: 2/1) до получения желтого масла с выходом 60%.

ЯМР¹H (DMSO d6, 400 МГц, δ): 2,16 (м, 6Н, 2N(СН₃)₂); 2,59 (т, 2Н, CH₂); 2,80 (м, 6Н, 2СН₃); 2,87 (т, 2Н, СН₂); 3,31 (с, 2Н, СН₂); 3,71 (с, 3Н, ОСН₃); 6,11 (м, 1Н ароматический); 6,27 (с, 1Н ароматический); 7,48 (м, 2Н ароматический); 8,11 (м, 2Н ароматический).

МН+=402,19; t.r.=4,80 мин (условия элюирования I).

Пример 11: 3,7-дигидрокси-N-[2-(4-нитрофенил)этил]-2-нафтамид

В раствор 204 мг (1 ммоль) 3,7-дигидрокси-2-нафтойной кислоты в диметилформамиде (10 мл) последовательно вводят 125 мкл 4-нитрофенэтиламина (1 ммоль), 1 мл раствора 1М N,N'-дициклогексилкарбодиимида в дихлорметане и 135 мг (1 ммоль) моногидрата гидроксибензотриазола. Реакционную массу взбалтывают в течение 2 часов при комнатной температуре, разбавляют 100 мл воды и экстрагируют дважды 30 мл этилацетата. Органические фазы собирают, затем промывают последовательно 100 мл воды, потом 50 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Органическую фазу сушат на сульфате магния, фильтруют и удаляют растворитель путем выпаривания при пониженном давлении. Остаток извлекают с помощью дихлорметана, фильтруют и сушат в вакууме. Получают 100 мг вещества в виде желтого порошка (выход 30%).

Точка плавления: >250°С.

МН+=353,20; t.r.=6,10 мин (условия элюирования I).

Пример 12: N-[4-(диметиламино)бенвил]-3,7-дигидрокси-2-нафтамид

Протокол эксперимента соответствует описанному в отношении соединения из примера 11, при этом используют 4-диметиламинобензиламин вместо 4-нитрофенэтиламина. Получают масло желтого цвета.

ЯМР-¹H (DMSO d6, 400 МГц, δ): 2,86 (с, 6Н); 4,42 (с, 2Н); 6,70 (м, 2Н); 7,04-7,20 (м, 5Н); 7,58 (д, 1Н); 8,29 (с, 1Н) 9,32 (т, 1Н); 9,55 (с, 1Н); 11,78 (с, 1Н).

МН+=337,20; t.r.=4,20 мин (условия элюирования I).

Пример 13: 4-{2-[(3, 7-дигидрокси-2-нафтоил)амино]этил}диэтилфенилфосфат

13.1) 2-{4-[(диэтоксифосфорил)окси]фенил}трет-бутилэтилкарбамат:

1,2 г (5 ммоль) N-Boc тирамина, 0,9 г (5,5 ммоль) диэтилцианофосфоната и 1,4 мл (10 ммоль) триэтиламина растворяют в 5 мл дихлорметана при 0°С в аргоновой атмосфере. Реакционную смесь взбалтывают в течение 30 мин при 0°С, разводят 25 мл воды и экстрагируют дважды 30 мл дихлорметана. Органические фазы собирают, затем промывают 50 мл воды, потом 25 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Органическую фазу сушат на сульфате магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Получают целевой продукт в виде светлого масла, выход 92% (1,73 г).

13.2) 4-(2-аминоэтил)диэтилфенилфосфат

Растворяют 1,7 г (4,5 ммоль) промежуточного продукта 13.1 в 20 мл раствора 4M соляной кислоты в диоксане. Реакционную смесь взбалтывают в течение 1 часа при комнатной температуре, затем концентрируют при пониженном давлении. 20 мл насыщенного раствора водородсодержащего карбоната натрия вводят в реакционную смесь с последующим двухкратным экстрагированием 25 мл этилацетата. Получают искомое соединение (выход 62%, 0,76 г) и используют его на следующей стадии очистки.

