Генерирование дендритных клеток из моноцитарных предшественников дендритных клеток с помощью gm-csf в отсутствие дополнительных цитокинов - RU2005129561A

Реферат

1. Способ дифференцировки моноцитарных предшественников дендритных клеток в незрелые дендритные клетки, предусматривающий

a) обеспечение популяции клеток, содержащей неактивированные моноцитарные предшественники дендритных клеток;

b) контактирование неактивированных предшественников дендритных клеток в культуральном сосуде со средой для культивирования дендритных клеток, дополненной колониестимулирующим фактором гранулоцитов-макрофагов, в отсутствие дополнительных цитокинов.

2. Способ по п.1, где моноцитарные предшественники дендритных клеток являются неактивированными.

3. Способ по п.2, где активация моноцитарных предшественников дендритных клеток предотвращается ингибированием адгезии клеток-предшественников к культуральному сосуду.

4. Способ по п.3, где адгезия моноцитарных предшественников дендритных клеток ингибируется контактированием этих клеток со средой для культивирования дендритных клеток, содержащей высокую концентрацию белка животного или человека.

5. Способ по п.4, где белком животного или человека является альбумин, сыворотка, плазма, желатин или полиаминокислота.

6. Способ по п.1, где активация моноцитарных предшественников дендритных клеток ингибируется контактированием этих клеток со средой для культивирования дендритных клеток, содержащей хелатор металла.

7. Способ по п.6, где этот хелатор металла содержит ЭДТА или ЭГТА.

8. Способ по п.3, где адгезия моноцитарных предшественников дендритных клеток к культуральному сосуду ингибируются контактированием этих клеток с культуральным сосудом с низкой клеточной авидностью.

9. Способ по п.8, где культуральный сосуд с низкой клеточной авидностью содержит полипропилен, Teflon® или PFTE.

10. Способ по п.5, где указанным белком является сывороточный альбумин человека.

11. Способ по п.3, где сывороточный альбумин человека присутствует в концентрации по меньшей мере 1%.

12. Способ по п.11, где сывороточный альбумин человека присутствует в концентрации приблизительно 2% - приблизительно 10%.

13. Способ по п.1, где средой для культивирования дендритных клеток является бессывороточная среда.

14. Способ по п.1, где указанная популяция клеток включает периферическую кровь, продукт лейкафереза, продукт афереза, пуповинную кровь, селезенку, лимфатический узел, тимус или костный мозг.

15. Способ по п.14, где указанная популяция клеток была криоконсервирована.

16. Способ по п.4, где культуральный сосуд содержит полистирол, покрытый стеклом полистирол, стирол или стекло.

17. Способ по п.14, где предшественники дендритных клеток дополнительно обогащены посредством фильтрации с тангенциальным потоком.

18. Способ по п.17, где указанный фильтр имеет размер пор 5,5 мкм, скорость рециркуляции (вхождения) была приблизительно 1400 мл/мин, скорость фильтрации была приблизительно 17 мл/мин и время фильтрации было приблизительно 90 мин.

19. Способ по п.1, дополнительно предусматривающий контактирование дифференцированных предшественников дендритных клеток с представляющим интерес антигеном в течение периода времени, достаточного для поглощения антигена.

20. Способ по п.19, дополнительно предусматривающий контактирование предшественников дендритных клеток с агентом созревания дендритных клеток.

21. Способ по п.20, где указанный агент созревания дендритных клеток включает Bacillus Calmette-Guerin (BCG), липополисахарид (LPS), TNFα, интерферон гамма (IFNγ) или их комбинации.

22. Способ по п.21, где указанным агентом созревания является комбинация BCG и IFNγ.

23. Способ по п.19, где указанным антигеном является опухолеспецифический антиген, опухоль-ассоциированный антиген, вирусный антиген, бактериальный антиген, опухолевые клетки, нуклеиновая кислота, кодирующая антиген, выделенная из опухолевой клетки, бактериальные клетки, рекомбинантные клетки, экспрессирующие антиген, лизат клеток, препарат мембран, рекомбинантно полученный антиген, пептидный антиген или выделенный антиген.

24. Способ по п.10, дополнительно предусматриающий криоконсервирование дендритных клеток.