Детекция нуклеиновокислотных последовательностей-мишеней в анализе с расщеплением и удлинением рто - RU2012142160A

Реферат

1. Способ детекции нуклеиновокислотной последовательности-мишени из ДНК или смеси нуклеиновых кислот в анализе с PTOCE (расщеплением и удлинением PTO), включающий:(a) гибридизацию нуклеиновокислотной последовательности-мишени с располагающимся "вверх по течению" олигонуклеотидом и PTO (зондирующим и метящим олигонуклеотидом); при этом располагающийся "вверх по течению" олигонуклеотид содержит гибридизующуюся нуклеотидную последовательность, комплементарную нуклеиновокислотной последовательности-мишени; PTO содержит (1) 3'-концевой узнающий мишень участок, содержащий гибридизующуюся нуклеотидную последовательность, комплементарную нуклеиновокислотной последовательности-мишени, и (2) 5'-концевой метящий участок, содержащий нуклеотидную последовательность, некомплементарную нуклеиновокислотной последовательности-мишени; при этом 3'-концевой узнающий мишень участок гибридизуется с нуклеиновокислотной последовательностью-мишенью, а 5'-концевой метящий участок, не гибридизуется с нуклеиновокислотной последовательностью-мишенью; располагающийся "вверх по течению" олигонуклеотид локализован "вверх по течению" относительно PTO;(b) приведение в контакт продукта со стадии (a) с ферментом, обладающим 5'-нуклеазной активностью, в условиях, подходящих для расщепления PTO; при этом располагающийся "вверх по течению" олигонуклеотид или его удлиненная цепь индуцирует расщепление PTO ферментом, обладающим 5'-нуклеазной активностью, так что в результате расщепления высвобождается фрагмент, содержащий 5'-концевой метящий участок или часть 5'-концевого метящего участка PTO;(c) гибридизацию фрагмента, высвободившегося из PTO, с CTO (захв