13.3) 4-{2-[(3,7-дигидрокси-2-нафтоил)амино]этил}диэтилфенилфосфат:

Протокол эксперимента соответствует описанному в отношении соединения из примера 11, при этом используют промежуточный продукт 13.2 вместо 4-нитрофенэтиламина. Получают порошок желтого цвета. Точка плавления: 192-194°С.

МН+=460,20; t.r.=9,60 мин (условия элюирования I).

Пример 14: N-{2-[4-(аминосульфонил)фенил]этил)-3,7-дигидрокси-2-нафтамид

Протокол эксперимента соответствует описанному в отношении соединения из примера 11, при этом используют 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид вместо 4-нитрофенэтиламина. Получают масло желтого цвета.

ЯМР-¹Н (DMSO d6, 400 МГц, δ): 2,98 (т, 2Н); 3,59 (кв, 2Н); 7,05-7,09 (м, 2Н); 7,14 (с, 1Н); 7,28 (с, 2Н); 7,46 (д, 2Н); 7,58 (д, 1Н); 7,75 (д, 2Н); 8,22 (с, 1Н); 9,03 (т, 1Н); 9,55 (с, 1Н); 11,64 (с, 1Н).

МН+=387,10; t.r.=4,30 мин (условия элюирования I).

Пример 15: 3,7-дигидрокси-N-[2-(4-аминофенил)этил]-2-нафтамид

Это соединение является промежуточным продуктом синтеза, используемым при получении соединения из примера 11 заявки WO 00/17190, 2,7-дигидрокси-N-{2-[4-[(2-тиенил(имино)метил)амино]фенил]этил}-2-нафталинкарбоксамида, способом, описанным в указанном документе. Получают твердое вещество бежевого цвета.

МН+=323,20; t.r.=4,00 мин (условия элюирования I).

Пример 16: 3, 7-дигидрокси-N-(2-{4-[(метилсульфонил)амино]фенил}этил)-2-нафтамид

В раствор 170 мг (0,5 ммоль) соединения из примера 15 в пиридине (1 мл) вводят 44 мкл (0,55 ммоля) метансульфонилхлорида. Реакционную массу взбалтывают в течение 16 часов при комнатной температуре, после чего разбавляют с помощью 20 мл воды и экстрагируют дважды 30 мл этилацетата. Органические фазы собирают, затем промывают последовательно 20 мл воды, потом 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Органическую фазу сушат на сульфате магния, фильтруют и удаляют растворитель путем выпаривания при пониженном давлении. Остаток элюируют на кремнеземе смесью этилацетата и дихлорметана (30/70). Получают 65 мг вещества (выход 30%) в виде порошка желтого цвета. Точка плавления: 176-178° С.

МН+=401,10; t.r.=4,60 мин (условия элюирования II).

В примерах с 17 по 28 методика синтеза соединений та же, что и соединения в примере 16.

Пример 17: N-(2-{4-[(бутилсульфонил)амино]фенил}этил)-3,7-дигидрокси-2-нафтамид

Порошок желтого цвета. Точка плавления: 193-195°С

МН+=443,20; t.r.=5,50 мин (условия элюирования II).

Пример 18: 3,7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-метилфенил)сульфонил]амино}фенил)этил]-2-нафтамид

Порошок желтого цвета. Точка плавления: 182-184°С

МН+=477,20; t.r.=5,70 мин (условия элюирования II).

Пример 19: 3,7-дигидрокси-N-(2-{4-[(1-нафтилсульфонил)амино]фенил)этил)-2-нафтамид Масло желтого цвета.

МН+=513,20; t.r.=9,70 мин (условия элюирования III).

Пример 20: 3,7-дигидрокси-N-{2-[4-(([2-(трифторметил)фенил]сульфонил)амино)фенил]этил)-2-нафтамид

Масло желтого цвета.

