Способ получения оболочечного вируса - RU2016114541A
Код документа: RU2016114541A
Формула
1. Способ получения оболочечного вируса, отличающийся тем, что клетки-хозяева, продуцирующие указанный вирус, культивируют в умеренно кислой среде.
2. Способ по п. 2, где pH среды находится в диапазоне от 5,8 до 6,2, более конкретно pH составляет приблизительно 6.
3. Способ по любому из пп. 1 и 2, где оболочечный вирус представляет собой ретровирус, при необходимости псевдотипированный.
4. Способ по любому из пп. 1-3, где оболочечный вирус представляет собой лентивирус, при необходимости псевдотипированный.
5. Способ по п. 4, где ретровирус псевдотипируют белком оболочки, выбранным из белка оболочки VSV-G или белка оболочки GALV.
6. Способ по п. 5, лентивирус псевдотипируют белком оболочки, выбранным из белка оболочки VSV-G или белка оболочки GALVTR.
7. Способ по любому из пп. 1-6, где клетка-хозяин выбрана из клетки HEK293, HEK293T, HEK293FT, Te671, CEM, NIH-3T3, Mpf или D17.
8. Способ по любому из пп. 1-7, где указанный способ включает следующие стадии:
транзиентную трансфекцию клеток HEK293T одной или несколькими плазмидами, кодирующими элементы, необходимые для продукции указанного оболочечного вектора;
культивирование указанных клеток в подходящей среде, pH которой составляет приблизительно 6;
сбор оболочечного вируса в культуральном супернатанте.
9. Способ получения лентивируса по п. 8, где клетки трансфицируют четырьмя плазмидами: плазмидой, несущей экспрессирующую кассету, содержащую ген лентивируса gagpol, плазмидой, несущей экспрессирующую кассету, содержащую ген лентивируса rev, плазмидой для переноса, содержащей экспрессирующую кассету представляющего интерес трансгена, находящегося между LTR-5' и LTR-3' лентивируса, и плазмидой, несущей экспрессирующую кассету гликопротеина(ов) оболочки.
10. Набор для осуществления способа по любому из пп. 1-9, содержащий умеренно кислую среду для культивирования или среду для культивирования совместно с одним или несколькими растворами, пригодными для доведения pH указанной среды до умеренно кислого значения, где набор также содержит:
(a) одну или несколько плазмид, подходящих для получения оболочечного вируса, и/или
(b) клетки, подходящие для продукции указанного вируса.
11. Набор по п. 10, дополнительно содержащий инструкции по осуществлению способа получения оболочечного вируса по любому из пп. 1-11.
12. Набор для осуществления способа по любому из пп. 1-9, содержащий (i) средства для проведения указанного способа и (ii) инструкции по осуществлению способа.
13. Набор по п. 12, где средства, содержащиеся в наборе, выбраны из одного или нескольких следующих средств:
(a) одной или нескольких плазмид, подходящих для получения оболочечного вируса;
(b) клеток, подходящих для получения указанного вируса, и
(c) умеренно кислой среды для культивирования или среды для культивирования совместно с одним или несколькими растворами, пригодными для доведения pH указанной среды до умеренно кислого значения.
14. Набор по п. 13, содержащий средства (a) и (b), (a) и (c), (b) и (c) или (a) и (b), и (c).
15. Набор для осуществления способа по любому из пп. 1-9, содержащий среду для культивирования совместно с одним или несколькими растворами, пригодными для доведения pH указанной среды до умеренно кислого значения.
