Дифференцировка клеток фибробластов человека - RU2015122714A
Код документа: RU2015122714A
Формула
1. Способ дифференциации клеток фибробластов в клетки адипоциты, включающий следующие этапы:
a) выращивание клеток фибробластов в среде для культуры клеток фибробластов до конфлюенции в стандартных условиях;
b) культивирование клеток в среде для культуры клеток для первичной дифференциации;
c) культивирование клеток в среде для культуры клеток для вторичной дифференциации; и
d) подтверждение наличия клеток адипоцитов.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что клетки культивируют в среде для культуры клеток для первичной дифференциации в течение 4 дней.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что клетки культивируют в среде для культуры клеток для вторичной дифференциации в течение 17 дней.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что среда для культуры клеток фибробластов представляет собой среду для культуры клеток FibroLife S2.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что среда для культуры клеток для первичной дифференциации представляет собой среду для культуры клеток AdipoLife Complete DifFactor 1
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что среда для культуры клеток для вторичной дифференциации представляет собой среду для культуры клеток AdipoLife Complete DifFactor 2.
7. Способ по п. 5, отличающийся тем, что среда для культуры клеток AdipoLife Complete DifFactor 1 включает среду для культуры клеток AdipoLife и добавку DifFactor 1.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что добавка DifFactor 1 содержит:
а) 1-200 мМ L-глутамин;
б) 10-50% плазманат;
в) 10-1000 мкМ дексаметазон;
г) 10-300 мкг/мл инсулина;
д) 10-1000 мкг/мл аскорбат-2-фосфата;
e) 0,1-10 мМ индометацин;
ж) 10-300 мкг/мл EGF; и
з) 10-1000 мкМ троглитазон.
9. Способ по п. 6, отличающийся тем, что среда для культуры клеток AdipoLife Complete DifFactor 2 включает среду для культуры клеток AdipoLife и добавку DifFactor 2.
10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что добавка DifFactor 2 содержит:
а) 1-100 мМ L-глутамин;
б) 10-50% плазманат;
в) 10-1000 мкМ дексаметазон;
г) 10-300 мкг/мл инсулина;
д) 10-1000 мкг/мл аскорбат-2-фосфата;
е) 0,1-10 мМ индометацин; и
ж) 10-300 мкг/мл EGF.
11. Клетки адипоциты, полученные способом по п. 1.
12. Способ дифференциации клеток фибробластов в клетки остеоциты, включающий следующие этапы:
а) выращивание клеток фибробластов в среде для культуры клеток фибробластов до конфлюенции в стандартных условиях;
б) культивирование клеток в среде культуры клеток для остеогенеза; и
в) подтверждение присутствия клеток остеоцитов.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что клетки культивируют в среде культуры клеток для остеогенеза в течение 3 недель.
14. Способ по п. 12, отличающийся тем, что среда для культуры клеток фибробластов представляет собой среду для культуры клеток Fibroblast S2.
15. Способ по п. 12, отличающийся тем, что среда культуры клеток для остеогенеза представляет собой среду для культуры клеток OsteoLife Complete.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что среда для культуры клеток OsteoLife Complete содержит:
а) DMEM;
б) 1-100 мМ L-Ала-L-Глу;
в) 1-50% FBS;
г) 0,1-20 нг/мл EGF;
д) 0,1-20 нг/мл bFGF;
е) 0,1-20 нг/мл aFGF;
ж) 1-100 мМ β-глицерофосфат;
з) 10-1000 мкг/мл аскорбат-2-фосфата;
и) 0,1-100 мкМ дексаметазон;
к) 1-100 мкг/мл глюкозамин сульфата;
л) 1-100 мкг/мл гиалуроновой кислоты; и
м) 0,1-50 г/л галактозы.
17. Клетки остеоциты, полученные способом по п. 12.
18. Способ дифференциации клеток фибробластов в клетки хондроциты, включающий следующие этапы:
а) выращивание клеток фибробластов в среде для культуры клеток фибробластов до 80-90% конфлюенции в стандартных условиях;
б) осаждение клеток;
в) ресуспендирование клеток в 1,5%-ном растворе альгината;
г) добавление клеток в растворе альгината к 100 мМ хлорида кальция для образования микросфер;
д) выращивание клеток на микросферах в среде культуры клеток для хондрогенеза; и
е) подтверждение присутствия клеток хондроцитов.
19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что клетки культивируют в среде культуры клеток для хондрогенеза в течение 3 недель.
20. Способ по п. 18, отличающийся тем, что среда для культуры клеток фибробластов представляет собой среду для культуры клеток Fibroblast S2.
21. Способ по п. 18, отличающийся тем, что среда культуры клеток для хондрогенеза представляет собой среду для культуры клеток ChondroLife Chondrogenesis.
22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что среда для культуры клеток ChondroLife Chondrogenesis содержит:
а) FibroLife;
б) 0,1-10 г/л глюкозы;
в) 1-25% плазманат;
г) 1-100 мМ глутамин;
д) 0,1-100 мкМ дексаметазон;
е) 0,1-20 мкг/мл инсулина;
ж) 0,1-20 мкг/мл PS-трансферрина;
з) 0,1-20 нг/мл EGF;
и) 10-1000 мкг/мл аскорбат-2-фосфата;
к) 10-1000 мкг/мл L-пролина;
л) 0,1-20 нг/мл TGFβ3;
м) 1-100 мкг/мл глюкуроновой кислоты;
н) 0,1-50 г/л галактозы;
о) 1-100 мкг/мл глюкозамин сульфата; и
п) 1-100 мкг/мл гиалуроновой кислоты.
23. Клетки хондроциты, полученные способом по п. 18.
24. Набор для дифференциации клеток фибробластов в клетки адипоциты, включающий:
а) среду для культуры клеток AdipoLife Basal;
б) добавку DifFactor 1;
в) добавку DifFactor 2;
г) краситель Oil Red О; и
д) руководство для дифференциации клеток фибробластов в клетки адипоциты.
25. Набор для дифференциации клеток фибробластов в клетки остеоциты, включающий:
а) среду для культуры клеток OsteoLife;
б) краситель ализарин красный; и
в) руководство для дифференциации клеток фибробластов в клетки остеоциты.
26. Набор для дифференциации клеток фибробластов в клетки хондроциты, включающий:
а) среду для культуры клеток ChondroLife Chondrogenesis;
б) краситель Альциан синий; и
в) руководство для дифференциации клеток фибробластов в клетки хондроциты.
27. Способ по п. 1, отличающийся тем, что клетки культивируют на стандартном пластике обработанном для работы с культурой ткани.
28. Способ получения внеклеточного матрикса, включающий культивирование клеток в присутствии по меньшей мере одного сложного сахара.
29. Способ по п. 28, отличающийся тем, что сложный сахар выбран из группы, состоящей из гиалуроновой кислоты, маннозы, сиаловой кислоты, хондроитинсульфата, галактозы, глюкуроновой кислоты и глюкозамин сульфата.
30. Способ по п. 28, отличающийся тем, что клетки представляют собой адипоциты, остеоциты или хондроциты, происходящие от стволовых клеток мезенхимы.
31. Способ по п. 28, отличающийся тем, что клетки представляют собой адипоциты, остеоциты или хондроциты, происходящие от клеток фибробластов.