МН+=531,20; t.r.=9,60 мин (условия элюирования III).

Пример 21: N-(2-{4-[(бензилсульфонил)амино]фенил)этил)-3,7-дигидрокси-2-нафтамид

Масло желтого цвета.

МН+=477,20; t.r.=9,20 мин (условия элюирования III).

Пример 22: 3,7-дигидрокси-N-{2-[4-({[3-(трифторметил)фенил]сульфонил)амино)фенил]этил)-2-нафтамид

Масло коричневого цвета.

МН+=531,20; t.r.=9,80 мин (условия элюирования III).

Пример 23: 3, 7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(4-нитрофенил)сульфонил]амино)фенил)этил]-2-нафтамид

Масло оранжевого цвета.

МН+=508,20; t.r.=9,30 мин (условия элюирования III).

Пример 24: 3,7-дигидрокси-N-{2-[4-({[4-(трифторметил)фенил]сульфонил)амино)фенил]этил)-2-нафтамид

Масло коричневого цвета.

МН+=531,20; t.r.=9,80 мин (условия элюирования III).

Пример 25: 3,7-дигидрокси-N-(2-(4-[(тиен-2-илсульфонил)амино]фенил)этил)-2-нафтамид

Масло желтого цвета.

МН+=469,20; t.r.=9,00 мин (условия элюирования III).

Пример 26: 3,7-дигидрохси-N-[2-(4-{[(4-метоксифенил)сульфонил]амиво)фенил)этил]-2-нафтамид

Масло желтого цвета.

МН+=493,20; t.r.=9,10 мин (условия элюирования III).

Пример 27: 3,7-дигидрокси-N-[2-(4-{[(1-метил-1H-имидазол-4-ил)сульфонил]амиво)фенил)этил]-2-нафтамид

Масло желтого цвета.

МН+=467,20; t.r.=7,90 мин (условия элюирования III).

Пример 28: N-[2-(4-{[(4-фторфенил)сульфонил]амино)фенил)этил]-3,7-дигидрокси-2-нафтамид

Масло желтого цвета.

МН+=481,20; t.r.=9,20 мин (условия элюирования III).

Пример 29: 3,7-дигидрокси-N-{3-[(4-метил-1-ниперидинил)сульфонил]бензил}-2-нафтамид

29.1) 3-(4-метилпиперидиносульфонил)фенилметанол:

11 г (50 ммоль) 3-хлорсульфонилбензойной кислоты в суспензии в дихлорметане (300 мл) обрабатывают с помощью 12,4 г (125 ммоль) 4-метилпиперидина и реакционную смесь взбалтывают при комнатной температуре в течение ночи. Полученный раствор промывают последовательно 10% водным раствором лимонной кислоты и насыщенным раствором хлорида натрия, затем сушат (Na₂SO₄) и концентрируют при пониженном давлении до получения бесцветного вязкого остатка. Последний забирают метанолом и, поддерживая температуру от 0°С до 10°С, титруют триметилсилилдиазометаном до получения устойчивой характерной желтой окраски. Избыток реактива удаляют с помощью нескольких капель муравьиной кислоты и реакционную среду концентрируют при пониженном давлении. Остатки кислоты и метанола удаляют с помощью толуола двухкратным азеотропным выпариванием при пониженном давлении. Остаток извлекают тетрагидрофураном (300 мл) и обрабатывают с помощью боргидрида лития (2Н в THF, 30 мл). В течение 2 часов реакционную среду кипятят с обратным холодильником, затем охлаждают и гидролизуют насыщенным раствором хлорида аммония. Полученную смесь экстрагируют с помощью этилацетата, затем органическую фазу промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат (Na₂SO₄) и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают в колонке с кремнеземом (элюент: 5% ацетон в дихлорметане) и получают бензиловый спирт в виде белого твердого вещества.

