Получение вирусного вектора - RU2016121425A
Код документа: RU2016121425A
Формула
1. Модифицированная клетка млекопитающего, в которой геном клетки модифицирован, чтобы включать последовательность, кодирующую CP77 под контролем такого конститутивного промотора, что модифицированная клеточная линия поддерживает размножение поксвируса, который способен в меньшей степени или не способен размножаться в немодифицированной клетке, и причем геном клетки дополнительно включает последовательность, кодирующую D13L под контролем конститутивного промотора.
2. Клетка по п.1, где геном клетки дополнительно содержит последовательность, кодирующую K1L под контролем промотора.
3. Клетка по п.1 или 2, где клетка представляет собой непрерывную линию клеток.
4. Клетка по любому из пп.1-3, где клетка представляет собой клетку CHO.
5. Клетка по любому из пп.1-4, где клетка представляет собой клетку человека, клетку примата, клетку хомячка или клетку кролика.
6. Клетка по любому из пп.2-5, где экспрессия гена K1L находится под контролем конститутивного промотора млекопитающего.
7. Клетка по любому из пп.1-6, где экспрессия гена CP77 поддерживает размножение вируса для получения выхода вируса, эквивалентного наблюдаемому в пермиссивной клеточной линии.
8. Клетка по любому из пп.1-7, где экспрессия гена CP77 поддерживает коэффициент амплификации репликации вируса выше 500.
9. Клетка по любому из пп.1-8, где CP77 кодируется непрерывной последовательностью нуклеотидов, оптимизированной по кодонам для экспрессии в клетках млекопитающих.
10. Способ размножения ортопоксвируса, который не размножается в клетках СНО, включающий размножение поксвируса in vitro в линии клеток млекопитающих, где клеточная линия модифицирована, чтобы кодировать и экспрессировать CP77 под контролем конститутивного промотора и экспрессировать D13L под контролем конститутивного промотора.
11. Способ по п.10, где модифицированная клеточная линия модифицируется, чтобы кодировать и экспрессировать K1L под контролем промотора.
12. Способ по п.10 или 11, где модифицированная клеточная линия представляет собой клетку человека, клеточную линию примата, клеточную линию хомяка или клеточную линию кролика.
13. Способ по п.12, где клеточная линия представляет собой клеточную линию CHO.