ЯМР¹H (DMSO d6, 400 МГц, δ): 0,84 (д, 3Н); 1,13 (м, 2Н); 1,26 (м, 1Н); 1,63 (д, 2Н); 2,17 (т, 2Н); 3,59 (д, 2Н); 4,59 (д, 2Н); 5,42 (т, 1Н); 7,60 (м, 3Н); 7,67 (с, 1Н).

29.2) 2-[3-(4-метилпиперидиносульфонил)бензил]-1,3-изоиндолиндион:

950 мг (3,5 ммоль) бензилового спирта, 1,5 эквивалента трифенилфосфина и 1,5 эквивалента фталимида в растворе в дихлорметане (50 мл) обрабатывают с помощью 1,5 эквивалента диизопропилдиазадикарбоксилата и реакционную смесь взбалтывают в течение ночи при комнатной температуре, затем обрабатывают насыщенным раствором хлорида аммония, промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат (Na₂SO₄) и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают в колонке с кремнеземом (элюент: EtOAc/гептан 1/4) и получают твердое вещество белого цвета.

ЯМР¹H (DMSO d6, 400 МГц, δ): 0,79 (д, 3Н); 1,05 (м, 2Н); 1,26 (м, 1Н); 1,57 (д, 2Н); 2,18 (т, 2Н); 3,56 (д, 2Н); 4,89 (с, 2Н); 7,6 (м, 3Н); 7,68 (с, 1Н); 7,88 (м, 4Н).

29.3) 3-(4-метилпиперидиносульфонил)бензиламин:

Промежуточный продукт 29.2 обрабатывают с помощью избытка гидразингидрата в метаноле и полученную смесь взбалтывают в течение ночи при комнатной температуре, затем концетрируют при пониженном давлении. Остаток извлекают дихлорметаном и промывают насыщенным раствором хлорида натрия. После высушивания и концентрирования получают белое твердое вещество, которое очищают на колонке с кремнеземом (элюент: 10% MeOH/DCM) до получения белого твердого вещества.

ЯМР¹H (DMSO d6, 400 МГц, δ): 0,84 (д, 3Н); 1,13 (м, 2Н); 1,26 (м, 1Н); 1,63 (д, 2Н); 2,17 (т, 2Н); 3,58 (д, 2Н); 4,22 (д, 2Н); 7,6 (м, 3Н); 7,70 (с, 1Н).

29.4) 3,7-дигидрокси-N-{3-[(4-метил-1-пиперидинил)сульфонил]бензил}-2-нафтамид:

Протокол эксперимента соответствует описанному в отношении соединения из примера 11, при этом используют промежуточный продукт 29.3 вместо 4-нитрофенэтиламина.

ЯМР¹³C (DMSO d6, 400 МГц, δ): 21,4; 29,39; 32,90; 42,41; 46,19; 109,22; 111,06; 118,89; 121,59; 126,06; 126,14; 127,47; 127,57; 128,07; 129,58; 130,89; 132,15; 136,01; 140,98; 153,00; 153,67; 168,58.

MH+=455,20; t.r.=9,90 мин (условия элюирования IV).

Пример 30: 5-(4-{[(1E)-амино(2-тиенил)метилиден]амино}фенил)-N-[2-(диметиламино)фенил]пентанамидгидрохлорид

30.1) N-[2-(диметиламино)фенил]-5-(4-нитрофенил)пентанамид:

Протокол эксперимента соответствует описанному в отношении промежуточного продукта 5.1, при этом используют N,N-диметил-1,2-бензолдиамин вместо 4-(N-метилпиперазинил)анилина и 5-(4-нитрофенил)валериановую кислоту вместо 4-(4-нитрофенил)бутановой кислоты.

30.2) 5-(4-аминофенил)-N-[2-(диметиламино)фенил]пентанамид:

Протокол эксперимента соответствует описанному в отношении промежуточного продукта 5.2, при этом используют промежуточный продукт 30.1 вместо промежуточного продукта 5.1.

30.3) 5-(4-{[(1E)-амино(2-тиенил)метилиден]амино}фенил)-N-[2-диметиламино)фенил]пентанамидгидрохлорид

В раствор 0,07 г (0,22 ммоль) промежуточного продукта 30.2 в 2-пропаноле (5 мл) вводят 0, 071 г (0,24 ммоль) S-метил-2-тиофентиокарбоксимидгидроиодида (Ann. Chim. (1962), 7, 303-337). После нагревания до 60°С в течение 18 часов реакционную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток извлекают этилацетатом и насыщенным раствором карбоната натрия. После отстаивания органическую фазу последовательно промывают дважды 25 мл воды и дважды 25 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Органическую фазу сушат на сульфате магния, фильтруют и выпаривают при пониженном давлении. Остаток, полученный при выпаривании, очищают в колонке с кремнеземом (элюент: этилацетат/гептан: 2/1). Получают 0,06 г (выход 63%) свободного основания. Получают гидрохлорид путем растворения 0,06 г (0,14 ммоль) полученного ранее основания в ацетоне (10 мл) и введения туда 0,43 мл молярного раствора соляной кислоты в безводном диэтиловом эфире. Полученные кристаллы фильтруют и промывают диэтиловым эфиром; после высушивания получают 0,052 г целевого продукта (выход 74%) в виде твердого вещества бежевого цвета. Точка плавления: 145-148°С.

МН+=421,20; t.r.=3,30 мин (условия элюирования II).

Пример 31: 3-({4-[(4-метилфенил)сульфонил]пиперазин-1-ил}карбонил)нафталин-2,6-диол

31.1) 4-(3,7-дигидрокси-2-нафтоил)пиперазин-1-трет-бутилкарбоксилат:

Протокол эксперимента соответствует описанному в отношении соединения из примера 11, при этом используют N-трет-бутилоксикарбонилпиперазин вместо 4-нитрофенетиламина. Получают твердое вещество бежевого цвета.

31.2) 3-(пиперазин-1-илкарбонил)нафталин-2,6-диол:

В раствор 1,9 г (5 ммоль) промежуточного продукта 31.1 в этаноле (20 мл) вводят 10 мл раствора 4 н. соляной кислоты в диоксане. Раствор взбалтывают в течение 2 часов при комнатной температуре, растворитель выпаривают и остаток извлекают в дихлорметане. Осадок фильтруют, промывают дихлорметаном и сушат в вакууме. Получают 1,35 г искомого вещества в виде порошка белого цвета.

31.3) 3-({4-[(4-метилфенил)сульфонил]пиперазин-1-ил}карбонил)нафталин-2,6-диол:

Протокол эксперимента соответствует описанному в отношении соединения из примера 16, при этом используют промежуточный продукт 31.2 вместо соединения из примера 15 и паратолуолсульфонилхлорид вместо метансульфонилхлорида. Получают порошок желтого цвета. Точка плавления: 135-137°С.

МН+=427,20; t.r.=8,30 мин (условия элюирования IV).

В примерах 32 и 33 методика синтеза соединений та же, что и соединения из примера 31.

Пример 32: 3-{[4-(метилсульфонил)пиперааин-1-ил]карбонил)нафталин-2,6-диол

Порошок желтого цвета. Точка плавления: 124-126° С.

МН+=351,20; t.r.=6,70 мин (условия элюирования IV).

Пример 33: 3-{[4-(бутилсульфонил)пиперазин-1-ил]карбонил}нафталин-2,6-диол

Порошок желтого цвета. Точка плавления: 105-110°С.

МН+=393,20; t.r.=7,90 мин (условия элюирования IV).

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СОЕДИНЕНИЙ СОГЛАСНО ИЗОБРЕТЕНИЮ

Протоколы тестов

а) Измерение фосфатазной активности очищенного рекомбинантного фермента cdc25C.

Фосфатазная активность белка MBP-cdc25C оценивают путем дефосфорилирования 3-O-метилфлуоресцеинфосфата (OMFP) до 3-O-метилфлуоресцеина (OMF) и определения флуоресценции продукта реакции при 475 нм. Этот тест позволяет идентифицировать ингибиторы рекомбинантного фермента cdc25. Получение синтетического белка MBP-cdc25C описано в заявке на патент РСТ WO 01/44467.

Реакцию осуществляют в конечном объеме 50 мкл в формате 384-луночного планшета. Белок MBP-cdc25C (полученный, как описано выше) находится в следующем элюирующем буфере:

20 мМ Tris-HCl рН 7,4; 250 мМ NaCl; 1 мМ EDTA; 1 мМ DTT; 10 мМ мальтозы. Его разбавляют до концентрации 60 мкМ следующим реакционным буферным раствором: 50 мМ Tris-HCl рН 8,2; 50 мМ NaCl; 1 mM DTT; 20% глицерина.

Измерение фона осуществляют с помощью буферного раствора без добавления фермента. Продукты тестируют с понижением концентраций, начиная с 80 мкМ. Для инициации реакции вводят раствор OMFP с конечной концентрацией 500 мкМ (приготовленный перед самым употреблением из маточного раствора, концентрация которого соответствует 12,5 мМ в 100% DMSO (Sigma#M2629)). После выдерживания в одноразовом 384-луночном планшете в течение 4 часов при 30°С флуоресценцию, измеряемую при оптической плотности 475 нм, считывают с помощью считывающего устройства Victor2 (EGG-Wallac). Определение концентрации, ингибирующей на 50% ферментативную реакцию, производят по результатам трех независимых тестов. Для анализа линейной регрессии используют только значения из линейной части сигмоидальной кривой.

b) Измерение состояния фосфорилирования cdc2:

Данное исследование показывает, что ферментативная активность фосфатазы cdc25-C ингибируется in vivo в присутствии ингибиторов, выбранных в отношении очищенного фермента. При ингибировании cdc25-C количество фосфорилированного (неактивного) белка cdc2 увеличивается.

Клетки линии Mia PaCa2 высевают из расчета 450000 клеток на чашку Петри, 10 см, в среду Игла, модифицированную Дульбекко, с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки. Через 48 часов клетки обрабатывают в течение 1 часа тестируемым соединением или менадионом в концентрации 100 мкМ (эталонный ингибитор). Среда обновляется после промывки в PBS. Через 24 часа клетки соскабливают и лизируют в лизирующем буфере (Нéрés 50 мМ рН 7,5; NaCl 10 мМ; Triton Х100 1%; 10% глицерин; MgCl₂ 5 мМ; EDTA 1 мМ; ортованадат натрия 1 мМ; смесь протеазных ингибиторов 1836170 Roche Diagnostics). После центрифугирования со скоростью 13000 об/мин в течение 10 минут при 4°С определяют концентрацию протеинов на поверхности (Bio-Rad DC Protein assay kit) и доводят до 10 мкг. К образцам добавляют пятикратный буфер (TrisHCl 125 мМ рН 7,4; SDS 10%; глицерин 50%, бромофенольный синий 0,025%; β-меркаптоэтанол 7%). Образцы нагревают до 100°С в течение 10 минут. Образцы выкладывают в объеме 40 мкл на гели Tris/Glycine 12% (BioRad). Миграция происходит в течение 1 часа при 180 V. Белки в полусухом состоянии перемещают на мембрану из нитроцеллюлозы (Hybond С, Amersham). Мембрану блокируют в течение 1 часа в 5% молоке (BioRad) в присутствии 0,1% Tween 20. Затем ее инкубируют в течение 6 часов в присутствии первичного антитела, направленного к фосфорилированному cdc2 (Phospho Plus cdc2, 91115 New England BioLabs), разведенного до 1/1300-й. После промывания в 0,1% PBS-Tween 20 мембрану инкубируют в течение 1 часа 30 мин в присутствии вторичного антитела, к иммуноглобулину G кролика (anti-rabbat IgG-HRP, sc2030, Santa Cruz), разведенного до 1/40000-й. Присутствие белков устанавливают путем электрохимической люминесценции (western blotting detection system ECL⁺, Amersham), для обнаружения которой используют фотопленку (BioMax ligt, Sigma). Изображение сканируют (BioProfil scanner, Vilbert Lourmat) и обрабатывают в формате Powerpoint®. Полученный результат изображен на чертеже, где показано сравнительное действие менадиона и соединения из примера 1 на фосфорилирование cdc2 в линии Mia PaCa-2 (обработка метадионом или соединением из примера 1 в течение 3 часов, взятие проб через 24 часа).

с) Характеристика анти-пролиферативной активности:

В качестве примера рассмотрим результат обработки по двум линиям клеток человека Mia PaCa-2 и DU145 соединениями из примеров с 1 по 5, описанными выше. Клеточные линии DU145 (раковые клетки рака предстательной железы человека) и Mia РаСа-2 (раковые клетки рака поджелудочной железы человека) были получены в Американской коллекции культуры ткани (Rockville, Maryland, USA). Клетки, помещенные в 80 мкл среды Игла, модифицированной Дульбекко (Gibco-BrI, Cergy-Pontoise, France), с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, инактивированной нагреванием (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), 50000 единиц/л пенициллина и 50 мг/л стрептомицина (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) и 2 мМ глутамина (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), высевают на 96-луночный планшет в нулевой день. В первый день клетки обрабатывают в течение 96 часов каждым из тестируемых соединений, концентрацию которых повышают до 59 мкг/мл. В конце этого периода количественную характеристику клеточной пролиферации оценивают с помощью колорометрического теста, основываясь на расщеплении соли тетразолия WST1 митохондриальными дегидрогеназами в жизнеспособных клетках с образованием формазана (Boehringer Mannheim, Meylan, France). Указанные тесты осуществляли дважды, 8 раз определяя тестируемую концентрацию. Значения, включенные в линейную часть сигмоидальной кривой по каждому тестируемому соединению, использовали для анализа по линейной регрессии и оценки ингибирующей концентрации CI₅₀. Продукты растворяли в диметилсульфоксиде (DMSO) с концентрацией 10^-2 М и использовали в конечной культуре с 0,5% DMSO.

Результаты тестов

a) Соединения из примеров с 1 по 11, с 13 по 18 и с 27 по 33 имеют CI₅₀, ниже или равную 100 мкМ по отношению к фосфатазной активности очищенного рекомбинантного фермента cdc25-C.

b) Показателем ингибирующей активности соединения из примера 1 по отношению к эндогенной фосфатазе cdc25-C клеток человека является рост фосфорилированной формы cdc2 в клетках Mia-PaCa2, обработанных увеличивающимися концентрациями этого соединения. Такой рост можно сравнить с тем, который индуцируется менадионом (см. чертеж).

c) Соединения из примеров с 1 по 4, с 6 по 11, 13, 14, с 16 по 18, 22 и с 28 по 31 имеют CI₅₀, ниже или равную 100 мкМ по отношению к клеточной пролиферации линий Mia-PaCa2.

d) Соединения из примеров с 1 по 4, с 8 по 10, 13, 14, с 16 по 18, 22 и с 28 по 30 имеют CI₅₀, ниже или равную 100 мкМ по отношению к клеточной пролиферации линий DU-145.

Реферат

Изобретение относится к области органической химии и медицины и касается новых производных амидинов, обладающих свойством ингибиторов фосфатаз, а также фармацевтической композиции, включающей указанные соединения. Изобретение обеспечивает повышение эффективности лечения. 3 н.п. ф-лы, 1 ил.

Формула